人参皂甙Rh2诱导人肝癌Bel7404细胞凋亡的作用

人参皂甙-Rh 2诱导人肝癌Bel -7404细胞凋亡的作用

樊光华　姜　浩　欧文胜

作者单位:330029江西省肿瘤医院(樊光华),421001南华大学第一附属医院(姜　浩),423000郴州医专附属医院(欧文胜)

【摘要】　目的　研究人参皂甙-Rh2(GS -Rh 2)诱导肝癌Bel -7404细胞凋亡的作用。方法　应用流式细胞术检测GS -Rh 2对肝癌Bel -7404细胞凋亡的诱导作用以及对细胞周期的影响。结果　流式细胞术证实GS -Rh 2具有诱导凋亡作用,细胞凋亡率

(AR )随GS -Rh 2浓度增高和作用时间延长而升高,当GS -Rh 2浓度由12.5μg/ml 增至50.0μg/ml 时,AR 由16.2%升高至27.5%,但GS -Rh 2浓度由50.0μg/ml 进一步增至100.0μg/ml 后,AR 未见相应升高;GS -Rh 2可将细胞周期阻滞于G 1期。结

论　GS -Rh 2能诱导体外培养的Bel -7404细胞凋亡;GS -Rh 2诱导Bel -7404细胞凋亡可能与细胞周期阻滞有关。

【关键词】　人参皂甙-Rh 2;肝肿瘤;凋亡

中图分类号:R735.7 文献标识码:A 文章编号:100125930(2003)0120016203

The Effect of Ginsenoside 2Rh 2in Induction of Apoptosis on Bel 27404Cell L ine

FA N Guang 2hua ,J IA N G Hao ,O U W en 2sheng.　Jiangx i Provi nce T u m or Hospital ,N anchang ,330029

【Abstract 】　Objective To explore t he effect of ginsenoside 2Rh 2(GS 2Rh2)in induction of apoptosis on Bel 27404human hep 2

atoma cell line.Methods The apoptosis rate of Bel 27404cells and its cell cycle analyzation was determined by flow cytometry (FCM ).R esults GS 2Rh 2induced apoptosis on Bel 27404cell line in a dose 2and time 2dependent manner ,When t he concentration of GS 2Rh 2was increased f rom 12.5μg/ml to 50.0μg/ml ,t he apoptosis rate (AR )of Bel 27404cell line elevated f rom 16.2%to 27.5%accordingly ;but when t he concentration of GS 2Rh 2was increased up to 100μg/ml ,t he AR no longer rose ;GS 2Rh 2was capable of ar 2resting t he cell cycle at G 1phase.Conclusions :GS 2Rh 2could induce apoptosis on Bel 27404cell line in vitro ;Apoptosis of Bel 27404cells induced by GS 2Rh 2may be related to arresting cell cycle at G 1phase.

【K ey words 】　GS 2Rh 2(ginsenoside 2Rh 2);Liver neoplasm ;Apoptosis

(T he Practical Jou rnal of Cancer ,2003,18:016～018)

近年来的研究发现,我国的名贵中药人参具有抗癌活性,其主要活性成分人参皂甙(ginsenoside ,GS )能诱导细胞分化和凋亡而发挥抗肿瘤作用[1,2]。人参皂甙单体-Rh 2(ginsenoside 2Rh 2,GS 2Rh 2)是1种原人参三醇型皂甙,是红参的主要抗癌成分。本实验以人肝癌Bel -7404细胞株为受试对象,研究GS -Rh 2的诱导凋亡作用,旨在进一步阐明中药人参抗肿瘤作用的机理,为将其应用于肿瘤的临床治疗提供更多的实验依据。1　材料与方法

1.1　实验材料与主要仪器

人肝癌Bel -7404细胞株:由中国科学院细胞生

物研究所引入,我院临床医学研究所传代培养。人参皂甙-Rh 2购自中国科学院生物制品研究所,溶于PBS (p H 7.4)中配成50mg/ml 母液,超滤除菌,-20℃保存;R PM I -1640培养基为美国G ibco 公司产品;小牛血清(FBS )为杭州四季青生物工程公司产

品;酶联免疫检测仪由第四军医大学与国营华东电子管厂联合研制,型号为D G3022;流式细胞仪型号为Beckerman Coulter EP ICS -XL 。1.2　实验方法

1.2.1　细胞培养　Bel -7404细胞用含10%小牛血

清的培养液(含100IU/ml 青霉素和0.1mg/ml 链霉

素),于37℃、5%CO 2恒温培养箱中培养,细胞呈单层生长,达80%左右时传代。

1.2.2　药物处理　细胞传代后,接种于24孔培养板

内,当细胞50%～60%融合贴壁良好时,换用含有不同浓度GS -Rh 2的培养液。培养至预定时间后进行观测,分别探讨GS -Rh 2诱导凋亡的量效关系及时效关系。

1.2.3　GS -Rh 2诱导凋亡的量效关系及细胞周期分

析　根据前期实验结果,我们将GS -Rh 2共设立5个浓度组,即a 、b 、c 、d 、e 5组,浓度分别为0、12.5、25.0、

50.0、100.0μg/ml ,培养24h 后分别收集各组细胞,然后通过流式细胞仪检测,探讨GS -Rh 2诱导凋亡的量效关系并分析细胞周期。

1.2.4　GS -Rh 2诱导凋亡的时效关系　根据我们既

往采用M T T法检测GS-Rh2对Bel-7404细胞的生长抑制作用的结果,其半数抑制浓度(IC50)为23.7μg/ml,故我们选取25.0μg/ml(IC50的近似值)GS -Rh2分别作用0、12、24、48h后,检测凋亡率。

1.2.5　凋亡细胞的检测　分别收集各组细胞,每组约1×106个,4℃PBS洗2次(p H7.2),500r/min,8 min,离心去上清,然后加1.5ml70%乙醇重悬并固定细胞。经一系列处理后,上机检测,每组计数10000个细胞,检测凋亡细胞,其中凋亡细胞所占比例即为凋亡率(AR);并分析处于不同周期的细胞比例。详细方法见参考文献[3,4]。

1.3　统计学处理

不同组间凋亡率比较采用χ2检验,P<0.05为有显著性差异。

2　结果

2.1　GS-Rh2诱导Bel-7404细胞凋亡的量效关系与时效关系

采用流式细胞仪检测凋亡细胞,各处理组凋亡率见表1、表2。

表1　不同浓度GS-Rh2作用下

Bel-7404细胞的凋亡率(%)

组别凋亡率P

a 3.5(3490/10000)

b10.2(1015/10000) <0.013

c21.5(2150/10000)<0.013

d27.5(2753/10000)<0.013#

e27.9(2791/10000)<0.013#

3为与a组比较;#为d、e两组比较,P>0.05

由表1可见,细胞凋亡率(AR)随药物浓度增高而递增,但50.0μg/ml与100.0μg/ml组AR无显著性差异。

表2　GS-Rh2诱导Bel-7404细胞凋亡的时效关系

作用时间(h)凋亡率(%)P

0 3.7(366/10000)

128.1(813/10000)<0.053#

2421.5(2150/10000)<0.053#

4839.6(3957/10000)<0.013#

3为与0h组比较;#为b、c、d两组比较,P<0.01

由表2可见,在25μg/ml GS-Rh2作用下,Bel-7404细胞的AR随作用时间延长而呈现递增的趋势。

2.2　GS-Rh2作用后细胞周期变化

药物处理24h后收集细胞,用流式细胞仪检测各期细胞数(每组检测10000个细胞),结果见表3。

表3　GS-Rh2对Bel-7404细胞周期的影响组别

各期细胞数

G1S G2/M a645119801569

b69572142　901

c72821961　757

d7*******　887

e687420471079

由表3可见,不同浓度的GS-Rh2可使G1期细胞明显增多。

3　讨论

中医药理论认为,人参具有健脾补气、宁神益智的功效,而现代药理学研究证实:人参具有抗肿瘤作用。本实验研究了人参中的1种活性成分—人参皂甙-Rh2(GS2Rh2)对人肝癌Bel-7404细胞凋亡的影响,旨在进一步阐明人参抗肿瘤作用的机理,为肝癌的临床治疗提供更多的实验依据。

细胞凋亡是1种由多基因调控的细胞主动死亡过程,在生理性刺激或较弱的外界刺激作用下,细胞内部的遗传程序被启动,核酸内切酶被激活,通过一系列复杂的生化过程后出现非随机性DNA降解。凋亡异常与肿瘤发生、发展有极密切的关系,是近年来肿瘤防治领域的研究热点之一。

目前已从人参中提取出多种具有抗肿瘤作用的皂甙,并且对它们抗肿瘤作用的机制进行了大量研究。韩萍等[5]认为人参皂甙-Rg3有抗肿瘤生长的作用,与其它抗肿瘤药物,如5-氟尿嘧啶、长春新碱、环磷酰胺、氨甲喋呤等合用,有明显的协同作用。Kim等[6]研究表明GS-Rh2有诱导小鼠胶质瘤细胞凋亡的作用。马文彬等[7]应用流式细胞仪研究GS-Rh2对S180肉瘤细胞周期移行的影响,发现GS-Rh2能引起细胞周期阻滞于S期。为进一步探讨GS-Rh2抑制细胞生长的机理,我们以Bel-7404细胞为研究对象,检测了GS-Rh2作用后细胞凋亡率(AR)以及细胞周期变化。

本实验结果表明,Bel-7404细胞的凋亡率在一定范围内具有随药物浓度增高而增高的趋势。由此提示:在一定范围内,GS-Rh2诱导细胞凋亡呈剂量依赖性和时间依赖性。50.0μg/ml组与100.0μg/ml组AR无显著性差异,说明GS-Rh2达一定浓度后,Bel -7404细胞的凋亡率不再随药物浓度的增高而增高。

根据Anodrew等[8]的观点,细胞死亡是由正常的细胞周期改变引起的。细胞凋亡与细胞周期阻滞有

关,细胞阻滞于哪一期,凋亡就发生在哪一期。本实验结果还表明,GS-Rh2能阻滞G1期细胞向S期移行,使G1期细胞数量增多。故我们推测,当细胞周期被阻滞于G1期时,在药物作用下,部分肿瘤细胞发生凋亡,未发生凋亡的部分细胞进入S期。当联合使用GS-Rh2与其它主要作用于S期的抗肿瘤药物(如5-氟尿嘧啶、甲氨喋呤等),则有可能通过“同步化”作用而产生协同效应。

总之,我们的实验已证实GS-Rh2能诱导凋亡而发挥抗肿瘤作用,但关于其诱导凋亡的详细机制,还有待于进一步研究。

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系U-937诱导分化作用〔J〕.白求恩医科大学学报, 1994,20(4):384.

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type of ginseng saponin concurrently induces apoptosis and selectively elevates protein levels of p53and p21WA F1in human hepatoma S K2HEP21cells〔J〕.Eur J Cancer,1999,35(3):507.

[7]　马文彬,宋长春,马兴元,等.应用流式细胞光度计研究人

参单体Rh1和Rh2对小鼠S180肉瘤细胞周期移行的影响〔J〕.白求恩医科大学学报,1991,17(6):551.

[8]　Anodrew L,Kung S,Anders Z,et al.Cytotoxic effects of

cell cycle phase specific angents:result of cell cycle pertur2 bation〔J〕.Cancer Research,1999,50(4):7307.

(收稿日期2002-08-14　修回日期2002-12-21)

(编辑:吴小红)

(上接第12页)

维甲类化合物,在体外能通过诱导细胞凋亡而发挥抗癌作用。因此,我们认为N-(4-羧基苯)钐维甲酰胺有可能成为1种新的抗癌药物而应用于临床。

参考文献

[1]　杨生永,吴志豪,李文惠,等.镍维甲酸胺对HL-60细胞

凋亡及端粒酶的影响〔J〕.中国肿瘤,2001,10(6):365. [2]　张均田,段文贞,吴俊芳.细胞凋亡的基因调控和抗神经

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hibits cell deat h and t he morphogensis,but not tumori2 gensis of human mammany epit helial cell〔J〕.J Cell Boil, 1995,129(5):1363.

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[6]　Kaisev HE,Bodey B.The vole of apoptosis in normal on2

togenesis and solid human neoplasms〔J〕.In Vivo,2000, 14(6):789.

(收稿日期2002-11-22　修回日期2002-12-30)

(编辑:王新春)

HuH-7 人肝癌细胞

HuH-7 人肝癌细胞 Catalogue No.: C165 Product Format: a T25 flask Culture Properties：贴壁 Complete Growth Medium:89%H-DMEM+10%FBS+1%双抗 Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% Application:Cells and cancer research NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY. Components Operation steps for cell culture 1.吸走用于培养基，加入3-5mL PBS后轻轻晃动培养瓶润洗细胞； 2.吸干净PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，轻轻摇晃培养皿使胰酶 浸没细胞表面，培养瓶放37度培养箱消化； （细胞对于消化比较敏感，消化过度会严重影响细胞状态，导致细胞传代死亡漂浮或者传代后不长。细胞消化到细胞间隙变大但未脱落，可以轻轻吹下时即可终止，禁止消化到细胞完全漂浮。混匀细胞时尽量轻柔，不要吹出大量气泡。） 3.加入6-8ml完全培养基终止消化，轻轻吹下细胞混匀； 4.将混匀的细胞1000rpm（约150g）离心3min，弃上清，再用新鲜培养基 重悬37度培养箱继续培养； 传代比例: 不同细胞生长速度不一，具体传代比例视细胞生长速度而定，大部分细胞适用1:3-1:4传代，生长较慢的细胞可以1:2传代。 Cell cryopreservation 1.冻存液：92%完全培养基+8%DMSO（可以根据实验室条件自行选择） 2.降温步骤：4度10min，-20度2h，-80过夜后液氮保存。

慢性炎症在肝癌发生发展中的作用

慢性炎症在肝癌发生发展中的作用 我们大家对肝癌与乙肝的关系并不陌生，患有乙肝病史的患者罹患肝癌的几率比其他正常人几率要高。那临床上慢性炎症患者会促使肝癌发生吗?慢性炎症与肝癌之间有没有必然的联系? 江苏肿瘤生物治疗中心专家指出，慢性炎症可以促使肝癌的发展，而众多的炎症因子在其中起着重要作用。许多组织可由慢性炎症反应发展演变成癌性病变，在恶性组织内残存大量的炎性细胞，它们对癌细胞的增殖、生存、转移和血管生成具有一定的促进作用。 原发性肝癌是一种典型的炎症相关性肿瘤，发病速度很快，且大多数肝癌患者确诊时已属中晚期，并对外科手术、射频消融或化学药物等治疗效果不佳，预后较差。慢性病毒感染是原发性肝癌发生发展中一个最重要的促癌因素，长期持续的肝脏炎症损伤、肝细胞再生、修复等，容易诱发肝癌的发生。因此慢性炎症在肝癌的发生发展中具有非常重要的作用。LTD4和其受体在炎症诱发的癌症中发挥了重要作用 白三烯D4(LTD4)是一种经5-脂氧合酶(5-LOX)途径代谢发生四烯酸(AA)衍生的炎症介质，通过与特异性细胞表面受体结合发挥生物学活性。大量研究已证实，LTD4作为半胱氨酸白三烯中(CysLTs，LTC4、LTD4、LTE4)作用最强的炎症因子，参与了许多炎症性过程，包括过敏性疾病、炎症性肠病和心血管、皮肤及免疫等病理状态。它可直接引起炎性细胞聚集、支气管平滑肌剧烈收缩、毛细血管通透性增加、支气管粘液分泌及气道高反应性和气道重塑等过程，是哮喘和过敏性鼻炎中的主要炎症介质。此外，还能与受体CysLT1R结合上调细胞和组织中COX-2、5-LOX、β-Catenin和Bcl-2蛋白的表达，共同促进肿瘤的生长和扩散。由此我们可以明白，慢性炎症与肝癌的发生发展有着一定的促进作用。

实验14-细胞凋亡的诱导和检测

实验14 细胞凋亡的诱导和检测 20世纪60年代人们注意到细胞存在着两种不同形式的死亡方式：凋亡（apoptosis）和坏死（necrosis）。细胞坏死指病理情况下细胞的意外死亡，坏死过程细胞膜通透性增高，细胞肿胀，核碎裂，继而溶酶体、细胞膜破坏，细胞容物溢出，细胞坏死常引起炎症反应。 细胞凋亡apoptosis一词来源于古希腊语，意思是花瓣或树叶凋落，意味着生命走到了尽头，细胞到了一定时期会像树叶那样自然死亡。凋亡是细胞在一定生理或病理条件下遵守自身程序的主动死亡过程。凋亡时细胞皱缩，表面微绒毛消失，染色质凝集并呈新月形或块状靠近核膜边缘，继而核裂解，由细胞膜包裹着核碎片或其他细胞器形成小球状凋亡小体凸出于细胞表面，最后凋亡小体脱落被吞噬细胞或邻周细胞吞噬。凋亡过程中溶酶体及细胞膜保持完整，不引起炎症反应。细胞凋亡时的生化变化特征是核酸切酶被激活，染色体DNA被降解，断裂为50～300 kb长的DNA片段，再进一步断裂成180～200bp整倍数的寡核苷酸片断，在琼脂糖凝胶电泳上呈现“梯状”电泳图谱(DNA Ladder)。细胞凋亡在个体正常发育、紫稳态维持、免疫耐受形成、肿瘤监控和抵御各种外界因素干扰等方面都起着关键性的作用。 1．细胞凋亡的检测方法 凋亡细胞具有一些列不同于坏死细胞的形态特征和生化特征，据此可以鉴别细胞的死亡形式。细胞凋亡的机制十分复杂，一般采用多种方法综合加以判断，同时不同类型细胞的凋亡分析方法有所不同，方法选择依赖于具体的研究体系和研究目的（表？）。

形态学观察方法：利用各种染色法可观察到凋亡细胞的各种形态学特征： （1）DAPI时常用的一种与DNA结合的荧光染料。借助于DAPI染色，可以观察细胞核的形态变化。 （2）Giemsa染色法可以观察到染色质固缩、趋边、凋亡小体形成等形态。 （3）吖啶橙(AO)染色，荧光显微镜观察，活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。 （4）吖啶橙(A())／溴化乙啶(EB)复染可以更可靠地确定凋亡细胞的变化，AO只进入活细胞，正常细胞及处于凋亡早期的细胞核呈现绿色；EB只进入死细胞，将死细胞及凋亡晚期的细胞的核染成橙红色。 （5）台盼蓝染色对反映细胞膜的完整性，区别坏死细胞有一定的帮助，如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝，即为坏死。如果细胞膜完整，细胞不为台盼蓝染色，则为正常细胞或凋亡细胞。使用透射电镜观察，可见凋亡细胞表面微绒毛消失，核染色质固缩、边集，常呈新月形，核膜皱褶，胞质紧实，细胞器集中，胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和凋亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。 （6）木精-伊红（HE）染色是经典的显示细胞核、细胞质的染色方法，染色结果清晰。发生凋亡的细胞经HE染色后，其细胞大小的变化及特征性细胞核的变化：染色质凝集、呈新月形或块状靠近核膜边缘，晚期核裂解、细胞膜包裹着核碎片“出芽”凸出于细胞表面形成凋亡小体等均可明显显示出来。 DNA凝胶电泳：细胞发生凋亡或坏死，其细胞DNA均发生断裂，细胞小分子 质量DNA片段增加，高分子DNA减少，胞质出现DNA片段。但凋亡细胞DNA断裂点均有规律的发生在核小体之间，出现180～200 bp DNA片段，而坏死细胞的DNA断裂点为无特征的杂乱片段，利用此特征可以确定群体细胞的死亡，并可与坏死细胞区别。

Rab27A和Rab27B在4种不同人肝癌细胞株中的表达

龙源期刊网 https://www.wendangku.net/doc/f66570681.html, Rab27A和Rab27B在4种不同人肝癌细胞株中的表达 作者：刘鼎刘建生 来源：《中国当代医药》2015年第16期 [摘要] 目的检测Rab27A与Rab27B在3种人肝癌细胞系及1种永生化肝细胞系中的表达情况，初步研究Rab27A与Rab27B表达对肝癌细胞生物学特性的影响。方法采用RT-PCR及Western blot技术，检测Rab27A与Rab27B mRNA在3种人肝癌癌细胞HepG2、Huh-7、Li-7及1种永生化肝细胞系HL-7702中的表达。结果 Rab27A与Rab27B在肝癌细胞系及原发性肝癌组织中存在差异性表达。Rab27A mRNA在3种人肝癌细胞系中表达明显强于1种人永生化肝细胞系；Rab27B mRNA在3种人肝癌及1种人永生化肝细胞系中均明显表达但无显著差异。结论 Rab27A与Rab27B与原发性肝癌密切相关，可以为临床采取合理诊断措施提供有效的参考依据。 [关键词] Rab27A；Rab27B；肝细胞癌；RT-PCR；Western blot [中图分类号] R735 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2015）06（a）-0004-04 Expression of Rab27A and Rab27B in the four different hepatocellular carcinoma LIU Ding LIU Jian-sheng▲ The First Clinical Medical College of Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China [Abstract] Objective To investigate the expression of Rab27A and Rab27B in 3 human HCC lines and the immortalized hepatic cell line and its effect on biology characteristics of the cells. Methods The mRNA expression of Rab27A and Rab27B was detected by RT-PCR，and Western-blot in 3 human HCC lines of HepG2，Huh-7，Li-7 and the immortalized hepatic cell line of HL-7702. Results Rab27A and Rab27B were differentially expressed in cell lines and primary HCC tumors.The expression of Rab27A in 3 human HCC line was significantly better than that expressed in the immortalized hepatic cell line；the mRNA of Rab27B in 3 human HCC lines and the immortalized hepatic cell line were significantly expression but there was no significantly difference. Conclusion Rab27A and Rab27B expression are closely correlated HCC，it can provide the clinical reasonable diagnostic measures as valuable effective reference basis. [Key words] Rab27A；Rab27B；Hepatocellular carcinoma；RT-PCR；Western blot 肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，具有极高的侵袭性和转移性，出现典型症状时，往往已经为晚期。目前与HCC进展相关的因子包括癌

综述：肝细胞性肝癌

综述：肝细胞性肝癌 原发性肝癌以肝细胞性肝癌（HCC）为主。在全球范围内，肝癌是导致癌症相关死亡的第四大常见原因，在发病率方面排名第六。根据世界卫生组织的年度预测，估计2030年将有100多万患者死于肝癌。 在美国，从2000年到2016年，肝癌的死亡率增加了43%（从7.2人/10万人上升到10.3人/10万人），而5年生存率为18%，肝癌已成为仅次于胰腺癌的第二大致死性肿瘤。大部分的HCC发生在有基础肝脏疾病的患者当中，主要是HBV或HCV感染或酒精滥用。 普遍接种HBV疫苗和广泛应用针对HCV的直接作用抗病毒药物可能将改变HCC的病因谱。而非酒精性脂肪肝（NAFLD）、代谢综合征和肥胖患者的增加放大了肝癌的发生风险，在西方国家，NAFLD将很快成为肝癌的主要病因。 针对晚期肝癌患者的系统疗法发展迅速，在过去2年，有4种新药在3期临床试验中显示出了临床疗效。本文将主要论述HCC的主要遗传学改变、风险因素、监测和诊断，以及循证治疗方法。 一、发病机制 慢性肝病患者存在持续性肝脏炎症、肝纤维化和肝细胞异常再生。这些异常的生理过程可导致肝硬化，并导致一系列遗传学和表观遗传学事件，最终导致异常增生结节（真正的肿瘤癌前病变）的形成。额外的分子改变能使异常增生细胞获得增殖、侵袭性和生存优势，并完成到成熟HCC的转变（图1）。HCC也可发生于不存在肝硬化或明显炎症的慢性肝病患者（如HBV感染患者）。 图1HCC的主要遗传学改变及分子分型 图中描述了人HCC发生过程中关键的分子和组织学改变，以及HCC两个分子亚型的主要遗

传和临床特征。*表示高水平的DNA扩增。在非增生型中，CTNNB1突变增强了免疫排斥。 二、风险因素 没有基础肝病的患者很少罹患HCC，男性的HCC发病率是女性的两倍。任何原因的肝硬化都会增加HCC的发生风险。 这种风险因病因、地理区域、性别、年龄和肝损伤程度而异。 在世界范围内，HBV感染是HCC的主要病因。尽管乙肝疫苗的广泛接种降低了HCC的发病率，但仍有许多未接种疫苗的人感染HBV（2015年为2.57亿人），有罹患HCC的风险。饮食中接触黄曲霉毒素B1可导致249位TP53的特异性突变（R→S），增加HBV感染患者发生HCC的风险。在西方国家和日本，HCC的主要病因是HCV感染。无论潜在的肝纤维化程度如何，HBV感染都有直接的致癌作用，但在HCV感染者中，若不伴有重度肝纤维化，则HCC很少发生。 全世界范围内，NAFLD相关HCC的发病率呈上升趋势。在美国，从2016年到2030年，该发病率预计将增加122%（从5510例增加到12240例）。 酒精性肝硬化是HCC的另一常见病因。 吸烟合并HIV感染也可能导致HCC的发生。抗病毒治疗在降低HCC的发生率方面是有效的，但不能根除这种风险。 与无应答的患者相比，在对干扰素治疗方案有持续病毒学应答的HCV感染患者中，HCC 的风险从6.2%降低到了1.5%。据报道，使用直接作用抗病毒药物治疗的HCV感染患者发生HCC的风险也会降低。 除了肝病的病因治疗外，尚无任何药物可以降低HCC的发生率。 三、HCC的监测 癌症监测旨在早期发现肿瘤，增加治疗机会，提高生存率。然而，尚无高质量的随机对照试验评估HCC监测对肝硬化患者的临床价值。不过，数学模型、低质量的临床试验（在方法学上有局限性）以及meta分析都显示了监测对患者的生存益处。 HCC监测的目标人群是肝硬化患者，且不考虑肝硬化的病因。 由于重度肝功能不全的肝硬化患者不适合接受根治性治疗，所以没有癌症监测的必要。但因肝功能障碍而等待肝移植的患者则需要进行监测，目的是确保肿瘤不会发展到按照既定标准无法进行移植的程度。 一些没有肝硬化的肝病患者也应该被纳为癌症监测目标。慢乙肝患者发生HCC的风险存在地区差异（非洲和亚洲地区的发生风险高于其他地区），且老年、男性、肝纤维化、病毒复制水平高、基因C型以及HCC家族史都提示着更高的HCC发生风险。 虽然无肝硬化的非酒精性肝病患者可能会发生HCC，但实际风险是未知的，且可能非常低。除非有方法可以识别出风险较高的患者，否则不建议对无肝硬化的NAFLD患者进行癌症监测。 HCC的推荐监测方法为：每6个月进行一次腹部超声检查，联合/不联合血清甲胎蛋白水平检测。结果对操作者的依赖性较高，敏感度为47%-84%，特异度＞90%。对肥胖患者，超声检测的实用性会降低。 四、HCC的诊断 在肝硬化患者中，利用影像学技术就可以诊断HCC（图2）。由于肝细胞在恶性转变期间会发生血管转变：良性病灶（如增生性结节）由门静脉系统分支供血，而恶性病灶由肝动脉分支供血。这种转变转化为一种独特的模式：对比增强CT或MRI可显示动脉后期明显强

对肝癌有抑制作用食材

对肝癌有抑制作用食材 四种食物有效预防肝癌 声明：图片网络，如有侵权，敬请告知肝癌、肺癌以及胃癌，是癌症病的高发病。近半个世纪以来，国内外学者对肝癌的病因进行了广泛而深入的研究。 目前我国肝癌的危险因素有以下几种：病毒性肝炎、进食黄曲霉菌及其霉素污染的食物、化学致癌物质、水源污染、饮酒等，此外，疾病因素、遗传因素以及营养因素也有影响。研究发现，蔬菜、水果摄入能降低癌症的危险性。下面几样食物就能有效预防肝癌。 1、奶制品 医学研究证明，在控制喝酒的情况下，如果每天食用奶制品，包括牛奶及酸奶等，患上肝癌的几率将减少78%。目前小孩已经养成了食用奶制品的习惯，但成年人中食用奶制品的还为数不多，不妨加以改进。 2、“三笋”

三笋，即竹笋、莴笋和芦笋。专家提示日常多吃这三种食物，可降低肝癌的发生率，而且还美味可口。 3、胡萝卜、柑橘 4、铁观音 闽南人爱喝茶，董博士说，这对防肝癌很有益，尤以闽南一带常见的铁观音为最佳，雨前龙井也不错。 预防肝癌远离哪些食物 1、不能吃发霉的、糊了的食物，这类食物含有黄曲霉素，这种物质致癌。吃发霉的食物也容易引发肝癌。还有免淘米，在塑料袋里如果遇到高温，粮食里的温度高，水分大于16%，就会发霉。发霉的食物一定要晾干，例如：玉米、花生、花生油、花生酱等是容易发霉的食物，这些食物要注意保管。 2、预防肝炎。使用肝炎疫苗预防肝炎从而预防肝癌已成为预防肝癌极有希望的途径之一，这样可阻断部分肝炎发展成为肝癌。

3、远离致癌物。不吃发霉的、煳了的食物，因为这类食物中含有的黄曲霉素是致癌物。 4、积极锻炼。积极锻炼、增强人体的免疫力，是防止肝癌发生的重要方面。 5、戒酒。酒在人体内需经肝脏这个人体最大的化工厂来解毒。在这一代谢过程中产生的乙醛对人体的毒性极大，最终可导致肝硬化，一部分肝硬化会转变为肝癌。 6、定期体检。慢性乙肝或丙肝患者比正常人患肝癌的几率高10～30倍。如果肝炎好了，但肝炎病毒对肝脏的损害并没有消失，也就是说癌变的基础还是有的，所以应定期检查。 推荐阅读：/xiamen/yiliao/16760950.html 不同食物对于多种癌症的抑制作用 食物中含有很多对人体有益的物质，预防和治疗癌症不光要靠药物，食物中的营养物质也可以对抗多种癌症。 胃癌“克星”：大蒜。

原发性肝癌

一、原发性肝癌 【病理与临床】 原发性肝癌是我国常见恶性肿瘤之一，死亡率高，在消化系统恶性肿瘤死亡顺位中仅次于胃、食管而居第三位，在部分地区的农村中则占第二位，仅次于胃癌。我国每年约11万人死于肝癌，占全世界肝癌死亡人数的45%。由于依靠血清甲胎蛋白（AFP）检测结合超声成像对高危人群的监测，使肝癌在亚临床阶段即可作出诊断，早期切除的远期效果尤为显著。加之积极综合治=治疗，使肝癌的五年生存率有了显著提高。原发性肝癌发病年龄多在中年以上，男多于女。原发性肝癌发病隐匿，早期无临床症状，有症状时多已属中晚期，表现为中上腹不适、腹胀、疼痛、食欲缺乏、乏力、消瘦等，其他可有发热、腹泻、黄疸、腹水、出血倾向以及转移至其他脏器而引起的相应症状。 原发性肝癌按组织学类型分为肝细胞、胆管细胞和肝细胞与胆管细胞混合型肝癌三类，其中肝细胞肝癌最多见，占90%以上。按病理形态来分肝癌分为三型： 1、块状型癌结节直径>5cm，其中>10cm者为巨块型，块状型肝癌有膨胀性生长的特点，邻近肝组织和较大的血管、胆管被推移或受压变窄形成假包膜，巨块型肝癌内部多伴出血、坏死。 2、结节型癌结节直径<5cm，可单发或多个，多伴有肝硬化。 3、弥漫型癌结节小，呈弥漫性分布，该型肝癌多伴有明显肝硬化，癌结节与周围肝组织境界不清，易与肝硬化混淆。 另外，将肝内出现单个癌结节且直径<3cm者，或肝内癌结节不超过2个且2个癌结节直径之和<3cm者称作小肝癌。近年来提出将单个肿瘤直径≤2cm肝癌定为微小肝癌。原发性肝癌极易侵犯门静脉分支，癌栓可经门静脉系统形成肝内播散，甚至阻塞门静脉主干引起门静脉高压的表现；经淋巴转移可出现肝门淋巴结肿大，其次为胰周、腹膜后、主动脉旁及锁骨上淋巴结。此外，还可出现膈肌及附近脏器直接蔓延和腹腔种植性转移。 【超声表现】 1、二维超声肝癌结节形态多呈圆形或类圆形，结节内部回声较复杂、大致可分为低回声型、等回声型、混合型，而以低回声型和混合回声型较多见。癌结节内部回声多不均匀，部分肝癌具有周围暗环，有较高的诊断特异性。癌结节后方回声常可呈轻度增强变化，尤其是小肝癌。此外，大部分肝癌具肝硬化背景。不同病理类型肝癌的超声表现也不尽相同，具有各自的特征。

细胞凋亡实验步骤及注意事 项

细胞凋亡实验步骤及注意事项 一、实验目的 1、掌屋凋亡细胞的形态特征 2、学会用荧光探针对细胞进行双标记来检测正常活细胞、凋亡细胞和坏死细胞的方法 二、实验原理 细胞死亡根据其性质、起源及生物学意义区分为凋亡和坏死两种不同类型。凋亡普遍存在于生命界，在生物个体和生存中起着非常重要的作用。它是细胞在一定生理条件下一系列顺序发生事件的组合，是细胞遵循一定规律自己结束生命的自主控制过程。细胞凋亡具有可鉴别的形态学和生物化学特征。 在形态上可见凋亡细胞与周围细胞脱离接触，细胞变园，细胞膜向内皱缩、胞浆浓缩、内质网扩张、细胞核固缩破裂呈团块状或新月状分布、内质网和细胞膜进一步融合将细胞分成多个完整包裹的凋亡小体，凋亡小体最后被吞噬细胞吞噬消化。在凋亡过程中细胞内容物并不释放到细胞外，不会影响其它细胞，因而不引起炎症反应。 在生物化学上，多数细胞凋亡的过程中，内源性核酸内切酶活化，活性增加。核DNA随机地在核小体的连接部位被酶切断，降解为180-200bp 或它的整倍数的各种片断。如果对核DNA进行琼脂糖电泳，可显示以180-200bp为基数的DNA ladder（梯状带纹）的特征。 相比之下，坏死是细胞处于剧烈损伤条件下发生的细胞死亡。细胞在坏死早期即丧失质膜完整性，各种细胞器膨胀，进而质膜崩解释放出其中的内容物，引起炎症反应，坏死过程中细胞核DNA虽也降解，但由于存在各种长度不等的DNA片断，不能形成梯状带纹，而呈弥散状。 一些温和的损伤刺激及一些抗肿瘤药物可诱导细胞凋亡，通常这些因素在诱导凋亡的同时，也可产生细胞坏死，这取决于损伤的剧烈程度和细胞本身对刺激的敏感程度。 三尖杉酯碱（HT）是我国自行研制的一种对急性粒细胞白血病，急性单核白血病等有良好疗效的抗肿瘤药物。研究表明HT在0.02~5μg/ml范围内作用2小时，即可诱导HL-60细胞凋亡，并表现出典型的凋亡特征。本实验用1μg/ml HT在体外诱导培养的HL-60细胞发生凋亡，同时也有少数细胞发生坏死。用Hoechst33342和碘化丙啶（propidium iodide，PI）对细胞进行双重染色，可以区别凋亡、坏死及正常细胞。细胞膜是一选择性的生物膜，一般的生物染料如PI等不能穿过质膜。当细胞坏死时，质膜不完整，PI就进入细胞内部，它可嵌入到DNA或RNA 中，使坏死细胞着色，凋亡细胞和活细胞不着色。而一些活细胞染料由于为亲脂性物质，可跨膜进入活细胞，因而可进行活细胞染色。

人肝癌细胞株中FOXM1及NF_B的表达及意义_王琦1_柴磊2_蒋少青3_马丽4

网络出版时间：2014-02-17 09:02 网络出版地址：https://www.wendangku.net/doc/f66570681.html,/kcms/detail/64.1008.R.20140217.0902.004.html 人肝癌细胞株中FOXM1 及NF-κB的表达及意义 王琦1，柴磊2，蒋少青3，马丽4 ，金栋5 ，殷利军5，张桂香5，谢岩青5 （1.宁夏医科大学总医院肝胆外科，银川 750004；2.宁夏回族自治区第三人民外科，银川750004；3.宁夏医科大学总医院药剂科，银川 750004；4.宁夏医科大学总医院心脑血管疾病医院药剂科，银川 750004；5.宁夏医科大学总医院心脑血管疾病医院血管外/普外科，银川750004）1 [摘要] 目的探讨不同肝癌细胞株中转录因子FOXM1（Forkhead Box M1）及核转录因子NF-κB（nuclear factor kappa B）的表达强度及意义。方法采用Western blot、RT-PCR法，检测不同肝癌细胞株（QGY-7703、BEL-7402、SMMC-7721）中FOXM1及NF-κ B 在蛋白及mRNA 水平的表达情况。结果在3株肝癌细胞中FOXM1及NF-κB的表达无论是mRNA水平还是蛋白水平均存在显著差异，细胞株（QGY-7703、BEL-7402）中FOXM1及NF-κB的表达同时都明显高表达于细胞株SMMC-7721。结论肝癌细胞株中FOXM1蛋白及mRNA表达与NF-κB表达趋势一致，提示FOXM的表达可能与NF-κB的活化有关。 [关键词] FOXM1；NF-κB；肝细胞肝癌 [中图分类号]R735.7 [文献标识码]A Expression and significance of Forkhead Box M1 and nuclear factor kappa B in human liver carcinoma cells WANG Qi1，CHAI Lei2，JIANG Shao-qing 3，MA Li4，JIN Dong5，YIN Li-jun5 ,ZHANG Gui-xiang5，XIE Yan-qing5，（1. Dept.of Hepatobiliarysurgery，the Affiliated Hospital of Ningxia Med. Univ. Yinchuan 750004；2. Dept.of Surgical， the Third People′s Hospital of Ningxia. Yinchuan 750004；3. Dept.of Pharmacy，the Affiliated Hospital of Ningxia Med. Univ. Yinchuan 750004；4. Dept.of Pharmacy，the Cardio-Cerebral Vascular Disease Hospital of Ningxia Med. Univ. Yinchuan 750004；5. Dept.of Vascular/General Surgery， the Cardio-Cerebral Vascular Disease Hospital of Ningxia Med. Univ.Yinchuan 750004） ABSTRACT Objective（1）To investigate the expression and significance of Forkhead Box M1 and nuclear factor kappa B in human liver carcinoma cells. Methods The expression of Forkhead Box M1 and nuclear factor kappa B protein and micro-RNA in hepatocellular carcinoma cell lines(QGY-7703、BEL-7402、SMMC-7721)were detected with the application of Western blot analysis and RT-PCR analysis，respectively. Results The expression 基金项目：宁夏自然科学基金（项目编号：NZ1236） 作者简介：王琦(1983-),硕士，主任医师，肝癌复发相关分子机制的研究。 通作者：谢岩青，Email：xie-yanqing@https://www.wendangku.net/doc/f66570681.html,

肝癌介入治疗副作用

肝癌介入治疗副作用 介入治疗不同于单纯化疗,不必要3--4周一次，在疗效非常好的情况下,可以连做3到4次。但是单纯介入治疗是无法完全杀死肝癌细胞的，即使最成功的介入手术，在原来部位再次活检依然可以查到癌细胞，因此肝癌介入治疗后易复发转移。并且介入治疗还有一定的副作用，介入药物对神经的刺激，会引起酸痛，对免疫系统的损伤会引起发热。 一、肝癌介入治疗副作用 1、肝功能损害： 肝功能损害是肝癌介入治疗主要的副作用，主要表现为丙氨酸转氨酶(ALT)的升高，发生率7%～100%，多是由于化疗药物、栓塞剂的细胞毒性及治疗后坏死组织吸收所致。 2、胃肠道反应： 胃肠道反应发生率高达44.8%～83%，多是由于介入治疗药物引起的消化系反应，表现为恶心、呕吐、食欲降低或不思饮食等等。 3、血象降低： 白细胞减少的发生率为25%～30%，多是由于化疗药物对骨髓的抑制所致，一般多发生在术后2周内。 4、疼痛： 主要以上腹部疼痛为主，发生率3O%一l00%，多是由于栓塞后肝脏局部缺血，致肝局部血管肿胀刺激肝包膜或造影剂、栓塞剂直接刺激引起，一般多发生在术后24小时内。 5、发热： 发生率10%～100%不等，多是由于肿瘤组织急性缺血、坏死、脱落、吸收所致，一般在肝癌介入治疗术后第2天出现，体温在37.5-38℃之间，可持续5-7天，但也有个别患者体温在38.5℃以上，持续时间为9～14天。 6、穿刺部位的损伤： 发生率在2%～13%之间，表现为穿刺局部出血、血肿，动、静脉痉挛或血栓形成等等，多是由于病人凝血机制障碍、术中应用肝素或术后止血压迫过度等原因所致。

漳州市医院肿瘤院士工作站李泽玲主任提醒，肝癌介入治疗虽是非开腹手术治疗肝癌的首选方法，但因治疗后可产生一定程度的副作用，所以为有效避免肝癌介入治疗副作用的发生，只有符合肝癌介入治疗适应症的患者才可以选用。建议结合生物多细胞免疫治疗能够提高治疗的效果，减少副作用的产生，稳定白细胞的数量，提高肝癌患者的免疫力。同时该疗法能够清除体内一些残余的癌细胞和微小病灶，防止肝癌复发。 肝癌患者在接受介入治疗后，由于病人免疫系统的破坏，经常会出现一些并发症，这是应该及时进行护理，下面就给大家介绍一下：肝癌介入治疗后如何护理?饮食应注意什么? 二、肝癌介入治疗后护理措施如下 1、发热起发热的原因有很多，肝癌病人发热主要是癌性发热、感染以及药物性发热。 【处理】 (1)多喝开水。 (2)如发热过高可用冰袋冰敷，温水擦浴。 (3)注意保暖，勤换衣裤，保持衣物的干燥清洁。 (4)如高热持续不退，应与医生取得联系。 2、便秘肝癌病人便秘是由于长期卧床，或服用利尿剂，或情绪因素，膳食中的粗纤维含量过少，饮水过少引起。 【处理】 (1)养成定时上厕所的习惯。 (2)用开塞露肛塞剂或开塞露灌肠剂，勿用力排便。 (3)多饮开水。 (4)膳食中有足量定额粗纤维食物。 (5)在病情允许的情况下适当运动。 注意事项如下 忌烟、酒。

原发性肝癌与炎症关系的研究进展

原发性肝癌与炎症关系的研究进展 摘要原发性肝癌是最常见的恶性肿瘤之一，与炎症密切相关。在我国，肝癌患者中约大多数有慢性乙型病毒性肝炎感染病史；在欧美及日本，肝癌与丙型病毒性肝炎有关。本文总结原发性肝癌与炎症关系的最新研究进展，探讨多种炎症介质对肝癌发生、转移的促进机制，通过阻断相关炎症介质作用，探索出抑制原发性肝癌的发生、发展，减少复发、转移的新治疗途径。 原发性肝癌（primary hepatic carcinoma PHC）是世界卫生组织公布的十大恶性肿瘤之一，全世界每年新发及死亡病例约占所有恶性肿瘤的5.4%。最新的流行病学调查结果显示，其发病率及死亡率均有上升趋势。原发性肝癌是一种与炎症密切相关的恶性肿瘤，炎症在肝癌的发生和转移过程中具有促进作用[1][2]。本文就原发性肝癌与炎症关系的研究作一综述。 概述 Rudolph Virchow[3]第一次提出炎症在恶性肿瘤进展中起一定的作用，认为慢性炎症可促进肿瘤的生长；随后Wiemann B[4]证明：通过给患者注射化脓性链球菌和粘质沙雷菌引起的急性炎症可使部分患者的恶性肿瘤退化。目前炎症与肿瘤关系的研究成为热点。 大量流行病学调查提示：炎症是导致肿瘤发生或促进肿瘤发展的最主要因素之一，约20%的恶性肿瘤由炎症诱发或促进[1] [2] [5]。炎症与肿瘤发展的多个环节相关，包括肿瘤细胞形成、进展、逃逸、增生、浸润、血管生成、转移。炎症引起恶性肿瘤的分子和细胞机制尚未完全明确，有研究认为：炎症发生后，炎性细胞在迁入炎症部位的过程中产生大量的活性氧、活性氮物质，而且在慢性炎症过程中，内生抗氧化机制的抑制作用也可以产生超负荷的活性物质，这些活性物质诱导DNA损伤，破坏增生细胞的基因稳定性，最终在炎症和活性物质的反复破坏下，细胞基因改变，包括点突变、基因缺失、基因重组[6]。 在我国，原发性肝癌患者中约1/3有明确的乙型病毒性肝炎病史，欧美及日本，肝癌主要与丙型肝炎病毒感染及酒精性肝病有关。肝癌与肝炎病毒、酒精性肝病的关系，国内外已有大量研究，部分机制已经阐明。研究证实：乙型肝炎病毒（HBV）是一种DNA病毒，它可以整合插入宿主基因组，改变宿主体细胞基因的表达，导致宿主细胞基因组的不稳定，易发生基因改变，从而转化为肝癌细胞[7]；丙型肝炎病毒（HCV）为单链RNA病毒，可以和多种细胞蛋白作用，促进肝细胞向肝癌细胞转化[8]；酒精性肝病诱导肝癌形成过程中，酒精产物乙醛可直接损伤肝细胞或乙醇代谢产生的反应性氧化剂和脂质过氧化物直接造成DNA损伤[9]。原发性肝癌通常发生在慢性肝损伤的基础上，包括慢性肝炎、肝硬化，这些被认为是癌前病变。慢性肝损伤引起的炎症反应促进肝硬化的发展，并且激活了肝细胞的再生能力[10]。肝脏的修复机制若被短暂的激活，肝脏的结构和功能可迅速恢复，修复机制的持续激活可促进肝癌的形成和发展，肝炎病毒感染和长期饮酒可激活先天性免疫功能，维持持久的炎症反应，从而促进肝癌的形成和发展[11]。 目前研究已证明，在炎症与癌症的关系中，许多炎症介质具有重要作用。炎症介质产生于炎症反应过程中，也可以由肿瘤细胞产生，其中起关键作用的炎症介质包括环氧化酶-2（cyclooxygenase-2，Cox-2）、核转录因子—kappaB（NF-kB）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、补体系统。. 原发性肝癌与Cox-2 环氧化酶（cyclooxygenase，Cox）是花生四烯酸转变为前列腺素的限速酶，又称前列腺素内过氧化物合成酶，是一种完整的膜结合蛋白，至少有三种形式：Cox-1位于内质网，属于结构型基因，多种正常组织

常见的细胞凋亡诱导剂和抑制剂

表1 常见的细胞凋亡诱导剂和抑制剂 诱导剂与抑制剂靶细胞诱导剂 激素地塞米松T细胞 细胞因子IL—2 胸腺细胞 TGF—β肝细胞、上皮细胞、慢性B淋巴瘤细胞 IL—10 髓样白血病细胞 IFN—Υ前B细胞、T细胞抗体抗IgM抗体B细胞 抗IgD抗体B细胞 抗HLA—II抗体静止B细胞 超抗原SPE CD4+T细胞 胞内信号分子调节 剂 放线菌酮T细胞 PKC激活剂胸腺细胞 其他DNA拓扑异构酶抑制 剂 白血病细胞放射线淋巴样细胞 抑制剂 细胞因子IL—2 T H1细胞 IL—4 T H2细胞 IL—10 B、T细胞 IFN—ΥT细胞 IL—4 B细胞 黏附分子LFA—1、ICAM—1 B细胞 VLA—4、VCAM—1 B细胞 胞内信号分子调节 剂 PKC激活剂T、B细胞 细胞凋亡（apoptosis）是一种由基因控制的细胞自主死亡方式。1972年，英国教授Kerr首先提出凋亡的概念。近十余年来，细胞凋亡现象引起了广泛重视，有关的研究工作取得重要进展，并成为医学生物学各学科共同关注的极为活跃的研究领域。 细胞凋亡与组织器官的发育、肌体正常生理活动的维持、某些疾病的发生以及细胞恶变等过程均有密切的关系。

1．形态学变化： 细胞凋亡的形态变化大致可分为三个阶段： 1）胞体缩小，与周围细胞失去联系，细胞器变致密，核体积缩小，核仁消失，染色质浓集于核膜内表面下，形成新月形致密小斑块。 2）染色体断裂，核膜与细胞膜均内陷，包裹胞内成分（胞浆、细胞器、碎裂的染色质及核膜）形成“泡”样结构，此为“凋亡小体”。最后，整个细胞均裂解成这种“小体”。 3）凋亡小体被邻近的巨噬细胞、上皮细胞等识别、吞噬、消化。 上述三个阶段维持时间很短，通常在几分钟、十几分钟内即可完成。 2．细胞凋亡的生化改变： 1）胞内Ca2+浓度增高 所有细胞凋亡过程中均出现胞内Ca2+浓度增高，这可能是Ca2+内流所致。 2）内源性核酸内切酶激活 细胞发生凋亡时，由于内源性核酸内切酶被激活，DNA被从核小体连接处水解，形成180—200bp 或其整倍数的片段。 3）生物大分子的合成 凋亡过程的发生一般依赖于新的RNA和蛋白质的合成，如在激素、射线作用下，或由于去除生长因子等所引起的细胞凋亡中，情况均为如此。 常用的检测方法： 1．形态学方法 借助普通光学显微镜、荧光显微镜或透射电镜可对组织切片、切片涂片或细胞悬液进行形态学观察，凋亡细胞在组织中散在分布，表现为核致密浓染、核碎裂等。该方法简便、经济，可定性、定位。但在组织成分及细胞死亡类型复杂的情况下，难以判断结果，也无法定量。 2．电泳法 对凋亡细胞的基因组DNA进行琼脂凝胶电泳，由于存在180—200bp或其整倍数的片段，故电泳结果可见“梯状”（ladder）DNA条带。该法简便，可定性及定量，但无法显示组织细胞形态结构，也不能反映凋亡细胞与周围组织的关系。

常见肝癌细胞株

实验室用肝癌细胞株 细胞英文名称Hep G2 [HepG2]细胞中文名人肝癌细胞 形态特性上皮样生长特性贴壁生长 特征特性该细胞来源于一名15岁的白人少年的肝癌组织。该细胞表达甲胎蛋白、白蛋白、α-2-巨球蛋白、α-1-抗胰蛋白酶、转铁蛋白、α-1-抗凝乳蛋白酶、结合珠蛋白、铜蓝蛋白、纤溶酶原、补体C4、C3激活物、纤维蛋白原、α-1酸性糖蛋白、α-2-HS-糖蛋白、β-脂蛋白、视黄醇结合蛋白；表达胰岛素受体和胰岛素样生长因子IGFⅡ的受体；该细胞具有3-羟基-3-甲酰辅酶A还原酶和肝甘油三酯脂肪酶的活性。目前尚未证明该细胞中有HBV基因组。 培养基MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle＇s Balanced Salts) 血清10%FBS其它因子1%NEAA 传代方法1:4~1：6传代；每周2次。传代情况C5 冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS支原体检测阴性 细胞英文名称SMMC-7721 [SMMC7721]细胞中文名人肝癌细胞 形态特性上皮样生长特性贴壁生长 特征特性取人肝癌组织，采用静置和旋转管法培养11天细胞开始生长，首次传代23天。AFP阳性。用Northern blot方法，未能检测到细胞中1.3kb LFIRE-1/HFREP-1 mRNA的表达，免疫缺陷小鼠体内可成瘤。 培养基RPMI 1640 (w/o Hepes) 血清10%FBS其它因子无 传代方法1:3传代；3~4天1次。传代情况C5 冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS支原体检测阴性 细胞英文名称Hep3b 细胞中文名人肝癌细胞 形态特性上皮细胞样生长特性贴壁生长。 特征特性该细胞源自一位患有肝癌的7岁黑人男童，HBV阳性。 培养基MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle＇s Balanced Salts) 血清10%FBS 其它因子无 传代方法1:4～1:6传代，每周换液2次传代情况C2 冻存条件基础培养基+8%DMSO+20%FBS 支原体检测培养法（-） 国内还有，： 小鼠肝癌细胞Hepa 1-6 [Hepa1-6] 人胆管细胞型肝癌细胞HCCC-9810 小鼠肝癌瘤株H22 人肝癌细胞HHCC 人肝癌细胞PLC/PRF/5 人肝癌细胞HB611 人肝癌细胞BEL-7402 人肝癌细胞QGY-7701 （有疑问细胞待定） 人肝癌细胞QGY-7703 （有疑问细胞待定） 人肝癌细胞BEL-7404 人肝癌细胞BEL-7405

肝癌的综述

肝癌的综述 一、什么是肝癌 肝癌可分原发性和继发性两种。继发性肝癌系由于其它脏器的肿瘤经血液、淋巴或直接侵袭到肝脏所致。原发性肝癌为我国常见恶性肿瘤之一，死亡率高，居男性恶性肿瘤第三位，女性恶性肿瘤第四位。肝癌早期症状不明显，诊断较困难，出现症状就医时，多属中、晚期。我国东南沿海地区是肝癌高发区之一。本病多发生于中、壮年男性，男女性比率可高达3-8:1，并以40-49岁之间发病率最高，这可能是与病毒性肝炎及肝硬变多见于中、壮年男性有关。以往对肝癌治疗多持消极态度，近10多年来有关肝癌诊断及治疗的研究取得很大进展，不少病人经过以手术为主的综合治疗，可获长期存活. 二、肝癌的症状 早期肝癌可无症状体征，一旦出现典型的临床表现时，已属于中晚期肝癌。肝癌的常见症状有：肝区疼痛、纳差、消瘦、乏力以及不明原因的发热、腹胀、腹泻、黄疸等。肝癌伴腹水、黄疸、远处转移等情况时，称为晚期肝癌。对肝癌伴腹水者，可先予中药或西药利尿剂治疗，腹水消退后，根据肝内肿瘤情况，仍可按上法治疗。如为血性腹水，则不易消退；门静脉或肝静脉有癌栓者，予中西药利尿剂不易见效。如肝癌结节破裂出血，应予止血处理，同时采用腹部加压包扎。 肝癌伴黄疽者，如系肝门区肿块压迫所致阻塞性黄疽，可采用局部放射治疗，或局部瘤内注射、或介入治疗，或内支架或外引流；如系非黄疸，可予中医药治疗、保肝治疗。对肝癌有肺转移者，如肝癌原发灶已控制，只有单个肺转移灶，可考虑切除，或局部放射治疗。如系多个转移灶，或弥漫两肺者，可考虑放射治疗（全肺野照射），或化学治疗、生物治疗。如肝癌原发灶未治疗，或治疗未见控制，转移灶为单个，或较为局限，亦可考虑放疗。 三、肝癌的病因 肝癌是多种因素协同作用的结果，主要与乙型肝炎病毒，丙型肝炎病毒、黄曲霉素、饮水污染、某些微量元素缺乏、遗传因素、嗜酒等因素有关。慢性肝炎—肝硬化—肝癌三者之间的关系，已引起人们广泛的重视。资料显示，我国肝硬化患者中20%有既往肝炎病史；56%可查出乙肝和丙肝病毒感染的阳性指标；而肝硬化患者中，16.5%—51.5%可发展成肝癌。 四、肝癌的治疗 （1）、肝癌的早期治疗 肝癌早期主要以手术为主，之后进行化疗治疗，严重的甚至要局部的放疗治疗，不过这两种治疗上副作用较大，建议期间可以配合中药辅助调理，中药具有抗复发，延长生存期，部分病人与瘤共存，长期存活，改善生存质量，减缓放化疗毒副反应。特别是中医的扶正调理法，不仅是体弱多病患者或中老年朋友祛病强体，延年益寿的重要手段，而且在恶性肿瘤的综合治疗中有着重要地位。

原发性肝癌

第六章原发性肝癌 【概述】 据统计，原发性肝癌是城市人口恶性肿瘤死亡的第二位，其死亡率在一些城市为 19.65 / 10 万，在农村为人口恶性肿瘤死亡的第一位，其死亡率在一些农村为22。 65 / 10 万。 我国原发性肝癌的病因主要有乙型肝炎病毒（HBV ）、黄曲霉毒素、饮水污染（藻类毒素等）、丙型肝炎病毒（HCV ）、某些微量元素（如硒）缺乏、酒精性肝硬化和遗 传因素、HBV 和黄曲霉毒素协同作用等。 我国肝癌病理协作组提出将原发性肝癌分为：①块状型：单块状、融合块状、多块状；②结节型；单结节、融合结节、多结节；③小癌型；④弥漫型。原发性肝癌组织学分型为：①肝细胞性肝癌；②胆管细胞性肝癌；③混合型肝癌。纤维板层型肝癌（fibrolamellar carcinoma of liver ）是肝细胞性肝癌的特殊组织学亚型。 高危人群的健康普查（应用AFP 检测和B 超）是发现小肝癌和亚临床肝癌的重要方法。 【临床表现】 1.症状肝癌无明显的早期临床表现，肝区疼痛、腹胀、纳差、乏力、消瘦、腹部肿块等多为肝癌常见的中晚期症状。长时间的发热，上腹部肿块；右上腹突然剧痛而未能证实为胆囊炎、胆结石者；右肩痛按关节炎治疗无效者及不明原因的腹泻等等，应该引起注意。 对高危人群，即乙肝病毒携带者、慢性肝炎和肝硬化者,40岁以上的男性，应及时检测AFP、超声显像、CT等。有条件者应半年左右重复一次。 2.体征 (1)肝肿大：90％以上有肝肿大，质地坚硬，表面及边缘不规则，可触及大小不等的结节或巨块，大多伴有明显压痛，右上部肝癌常可致肝上界上移。左叶肝癌常在剑突下们及肿块。小肝癌常无明显体征。 (2)黄疽：由于肝细胞损害或由于癌块压迫或侵犯胆总管所致。一旦出现黄疽，表明病情已属晚期。 (3)腹水：门静脉主干癌栓引起，因肝癌结节破裂引起的常是血性腹水。在腹水较多时或右上肝癌浸润横隔时可出现右侧胸水。 3.分期肝癌的临床分期按1977年国内制定的分期标准简单明了，易于执行。，－ Ⅰ期：无明显肝癌症状和体征。 Ⅱ期：超过工期标准而无Ⅲ期证据。 Ⅲ期：有明显的恶病质、黄疽、腹水或远处转移者。 国际抗癌联盟(UICC)1997年第5版原发性肝癌TNM分期如下：T1单个结节≤2 cm，无血管侵犯 T2单个≤2 cm，侵犯血管；或多个，局限一叶＜2cm,未侵犯血管；或单个＞2cm，未侵犯血管