SDS提取DNA的方案

1.5.

2.2 菌丝体DNA的提取与检测

提取缓冲液I：6.2g 葡萄糖，2.0g 聚乙烯吡咯烷酮（PVP），80μL 巯基乙醇，加去离子水定容至100mL。

提取缓冲液II：100mmol/L Tris-Cl（pH8.0），20mmol/L EDTA，500mmol/L NaCl，1.5% SDS。

TE 缓冲液：10 mmol/L Tris-CL（pH 8.0），1 mmol/L EDTA（pH 8.0）酚∶氯仿∶异戊醇（25∶24∶1）。

氯仿∶异戊醇∶乙醇（80∶4∶16）。

其他试剂：液氮、异丙醇、无水乙醇、70%乙醇、3 mol/L NaAc（pH5.2）。

实验步骤:

（1）称0.5g 菌丝，放入适中石英砂和液氮，迅速研磨成粉末状，液氮要加3次。

（2）将磨得粉末移入2mL 离心管中，加0.5mL 提取缓冲液I，缓慢混匀。10000rpm 室温离心10min，吸去上清液；向沉淀中加入0.8mL 提取缓冲液II，缓慢混匀。65oC水浴锅中水浴30min，每5min 缓慢旋转混匀一次。

（3）加入0.7mL 酚:氯仿:异戊醇（25:24:1），缓慢混匀。6000rpm 离心5min。（4）取上清液转移到另一离心管中，加入1mL 氯仿:异戊醇:乙醇（80:4:16），缓慢倒入混匀，室温下静置5-10min。

（5）室温6000rpm 离心5min。

（6）小心吸取上清液转移到另一离心管中，加入等体积异丙醇，缓慢上下颠倒混匀。室温下放置5min，出现絮状沉淀。室温下6000rpm 离心5min。（7）吸去上清液，向沉淀中加入40ulTE缓冲液，30ul，3mol/L NaAc 和80μL 预冷的无水乙醇，缓慢上下颠倒混匀，-20oC 冰箱放置2h。

（8）室温下6000rpm 离心5min。

（9）吸去上清液，用1mL70%乙醇漂洗液漂洗两次，6000rpm 离心5min。倒去上清液，将离心管倒置在干净的吸水纸上轻轻磕几下，尽量去除上清液，放置三min自然干燥后，将沉淀溶于25μLTE 缓溶液中，-20oC 贮存。