本人细胞培养实际操作记录

细胞复苏
1、将细胞系从液氮中取出，放入4度冰箱中半个小时，然后放入恒温水浴锅中加热5分钟。
2、将培养基和血清从4度冰箱中取出，放入恒温水浴锅中加热（设定为37度）3分钟。
3、进入细胞培养间，在无菌操作台上配制血清培养基。（使用无菌操作台时，需将无菌操作台用75%酒精擦拭，之后用紫外灭菌30分钟以上。）
4、将细胞系离心，然后进入无菌操作台进行后续处理，将离心过的细胞系的上清液直接倒掉。
5、将培养液加入管中用移液枪吹打，将细胞吹打散开，从而使细胞尽量均匀的分散在培养液中。
6、将吹打好的细胞及培养液用移液枪转移到培养瓶中，加入培养液5ml，放入CO2培养箱中。（放入之前将培养瓶的瓶口拧紧，放入之后可拧松。）



培养基的配制
1、将1640培养基与血清从4度冰箱中取出放入恒温水浴锅中（37度）。
2、将血清和培养基与细胞一起拿到细胞培养间，经酒精消毒后方可放入无菌操作台上
3、用5ml移液管取9次1640培养基加入到一个培养瓶中，然后换用新的5ml移液管取1次血清加入该培养基中，摇匀。



更换培养基：更换培养基的时候，移液管不能接触到瓶口已经瓶壁，防止细胞污染（即使培养基洒出来也可）；将培养瓶放入培养箱中以及将培养瓶放入无菌操作台的时候需用酒精消毒，将培养瓶从培养箱中拿出来放入培养箱之前酒精消毒后需将酒精风干。



更换培养基
1、将细胞从CO2培养箱中取出，在放入无菌操作台之前用酒精消毒。（之前将瓶盖拧紧。）
2、待酒精风干后放入无菌操作台，然后倒掉上清液，更换培养基。（更换培养基的时候，需要保持瓶口的干燥，可用酒精灯烧下瓶口，但是不能烧太久。）
3、加入培养基后，将瓶盖拧紧，然后放入培养箱中，拧松瓶盖。



细胞分瓶（传代培养）
1、将细胞从培养箱中取出，拧紧瓶口，在放入无菌操作台前，用酒精消毒。
2、倒掉上清液，用PBS缓冲液清洗2-3次，每次用液5-10ml。
3、取0.5ml胰蛋白酶加入培养瓶中，轻微晃动，使胰蛋白酶能侵润到长有细胞的瓶壁，消化1分钟（也可直接倒掉）。
4、加入10ml配好的培养基，用移液枪吹打细胞，将贴在瓶壁的细胞尽量吹打下来。
5、用新的移液管将细胞平均分装到2个培养瓶中。
6、拧紧瓶盖，酒精消毒后放入培养箱中，松下瓶盖。



细胞冻存