干细胞常用实验技术protocol

实验室内部的人胚胎干细胞protocol

人类胚胎干细胞H1和H9维持方案

一、试剂配制

饲养层细胞培养基

Fibroblast-DMEM Media (F-DMEM)

DMEM (GIBCO 11960-044) 450ml

FCS GIBCO 16000-044 50ml 10%

Pen/Strep 2.5ml 50IU/ml

L-glut GIBCO 25030-081 5ml 2uM/ml

人类胚胎干细胞培养基

HESC-Media

KO-DMED GIBCO 10829-018 480ml

KOSR GIBCO 10828-028 120ml 20%

10mM NEAA GIBCO 11140-050 6ml 0.1mM

L-glut(0.2M) GIBCO 25030-081 6ml 2mM

Pen/Strep 3ml

55mM BME GIBCO 21985-023 1.1ml 0.1mM

ITS GIBCO 41400-045 6ml

4-80C避光保存。用前每50毫升加200-400ng bFGF

细胞冻存培养基

FBS-DMSO

FCS GIBCO 16000-044 9ml 90%

DMSO SIGMA D2650 1ml 10%

细胞消化液Trypsin-EDTA

0.25% Trysin-1mM EDTA GIBCO 25200-056 2ml 0.05%,0.2mM

PBS(-) 14190-144 8ml

MEF细胞有丝分裂终止液Mito C

Mitomycin C 0.2mg 0.05mg/ml

dd-H2O 15230-162 4ml

避光保存。

Mito C的终浓度为10ug/ml即40吸ul 工作液加到2ml F-DMEM中。.

0.1% Gelatin(用于培养皿的包被)

1% Gelatin 40ml 0.1%

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