文档库 最新最全的文档下载
当前位置:文档库 › 非发酵革兰氏阴性杆菌

非发酵革兰氏阴性杆菌

非发酵革兰氏阴性杆菌
非发酵革兰氏阴性杆菌

第十一章非发酵革兰阴性杆菌

一、教学大纲要求

(1)非发酵菌的概念、种类和初步鉴定特征。

(2)假单胞菌属的分类、临床意义、细菌特性、实验室检查和耐药性。

(3)铜绿假单胞菌的临床意义、细菌特性、实验室检查和耐药性。

(4)荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、斯氏假单胞菌的临床意义、细菌特性和实验室检查。

(5)不动杆菌属、寡养单胞菌属、产碱杆菌属和军团菌的临床意义、细菌特性、实验室检查和耐药性。

(6)黄杆菌属和莫拉菌属的细菌特性和实验室检查。

二、教材内容精要

(一)非发酵菌的主要特点和分类

非发酵菌(Nonfermentative Bacilli)是一群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞的革兰阴性杆菌;在分类学上分别属于不同的科、属和种,但生化特征十分接近,多为条件致病菌,主要引起院内感染。

非发酵菌包括的菌种较多,主要有下列菌属:假单胞菌属(Pseudomonas)、不动杆菌属(Acinetobacter)、寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)、伯克菌属(Burkholderia)、产碱杆菌属(Alcaligenes)、无色杆菌属(Achromobacter)、莫拉菌属(Moraxella)、金氏杆菌属(Kingella)、黄杆菌属(Flavobacterium)、艾肯菌属(Eikenella)、土壤杆菌属(Agrobacterium)、黄单胞菌属(Xanthomonas)、丛毛单胞菌属(Comamonas)、食酸菌属(Acidovorax)等。

若某种未知的革兰阴性杆菌具有以下一种或几种特征,则怀疑其为非发酵菌:

1.氧化发酵试验常显示是氧化型或产碱型。

2.氧化酶阳性,非发酵菌中,除不动杆菌和嗜麦芽寡养单胞菌外氧化酶试验均为阳性。但并非所有氧化酶阳性的革兰阴性杆菌都是非发酵菌,如巴斯德菌、气单胞菌、邻单胞菌和弧菌属等也是氧化酶阳性但不是非发酵菌。

3.动力,非发酵菌大部分为专性需氧菌,在半固体培养基上观察动力不明显,可用悬滴法或鞭毛染色法检测其动力。

(二)假单胞菌属

假单胞菌属(Pseudomonas)为严格需氧、有鞭毛、无芽胞、无荚膜的革兰阴性杆菌,氧化酶试验均阳性,是假单胞菌科的代表菌属。

1.分类

假单胞菌科由假单胞菌属及其亲缘关系密切的菌属(以前大部分属于假单胞菌属)组成,用于假单胞菌科分类的方案有两个,一是根据细菌的表型特征分为7个主要的组,二是根据rRNA-DNA同源研究将假单胞菌科分为5个rRNA群。

尽管假单胞菌科的绝大部分细菌原先都被归类于假单胞菌属,但现在只有rRNAⅠ群的细菌属于假单胞菌属(Pseudomonas),包括铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、斯氏假单胞菌、曼多辛假单

胞菌、产碱假单胞菌和假产碱假单胞菌7种细菌。

rRNAⅡ群的细菌属于伯克菌属(Burkhokderia),包括13个种,其中类鼻疽伯克菌、葱头伯克菌、唐菖蒲伯克菌和皮氏伯克菌与人类疾病相关。鼻疽伯克菌是动物专性寄生菌,在极少数情况下可传播给人(通常通过皮肤的磨损),是本菌属中唯一无动力的种,本属其他菌种与植物有关而与人类疾病无关。

rRNAⅢ群的细菌属于丛毛单胞菌科(Comamonadaceae),本科包括两个菌属:丛毛单胞菌属(Comamonas)和食酸菌属(Acidovorax),前者包括土生丛毛单胞菌等三个菌种,后者包括敏捷食酸菌等三个菌种。

rRNAⅣ群属于短波单胞菌属(Brevundimonas),包括两个菌种:缺陷短波单胞菌和泡囊短波单胞菌。

rRNAⅤ群的细菌属于寡养单胞菌属(Stenotrophomonas),只有一个菌种——嗜麦芽寡养单胞菌。

2.细菌特性

假单胞菌属是一类无芽胞、有荚膜、散在排列的革兰阴性杆菌,菌体直或微弯、有单鞭毛或丛鞭毛,运动活泼;专性需氧,生长温度范围广,最适生长温度35℃,少数细菌可在4℃或42℃生长,营养要求不高,普通培养基上均可生长;氧化利用葡萄糖,氧化酶、触酶试验阳性,麦康凯上可生长。除曼多辛假单胞菌、产碱假单胞菌和假产碱假单胞菌外,假单胞菌属的细菌在生长过程中可产生各种水溶性色素,主要为黄绿色的绿脓素、青脓素等。

3.临床意义

人类非发酵菌感染中,假单胞菌占70%~80%,主要为铜绿假单胞菌,其他较为常见的菌种有鲍曼不动杆菌、嗜麦芽寡养单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、产碱假单胞菌等。

4.微生物学检验

(1)检验程序见图11-1。

血平板麦康凯平板

OF试验涂片革兰染色

42℃生长、极端单鞭毛

乙酰胺酶阳性

铜绿假单胞菌

图11-1 非发酵菌检验程序

(2)标本采集根据感染部位不同分别采集痰液、分泌物、尿液以及医院环境用品等。

(3)检验方法非发酵菌鉴定较为复杂,应先进行初步分群(属),然后再进行种的鉴定。初步分群的常用实验为葡萄糖氧化发酵试验(O/F试验)、氧化酶试验、动力观察。再进一步作生化试验进行菌种鉴定。

4.耐药性假单胞菌属的细菌对有些抗生素天然耐药,临床治疗假单胞菌感染的抗菌药物主要有三类:β内酰胺类、氨基糖苷类和喹诺酮类。按美国临床实验室标准化委员会(National Committee for Clinical Laboratory Standards,NCCLS)推荐,非肠杆菌科细菌除铜绿假单胞菌和不动杆菌属外,药敏试验不选用Kirby-Bauer法,应选用肉汤或琼脂稀释法或E-test法。

(三)铜绿假单胞菌

铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)是假单胞菌属的代表菌种,广泛分布于自然界和人体,其在外界环境中存在的重要条件是潮湿环境;为条件致病菌,主要引起医院内感染。

1.细菌特性

(1)形态染色革兰阴性杆菌,菌体呈球杆状或长丝状,长短不一;单个、呈双或短链状排列;无芽胞,有荚膜,一端有单鞭毛,运动活泼,临床分离株常有菌毛。

(2)培养特性专性需氧菌,部分菌株能在兼性厌氧环境中生长,营养要求不高,在普通培养基上生长良好,可生长温度范围是25℃~42℃,最适生长温度35℃,4℃不生长而42℃生长是该菌的鉴别点之一。

在血平板、麦康凯平板上均可形成5种不同形态的菌落:①典型型,菌落呈灰绿色,大小不一,扁平湿润,边缘不规则,呈伞状伸展,表面常可见金属光泽;②大肠菌样型,菌落圆形凸起,灰白色半透明,似大肠埃希菌菌落;③黏液型,菌落光滑凸起,呈黏液状;④侏儒型,细小,无光泽半透明菌落;⑤粗糙型,菌落中央凸起,边缘扁平,表面粗糙。在血平板上常可见透明溶血环,有生姜气味;在液体培养基中呈混浊生长,表面可形成菌膜,在SS琼脂平板上,该菌经过24h培养形成较小无色半透明菌落,一般不易与沙门菌和志贺菌菌落相区别,但经48h培养菌落中央呈棕绿色。铜绿假单胞菌在普通琼脂平板上生长时,可产生多种色素,主要为绿脓素(为铜绿假单胞菌特征性色素)和青脓素(荧光素),前者为蓝绿色。从临床标本分离的铜绿假单胞菌约有80%~90%产生绿脓素和青脓素。

(3)生化反应氧化酶阳性,在OF培养基上,能氧化利用葡萄糖、木糖产酸,精氨酸双水解酶阳性,乙酰胺酶阳性,液化明胶,利用枸橼酸盐,还原硝酸盐并产生氮气,吲哚阴性。

(4)抗原构造铜绿假单胞菌有菌体(O)抗原、鞭毛(H)抗原、黏液(S)抗原和菌毛抗原。O 抗原有两种成分:一种是外膜蛋白,为保护性抗原,免疫性强,具有属特异性;另一种为脂多糖(LPS),具有型特异性,可用于细菌分型。

(5)抵抗力铜绿假单胞菌对外界因素的抵抗力比其他无芽胞菌强,在潮湿的环境中能长期生存。对干燥、紫外线有抵抗力,但对热抵抗力不强,临床分离菌株对多种抗生素不敏感。

2.临床意义

铜绿假单胞菌可从医院内许多消毒不严的器皿和溶液中分离出来,常见为水溶液包括洗涤水、消毒液和液体药物等。医院内铜绿假单胞菌所致的肺部感染常见的入侵途径是雾化吸入、氧气吸入,各种侵袭性检查和治疗,如纤维支气管镜、导管、胆道、手术后引流等,破坏了机体皮肤或黏膜屏障,常引起本菌侵袭。

严重铜绿假单胞菌感染常发生在局部组织损伤或抵抗力降低的患者,如烧伤病人、各种癌肿患者和应用广谱抗生素、激素、抗肿瘤药及免疫抑制剂等患者;早产、先天畸形儿童和囊性纤维化等疾病及老年患者,也易发生严重的铜绿假单胞菌感染。

铜绿假单胞菌的致病作用与多种毒力因子有关,主要有以下几种:

(1)黏附和定植形成黏附的条件包括:①铜绿假单胞菌表面的荚膜多糖物质阻止白细胞和吞噬细胞的吞噬作用;②细菌表面的黏附素(主要是菌毛)和上皮细胞上存在的相应受体结合;③宿主防御机制异常。后者使细菌得以驻足,并保持和上皮细胞长时间的接触。

完整的皮肤黏膜是天然的屏障,故铜绿假单胞菌很少成为健康人的原发病原菌,但改变或损伤宿主正常的防御机制,如皮肤黏膜破坏、留置导尿管、气管切开插管或免疫机制缺损如粒细胞缺乏、低蛋白血症、各种肿瘤患者、应用激素和广谱抗生素的患者,常可导致感染。烧伤焦痂、婴儿或儿童的皮肤、脐带和肠道、老年人的尿道则是较常见的原发病灶或入侵门户。如果人体抵抗力降低或细菌毒力强,数量多,就可在血中生长繁殖,发生败血症。

(2)外毒素A 为主要毒力因子,是铜绿假单胞菌产生的最强有力毒素,可抑制蛋白质合成,对皮肤黏膜有坏死作用,约90%菌株产生外毒素A,在烧伤病人,其致死作用特别突出。

(3)其他尚有蛋白酶、胞外酶S、溶血素、肠毒素、色素、杀白细胞素、内毒素等。

3.微生物学检验

(1)检验程序见图11-2。

血液、环境用品

肉汤增菌

初步鉴定

革兰阴性杆菌菌落特征色素生化 42℃分型

氧化酶阳性气味鉴定反应生长(血清学

噬菌体)

OF:O

报告

图11-2 铜绿假单胞菌检验程序

(2)标本采集按疾病和检查目的分别采取不同的临床标本,如伤口分泌物、尿液、脓及穿刺液、血液、脑脊液、胸腹水、关节液等。医院环境检测可从空气、水、物体表面等处采样。

(3).检验方法

1)显微镜检查脑脊液、胸腹水离心后取沉淀物涂片,绿色脓汁、分泌物直接涂片革兰染色镜检。为革兰阴性杆菌,有鞭毛。

2)分离培养血液和体液标本可先增菌后在转种血琼脂平板和麦康凯平板,脓液、分泌物、中段尿等可直接接种上述培养基。

3)鉴定与鉴别根据培养物的菌落特征、产生水溶性绿色色素、特殊的生姜气味、氧化酶试验、OF 试验等即可作出初步鉴定。但对色素产生不典型的铜绿假单胞菌还需要做其它生化反应(如明胶液化、精氨酸双水解试验、42℃生长试验等,乙酰胺酶检测试验有一定的价值,)与其他假单胞菌鉴别。

从临床标本中分离出铜绿假单胞菌,需要排除污染,从患者血及无菌体液、尿液中分离到本菌,特别是反复检出者,结合临床表现即可确定是感染病原菌,铜绿假单胞菌下呼吸道感染需连续三次痰培养阳性才能确立,如患者无感染的临床表现,虽然分离到铜绿假单胞菌亦应作为正常菌群。

(4)耐药性铜绿假单胞菌对多数抗生素不敏感,呈现明显的固有耐药性。长期以来假单胞菌的固有耐药性认为是由于该菌具有外膜的低通透性(主要是外膜微孔蛋白突变,阻止抗生素由外膜进入胞质),最近的研究表明,假单胞菌耐药的产生机制与细菌具有能量依赖性的主动外排系统有关,也可能同时存在其他耐药机制。由于在长期抗生素治疗过程中铜绿假单胞菌可能发生耐药,因此,初代敏感的菌株在治疗3~4周后,测试重复分离株的抗生素敏感性是必要的。目前,对假单胞菌感染多采用联合治疗,如选用一种β内酰胺类抗生素与一种氨基糖苷类或一种喹诺酮类抗菌药物联合治疗严重的铜绿假单胞菌感染。

(四)荧光假单胞菌

1.细菌特性

革兰阴性杆菌,呈单个或成对排列,一端丛毛菌,运动活泼,偶见无鞭毛无动力的菌株。专性需氧,营养要求不高,在普通培养基上可生长,在麦康凯和SS平板上亦可生长,最适生长温度为25℃~30℃,大多数菌株在4℃生长,37℃或42℃不生长。约94%的菌株产生水溶性荧光素(青脓素),在紫外线(360nm)照射下呈黄绿色荧光,有些菌株产生蓝色色素,不扩散。氧化酶阳性,氧化葡萄糖、木糖产酸,对麦芽糖多不分解,水解精氨酸,多能液化明胶,卵磷酯酶阳性。本菌对卡那霉素敏感。

2.临床意义

荧光假单胞菌(P.fluorescens)存在于土壤和水等环境中,常与食物(鸡蛋、血、牛乳等)腐败有关,可作为咽部的正常菌群存在,是人类少见的条件致病菌,偶从泌尿道感染病人尿中分离出。由于具有嗜冷性,可在冰箱储存血液中繁殖,若输入含有此菌的血库血液,可导致病人不可逆性的休克而死亡。

3.微生物学检验

尿、分泌物等临床标本可直接接种在血平板上,血液标本可先于20℃~30℃进行增菌后再接种血平板分离。不能在35℃或37℃进行培养,以免发生假阴性。本菌鞭毛3根以上,42℃不能生长,不产生绿脓素,可以与铜绿假单胞菌相区别。本菌的最低鉴定特征有:单端鞭毛3根以上,动力阳性;氧化分解葡萄糖,不分解麦芽糖,氧化酶阳性,精氨酸水解阳性,明胶液化阳性;可产生荧光素,不产生绿脓素,4℃生长,42℃不生长。

(五)恶臭假单胞菌

1.细菌特性

革兰阴性杆菌,有些菌株为卵圆形,单端丛毛菌,运动活泼。专性需氧,最适生长温度25℃~30℃,42℃不生长,4℃生长不定,菌落与铜绿假单胞菌相似,但只产生荧光素(青脓素),不产生绿脓素,借此可与铜绿假单胞菌相区别,其陈旧培养物有腥臭味。

2.临床意义

恶臭假单胞菌(P.putica)为鱼的一种致病菌,常从腐败的鱼中检出,可作为人类咽部的正常菌群,是人类少见的条件致病菌,偶从人类尿道感染、皮肤感染和骨髓炎标本中分离出,分泌物有腥臭味。

3.微生物学检验

鉴定中注意与其他假单胞菌相区别,只产生荧光素不产生绿脓素,42℃不生长可与铜绿假单胞菌区别;不液化明胶、不产生卵磷酯酶、陈旧培养物上有腥臭味,有别于荧光假单胞菌。

(六)斯氏假单胞菌

1.细菌特性

革兰阴性杆菌,一端单鞭毛,运动活泼;最适生长温度35℃,4℃不生长,大部分菌株在42℃生长,氧化葡萄糖产酸,在6.5%高盐培养基中可生长;营养要求不高,普通平板可生长,新分离菌株在培养基上可形成特征性干燥、皱缩样菌落,黏附于琼脂表面难以移动,可产生黄色色素,无荧光。

2.临床意义

斯氏假单胞菌(P.stutizeri)存在于土壤和水中,在医院设备及各种临床标本中亦有发现,本菌引起的感染并不多见,偶可引起抵抗力低下患者伤口、泌尿道、肺部感染等。

3.微生物学检验

注意与曼多辛假单胞菌相鉴别,其特征性菌落、精氨酸双水解试验阳性、不分解麦芽糖和甘露醇,有别于曼多辛假单胞菌。

(七)不动杆菌属

不动杆菌属(Acinetobacter)归于奈瑟菌科,1986年巴斯德研究所的Bouvet等根据DNA-DNA杂交和营养特征将不动杆菌分成17个基因种,但只有6个基因种有菌名,模式菌是醋酸钙不动杆菌。

1.细菌特性

不动杆菌属为一群不发酵糖类、氧化酶阴性、硝酸盐还原阴性、不能运动的革兰阴性杆菌。菌体多为球杆状,常成双排列,看似双球菌,有时不易脱色,可单个存在,无芽胞、无鞭毛,黏液型菌株有荚膜。专性需氧菌,营养要求不高,普通培养基上生长良好,最适生长温度35℃,可在麦康凯培养基上生长,菌落呈无色或淡粉红色,但在SS上有些菌株生长不良。

2.临床意义

不动杆菌广泛分布于自然界、医院环境和健康人的皮肤。在临床标本中,最常见的是鲍曼不动杆菌,它是仅次于铜绿假单胞菌而居临床分离阳性率第二位的非发酵菌,为条件致病菌。医院内感染最常见的部位是呼吸道、尿道和伤口;致病条件有抗生素治疗、手术、应用器械、ICU病房等;所致的疾病包括肺炎、尿路感染、皮肤和伤口感染、心内膜炎、脑膜炎和腹膜炎等。

3.微生物学检验

(1)检验程序见图11-3。

直接涂片分离培养

革兰染色(血平板、麦康凯)

35℃18~24h

涂片革兰动力KIA 全面生化反应

染色

报告

图11-3 不动杆菌属检验程序

(2)标本采集根据临床疾病的不同采集不同的标本,常见为痰液、尿液和分泌物。

(3)检验方法

1)显微镜检查临床标本采集后先做涂片,革兰染色后镜检,为革兰阴性球杆菌,常成双排列,在吞噬细胞内也有存在,易误认为奈瑟菌属细菌。

2)分离培养在血平板和麦康凯平板上经35℃~37℃培养18h~24h后,可形成圆形、灰白色、光滑、

湿润、边缘整齐、直径2~3mm的菌落,无色素形成;洛菲不动杆菌菌落较小,直径为1~1.5mm;溶血不动杆菌在血平板上可产生β溶血;有些菌株苛养,在血平板上呈针尖样菌落,在营养肉汤中不生长;某些氧化葡萄糖的不动杆菌可使血平板呈独特的棕色。氧化酶阴性,动力阴性,硝酸盐还原试验阴性。

3)鉴定与鉴别培养物经涂片、染色,如为革兰阴性成双排列的球杆菌,形态似奈瑟菌;KIA底层及斜面均不变色、无动力;氧化酶阴性,硝酸盐还原试验阴性,可初步确定为不动杆菌属的细菌(后三项试验均为阴性者在革兰阴性杆菌中极为罕见)。本菌属内种的鉴定参见表11-1,并注意与类似菌的鉴别(表11-2)。

表11-1 不动杆菌菌种的鉴别

醋酸钙鲍曼不溶血不琼氏不约氏不洛菲不

不动杆菌动杆菌动杆菌动杆菌动杆菌动杆菌葡萄糖 + + +或- - - -

木糖 - + +或- - - -

乳糖 + + - + + + 精氨酸双水解酶 + + + + -或+ -

鸟氨酸脱羧酶 + + - - - -

苯丙氨酸脱氨酶 + + - - - -

丙二酸盐利用 + + - - -或+ -

柠檬酸盐利用 + + + +或- + - 溶血 - - + - - -

液化明胶 - - + - - -

生长温度

37℃ + + + + - + 41℃ - + - + - -

42℃ - + - - - -

表11-2 不动杆菌与类似菌的比较

醋酸钙洛菲不铜绿假粪产

不动杆菌动杆菌单胞菌碱杆菌

氧化酶 - - + +

硫化氢 - - -/+ -

吲哚 - - - -

动力 - - + +

硝酸盐还原 - - + -/+

葡萄糖 + - + -

木糖 + - + -

乳糖(+) - - -

麦芽糖(+) - - -

甘露醇 - - - -

蔗糖 - - - -

精氨酸双水解酶 - - + -

柠檬酸盐利用 + - + +

(4)耐药性不动杆菌均对青霉素、氨苄西林和头孢拉啶耐药;大多数菌株对氯霉素耐药,不同菌株对二代和三代头孢菌素的耐药性不同,所以每个分离菌株均应进行药敏试验。非发酵菌中,仅本菌属细菌与铜绿假单胞菌可采用Kirby-Bauer法做药敏试验。多重耐药最多见于醋酸钙不动杆菌、鲍曼不动杆菌和溶血不动杆菌。

(八)寡养单胞菌属

寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)是一个新命名的菌属,属于假单胞菌科的RNA同源群Ⅴ,只有一个菌种——嗜麦芽寡养单孢菌(S.maltophilia),此菌的名称先后有嗜麦芽假单胞菌、嗜麦芽黄单胞菌和嗜麦芽窄食单胞菌。

1.细菌特性

革兰阴性杆菌,菌体直或略弯,单个或成对排列,一端丛毛菌,有动力。最适生长温度为35℃,4℃不生长,近半数菌株42℃生长,专性需氧菌,营养要求不高,在普通琼脂平板上生长良好,麦康凯平板可生长。

2.临床意义

为条件致病菌,主要引起院内感染,最常见的是:呼吸道感染、尿道感染、伤口感染,也可引起脑膜炎、菌血症、医源性败血症、心内膜炎等。引起本菌定植和感染的危险因素有:机械通气、广谱抗生素的预防性应用、化疗、插管和中性粒细胞减少等。在非发酵菌引起的感染中,仅次于铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌而居临床分离阳性率的第三位。

3.微生物学检验

(1)标本采集血液标本先肉汤增菌,尿液、痰、胸水、伤口等标本直接接种于血平板和麦康凯平板。

(2)检验方法

1)显微镜检查临床标本直接显微镜检查意义不大。细菌涂片革兰染色镜下为短至中等大小的革兰阴性杆菌;不染色标本显微镜下动力检查,本菌运动活跃;鞭毛染色后镜检,本菌为一端丛毛菌,多数菌

株鞭毛在3根以上。

2)分离培养在普通琼脂平板上形成中等大小、圆形、黄色或棕黄色不透明的菌落,在血平板上菌落不溶血,有氨气味。氧化酶阴性,DNA酶阳性,赖氨酸脱羧酶试验阳性,葡萄糖氧化分解缓慢,可快速氧化分解麦芽糖,能液化明胶,硝酸盐产氮气阴性,部分菌株硝酸盐还原试验阳性。

3)鉴定下列特征可用来推测性地鉴定嗜麦芽寡养单胞菌:在血平板或麦康凯平板上生长良好;氧化酶阴性;OF麦芽糖氧化产酸,但OF葡萄糖氧化分解可以阴性或产弱酸性反应;赖氨酸脱羧酶阳性、DNA 酶阳性;一些菌株产生黄色色素;对碳青霉烯类抗生素天然耐药。

(3)耐药性本菌对大多数临床常用的抗生素如氨基糖苷类和很多β内酰胺类(包括对铜绿假单胞菌很有效的抗生素,如碳青霉烯类)天然耐药,主要与该菌存在一种锌离子依赖金属β内酰胺酶有关,但对三甲氧苄氨嘧啶-磺胺甲噁唑天然敏感。目前尚无标准方法用于嗜麦芽寡养单胞菌的耐药性检测,可用肉汤或琼脂稀释法及E-test法检测其抗生素敏感性。

(九)产碱杆菌属

产碱杆菌属(Alcaligenes)在伯杰系统细菌手册中被分为2个种:粪产碱杆菌(A.faecalis)和木糖氧化产碱杆菌(A.xylosoxidans);后者又分为2个亚种:木糖氧化产碱杆菌木糖氧化亚种(A.xylosoxidans subsp. xylosoxidans)和木糖氧化产碱杆菌脱硝亚种(A. xylosoxidans subsp.denitrificans)。有医学意义的产碱杆菌除上述三种菌外,尚有皮氏产碱杆菌(A.piechaudii),典型菌种是粪产碱杆菌。

1.细菌特性

革兰阴性短杆菌,常成单、双或成链状排列,具有周鞭毛,无芽胞,多数菌株无荚膜。专性需氧,最适生长温度25℃~37℃,部分菌株42℃能生长,营养要求不高,普通培养基上生长良好,麦康凯和SS平板亦可生长。氧化酶阳性,不分解任何糖类,葡萄糖OF培养基中产碱,本属细菌除能利用柠檬酸盐和部分菌株能还原硝酸盐外,多数生化反应为阴性。

2.临床意义

本属中临床分离最常见的是粪产碱杆菌,大部分感染是条件致病,主要来自潮湿环境,如雾化器、呼吸机和灌洗液等,血、痰、尿、脑脊液等是常见的发现部位,是医院感染的病原菌之一。

3.微生物学检验

(1)检验程序与不动杆菌属细菌检验程序相同。

(2)标本采集根据临床疾病不同采集不同标本,如血、尿、痰、脓汁、脑脊液等。

(3)检验方法

1)显微镜检查脑脊液、尿液离心取沉淀涂片,脓汁和痰液可直接涂片革兰染色镜检,本菌为革兰阴性短杆菌,有周鞭毛。

2)分离培养血液、脑脊液标本需肉汤增菌后再转种固体培养基,脓汁、分泌物、尿液可直接接种血平板和麦康凯平板。经18h~24h培养后,在血平板上可形成大小不等、灰白色、扁平、边缘稍薄的的湿润菌落,粪产碱杆菌部分菌株有水果香味;在麦康凯和SS平板上形成无色透明菌落;在液体培养基中呈均匀混浊生长,表面形成菌膜,管底有粘性沉淀。

3)鉴定与鉴别本属细菌与产碱假单胞菌极为相似,二者主要区别在于前者为周毛菌而后者为极端

单鞭毛菌;在含有蛋白胨的肉汤培养基中产氨,使pH上升至8.6,为本菌的鉴别特征。木糖氧化产碱杆菌木糖氧化亚种通过使OF葡萄糖和OF木糖产酸而很容易和其他产碱杆菌区别;粪产碱杆菌在碳水化合物培养基上呈强烈的产碱反应,大部分菌株形成细小、边缘不规则的菌落,某些菌株产生特征性的水果味并使血平板呈绿色,本菌的一个重要生化特征是能还原亚硝酸盐而不能还原硝酸盐。皮氏产碱杆菌通过能还原硝酸盐和能在6.5%NaCl中生长可与其他产碱杆菌区别;木糖氧化产碱杆菌脱硝亚种较少从临床分离到。

(4)耐药性药物敏感试验的药物选择与假单胞菌相同,临床治疗可以用哌拉西林及替卡西林/克拉维酸,其他根据药敏试验结果选药。

(十)军团菌属

伯杰系统细菌学手册将其定为军团菌科,军团菌属。该菌属较为复杂,时有新种发现,现已命名的菌种分别来自人体和环境,共有39种及3个亚种,64个血清型。模式菌是嗜肺军团菌。

1.细菌特性

(1)形态染色革兰阴性杆菌,无芽胞,无荚膜,有端鞭毛或侧鞭毛,动力阳性。

(2)培养特性能在细胞内生长繁殖,专性需氧,同时生长环境中还需2.5%~5%的二氧化碳;其生长的pH范围较窄,最适pH6.4~7.2,在pH1.7时则死亡;最适生长温度35℃,可生长的温度范围为25℃~42℃,在外环境中甚至水温达63℃时亦可分离到本菌;营养要求苛刻,普通培养基、血平板和巧克力平板均不生长,生长过程中需要多种微量元素作为酶的协同因子或在代谢中起重要作用,同时需要氨基酸,以甲硫氨酸和半胱氨酸最为重要。生长缓慢,固体培养基在培养48h左右,在浓密涂种处可见生长。

不同培养基上菌落的形成和表现不同,目前公认的最适宜培养基是缓冲活性炭酵母浸出液,加上铁、L-半胱氨酸和α-酮戊二酸(在不含L-半胱氨酸的BCYE和血平板上不生长),称之为BCYEa(buffered charcoal-yeast extract agar)培养基。

(3)生化反应生化反应可作为鉴定时的参考,大多数菌种能产生β内酰胺酶和液化明胶、水解淀粉,触酶阳性,氧化酶弱阳性;硝酸盐还原、尿素酶和碳水化合物利用反应都是阴性;所有嗜肺军团菌血清型(血清型4和15除外)的各个菌株均具有极强的水解马尿酸盐的作用,而其他军团菌则阴性。

(4)抵抗力军团菌已成为天然水环境中常在的一大类菌群,嗜肺军团菌的生存能力较强,在含有藻类物质的气溶胶中可长期存活,对紫外线敏感,对热和常用的化学消毒剂敏感。

2.临床意义

军团病在世界各地均有发病,但主要在经济发达国家流行,国内多属散发报道。本菌广泛存在于土壤及自然和人工的水环境中,尤其是在空调冷凝水中的检出率最高。大多数病例(85%)是嗜肺军团菌引起的,其中嗜肺军团菌1血清型和6血清型占75%。高发于夏秋季,细菌通过空气传播,易侵犯患有慢性器质性疾病或免疫功能低下的患者,最常见的是肺炎型。

3.微生物学检验

(1)检验程序见图11-4。

血清血平板涂片革兰直接荧光抗体检测

培养染色抗原、核酸检测

平板

间接荧光

抗体染色

ELISA

检测抗体48h后生长,24h

可疑菌落非军团菌

涂片革兰染色

革兰阳性菌革兰阴性杆菌

非军团菌

做军团菌鉴定

(直接荧光抗体染色、生物学特性、

气相色谱分析)

图11-4 军团菌检验程序

(2)标本采集标本应小心收集避免气溶胶的形成,最好于收集后两小时内用无菌防漏容器在环境温度下小心送到实验室。

1)适用的标本主要包括咳出的痰、用支气管镜收集的材料、经气管吸出物、胸腔积液和血液等。除胸水和血液外,其他标本中均混有正常菌群及其他病原菌,正常菌群对军团菌有杀灭作用,取材后应及时分离培养,并使用加抗生素的选择培养基。

2)病理组织标本如闭合或开放的肺活检材料、尸体标本及实验动物的肝、脾等标本必须制成悬液,再进行涂片和分离培养。

3)环境污染标本如水、土壤等,水标本应先浓缩再接种,土壤标本加入水中振荡30min取水样,参照水标本处理。

(3)检验方法

1)显微镜检查标本直接涂片革兰染色,意义不大。

2)分离培养本菌营养要求苛刻,生长缓慢,在35℃~37℃,相对湿度70%~80%,2.5%~5.0%CO2环境下,BCYE培养基上培养2~5d可形成直径1~2mm有光泽的菌落,在F-G(Feeley-Garman)琼脂培养基上,培养3~5d可见针尖大小的菌落,在紫外线照射下可产生荧光。标本如在血平板、巧克力平板上生长或在BCYE或F-G平板上24h生长,则不是军团菌。临床标本如有污染,可在培养基中加入对军团菌无抑制作用的抗生素如头孢噻吩4μg/ml、多粘菌素E16U/ml、万古霉素0.5μg/ml、放线菌酮80μg/ml。

3)鉴定在血平板、巧克力平板及不含L半胱氨酸的BCYE平板上不生长,而在含有L半胱氨酸的BCYE 和F-G培养基上生长缓慢、形成典型菌落;革兰阴性小杆菌,有显著的多形性,均应怀疑为军团菌。对可疑菌株可作直接荧光抗体染色等血清学鉴定和生化反应,必要时作细菌脂肪酸的气液相色谱分析和DNA杂交、PCR试验。

4)免疫学检测检测军团菌血清抗体的方法主要有间接免疫荧光染色(IFA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)及放射免疫测定等,其中以IFA在临床应用最多。急性期和恢复期双份血清抗体效价增加4倍以上并达≥1:128或单份血清抗体效价达到或超过1:256为阳性。本法取恢复期血清需时较久(1~3个月),且可能与其他细菌的抗体起交叉反应。

5)核酸检测是快速特异方法,常用DNA探针和PCR方法检测军团菌rRNA,可用于军团菌的快速诊断。

(4)耐药性军团菌体外抗生素敏感性试验尚无统一标准,且与临床治疗反应不一致,因此,并不主张对医院诊断实验室分离的军团菌进行体外抗生素敏感性试验。目前已取得明显临床效果的抗菌药物主要是大环内酯类药物、利福平、氟喹诺酮类药物,其次是四环素类。青霉素、头孢菌素、氨基糖苷类抗生素治疗本菌无效。

(十一)其他非发酵革兰阴性杆

1.黄杆菌科

(1)细菌特性本科细菌是一群无动力、无芽胞、氧化酶阳性的革兰阴性杆菌。触酶阳性,临床可分离到的菌株一般均可产生吲哚;脑膜败血金色杆菌DNA酶阳性,动物伤口伯杰菌脲酶强阳性。专性需氧,最适生长温度35℃,营养要求不高,普通培养基上可生长,临床可分离到的菌株(除动物伤口伯杰菌外)均可产生不溶性的黄色色素,在麦康凯培养基上生长较弱或完全不生长,粘液威克菌可形成黏液样黏性菌落,难以从琼脂上分离。

(2)临床意义本科细菌在医院主要存在于有水的环境和潮湿的物体表面,对人致病的有脑膜败血金色杆菌、产吲哚金色杆菌、短稳杆菌、粘液威克菌、动物伤口伯杰菌等,其中脑膜败血金色杆菌是使人类致病的最常见的菌种,对早产儿具有高度致病性,可致新生儿脑炎,在婴儿室引起流行,且死亡率较高,也可引起免疫力低下成人肺炎。

(3)微生物学检验

1)分离培养与鉴定经35℃、18~24h培养后,在普通培养基上可形成光滑、有光泽、边缘整齐、直径1~1.5mm的菌落,典型菌落为淡黄色,也有的呈黄色或棕黄色。生化鉴定是黄杆菌科细菌鉴别的主要指标,详见表11-3。

2)耐药性临床常见的脑膜败血金色杆菌对广谱抗菌药物如氨基糖苷类、β-内酰胺类、四环素类、氯霉素等有耐药性,治疗最好根据药敏试验结果选择药物。临床经验用药可选用磺胺类和大环内脂类抗生素。

表11-3 临床常见黄杆菌科细菌主要鉴别特征

试验脑膜败血产吲哚粘液动物伤短稳

金色杆菌金色杆菌威克菌口伯杰菌杆菌

氧化酶 + + + + +

麦康凯生长 V(26) - - - -

动力 - - - - -

OF葡萄糖 + + - - V(80)

OF甘露醇 + + - - -

吲哚 + + + + +

淀粉水解 - + - - V(40)

七叶苷水解 + + - - -

ONPG + (41) - - -

DNA酶 + - - - +

尿素 - - - ++ -

青霉素 R R S S R

多粘菌素 R R S R R

色素微黄亮黄淡黄 - 淡黄

注:+,90%以上菌株阳性;-,90%以上菌株阴性;V,11%~89%的菌株阳性(表中数字为阳性率)2.莫拉菌属

医学上重要的莫拉菌有:腔隙莫拉菌(M. lacunate)、非液化莫拉菌(M. nonliquefaciens)、奥斯陆莫拉菌(M. osloensis)、苯丙酮酸莫拉菌(M. phenylpyruvica)、亚特兰大莫拉菌(M. atlantae)、狗莫拉菌(M. canis)和林肯莫拉菌(M. lincolnii)。

(1)细菌特性革兰阴性球杆菌,菌体小,革兰染色不易脱色,常成双或短链状排列,类似奈瑟菌,无鞭毛、无芽胞、多数菌株有荚膜。专性需氧,大部分莫拉菌营养要求高,首次培养需加入兔血或其他动物血清,如腔隙莫拉菌和非液化莫拉菌;奥斯陆莫拉菌和苯丙酮酸莫拉菌在血平板上生长良好,菌落较大,不溶血;最适生长温度32℃~35℃。氧化酶、触酶阳性,不能分解任何糖类,不产生吲哚和H2S。

(2)临床意义莫拉菌是人体黏膜表面的正常菌群,致病性较低,通常位于呼吸道。腔隙莫拉菌可引起结膜炎、角膜炎、慢性鼻窦炎和心内膜炎;非液化莫拉菌可引起内眼炎和化脓性关节炎;奥斯陆莫拉菌和苯丙酮酸莫拉菌在临床标本中很常见,一般对人类无致病性,但也有引起肺炎、结膜炎、脑膜炎、化脓性关节炎、中耳炎和腹膜炎的报道;亚特兰大莫拉菌有引起菌血症的报道,狗莫拉菌是一个新种,主要定植于狗和猫的上呼吸道,在人类血液和狗咬伤口处分离过本菌。

(3)微生物学检验

1)分离培养细菌在血平板或含兔血清的琼脂上经35℃培养24~48h后出现针尖大小(通常菌落直径小于0.5mm)到直径2mm之间的圆形、凸起、光滑湿润、无色不溶血的菌落,有的菌落培养数日后,菌落周围出现绿变区,时间延长可见柠檬色素或黄色色素。

2)鉴定与鉴别根据本菌氧化酶、触酶阳性(可排除不动杆菌)、不分解任何糖类(可同大多数奈瑟菌相区别),首先确定其属;然后进一步鉴定其种,确定本属各种之间的生化反应见表11-4。

3)耐药性大多数莫拉菌对低浓度的青霉素很敏感,所以临床上分离出的这些菌株一般不做药敏试

验,但现在产β内酰胺酶的菌株也开始出现,要注意临床分离株的β内酰胺酶的检测。

表11-4 莫拉菌主要鉴别特征

项目腔隙莫

拉菌

非液化

莫拉菌

狗莫

拉菌

林肯莫

拉菌

奥斯陆

莫拉菌

苯丙酮酸

莫拉菌

亚特兰大

莫拉菌

氧化酶+ + + + + + + 触酶+ + + + + + + 麦康凯生长- V(17) + - V(49) + + 动力- - - - - - - OF葡萄糖- - - - - - - 尿素酶- - - - - + - 苯丙氨酸脱氨酶- - - ND - + - 七叶苷水解+ ND - - - - - 硝酸盐还原+ + + - V(26) + ND 亚硝酸盐还原- - V V - - V(20) DNA酶- - + - - - - 溶血(羊血)- - - - - - - 明胶水解+ - - - - - - 注:+,90%以上的菌株阳性;-,90%以上菌株阴性;V,11%~89%的菌株阳性;ND,没有资料。

革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌的区别

革兰氏阳性菌革兰氏阴性菌 自然界存在多种多样细菌,如何将这些细菌加以鉴别、分类,并选择有效药物进行治疗这是很重要的问题。革兰氏染色法,能够把细菌分为两大类:采用这种染色方法,是先用龙胆紫来染细菌,所有细菌都染成了紫色,然后再涂以碘液,来加强染料与菌体的结合,再用95%的酒精来脱色20~30秒钟,有些细菌不被脱色,仍保留紫色,有些细菌被脱色变成无色,最后再用复红复染1分钟,结果已被脱色的细菌被染成红色,未脱色的细菌仍然保持紫色,不再着色,这样,凡被染成紫色的细菌称为革兰氏阳性菌;染成红色的称为革兰氏阴性菌。革兰氏染色法的意义就在于鉴别细菌,把众多的细菌分为两大类,革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。大多数化脓性球菌都属于革兰氏阳性菌,它们能产生外毒素使人致病,而大多数肠道菌多属于革兰氏阴性菌,它们产生内毒素,靠内毒素使人致病。常见的革兰氏阳性菌有:葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、炭疽杆菌、白喉杆菌、破伤风杆菌等;常见的革兰氏阴性菌有痢疾杆菌、伤寒杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、不动杆菌属、铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌、奈瑟氏球菌属、百日咳杆菌、霍乱弧菌及脑膜炎双球菌等。在治疗上,大多数革兰氏阳性菌都对青霉素敏感;而革兰氏阴性菌则对青霉素不敏感,而对链霉素、氯霉素等敏感。所以首先区分病原菌是革兰氏阳性菌还是阴性菌,在选择抗生素方面意义重大。附: 细菌的致病性 凡能引起人类疾病的细菌,统称为病原菌或致病菌(pathogenic bacterium)。细菌在人体内寄生,增殖并引起疾病的特性称为细菌的致病性或病原性(pathogenicity)。致病性是细菌种的特征之一,具有质的概念,如鼠疫细菌引起鼠疫,结核杆菌引起结核。致病性强弱程度以毒力(virulence)表示,是量的概念。各种细菌的毒力不同,并可因宿主种类及环境条件不同而发生变化。同一种细菌也有强毒、弱毒与无毒菌株之分。细菌的毒力常用半数死量(me

常见革兰阴性菌的天然耐药表

常见革兰阴性菌的天然耐药表 微生物氨 苄 西 林 氨 苄 西 林/ 舒 巴 坦 阿 莫 西 林/ 克 拉 维 酸 替 卡 西 林 替 卡 西 林/ 克 拉 维 酸 哌 拉 西 林 哌 拉 西 林/ 他 唑 巴 坦 头 孢 唑 林 、 头 孢 噻 吩 头 孢 噻 肟、 头 孢 曲 松 氨 曲 南 头 孢 他 啶 头 孢 西 丁、 头 孢 替 坦 头 孢 呋 辛 厄 他 培 南 亚 胺 培 南 美 洛 培 南 环 丙 沙 星 氨 基 糖 苷 类 四 环 素 类 替 加 环 素 氯 霉 素 多 粘 菌 素 B/ 粘 菌 素 呋 喃 妥 因 复 方 新 诺 明 磷 霉 素 所有肠杆菌科细菌对青霉素G、糖肽类、夫西地酸、大环内酯类(除了某些种类)、林可酰胺类、链阳霉素类、利福平、达托霉素、利奈唑胺天然耐药 柯氏枸橼酸杆菌R R R 弗氏枸橼酸菌属R R R R R R 阴沟肠杆菌/产气肠杆菌R R R R R R 赫氏埃希菌R R 蜂房哈夫尼亚菌R R R R R 肺炎克雷伯菌R R 摩根菌属R R R R R R R 奇异变形杆菌R R R 普通变形杆菌/潘氏变形杆菌R R R R R R 雷氏普罗威登斯菌/斯氏普罗威登 斯菌 R R R R R R R 粘质沙雷菌R R R R R R R R 小肠结肠炎耶尔森菌R R R R 假结核耶尔森菌R 所有非发酵革兰阴性杆菌天然耐药同肠杆菌科细菌,还对头孢唑林、头孢西丁、头孢孟多、头孢呋辛天然耐药 铜绿假单胞菌R R R R R R R R R R R 鲍曼/醋钙不动杆菌复合群R R R R R R R R 洋葱伯克霍尔德菌R R R R R R R R R R R R R R R R 嗜麦芽窄食单胞菌R R R R R R R R R R R R R R R R R 木糖氧化无色杆菌R R R R R R 脑膜炎败血金黄杆菌R R R R R R R R R R R R 人苍白杆菌R R R R R R R R R R R R

不发酵革兰阴性菌属题库1-2-10

不发酵革兰阴性菌属题库1-2-10

问题: [单选,A2型题,A1A2型题]患者行右下肢截肢术后,在手术创面出现脓性分泌物。经培养血平板上有扁平、溶血菌落,有生姜味,传代后有绿色色素,此菌很可能是() A.金黄色葡萄球菌 B.草绿色链球菌 C.铜绿假单胞菌 D.嗜麦芽窄食单胞菌 E.大肠埃希菌 铜绿假单胞菌在血琼脂平板上经18~24小时培养,可形成扁平、湿润、有金属光泽、有特殊气味的灰绿色或蓝绿色菌落,菌落周围有透明溶血环。

问题: [单选,A2型题,A1A2型题]下列哪项不是铜绿假单胞菌所产生的毒素和酶() A.铜绿假单胞菌外毒素A B.蛋白分解酶 C.胞外酶S D.弹性蛋白酶 E.红疹毒素 铜绿假单胞菌的主要致病物质是内毒素,此外尚有菌毛、荚膜、胞外酶和外毒素等多种致病因子,包括外毒素A、蛋白分解酶、胞外酶S、弹性蛋白酶、碱性蛋白酶等。红疹毒素是A群链球菌产生的外毒素。

问题: [单选,A2型题,A1A2型题]下列哪种是非发酵菌的主要特征() A.无芽孢 B.营养要求不高 C.革兰阴性杆菌 D.不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖 E.需氧或兼性厌氧 非发酵革兰阴性杆菌指一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽孢的革兰阴性杆菌,多为条件致病菌。 https://www.wendangku.net/doc/ee17003436.html,/ 电子竞技专业

问题: [单选,A2型题,A1A2型题]军团菌的分离培养基是() A.SS培养基 B.麦康凯培养基 C.含L-半胱氨酸的BCYE培养基 D.罗-琴培养基 E.血琼脂培养基 军团菌是一类特殊营养的革兰阴性需氧菌,在一般培养基上不生长,可在含有磷酸铁和L-半胱氨酸的F-G琼脂培养基,或缓冲的活性炭酵母提取物(BCYE)琼脂培养基上,在pH6.0~6.9、35℃含2.5%CO的空气中缓慢生长。

不常见革兰阴性菌的快速鉴定方法

不常见革兰阴性菌的快速鉴定方法 病原学检测对于感染性疾病的诊断和治疗非常重要,因此,临床微生物实验室在医院感染治疗和控制中起到关键作用。目前,大部分临床微生物实验室采用商品化的鉴定系统鉴定临床分离的细菌,但是对于一些临床不常见的细菌,传统的鉴定方法(如革兰染色、生化反应等)更加实用有效。因此,本文参照CLSI M32-A2文件列举了一些临床不常见细菌的特征和鉴定方法,希望对临床微生物实验室的常规工作有所帮助。 一. 不常见革兰阴性菌 1. 布氏杆菌属 布氏杆菌属是一类革兰阴性细小杆菌,牛、羊、猪等动物最易感染。人类接触带菌动物或食用病畜及其乳制品,均可被感染。布氏杆菌病广泛分布世界各地,我国部分地区曾有流行。布氏杆菌属分为羊、牛、猪、鼠、绵羊及犬布氏杆菌6 个种,20个生物型。中国流行的主要是羊、牛、猪三种布氏杆菌,其中以羊布氏杆菌病最为多见。 布氏杆菌属细菌为非抗酸性,无芽胞,无荚膜,无鞭毛,呈球杆状(见图1)。血琼脂(BAP)上为透明或半透明、光滑且有光泽菌落。此细菌不在麦康凯琼脂上生长。布氏杆菌属细菌尿素阳性,触酶、氧化酶阳性,而吲哚阴性。由于该菌属细菌具有强的传染性,因此一旦怀疑应送往LRN B级参考实验室进行确认。 2. 空肠弯曲菌 空肠弯曲菌是一种人畜共患病病原菌,可以引起人和动物发生多种疾病,并且是一种食物源性病原菌,认为是引起全世界人类细菌性腹泻的主要原因。其致病因素包括粘附、侵袭、产生毒素和分子模拟机制等四个方面,通过分子模拟机制可以引起最严重的并发症一格林一巴利综合征。空肠弯曲菌可以通过产生细胞紧张性肠毒素、细胞毒素和细胞致死性膨胀毒素而致病。空肠弯曲菌对红霉素、新霉素、庆大霉素、四环素、氯霉素、卡那霉素等抗生素敏感,但近年发现了不少耐药菌株及多重耐药性菌株。 空肠弯曲菌菌体轻度弯曲似逗点状。菌体一端或两端有鞭毛,运动活泼,在暗视野镜下观察似飞蝇。有荚膜,不形成芽胞。微需氧菌,在含2.5~5% 氧和10% CO2的环境中生长最好,在正常大气或无氧环境中均不能生长,最适温度为37~42℃。本菌在普通培养基上难以生长,在凝固血清和血琼脂培养基上培养36 小时可见无色半透明毛玻璃样小菌落,单个菌落呈中心凸起,周边不规则,无溶血现象。空肠弯曲生化反应不活泼,不发酵糖类,不分解尿素。可还原硝酸盐,氧化酶和触酶为阳性。能产生微量或不产生硫化氢,甲基红和v-p试验阴性,枸椽酸盐培养基中不生长,在弯曲菌中马尿酸呈阳性反应具有重要鉴定价值。 3.“HACEK”群细菌 HACEK是指一组革兰阴性杆菌:嗜血杆菌属(H)、放线杆菌属(A)、人心杆菌属(C)、艾肯菌属(E)、金氏杆菌属(K)。这组微生物的共同特征是易导致心内膜感染,约占全部感染性心内膜炎的5-10%,它们是导致正常人群(非静脉药物滥用者)心

非发酵革兰氏阴性杆菌

第十一章非发酵革兰阴性杆菌 一、教学大纲要求 (1)非发酵菌的概念、种类和初步鉴定特征。 (2)假单胞菌属的分类、临床意义、细菌特性、实验室检查和耐药性。 (3)铜绿假单胞菌的临床意义、细菌特性、实验室检查和耐药性。 (4)荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、斯氏假单胞菌的临床意义、细菌特性和实验室检查。 (5)不动杆菌属、寡养单胞菌属、产碱杆菌属和军团菌的临床意义、细菌特性、实验室检查和耐药性。 (6)黄杆菌属和莫拉菌属的细菌特性和实验室检查。 二、教材内容精要 (一)非发酵菌的主要特点和分类 非发酵菌(Nonfermentative Bacilli)是一群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞的革兰阴性杆菌;在分类学上分别属于不同的科、属和种,但生化特征十分接近,多为条件致病菌,主要引起院内感染。 非发酵菌包括的菌种较多,主要有下列菌属:假单胞菌属(Pseudomonas)、不动杆菌属(Acinetobacter)、寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)、伯克菌属(Burkholderia)、产碱杆菌属(Alcaligenes)、无色杆菌属(Achromobacter)、莫拉菌属(Moraxella)、金氏杆菌属(Kingella)、黄杆菌属(Flavobacterium)、艾肯菌属(Eikenella)、土壤杆菌属(Agrobacterium)、黄单胞菌属(Xanthomonas)、丛毛单胞菌属(Comamonas)、食酸菌属(Acidovorax)等。 若某种未知的革兰阴性杆菌具有以下一种或几种特征,则怀疑其为非发酵菌: 1.氧化发酵试验常显示是氧化型或产碱型。 2.氧化酶阳性,非发酵菌中,除不动杆菌和嗜麦芽寡养单胞菌外氧化酶试验均为阳性。但并非所有氧化酶阳性的革兰阴性杆菌都是非发酵菌,如巴斯德菌、气单胞菌、邻单胞菌和弧菌属等也是氧化酶阳性但不是非发酵菌。 3.动力,非发酵菌大部分为专性需氧菌,在半固体培养基上观察动力不明显,可用悬滴法或鞭毛染色法检测其动力。 (二)假单胞菌属 假单胞菌属(Pseudomonas)为严格需氧、有鞭毛、无芽胞、无荚膜的革兰阴性杆菌,氧化酶试验均阳性,是假单胞菌科的代表菌属。 1.分类 假单胞菌科由假单胞菌属及其亲缘关系密切的菌属(以前大部分属于假单胞菌属)组成,用于假单胞菌科分类的方案有两个,一是根据细菌的表型特征分为7个主要的组,二是根据rRNA-DNA同源研究将假单胞菌科分为5个rRNA群。 尽管假单胞菌科的绝大部分细菌原先都被归类于假单胞菌属,但现在只有rRNAⅠ群的细菌属于假单胞菌属(Pseudomonas),包括铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、斯氏假单胞菌、曼多辛假单

革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的区别

革兰氏阳性细菌与阴性细菌的比较 把细菌采用龙胆紫染色,涂碘加强染色。然后用酒精脱色,革兰氏阳性菌不会被脱色呈现紫色,革兰氏阴性菌会被脱色呈现红色。在治疗上,大多数革兰氏阳性菌都对青霉素敏感;而革兰氏阴性菌则对青霉素不敏感,而对链霉素、氯霉素等敏感。革兰氏染色法的意义就在于鉴别细菌,把众多的细菌分为两大类,革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。大多数化脓性球菌都属于革兰氏氏阳性菌,它们能产生外毒素使人致病,而大多数肠道菌多属于革兰氏阴性菌,它们产生内毒素,靠内毒素使人致病。常见的革兰氏阳 菌等。 1.阳性的肽聚糖厚,阴性的肽聚糖薄,如下图: 2.阳性菌有磷壁酸,阴性菌没有。磷壁酸如下图:

3.阳性菌无外膜,阴性菌有外膜,其图如下:

1884年革兰氏染色法被发明,用于细菌的形态观察和分类,根据革兰氏染色反应的基本特征,细菌可以主要分为两大类:G阳性(G+)和G阴性(G-)。前者经过染色后细菌细胞仍然保留初染结晶紫的蓝紫色,后者经过染色后细菌细胞则先脱去了初染结晶紫的颜色,带上了复杂蕃红或沙黄的红色。本文将从细胞形态和结构,生理特性以及在生产生活中不同的运用这三个方面,来对革兰氏阳性细菌与阴性细菌进行进一步比较。 一、细胞形态和结构 细胞的基本结构包括细胞壁和原生质体两部分。原生质体位于细胞壁内,包括细胞膜(细胞质膜)、细胞质、核质和内含物。另外细胞还含有有些特殊结构,主要有荚膜、芽孢、鞭毛和菌毛等4种。由于革兰氏阳性细菌与阴性细菌在结构上的差别主要在于细胞壁,故本文就细胞壁与非细胞壁结构两部分来进行集中比较。

1.细胞壁 革兰氏染色的机理主要是抓住了革兰氏阳性细菌与阴性细菌在细胞壁的结构与组成上的不同,具体比较见下表: 进一步的,革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖和包括磷酸壁的酸性多糖构成,细胞表面整体带负电的部分原因就是因为磷酸壁带负电。同时,磷酸壁赋予了革兰氏阳性细菌以特异的表面抗原(殷士学.环境微生物

鲍曼不动杆菌为非发酵革兰阴性杆菌

鲍曼不动杆菌为非发酵革兰阴性杆菌,广泛存在于自然界,属于条件致病菌。该菌是医院感染的重要病原菌,主要引起呼吸道感染,也可引发菌血症、泌尿系感染、继发性脑膜炎、手术部位感染、呼吸机相关性肺炎等。对常用抗生素的耐药率有逐年增加的趋势,并引起临床医生和微生物学者的严重关注。 国内资料表明,Ab约占临床分离的不动杆菌的70%以上。Ab对第三代和第四代头孢菌素的耐药率已达63.0%~89.9%。对四种氨基糖苷类(阿米卡星、庆大酶素、奈替米星、妥布霉素)和环丙沙星的耐药率菌达96.3%。我国目前的绝大多数菌株对亚胺培南、美罗培南、头孢 鲍曼不动杆菌 派酮/舒巴坦和多黏菌素B保持敏感,但在呼吸道感染的治疗中效果较差。 鲍曼不动杆菌为不动杆菌属中最常见的一种革兰阴性杆菌,广泛存在于自然界的水及土壤、医院环境及人体皮肤、呼吸道、消化道和泌尿生殖道中,为条件致病菌。该菌在医院环境中分布很广且可以长期存活,极易造成危重患者的感染,因此常从被感染患者的血、尿、脓液及呼吸道分泌物等标本中分离出,在非发酵菌中感染仅次于假单胞菌。本次调查结果显示,138株鲍曼不动杆菌以痰液及支气管吸出物标本中检出最多,其次为脓液及分泌物。 科室分布以ICU最多,其次为呼吸内科患者。感染的病人多是老年患者、危重疾病及机体抵抗力弱的患者,以及使用各种侵入性操作和长期使用广谱抗生素治疗的患者。又因为该菌对湿热紫外线及化学消毒剂有较强抵抗力,常规消毒只能抑制其生长而不能杀灭,而抵抗力弱或有创伤的患者可能被从医务人员的手或消毒不彻底的医疗器械所带有的细菌感染的机会较多。 从72株鲍曼不动杆菌的来源看,其感染部位分布广泛,如呼吸系统、泌尿系统、伤口、腹腔及神经系统等。其中以呼吸系统感染占多数(54.2%)。不动杆菌是近几年医院内感染出现率较高的菌属,其中鲍曼不动杆菌所引起的感染应引起重视。 分类不动杆菌属(Acinetobacter)分为6种,即醋酸钙不动杆菌(A. calcoaceticus)、鲁菲不动杆菌(A. lwoffi)、鲍曼不动杆菌(A. baumanii)、溶血不动杆菌(A. haemolytius)、琼氏不动杆菌(A. junii)和约翰逊不动杆菌(A. johnsonii)。 不动杆菌广泛分布于外界环境中,主要在水体和土壤中,易在潮湿环境中生存,如浴盆、肥皂盒等处。该菌粘附力极强,易在各类医用材料上粘附,而可能成为贮菌源。此外,本菌还存在于健康人皮肤(25%)、咽部(7%),也存在于结膜、唾液、胃肠道及阴道分泌物中。

我院2004—2016年3种非发酵革兰氏阴性杆菌耐药性分析

我院2004—2016年3种非发酵革兰氏阴性杆菌耐药性分析 目的:为临床合理选用针对非发酵革兰氏阴性杆菌的抗菌药物提供参考。方法:收集青岛大学附属医院(以下简称“我院”)2004年1月-2016年12月临床分离的铜绿假单胞菌(PA)、鲍曼不动杆菌(AB)、嗜麦芽窄食单胞菌(SM)的病原学资料,回顾性分析其对常用抗菌药物的耐药情况。结果:共检出PA 15 587株、AB 7 446株、SM 2 950株。PA对常用抗菌药物的耐药率虽有波动,但整体呈下降趋势;除亚胺培南外,PA对其他常用抗菌药物的耐药率均明显下降,其中对阿米卡星、庆大霉素的耐药率分别降至4.60%、7.48%。AB对大部分常用抗菌药物的耐药率均超过了40%,但对替加环素较为敏感(耐药率为0~4.03%)。SM对头孢哌酮钠舒巴坦钠的耐药率由2004年的3.03%上升至2016年的39.01%,但对复方磺胺甲噁唑、米诺环素、左氧氟沙星较为敏感。结论:我院检出的非发酵革兰氏阴性杆菌以PA为主。PA对大部分抗菌药物的耐药率呈下降趋势,AB 的耐药情况严峻,SM对头孢哌酮钠舒巴坦钠的耐药率呈上升趋势。对上述3种非发酵革兰氏阴性杆菌敏感的药物包括阿米卡星、替加环素、米诺环素等,临床应根据药敏试验结果合理选用。 ABSTRACT OBJECTIVE:To provide reference for rational selection of antibiotics against non-fermentative Gram-negative bacilli in clinic. METHODS:Etiological data of clinical isolated Pseudomonas aeruginosa (PA),Acinetobacter baumanii (AB)and Stenotrophomonas maltophilia (SM)were collected from the Affiliated Hospital of Qingdao University (called “our hospital” for short)during Jan. 2004-Dec. 2016. Drug resistance of them to commonly used antibiotics was analyzed retrospectively. RESULTS:Totally 15 587 strains of PA,7 446 strains of AB and 2 950 strains of SM were detected. Resistance rates of PA to commonly used antibiotics fluctuated but were in a decreasing tendency. Except for imipenem,resistance rates of PA to commonly used antibiotics decreased significantly,and resistance rates of PA to amikacin and gentamicin decreased to 4.60% and 7.48%,respectively. Resistance rates of AB to most commonly used antibiotics were more than 40%,but it was sensitive to tigecycline (drug resistance of 0-4.03%). Resistance rates of SM to cefoperazone sodium and sulbactam sodium increased from 3.03% in 2004 to 39.01% in 2016,but it was sensitive to sulfamethoxazole,minocycline and levofloxacin. CONCLUSIONS:Non-fermentative Gram- negative bacilli detected in our hospital are mainly PA. Resistance rate of PA to most of the antibiotics is declining;drug resistance of AB is severe;resistance rates of SM to cefoperazone sodium and sulbactam sodium show increasing tendency. Above 3 non-fermentative Gram-negative bacilli are sensitive to amikacin,tegocycline and minocycline. Clinical selection should be based on the results of drug sensitivity test. KEYWORDS Non-fermentative Gram-negative bacilli;Pseudomonas aeruginosa;Acinetobacter baumanii;Stenotrophomonas maltophilia;Antibiotics;Drug resistance非发酵菌为不发酵任何糖类的革兰氏阴性杆菌,以铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)、鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,AB)、

革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的区别

细菌的分类 把众多的细菌分为两大类,革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。大多数化脓性球菌都属于革兰氏氏阳性菌,它们能产生外毒素使人致病,而大多数肠道菌多属于革兰氏阴性菌,它们产生内毒素,靠内毒素使人致病。 常见的革兰氏阳性菌有:葡萄球菌、链球菌、李式杆菌属、丹毒丝菌属、肾杆菌属、芽孢杆菌属、梭菌属、分歧杆菌属、放线菌属、奴卡菌属、棒状杆菌属、红球菌属、丹毒杆菌、气肿疽杆菌、结核杆菌、肺炎双球菌、炭疽杆菌、白喉杆菌、破伤风杆菌等; 常见的革兰氏阴性菌有:伤寒杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、肺炎杆菌、布式杆菌、流感副流感杆菌、卡他杆菌、不动杆菌属、耶尔森菌属、嗜肺军团菌、绿脓杆菌、(副)百日咳杆菌、志贺菌属、巴斯德菌属、霍乱弧菌、副溶血性杆菌及脑膜炎双球菌等。 G+ 球菌:金黄色葡萄球菌(葡萄球菌属)、乙型溶血性链球(链球菌属)、肺炎链球菌(链球菌属) G—球菌:淋球菌、脑膜炎双球菌(奈瑟菌属) G+ 杆菌:白喉杆菌(棒状杆菌属)、结核杆菌(分歧杆菌属)抗酸菌 麻风杆菌(分歧杆菌属)抗酸菌 G—杆菌:大肠杆菌(埃希菌属)、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、志贺痢疾杆菌、福式痢疾杆菌、宋内痢疾杆菌(志贺菌属)、百日咳杆菌(包特菌属)、 肠炎杆菌(沙门菌属)、绿脓杆菌(假单胞菌属)、 在治疗上,大多数革兰氏阳性菌都对青霉素敏感;而革兰氏阴性菌则对青霉素不敏感,而对链霉素、氯霉素等敏感。所以首先区分病原菌是革兰氏阳性菌还是阴性菌,在选择抗生素方面意义重大。

附:革兰氏阳性细菌和阴性细菌感染可选药物清单 一、革兰氏阳性细菌 1.主要抗革兰氏阳性菌的抗生素与抗菌药 青霉素类:青霉素G,青霉素V 耐青霉素酶的青霉素:唑西林,邻氯西林,二氯西林,氟氯西林,甲氧西林,萘夫西林等 内酰胺酶抑制剂合剂:阿莫西林/克拉维酸,氨苄西林/舒巴坦,氨苄西林/舒巴坦等 大环内酯类:一代:红霉素,柱晶白霉素,乙酰螺旋霉素,麦迪霉素 二代:罗红霉素,克拉霉素,阿奇霉素,地红霉素 林可霉素类:林可霉素,克林霉素 链阳霉素类:奎奴普丁/达福普汀 糖肽类:万古霉素,去甲基万古霉素,替考拉宁 嗯唑烷酮类:利奈唑酮 其他:利福平,夫西地酸,杆菌肽 2.具有良好抗革兰氏阳性菌作用的广谱抗生素与抗菌药 广谱青霉素:氨苄西林,阿莫西林 头孢菌素:第一、二、四代头孢菌素 碳青霉烯:亚胺培南,培尼培南,美洛培南 青霉烯:法罗培南 氨基糖苷:庆大霉素,阿米卡星,阿贝卡星 四环素类:多西环素,米诺环素 其他类抗生素:氯霉素,甲砜霉素,磷霉素 氟喹诺酮:环丙沙星,氧氟沙星,托氟沙星,司帕沙星,莫西沙星,加替沙星

革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌

盛年不重来,一日难再晨。及时宜自勉,岁月不待人。 革兰氏阳性菌与阴性菌 【药师学习百科】——第9期20090614 <药理学-第六章β-内酰胺类抗生素> 我基础较差,有些基础性的知识也不明白,比如,啥是革兰氏阳/阴性菌呀?那么从头开始吧—— 前言 自然界存在多种多样病菌,如何将这些病菌加以鉴别、分类,并选择有效药物进行治疗这是很重要的问题。革兰氏染色法,能够把细菌分为两大类。革兰氏染色法的意义就在于鉴别细菌,把众多的细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类。 先来看看什么是—— 革兰氏染色法 革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法,1884年由丹麦医师Gram创立细菌先经碱性染料结晶染色,而经碘液媒染后,用酒精脱色,在一定条件下有的细菌此色不被脱去,有的可被脱去,因此可把细菌分为两大类,前者叫做革兰氏阳性菌(G+),后者为革兰氏阴性菌(G-)。为观察方便,脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红等进行复染。阳性菌仍带紫色,阴性菌则被染上红色。有芽胞的杆菌和绝大多数和球菌,以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应;弧菌,螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。 革兰氏染色的原理我叫不想知道了,但我很想知道—— 革兰氏染色法的方法步骤 革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤。 1)涂片固定。 2)草酸铵结晶紫染1分钟。 3)自来水冲洗。 4)加碘液覆盖涂面染1分钟。 5)水洗,用吸水纸吸去水分。

6)加95%酒精数滴,并轻轻摇动进行脱色,30秒后水洗,吸去水分。 7)蕃红梁色液(稀)染10秒钟后,自来水冲洗。干燥,镜检。 染色的结果,革兰氏正反应菌体都呈紫色,负反应菌体都呈红色。 知道了这些,我最关心的还是哪些是—— 常见的革兰氏阳性菌 葡萄球菌属,链球菌属,李式杆菌属,丹毒丝菌属,肾杆菌属,芽孢杆菌属,梭菌属,分支杆菌属,放线菌属,奴卡菌属,棒状杆菌属,红球菌属,炭疽杆菌丹毒杆菌破伤风杆菌李氏杆菌产气荚莫杆菌气肿疽杆菌结核杆菌。 当然,也少不了哪些是—— 常见的革兰氏阴性菌 除了大肠杆菌外,变形杆菌、痢疾杆菌、肺炎杆菌、布氏杆菌、产气夹膜杆菌、流感(嗜血)杆菌、副流感(嗜血)杆菌、卡他(摩拉)菌、不动杆菌属、耶尔森菌属、嗜肺军团菌、百日咳杆菌、副百日咳杆菌、志贺菌属、巴斯德菌属、霍乱弧菌、副溶血性杆菌等也是革兰氏阴性菌。 混了这么久,我要怯怯地提点意见哦。这些细菌名字太复杂了哟! 革兰菌简表 类菌名 G+球菌金黄色葡萄球菌(葡萄球菌属)乙型溶血性链球(链球菌属)肺炎链球菌(链球菌属) G-球菌 淋球菌 脑膜炎双球菌(奈瑟菌属)G+杆菌白喉杆菌(棒状杆菌属)

(推荐)细菌分类大全

革兰氏阳性菌 革兰氏阳性菌 革兰氏染色法的意义就在于鉴别细菌,把众多的细菌分为两大类,革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。大多数化脓性球菌都属于革兰氏氏阳性菌,它们能产生外毒素使人致病,而大多数肠道菌多属于革兰氏阴性菌,它们产生内毒素,靠内毒素使人致病。 常见的革兰氏阳性菌有:葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、炭疽杆菌、白喉杆菌、破伤风杆菌等;常见的革兰氏阴性菌有痢疾杆菌、伤寒杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、百日咳杆菌、霍乱弧菌及脑膜炎双球菌等。 在治疗上,大多数革兰氏阳性菌都对青霉素敏感(结核杆菌对青霉素不敏感);而革兰氏阴性菌则对青霉素不敏感(但奈瑟氏菌中的流行性脑膜炎双球菌和淋病双球菌对青霉素敏感),而对链霉素、氯霉素等敏感。所以首先区分病原菌是革兰氏阳性菌还是阴性菌,在选择抗生素方面意义重大。 革兰氏阴性菌,大多数肠道菌多属于革兰氏阴性菌,它们产生内毒素,靠内毒素使人致病.常见的革兰氏阴性菌有痢疾杆菌、伤寒杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、百日咳杆菌、霍乱弧菌及脑膜炎双球菌等。革兰氏阴性菌则对青霉素不敏感,可以选择氟喹诺酮类药物如诺氟沙星,左氧氟沙星等,也可以选择大环内酯类比如克拉霉素、罗红霉素等。 革兰氏阳性菌,大多数化脓性球菌都属于革兰氏阳性菌,它们能产生外毒素使人致病,常见的革兰氏阳性菌有:葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、炭疽杆菌、白喉杆菌、破伤风杆菌等。可以选择青霉素族,头孢曲松钠等。 革兰氏阴性菌,以[大肠杆菌]为代表。大肠杆菌为兼气性菌种,一般生存于肠道中及厌氧的还境中。革兰氏阴性菌细胞壁的特征为有一层outer membrane 与阳性菌种不同。目前对大肠杆菌的研究很多,除了它是一般食物中是否有被污染的指标外,很多分子生物学方面的研究皆需要使用到大肠杆菌当作实验宿主。 除了大肠杆菌外,变形杆菌、痢疾杆菌、肺炎杆菌、布氏杆菌、产气夹膜杆菌、流感(嗜血)杆菌、副流感(嗜血)杆菌、卡他(摩拉)菌、不动杆菌属、耶尔森菌属、嗜肺军团菌、百日咳杆菌、副百日咳杆菌、志贺菌属、巴斯德菌属、霍乱弧菌、副溶血性杆菌、类志贺吡邻单胞菌等也是革兰氏阴性菌 革兰氏阳性菌与阴性菌

微生物学整理--非发酵格兰阴性杆菌

非发酵格兰阴性杆菌共同特点假单胞菌属铜绿假单胞菌(绿脓杆 菌) 荧光假单胞菌不动杆菌属寡养单胞菌属 形态特征1)无芽孢,格兰阴性 杆菌 2)多数有鞭毛(不动 杆菌属除外),鞭毛类 型为周/丛/单鞭毛,但 半固体动力试验不明 显,常采用镜检或鞭毛 染色多数有鞭毛,类型为丛 /单鞭毛(端鞭毛);运 动活泼 G- 细杆菌,散在排列, 有时呈球杆或线状,成 对或短链状排列;单鞭 毛,临床株多有菌毛 G- 杆菌,单端丛鞭毛G- 杆菌菌体多为球 杆状,常成双排列,似 双球菌;(与淋球菌鉴 别) 无芽孢、无鞭毛,某些 菌株有荚膜 培养特征营养要求不高,多数为 需氧菌1)专性需氧 2)生长范围广:少数 可在4度或42度生长 3)营养要求不高,在 麦康凯培养基上可以 生长;部分菌株可产生 荧光素或其他色素 1)专性需氧 2)最适生长温度35 度,4度不长,42度可 生长 3)营养要求不高,普 通培养基生长良好 4)菌落特征:可形成 多种不同形态的菌落, 多扁平湿润,边缘锯齿 状,常融合生长;产生 荧光素和水溶性的绿 脓素等不同颜色的色 素;培养物有生姜气 味;在BAP上β溶血; 在MAC上形成不发酵 乳糖菌落 1)专性需氧,营养要 求不高,普通平板、 MAC平板可生长 2)多数产生水溶性荧 光素,在紫外线下呈绿 色荧光 3)最适温度25~30 度,4度生长,35度、 42度不生长,具有嗜 冷性,可在冰箱储存血 中繁殖 1)专性需氧,最适温 度35度 2)营养要求不高,普 通培养基能生长,少数 菌株可产生色素;在 BAP/巧克力平板CO2 环境中生长良好,可在 MAC培养基上生长, 形成不发酵乳糖的菌 落 1)专性需氧 2)最适温度35度,4 度不生长,近半数菌 42度生长 3)营养要求不高,普 通平板生长良好,菌落 灰黄色、深褐色或无 色;在BAP上有强的 氨味,无溶血,MAC 上可生长 生化反应1)氧化酶多+(不动杆 菌属除外),在KIA上 K/K 2)O/F试验:O/- 氧化酶+,硝酸盐还原 +,O/F大多O型 1)氧化酶+;O/F:O 2)分解糖产酸不产 气:葡、木+,乳、麦、 蔗— 3)硝酸盐还原+,产 N2+ 4)枸橼酸盐+;精氨酸 氧化酶+;O/F:O;卵 磷脂酶+;明胶液化+ “三阴”:氧化酶阴性、 动力阴性、硝酸盐还原 阴性。 O/F:O/-;KIA:底层 斜面均红色 1)硝酸盐还原+,氧化 酶—,DNAse + 2)氧化分解葡萄糖、 迅速分解麦芽糖 3)水解明胶和七叶 苷、赖氨酸脱羧酶阳性

非发酵革兰阴性杆菌

第15章非发酵革兰阴性杆菌 第一节假单胞菌属 假单胞菌属(Pseudomonas)是一类革兰阴性的小杆菌,无芽胞、有荚膜,多数菌株有鞭毛。假单胞菌属分布广泛,种类繁多,目前已发现200余种,与人类关系较大的有铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)、荧光假单胞菌(P.fluorescens)和鼻疽假单胞菌(P.mallei)等,其中铜绿假单胞菌是主要的致病菌。 铜绿假单胞菌俗称绿脓杆菌,由于其在生长过程中产生水溶性绿色色素,感染后使脓汁或敷料出现绿色,故而得名。铜绿假单胞菌广泛分布于自然界的水、空气、土壤及医院环境中。本菌是人体的正常菌群,也是一种常见的条件致病菌,常引起医院内感染。 一、生物学特性 (一)形态与染色 革兰阴性菌,约(0.5~1.0)×(1.5~3.0)μm大小的直或微弯曲的杆菌。无芽胞,单端有1~3根鞭毛,运动活泼(图15-1)。临床分离的菌株常有菌毛和荚膜。 图15-1铜绿假单胞菌 (二)培养与生化反应 专性需氧。最适生长温度为35℃。在4℃不生长而在42℃生长是铜绿假单胞菌的一个特点。普通培养基上生长良好,菌落大小不一,扁平湿润,边缘不整齐,由于能产生带荧光的水溶性色素(青脓素与绿脓素)而使菌落及培养基呈亮绿色,这一特征有鉴别意义。在血琼脂平板上产生透明的溶血环,在液体培养基中呈混浊生长,其表面易形成菌膜。 铜绿假单胞菌能分解葡萄糖,产酸不产气,但不分解乳糖、甘露醇、麦芽糖和蔗糖。不形成吲哚,氧化酶试验阳性。 (三)抗原构造

铜绿假单胞菌有O和H抗原。O抗原包括两种成分,一种是内毒素脂多糖,另一成分是原内毒素蛋白(original endotoxin protein,OEP)。OEP是一种具有强免疫原性的高分子类属抗原,除假单胞菌属外,还广泛存在于一些革兰阴性细菌中,如其他种类假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克氏菌和霍乱弧菌等。OEP抗体不仅对同一血清型细菌有特异性保护作用,且对不同血清型的细菌也有共同保护作用。 (四)抵抗力 铜绿假单胞菌抵抗力强,对许多化学消毒剂如醛类、汞类和表面活性剂有一定的抵抗力。对青霉素G、头孢菌素、红霉素、部分氨基糖苷类等抗生素有抵抗力。56℃需1小时才能杀死细菌。 二、致病性与免疫性 (一)致病物质 主要致病物质是内毒素和外毒素A,此外菌毛、荚膜和多种胞外酶也与致病性有关(表15-1)。 表15-1铜绿假单胞菌的致病物质及其生物学活性 致病物质生物学活性 内毒素致发热、休克、弥散性血管内凝血等 神经氨酸酶分解细胞表面神经氨酸而促进细菌侵入 毒素A抑制蛋白质合成,引起组织坏死和实验动物死亡 胞外酶S抑制蛋白质合成 弹性蛋白酶降解弹性蛋白而损伤血管,抑制中性粒细胞功能,与细菌扩散有关 碱性蛋白酶具有损伤组织、抗补体、抑制中性粒细胞功能 磷酸脂酶C分解脂类损伤组织细胞 杀白细胞素抑制中性粒细胞功能和淋巴细胞功能 绿脓菌素催化超氧化物和过氧化氢产生有毒氧基团,损伤组织细胞 (二)所致疾病 铜绿假单胞菌是人体的正常菌群,也是一种常见的条件致病菌。感染多见于皮肤粘膜受损部位,如烧伤、创伤等,也见于因长期化疗或使用免疫抑制剂的患者。在医源性感染中由本菌引起的感染约占10%,在某些特殊病房中,如烧伤和肿瘤病房等,本菌感染率可高达30%。 本菌几乎可感染人体的任何组织和部位,经常引起手术切口、烧伤组织感染,表现为局部化脓性炎症。由铜绿假单胞菌引起肺部感染、泌尿道感染在临床也常见,此外尚可引起中耳炎、角膜炎、心内膜炎以及败血症等。由本菌引起婴儿的流行性腹泻也有报道。 (三)免疫性 中性粒细胞的吞噬作用在抗铜绿假单胞菌感染中起着重要的作用。感染后产生的特异性抗体,尤其SIgA在黏膜局部起一定的抗感染作用。应用抗绿脓杆菌免疫血清可降低病人继发败血症的发生率和病死率。

革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的区别 (1)

细菌的分类把众多的细菌分为两大类,革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。大多数化脓性球菌都属于革兰氏氏阳性菌,它们能产生外毒素使人致病,而大多数肠道菌多属于革兰氏阴性菌,它们产生内毒素,靠内毒素使人致病。 常见的革兰氏阳性菌有:葡萄球菌、链球菌、李式杆菌属、丹毒丝菌属、肾杆菌属、芽孢杆菌属、梭菌属、分歧杆菌属、放线菌属、奴卡菌属、棒状杆菌属、红球菌属、丹毒杆菌、气肿疽杆菌、结核杆菌、肺炎双球菌、炭疽杆菌、白喉杆菌、破伤风杆菌等; 常见的革兰氏阴性菌有:伤寒杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、肺炎杆菌、布式杆菌、流感副流感杆菌、卡他杆菌、不动杆菌属、耶尔森菌属、嗜肺军团菌、绿脓杆菌、(副)百日咳杆菌、志贺菌属、巴斯德菌属、弧菌、副溶血性杆菌及双球菌等。 G+ 球菌:金黄色葡萄球菌(葡萄球菌属)、乙型溶血性链球(链球菌属)、肺炎链球菌(链球菌属) G—球菌:淋球菌、脑膜炎双球菌(奈瑟菌属) G+ 杆菌:白喉杆菌(棒状杆菌属)、结核杆菌(分歧杆菌属)抗酸菌麻风杆菌(分歧杆菌属)抗酸菌 G—杆菌:大肠杆菌(埃希菌属)、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、志贺痢疾杆菌、 福式痢疾杆菌、宋内痢疾杆菌(志贺菌属)、百日咳杆菌(包特菌属)、 肠炎杆菌(沙门菌属)、绿脓杆菌(假单胞菌属)、

在治疗上,大多数革兰氏阳性菌都对青霉素敏感;而革兰氏阴性菌则对青霉素不敏感,而对链霉素、氯霉素等敏感。所以首先区分病原菌是革兰氏阳性菌还是阴性菌,在选择抗生素方面意义重大。 附:革兰氏阳性细菌和阴性细菌感染可选药物清单 一、革兰氏阳性细菌 1.主要抗革兰氏阳性菌的抗生素与抗菌药 青霉素类:青霉素G,青霉素V 耐青霉素酶的青霉素:唑西林,邻氯西林,二氯西林,氟氯西林,甲氧西林,萘夫西林等 内酰胺酶抑制剂合剂:阿莫西林/克拉维酸,氨苄西林/舒巴坦,氨苄西林/舒巴坦等 大环内酯类:一代:红霉素,柱晶白霉素,乙酰螺旋霉素,麦迪霉素二代:罗红霉素,克拉霉素,阿奇霉素,地红霉素 林可霉素类:林可霉素,克林霉素 链阳霉素类:奎奴普丁/达福普汀 糖肽类:万古霉素,去甲基万古霉素,替考拉宁 嗯唑烷酮类:利奈唑酮 其他:利福平,夫西地酸,杆菌肽 2.具有良好抗革兰氏阳性菌作用的广谱抗生素与抗菌药 广谱青霉素:氨苄西林,阿莫西林 头孢菌素:第一、二、四代头孢菌素 碳青霉烯:亚胺培南,培尼培南,美洛培南 青霉烯:法罗培南

常见革兰阴性菌的天然耐药

CLSI 2013 附录B.天然耐药 注1:三代头孢,头孢吡肟,氨曲南,替卡西林/克拉维酸,哌拉西林/他唑巴坦,和碳青霉烯类没有列出,因为肠杆菌科细菌没有对其天然耐药。 注2:肠杆菌科也对对克林霉素、达托霉素、夫西地酸、糖肽类(万古霉素、替考拉宁)、利奈唑胺、大环内酯类(红霉素、克拉霉素、阿奇霉素)、奎奴普汀-达福普汀、利福平天然耐药。

CLSI 2013 附录B (续) + 嗜麦芽窄食单胞菌对四环素天然耐药,而对多西环素或米诺环素不是天然耐药。 注:非发酵革兰阴性菌也对一代头孢(头孢噻吩、头孢唑林),二代头孢(头孢呋辛),头霉素类(头孢西丁、头孢替坦),克林霉素,达托霉素,夫西地酸,糖肽类(万古霉素、替考拉宁),利奈唑胺,大环内酯类(红霉素、阿奇霉素、克拉霉素),青霉素,奎奴普汀-达福普汀、利福平天然耐药。

CLSI 2013 附录B (续) B.3 葡萄球菌 注1:革兰阳性菌也对氨曲南、多粘菌素B/粘菌素和萘啶酸天然耐药。 注2:苯唑西林耐药的金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌(耐甲氧西林葡萄球菌[MRS]),被认为对其他β-内酰胺类耐药,如,青霉素类,β-内酰胺/β-内酰胺酶抑制剂复合物,头孢类(除外具有抗MRSA活性的头孢菌素类),和碳青霉烯类。因为大多数病例证明MRS感染对β-内酰胺类治疗反应差,或因为证明这些药物临床有效性的令人信服的临床资料还没有出现。 CLSI 2013 附录B (续) 警告:对于肠球菌属,头孢菌素类,氨基糖苷类(除外高浓度氨基糖苷类耐药检测),克林霉素,和复方新诺明可能体外显示活性,但临床无效,不应报告敏感。 注:革兰阳性菌也对氨曲南、多粘菌素B/粘菌素和萘啶酸天然耐药。

革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌

革兰氏阳性菌与阴性菌 【药师学习百科】——第9期20090614 <药理学-第六章β-内酰胺类抗生素> 我基础较差,有些基础性的知识也不明白,比如,啥是革兰氏阳/阴性菌呀?那么从头开始吧—— 前言 自然界存在多种多样病菌,如何将这些病菌加以鉴别、分类,并选择有效药物进行治疗这是很重要的问题。革兰氏染色法,能够把细菌分为两大类。革兰氏染色法的意义就在于鉴别细菌,把众多的细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类。 先来看看什么是—— 革兰氏染色法 革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法,1884年由丹麦医师Gram创立细菌先经碱性染料结晶染色,而经碘液媒染后,用酒精脱色,在一定条件下有的细菌此色不被脱去,有的可被脱去,因此可把细菌分为两大类,前者叫做革兰氏阳性菌(G+),后者为革兰氏阴性菌(G-)。为观察方便,脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红等进行复染。阳性菌仍带紫色,阴性菌则被染上红色。有芽胞的杆菌和绝大多数和球菌,以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应;弧菌,螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。

革兰氏染色的原理我叫不想知道了,但我很想知道—— 革兰氏染色法的方法步骤 革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤。 1)涂片固定。 2)草酸铵结晶紫染1分钟。 3)自来水冲洗。 4)加碘液覆盖涂面染1分钟。 5)水洗,用吸水纸吸去水分。 6)加95%酒精数滴,并轻轻摇动进行脱色,30秒后水洗,吸去水分。 7)蕃红梁色液(稀)染10秒钟后,自来水冲洗。干燥,镜检。 染色的结果,革兰氏正反应菌体都呈紫色,负反应菌体都呈红色。 知道了这些,我最关心的还是哪些是—— 常见的革兰氏阳性菌 葡萄球菌属,链球菌属,李式杆菌属,丹毒丝菌属,肾杆菌属,芽孢杆菌属,梭菌属,分支杆菌属,放线菌属,奴卡菌属,棒状杆菌属,红球菌属,炭疽杆菌丹毒杆菌破伤风杆菌李氏杆菌产气荚莫杆菌气肿疽杆菌结核杆菌。

几种常见革兰阴性杆菌药敏结果分析

几种常见革兰阴性杆菌药敏结果分析 目的:通过几种常见革兰阴性杆菌耐药情况的分析,为临床医生在抗感染治疗中能合理应用抗生素提供一些参考。方法:经临床标本培养分离出纯菌,细菌鉴定按《全国临床检验操作规程》推荐的程序进行并鉴定到种。敏试验采用K-B 纸片扩散法,结果按NCCLS标准判断。超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的检测按NCCLS标准进行。结果2006-2008年共分离出常见革兰阴性杆菌3694株。其中大肠埃希菌1772株(占48.0%),肺炎克雷伯菌593株(占16.1%),铜绿假单孢菌643株(17.4%),鲍曼不动杆菌308株(占8.3%),阴沟肠杆菌184株(占5.0%),嗜麦芽寡养单孢菌127株(占3.4%),粘质沙雷菌67株(占1.8%)。3694株革兰阴性杆菌对氨苄青、复方新诺明、哌拉西林、头孢噻肟、氨曲南的耐药率一次为94.5%、65.1%、64.7%、56.2%、50.6%。对哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率较低依次为25.1%、16.2%、9.8%。63.5%的大肠埃希菌和40.5%的肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶。而产超广谱β-内酰胺酶的菌株对青霉素类、氨曲南、头孢菌素类均有很高的耐药性。但其对亚胺培南则100%敏感,对头孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/他唑巴坦的敏感率也较高分别为96.1%和90.2%。结论:革兰阴性杆菌的耐药趋势日益上升,特别是产超广谱β-内酰胺酶菌株的检出率也有上升趋势,出现多重耐药,临床抗感染治疗的难度加大。为减少耐药菌株的产生,临床医生在应用抗生素之前应参考药敏结果,并注重抗生素以外的其他治疗。 近年来,随着抗生素的广泛运用及不合理使用,越来越多的菌株其耐药性呈现逐年上升趋势,其中ESBLs的产生是耐药率上升的重要因素。因此ESBLs的及时检出及其预防便相当关键,而结合药敏试验合理地使用抗生素尤为重要。以下是对昆明医学院第二附属医院细菌室2006~2008年来分离出的常见革兰阴性杆菌药敏试验的分析,希望能对基层单位经验性用药提供一些参考。 一、料材和方法 (一)材料 1.菌株来源:各科送检的各类标本,如血、骨髓、脑脊液、胸腹水、心包积液、关节也、脓液、各种分泌物及痰、咽拭子、前列腺液、尿液、粪便、肛拭子等,经培养分离出的纯菌。 2.微生物试剂、M-H琼脂平板、药敏纸片等。其中药敏纸片包括:丁胺卡那(AMK)、氨苄青(AMP)、氨曲南(ATM)、头孢哌酮/舒巴坦(CSL)、头孢噻肟(CTX)、头孢他啶(CAZ)、头孢呋辛(CXM、环丙沙星(CIP)、亚胺培南(IPM)、哌拉西林(PIP)、复方新诺明(SXT)、头孢吡肟(FEP)、哌拉西林/他唑巴坦(TZP)、左氧氟沙星(LEV)。 3.质控菌株:大肠埃希菌(ATCC25922)、铜绿假单孢菌(ATCC27853)、金黄色葡萄球菌(ATCC25923)。

相关文档