基质金属蛋白酶_9和肿瘤坏死因子_省略_鼠光气吸入性肺损伤中的表达及意义_张琳
·论著·
基质金属蛋白酶-9和肿瘤坏死因子α在大鼠
光气吸入性肺损伤中的表达及意义
张琳 申捷 黄文彬 何岱昆
(复旦大学附属金山医院化学伤害医疗救治中心,上海 200540)
摘要 目的:探讨基质金属蛋白酶-9(MM P -9)和肿瘤坏死因子α(T NF -α)在大鼠光气吸入性肺损伤中的表达及意义。方法:SP F
级SD 大鼠(180～220g )50只,随机分为空气对照组和光气暴露组。建立大鼠光气吸入性肺损伤动物模型,并分别于光气染毒后2、4、6、8h 采用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT -PCR )方法测定MM P -9mRNA 在肺组织中的表达含量,酶联免疫吸附试验(ELISA )法测定支气管肺泡灌洗液(BALF )中的T NF -α含量,同时对肺湿/干质量比,支气管肺泡灌洗液(BA LF )中蛋白含量、中性粒细胞数以及肺组织病理学改变进行动态监测和对比分析。结果:与空气对照组相比,光气暴露组肺组织出现水肿、出血、炎性细胞浸润,随时间延长进一步加重。光气暴露组肺湿/干质量比值,BA LF 中蛋白含量、TN F -α含量、中性粒细胞计数均明显高于空气组(P <0.05);光气暴露各组M MP -9mRN A 表达水平和BA LF 中M M P -9的表达明显高于空气对照组,随时间延长肺水肿加重(P <0.01)。结论:基质金属蛋白酶的过度激活和表达及其与炎症因子相互影响在光气肺损伤过程中发挥重要的作用。关键词 光气; 急性肺损伤; 基质金属蛋白酶-9中图分类号 R 563.9 文献标识码 A
Expression and Effect of MMP -9and TNF -αin Rats with Phosgene -Induced Acute Lung Injury ZH A NG Lin S H E N J ie HU A NG Wenbin H E Daik un Emergency &I ntensive Care Centre f or Chem ical Accident o f J inshan H ospital ,Fudan University ,Shanghai 200540,China A bstract Objective :T o inv estiga te the ro le of matrix metallopro teinase -9(M M P -9)and T N F -αin the patho genesis o f acute
lung injury induced by pho sg ene poiso ning .Methods :Fif ty Sprag ue Daw ley (SD )rats w ere rando mly separated into tw o g roups ,the co ntrol g roup and the experime nt g roups (2h ,4h ,6h ,8h after pho sgene poiso ning ).Sacrifice the ex pe riment rats 2h ,4h ,6h ,8h after pho sg ene poisoning .Wet and dry ratio of the lung (w et ∕dry )and pr otein co ncentra tion ,T N F -αand M M P -9conce n -tratio n and po ly mor phonuclear neutrophils in bro nchoalveolar lavage fluid (BA LF )w ere reco rded ,histo pa tho log y o f the lung was o bser ved under the lig ht scope ,and the quantita tion o f M M P -9m RNA w as determined by Real time RT -PCR .Results :Co mpa red to co ntro l g roup ,pulmonary edema and inf lammato ry cells infiltra ting appea red in the e xperiment g ro up r ats .W et -to -dry lung weight r atio ,pro tein co ncentration ,T N F -αconcentr ation and polymo rpho nuclea r neutr ophils count in BA LF we re higher in pho sg ene poiso ning gr oup compared to co ntrol gr oup .(P <0.05).A cute lung injury caused by pho sg ene w as accom -panied w ith increased e xpression of M M P -9m RNA in lung tissues (P <0.01),which w as co r related w ith la sting of time and ag -g rav atio n of lung injury .Conclusions :M M P -9and its relation with inflammator y facto rs such a s T N F -αplay an impor tant role in the developme nt o f pho sg ene -induced acute lung injury in rats .
Key Words Phosgene ; A cute lung injury ; M atrix metallo pr oteinase -9基金项目:上海市科委科研项目资助(编号:54119610);上海市公共卫生重点学科建设项目(No .08GWZX 0404)通讯作者 申捷,E -mail :Jsh 1999@y ahoo .com .cn
光气是无色,具有烂干草味的窒息性气体,是重要的化工原料,广泛用于橡胶、塑料、染料、农药、医药等领域。在第一次世界大战期间,光气曾被用作军事毒剂。因此,联合国裁军委员会将光气定为“双用途毒剂”[1]。由于光气用途广泛,人们对其接触机会多,常因防护不当或意外泄露而致人员中毒,导致急性肺损伤(acute lung injury ,ALI ),甚至发展成
急性呼吸窘迫综合征(acute respirato ry distress
sy ndrom e ,A RDS ),危及生命。但目前光气对人体的中毒机制尚不清楚[2],中毒后特效疗法,故研究光气中毒机制具有重要意义。
基质金属蛋白酶-9(M M P -9)又称明胶酶B [3]
,是基质金属蛋白酶家族中的一种,可由多种炎性细胞产生,包括中性粒细胞、肺泡巨噬细胞以及结缔组织细胞。本实验建立大鼠光气吸入性肺损伤的模型,采用分子生物学方法探讨M M P -9在光气吸入性肺损伤中的表达和意义及其与肿瘤坏死因子α(TNF -α)的关系。
1 资料与方法
1.1 实验动物及分组 取SPF级SD大鼠50只,雌雄各半,体质量180～220g,由第二军医大学实验动物中心提供。随机分为空气对照组(10只)和光气染毒后2、4、6、8h组(每组各10只),分别记为O、A、B、C、D组。光气染毒组置于动态染毒柜中,导入浓度为8.33mg·L-1的光气(光气纯度为100%,由固体三光气溶于环己烷在N,N-二甲基甲酰胺作用下产生,染毒方法根据文献[4]略做改动)染毒5min;对照组动物置于染毒柜内,除导入同样流量的空气之外,其余条件与染毒组完全相同。
1.2 病理组织学检测 实验动物经腹腔注射20%乌拉坦(1m L·kg-1)麻醉,心脏穿刺放血处死。开胸取右中上肺,4%甲醛固定,石蜡包埋,4μm切片,
H E染色,光镜下观察肺组织病理学变化。
1.3 肺损伤的评价 ①肺湿/干质量(W/D)比值 取右下肺,轻轻擦干表面,立即称质量记为肺湿质量。然后置于80℃烤箱内,48h后称质量记为肺干质量,计算湿/干质量比值。②支气管肺泡灌洗液(BALF)蛋白浓度 处死大鼠后立即行气管插管,结扎右侧主支气管,以37℃0.9%氯化钠液对左肺行支气管肺泡灌洗,连续灌洗3次。收集灌洗液5mL于4℃800×g离心10min,回收上清液置于-20℃冰箱待检测蛋白含量。Lowry法测定蛋白含量。③支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞数目用血球计数板计细胞总数后,将灌洗液4℃3000r·min-1离心10min,上清液置于-20℃保存待生化测定,沉渣用于做细胞涂片, Wright-Giemsa染色,进行细胞分类(至少计数200个细胞),计算总细胞数目。
1.4 酶联免疫吸附试验(ELISA法)法测定BALF中TNF-α和MMP-9含量 操作步骤严格按照各试剂盒说明书进行,酶标溶解度波长以450nm读取吸光值,按标准曲线计算对应的吸光值。TNF-α和MMP-9放射免疫盒均由由美国R&D systems公司生产。
1.5 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测M M P-9mRNA水平 取左肺置于-70℃冰箱保存。用T rizo l试剂(美国Invitrogen公司)从肺组织中提取总RNA。引物由上海赛百盛公司合成。MM P-9引物序列:上游引物5′T TCAAGGACGGACGG TCGG TAT T3′,下游引物5′CTC TGAGCCTAGACCCAAC TTA3′,产物为228bp cDNA片断。β-Actin引物序列:上游引物5′CACGA TGGAGGGGCCGGAC TCATC3′,下游引物5′TA AAGACC TC TA TGCCAACACAG T3′具体步骤:(1)DNA酶处理完全去除残留DNA。(2)反转录生成cDNA。(3)以cDNA为模板做PCR扩增。反应程序:95℃5min,95℃30s, 48℃30s,72℃30s(60循环)。然后进行Real time PCR反应。
为了建立PCR产物的熔解曲线,扩增反应结束后继续从72℃缓慢加热到99℃(每5S升高1℃)实时定量PC R时各样品加样量均为2μL,然而由于受RNA浓度定量误差和RNA逆转录效率误差等的影响,每个样品取2μL体积的cDNA含量并不完全相同,为校正此差异,我们使用管家基因β-ac-tin作为内参,以样品待测基因得值除以此样品内参得值,最终得到的比值为样品的待测基因相对含量。
1.6 统计学方法 用SPSS11.0进行统计学分析。实验数据均以均数±标准差的形式表示,组间比较采用方差分析。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 观察 实验中观察到染毒组大鼠双足挠鼻,呼吸急促,心率加快,取肺可观察到双肺膨胀,体积增大,质量增加,色泽暗红,表面有明显出血点,气管插管时可见粉红色泡沫液体溢出,光镜下观察到肺组织结构显著改变,肺间质和肺泡腔内有大量的红细胞漏出和炎性细胞浸润,肺间质水肿增厚。对照组大鼠肺组织表面无出血点,光镜下肺组织结构完好,肺泡腔内无细胞渗出,肺间质清晰。病理观察见图1～2
。
2.2 肺湿/干质量比和BALF 中蛋白含量及中性粒细胞数目 动物染毒后肺湿/干质量比和支气管肺泡灌洗液中的蛋白含量逐渐增大,表明肺水肿逐渐加重,各组与对照组有明显差异(P <0.05),见表1。
表1 光气染毒后肺湿/干质量比和支气管肺泡
灌洗液中蛋白含量的变化
组别
个数湿/干质量比支气管肺泡灌洗液中的蛋白含量(g ·L -1)支气管肺泡灌
洗液中的细胞
数目(×106)
空气对照组
10
2.61±0.15
0.229±0.181
3.52±0.28
光气染毒后2h 10
5.24±0.41＊0.577±0.800＊5.23±0.28＊4h 105.62±0.33＊0.625±0.381＊
6.66±0.41＊6h 106.11±0.14＊0.675±0.107＊8.77±0.46＊8h
10
7.60±0.31＊0.726±0.110＊14.83±1.75＊
注:与对照组比较,＊P
<0.05
2.3 BA LF 中TNF -α和MM P -9含量 见表2。
表2 BALF 中TNF -α和MMP -9含量
组别
个数
支气管肺泡
灌洗液中T NF -α含量
支气管肺泡灌洗液中M M P -9含量空气对照组1015.302±1.15216.229±0.781光气染毒后2h 1020.243±0.412＊29.577±0.800＊4h 1027.623±0.332＊30.625±0.381＊6h 1034.115±0.142＊43.675±0.907＊8h
10
39.603±0.313＊48.726±0.110＊
注:与对照组比较,
＊P
<0.05
2.4 RT -PC R 结果分析 结果显示,对照组大鼠肺组织中也有MM P -9mRNA 的微量表达,以对照组大鼠肺组织中M M P -9m RNA 的表达含量设为1,染毒组大鼠较对照组M M P -9m RNA 的表达含量
显著增高(P <0.01),染毒组大鼠MM P -9m RNA 的表达含量随时间延长进一步增多,差异有统计学意义(P <0.01)。光气染毒后8h 组M MP -9m RNA 的表达量较其他各组显著增高(P <0.01)。见图3～4
。
图3 M M P -9m RNA
相对表达量
图4 M M P -9mRNA 相对表达量比较
(O :空气对照组;A :光气染毒后2h ,B :4h ;C :6h ;D :8h )
3 讨 论
本实验发现大鼠吸入光气2h 后即出现典型ALI 表现,主要表现为光气致伤大鼠整个肺充血,表面可见斑片状或者点状的出血灶;光镜下显示肺间质水肿,弥漫性出血,肺泡内可见大量红细胞渗出和中性粒细胞、血浆蛋白浸润;肺湿/干质量、肺泡灌洗液中性粒细胞数、蛋白含量以及肺血管的通透性均较对照组明显增高(P <0.05)。实验表明,在光气所致的急性肺损伤中不仅血管内皮细胞存在一定程度的损伤,而且肺泡上皮也受损,致使大量的蛋白和中性粒细胞等血管内容物渗漏到肺泡腔内,致肺泡灌洗液中蛋白含量和中性粒细胞数显著升高,肺湿/干质量比增加,表明肺水增加,这些变化均符合A LI 的生物标志(肺水增加、肺毛细血管通透性增加、肺泡灌洗液中的中性粒细胞数和蛋白浓度增加等改变)。实验结果证明,随光气染毒后时间的延长,肺组织损伤加重,这证实光气中毒可引起的迟发性肺水肿。
光气经人体吸入后经一定潜伏期(最长24h )可导致肺水肿甚至急性呼吸窘迫综合征(A RDS ),其主要病变是中毒性肺水肿,中毒机制假说颇多,包括诸如酰化作用、直接作用、盐酸作用、神经反射作用、肺血流动力学改变等,各有实验依据。但任何一种假说都不能完满地解释肺水肿发生与发展过程。
MMP 是一组在结构上具有极大同源,能降解细胞外基(ECM )蛋白的内切酶的总称,MMP -9是其中一种,可以通过以下作用参与肺损伤过程:①MMP -9直接作用于肺泡毛细血管基膜,使其通透性增加。MMP -9还可以水解血管内皮细胞的钙黏附素(cad -herin )和闭合蛋白(occludin )这两种细胞之间的连接
结构直接导致微血管通透性增加[5]
。②MMP -9通过调节细胞因子的水平,从而参与ALI 的发生、发展。MMP -9可将相对分子质量为26kDa 的TNF -α前体裂解成具有活性形式的、成熟的相对分子质量为
17kDa 的TNF -α[6]
。③MMP -9通过增加弹性蛋白酶的活性而间接促使ECM 及基膜的损伤。④降解肺泡毛细血管基底膜的主要成分Ⅳ型胶原,加重肺水肿。
MM Ps是一组锌离子依赖性内肽酶,通过介导细胞外基质降解,参与正常发育、组织重建、修复、细胞迁移、血管生成、炎性反应、肿瘤侵袭和转移等过程。在正常情况下,M M Ps表达量很少,但活化的中性粒细胞可释放大量的M M P-9。肺泡毛细血管基底膜的损害是以细胞外基质的变化为基础。MM P-9的过度激活和表达,导致大量细胞外基质(ex tracellularmatrix,ECM)成分降解,基底膜破坏,通透性增加,炎性细胞浸润,引起A RDS。Chet-ty等[7]也证实MM P-9参与了高氧诱导的新生小鼠急性肺损伤,并随损伤的加重MM P-9的表达明显增强。M MP-9还可能通过降解肺组织中的弹性纤维造成肺组织弹性支持作用减低,结构破坏;同时, MM P-9降解的细胞外基质片段对炎性细胞还有趋化作用,可放大肺组织局部的炎性反应,进一步加重了肺实质的毁损。Fligiel等[8]对28例ALI/ARDS 患者支气管肺泡灌洗液进行分析,结果显示M MP-9,M M P-8,MM P-2均增高。张向峰等[9]建立小鼠高氧环境下急性肺损伤模型,RT-PCR方法证明MM P-9mRNA在高氧引起的肺损伤中表达增多。Kim等[10]发现在博来霉素引起的肺损伤中发现肺组织和BA LF中M MP-9和M M P-2均升高,M MP-9升高更明显,早期主要起肺损伤作用,晚期肺组织中M M P-9和M MP-2也升高,起肺组织损伤修复作用,导致肺纤维化。刘新等[11]研究发现,异丙酚可产生与抑制MM P-9活性相关的肺保护作用。本实验通过建立大鼠光气吸入性肺损伤动物模型,证明与空气对照组相比,光气损伤组BA LF中MM P-9及TNF-α的含量明显增加,M M P-9在光气染毒组中表达较对照组明显增多(P<0.01),并随时间延长,M M P-9mRNA的表达显著增加,证明MM P-9与光气吸入性肺损伤程度存在相关性。
MMP-9在光气吸入性肺损伤中的确切机制目前尚未见报道,本实验证明MM P-9被激活后导致大量炎性细胞因子过度表达和中性粒细胞活化致伤是引起ALI发生发展的共同轴心环节。通过本实验,我们认为光气吸入性肺损伤的可能机制为:(1)光气吸入导致中性粒细胞、巨噬细胞等炎性细胞在肺部扣押,引发全身炎性反应综合征(SIRS)。(2)激活的炎性细胞和释放的炎性介质使MMP-9的表达含量上调,降解肺泡毛细血管基底膜,使其通透性增加,肺间质结构显著紊乱,肺水肿形成。(3)钠-钾ATP酶活力受到抑制,肺组织清除氧自由基的能力明显下降[12]。氧化物质大量生成能直接切断MM P-9的cys-Zn2+间的配位键,或引起前肽区裂解,使酶活性中心暴露而激活,从而发挥其损伤作用。
MMP-9可以通过多种途径参与光气吸入性肺损伤,并与众多细胞炎性因子如TNF-α之间存在正反馈,促进炎症进展。在发生ALI后,早期应用MMP-9抑制剂,如地塞米松,乌司他丁抑制MMP-9活性可能会减轻肺损伤的程度[13]。在光气引起的肺损伤中,目前尚需相关动物实验和临床研究证明。通过研究细胞因子与MMP-9之间的信号传导通路可进一步了解MMP-9在光气吸入性肺损伤中的作用,同时在临床研究中对光气中毒患者MMP-9进行评价,并观察MMP-9与其相关性,以期进一步探讨光气吸入性肺损伤的发病机制。
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常见蛋白酶抑制剂
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基质金属蛋白酶及其抑制因子与盆底功能障碍性疾病的关系
基质金属蛋白酶及其抑制因子与盆底功能障碍性疾病的关系 盆底功能障碍性疾病（PFD）是中老年女性的常见病，MMP7、TIMP1及其相互作用对ECM的降解过程有着重要影响，进而也与PFD的发生发展密切相关。 标签：盆底功能障碍性疾病（PFD）；基质金属蛋白酶（MMPs）；组织型金属蛋白酶抑制物（TIMPs） 盆底功能障碍性疾病（PFD）是中老年女性的常见病，是威胁妇女健康的慢性疾病之一，随着社会老龄化的到来，发病率逐渐升高。PFD以女性压力性尿失禁（SUI）、盆腔器官脱垂（POP）和生殖道损伤为常见问题，是一组由于盆腔支持结构缺陷或退化、损伤及功能障碍而导致的疾病。PFD的发病危险因素有妊娠、阴道分娩损伤、长期腹压增加、先天缺陷及盆底肌肉退化薄弱，而支持盆底器官的盆底肌肉组织结构功能异常为主要因素[1]。 骨盆底由多层肌肉和筋膜构成，封闭骨盆出口，承托并保持盆腔脏器于正常位置[1]。细胞外基质（ECM）是由细胞分泌到细胞外间质中的大分子物质，构成复杂的网架结构，支持并连接组织结构、调节组织的发生和细胞的生理活动。ECM是盆底结缔组织的主要成分，其合成与分解处于动态平衡中，以维持组织形态结构及功能的稳定。因此，其含量及结构的改变与PFD的发生发展关系密切。目前已经发现多种作用于ECM不同成分的酶，其中胞外基质降解最重要的蛋白水解系统由结缔组织及肿瘤组织合成、分泌的基质金属蛋白酶（MMPs）构成。MMPs是一个依赖锌离子的内肽酶类，在细胞外基质中其活性可被内源性抑制剂—组织型金属蛋白酶抑制物（TIMPs）家族所调节。目前MMPs家族已分离鉴别出26个成员MMP1～26，分为6类。其中MMP3、7为基质溶解素类，不仅可降解Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型胶原蛋白还能降解纤维连接蛋白和层粘连蛋白等，它们的内源性抑制剂TIMP1可以抑制MMP3、MMP7的活性。由此可见，MMP7，TIMP1及其相互作用对ECM的降解过程有着重要影响，进而也与PFD的发生发展密切相关。现就MMP7，TIMP1与PFD之间关系的相关研究做一综述。 盆腔肌肉群与盆底结缔组织共同作用支撑着阴道与子宫。盆底结缔组织主要由胶原构成，胶原蛋白是盆底韧带、筋膜的主要成分。盆底的阴道上皮、肌纤维组织与结缔组织的胶原构成主要是Ⅰ型与Ⅲ型。 1 PFD患者盆底结缔组织中胶原含量改变 许多文献报道女性SUI及POP患者，膀胱阴道筋膜，主韧带组织中胶原含量减少。2009年李萍等[2]在研究中发现PFD患者宫颈组织中1型蛋白含量减小。2009叶明等[3]在研究中发现POP患者韧带和盆底筋膜组织Ⅲ型胶原含量减少。 2 胶原代谢情况改变 2.1 胶原分解代谢增加
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金属基质蛋白酶9与疾病的研究进展 摘要：金属基质蛋白酶（MMPs）是一组可以选择性降解细胞外基质（ECM）的内肽酶，金属基质蛋白酶9（MMP-9）又名明胶酶B，它是MMPs家族中一个重要成员，能水解弹性蛋白、胶原蛋白、明胶、纤维蛋白等多种细胞外基质成分，在生理情况下参与人体的正常发育，是ECM降解的生理性调节因子。所有MMPs都受金属基质蛋白酶抑制剂所抑制，两者的不平衡导致许多疾病的发生。金属基质蛋白酶抑制剂1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1）为MMP-9特异性抑制剂，目前认为MMP-9与TIMP-1是调节ECM降解、合成的主要酶类，MMP-9/TIMP-1比值失衡是多种疾病发生、发展的重要机制之一。近年研究发现MMP-9还与全身多系统疾病的发生、发展有关，现就MMP-9与多种疾病的相关研究进展进行综述。 关键词：金属基质蛋白酶9；疾病；研究进展金属基质蛋白酶（matrix metalloteinases，MMPs）是一组锌离子依赖的肽链内肽酶，因含金属离子（锌、钙）而得名，现至少已发现26种MMPs，称为MMPs家族，是构成细胞外基质降解最重要的蛋白水解系统。其抑制剂（tissue inhibitor of metalloproteinases，TIMPs）是调节MMPs的重要因素。MMPs
与TIMPs在维持ECM的动态平衡中起重要作用。细胞外基质（extracellullar matrix，ECM）是一类由胶原、蛋白聚糖及糖蛋白等大分子物质组成的动态网状结构，ECM不仅起细胞与细胞之间机械支持和连接作用，也是细胞与细胞之间信号传递的桥梁，现已识别丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、基质金属蛋白酶均能降解ECM[1]。金属基质蛋白酶9（matrix metalloteinases-9，MMP-9）是MMPs家族分子量最大的明胶酶。TIMP-1是MMP-9的重要的生理性抑制剂，二者在维持ECM的动态平衡中起重要作用。MMP-9/TIMP-1比值失衡是多种疾病发生、发展的重要机制之一。近年许多研究发现MMP-9与多种疾病的发生发展密切相关。 1 MMP-9概述 MMP-9是1974年从人中性粒细胞中首次提纯得到，于1989年的金属蛋白酶学会上被正式命名。MMP-9的分子量为92KD，MMP-9基因长7.7kb，含13个外显子，其长度不一，位于染色体的20q11.2-13.1[2]。MMP-9起源于角质形成细胞、单核细胞、中性粒细胞、巨噬细胞和成纤维细胞。在生理PH值时，在金属锌离子的作用下，能够切断任何ECM 成分，调节细胞黏附、作用于细胞外成分或其他蛋白成分而启动潜在生物学功能，直接或间接参与胚胎发育、组织模型重建和场上恢复等正常生理功能。MMP-9其作用底物包括明
组织金属蛋白酶及其抑制因子与肝纤维化
组织金属蛋白酶及其抑制因子与肝纤维 化 (作者：__________ 单位：___________ 邮编：___________ ) 【摘要】基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase ，MMP) 是体内重要的水解酶之一，几乎能降解细胞外基质(extracellular matrix ，ECM的所有成分；基质金属蛋白酶组织抑制因子(tissue in hibitor of metalloprote in asas ，TIMPs )是MMP 啲内源性抑制 系统。近年来发现，MMPs/TIMPs调节失衡与肝纤维化的关系密切，可从多方面影响肝纤维化的形成。通过干扰MMP与TIMPs基因的表达，研究肝纤维化的发病机制和药物治疗是有希望的途径。 【关键词】MMPs ;TIMPs;肝纤维化 肝纤维化是许多慢性肝病的共同病理过程，是细胞外基质(ECM)的合 成与降解失衡，导致在细胞间质的过度沉积［1-4 ］，肝组织结构改建。 许多细胞因子参与了这一过程，但是MMP是最重要的一种［5］。MMPs 几乎能降解细胞外基质(ECM)的所有成分，而其天然抑制剂-基质金属蛋白酶抑制剂(TIMPs)能与MMPs成员结合成复合物抑制其活性⑹。二者的调节异常将引起ECM合成或降解的失衡，与各种器官纤维化疾病密切相关。研究发现，通过调节MMP与TIMPs基因的表达
来治疗肝纤维化是肝纤维化治疗的新途径。本文就MMPs/TIMPs与肝纤维化的关系及治疗前景作一综述。 1 MMPs分类、功能、结构及活性的调控 MMPs是一组基质金属蛋白酶。M MPs在肝内主要由肝星状细胞（HSC）和Kupffer细胞表达分泌，参与细胞外基质降解的一类锌-钙离子依赖的内源性蛋白水解酶家族，因其需要Ca2+ Zn 2+等金属离 子作为辅助因子而得名，是迄今为止发现的唯一能分解纤维类胶原的酶，几乎能降解除多糖以外的所有ECM成分，在生理病理过程中发挥着重要的作用。MMP家族由24种成员组成，其中有23种存在于人体中。 1. 1 MMPs可被分成六类［7］（1）胶原酶类。主要包括MMP-1 MMP-8 MMP-13和MMP-18它们能够降解间质胶原（I、H、皿型胶原），也能消化许多别的ECM及可溶性蛋白［5］。 MMP-1又称成纤维细胞型，是人类主要的间质胶原酶，结缔组织细胞、肝内HSC肝细胞、枯否氏细胞均有分泌，分解底物为胶原蛋白（皿I II）。而MMP-13 是鼠类主要的间质胶原酶。MMP-取称中性粒细胞胶原酶，主要降解I型胶原。（2）明胶酶类（gelatinases）。包括MMP-2阴胶酶A）及MMP-9明胶酶B）。它们可降解明胶（变性胶原）和W、V和幻型胶原、层粘连蛋白、蛋白聚糖等。MMP-2和胶原酶类以相似的方式可以降解I, I,和皿型胶原，但其活性较MMP-1弱［8］。（3）基质分解素（strogylisin）。主要包括MMP-3 MMP-1（和MMP-11 仅有MMP-3在肝脏中存在。底物广泛，包括蛋白多糖、层粘蛋白、纤维连接蛋白、
基质金属蛋白酶
基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs) 基质金属蛋白酶是一个大家族，因其需要Ca++、Zn++等金属离子作为辅助因子而得名，其家族成员具有相似的结构，一般由5个功能不同的结构域组成:（1）疏水信号肽序列;（2）前肽区，主要作用是保持酶原的稳定。当该区域被外源性酶切断后，MMPs酶原被激活;（3）催化活性区，有锌离子结合位点，对酶催化作用的发挥至关重要;（4）富含脯氨酸的铰链区;（5）羧基末端区，与酶的底物特异性有关。其中酶催化活性区和前肽区具有高度保守性。MMPs成员上述结构的基础上各有特点。各种MMP间具有一定的底物特异性，但不是绝对的。同一种MMP可降解多种细胞外基质成份，而某一种细胞外基质成分又可被多种MMP 降解，但不同酶的降解效率可不同。 MMPs几乎能降解ECM中的各种蛋白成分,破坏肿瘤细胞侵袭的组织学屏障，在肿瘤侵袭转移中起关键性作用，从而在肿瘤浸润转移中的作用日益受到重视，被认为是该过程中主要的蛋白水解酶。目前MMPs家族已分离鉴别出26个成员，编号分别为MMP1～26。根据作用底物以及片断同源性，将MMPs分为4类。 Ⅳ型胶原酶为其中重要的一类，它主要有两种形式，一种被糖化，分子量为92kD，命名为MMP-9;另一种非糖化，分子量为72kD，被称为MMP-2。当前对MMP-2，MMP-9的研究较深入。 MMP-2基因位于人类染色体16q21，由13个外显子和12个内含子所组成，结构基因总长度为27kb，与其他金属蛋白酶不同，MMP-2基因5’旁侧序列促进子区域含有2个GC盒而不是TATA盒。活化的MMP-2定位于细胞穿透基质的突出部位，估计其在酶解细胞间基质成分及基底膜的主要成分Ⅳ型胶原中有“钻头”的作用。 此外，已证实MMP-3 和MMP-10能作用于PG、LN、FN、Ⅲ型和Ⅳ型胶原及明胶。MMP-7能作用于明胶和FN。MMP-1的产生范围较广，可由基质纤维母
组织金属蛋白酶及其抑制因子与肝纤维化
组织金属蛋白酶及其抑制因子与肝纤维化【摘要】基质金属蛋口酶(matrix metalloproteinase> MMP)是体内 重要的水解酶之一，几乎能降解细胞外基质(extracellular raatrix> ECM)的所有成分;基质金属蛋口酶组织抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinasas^ TIMPs )是MMPs的内源性抑制系统。近年来发现，MMPs/TIMPs调节失衡与肝纤维化的关系密切，可从多方而影响肝纤维化的形成。通过干扰MMPs与TIMPs基因的表达，研究肝纤维化的发病机制和药物治疗是有希望的途径。 【关键词】MMPs ;TIMPs：肝纤维化 肝纤维化是许多慢性肝病的共同病理过程，是细胞外基质(ECM)的合成与降解失衡，导致在细胞间质的过度沉积［1-4］,肝组织结构改建。 许多细胞因子参与了这一过程，但是MMPs是最重要的一种［5］° MMPs 几乎能降解细胞外基质(ECM)的所有成分,而其天然抑制剂-基质金属 蛋口酶抑制剂(TIMPs)能与MMPs成员结合成复合物抑制其活性［6］。 二者的调节异常将引起ECM合成或降解的失衡，与各种器官纤维化疾病密切相关。研究发现，通过调节MMPs与TIMPs基因的表达来治疗肝纤维化是肝纤维化治疗的新途径。木文就MMPs/TIMPs与肝纤维化的关系及治疗前景作一综述。 1 MMPs分类、功能、结构及活性的调控 MMPs是一组基质金属蛋口酶。MMPs在肝内主要由肝星状细胞(HSC) 和Kupffer细胞表达分泌，参与细胞外基质降解的一类锌-钙离子依赖的内源性蛋口水解酶家族，因其需要Ca2+、Zn2+等金属离子作为辅 助因子而得名，是迄今为止发现的唯一能分解纤维类胶原的酶，几乎能降解除多糖以外的所有ECM成分，在生理病理过程中发挥着重要的作用。MMPs家族由24种成员组成，其中有23种存在于人体中。 L 1 MMPs可被分成六类［7］（1）胶原酶类。主要包括MMP-K
基质金属蛋白酶_
基质金属蛋白酶_ 基质金属蛋白酶 细胞外基质和基底膜重塑是癌细胞侵袭转移过程中的关键环节，需借助于蛋白降解酶的表达和激活。基质蛋白酶主要有以下数种：丝氨酸蛋白酶类，包括血浆酶原激活剂；半胱氨酸蛋白酶类，包括组织蛋白酶0在内的溶酶体酶；金属蛋白酶类0^1&110^^0^611^565) [1]。金属蛋白酶类在肿瘤侵袭过程中的作用近年来倍受关注，大量证据表明基质金属蛋白酶，特别是基质金属蛋白酶- 2 (matrix metalloproteinase-2, MMP-2)在肿瘤细胞介导的细胞外基质降解中起关键作用，临床研究表明，順?_2活性和表达的增加与人类多种恶性肿瘤侵袭转移潜能及预后密切相关[2?4]。 一.嫩识-2基因及其表达和激活的调节 MMP-2基因位于人类染色体16q21,由13个外显子和12个内含子所组成，结构基因总长度为27此，与其他金属蛋白酶不同，_-2基因5'旁侧序列促进子区域含有2个60盒而不是1414盒[5]。_-2以前酶原的形式由多种细胞分泌，如成纤维细胞、巨噬细胞、内皮细胞和恶性肿瘤细胞等。与其他金属蛋白酶相似，嫩1?-2分子含有氨基末端片段、金属结合片段及竣基末端片段，其中带有高度保守序列PRCGV/NPD的氨基末端具有一个不配对的半胱氨酸残基，该残基与激活位点的锌原子相互作用介导着—_2的前体状态；金属结合片段是公认的锌结合部位，其含旁侧有2个组氨酸的保守序列册4出羧基末端具有类似凝血酶的片段，该片段的具体功能尚未明确。此外，_-2还具有一个 58个氨基酸残基组成的明胶结合片段，此片段与纤维连接素的明胶结合11型基元相似[6]。目前认为，_-2表达和功能的调节发生于转录、分泌、前酶原 的激活、细胞表面的结合以及与来源于肿瘤或宿主细胞的MMP抑制剂的相互作用等多个不同的水平。 MMP-2的转录调节与其他金属蛋白酶相比具有一定的独特性，如佛波醇酯 (phorbol 6316：^通过仙-1位点的介导增加腿?-9和间质胶原酶的表达，而
基质金属蛋白酶酶谱分析法
基质金属蛋白酶酶谱分析法刘 煜 张嘉宁 朱正美 基质金属蛋白酶(m atrix m etallop ro teinases, MM P s)是一组重要的蛋白水解酶,可以水解细胞外基质中胶原、纤维连接蛋白等多种成分[1],参与了人体内许多生理和病理过程,如骨的重建[2]、肿瘤转移[3]等都与MM P s密切相关。近年来研究发现MM P s与生殖过程关系密切[4,5],如在月经的发生,着床与分娩过程都有一定的MM P s的变化,因而对MM P s的活性及种类的分析有着很重要的意义。目前分析MM P s活性及酶量的方法有多种,其中酶谱法是将非还原性SD S2 PA GE电泳分析酶种类与检测酶活性有效结合的一种酶学方法。尤其是具有在电泳中可将组织内与MM P s 紧密结合的组织抑制剂(T I M P s)分离,进而表现出酶的活性,从而达到在分离不同MM P s的同时又可直接显示其活性条带一举两得的特点。鉴于MM P s酶谱分析法具有方法灵敏,结果直观,能同时观察酶与酶原种类和活性等优点,且其方法较简便,适于在不同实验室应用。本研究用早孕子宫内膜样品经组织培养后,将其所分泌的MM P s运用酶谱分析法进行鉴别种类和活性分析,对方法的实验原理及条件进行了介绍,并就其优缺点进行讨论。 一、材料与方法 11材料:丙烯酰胺(A cry),十二烷基磺酸钠(SD S),T riton2X100,Pep statine A,苯甲基磺酰氟(P M SF),N,N2亚甲基丙烯酰胺(B is),1,10菲洛林(1,10phenan th ro line),ED TA,明胶蛋白,DM E M F12无血清培养基,考马斯亮蓝G250,以上均为Sig2 m a公司产品;冰醋酸,甲醇(国产分析纯);72、92×103明胶酶标准品(美国N I H,D r.Stetler2Steven son W G 惠赠)。 21子宫内膜组织块培养:子宫内膜用灭菌冷生理盐水冲洗血迹后,剪成2mm2大小,在24孔培养板中加重量约50m g 孔组织块及1m l培养基后,于5% CO2、37℃条件下,培养5小时,收集上清,-20℃冰箱冻存用于酶谱分析[6]。 31酶谱法:实验原理:MM P s与SD S结合使MM P s结构发生改变,后经SD S2PA GE电泳,将分子量不同的MM P s以及与MM P s结合的组织抑制剂同时分离,再用T rti on2X100除去SD S,在这一过程中引发了MM P s酶原蛋白体外活化机制,酶原在凝胶内除掉一个约10×103的小肽,转变为有活性的酶。MM P s 在体内常以酶原形式分泌并可被纤溶酶等物质激活[7],活化后的MM P s,在除掉SD S后也可以恢复酶活性,在酶谱上称之为活性型MM P s,从而与酶原相区别,由于它在体内已具有水解胶原等基质的作用,因而在功能上的意义要大于相应的酶原。经过酶的复性及酶原的活化后,凝胶内已经具有活性的MM P s则可在适宜的条件下将其所在位置的底物明胶蛋白或其它底物蛋白(制凝胶时已均匀掺入其中)水解,然后用考马斯亮蓝G250染色,再用脱色液脱色,结果见凝胶普遍蓝染,而底物被水解处即可见到清晰的透明条带,根据其透明的程度及面积的大小判断其酶活性的高底,该方法还可以通过变换底物,从而用来研究不同种类的MM P s。如用酪蛋白做底物研究基质溶解素等。 取上述收集的培养上清50Λl加入10Λl样品缓冲液(含1714%SD S,7%蔗糖)混匀后即可进行上样,然后将含有1m g m l明胶蛋白的10%的丙烯酰胺凝胶加入V216垂直电泳槽中,按照L aem n li[8]方法进行电泳,结束后将凝胶置于培养皿中,加入215%T riton2 X100100m l,振荡,重复洗6次,每次5分钟,再用T ris HC l缓冲液(50mmo l L T ris,pH714)冲洗3次,每次5分钟,之后将凝胶放入反应液中(50mmo l L T ris,pH714,200mmo l L N aC l,10mmo l L CaC l2), 37℃培养18小时(该步骤可根据实验要求分别加入1, 10phenan th ro line1mmo l L,ED TA20mmo l L,Pep2 statine A1mmo l L,P M SF20mmo l L等不同的蛋白酶抑制剂,用以鉴定MM P s存在),然后将凝胶置于011%考马斯亮蓝G2250染色液中染色1小时,最后放入脱色液(5%甲醇,715%冰醋酸)中进行脱色[9]。 二、结果 11早孕子宫内膜的MM P s酶谱:应用酶谱法从早 作者单位:116027 大连医科大学生化教研室
肝癌中基质金属蛋白酶及其抑制因子的研究进展
怂鑫妻盏豁翳要）Ｅｄｉ，２０?ｏ，Ａ叭２９（２）：２，５—２均．２，５． ｉｃｃｏｎｄｉｔｉｏｎ［Ｐ］．２００４．［６４］ＣＵＩ Ｈ，ＣＵＩＹ．ＣＮｌｌ３４２３４一Ａ，ＣＮｌ０７３３６２一Ｃ：Ｔｅａｆｏｒｅ．ｇ． ［５７］ＭＡＢ．ＣＮｌ０１４７４３１１。Ａ：Ｓｏｆｔｃａｐｓｕｌｅｆｏｒｕｓｅａ８ａｎ ａｎｆｉｏｘｉ－ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇｔｈｅｌｉｖｅｒａｎｄｉｎｖｉｇｏｒａｔｉｎｇｓｐｌｅｅｎ［Ｐ］．１９９８．ｄａｎｔｆｏｒａｌｌｅｖｉａｔｉｎｇｅｙｅｓｔｒａｉｎ，ｃｏｍｐｒｉｓｅｓｓｏｆｔｃａｐｓｕｌｅｓｈｅｌｌ，［６５］ＰＡＮＧＹ．ＣＮｌｌ２４１０８－Ａ：Ｎｕｔｒｉｔｉｖｅｈｅａｌｔｈ．ｃａ弛ｓ锄ｓａｇｅ［Ｐ］．ｘａｎｔｈｉｎｉｎｍａｒｉｇｏｌｄｅｘｔｒａｃｔ，ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎｓｉｎｂｌｕｅｂｅｒｒｙ１９９７． ｅｘｔｒａｃｔ，ｂｅｔａ。ｃａｒｏｔｅｎｅ，ａｎｄｓｔｅｖｉｏｓｉｄｅｉｎＣｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ６－［６６］ＢＡＲＴＯＮＢ，ＡＮＴＯＮＥＬＬＩＪ．ＵＳ２００７２６９５７６．Ａ１：ＮｕｔｒｉｔｉｏＩｌａｌ ｔｒａｃｔ［Ｐ］．２００９．ｆｒｕｉｔｄｒｉｎｋｆｏｒ ｕｓｅｉｎｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ．ｈｅａｌｔｈｓｃｉｅｎｃｅｓａｒｌｄｍｅｄｉ． ［５８］ＸＩＡＰ，ＢＥＩＳ，ＦＥＮＧＹ．ＣＮｌ０７５８７８。Ａ：Ｎｕｔｒｉｔｉｏｕｓ ｌｉｑｕｉｄｃｉｎｅｆｉｅｌｄｓ，ｃｏｎｔａｉｎｓｆｒｕｉｔｉｕｉｃｅ，ｅ．ｇ．ｄｕｒｉａｎ。ａｎｄｓｉｌｖｅｒ ｆｏｒｅｙｅｓｉｇｈｔｃｏｎｓｉｓｔｓｏｆｅｘｔｒａｃｔｓｏｆｃａｓｓｉａｓｅｅｄ，ｆｒｕｉｔｏｆｌｙｃｉｕｍ￥ｏｎｌ＇ｅｅ［Ｐ］．２００７． ｂａｒｂａｒｕｍ，ｍｕｌｂｅｒｒｙｆｌｏｗｅｒｈｅａｄ，ｖｉｔａｍｉｎＡ，ｖｉｔａｍｉｎＣｅｔｅ［６７］ＡｍｅｒｉｃａｎＰｈｏｅｎｉｘＢｉｏｔｅｃｈＩｎｃ．ＤＥ２０２００８０１１７２１．Ｕ１：ｃ砌．［Ｐ］．１９９４．ｐｏｓｉｔｉｏｎ，ｕｓｅｆｕｌｔｏｔｒｅａｔｃ帅ｃｅｒ，ｃｏｍｐｒｉｓｅｓａｍｉｘｔｕｒｅｏｆｅ】【－ ［５９］ＹＵＢ．ＣＮｌ０１０７７３７４一Ａ：ＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅｆｏｒｔｒａｃｔｓｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍ ｅ．ｇ．Ｒａｄｉｘｇｉｎｓｅｎｇ．Ｇａｎｏｄｅｒｍａｌｕｃｉｄ． ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇａｎｄｔｒｅａｔｉｎｇｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅ，ｃｏｍｐｒｉｓｅｓｌｙｃｉ一哪，Ｃｏｒｄｙｅｅｐｓｓｉｎｅｎｓｉｓ，Ｃｏｄｏｎｏｐｓｉｓｐｉｌｏｓｕｌａ，Ｌｙｃｉｕｍｂａｒ－ ｕｎｌｂａｒｂａｒｕｍｐｏｌｙｓａｃｅｈａｒｉｄｅ，ｇｉｎｓｅｎｇｐｏｗｄｅｒ，２‘ａｍｉｎｏｅｔｈ．ｂａｌ＇ｕｍ，ＬｉｇｕｓｔｒｕｍｌｕｃｉｄｕｍａｎｄＧｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｕｒａｌｅｎｓｉｓａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｅａｃｉｄａｎｄｖｉｔａｍｉｎＥ［Ｐ］．２００８．［Ｐ］．２００９． ［６０］ＭＡＪＥＷＳＫＩＧＰ，ＳＨＡＨＡＲ，ＧＯＲＭＬＥＹＪＬ，ｅｔａ１．［６８］帆ＬＧ．ＥＰｌ５３２８６８－Ａ１，ＤＥｌ０３５８３２８一Ａ１。ＥＰｌ５３２８６８．ＵＳ２００７１６６２６７’ＡＩ：ＣｏｓｍｅｔｉｃｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｆｏｒｔｒｅａｔｉｎｇｆｉｎｅＢ１，ＤＥ５０２００４００９１２２?Ｇ：Ｐｌａｎｔｅｘｔｒａｃｔ．ａｓａｆｏｏｄｓｕｐｐｌｅ．１ｉｎｅｓａｎｄｗｒｉｎｋｌｅｓｉｎｆａｃｉａｌｓｋｉｎｂｙｉｍｐｒｏｖｉｎｇｄｅｒｍａｌｆｉｂｒｏ－ｍｅｎｔ，ｉｓｃｏｍｐｏｓｅｄｏｆｅｘｔｒａｃｔｓｏｆｗｏｌｆｂｅｒｒｉｅｓａｎｄｓｃｈｉｓａｎｄｒａｂｌａｓｔｍａｔｒｉｘ，ｃｏｎｔａｉｎｓａｃｙｌａｔｅｄｏｌｉｇｏｐｅｐｔｉｄｅａｎｄＬｙｅｉｕｍｂａｒ－ｂｅｒｒｉｅｓｔｏｇｅｔｈｅｒｗｉｔｈｍａｇｎｏｌｉａｂｌｏｓｓｏｍ［Ｐ］．２００５． ｂａ／ｌｌｍｅｘｔｒａｃｔｉｎｃｏｓｍｅｔｉｃｖｅｈｉｃｌｅ［Ｐ］．２００７．［６９］ＳＯＫ，ＹＵＥＮｗ，ＣＨＡＮＧＲＣ，ｅｔａ１．ＵＳ２００５１９６４７８．Ａ１． ［６１］ＧＯＤＤＩＮＧＥＲＤ，ＫＲＵＥＧＥＲＭ．ＤＥｌ０２００８０１２０５９’Ａ１，Ｗ０２００５０８２３８７－Ａ２，ＤＥｌ １２００５０００３４５．Ｔ５，ＣＮｌ９５３７６１．Ａ：Ｗ０２００９１０９４２６‘Ａ１：Ｃｏｓｍｅｔｉｃｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ，ｕｓｅｆｕｌｅ．ｇ．ｔｏＲｅｄｕｃｉｎｇｒｅｔｉｎａｌｇａｎｇｌｉｏｎｃｅｌｌｓｄｅａｔｈｅ．ｇ．ｇｌａｕｃｏｍｉｎｖｏｌｖｅｓｔｒｅａｔｋｅｒａｔｉｎｆｉｂｅｒｓ，ｐｒｅｆｅｒａｂｌｙｈｕｍａｎｈａｉｒｓ。ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ锄ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇａｇｅｎｔｅｘｔｒａｃｔｅｄｂｙｗａｔｅｒｆｒｏｍｌｙｃｉｕｍｂａｒｂａｍｍｅｘｔｒａｃｔｆｒｏｍｆｒｕｉｔｓｏｆＬｙｃｉｕｍｂａｒｂａｒｍｎ，ａｎｄｆｕｒｔｈｅｒ蛐ａｃｔｉｖｅｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｍａｔｅｒｉａｌ［Ｐ］．２００５． ａｇｅｎｔｅ．ｇ．ｎｏｎ。ｓｕｒｆａｃｅａｃｔｉｖｅｂｅｔａｉｎｅ，ｕｂｉｑｕｉｎｏｎｅ，ａｎｄＣＯ－［７０］ＰｈｙｔｏｖｉｓｉｏｎｓＧｍｂｈ＆ＣｏＫＳ．ＤＥ２０２００４０１８００５一Ｕ１．ＤＥｌ０３ｅｎｚｙｍｅＱ１０［Ｐ］．２００９．５４６６７－Ａ１：ＣｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｅｘｔｒａｃｔｓｏｆＬｙｃｉｕｍａｎｄ［６２］ＣＨＵＣ．ＣＮｌｌ２２７１２。Ａ：Ｎｏｕｒｉｓｈｉｎｇａｎｄｈｅａｌｔｈ－ｃａｒｅｍｅｄｉｃｉ．Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａ，ｕｓｅｆｕｌｉｎｃｏｓｍｅｔｉｃｓ，ｆｏｏｄｓａｎｄｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ，ｎａｌｗｉｎｅ［Ｐ］．１９９７．ｈａｖｅａｎｔｉｓｔｒｅｓｓａｎｄａｎｔｉ．ａｇｅｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ．１ａｃｋｐｏｔｅｎｔｉａｌｌｙ ［６３］ＷＡＮＧＤ．ＣＮｌ１０８０４７－Ａ，ＣＮｌ０３８３８３一Ｃ：Ｉｎｓｔａｎｔｎｏｏｄｌｅｓｈａｒｍｆｕｌ ｌｉｇｎａｎｓ ａｎｄｓｃｈｉｓａｎｄｒｉｎｓ［Ｐ］．２００５．ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇＣｈｉｎｅｓｅｗｏｌｆ－ｂｅｒｒｙ［Ｐ１．１９９７． 肝癌中基质金属蛋白酶及其 抑制因子的研究进展 程桂丹１，陆枫林２ （１．东南大学临床医学院，江苏南京２１０００９；２．东南大学附属中大医院消化科，江苏南京２１０００９） ［摘要］基质金属蛋白酶（ＭＭＰ）家族是降解细胞外基质的重要酶类，组织金属蛋白酶抑制因子（ＴＩＭＰ）是［收稿日期］２００９—０５—１８［修回日期］２００９?１Ｉ一１７ ［基金项目］江苏省自然科学基金资助项目（ＢＫ２００６１００） ［作者简介］程桂丹（１９８３一），女，湖北咸宁人，在读硕士研究生。Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｇｄｋｌｚ２１９＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｉｎ．ｃｎ ［通讯作者］陆枫林Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｕｆｅｎｇｌｉｎｍｙｔｕｔｏｒ＠１６３．ｃｏｍ
基质金属蛋白酶在皮肤病中的研究进展
突、枕鳞、部分枕髁和C1、C2的一侧后弓、侧块、椎弓及横突等。在分离C1、C2时注意保护椎动脉。骨质的切除范围包括一侧部分枕鳞、枕骨大孔后外缘、C1后弓、乳突,使乙状窦可被牵拉向外侧从而扩大对岩斜区的暴露角。沿乙状窦内侧5mm 处切开硬膜,硬脊膜的切开于椎动脉穿过寰枕膜处的外侧,硬膜瓣翻向中线侧。牵开小脑即可暴露相关解剖结构。 此区域神经、血管众多,包括Ⅶ～Ⅻ颅神经、C1和C2神经根、椎动脉Ⅴ3、Ⅴ4段、基底动脉、小脑前下动脉、小脑后下动脉、脊髓前后动脉和众多的小穿支。手术的重点在于寻找、暴露及保护椎动脉,椎动脉总是位于神经根的腹侧、下斜肌的下缘[8]。此处有丰富的静脉丛围绕椎动脉。C1横突孔是有价值的骨性标志[9]。 此种入路手术技术要求较高,但对于中、下斜坡区病变,其距离近,视野宽广,不失为一种较理想的手术入路。 3.5 颞底或颞下入路 耳前颞底或颞下入路为经岩骨前部从 前外侧方向到达斜坡的途径。颞底或颞下入路的皮肤切口自耳前颧弓下缘向下向后至颞上线处拐向前,止于眶外上方发际缘。分离颞肌至骨质,截断颧弓后形成颧颞骨窗,颞底部骨质切除可达翼突外侧板附近。处理桥静脉后可将颞叶抬起,解剖颈动脉池、脚间池、环池等脑池,可进一步抬起颞叶,如暴露仍欠佳,可切除部分颞叶。 此入路适合上岩斜区向外上发展,或突入颞下窝的病变。病变须较局限,如较大,则须使用联合入路。 4 小结 手术入路的选择是神经外科手术的重要组成部分,也是手术成功与否的决定性因素之一。在处理岩斜区病变时,手术入路的选择则显得更加重要。在选择手术入路时主要考虑以下 几点:(1)肿瘤的大小、部位及受累及的区域;(2)颅底骨质的改变;(3)脑干受压的程度、方向;(4)基底动脉与肿瘤的位置关系; (5)肿瘤的供血来源及静脉回流以及瘤周水肿;(6)术前神经功 能缺失的程度;(7)患者的年龄和一般状况;(8)术者的经验和对手术的认识程度。术前对影像学资料的精确分析可以提供预测岩斜区肿瘤的危险程度的重要信息,帮助神经外科医师估计手术风险。 参考文献 1 Y https://www.wendangku.net/doc/f85355591.html,teral suboccipital approach for vertebal and verebrobasilar lesions. Neurosurgery ,1986,64:5592562.2 Lorenz o ND.T rans oral approach to extradural lesions of the lower clivus and upper cervical spine :An experience of 19cases.Neurosurgery ,1989,24:37243. 3 Babu RP ,Sekhar LN ,Wright DC.Extreme lateral transcondylar approach : tethnical im provements and less ons earned.Neurosurgery ,1994,81:49259.4 Hakuba TR ,Sen CN ,Sekhar LN.Surgical management of anterionly placed lesions at the cranio 2cervical junction an alternative approach.Acta Neurochir ,1991,108:70277.5 Sam ii M ,G eorge B ,Demalons https://www.wendangku.net/doc/f85355591.html,teral approach to the anterior portion of the foramen magnum.Surg Neurol ,1998,29:484. 6 Sen N ,Carvalho C.Surgical results for meningiomas of the cranio 2cervical junction.Neurosurgery ,1998,39:108621087.7 S pektor S ,Aanclers on C J.Quantitative description of the far lateral transcon 2dylar and transtubercular approach to the clivus.Neurosurgery ,2000,92:824.8 W en HT ,Rhoton A L ,K alsnla T ,et al.M icrosurgical anatomy of the transcon 2dylar ,supercondylar ,and paracondylar extension of the far lateral approah. Neurosurgery ,1997,22:5552557.9 Salas E.Sekhar LS.Z ival LV.Variations of the far lateral transcondylar and transtubercular approach :anatom ical and clinical analysis of 69patients.Neurosurgery ,1999,90:2062219. (收稿日期:2006-08-29) ?综述与讲座? 基质金属蛋白酶在皮肤病中的研究进展 蔡丽 丁政云 作者单位:050011 石家庄市,河北医科大学第四医院皮肤科 基质金属蛋白酶(M MP )是一族锌依赖性内肽酶,可降解细胞外基质中各种蛋白成分,基质金属蛋白酶抑制剂(TI MP )能特异性抑制其活性。基质金属蛋白酶及其抑制剂是细胞外基质合成及代谢平衡中两个重要的酶系,参与多种与细胞外基质蛋白水解重塑有关的生理过程,如组织发生、组织修复、血管形成等,二者表达的失衡与类风湿性关节炎、骨性关节炎、慢性溃疡、皮肤老化、牙周炎以及肿瘤细胞侵袭转移有关[1]。近来研究表明,M MP 及其抑制剂与多种皮肤病发病有密切关系。 1 M MP 简述1.1 M MP 的结构 [2] M MP 是一类含有锌离子,活性依赖于钙 离子的蛋白酶,有下列基本结构。(1)信号肽与前肽区:信号肽 位于N -末端,其作用是引导翻译后的产物至胞浆内质网。前肽区内含有保守的PRCG V ΠNPD 序列,其中保守的半胱氨酸在大 多数M MP 酶原活化中有重要作用。(2)催化区:催化区中存在两个锌离子结合区和至少一个钙离子结合区。两个锌离子结合区中,一个位于活性中心内,涉及M MP 的催化过程,称为催化性锌离子;另一个为结构性锌离子。催化区有三个保守的组氨酸残基,是催化性锌离子结合的位点。(3)铰链区与类血红素蛋白结合区:铰链区位于催化区与类血红素蛋白区之间,以二硫键与类血红素结合蛋白区末端氨基酸残基相连。类血红素结合蛋白区含有4个重复序列,与血红素结合蛋白及玻璃粘连蛋白有较弱的同源性。此区的作用认为与大多数M MP 底物特异性有关,同时在M MP 与TI MP 结合中有重要作用。(4)跨膜区:此区存在于膜型基质金属蛋白酶(MT 2M MP )中,有将其固定于细胞膜上的作用。
基质金属蛋白酶
基质金属蛋白酶 【关键词】肠肿瘤；基质金属蛋白酶；肿瘤坏死因子受体 Effects of matrix metalloproteinase9 on the expression of tumor necrosis factor receptorl in human colon carcinoma cell lines 【Abstract】 AIM: To study the effects of matrix metalloproteinase9 (MMP9) on the expression of tumor necrosis factor receptorl (TNFRl) and migratory and invasive potentials in human colon carcinoma cells. METHODS: Immunofluorescence staining was applied to examine the expression of TNFRl in SW1116 in human colon carcinoma cell lines. The expression of TNFRl was assayed by flow cytometry in human colon carcinoma SW1116 cells treated with iMMP9 at different concentrations and at different time periods of culture. RESULTS: TNFRl was expressed in SW1116 cells and MMP9 downregulated the expression of TNFRl on cell surface in a dose and timedependent manner. CONCLUSION: MMP9 decreases the expression of TNFRl on the surface of human colon carcinoma cells, which may be a factor associated with invasive and metastasis potentials of colon carcinoma. 【Keywords】 intestinal neoplasms; matrix metalloproteinase; TNFR 【摘要】目的：研究基质金属蛋白酶9 (MMP9)对大肠癌细胞肿瘤坏死 因子受体1 (TNFRl)表达的影响以及促进大肠癌侵袭和转移的可能途径.方法: 通过免疫荧光法研究TNFRl在大肠癌细胞SW1116中的表达；用MMP9干预培养