ABO血型鉴定正反定型试验方法

ABO血型鉴定正反定型试验方法

一、试剂和材料：

（一）单克隆抗A、抗B试剂（由试剂厂家提供）

（二）显微镜、载玻片

（三）A型、B型红细胞（本实验室制备的5%混悬液）

（四）EDTA抗凝的待测红细胞全血

（五）竹签

二、方法（玻片法）：

（一）正定型：

1.在一块干净的玻片上，间隔一定距离做好标记，分别滴一滴抗A和抗B试剂；

2.在每滴试剂中加一滴待测红细胞全血；

3.用竹签混匀试剂和红细胞，并使混合物直径＞15mm；

4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察；

5.判读、解释并记录反应结果。

（二）反定型：

1.在玻片上间隔一定距离标明Ac和Bc字样。分别滴加5%的A型红细胞悬液、B型红细胞悬液各一滴；

2.在玻片每滴红细胞悬液上滴加待测血清各一滴；

3.混匀（同正定型）；

4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察；

5.判读、解释并记录反应结果。

6.结合正反定型反应结果、判定血型，见表1

表1 ABO血型正反定型试验结果判定

正定型反定型

血型抗体试剂+红细胞标本红细胞试剂+血清标本

抗A 抗B A细胞B细胞

+ O O + A

O + + O B

O O + + O

+ + O O AB

三、附注：

（一）表中“O”表示无凝集，“+”表示凝集，一般都是3-4个+的强凝集反应；

（二）2分钟后红细胞仍呈均匀混悬状态是阴性反应；

（三）若得到弱的或可凝集反应结果，该标本应用试管法重新试验；

（四）由于新生儿在出生4~6个月内，血浆中的ABO抗体活动太弱，并且含有来自母亲的抗体，故新生儿血型只能由检测红细胞抗原的正定型来测定其ABO血型；

（五）做正定型时，还可加一抗A、B血清（O型人血清），以检测ABO弱抗原；做反定型时可以加试一O型红细胞，借以证实是否有不规则抗体的存在。

ABO血型正反定型不符与交叉配血不合的原因及其处理方法_杨世明

论著 文章编号:1007-8738(2011)07-0812-02 ABO 血型正反定型不符与交叉配血不合的原因及其处理方法 杨世明*,张勇萍,田 榆,徐 宁,王文婷(第四军医大学唐都医院输血科,陕西西安710038) 收稿日期:2011-01-18; 接受日期:2011-04-28 作者简介:杨世明(1955-),男(苗族),湖北宣恩人,副主任技师 T e:l 029-********;E-m ai:l s hxkysh m@f m https://www.wendangku.net/doc/f46205073.html, .cn *Correspond i ng au t hor [摘要] 目的:探讨引起患者ABO 血型正反定型不符与交叉配血不合的原因及其处理方法,确保输血安全。方法:应用血型血清学检测方法对A BO 血型正反定型不符及交叉配血不合的血标本进行正反定型、不规则抗体筛选及特异性鉴定、吸收放散试验、唾液血型物质测定等系列检测,分析引起血型正反定型不符及交叉配血不合的原因,为患者选择同型及交叉配血相合的血液进行输注。结果:在输血前的血型血清学检测中发现ABO 血型正反定型不符及交叉配血不合的血标本468例,其中自身冷抗体132例(28.2%),血型不规则抗体96例(20.5%),血型抗原性减弱68例(14.5%),血型抗体效价减弱60例(12.8%),自身抗体阳性54例(11.5%),血浆蛋白异常18例(3.8%),实验方法学原因16例(3.4%),ABO 血型不合的干细胞移植13例(2.8%),肝素影响9例(1.9%),血标本污染2例(0.4%)。结论:ABO 血型正反定型不符及交叉配血不合的原因大多数是由自身抗体,不规则抗体,血型抗原抗体减弱及血浆蛋白异常等引起的。因此对ABO 血型正反定型不符及交叉配血不合的血标本,应采用多种血型血清学检测方法进行互相验证,以保证血型鉴定及交叉配血无误,确保临床输血安全。[关键词]血型鉴定;抗体鉴定;交叉配血;输血安全[中图分类号]R 457.1 [文献标识码]B ABO 血型是临床输血和器官移植中最重要的血型系统,在输血前的血型血清学检测中,准确地进行ABO 血型鉴定、不规则抗体筛选及交叉配血试验, 为患者选择不含相应抗原的血液进行输注,是确保临床输血安全和有效的重要措施。但在输血前的血型血清学检测中,常出现AB O 血型正反定型不符及交叉配血不合的现象。如果误定患者或供血者的ABO 血型,交叉配血未及时发现有临床意义的血型不规则抗体,误输异型血,就会严重威胁患者的生命安全。现将468例ABO 血型正反定型不符及交叉配血不合的原因进行分析,并对其处理方法及输血对策进行探讨。1 材料和方法 1.1 材料 1.1.1 标本来源 2000-01/2010-10期间在我院住院及门诊 的患者。进行血型血清学检测中,出现血型正反定型不符及交叉配血不合患者468例,男213例,女255例,年龄2d~82岁。1.1.2 试剂仪器 抗A 、抗B 、抗A +B 、抗H 、抗A 1、抗D 、抗C 、抗c 、抗E 、抗e 血型定型试剂、抗人球蛋白试剂、不规则抗体筛选细胞及谱细胞均由上海血液生物医药有限责任公司提供,反定型红细胞悬液由长春博德生物制品研究所提供(部分由本实验室制备),凝聚胺配血试剂由珠海贝索生物技术有限公司提供,微柱凝胶卡、专用离心机、37 孵育器及其配套试剂由达亚美公司提供。 1.2 方法 用微柱凝胶法进行A BO 正反定型及R h 血型鉴定;用凝聚胺法和微柱凝胶法进行血型不规则抗体筛选及特异性鉴定;吸收放散试验及唾液血型物质测定按参考文献[1]操作;用2-M e 处理被患者自身冷抗体凝集的红细胞;用氯喹放散法检测自身抗体掩盖的同种抗体。 2 结果 通过对468例患者血标本进行ABO 正反定型、吸收放散试验、唾液血型物质测定、抗人球蛋白试验、血型不规则抗体筛选及其特异性鉴定等,发现造成ABO 血型正反定型不符及交叉配血不合的主要原因有:自身冷抗体132例(28.2%),血型不规则抗体96例(20.5%),血型抗原性减弱68例(14.5%),血型抗体效价减弱60例(12.8%),自身抗体阳性54例(11.5%),血浆蛋白异常18例(3.8%),实验方法学原因16例(3.4%),A B O 血型不合的干细胞移植13例(2.8%),肝素影响9例(1.9%),血标本细菌污染2例(0.4%)。 3 讨论 AB O 血型鉴定和交叉配血可受多种因素的干 扰,引起正反定型不符或交叉配血不合。在进行AB O 血型鉴定和交叉配血时,如果发现正反定型不符及交叉配血不合,应重新抽取血标本并使用质量合格的检测试剂重做一次试验,在排除人为因素和技术原因以后,根据具体情况进行综合分析。本研究通过正反定型、吸收放散试验、唾液血型物质测定、血型不规则抗体筛选及其特异性鉴定,并在正定型时加做抗AB 、抗A1和抗H 试剂,反定型时加做A1型细胞、A 2型细胞、O 型细胞及自身对照,排除AB O 亚型的干扰,同时在4 、22 及37 孵育,结果表明引起AB O 血型正反定型不符及交叉配血不合的主要原因有:自身冷抗体132例(28.2%),血型不规则抗体96例(20.5%),血型抗原性减弱68例(14.5%),血型抗体效价减弱60例(12.8%),自身

ABO血型鉴定正反定型试验方法

A B O血型鉴定正反定型 试验方法 This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020

ABO血型鉴定正反定型试验方法 一、试剂和材料： （一）单克隆抗A、抗B试剂（由试剂厂家提供） （二）显微镜、载玻片 （三）A型、B型红细胞（本实验室制备的5%混悬液） （四）EDTA抗凝的待测红细胞全血 （五）竹签 二、方法（玻片法）： （一）正定型： 1.在一块干净的玻片上，间隔一定距离做好标记，分别滴一滴抗A和抗B试剂； 2.在每滴试剂中加一滴待测红细胞全血； 3.用竹签混匀试剂和红细胞，并使混合物直径＞15mm； 4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察； 5.判读、解释并记录反应结果。 （二）反定型： 1.在玻片上间隔一定距离标明Ac和Bc字样。分别滴加5%的A型红细胞悬液、B型红细胞悬液各一滴；

2.在玻片每滴红细胞悬液上滴加待测血清各一滴； 3.混匀（同正定型）； 4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察； 5.判读、解释并记录反应结果。 6.结合正反定型反应结果、判定血型，见表1 表1 ABO血型正反定型试验结果判定 三、附注： （一）表中“O”表示无凝集，“+”表示凝集，一般都是3-4个+的强凝集反应；（二）2分钟后红细胞仍呈均匀混悬状态是阴性反应；

（三）若得到弱的或可凝集反应结果，该标本应用试管法重新试验； （四）由于新生儿在出生4~6个月内，血浆中的ABO抗体活动太弱，并且含有来自母亲的抗体，故新生儿血型只能由检测红细胞抗原的正定型来测定其ABO血型； （五）做正定型时，还可加一抗A、B血清（O型人血清），以检测ABO弱抗原；做反定型时可以加试一O型红细胞，借以证实是否有不规则抗体的存在。

ABO血型鉴定正反定型试验方法

A B O血型鉴定正反定 型试验方法 标准化管理处编码[BBX968T-XBB8968-NNJ668-MM9N]

ABO血型鉴定正反定型试验方法 一、试剂和材料： （一）单克隆抗A、抗B试剂（由试剂厂家提供） （二）显微镜、载玻片 （三）A型、B型红细胞（本实验室制备的5%混悬液） （四）EDTA抗凝的待测红细胞全血 （五）竹签 二、方法（玻片法）： （一）正定型： 1.在一块干净的玻片上，间隔一定距离做好标记，分别滴一滴抗A和抗B试剂； 2.在每滴试剂中加一滴待测红细胞全血； 3.用竹签混匀试剂和红细胞，并使混合物直径＞15mm； 4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察； 5.判读、解释并记录反应结果。 （二）反定型： 1.在玻片上间隔一定距离标明Ac和Bc字样。分别滴加5%的A型红细胞悬液、B型红细胞悬液各一滴；

2.在玻片每滴红细胞悬液上滴加待测血清各一滴； 3.混匀（同正定型）； 4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察； 5.判读、解释并记录反应结果。 6.结合正反定型反应结果、判定血型，见表1 表1 ABO血型正反定型试验结果判定 三、附注： （一）表中“O”表示无凝集，“+”表示凝集，一般都是3-4个+的强凝集反应；（二）2分钟后红细胞仍呈均匀混悬状态是阴性反应；

（三）若得到弱的或可凝集反应结果，该标本应用试管法重新试验； （四）由于新生儿在出生4~6个月内，血浆中的ABO抗体活动太弱，并且含有来自母亲的抗体，故新生儿血型只能由检测红细胞抗原的正定型来测定其ABO血型； （五）做正定型时，还可加一抗A、B血清（O型人血清），以检测ABO弱抗原；做反定型时可以加试一O型红细胞，借以证实是否有不规则抗体的存在。

ABO血型正反定型

ABO血型正、反定型操作规程 [目的] 保证ABO血型鉴定准确，确保临床输血安全。 [适用范围] XXX医院输血科 [职责] 具有专业技术的工作人员主要负责本院输血（或备血）标本的ABO血型鉴定（但只对该单份标本负责）。 [相关文件] 试剂采购、保存和使用管理程序 设备采购、使用管理程序 消毒与清洁管理程序 标本采集、运输、保存和报废管理程序 紧急用血管理程序 [相关记录] 仪器设备的采购、使用和维护记录 仪器的温度记录 恒温水温箱的换水和消毒记录 消毒液的配置记录 清洁消毒记录 试剂采购、使用记录 标本交接和报废记录 紧急用血记录 [实验原理] ABO血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。存在A凝集原的称为A型，存在B凝集原的称为B型。而血清中还存在凝集素。当A凝集原与抗A凝集素相遇或B凝集原与抗B凝集素相遇时，会发生红细胞凝集反应。一般A型血清中含有抗B凝集素，B型血清中含有抗A凝集素，因此可以用标准血清中的凝集素与被测者的红细胞反应（称为正定型），用标准红细胞与被测者血清中的凝集素反应（称为反定型），以确定其ABO血型。 [仪器器械] 玻璃试管、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、普通离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。 [试剂] 抗A标准血清、抗B标准血清、A型标准红细胞、B型标准红细胞、O型标准红细胞、生理盐水。以上试剂均为有合格证件的正品。 [标本收集与处理] 1．受检者血清：采集受检者静脉血2~3ml，经1000r/min离心1分钟或室温静置1小时后取上清。 2．2~5%的受检者红细胞：采集受检者静脉血或末梢血，用生理盐水制成2~5％红细胞盐水悬液备用，制备方法见本节质量控制和注意事项。 3．标本出现中度以上溶血者，为不合格标本，不能用于检测。 [实验方法与步骤] 1.ABO血型的正定型（试管法）：

ABO血型鉴定正反定型不符原因分析

【摘要】目的分析临床常见的abo血型正反定型不符的原因及解决方法。方法应用正反定型、吸收放散试验和唾液血型物质测定试验检测abo血型正反定型不符的标本，分析正反定型不符原因，进行正确的分型。结果共出检abo血型正反定型不符标本18例，其中冷自身抗体8例；血浆成分异常4例；亚型2例；ab抗原减弱2例；抗体减弱或缺失1例；同种抗体1例子。结论对abo血型正反定型不符的标本，应采用正确方法鉴定abo血型，从而确保临床输血安全。 【关键词】 abo血型；正反定型不符；原因分析 doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2014.03.733 文章编号：1004-7484（2014）-03-1767-02 血型鉴定及鉴定结果的可靠性对临床安全输血具有至关重要的作用，正确的血型鉴定是临床安全输血的关键，而错误血型的血液一旦输入，则直接危及患者生命安全。但在临床实际工作中，常出现abo血型不符的现象，本文对我院2010年8月至2013年8月鉴定abo血型正反定型不符的标本18例进行分析报告如下： 1 资料与方法 1.1 一般资料我院2010年8月?2013年8月门诊及住院鉴定血型患者标本，其中abo 血型正反定型不符的有18例。 1.2 试剂抗a、抗b、抗ab、抗h、抗a1血清，红细胞ac、bc、oc、a1c、a2c（由长春博德生物制品研究所）；不规则抗体筛查红细胞及谱细胞（上海血液生物医药有限公司）。 1.3 方法血型正反定型（试管法、微柱凝胶法）、吸收放散试验、abo型认定试验、抗人球蛋白试验、抗体鉴定试验、唾液血型物质测定试验。以上试验均按规范进行操作。 2 结果 通过对18例血样标本进行abo正反定型、吸收放散试验、抗体鉴定试验、抗人球试验、唾液血型物质测定等试验，发现造成abo型正反定型不符的原因主要为冷自身抗体8例，其它原因有血浆成分异常4例，血型亚型2例，ab抗原性减弱2例，抗体缺失及减弱1例，同种抗体1例。 3 讨论 在鉴定abo血型时，如果发现正反定型不符，首先严格按照操作规程重新试验，排除人为操作失误、试剂因素后综合分析原因并应用正确的方法解决出现的问题。abo血型正反定型不符的常见原因如下。 3.1 冷自身抗体本组例中标本8例。冷自身抗体是引起正反定型不符的最常见原因。一般健康人血清中含有少量的冷凝集素，且效价很低，一般在1：16以下，冷凝集素是红细胞自身免疫抗体，以igm形式存在于血清中，其效价大于1：64凝集素的患者，能使血型鉴定受到干扰。在进行正定型时，误定a、b、o型为ab型，在反定型时，容易把a、b、ab型误定为o型。冷凝集素属冷反应的自身抗体，其特点是在较低的温度下能使患者自身的红细胞凝集，在体外最适的反应温度为4-27℃，4℃时反应最强，37℃时冷凝集消失。冷抗体效价不超过1：16时，一般不会发生凝集，但某些疾病如支原体肺炎、传染性单核细胞增多症、病毒性肺炎、再生障碍性贫血恶性变、自身免疫性溶血性贫血、红斑狼疮等可引起高效价的冷凝集素，因此，对有高效价凝集素的患者，可将红细胞和血清分别放在37℃预温，并在此条件下进行血型鉴定，对于自身红细胞已凝集的情况，进行血型鉴定时必须用37℃生理盐水反复洗涤红细胞，用洗涤后的红细胞反复吸收血清中的冷凝集素，使血清中自身的冷凝集素消失，再进行血型鉴定。在冷自身抗体效价太高，血样标本已凝固的情况下，可用巯基乙醇处理红细胞再进行abo正定型试验[1]。 3.2 血浆成分异常本组例中标本有4例，某些肝病、多发性骨髓瘤等疾病的患者存在大

ABO血型鉴定中正反定型不符的原因及对策分析

ABO血型鉴定中正反定型不符的原因及对策分析 摘要：目的：探讨在实施ABO血型鉴定期间导致呈现出正反定型不符原因并研 究具体干预对策。方法：将我院2017年05月～2020年01月收治的40例ABO 血型正反定型不符患者作为实验对象；就正反定型不符原因进行分析，并研究具 体的干预对策。结果：针对ABO血型鉴定患者表现出正反定型不符原因进行分析，主要集中于冷自身抗体干扰、不规则冷抗体干扰以及抗体减弱几方面，对此通过 研究有效干预对策给予对应干预，可获得显著干预效果。结论：针对患者在实施ABO血型鉴定期间，需要依据患者表现型具体情况以及临床资料，合理展开血清 学试验操作，以确保对于ABO血型正反定型不符原因能够充分了解以及掌握，并 且对应完成解决方法的创建，以对血型检查安全性以及准确性做出充分保证，为 患者早期确诊以及治疗方法的快速、有效研究做出充分准备。 关键词：ABO血型鉴定；正反定型不符；原因；对策 针对患者在进行治疗期间，需要对患者临床输血安全性做出充分保证，对此积极展开ABO 血型鉴定工作意义显著[1]。具体在实施ABO血型鉴定期间，往往因为系列因素的影响最终使 得患者红细胞以及血型抗体表面呈现出血型抗原变化的现象，对应表现出ABO血型正反定型 不符的现象[2]。当前针对此种情况需要就具体诱发原因加以充分了解以及掌握，对应完成解 决办法的创建，以使得ABO血型正反定型不符现象获得充分减少，对患者临床诊治效果做出 充分保证。 1、资料与方法 1.1 一般资料 将我院2017年05月～2020年01月收治的40例ABO血型正反定型不符患者作为实验 对象：女26例，男14例；年龄区间为55岁～89岁，平均为（65.25±2.35）岁；纳入标准：①患者均能够配合完成本次实验研究；②对于沟通以及交流工作均可以顺利展开；排除标准：①实验期间呈现出强烈不配合现象；②短期内接受过其他实验研究。 1.2 方法 针对此次研究主要利用贝索离心机完成，水浴恒温箱分别控制为37℃以及56℃。此外，合理进行ABO反定型试剂、抗B试剂以及抗A试剂等选择。针对所有患者血型合理采用试管 法完成鉴定工作，针对不规则抗体主要利用盐水试管法以及抗人球蛋白试管法完成筛查工作。依据试剂盒具体说明合理完成不规则抗体特异性鉴定工作，针对对照谱细胞格局之间合理完 成对比，从而对特异性抗体种类进行有效明确。之后针对完成标化的抗A血清、抗H血清以 及抗B血清，于抗血清以及等量唾液中合理完成中和处理操作，＞10min，准备对应量红细 胞合理加入，对混合均匀性做出保证后，合理展开孵育（30min，在室温条件下展开），利 用离心方法针对获得结果展开对应观察，最终确保血型物质于唾液中有效获得。 2、结果 针对ABO血型鉴定患者表现出正反定型不符原因进行分析，主要集中于冷自身抗体干扰、不规则冷抗体干扰以及抗体减弱几方面，对此通过研究有效干预对策给予对应干预，可获得 显著干预效果。

ABO血型正定型标准操作规程

ABO血型正定型标准操作规程 一．目的：规范ABO血型正反定型的操作。 二．适用范围：适用于ABO血型正反定型。 三．支持性文件：全国临床检验操作规程第二版。 四．原理：根据红细胞上有或无A抗原或／和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型。可利用红细胞凝集试验，通过正反定型准确鉴定ABO血型。 所谓正定型，是用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A 抗原或／和B抗原； 五．仪器：离心机。 六．试剂： 1．抗A、抗B分型血清；定期进行效价滴定,以保分型血清质量性能符合要 求。抗A：1∶128，抗B：1∶128。 七．样本要求： 1．红细胞可用针刺手指采血，并直接用生理盐水稀释制成5%红细胞悬液； 也可静脉采血，用1∶9枸橼酸钠抗凝．。 2．血清取静脉血将血液沿管壁慢慢注入干燥试管中，待自然凝固后用玻璃棒轻轻搅动血块，使之与试管壁分离。或置37℃水浴1小时，使血块收缩 离心分离血清。 八．操作步骤： 1．取洁净小试管3支，分别标明抗Ａ．抗Ｂ和抗A＋B，用滴管分别加抗Ａ．抗B和抗A＋B分型血清各1滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5% 红细胞悬液1滴，混合。 2．另取洁净小试管3支，分别标明A、B和O细胞；用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5%试剂红细胞悬 液1滴，混合。 3．用离心机以1000r／min离心1分钟；或3400r/10秒。 4．将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（溶血）现象。如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。 5．观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型； 类B或cisAB的发现。 6．凝集强度判断标准： 4＋＝红细胞凝集成一大块，血清清晰透明 1．观察结果时不可用力振摇； 2．严格按规程操作，避免操作失误，以免重新试验浪费时间和试剂； 3．试验结束后，试剂置2-6℃冰箱保存，以免试剂中的免疫球蛋白变质

ABO-Rh正反定型血型定型操作规程

ABO-Rh正反定型血型定型操作规程 一、项目名称、检验方法名称 1．项目名称：ABO-Rh正反定型血型定型 2．检验方法名称：柱凝集 二、方法学原理 该试剂卡是基于柱凝集的原理而设计。正常具有抗原的人红细胞将与相应的抗体发生凝集反应，BioVue血型诊断试剂卡的微柱中含有玻璃珠介质和试剂。加入红细胞并将试剂卡离心后，发生凝集的红细胞会被阻挡在玻璃珠的上面，而未凝集的游离红细胞则会在离心力的作用下通过玻璃珠之间的间隙到达微柱的底部。 三、试剂卡品牌、代号、包装规格、内含物 1．试剂卡品牌：美国强生奥索(Ortho-Clinical Diagnostica,Inc) 2．代号：BioVue -ABO/Rh-Reverse 3．包装规格： 400卡/箱试剂卡（707100）；100卡/箱试剂卡（707155） 4．试剂成分： BioVue ABO-Rh正反定型血型诊断试剂卡有6根微柱组成，每一柱中含有缓冲液，其成分为牛血清蛋白，大分子增强剂以及0.1％叠氮钠，0.01M的EDTA. 成分描述 第一柱：抗－A试剂抗－A鼠单克隆(lgM)抗体混和；蓝色染料第二柱：抗－B试剂抗－B鼠单克隆(lgM)抗体混和；黄色染料第三柱：抗－D试剂（抗RH）抗－D人单克隆(lgM)抗体 第四柱：质控优化增强剂，用于血型检测的质控对照 第五，第六柱：反定型稀释液优化增强剂，用于反定型血型检测 5．试剂的储存与效期： 储存条件： 2～25℃环境中保存。请勿将试剂存放在自动除霜的冰箱中，也不要冷冻保存。并且不要放在离热源（如孵育箱、辐射器、大型设备、冰箱、冰柜等）很近或阳光直射的地方。 效期：试剂盒上有记载 四、仪器品牌、型号 BioVue专用离心机；BioVue专用孵育器 五、样本的采集与准备： 在采集标本前对病人/献血者无特殊要求，血液采集应符合相关的技术标准及管理规范。含有或不含有抗凝剂的标本均可使用。 标本采集后应尽快进行检测。如果实验不能立即进行，应将标本置于2－8℃保存。已凝集的标本以及用EDTA、肝素或柠檬酸盐抗凝的标本应在7天内检测。献血员标本应在其效期内检测。 采集自脐带血的红细胞应确保没有污染。如怀疑样品污染需用生理盐水洗涤。 抗凝全血标本以900－1000g离心5分钟，即可得到浓度约为80％的浓缩红细胞。 1ml生理盐水＋40ul浓缩红细胞即配制成3％的红细胞悬液。 或 1ml生理盐水＋10ul浓缩红细胞即配制成0.8％的红细胞悬液。 六、试剂准备： BioVue ABO-Rh正反定型血型诊断试剂卡应在铝箔开启后一小时内使用。请勿使用液面在玻璃珠以下的试剂卡。

ABO血型鉴定正反定型试验方法

A B O血型鉴定正反定型试 验方法 The latest revision on November 22, 2020

A B O血型鉴定正反定型试验方法 一、试剂和材料： （一）单克隆抗A、抗B试剂（由试剂厂家提供） （二）显微镜、载玻片 （三）A型、B型红细胞（本实验室制备的5%混悬液） （四）EDTA抗凝的待测红细胞全血 （五）竹签 二、方法（玻片法）： （一）正定型： 1.在一块干净的玻片上，间隔一定距离做好标记，分别滴一滴抗A和抗B试剂； 2.在每滴试剂中加一滴待测红细胞全血； 3.用竹签混匀试剂和红细胞，并使混合物直径＞15mm； 4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察； 5.判读、解释并记录反应结果。 （二）反定型： 1.在玻片上间隔一定距离标明Ac和Bc字样。分别滴加5%的A型红细胞悬液、B型红细胞悬液各一滴； 2.在玻片每滴红细胞悬液上滴加待测血清各一滴； 3.混匀（同正定型）； 4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察； 5.判读、解释并记录反应结果。 6.结合正反定型反应结果、判定血型，见表1 （一）表中“O”表示无凝集，“+”表示凝集，一般都是3-4个+的强凝集反应； （二）2分钟后红细胞仍呈均匀混悬状态是阴性反应； （三）若得到弱的或可凝集反应结果，该标本应用试管法重新试验； （四）由于新生儿在出生4~6个月内，血浆中的ABO抗体活动太弱，并且含有来自母亲的抗体，故新生儿血型只能由检测红细胞抗原的正定型来测定其ABO血型； （五）做正定型时，还可加一抗A、B血清（O型人血清），以检测ABO弱抗原；做反定型时可以加试一O型红细胞，借以证实是否有不规则抗体的存在。