小麦硫转运蛋白基因半定量RT_PCR检测方法的建立_陈昕
西北植物学报,2006,26(2):0309—0313
Acta Bot.Boreal.-Occident.Sin.
文章编号:1000-4025(2006)02-0309-05
小麦硫转运蛋白基因半定量RT-PCR
检测方法的建立
陈 昕1,王保莉1*,曲 东2,3,张 燕1
(1西北农林科技大学生命科学学院,陕西杨陵712100;2西北农林科技大学资源环境学院,陕西杨陵712100;3黄土高原土壤
侵蚀与旱地农业国家重点实验室,陕西杨陵712100)
摘 要:为进一步研究干旱胁迫下小麦硫转运蛋白基因(S T)的表达,选用小麦T-Tubulin基因(Ta)为内参照,提取小麦根系总RN A,反转录c DN A,同批异管对2个基因片段进行PCR扩增.通过对P CR体系中M g2+浓度、退火温度及循环次数的优化和对体系重复性、准确性的分析,最终建立了一个稳定、方便的半定量R T-PCR体系.该体系可用于比较不同小麦样品间硫转运蛋白基因的表达,且因为两对引物均垮内含子,其稳定RT-PCR体系,也为实验室建立小麦m RN A反转录体系提供了参考依据.
关键词:小麦;硫转运蛋白;半定量RT-PCR;T-Tubulin
中图分类号:Q343.1+7;S512.1 文献标识码:A
Establishment of the Semi-quantitative RT-PCR System of
Sulphur Transporter Genes in Wheat
CHEN Xin1,W AN G Bao-li1*,QU Do ng2,3,ZHAN G Yan1
(1Colleg e of Life Sciences,North w es t Sci-Tech of Agricultrue and Fores try Univ ersity,Yangling,Shaanxi712100,China;2Col-
lege of Resources and Environment,North w es t Sci-Tech of Ag ricultru e and Fores try Univ ersity,Yangling,Shaanxi712100,Ch i-
na;3State Key Labo ratory of Soil Erosion and Dryland Farming on Loess Plateau,Yang ling,Sh aanxi712100,China)
Abstract:With T-Tubulin gene(Ta)as the inner contro l,the total RN A o f wheat ro ots wa s ex tracted a nd reversely transcribed to fo rm cDN A to further study the ex pressio ns of sulphur transporter genes in wheat suffering droug ht stress;The frag ments of the tw o g enes w ere PCR am plified a t the same cycle num bers at the ex ponential phase o f S T a nd Ta in different tubes.Mg2+co ncentratio n,a nnealing tempera ture a nd cycle number o f PC R sy stem w ere o ptimized analy zed in their repea tability a nd precisio ns,and then a stable a nd conv enient semi-quantitativ e RT-PCR sy stem w as established.This system ca n be used in co mpa ring the ex pressions o f sulphur transpo rter g enes in different wheat materials and its tw o pairs of prim ers are capa-ble of stabilizing the RT-PC R system because bo th of them a re intro n-spanned;In additio n,the system pro-vides a reference fram e to establishing the rev erse tra nscription system of w hea t m RN A.
Key words:w hea t;sulphur transpo rter;semi-quantita tive RT-PC R;T-Tubulin
硫转运蛋白即硫酸盐转运蛋白(Sulpha te transpor ter,ST),是一类主动运输硫酸根时所需的载体蛋白,也是植物体吸收、运输硫元素时的必需蛋白.硫元素是植物生长发育所必需的基本元素之一,
收稿日期:2005-07-19;修改稿收到日期:2005-12-22
基金项目:黄土高原土壤侵蚀与旱地农业国家重点实验室基金项目(10501-121)作者简介:陈 昕(1982-),女(汉族),在读硕士研究生.
*通讯联系人.Co rres pond ence to:W AN G Bao-li.E-mail:b lw ang@https://www.wendangku.net/doc/f07254070.html,
它主要以SO2-4形式被植物吸收,通过硫转运蛋白进入植物体内.基本上所有的蛋白质都含硫,且它对叶绿素形成也有一定影响,植物体内各种含硫物质在原生质构成、能量固定、光合作用、固氮作用、提高植物抗逆性等方面起到非常重要的作用.近年来,由于农业生产的提高增加了单位面积上养分的输出,不含硫或含硫少的肥料的使用量增加,作物秸秆还田少等,导致土壤缺硫现象越来越严重.硫缺乏已成为很多地区限制农业生产的重要因素之一[1],因而研究硫转运蛋白对提高小麦抗逆性和产量有着非常重要的意义.
为了进一步探讨干旱胁迫下硫转运蛋白基因调控机制,有必要建立一种灵敏、简便、特异的半定量检测S T基因表达的方法.逆转录多聚合酶链式反应(RT-RCR)技术法是近年来发展起来的探讨基因转录水平的有效手段[2].因此本实验采用小麦为供试材料,T-Tubulin为内参基因,S T为检测目的基因,应用RT-PCR技术对小麦根系硫转运蛋白基因的表达进行半定量,建立一个特异、稳定的RT-PCR 半定量检测体系,为进一步研究其表达调节机制奠定基础.
1 材料和方法
1.1 实验材料
本实验选用高水肥型小麦郑引1号.
1.2 试 剂
鼠源反转录酶(M-M LV Reve rse tra nscripta se)购自Promega公司,RN A酶抑制剂(RNase inhabitor)购自北京天为时代公司,寡聚引物Olig o-d(T)18和dN TP购自上海生工生物工程技术服务有限公司,Taq DN A Polym erase购自M BI公司.其它化学试剂均为国产.
1.3 PCR引物序列设计
利用Cluastal X对已报道的六倍体小麦中国春的6个硫转运蛋白基因(Sulphate transpo rter g ene, S T g ene)的序列进行比对,利用Primer Premier 5.0设计一对引物ST1和ST2用来扩增同源性较高的约835bp的片段,并将该片段作为预期检测片段,由于内含子的存在,预期基因组扩增产物和cDN A扩增产物相差400bp左右;参考Nem oto 等[3]小麦T-Tublulin基因扩增引物Ta1和Ta2作为半定量RT-PCR内参照的引物,预期基因组扩增产物和cDN A扩增产物相差200bp左右,引物由成都法玛生物公司合成,序列分别为:
ST15′CCC GCT CAT T TC AGT TG T CA3′;
ST25′TTG T TC CTC CTC ATC CCT CA3′;
Ta15′ACC GCC AGC TCT TCC ACC C T3′;
Ta25′TCA C TG GGG CA T AGG AGG AA3′. 1.4 实验材料的培养
选取饱满、籽粒大小一致的小麦种子,用5%次氯酸钠消毒10min,吸胀24h,石英砂上萌发48h 后,在缺硫Hogla nd营养液中光照培养至3叶期. 1.5 根系总RNA的提取及质量检测
参照Trizol试剂说明书方法并加以改进.称取小麦根尖组织100mg,在液氮预冷的研钵中快速研磨,直至无可见颗粒;吸取1m L Trizol于RNase-free的Eppendorf管中,加入研磨好的白色粉末,混匀后室温静置5min;4℃,12000r/min离心1min 后,加入200μL氯仿(相当于1/5Trizol),盖紧离心管盖,剧烈混匀,直至溶液充分乳化成乳白状,无分相现象;4℃,12000r/min离心15min;小心地取出离心管,吸取体积约为Trizol试剂起始加入量一半(400μL)的上层水相于一新RNase-free的离心管中(切忌吸动白色中间相),加入等体积的异丙醇,轻轻颠倒充分混匀,室温放置10min(如无明显沉淀可于-20℃过夜);4℃,12000r/min离心10min,小心弃去上清,沿管壁缓慢加入75%乙醇1m L(切勿触及沉淀),轻轻颠倒洗涤离心管管壁,小心弃去乙醇;再加入75%乙醇1m L,短暂涡旋(使沉淀悬浮于75%乙醇中),4℃,7500r/min离心5min;小心地弃上清,短暂离心,用枪吸去所有上清,在超净工作台中干燥5min使乙醇挥发;加20μL RNase-free水溶解RN A沉淀.取5μL总RN A稀释100倍,测OD值,检验其纯度.取5μL总RN A进行1.0%普通琼脂糖凝胶电泳,检测RN A的完整性. 1.6 反转录反应
参照M-M LV逆转录酶的20μL标准反转录体系,总RN A取2μg,Olig o-dT(100mg/L)取5μL,加ddH2O补足至7μL,70℃水浴10min,冰骤冷5 min后,加混好的5×Buffer4μL、dN TP2μL、RNasin1μL、M-M LV1μL,37℃反应1h,95℃5 mim中止反应.
1.7 PC R反应条件优化
参照Nemo to等[3]PCR体系,以上述合成的cDN A为模板,优化Mg2+浓度,退火温度及循环次数,获得适宜的实验参数,建立能同时稳定扩增S T 和Ta片段的有效的半定量PCR检测体系,并对该体系的重复性与准确性进行检测.
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1.8 PCR 反应产物的检测
分别取10μL 扩增产物于含溴化乙锭的 1.0%琼脂糖凝胶电泳中电泳,电泳结果在紫外灯下用Sy nGene 公司成像系统自带Gene Snap 和Gene-Tools 软件进行成像和荧光密度扫描分析.
2 结果与分析
2.1 目的基因ST 和内参Ta 同时扩增的PCR 条件优化
对Nemo to 等[3]的PCR 体系进行优化.在dN TP 0.1mmo l /L 、Taq 0.03U /μL 、ST1/ST20.2μmo l /μL 、Ta1/Ta 20.2μmo l /μL 和cDN A (2μg RN A 为模板的20μL 反转录体系)取0.5μL 的条件下,分别改变体系中Mg 2+浓度 1.5、1.7、1.9、2.1、2.3mmo l /L (图1),退火温度53、55、57、59、61℃(图2),在同一PCR 体系中分管扩增2片段,PCR 结果在同一电泳体系中检测.如图所示,能同时稳定扩增目的基因S T 和内参Ta 的M g 2+
浓度为1.7m mol /L 和 1.9m mol /L,退火温度为55℃、57℃和59℃
.
图1 不同Mg 2+浓度Ta (579bp )和ST (835bp )PCR 结果
Fig.1 PCR amplifica tio n results o f trails T a (579bp)and S T (835bp)at differ ent M g 2+concentrations
1,2.1.5mm ol /L;3,4.1.7m mol /L;5,6.1.9mmol /L;7,8.2.1mmol /L;9,10.2.3mmol /L;M.DN A marker
2.2 半定量PCR 循环次数的确定
分别在16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36个循环时对2片段进行扩增(图3),电泳结果经凝胶成像系统扫描分析,以各电泳条带的光密度值(光密度曲线峰面积)作为纵坐标,循环次数为横坐标作图(图4).如图所示,S T 在第24个循环后才可被检出,此时内参Ta 已接近平台期,若将二者同管扩增,则ST 的扩增会因为Ta 的竞争受到影响,扩增效率将会降低.因此,为保证扩增体系中2片段的扩增均处于线性期[4]
,决定采用同批异管,且在不同循
环次数时分别取出2片段的方法来同时扩增ST 和
Ta ,S T 的循环次数不超过30循环,而Ta 则在24
循环时就取出.
图2 不同退火温度S T 和Ta 的PCR 结果
1,2.53℃;3,4.55℃;5,6.57℃;7,8.59℃;
9,10.61℃;11,12.63℃;M.DNA marker
Fig.2 PCR amplificatio n results o f ST and Ta a t different annealing tempera ture
图3 不同循环次数下的PCR 结果电泳图谱Fig.3 P CR amplification r esults of the t rails at
different cycle num ber s in electr opho resis
图4 不同循环次数下S T 和Ta 的PCR 结果Fig.4 PCR a mplifica tio n results o f ST a nd
Ta at differ ent cy cle numbe rs
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2期
陈 昕,等:小麦硫转运蛋白基因半定量R T -P CR 检测方法的建立
2.3 体系重复性与准确性检测
对该体系的重复性检测如表 1.S T与Ta条带的光密度值之比为ST的相对表达量进行统计:对比结果显示,光密度取Lg之后再作为统计值可降低光密度扫描系统本身的系统差异;两组cDN A重复PCR带来的批内差异分别为 2.21%和2.11%,总体<3%;凝胶点样差异(对同一扩增样品重复5次点样检测结果差异)<0.2%.最终确定误差范围为:当两样品差异<5%(2倍最大差异[9])时,认为该差异是系统造成的,两样品间差异不明显.
同时对同管扩增的差异(同管扩增2片段与正常情况下分别扩增2片段的差异)进行分析发现,该差异>6%,是本系统批内差异的3倍,因此不能采用同管扩增,只能同批异管扩增S T和Ta.
表1 半定量RT-PCR方法的重复性检测
T able1 Statistic repeatabilty test of the SQ-R T-PC R system
项目Item
统计值
Values us ed in s tatis tic analysis
平均值±标准差(自由度)
M ean±SD(n)CV
(%)
cDN A1
Vol. 1.114±0.253(n=5)22.7 LgV ol. 1.009±0.022(n=5) 2.21
cDN A2
Vol. 1.062±0.226(n=5)21.3 LgV ol. 1.004±0.021(n=5) 2.11
同一产物重复电泳Repeated g el tes t of th e s am e PCR product
Vol. 1.025±0.155(n=5) 1.5 LgV ol. 1.003±0.001(n=5)0.14
同管扩增差异
D ifferences of th e samples amplified in same tub es
Vol. 1.914±1.08(n=2)56.6 LgV ol.0.84±0.055(n=2) 6.55
注:V ol.光密度值;LgVol.光密度值取Lg;cDN A1和cDNA2为同一总RN A分成2份后分别进行反转录得到的.
Note:Vol.Optical density;LgVol.logarithm of the Optical density;cDN A1and cDN A2were ach ieved from the same total RN A by reverse trans crip tion.
3 讨 论
PCR扩增反应是酶促反应,遵循酶促反应定律,开始的循环内扩增产物呈指数累积,产物与模板呈线性关系,半定量RT-PCR技术[5]正是利用产物与模板的这一线性关系,通过扩增产物来对比总RN A中目的基因的表达,该技术已被成功应用于检测多种基因的表达[2～14].但经过一定的循环后, PCR产物不再呈指数累积而进入平台期,因此,为避免平台效应的影响,合适的循环数是PCR半定量方法的关键因素之一.本实验中目的基因与内参基因的扩增动态曲线表明,二者处于线性期的循环次数相差过大,若直接同管扩增,则S T的产物量受到Ta的竞争,扩增效率降低.尝试对Mg2+和引物量等[14]做了调整后再次同管扩增ST和Ta基因,但统计结果发现,由于Ta的扩增过早地进入了平台期,其竞争仍严重影响S T的扩增,其与正常情况下分别扩增2片段的差异(同管扩增差异)>6%,是批内差异的3倍.最终只能放弃同管扩增,选用同批异管扩增,并在不同循环次数下分别取出二产物的方法.
为避免RN A抽提、加样、测量、cDN A合成及PCR反应过程中的某些系统误差和人为误差,本试验选用了在植物体内稳定表达且在干旱[6]及盐离子胁迫初级阶段[7]不受影响的持家基因a-Tubulin片段作为内参,采用反转录与PCR分开进行的两步法RT-PCR,在实验摸索阶段较一步法RT-PC R更为经济和方便,因为每次提取到的总RN A立即反转录成cDN A存放可以尽量避免RN A操作中的降解,而且一次反转录的cDN A模板可供多次PCR 使用,不但节约成本还缩短了实验周期,提高了试验的成功率.
半定量RT-PCR检测体系必须防止混在RN A 中的基因组DN A带来的假阳性.本实验中涉及的两对特异引物均至少跨越2个内含子,使得以cDN A为模板和以基因组DN A为模板扩增时PCR 产物大小差异200～400bp,从而可直接从产物大小上判断模板中有无基因组DN A的污染.加上小麦中a-Tubulin的稳定扩增,本实验除了为进一步半定量检测特定基因m RN A含量建立了良好体系,也为实验室建立小麦m RN A反转录体系提供了参考依据.
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陈 昕,等:小麦硫转运蛋白基因半定量R T -P CR 检测方法的建立
小麦草和生食疗法治疗癌症
小麦草和生食疗法治疗癌症 小麦草和生食疗法是美国麻省理工学院化学博士——现任德州大学安德森医院肿瘤研究所研究员雷久南博士推介的治疗癌症最简便、最有效的方法。 凡癌症患者，若能真心忏悔，戒杀、放生，遵行生食和服用小麦草汁，就是最严重的癌症，一年之内也可能会好。初期患者，最短几个星期就会好。笔者的亲戚、朋友中俱有如法实施而得愈的例子。 下面是我们遵一新加坡医师——雷博士的弟子指导，在为亲戚实施过程中的作法和体会，供读者参考： 一、小麦草疗法。它是以小麦草汁当药，用来口服和直接灌肠。 1．灌肠是清洗肠内毒素。比较实用的方法是：用一个“百事可乐”的空瓶，盛十分之九的凉开水或矿泉水，再用一汤匙小麦草汁兑一玻璃杯“回春水”（小麦泡发酵的水），掺入瓶内，不盖瓶口，放在装有清水的桶内，不让水进入瓶口内，大约两小时以后，盖上瓶盖，在桶内浸十小时（最好晚上准备）。次日早晨，空腹喝完瓶内的水，一气喝不完，停一会再喝，直至喝完。然后仰卧再床上，口里念着：空、空、空、〃〃〃〃〃〃，心里产生意念，想象头是空的，上肢是空的，胸、腹、下肢至脚全是空的，似乎全身都象浸泡在水里一样。这样在床上大约躺20～30分钟，再起床做气功。这是一种在室内做的简易气功甩手运动：不穿鞋、袜，取掉身上的金属物，方法是：双脚分开与肩同宽站着，下肢紧缩，脚趾象爪一样抓地。肛门上收，上身全都放松，舌头轻抵上颚，两眼平视，两手下垂放在身旁，手掌心向后，这时向后慢慢推至70度时就放松，收自然摆回来，每推一次，数一下，初练的人可练一百到两百下，然后渐渐增加到一千下。喝了很多的水，必然小便也多，每次解小便时（大便也一样）必须叩齿（即上下牙咬住），小便时要屙一下，停一下，不可一下屙完。 2．口服方法。开始一汤匙小麦草汁兑半杯“回春水”，两天以后慢慢增加到四分之一杯小麦草汁兑四分之三杯“回春水”。每日服三次（早、午、晚各一次）。
基因突变的检测方法
基因突变的检测方法 基因突变的研已成为当今生命科学研究的热点之一，检测方法也随之迅速发展。人类细胞癌基因的突变类型已如上所述，对于基因突变的检测，1985以前，利用Southern印迹法，可以筛选出基因的缺失、插入和移码重组等突变形式。对于用该法法不能检测的突变，只能应用复杂费时的DNA序列测定分析法。多聚酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）技术是突变研究中的最重大进展，使基因突变检测技术有了长足的发展，目前几乎所有的基因突变检测的分子诊断技术都是建立于PCR的基础之上，并且由PCR衍生出的新方法不断出现，目前已达二十余种，自动化程度也愈来愈高，分析时间大大缩短，分析结果的准确性也有很大很提高。其中包括单链构象多态性（single-strand comformational polymorphism,SSCP）和异源双链分析法（heteroduplex analysis,HA）。下面分别介绍几种PCR衍生技术及经典突变检测方法，可根据检测目的和实验室条件选择时参考。 PCR-SSCP法 PCR-SSCP法是在非这性聚丙烯酰胺凝胶上，短的单链DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同构象，一个碱基的改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变。其基本原理为单链DNA在中性条件下会形成二级结构，这种二级结构依赖于其碱基组成，即使一个碱基的不同，也会形成不同的二级结构而出刺同的迁移率。由于该法简单快速，因而被广泛用于未知基因突变的检测。用PCR-SSCP法检测小于200bp的PCR产物时，突变检出率可达70％-95％，片段大于400bp时，检出率仅为50％左右，该法可能会存在1％的假阳性率。应用PCR-SSCP法应注意电泳的最佳条件，一般突变类型对检测的灵敏度无大的影响，同时该法不能测定突变的准确位点，还需通过序列分析来确定。Sarkar等认为对于大于200bp的片段，用其RNA分子来做SSCP会提高其录敏度。应用PCR-SSCP检测点突变已见报道于人类大部分的肿瘤组织或细胞，如乳腺癌、食管癌、肺癌、胃癌、肝癌、胰腺癌等。检测的基因包括多种癌基因及抑癌基因，也是检测抑癌基因p53突变最常用的方法，仅检测第5-8外显子即可发现85％以上的p53基因突变。由于该法简便快速，特别适合大样本基因突变研究的筛选工作。 异源双链分析法（HA） HA法直接在变性凝胶上分离杂交的突变型一野生型DNA双链。由于突变和野生型DNA形成的异源杂合双链DNA在其错配处会形成一突起，在非变性凝胶中电泳时，会产生与相应的同源双DNA不同的迁移率。该法与SSCP相似，所不同的是SSCP分离的是单链DNA，HA法分离的是双链DNA，也只适合于小片段的分析。但HA对一些不能用SSCP 检出的突变有互补作用，两者结合使用，可使突变检出率提高到近100％。
米粉、小麦、面粉的感官鉴别
xx、小麦、面粉的感官鉴别 一、xx的鉴别 1、xx的形成工艺 米粉是用特等米或加工精度高的米为原料，经过洗米、浸泡、磨浆、搅拌、蒸粉、压条、干燥等一系列工序加工制成的米制品。 2、xx质量的鉴别 色泽： 洁白如玉，有光亮和透明度的，质量最好，无光泽，色浅白的质量差。 状态： 组织纯洁，质地干燥，片形均匀、平直、松散，无结疤，无并条的，质量最好。 气味： 无霉味，无酸味，无异味，具有米粉本身新鲜味的质量最好。如果有霉味和酸败味重，不得食用。 加热： 煮熟后不糊汤、不粘条，不断条，质量最好，有韧性，清香爽口，色、香、味、形俱佳。 二、小麦的鉴别 小麦是小麦属植物的统称，是一种在世界各地广泛种植的禾本科植物，最早起源于中东的新月沃土地区。小麦是世界上总产量第二的粮食作物。 1、小麦的分类 根据对温度的要求不同，分冬小麦和春小麦两个生理型，不同地区种植不同类型。在中国黑龙江、内蒙古和西北种植春小麦，于春天3～4月播种，
7～8月成熟，生育期短，约100天左右；在辽东、华北、新疆南部、陕西、长江流域各省及华南一带栽种冬小麦，秋季10～11月播种，翌年5～6月成熟，生育期长达180天左右。 按照面筋含量，小麦分为软小麦和硬小麦两种。“高筋度硬小麦”(hard wheat)的胚乳中筋度高，而“低筋度软小麦”(soft wheat)的胚乳中筋度低。碾磨方法也大致分为两种：１）只保留胚乳，丢弃胚芽和麦麸； ２）保留谷物的所有部分。 不同的碾磨方法和不同小麦品种会产生不同的面粉。 2、小麦的质量鉴别 色泽鉴别 方法： 取样品在黑纸或白纸上撒一薄层，仔细观察其外观 良质小麦： 去壳后小麦皮色呈白色、黄白色、金黄色、红色、深红色、红褐色，有光泽次质小麦： 色泽变暗，xx 劣质小麦： 色泽灰暗或呈灰白色，胚芽发红，带红斑，无光泽 外观鉴别 良质小麦： 颗粒饱满、完整、大小均匀，组织紧密，无害虫和杂质。 次质小麦：
基因表达的检测的几种方法
基因表达检测的最终技术目标是能确定所关注的任何组织、细胞的 RNA的绝对表达量。可以先从样本中抽提RNA，再标记RNA， 然后将这些标记物作探针与芯片杂交，就可得出原始样本中不同 RNA的量。然而用于杂交的某个特定基因的RNA的量与在一个 相应杂交反应中的信号强度之间的关系十分复杂，它取决于多种 因素，包括标记方法、杂交条件、目的基因的特征和序列。所以 芯片的方法最好用于检验两个或多个样本中的某种RNA的相对 表达量。样本之间某个基因表达的差异性（包括表达的时间、空 间特性及受干扰时的改变）是基因表达最重要的，而了解RNA 的绝对表达丰度只为进一步的应用或多或少地起一些作用。 基因表达的检测有几种方法。经典的方法（仍然重要）是根据在 细胞或生物体中所观察到的生物化学或表型的变化来决定某一 特定基因是否表达。随着大分子分离技术的进步使得特异的基因 产物或蛋白分子的识别和分离成为可能。随着重组DNA技术的 运用，现在有可能检测．分析任何基因的转录产物。目前有好几 种方法广泛应用于于研究特定RNA分子。这些方法包括原位杂交．NORTHERN凝胶分析．打点或印迹打点．S－1核酸酶分 析和RNA酶保护研究。这里描述RT-PCR从RNA水平上检查 基因表达的应用。8 f3 f- |2 L) K) b7 ]- ~- | RT-PCR检测基因表达的问题讨论
关于RT-PCR技术方法的描述参见PCR技术应用进展，在此主要讨论它在应用中的问题。理论上1μL细胞质总RNA对稀有mRNA扩增是足够了（每个细胞有1个或几个拷贝）。1μL差不多相当于50－100，000个典型哺乳动物细胞的细胞质中所含RNA的数量，靶分子的数量通常大于50，000，因此扩增是很容易的。该方法所能检测的最低靶分子的数量可能与通常的DNAPCR相同；例如它能检测出单个RNA分子。当已知量的转录RNA（用T7RNA聚合酶体外合成）经一系列稀释，实验结果表明通过PCR的方法可检测出10个分子或低于10个分子，这是反映其灵敏度的一个实例。用此技术现已从不到1个philadelphia染色体阳性细胞株K562中检测到了白血病特异的MRNA的转录子。因此没必要分离polyA+RNA，RNA/PCR法有足够的灵敏度来满足绝大多数实验条件的需要。 7 H+ F& _* S6 W( a8 p: [, @- d, { 将PCR缓冲液同时用于反转录酶反应和PCR反应，可简化实验步骤。我们发现整个反应过程皆用PCR缓冲液的结果相当于或优于先用反转录缓冲液合成CDNA，然后PCR缓冲液进行PCR扩增循环。当然，值得注意的是PCR缓冲液并不最适合第一条DNA链的合成。我们对不同的缓冲液用于大片段DNA 合成是否成功还没有进行过严格的研究。
自从种了芽苗人家芽苗菜-我再也没有买过菜
芽苗人家芽苗菜，是各种谷类、豆类、树类的种子培育出可以食用的“芽菜”，也称“活体蔬菜”。 自然生长：不打农药、不必化肥、不必生长激素 养分安康：易吸收、促进消化、能改善慢性疾病 油腻味美：可榨汁、可凉拌、可清炒，鲜嫩可口 这麼好的芽苗菜，看看都有哪些品种，养分价值又有多高呢？ 养分价值 品种 ▼豌豆苗 ▼小麦草 ▼空心菜 ▼萝卜芽苗菜 ▼荞麦苗 ▼香椿芽苗菜
芽苗菜品种这麼多，而且养分液高，但是看到商场里的价钱，就…… 不过我们可以本人在家入手种哦！ 后期预备—选种 1、人选，挑选个大、丰满，无虫眼、无损伤的种子； 2、挑选，用大眼洗菜筐筛筛，留下好的、平均的； 3、水选，将种子放在水里，留下沉底的，飘在水面上的是瘪种； 4、风选，用簸箕扬起来挑选。 后期预备—容器 洗菜筐、塑料餐盒、泡沫盒、脸盆、菜盆，只需是平底的都可以，底部没有筛眼的，要钻一些漏水孔，一定要清洗洁净、无油污。 纸巾可用餐巾纸、白纸、毛巾、纱布、包装纸，脱脂棉，稍薄一些洁净无油污的都可以。 后期预备—盆底基质 虽爲水培，除了用湿纸巾，还可采用不同的基质，来坚持湿度。 1、在铺好的纸巾上铺上一层薄薄的珍珠岩颗粒，再平摊种子，加盖纸巾，一天只需浇2次水，早晚各一次。 2、铺上薄海绵再收获，一天只需浇水1次。 3、也可以用洗净的河沙做基质。
芽苗菜种植示例 豌豆水培 浸种催芽：种子经常带有细菌，普通从市面买回的种子，用温水浸泡法就足够了。 消毒时，将种子放入55度左右的热水里，疾速搅动，待水温降至30度时，再泡8个小时。 收获：将泡发好的种子平均地放入筐里摊平，不要叠加，再盖上一层纸巾，再浇水。 管理：放在黑暗通风处，也可以在下面再盖上一层不透光的东西，每天用喷壶喷水3-4次。 待长出芽苗时，可以放在有光线的中央（室内可见光即可），不能间接晒太阳。 采收：待芽苗长到10-15厘米左右，就可以采收食用了，剪的时分从根部下面留一节，几天后会再长出芽苗。不要等叶片张开后再采收，曾经纤维化的叶片，口感不佳，很难嚼烂。 花生河沙培 种类选择：选择小粒花生种类，要用颗粒丰满、大小分歧、无损伤、发芽势强、发芽率高的当年产的新种。 浸种：先将种子停止淘洗，将浮在水面的种皮和杂质去掉。然后放在20℃的温水中浸泡12-17小时，两头淘洗换清水1次。
(3)理解基因突变的检测方法
第十章基因突变 一、教学目的与要求： （1）了解基因突变的类型和性质、特征 （2）掌握基因突变分子机理和诱变因素的作用方式 （3）理解基因突变的检测方法 (4) 掌握基因突变的修复途径 二、教学重点、难点、疑点： 1.突变的概念、类型和性质 2.诱发突变的分子基础 3.诱发突变与人类癌症 4.生物体基因突变的修复机制 5.果蝇基因突变的检出 6.植物基因突变的检出 7.人类基因突变的检出 [解决方法] （1）通过出示基因结构变化的示意图，加深学生对基因突变内涵的理解。 （2）课堂教学中不断提出问题，让学生通过概念的运用达到巩固概念和知识迁移的目的。 2．教学难点及解决办法 基因突变的原因。 [解决办法] 对人类镰刀型细胞贫血症病因结合图解进行分析，使学生真正明白基因突变的原因——DNA复制过程也可能发生差错，基因中个别碱基的变化，就会造成性状改变。 3．教学疑点及解决办法 为什么说基因突变是变异的主要来源？ [解决办法]讲明基因突变与基因重组的区别，联系实际举例。 三、教学方法设计： 四、教具或教学手段：多媒体课件 五、教学过程与板书设计：
第一节基因突变的概念和特征 一、基因突变的概念及类别 1、基因突变：指在染色体上一定位点基因内部的化学变化引起的突变基因突变：指染色体上一定位点基因内部的化学变化引起的突变 2、类别 隐性突变：A a 显性突变：a A 自发突变—外界环境条件的自然作用或生物体内的生理生化变化而产生的突变 诱发突变—在专门诱变因素影响引起的突变，为“诱发突变” 形态突变型—可见突变：指造成外形改变的突变型 至死突变型—能造成个体死亡或生命力明显下降的突变型 条件突变型—在一定条件下有致死效应 3.一般特征 ①突变的频率：指生物体在每一世代中发生突变的机率，或者在一定时 间内突变可能发生的次数。 高等植物 10-5— 10-8 细菌和噬菌体 10-4—10-10范围大、突变频率比动植物高 例如：氨基酸过程中三种疾病是由三种基因突变导致酶发生变化引起的，有一定的突变频率 苯丙氨酸羟化酶缺乏导致苯丙酮尿症；尿黑尿酸氧化酶缺乏会产生尿黑酸尿症；酪氨酸酶缺乏导致白化病 苯丙氨酸羟化酶 苯丙酮酸苯丙氨酸酪氨酸 积累尿黑尿酸氧化酶 酪氨酸酶 苯丙酮尿症尿黑酸黑色素
第三节 小麦品质的检验方法
第三节小麦品质的检验方法 一、籽粒硬度的测定（研磨时间法） (1)适用范围本方法适用于快速测定小麦及其他谷物籽粒的硬度。 (2)方法提要本方法利用小麦籽粒的研磨特性来测定其硬度。因为硬麦研磨后得到粗的颗粒粉易于从磨体间隙中流出，而软麦研磨后得到细的颗粒粉不易从磨体间隙中流出，故研磨一定数量不同硬度的小麦所用时间不同，硬麦时间短，软麦时间长。此方法称为研磨时间法(ground time)，简称GT法，以秒数表示小麦的硬度。数值越小，籽粒越硬。 (3)仪器设备使用国产ZL Y-1型自动粮食硬度计（牡丹江市机械研究所和北京市粮食科，学研究所联合研制）或联邦德国布拉本德( Brabender)公司制造的微型硬度计(micro-hardness Tester)。 ZI_Y-1型自动粮食硬度计的结构和技术参数：‘ ①结构仪器包括主机和天平两个组成部分。主机由锥形磨体，磨隙调节环，传动机构，电器控制，时间显示器等部分组成，如图2-2所示。 ②技术参数厂_一 380V：圆锥50Hz磨隙可调o．0～1.50mm。电源380V±10%，50Hz，具有水冷却系统可保证磨体工作温度稳定（要另配恒温水浴或使用自来水龙头供水）。 天平：称量范围0-20g，精度±0．Olg。 时间测量：液晶数系显示000.0～999. 9s，精度±0.1s． ③安装。将仪器从包装箱中取出，将底座⑩与主机用6个M8螺钉连接起来，将电源导线与天平信号导线分别接入相应的插孔，天平放在主机下部。将仪器安装在靠近水龙头的地方，但不得靠近振动大的振源，以防影响仪器精度。使用前检查仪器是 (4)样品制备选取有代表性的小麦样品种子，去杂后按四分法缩分，取样量不得少于30g。样品种子要干燥，含水量相对一致。 (5)测定步骤 ①接通电源，将电源开关(12)置于“l”的位置，此时电源开关上指示灯亮，液晶显示器⑤显示数字，天平上的取少灯(13)亮。 ②将天平的一个托盘对准仪器磨体的下斜口，并调整天平的水平位置。在另一天平托盘上放4g砝码。 ③将磨隙调节环的螺丝③放松，把刻度调节到6．O的位置，拧紧固定螺丝。 ④将仪器后面的冷却水管分别与恒温水浴的出水口和入水口连接，或与自来水龙头连接，向仪器通入恒温水20min。 ⑤在正式测定样品前，为了预热和清理仪器，取非供试小麦20g，投入进料口④ 中，按下磨起动钮⑧，研磨完后，按下磨停止钮⑨，使仪器处于待测工作状态。 ⑥按下液晶显示器清零钮(14)使显示器显示ooo．O。 ⑦用精度为0. lg的天平（用户自备）称量6g供试样品，放入仪器进料口④中。 按下起动钮⑥，磨体开始转动，计时器也开始工作。当粉碎物由磨体下口流人天平托(PSD）。此法比较准确，应用最多。研磨功耗法使用硬度一结构仪测定研磨小麦时所需要的力和功，需与粉质／阻力测定仪( farinogranh／resistograph)配合使用。此法更为精确，但用样量大，每次测定需要50g，且费工时。研磨时间法即本书引用的方法，其准确性较差，但有快速，微量的优点，适于大批样品，特别适于育种工作者使用。d．近红外法，它可以快速测定谷物的蛋白质、脂肪、水分含量等。在1680nm处的反射光密度与研磨时间法的GT值或研磨细度法的PSI值都有较好的相关性，因此可用来测定小麦的硬度，已有应用的报道。 ③用研磨时间法测定小麦硬度，其结果会受到样品含水量、环境温度和湿度等的影响。
小麦春季管理技术要点
年县小麦春季管理技术要点 县农业科学研究所副研究员 县是小麦生产大县，小麦常年播种面积万亩左右，因此，小麦生产事关县粮食生产大局，事关农民增收农业增效。去年全县小麦播种期间，土壤墒情好，小麦出苗齐全，苗情较好，但由于部分田块播种早、播量大，出现旺长现象，还有部分麦田由于去年月底持续阴雨播种较晚，导致麦苗素质较差，因此，当前麦田管理应根据具体情况，抓住时机、早促、早管、巧管，分类指导，特别对于旺长麦田和弱苗田，更要立足一个“早”字，抓好一个“促”字。因苗管理，合理运筹肥水，促进苗情转化升级为壮苗，为多成穗、成大穗打好基础，确保丰产丰收。那么，小麦的春季管理一般分为返青—抽穗期管理和抽穗—成熟期管理这样两个阶段。 1、返青抽穗期管理：‘ 管理目标：因地因苗分类管理，促弱控旺转壮，保苗稳健生长，构建高质量群体，培育壮杆大穗，搭好丰产架子。 1.1、看苗管理： 1.1.1、对于整地质量差，亩群体小于万头、长势弱的麦田追肥应分两次进行，第一次在返青期尽早趁雨雪天或浇水时亩追尿素—公斤，同时配施磷酸二氢钾公斤左右，以促弱转壮，巩固
冬前分蘖，争取春季多分蘖；第二次在拔节后期亩追尿素—公斤，为多成穗、成大穗奠定基础。 1.1.2、对于生长正常、群体适宜、底肥充足的麦田，应本着氮肥后移的原则，在返青起身期不追或少量追施肥料，拔节期亩追尿素—公斤，同时配施磷酸二氢钾公斤。 1.1.3、对于有旺长现象、群体偏大、冻害较轻的麦田，应先控后促，追肥时间推迟至拔节后期，一般亩追尿素—公斤，同时配施磷酸二氢钾—公斤。 1.1.4、对于主茎及大分蘖受冻害较为严重的麦田，要加大追肥量，亩追尿素—公斤，同时配施磷酸二氢钾—公斤。 1.1.5、对于播期早，播量大，有旺长趋势的麦田，如群体过大，没有镇压或镇压不佳且出现倒伏风险时，应及时采取化控防倒伏措施，可在起身期（倒叶抽出）前，每亩用多效唑湿性粉剂—克或壮丰胺—毫升，加水—公斤均匀喷洒，控制旺长、防止倒伏。 1.2、防治病虫草害： 重点防治麦田草害和纹枯病，挑治麦蚜、麦蜘蛛、补治小麦全蚀病。 1.2.1、早控草害：对冬前未能及时除草，而杂草又重的麦田，此期应及时进行化除。播娘蒿、荠菜发生较重的田块用苯磺隆有效成分1.0克加水公斤喷雾；泽漆、猪殃殃、婆婆纳、播娘蒿、荠菜、繁缕较重地块，每亩用二甲四氯钠盐水剂毫升使它隆
油草种植的技术
油草种植的技术 第一，光照和土壤：大叶油草喜充足阳光，也较耐荫，是很好的疏林草坪草。在稀疏乔木下种植，上有树木遮荫，下有草，是供游 人休息活动的最佳场所。大叶油草对土壤要求不严，在冲积土和较 肥沃的沙壤土上生长最好，在干旱沙土等较干燥环境下生长不良。 第二，修剪：因为大叶油草匍匐茎蔓延迅速，草坪会变得密集而高，而且秋季会开出高而粗糙的花穗，所以作为休息活动草坪、疏 林草坪和运动场草坪，必须根据具体的情况进行必要的修剪。 第三，浇水：作为进行休息活动用的草坪，经常受践踏，而且地毯草的根系浅，不大耐旱，所以要让草恢复和生长得好，在干旱时 要注意浇水。 第四，施肥：作为活动用南方草坪，由于践踏较频繁，为了让大叶油草坪恢复和生长快，在春夏秋三季可各干施一次氮肥，每100 平方米150克，施后立即浇水。对于受损太严重的草坪，应当暂时 禁止游人再进入，让其恢复良好。 千金子，一年生草本，高30～90厘米。根细长须状，簇生。秆 丛生，直立或基部稍倾斜，节明显，节间长，着地之节处，易再生根。叶片扁平或多少卷折，线形，长7～25厘米，宽0.3～0.6厘米，先端渐尖，全缘，稍粗糙，叶鞘无毛，叶舌长0.1～0.2厘米，膜质，多细裂成纤毛状。枝梢生圆锥花序，长10～30厘米，分枝及主轴均 微粗糙，分枝长达6厘米;小穗绿白色至带紫色，长0.2～0.4厘米，具花3～7朵;颖膜质，不等长，具1脉，背脊粗糙;外稃具3脉，先 端锐尖，无毛或下部具短毛;花药长约0.5毫米。颖果，椭圆形，长 约0.1厘米。花、果期8～11月。 该草适于热带和亚热带气候，喜光，也较耐阴，再生力强，亦耐践踏。对土壤要求不严，能适应低肥沙性和酸性土壤，在冲积土和 肥沃的砂质壤土壤上生长最好，但在干燥的高丘上生长欠佳。由于 匍匐茎蔓延迅速，每节均能产生不定根和分蘖新枝，因此侵占力强。
基因突变的检测方法(完整资料).doc
此文档下载后即可编辑 基因突变的检测方法 基因突变的检测方法 基因突变的研已成为当今生命科学研究的热点之一，检测方法也随之迅速发展。人类细胞癌基因的突变类型已如上所述，对于基因突变的检测，1985以前，利用Southern印迹法，可以筛选出基因的缺失、插入和移码重组等突变形式。对于用该法法不能检测的突变，只能应用复杂费时的DNA序列测定分析法。多聚酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）技术是突变研究中的最重大进展，使基因突变检测技术有了长足的发展，目前几乎所有的基因突变检测的分子诊断技术都是建立于PCR的基础之上，并且 由PCR衍生出的新方法不断出现，目前已达二十余种，自动化 程度也愈来愈高，分析时间大大缩短，分析结果的准确性也有很大很提高。其中包括单链构象多态性（single-strand comformational polymorphism,SSCP）和异源双链分析法（heteroduplex analysis,HA）。下面分别介绍几种PCR衍生技术及经典突变检测方法，可根据 检测目的和实验室条件选择时参考。 PCR-SSCP法PCR-SSCP法是在非这性聚丙烯酰胺凝胶上，短的单链DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同构象， 一个碱基的改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变。其基本原理为单链DNA在中性条件下会形成二级结构，这种二级结构依赖于其碱基组成，即使一个碱基的不同，也会形成不同的二级结构而出刺同的迁移率。由于该法简单快速，因而被广泛用于未知基因突变的检测。用PCR-SSCP法检测小于200bp 的PCR产物时，突变检出率可达70％-95％，片段大于400bp时，检出率仅为50％左右，该法可能会存在1％的假阳性率。应用PCR-SSCP法应注意电泳的最佳条件，一般突变类型对检测的灵敏度无大的影响，同时该法不能测定突变的准确位点，还需通过
全套感官相关标准
感官检验和评价相关标准导论及总则 GBT 10220-2012 感官分析方法学总论 GBT 10221-2012 感官分析术语 GBT 13868-2009 感官分析建立感官分析实验室的一般导则 GBT 21172-2007 感官分析食品颜色评价的总则和检验方法 GBT 25006-2010 感官分析包装材料引起食品风味改变的评价方法 GBT 29604-2013 感官分析建立感官特性参比样的一般导则 GBT 29605-2013 感官分析食品感官质量控制导则 方法标准 GBT 12313-1990 感官分析方法风味剖面检验 GB 12314-1990 感官分析方法不能直接感官分析的样品制备准则 GB 12316-1990 感官分析方法“A”-“非A”检验 GBT 12310-2012 感官分析成对比较检验 GBT 12311-2012 感官分析三点检验 GBT 12315-2008 感官分析方法学排序法
GBT 15549-1995 感官分析方法学检测和识别气味方面评价员的入门和培训 GBT 16860-1997 感官分析方法质地剖面检验 GBT 16861-1997 感官分析通过多元分析方法鉴定和选择用于建立感官剖面的描述词 GBT 17321-2012 感官分析方法二-三点检验 GBT 19547-2004 感官分析方法学量值估计法 GBT 22366-2008 感官分析方法学采用三点选配法（3-AFC）测定嗅觉、味觉和风味觉察阈值的一般导则 GBT 12312-2012 感官分析味觉敏感度的测定方法 GBT 12312-2012 感官分析味觉敏感度的测定方法 评价员管理 GBT 23470.1-2009 感官分析感官分析实验室人员一般导则第1部分：实验室人员职责 GBT 23470.2-2009 感官分析感官分析实验室人员一般导则第2部分：评价小组组长的聘用和培训 GBT 16291.1-2012 感官分析选拔、培训与管理评价员一般导则第1部分：优选评价员 GBT 16291.2-2010 感官分析选拔、培训和管理评价员一般导则第2部分：专家评价员 食品感官标准（粮油） GBT 14611-2008 粮油检验小麦粉面包烘焙品质试验直接发酵法
小麦后期管理技术要点
小麦后期管理及花生栽培技术 第一节、小麦后期管理 中后期管理要以延长叶片功能期、稳定亩穗数、增加穗粒数、提高千粒重、优化品质为主攻方向。现提出如下管理措施： 1.补施灌浆肥：小麦抽齐穗后（5月上旬）结合浇水亩追施尿素4—5公斤，对于增加穗粒数，提高千粒重效果明显。 2.叶面喷肥：小麦叶面喷肥可延长叶片功能期，保持根系活力，防止早衰，抵御干热风危害，增加穗粒数，提高千粒重。具体方法是在孕穗至灌浆期，亩用磷酸二氢钾0.15公斤加尿素0.5公斤加硫酸锌0.1公斤或天丰素8克对水50公斤喷洒叶面，间隔7天喷洒一次，提高千粒重，预防干热风。 3.以锈病、白粉病、赤霉病为主的病害防治：白粉病一般发生在4月中下旬，发现有发病中心的麦田亩用12.5%禾果利可湿性粉剂20—30克对水50公斤及时喷雾防治；加强条锈病监测，发现发病中心立即施药防治，方法同防治白粉病；赤霉病以预防为主，小麦抽穗期亩用50%多菌灵可湿性粉剂100克，对水40—50公斤喷雾，扬花后再喷一遍。 4.以吸浆虫、麦穗蚜为主的虫害防治：发生吸浆虫地块要搞好蛹期防治和穗期的成虫补治。方法是：在4月下
旬亩用50%辛硫磷乳油或40%甲基异柳磷乳油300毫升加水5公斤拌干细沙土20公斤顺垄撒施，撒后及时浇水。抽穗后，当两手扒开麦垄一眼能看见2-3头成虫时，亩用50%辛硫磷乳油50毫升或5%高效氯氰菊酯乳油25毫升加水30—40公斤喷雾防治成虫，间隔2—3天喷一次，连喷3—5次。当百株有蚜500头时，亩用25%氰戊氧乐乳油50毫升或25%吡蚜酮可湿性粉剂20克对水40-50公斤喷雾防治。 5.适时收获：蜡熟中后期及时收获,强筋小麦分品种单收、单打、单贮,防止机械混杂，降低小麦品质。 第二节、花生栽培技术 1.平整土地 花生是地上开花，形成果针后钻到地里结果的经济作物。适宜种植在疏松的沙质土、油沙土上。种花生的地块要深翻，结合翻地每公顷施优质农家肥30-40吨，翻后镇压1-2遍。有条件的地方可以先灌水，然后把农肥、化肥混合施入垄沟，起垄镇压，以备适时播种。注意，花生喜欢生茬，不宜重茬和迎茬。较好的前茬作物是玉米、谷子和高粱。 2.栽培品种 花生要高产，良种是基础。适合本区种植的花生品种主要包括扶花系列品种与吉扶系列品种（俗称四粒红）。生育期在110－120天左右。选用果大饱满、形状整齐、无破碎的荚果作种。在剥壳前要晾晒1-3天，剥壳后进一
家庭种植小麦草的简便流程如下
家庭种植小麦草的简便流程如下： 0、浸种。将小麦种用清水（自来水即可）浸泡12－24小时。 1 、播种。将小麦草种子均匀撒播到铺垫有保湿纸的育苗盘中，散平不重叠为宜。保湿纸用质量好点的卷纸（三四层）即可；育苗盘可以是盘子、水果篮、洗菜筐，奶粉盒、牛奶箱（剪至4.5厘米高）等。 2、洒水。用喷水壶或毛刷蘸水均匀喷洒，水要充分浸湿纸巾，但不积水或有少许积水。
如下图： 4、每天继续喷洒2－3次清水，第四天如下图：
5、此时可不再覆盖报纸，充分见光，第五天长势如下图： 6、每天继续喷洒2－3次清水，第六天如下图：
继续洒水，第七天如下图： 继续洒水，第八天如下图： 第九天如下图：
第十天如下图： 第十一天图： 哈哈，可以采收了！当芽长到10-12厘米，刚顶心叶而心叶又未钻出时，即可采收。
以上图片均由店主卖菜翁小伙100%实物拍摄，盗图必究！ 小麦草榨汁法: 将小麦草离根部约1厘米以上部分采收下来，用清水洗净，然后把水沥干。 小麦草压汁可用、绞肉机、蒜捣子等。另外将洗净的小麦草直接放入口中咀嚼，吞下草汁，吐出草渣，更是简便方法。 或将已洗好的小麦草用布包起来放在砧板上或木板上，用菜刀背敲打之后，拧出汁来。如此反复敲打及拧汁3次后把包布打开，倒少许温开水使小麦草渣湿润后再包起来敲打拧汁。再一次打开包布加少量冷开水敲打拧汁后即可饮用，但是这种方法既费时费力，所能得到的小麦草汁分量也不太理想。 也有人用果汁机打汁，要将速度调在最低速，将100克的小麦草汁加350毫升的水，约打30秒至1分钟，打匀过滤后方可饮用。 饮用法: ①小麦草在冰箱中，能够保持一星期的有效成分。但是榨出来的小麦草汁要即刻饮用。因为小麦草汁的有效成分，只能保持30分钟。 ②小麦草汁略带草味，可以添加些蜂蜜、水果汁、菜汁与其他饮料加以冲淡。最好不加糖，因其本身已有天然的甘醇和芳香。 ③每天饮用85～170毫升新鲜小麦草汁便可以增加抵抗力，应付现代生
基因突变检测多少钱检测方法是什么
基因突变检测多少钱检测方法是什么 一代测序法（Sanger法）： 科学家Sanger，于1977年建立，他本人也因此而获得了诺贝尔奖。该技术至今已用 三十多年，现在已相当成熟完善。人类基因组计划的测序工作就是使用该项技术完成的， 现在***的仪器是美国ABI公司的***3730型全自动遗传分析仪，是经过国际和国家认证的仪器，可重复性达到100%，是亲子鉴定和法医鉴定的专用仪器。该方法是目前基因检测的国际金标准。缺点是通量小，适合少量样本，可进行个性化位点检测，成本极高，比芯片 或高通量检测高100倍。 Taqman法： 准确性好，适合于大量样本、少量位点，价格贵，缺点是不能读出序列，不太直观。 质谱法： 准确性较好，缺点只能读出质量数据，不能读出序列，对于缺失和插入突变无法读出，但这种突变更加可怕，适合于大量样本、多位点（最多能检测25个位点），所以可能会 出现少量假阳性和假阴性。 二代基因检测芯片法： 适合于超多位点，大量样品检测和科研参考，每个样本做几百个位点和做几千个位点 的检测成本，相差无几，最大优点是成本低廉，一个位点的价格只相当于一代测序价格的1%，缺点是出来的大量数据，可信度不高。 我们都知道“是药三分毒”，癌症患者的过度治疗会造成患者的器脏损伤，甚至化疗 整个过程费钱费力却“不讨好”，所以进行在进行治疗之前先进行基因测序检测，会让靶 向药物治疗事倍功半。 肺癌的靶向药基因检测，现在很多公司都可以做，医院基本上也是外送公司做，看你 检测几个几个基因，一般不会超过7200，一般检测就是EGFR,融合基因ALK,ROS1，C-MET，中源协和基因检测。 一般的，基因检测是通过血液、其他体液、或细胞对DNA进行检测的技术。 基因检测可以诊断疾病，也可以用于疾病风险的预测。疾病诊断是用基因检测技术检 测引起遗传性疾病的突变基因。目前应用最广泛的基因检测是新生儿遗传性疾病的检测、 遗传疾病的诊断和某些常见病的辅助诊断。目前有1000多种遗传性疾病可以通过基因检 测技术做出诊断。
特定基因表达水平的检测
特定基因表达水平的检测（试剂制备、操作步骤和注意事项）2010-01-10 23:19:59 来源：易生物实验浏览次数：192 网友评论0 条 Northern杂交也采用琼脂糖凝胶电泳，将分子量大小不同的RNA 分离开来，随后将其原位转移至固相支持物（如尼龙膜、硝酸纤维膜等）上，再用放射性（或非放射性）标记的DNA 或RNA 探针，依据其同源性进行杂交，最后进行放射自显影（或化学显影），以目标RNA 所在位置表示其分子量的大小，而其显影强度则可提示目标RNA 在所测样品中的相对含量（即目标RNA 的丰度）。 关键词：基因表达 RNA -gel blot analysis 或Northern Blot 继分析DNA 的Southern杂交方法出现后，1977年Alwine等人提出一种与此相类似的、用于分析细胞总RNA 或含poly A尾的RNA 样品中特定mRNA 分子大小和丰度的分子杂交技术，这就是与Southern相对应而定名的Northern杂交技术。这一技术自出现以来，已得到广泛应用，成为分析mRNA 最为常用的经典方法。 与Southern杂交相似，Northern杂交也采用琼脂糖凝胶电泳，将分子量大小不同的RNA 分离开来，随后将其原位转移至固相支持物（如尼龙膜、硝酸纤维膜等）上，再用放射性（或非放射性）标记的DNA 或RNA 探针，依据其同源性进行杂交，最后进行放射自显影（或化学显影），以目标RNA 所在位置表示其分子量的大小，而其显影强度则可提示目标RN A 在所测样品中的相对含量（即目标RNA 的丰度）。但与Southern杂交不同的是，总R NA 不需要进行酶切，即是以各个RNA 分子的形式存在，可直接应用于电泳；此外，由于碱性溶液可使RNA 水解，因此不进行碱变性，而是采用甲醛等进行变性电泳。虽然North ern也可检测目标mRNA 分子的大小，但更多的是用于检测目的基因在组织细胞中有无表达及表达的水平如何。 一、试剂准备（易生物试剂购销平台https://www.wendangku.net/doc/f07254070.html,/yp/product-list-43.html） 1、0.5M EDTA: EDTA16.61g加ddH2O至80ml, 调pH至8.0, 定容至100ml。
水培芽苗菜种植
水培芽苗菜种植步骤：7-15天可以吃！营养丰富，超越任何蔬菜，被誉为天然维生素长寿菜！方法温度决定发芽率！ 种子回去泡8-12个小时，香椿泡24个小时，先清洗干净种子，用最大号的一次性水杯或者碗放一半或者1/3种子再装满水，4-6小时换一次水保持种子里的氧气，泡种子时可以少加一点白酒，给种子消毒，促进发芽，防止后期霉变.用育苗盘或者底部带孔的洗菜筐里铺2-3层育苗纸或者珍珠岩，喷湿，铺种子不能太密不能重叠，上面盖1-2层育苗纸喷湿，放在黑暗地方避光发芽，每天早中晚喷一次水。冬季室温低的可以盖毛巾保暖。夏天在盘子边放几瓣蒜防虫，开始几天长的白色小毛毛是根须，不是坏掉了，等苗长到3-5厘米了去掉上面的纸，见光，在室内长到8-10厘米的剪掉吃,长太高了下面的老了，不好吃了，炒鸡蛋，做汤，红烧炒肉都可以，用开水煮一下凉拌。室温高时注意通风透气，盘子底下不要积水，积水种子会坏掉。一般的7-10天可以吃了，豌豆摘上面的嫩苗吃，可以摘2-3次，其他的只吃一次。有的长的快，长的高，有的长的矮，但是营养价值各不相同。豌豆，小麦也可以种土里多摘几次上面的嫩苗吃，其他一次。香菜要先把种子压裂缝，再泡！香椿比豌豆萝卜发芽慢，20度以上，5-10天发芽，20多天可吃，别着急.黄豆芽绿豆芽要一直遮光到收获。 萝卜，豌豆，麻豌豆，空心菜，荞麦，油葵，黑豆，小麦（榨汁），这些长的快点，高点，其他的长的矮点，营养价值各不相同！豌豆麻豌豆黑豆100克种一盘，其他25-50克种一盘。一定要按店里的香椿介绍种！网上说松柳是山黧豆有毒的。建议不要买松柳。没贴标签的香菜是淡黄色圆粒，黑豆是黑色豆子，油葵是黑色小瓜子，板蓝根是黑色叶子状，其他都有标签。 小麦汁属于碱性食物提高免疫力，纤维质促进消化，并含有一种特殊的抗癌防癌物质A！铺纸水培7-10天收1-2次！种土里可以收2-3次！小麦草一盘用大约60克小麦，1斤种9盘，7-10天收一次，一盘苗榨半杯汁，想每天喝就多种5-10盘。
P53基因突变检测方法
2、试剂和耗材） GIAGEN,德国QIAamp?DNA Blood Mini Kit （）Platiinim?Taq DNA Polymerase High Fidelity （Invitrogen, 11304-102 Nuclease-Free Water （Promega,P 1195） d NTP Mix （Promega,P 151B） PCR引物：北京博迈德科技有限公司合成 DL10000 DNA Marker（TAKARA,大连宝生物）DNA分子定量标准：技术Bioer 产物回收纯化试剂盒（BioSpiii Gel Extraction kit,日本PCR有限公司）公司） Axygen, 200-1000 ul 吸头（美国110.5?10 u、2?20 u k 20-200 □、管EP、 仪.器3 ；Taimon1600R凝胶成像系统分析仪（上海天龙公司）Eppendorf 5417R 高速冷冻离心机（Eppendorf公司，德国）公司，美国）Allegra 6R离心机（Beckman-Coulter应涡旋混合器（北京北德科学仪器厂）MVS-1公司，德国） 1000 u 150 口1、200 ul、（Eppendorf^ 口1 移液器、10 U 1、NEWAIR 公司，美国）1【级生物安全柜NU425-400E （拓速冷冻离心机（BECKMAN COULTER 公司，美国）X-15R 公司德国）仪（Eppendorf Eppendorf Masteicycter PCR 公司，美国）（Bio-Rad电泳仪：Universal 024BR电热恒温水浴器（北京来亨科贸有限责任公司）240全自动凝胶成像系统（中国）凝胶成像分析系统：Tocan 测序仪：GenomeLab CEQ/GeXP （BECKMAN COULTER 公司，美国）20 u k 200 ul和1000 ul加样器（吉尔森公司，法国）旋涡震荡器（Scientific Industries公司，美国） 二、实验方法 1、样品采集，送检和保存 乙二胺四乙酸（EDTA） -3K抗凝管采集HIV和HEV合并感染者外周静脉血，于24h内测定CD4+T淋巴细胞计?数，抗凝血经常规离心分离全血中间层，分装后-80°C冻存用于P53基因变异的测定。 2、血浆样本DNA的提取 取200 P1全血中间层于1.5ml无菌EP管中，加入20 口1蛋白酶K；再加入200 ul AL缓冲液，涡旋振荡15秒，56°C孵育10分钟；瞬时离心EP管，加入200 u 1 无
神奇的小麦草(正文)
现代生机饮食理论是谁发明的？ 近年以来，采用“生机饮食”方法来治疗各式各样疾病的人不断增加，这种疗法的神奇功效也逐渐受到世界各地科学家的注意与重视。 这种生机饮食疗法的提倡者是一位来自东欧的美国人安·威格摩尔（Ann Wiqmore）博士，她创造出了一套“以麦草汁当药，以新鲜芽菜及蔬果当食物”的生活方式，除了医治了自己的重病，起死回生之外，后来还藉此救活了无数的人。 安·威格摩尔生来命苦，童年在战乱中长期颠沛流离，后来逃到美国定居。她在二十一岁结婚，三十二岁时怀孕，分娩困难，子宫长了瘤，几经辛苦才有惊无险，母女平安。 可是不久之后她就患了严重的“血毒”，医生宣布她再无生存机会。但是她并未绝望，反而潜心默想天下间的道理。 一次偶然的机会，她接触到有机耕种（不用化学肥料和农药的种植方式）和自然方法治疗疾病的理论。当时她生活贫苦，住在波士顿市，当地没有健康的食物，连新鲜菜也很少买得到，她为了维持生活，就在市内河边采集野草来生食，天天只吃生的野草和自己烘的面包以及马铃薯。 说也奇怪，过了八个月，她的重病居然大有起色。原来她的外婆原是个出色的草药医生，在她小时战乱当中（当时第一次世界大战俄国和德国在她的乡下打仗），全村缺粮，这位老人家不辞辛苦，到野外采集一些草类及种子，不但使村民不致饿死，还救活了许多病人，同时，外婆又不断用生草药替家人村民敷伤口，功效卓著。 安·威格摩尔记起多年前外婆教她的一些草药知识，加上 1
外婆给予她的榜样与信心，在医好自己以后，又埋头研究其中的道理。 有一天，她读《圣经》时读到一段说：有个患病的国王听从上天的指示，到野外像牛一样采集青草来吃，终于复元。于是她更相信青草有不可思议的保健功能，就着手收集各式各样的种子来试种，终于发现最理想的是小麦的幼苗。她自己大量吃，健康即时增进。 她开始榨小麦草汁给一些重病的人试饮，教他们生食新鲜蔬果，一个个癌症，麻疯患者重获健康，再过正常生活。 她自己在五十岁时健康极差，患了直肠癌、气喘等病，于是戒除一切熟食，三年之后，不药而愈。现在她活到八十多岁，仍然精力充沛，不停地工作，推广自己创立的这种饮食方式。她的联络地址是 Ann Wiqmore Foundation，196Commonwealth Avenue，Boston，MA02116-2903 USA。 小麦草汁有什么营养价值？ 小麦草早在西元1939年便由美国医学协会于《美国医学协会杂志》上发表，证实小麦草乃是一种十分珍贵的食物，当小麦草被选为美国太空人的指定浓缩营养食品时，小麦草的卓越营养价值便再一次获得学术界的肯定。 在1930年至1980年期间，许多学术界人士纷纷对小麦草的种植、营养价值和医疗特质，进行极尽深入的研究实验，其中一些著名的研究学家，包括：查理士施奈伯博士（堪萨斯城市）、克赫拉博士（威斯康辛大学）、安.威格摩尔博士（波士顿的希波克拉底研究所的创办人）、厄普·托玛斯（G.H Thomas）(新泽西的沃田BLOOMFIELD化验所)、雷久南博士（德克萨斯大 2
基因检测运营可行性方案精编版
基因检测运营可行性方 案 文件编码（008-TTIG-UTITD-GKBTT-PUUTI-WYTUI-8256）
基因检测可行性运营方案 一．项目介绍 基因是DNA分子上的一个功能片断，是的基本单位，是决定一切生物物种最基本的因子；基因决定人的生老病死，是健康、靓丽、长寿之因，是生命的操纵者和者。因此，哪里有生命，哪里就有基因，一切生命的存在与衰亡的形式都是由基因决定的，包括您的长相、身高、体重、肤色、性格等均与基因密不可分。 检测是通过血液、其他体液、或细胞对DNA进行检测的技术。 基因（Gene,Mendelian factor）是指携带有遗传信息的DNA或序列（即基因是具有遗传效应的DNA或RNA片段），也称为遗传因子，是控制性状的基本遗传单位。基因通过指导蛋白质的合成来表达自己所携带的遗传信息，从而控制生物个体的性状表现。 1. 基因与健康 现代医学研究证明，除外伤外，几乎所有的疾病都和基因有关系。像血液分不同血型一样，人体中正常基因也分为不同的基因型，即基因型。不同的基因型对环境因素的敏感性不同，敏感基因型在环境因素的作用下可引起疾病。另外，单独由异常基因直接引起疾病，被称为为。 可以说，引发疾病的根本原因有三种： （1）基因的后天突变； （2）正常基因与环境之间的相互作用； （3）遗传的基因缺陷。 绝大部分疾病，都可以在基因中发现病因。 基因通过其对蛋白质合成的指导，决定我们吸收食物，从身体中排除毒物和应对感染的效率。 第一类与遗传有关的疾病有四千多种，通过基因由父亲或母亲遗传获得。 第二类疾病是常见病，例如心脏病、、多种癌症等，是多种基因和多种环境因素相互作用的结果。 基因是人类遗传信息的化学载体，决定我们与前辈的相似和不相似之处。在基因“工作”正常的时候，我们的身体能够发育正常，功能正常。如果一个基因不正常，甚至基因中一个非常小的片断不正常，则可以引起发育异常、疾病，甚至死亡。