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GB6194—86 水果、蔬菜可溶性糖测定法2

GB6194—86 水果、蔬菜可溶性糖测定法2
GB6194—86 水果、蔬菜可溶性糖测定法2

GB6194—86 水果、蔬菜可溶性糖测定法

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1 适用范围

本标准适用于新鲜水果、蔬菜、干果可溶性糖的测定。

2 测定原理

在沸热条件下,用还原糖溶液滴定一定量的费林试剂时将费林试剂中的二价铜还原为一价铜,以亚甲基蓝为指示剂,稍过量的还原糖立即使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝。

3 仪器设备

a 高速组织捣碎机;

b 电热恒温水浴;

c 1000W调温电炉;

d 玻璃仪器:200ml,250ml容量瓶,250m1锥形瓶,50ml碱式滴定管。

4 试剂配制

4.1 费林试剂甲:称取硫酸铜(CuSO4·5H2O,分析纯)34.6g溶于水中,稀释至500ml,过滤,贮于棕色瓶内。

4.2 费林试剂乙:称取氢氧化钠50g和酒石酸钾钠(KNaC4O6H4·4H2O,分析纯)138g

溶于水中,稀释至500ml,用石棉垫漏斗抽滤。

4.3 转化糖标准溶液:称取9.5g蔗糖(分析纯)用水溶解后转入1000ml容量瓶中,加

入6MHCl(分析纯)10ml,加水至100ml。在20-25℃下放置三天或在25℃保温24h,然后用水定容(此为酸化的1%转化糖液,可保存3-4个月)。测定时,取1%转化糖液25.00ml放入250ml

容量瓶中,加入甲基红指示剂一滴,用1MNaOH溶液中和后用水定容,即为1mg/ml转化糖标准溶液。

4.4 亚甲基蓝溶液:称取 . 5g亚甲基蓝(分析纯)溶于100ml水中。

4.5 乙酸锌溶液:称取21.9g乙酸锌〔Zn(OAC)2·2HzO,分析纯〕溶于水中,加冰乙酸3ml,稀释至100ml。

4.6 亚铁氰化钾溶液:称取10.6g亚铁氰化钾〔K4Fe(CN)6·3H2O,分析纯〕溶于水,稀释至100ml。

5 样品提取液制备

取待测样品适量,洗净,用不锈钢刀将可食部分切成适当小块充分混匀后,按四分法取样。称取10 0g鲜样加入等重量的水,放入组织捣碎机中捣成1.1匀浆,有些材料匀浆比例可适当调整,多汁果蔬类可直接捣浆。称取匀浆25.0或50.0g(相当于样品12.5或25.0g)放入150m1烧杯中,含有机酸较多的材料加0.5-2.0g粉状CaCO3调至中性(广范试纸检试)。用水将样液全部转入250m1容量瓶中,并调整体积约为200ml。置80±2℃水浴保温30min,其间摇动数次,取出加入乙酸锌溶液及亚铁氰化钾溶液各2- 5ml,冷却至室温后,用水定容,过滤备用。

6 还原糖测定

6.1 费林试剂的标定

取费林试剂甲、乙各5.00ml或在测定前先等体积混合后取10.00ml混合液于250ml锥形瓶中,放入玻璃珠4-5粒,先加入比预测(按6 2进行预测)仅少0.5ml的1mg/ml转化糖标准液。将此混

合液置1000W电炉上加热,使其在2min左右沸腾,准确煮沸2min,此时不离开电炉,立即加入0. 5%亚甲基蓝指示剂6滴,并继续以每4-5s的滴速滴加标准糖液,直至二价铜离子完全被还原生成砖红色氧化亚铜沉淀,溶液蓝色褪尽为终点。用准确滴定标准糖液的毫升数V1,乘以标准糖液浓度〔mg/ ml〕,即得10m1费林试剂所相当的糖的毫克数。

注:无色的还原型亚甲基蓝极易被空气中的氧所氧化,应调节电炉温度使瓶内溶液始终保持沸腾状态,液面覆盖水蒸气不与空气接触。整个滴定过程锥形瓶不能离开电炉随意摇动。

6.2 预测

取费林试剂甲、乙各5.00ml或10.00ml混合液于250ml锥形瓶中,由滴定管加入待测糖液约15 ml,在电炉上加热至沸,约沸15s后迅速滴加待测糖液,至呈现极轻微的蓝色为止,此时加入0.5%亚甲基蓝指示剂6滴,继续滴加待测糖液,直至溶液蓝色褪尽为止,记下待测糖液的用量V2(毫升数)。

6.3 准确测定

取费林试剂甲、乙各5.00ml或10.00ml混合液加入锥形瓶中,由滴定管加入比预测仅少0 5ml

的待测糖液,并补加V1-V2毫升水(标定费林试剂所消耗的标准糖液毫升数V1减去预测消耗的待测糖液毫升数V2,即为应补加水的毫升数),使其与标定费林试剂时的反应体积一致。以下按费林试剂标定同样操作,继续滴至终点。前后沸热时间须在3min左右。待测糖液消耗量应控制在15-50ml范围内,不能大于标定费林试剂所用标准糖液体积V1。否则应增减称样量重新制备待测液。

7 可溶性总糖测定

取已经制备的待测液100ml于200ml容量瓶中,加6MHCl10ml。在80±2℃水浴加热10min,放入冷水槽中冷却后,加甲基红指示剂二滴用6M及1MNaOH溶液中和,用水定容。以下步骤同6.2、6.3。

8 结果计算

8.1 计算式

a 还原糖(%)按式(1)计算:

G 250

还原糖(%,以转化糖计)= ××100 (1)

V W×1000

b 可溶性总糖(%)按式(2)计算:

V A 250

可溶性总糖(%,以转化糖计)= ×××100 (2)

G W 1000

式中:W———样品称重,g;

G———10ml费林试剂相当的转化糖,mg;

V———准确滴定时所用待测液的体积,ml;

A———稀释倍数;

250———定容体积,ml;

1000———由毫克换算为克。

c 非还原糖(%)按式(3)计算:

非还原糖(%,以蔗糖计)=(可溶性总糖-还原糖)×0.95 (3)

式中:0.95———由转化糖换算成蔗糖的因数。

8.2 结果表示

测定结果计算到小数点后二位,两次平行试验结果相对相差:含量在5%以下的不得超过3%;含量在5-10%的不得超过2%;含量在10%以上的不得超过1%。鲜样以鲜基表示,风干样以风干基表示。

注:还原糖及可溶性总糖也可用葡萄糖表示,费林试剂需另用葡萄糖标定,非还原糖用转化糖换算成蔗糖形式表示。

附录A

提取剂的选择

(补充件)

A.1 本标准法是用水作提取剂。在测定可溶性总糖时,蔗糖需进行水解。但一些含菊糖和可溶性淀粉较多的果蔬样品,当用水作提取剂时,这部分物质也会被提取出来,对该类样品要用80%乙醇作提取剂将多糖分离除去。具体操作步骤如下。

A.2 取成熟度适中,有代表性的水果、蔬菜适量,洗净,用不锈钢刀将可食部分切成适当小块,充分混匀后按四分法取样。称取100g鲜样加入等重量的95%乙醇放入组织捣碎机中捣成1.1匀浆,称取匀浆25.0或50.0g(相当于样品125g或25.0g)放入150ml烧杯中。含有机酸较多的样品加0. 5-2.0g粉状CaCO3调至中性。继续加入95%乙醇使其最后浓度约达80%,用80%乙醇将样液全部转入250ml容量瓶中,并调整体积约为200ml。置80±2℃水浴保温30min,其间摇动数次,取出冷却至室温后,用80%乙醇定

容。取一定量(100-250ml)乙醇浸出液放入蒸发一中,在65-75℃水浴上蒸去乙醇,加少量水使沉淀物软化分散,加入乙酸锌溶液和亚铁氰化钾溶液各2-5ml,然后转入250ml容量瓶,用水洗涤蒸发皿并洗入容量瓶中,定容,过滤待测。

分光光度法测定总黄酮含量-操作流程图-简易图解-李熙灿-Xican Li

分光光度法测定总黄酮含量:操作流程图2017.10 【文献依据】Xican Li, Dongfeng Chen, Ying Mai, Bi Wen, Xiaozhen Wang. Concordance between antioxidant activities in vitro and chemical components of Radix Astragali. Natural Product Research. 2012;26:1050-1053. 【简介】黄酮包括黄酮、异黄酮、黄酮醇、二氢黄酮醇、双黄酮等,他们大多同时存在于某一种中药及其他植物中。为了测定这些黄酮的总含量,便建立了总黄酮的检测方法。其原理是:黄酮中的处于相邻羰基、羟基可以共同络合金属而显色。根据显色之深浅(即吸光度A值之大小),判断的总黄酮含量之高低。常用的显色剂是亚硝酸钠-硝酸铝,检测波长是508nm。采用分光光度计,并以某种标准品绘制工作曲线,依该曲线所建立的回归方程,计算其含量。 【检测方法与实验流程图】 图1实验流程图 【溶液配制】 1.5%亚硝酸钠溶液配制:称取0.5g亚硝酸钠(NaNO2)固体,加蒸馏水至10mL,即得。 2. 10%硝酸铝溶液配制:称取1g硝酸铝固体,加蒸馏水至9mL,即得。 3. 4% 氢氧化钠溶液配制:称取2g氢氧化钠固体,加蒸馏水至48mL,即得。 4. 芦丁标准液配制:精密称取芦丁10.4 mg置25mL容量瓶中,加80%乙醇溶液溶解、定容。 5. 样品液配制:视样品的溶解性,可选用甲醇、乙醇、95乙醇、水作溶液。浓度尽量高,但要有精确的数值。 【标准曲线绘制】(芦丁) 精密量取0.0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 mL芦丁标准液,代替上图中的“样品液0.5mL”,依“实验流程 图”,测A508nm值:

(整理)可溶性糖测定.

引言 可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖等单糖和双糖,是植物品质的重要构成性状之一,尤其是以果实为目的产品的植物,可溶性糖与酸的含量及其配比是影响果实风味品质的重要因素。对于鲜食品种,一般来讲,高糖中酸,风味浓,品质优;低糖中酸,风味淡,品质差。因此,可溶性糖的定量研究对植物的品质育种、储藏、加工特性等具有重要意义。而且可溶性糖广泛存在于植物的根、茎块和种子中,是人体热量的最最主要来源,具有较高的营养价值。本文重点介绍蒽酮比色法、铜还原碘量法、费林试剂法、原子吸收法、气相色谱法、液相色谱-蒸发光散射法,及连续流动法这几种实验如何定量测定可溶性糖含量。

1 蒽酮比色法 1.1 原理 糖在硫酸作用下生成糠醛,糠醛再与蒽酮作用形成绿色络合物,颜色的深浅与糖含量有关。在625 nm波长下的OD值与糖含量成正比。由于蒽酮试剂与糖反应的呈色强度随时间变化,故必须在反应后立即在同一时间内比色。 1.2 仪器与材料 1.2.1实验仪器 分光光度计,电炉,铝锅,电子天平,20ml刻度试管,刻度吸管5ml 1支、1ml 2支,漏斗。1.2.2实验试剂 (1)蒽酮乙酸乙酯试剂:取分析纯蒽酮1g,溶于50ml乙酸乙酯中,贮于棕色瓶中,在黑暗中可保存数星期,如有结晶析出,可微热溶解。 (2)浓硫酸(比重1.84)。 1.2.3实验材料 植物叶片。 1.3 实验方法 1.3.1标准曲线的制作 取20ml刻度试管11支,从0~10分别编号,按表24-1加入溶液和水。 表1 各试管加溶液和水的量 管号 0 1、2 3、4 5、6 7、8 9、10 100μg/ml蔗糖液 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 (ml) 水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 蔗糖量(μg) 0 20 40 60 80 100 然后按顺序向试管内加入1ml 9%苯酚溶液,摇匀,再从管液正面快速加入5ml浓硫酸,摇匀。比色液总体积为8ml,在恒温下放置30min,显色。然后以空白为参比,在485nm 波长下比色测定,以糖含量为横坐标,光密为纵坐标,绘制标准曲线,求出标准直线方程。按表1加入标准的蔗糖溶液,然后按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸,充分振荡,立即将试管放入沸水浴中,逐管均准确保温1min,取出后自然冷却至室温,以空白作参比,在630nm波长下测其光密度,以光密度为纵坐标,以糖含量为横坐标,绘制标准曲线,并求出标准线性方程。 1.3.2可溶性糖的提取 取新鲜植物叶片,擦净表面污物,剪碎混匀,称取0.10~0.30g,共3份,或干材料。

邻二氮菲分光光度法测定微量铁实验报告

实验一邻二氮菲分光光度法测定微量铁 实验目的和要求 1.掌握紫外可见分光光度计的基本操作; 2.掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的原理和方法; 3.掌握吸收曲线绘制及最大吸收波长选择; 4.掌握标准曲线绘制及应用。 实验原理 邻二氮菲(1,10—邻二氮杂菲)是一种有机配位剂,可与Fe2+形成红色配位离子: Fe2++3 N N N N 3 Fe 2+ 在pH=3~9范围内,该反应能够迅速完成,生成的红色配位离子在510nm波长附近有一吸收峰,摩尔吸收系数为1.1×10-4,反应十分灵敏,Fe2+ 浓度与吸光度符合光吸收定律,适合于微量铁的测定。 实验中,老师我们又见面了采用pH=4.5~5的缓冲溶液保持标准系列溶液及样品溶液的酸度;采用盐酸羟胺还原标准储备液及样品溶液中的Fe3+并防止测定过程中Fe2+被空气氧化。 实验仪器与试剂 1.752S型分光光度计 2.标准铁储备溶液(1.00×10-3mol/L) 3.邻二氮菲溶液(0.15%,新鲜配制) 4.盐酸羟胺溶液(10%,新鲜配制) 5.NaAC缓冲溶液 6.50ml容量瓶7个 7.1cm玻璃比色皿2个 8.铁样品溶液 实验步骤 1.标准系列溶液及样品溶液配制,按照下表配制铁标准系列溶液及样品溶液。

2.吸收曲线绘制用1cm比色皿,以1号溶液作为参比溶液,测定4号溶液在各个波长处的吸光度,绘制吸收曲线,并找出最大吸收波长。 3.标准曲线制作

在选定最大吸收波长处,用1cm 比色皿,以1号溶液作为参比溶液,分别测定2至7号溶液的吸光度,平行测定3次,计算吸光度平均值,绘制标准曲线。 实验数据处理 1、 样品中铁的计算 2.50 50.00 C C X ? =读取值 Cx=4.65×10-5 ×50.00/2.50=9.30×10-4 mol/L 2、 摩尔吸光系数计算 在标准曲线的直线部分选择量两点,读取对应的坐标值,计算邻二氮菲配位物在最大吸收波长出的摩尔吸光系数: 1 21 2c -c A A ε-= ε=(0.460-0.233)/(0.00006-0.00004)=2.00×10-5 7 样品溶液 4.65×10-5 mol/ml

可溶性总糖、蔗糖和淀粉测定

蔗糖、可溶性总糖和淀粉联合测定 一、原理 CH2O+蒽酮试剂——蓝绿色物质,在含糖5-80μg显色稳定,重现性好,在620nm下测定消光值。稀碱与糖溶液共热时,可破坏还原糖,而蔗糖不被破坏;淀粉经酸水解后与蒽酮试剂显色。 注意:硫酸含水量、反应温度、显色时间均影响显色度,测定时应严格控制反应条件,使显色温度和时间与做标准曲线时一致。 二、仪器与试剂 仪器:分析天平(0.001g)、分光光度计、水浴锅、离心机(4000转/分)、离心管(10ml)、移液管(1、2、5、10ml)、容量瓶(50、100、1000ml)、试管 试剂:(1)蒽酮试剂:84ml浓硫酸+16ml蒸馏水=88%硫酸;0.15g蒽酮溶于100ml 88%硫酸(现配现用,棕色瓶中冷藏室内可存3-5天) (2)30%KOH:称取30g KOH,溶解后定容至100ml (3)9.2N高氯酸:741ml 12.4N的高氯酸定容至1000ml (4)标准蔗糖、葡萄糖溶液(1mg/ml):取分析纯0.1000g溶于蒸馏水定容至100ml 三、测定步骤 1、茎、叶、柄中的可溶性总糖和淀粉提取 (1)准确称取烘干样品0.1000g置10ml离心管中,加蒸馏水6-7ml,置沸水浴中加热提取20分钟,取出冷却,离心5-10分钟(4000r/min),转移上清液于50ml容量瓶中,同样方法重复提取两次,合并上清液于50ml容量瓶中,定容至刻度,摇匀(此为A液,供蔗糖和可溶性总糖测定)。 (2)向沉淀中加水4ml,加入2ml 9.2N高氯酸,沸水浴中提取20分钟;取出冷却,离心5-10分钟,其上清液转移于50ml容量瓶。再向沉淀中加水5ml,加入1ml9.2N高氯酸,沸水浴中提取20分钟;取出冷却,离心5-10分钟,其上清液转移于50ml容量瓶。然后用水洗沉淀1-2次,全部转移于容量瓶中,并定容至刻度,摇匀(此为B液,供淀粉测定)。 2、块根中的可溶性总糖和淀粉提取 (1)准确称取烘干样品0.1000g置10ml离心管中,加乙醇(80%)5ml,置80℃水浴中加热提取20分钟,取出冷却,离心5-10分钟(4000r/min),转移上清液于50ml容量瓶中,同样方法重复提取两次,合并上清液于50ml容量瓶中,定容至刻度,摇匀(此为A液,供蔗糖和可溶性总糖测定)。 (2)向沉淀中加水4ml,加入2ml 9.2N高氯酸,沸水浴中提取20分钟;取出冷却,离心5-10分钟,其上清液转移于50ml容量瓶。再向沉淀中加水5ml,加入1ml9.2N高氯酸,沸水浴中提取20分钟;取出冷却,离心5-10分钟,其上清液转移于50ml容量瓶。然后用水洗沉淀1-2次,全部转移于容量瓶中,并定容至刻度,摇匀(此为B液,供淀粉测定)。

可见分光光度法测定大山楂丸中总黄酮的含量

实验五 一、目的要求 1、掌握用分光光度法测定中药制剂中总黄酮含量。 2、掌握可见分光光度计的使用方法。 二、基本原理 大山楂丸由山楂、神曲和麦芽组成,主要功能为开胃消食,其中山楂主要成分为有机酸、黄酮类及多种维生素。 黄酮类化合物具有邻二酚羟基,或3,5位羟基结构,可与铝盐、铅盐、镁盐等金属盐类试剂反应,生成有色配合物,可用可见分光光度法测定其含量。本实验利用黄酮类化合物在亚硝酸钠的碱性溶液中,与Al3+产生高灵敏度的橙红色配合物(λmax=510nm),从而用可见分光光度法(比色法)测定大山楂丸中总黄酮的含量。 三、仪器与试药 1、可见分光光度计、分析天平、索氏提取器。 2、乙醇(A.R)、5%亚硝酸钠溶液、10%硝酸铝溶液、1mol/l氢氧化钠溶液。 3、槲皮素(xx药品生物制品检定所)。 4、大山楂丸(市售品)。 四、操作步骤 1、标准液的配制: 精密称取槲皮素对照品20mg,置100ml容量瓶中,加95%乙醇50ml使溶解,然后加50%乙醇稀释至刻度,即得0.2mg/ml的对照品溶液。 2、标准曲线的制备:

精密量取对照品溶液0. 0、1. 0、2. 0、3. 0、4. 0、5.0ml,分别置于10ml容量瓶中,各加50%乙醇溶液使成5ml,精密加入5%亚硝酸钠溶液0.3ml,摇匀,放置6分钟,加入10%硝酸铝溶液0.3ml,摇匀,再放置6分钟,加入1%氢氧化钠溶液4ml,分别用50%乙醇稀释至刻度,摇匀,放置15分钟。以第一瓶作空白,用可见分光光度计在510nm处测其吸收度,作A-C标准曲线(或计算其回归方程)。 3、样品液的制备: 精密称取120℃干燥2小时的大山楂丸6.5g,置索氏提取器中,用95%乙醇125ml回流提取1.5小时,将提取液移至250ml容量瓶中,补加蒸馏水至刻度,摇匀即得。 4、含量测定: 精密量取提取液1ml,按上述标准曲线制备方法进行测定,并由标准曲线或回归方程计算样品中总黄酮的含量。 五、注意事项 1、实验证明,提取时间为1.5小时,基本能提尽样品中黄酮。 2、实验证明,样品显色后,在30分钟内测定总黄酮含量,无明显改变,超过30分钟,含量有所改变。 六、思考题 1、比色法操作的注意事项是什么?

植物组织中可溶性糖含量的测定(蒽酮法)

Ⅳ、植物组织中可溶性糖含量的测定(蒽酮法) 一、目的 掌握蒽酮法测定糖的原理和技术。 二、原理 糖类(包括单糖、双糖、寡糖)在浓硫酸存在下,脱水生成糠醛或羟甲基糠醛,然后蒽酮与糠醛或羟甲基糠醛经脱水缩合,生成蓝绿色的糠醛衍生物,颜色深浅与糖浓度成正相关。其反应式如下: 显色反应与反应温度、加热时间、反应系统中水和硫酸比例有关。本实验通过控制反应系统中水和硫酸比例,利用硫酸与水发生水合作用释放的热能,使反应系统自行升温而达到显色效果免去外加热步骤。 蒽酮法具有很高灵敏度,适用于糖的微量测定,且试剂简单,操作简便,因而得到普遍应用。 三、材料、仪器设备及试剂 1.材料:烘干材料粉末(过筛100目)或剪碎混匀鲜样品。 2.仪器设备: 分光光度计;电子分析天平;水浴锅;100ml容量瓶;试管;漏斗;剪刀;移液管;洗耳球等。 3.试剂及配制: 蒽酮试剂:称取蒽酮200mg溶于100ml浓硫酸中。该试剂不能久贮,宜用前配制。 100μg·ml-1 蔗糖标准母液:准确称取蔗糖100mg于烧杯加少量水溶解后,洗入 100ml容量瓶中定容至刻度。 四、实验步骤 1.蔗糖标准曲线制作 1.1取6支试管,编号,按下表配制每管含量为0~100μg蔗糖标准液 加入表中试剂后,向各管沿管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml,并立即摇动使混合均匀,置试管架上室温下显色,冷却后倒入比色杯,以0号管作空白对照,在620nm波长处,以多点校准总量法,制作标准曲线。 2.样品提取 称取干样品粉末100mg或剪碎混匀的鲜样品1g,放入试管中,加入蒸馏水10ml,置于沸水浴中提取20min,冷却后过滤入100ml容量瓶中,以热水冲洗残渣2~3次,一并滤入容量瓶中,待冷至室温,定容至刻度,即为样品待测液。 3.糖含量测定 吸取待测液0.2ml(含糖量30~80μg),加入试管中,再加蒸馏水2.3ml,摇匀。随后沿试管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml,立刻摇动混合均匀,置于试管架上显色,冷却至室温后,以空白管作对照,在620nm波长处,按多点校准定量法测定待测管中提取液糖含量。 五、结果计算

分光光度法测定水中铁离子含量.

专业项目课程课例 项目十二分光光度法测定水中铁离子含量 一、项目名称:分光光度法测定水中铁离子含量 二、项目背景分析 课程目标:本课程是培养分析化学操作技能和操作方法的一门专业实践课,以定量分析的基本理论为基础,以实验强化理论,以期提高化工工作者的分析操作能力。 功能定位:在定量分析中我们常常用到分光光度分析法,它具有操作简便、快速、准确等优点,在工农业生产和科学研究中具有很大的实用价值。是仪器分析的基础实验,也是一种重要的定量分析方法。分光光度法测定水中铁离子含量的测定项目综合训练了学生分光光度计使用、系列标准溶液配制、标准曲线绘制等多个技能。 学生能力:学生通过相关基础学科的学习已经具备了相应的化学知识和定量分析知识,也具备一定的独立操作和思维能力。 项目实施条件:该项目是仪器分析的基础实验,一般中职学校具备相关的实训实习条件,学生有条件完成相应的实习任务。 三、教学目标 1、了解721可见分光光度计的构造 2、了解分光光度法测定原理 3、掌握721可见分光光度计的操作方法 4、掌握分光光度法测定分析原始记录的设计 5、掌握分光光度法测定分析报告的设计 6、掌握分光光度法测定水中铁离子含量的测定方法 7、掌握分光光度法测定水中铁离子含量的分析原始记录和分析报告的填写 四、工作任务 1

2 五、参考方案 参考方案一 1、邻二氮杂菲-Fe 2+ 吸收曲线的绘制 用吸量管吸取铁标准溶液(20μg/mL )0.00、2.00、4.00mL ,分别放入三个50mL 容量瓶中,加入1mL 10%盐酸羟胺溶液,2mL 0.1%邻二氮杂菲溶液和5mL HAc-NaAc 缓冲溶液,加水稀释至刻度,充分摇匀。放置10min ,用3cm 比色皿,以试剂空白(即在0.0mL 铁标准溶液中加入相同试剂)为参比溶液,在440~560nm 波长范围内,每隔20~40nm 测一次吸光度,在最大吸收波长附近,每隔5~10nm 测一次吸光度。在坐标纸上,以波长λ为横坐标,吸光度A 为纵坐标,绘制A 和λ关系的吸收曲线。从吸收曲线上选择测定Fe 的适宜波长,一般选用最大吸收波长λmax 。 2、标准曲线的制作 用吸量管分别移取铁标准溶液(20μg/mL )0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL ,分别放入6个50mL 容量瓶中,分别依次加入1.00mL 10%盐酸羟胺溶液,稍摇动;加入2.00mL 0.1%邻二氮杂菲溶液及5.00mL HAc-NaAc 缓冲溶液,加水稀释至刻度,充分摇匀。放置10min ,用1cm 比色皿,以试剂空白(即在0.00mL 铁标准溶液中加入相同试剂)为参比溶液,选择λmax 为测定波长,测量各溶液的吸光度。在坐标纸上,以含铁量为横坐标,吸光度A 为纵坐标,绘制标准曲线。 3、水样中铁含量的测定 取三个50mL 容量瓶,分别加入5.00mL (或10.00mL 铁含量以在标准曲线范围内为合适)未知试样溶液,按实验步骤2的方法显色后,在λmax 波长处,用1cm 比色皿,以试剂空白为参比溶液,平行

可见分光光度法测定大山楂丸中总黄酮的含量

实验五可见分光光度法测定大山楂丸中总黄酮的含量 一、目的要求 1、掌握用分光光度法测定中药制剂中总黄酮含量。 2、掌握可见分光光度计的使用方法。 二、基本原理 大山楂丸由山楂、神曲和麦芽组成,主要功能为开胃消食,其中山楂主要成分为有机酸、黄酮类及多种维生素。 黄酮类化合物具有邻二酚羟基,或3,5位羟基结构,可与铝盐、铅盐、镁盐等金属盐类试剂反应,生成有色配合物,可用可见分光光度法测定其含量。本实验利用黄酮类化合物在亚硝酸钠的碱性溶液中,与Al3+产生高灵敏度的橙红色配合物(λ max=510nm),从而用可见分光光度法(比色法)测定大山楂丸中总黄酮的含量。 三、仪器与试药 1、可见分光光度计、分析天平、索氏提取器。 2、乙醇(A.R)、5%亚硝酸钠溶液、10%硝酸铝溶液、1mol/l氢氧化钠溶液。 3、槲皮素(中国药品生物制品检定所)。 4、大山楂丸(市售品)。 四、操作步骤 1、标准液的配制:精密称取槲皮素对照品20mg,置100ml容量瓶中,加95%乙醇50ml使溶解,然后加50%乙醇稀释至刻度,即得0.2mg/ml的对照品溶液。 2、标准曲线的制备:精密量取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml,分别置于10ml容量瓶中,各加50%乙醇溶液使成5ml,精密加入5%亚硝酸钠溶液0.3ml,摇匀,放置6分钟,加入10%硝酸铝溶液0.3ml,摇匀,再放置6分钟,加入1%氢氧化

钠溶液4ml,分别用50%乙醇稀释至刻度,摇匀,放置15分钟。以第一瓶作空白,用可见分光光度计在510nm处测其吸收度,作A-C标准曲线(或计算其回归方程)。 3、样品液的制备:精密称取120℃干燥2小时的大山楂丸6.5g,置索氏提取器中,用95%乙醇125ml回流提取1.5小时,将提取液移至250ml容量瓶中,补加蒸馏水至刻度,摇匀即得。 4、含量测定:精密量取提取液1ml,按上述标准曲线制备方法进行测定,并由标准曲线或回归方程计算样品中总黄酮的含量。 五、注意事项 1、实验证明,提取时间为1.5小时,基本能提尽样品中黄酮。 2、实验证明,样品显色后,在30分钟内测定总黄酮含量,无明显改变,超过30分钟,含量有所改变。 六、思考题 1、比色法操作的注意事项是什么? 2、总黄酮与单体黄酮的测定方法有何不同?

植物中可溶性糖含量的测定

植物组织中可溶性糖含量的测定 在作物的碳素营养中,作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。它们在营养中的作用主要有: 合成纤维素组成细胞壁;转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等;分解产物是其他许多有机物合成的原料,如糖在呼吸过程中形成的有机酸,可作为NH 3的受体而转化为氨基酸;糖类作为呼吸基质,为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。由于碳水化合物具有这些重要的作用,所以是营养中最基本的物质,也是需要量最多的一类。 Ⅰ蒽酮法测定可溶性糖 一、原理 糖在浓硫酸作用下,可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛,生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物,在一定范围内,颜色的深浅与糖的含量成正比,故可用于糖的定量测定。 该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物,不但可以测定戊糖与己糖含量,而且可以测所有寡糖类和多糖类,其中包括淀粉、纤维素等(因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应),所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量,实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下,用蒽酮法可以一次测出总量,省去许多麻烦,因此,有特殊的应用价值。但在测定水溶性碳水化合物时,则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中,不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外,不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同,果糖显色最深,葡萄糖次之,半乳糖、甘露糖较浅,五碳糖显色更浅,故测定糖的混合物时,常因不同糖类的比例不同造成误差,但测定单一糖类时,则可避免此种误差。 糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为620 nm,故在此波长下进行比色。 二、实验材料、试剂与仪器设备

实验8-植物组织中可溶性糖含量的测定(蒽酮比色法)

实验方案 一、实验目的 通过实验,掌握测定萝卜品质的方法 (一)萝卜外部形态的测定 1、实验材料 取鲜样3个∕小区 直尺、蒸馏水、笔、记录本、吸水纸 2、实验方法 .用自来水将各组萝卜洗净后,再用蒸馏水洗涤,擦干表面水分.每个小区取3个重复,用电子天平称量每株的鲜重,用直尺测量植株的茎长、茎粗、叶长,取平均值作为指标值 实验(二) 植物体内可溶性糖含量的测定(蒽酮法) 一、实验目的 了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理;掌握分光光度计的使用二、实验原理 糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一,也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。不同载培条件,不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定,可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。 蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法,在强酸性条件下,蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸(还原性和非还原性)作用生成蓝绿色的糖醛衍生物,其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应,但显现的颜色不同。当存在含有较多色氨酸的蛋白质时,反应不稳定,呈现红色。上述特定的糖类物质,反应较稳定。该法特点:灵敏度高,测定量少,快速方便。 三、材料、仪器及试剂

1.材料:植物种子、白菜叶、柑桔 2.仪器:分光光度计;恒温水箱;20ml具塞刻度试管(3支)漏斗;100ml容量瓶;刻度试管;试管架;剪刀;研钵 3.试剂 (1)200μg/ml标准葡萄糖:AR级葡萄糖100mg,蒸馏水溶解,定容至500ml。 (2)蒽酮试剂:1g蒽酮,用乙酸乙酯溶解,定容至50ml,棕色瓶避光处贮藏; (3)浓硫酸 四、实验方法 1.葡萄糖标准曲线的制作 取6支20ml具寒试管,编号,按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂,再缓慢地加入5ml 浓H2SO4,摇匀后,打开试管塞,置沸水浴中煮沸10分钟,取出冷却至室温,在620nm波长下比色,测各管溶液的光密度值(OD),以标 2. 称取1克白菜叶,剪碎,置于研钵中,加入少量蒸馏水,研磨成匀浆,然后转入20ml刻度试管中,用10ml蒸馏水分次洗涤研钵,洗液一并转入刻度试管中。置沸水浴中加盖煮沸10分钟,冷却后过滤,滤液收集于100ml容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,摇匀备用。 3.糖含量测定 用移液管吸收1ml提取液于20ml具塞刻度试管中,加1ml水和0.5ml蒽酮试剂。再缓慢加入5ml浓H2SO4(注意:浓硫酸遇水会产生大量的热!),盖上试管塞后,轻轻摇匀,再置沸水浴中10分钟(比色空白用2ml蒸馏水与0.5ml蒽酮试剂混合,并一同于沸水浴保温10分钟)。冷却至室温后,在波长620nm下比色,记录光密度值。查标准曲线上得知对应的葡萄糖含量(μg)。 五、结果计算 样品含糖量(g/100g鲜重)=查表所得糖含量(μg)×稀释倍数×100/样品重(g)×106 六、注意事项

实验分光光度法测定铁

实验分光光度法测定铁 The following text is amended on 12 November 2020.

实验十四邻二氮菲分光光度法测定铁的含量 一、实验目的 1.学习吸光光度法测量波长的选择方法; 2.掌握邻二氮菲分光光度法测定铁的原理及方法; 3. 掌握分光光度计的使用方法。 二、实验原理 分光光度法是根据物质对光选择性吸收而进行分析的方法,分光光度法用于定量分析的理论基础是朗伯比尔定律,其数学表达式为:A=εb C 邻二氮菲(又称邻菲罗啉)是测定微量铁的较好试剂,在pH=2~9的条件下,二价铁离子与试剂生成极稳定的橙红色配合物。摩尔吸光系数ε=11000 L·mol-1·cm-1。在显色前,用盐酸羟胺把Fe3+还原为Fe2+。 2Fe3++2NH 2OHHCl→2Fe2++N 2 +4H++2H 2 O+2Cl- Fe2+ + Phen = Fe2+ - Phen (橘红色) 用邻二氮菲测定时,有很多元素干扰测定,须预先进行掩蔽或分离,如钴、镍、铜、铅与试剂形成有色配合物;钨、铂、镉、汞与试剂生成沉淀,还有些金属离子如锡、铅、铋则在邻二氮菲铁配合物形成的pH范围内发生水解;因此当这些离子共存时,应注意消除它们的干扰作用。 三、仪器与试剂 1.醋酸钠:l mol·L-1; 2.盐酸:6 mol·L-1; 3.盐酸羟胺:10%(用时配制); 4.邻二氮菲(%):邻二氮菲溶解在100mL1:1乙醇溶液中; 5.铁标准溶液。 (1)100μg·mL-1铁标准溶液:准确称取(NH 4) 2 Fe(SO 4 ) 2 ·12H 2 0于烧杯中, 加入20 mL 6 mol·L-1盐酸及少量水,移至1L容量瓶中,以水稀释至刻度,摇匀. 6.仪器:7200型分光光度计及l cm比色皿。 四、实验步骤 1.系列标准溶液配制 (1)用移液管吸取10mL100μg·mL-1铁标准溶液于100mL容量瓶中,加入2mL 6 mol·L-1盐酸溶液, 以水稀释至刻度,摇匀. 此溶液Fe3+浓度为10μg·mL-1. (2) 标准曲线的绘制: 取50 mL比色管6个,用吸量管分别加入0 mL,2 mL,4 mL, 6 mL, 8 mL和10 mL10μg·mL-l铁标准溶液,各加l mL盐酸羟胺,摇匀; 经再加2mL邻二氮菲溶液, 5 mL醋酸钠溶液,摇匀, 以水稀释至刻度,摇匀后放置 10min。 2.吸收曲线的绘制 取上述标准溶液中的一个, 在分光光度计上,用l cm比色皿,以水为参比溶液,用不同的波长,从440~560 nm,每隔10 nm测定一次吸光度,在最大吸收波长

还原糖和可溶性总糖

(1)试剂: 葡萄糖标准液:称取80℃烘至衡重的葡萄糖100mg,用蒸馏水定容至100mL,测定还原糖时不用稀释,测定总糖时再稀释10倍,即100μg/ml。 蒽酮试剂:蒽酮100mg溶于100ml稀硫酸(76ml浓硫酸加30ml水中),贮于棕色瓶内冰箱保存,可使用2~3周。 3,5—二硝基水杨酸试剂:1g3,5—二硝基水杨酸,溶于20mL2mol/LNaOH溶液中,加50mL 蒸馏水,再加30g酒石酸甲钠,溶解后用蒸馏水定容至100mL。 盖紧瓶塞,勿使CO2进入。若溶液浑浊可过滤后使用。 (2)样品提取: 称取研碎样品0.5~1g放入刻度试管中,加入5~10mL蒸馏水(用80%乙醇更好),在80℃水浴中30min,3500转离心10min,上清液转入25ml容量瓶,洗净掺杂并定溶至刻度,该提取液用于测定还原糖和可溶性总糖。 (3)还原糖的测定 ○1测定还原糖的标准曲线: 试剂 1 2 3 4 5 6 7 1mg/ml葡萄糖标液 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 (ml) 蒸馏水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0 3,5—二硝基水杨酸 2 2 2 2 2 2 2 (ml) 各试管摇匀,在沸水浴中加热5分钟,取出后立即放入冷水中,加蒸馏水定容至20mL,混匀。以1号管为空白调零,在540nm波长下比色。以吸光度为纵坐标,葡萄糖含量为横坐标,绘制标准曲线。葡萄糖含量按顺序分别为0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2,单位mg。○2样品中还原糖含量的测定 吸取可溶性糖提取液2mL,置刻度试管中,加入2mL3,5—二硝基水杨酸试剂,与标准曲线同法测定。 ○3计算:还原糖含量=CV t/WV s×100%; 式中,C:从标准曲线上查得样品中还原糖含量(mg);V t:样品中提取液总体积(mL);V s:测定时取样体积(mL);W:样品重(mg)。注意样品重是mg (4)可溶性总糖测定 ○1总糖标准曲线: 试剂 1 2 3 4 5 6 100μg/ml葡萄糖标液 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 (ml) 蒸馏水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 蒽酮硫酸试剂(ml) 5 5 5 5 5 5 加蒽酮试剂时试管最好放在冷水中,并沿管壁加入,待全部加完后再混匀。将以上试管同时放入100℃水浴中准确加热10min,取出后冷却至室温后在620nm波长下测定吸光度。以吸光度为纵坐标,糖溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线。糖溶液浓度按顺序分别为:0、20、40、60、80、100,单位μg ○2样品测定: 取提取液适当稀释(10~50倍)后取2mL测定,方法同标准曲线测定。 ○3计算结果: 可溶性总糖含量= CV t n/WV s1000×100%; 式中,C:从标准曲线上查得样品中葡萄糖含量(μg);V t:样品中提取液总体积(mL);n::测定时取样体积(mL);W:样品重(mg);1000是换算系数。注意样品重是稀释倍数;V s mg

植物可溶性糖测定

植物可溶性糖(soluble sugar)测定:蒽酮比色法 糖在硫酸的作用下生成糠醛,糠醛再与蒽酮作用,形成一种绿色的络合物。在低浓度时,625nm的OD值与糖含量成正相关。该实验方法简便,但没有专一性,对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应,产生颜色。 实验用品 721型分光光度计,分析天平,研钵,恒温水浴锅,烧杯,刻度试管,大试管,移液管,漏斗,玻璃棒,试管架,吸耳球,滤纸 试剂:活性炭,酒精(80%) 葡萄糖标准溶液:称取已在80℃烘箱中烘至恒重葡萄糖100mg,配制成500mL溶液,即得每mL含糖为200μg的标准溶液。 蒽酮试剂:称取1g经过纯化的蒽酮,溶解于1000mL稀硫酸中即得。稀硫酸溶液由760mL 浓硫酸(比重1.84)稀释成1000mL而成。 实验步骤 1.可溶性糖的提取:称取0.5g的新鲜植物叶片,于研钵中加80%酒精4ml,仔细研磨成匀浆,倒入离心管内,置于80℃水浴中不断搅拌30min,离心10分钟(5000转/min),收集上清液于10ml的刻度试管中,其残渣加2ml80%酒精重复提1次,合并上清液。在上清液中加0.5g活性炭,80℃水浴脱色30min,定容至10ml,过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。 2.显色及比色:吸取上述糖提取液1mL,放入一干洁的试管中,加蒽酮试剂5mL混合之,于沸水浴中煮沸10分钟,取出冷却,然后于分光光度计上进行测定,波长为625nm,测得吸光度。从标准曲线上查得滤液中得糖含量(或经直线回归公式计算),然后再行计算样品中含糖百分数。 3.绘制标准曲线:取标准葡萄糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液,浓度分别为每mL含糖0、30、60、90、120、150、180μg。按上述方法分别测得其吸光度,然后绘制A625-糖浓度曲线,或进行直线回归求得直线方程。 试剂(ml) 管号 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液 0 0.15 0.3 0.45 0.6 0.75 0.9 80%酒精 1.0 0.85 0.7 0.55 0.4 0.25 0.1 蒽酮-硫酸试剂 5 5 5 5 5 5 5 葡萄糖浓度(ul/ml) 0 30 60 90 120 150 180 样品中含糖量%:设V为植物样品稀释后的体积(m L);C为提取液的含糖量(μg/ m L);W为植物组织鲜重(g) 可溶性糖含量%=( C×V)/(W×106) ×100% 可溶性糖(SS) 含量的测定: 根据赵世杰[20 ] 的方法。准确称取一定量新鲜叶片置于预冷的研钵内,加入5 mL 10 %三氯乙酸(TCA) ,于冰浴中研磨匀浆以4000 r/ min 离心10 min。吸取上清液2 mL(对照加2 mL 蒸馏水) ,加入2 mL 0.6 % TBA (用10 % TCA 配置) ,混匀物于沸水浴上反应15 min ,迅速冷却后再离心。取上清液于450 nm 波长处测定光密度。可溶性糖的浓度(mmol/ L) = 11.7D450 ,然后进一步换算成叶片可溶性糖含量,单位为μmol/ g ,FW。

蒽酮法测定可溶性糖

植物组织可溶性糖及淀粉测定(蒽酮法) 一、材料、仪器设备及试剂 1.材料 新鲜或烘干的植物叶片 2.仪器设备 分光光度计、水浴锅、刻度试管、刻度吸管。 3.试剂 蒽酮乙酸乙酯试剂:取分析纯蒽酮1g,溶于50ml乙酸乙酯中,贮于棕色瓶中,在黑暗中可保存数周,如有结晶析出,可微热溶解; 9.2mol/L HCIO 浓硫酸(相对密度1.84); l%蔗糖标准液:将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重,精确称取1.000g。加少量水溶解移入100ml容量瓶中,加入0.5ml浓硫酸,用蒸馏水定容至刻度; 100μg蔗糖标准液:精确吸取1%蔗糖标准液1ml加入100ml容量瓶中,加水定容。 淀粉标准溶液:准确称取100mg纯淀粉,放入100ml容量瓶中,加60-70ml热蒸馏水,放入沸水浴中煮沸,冷却后加蒸馏水稀释至刻度,则每ml含淀粉1mg,吸取此液5.0ml,加蒸馏水稀释至50ml,却为每ml含淀粉100g 的标准液。 二、实验步骤 1.标准曲线的制作 取20ml刻度试管11支,从0~10分别编号,按表加人溶液和水,然后按顺序向试管内加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸,充分振荡,,立即将试管放入沸水浴中,逐管准确保温1min,取出后自然冷却至室温,以空白为对照,在630nm波长下测其吸光度。比色液总体积为8ml.以糖含量为横坐标;光密度为纵坐标,绘制标准曲线,求出标准直线方程。 表 试剂 管号 01,23,45,67,89,10 100μg·L-1蔗糖液/ml00.20.40.60.8 1.0 水/ ml 2.0 1.812.6 1.4 1.2 1.0 蔗糖量/μg020********* 2.可溶性糖的提取新鲜植物叶片或干材料,擦净表面污物,剪碎混匀,称取0.10~0.30g ,共3份,分别放入3支刻度试管中,加人5-10ml蒸馏水,塑料薄膜封口,于沸水中提取30min(提取2次),提取液过滤入25ml容量瓶中,反复冲洗试管及残渣,定容至20ml。 3.显色测定:吸取样品提取液0.5ml于20ml刻度试管中,加蒸馏水1.5ml,然后向试管内加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸,充分振荡,立即将试管放入沸水浴中,准 确保温1min,取出后自然冷却至室温,以空白为对照,在630nm波长下测其吸光度。 可溶%)=(C*V/a*n)/(W*106) 式中C:标准方程求得糖量(g) a:吸取样品液体积(ml); V:提取液量hal); n:稀释倍数;

可溶性还原糖和总糖的测定

检测技术规范与标准方法 编号:HXSW/QC-001 修订:第 1 版第2次修改 还原糖和总糖的测定—3,5-二硝基水杨酸比色法起草:杨晓君日期:2013.10.27 批准:刘永垒日期:2014年1月17日 1 目的 建立统一的发酵液中还原糖和总糖的定性检测方法,确保检验方法的一致性、科学性和准确性 2 范围 适用于微生物中心实验室实验、生产发酵液中还原糖和总糖的检验 3 责任者 发酵工艺实验员负责检验 4 正文 4.1 原理 还原糖是指含有自由醛基或酮基、具有还原性的糖类。黄色的3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂与还原糖在碱性条件下共热后,自身被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内,反应液里棕红色的深浅与还原糖的含量成正比,在波长为540nm处测定溶液的吸光度,查对标准曲线并计算,便可求得样品中还原糖的含量。 不具还原性的部分双糖或多糖经酸水解后可彻底分解为具有还原性的单糖。通过对样品中的总糖进行酸水解,测定水解后还原糖含量,可计算出样品的含量含量。由于多糖水解为单糖时,每断裂一个糖苷键需加入一分子水,所以在计算多糖含量时应乘以系数0.9。 4.2 仪器和试剂 4.2.1 仪器 分光光度计、电热恒温水浴锅、试管及试管架、容量瓶、移液器、量筒。 4.2.2 试剂 4.2.2.1 1mg/ml葡萄糖标准液 准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg,置于小烧杯中,加少量蒸馏水溶解后,转移到100ml容量瓶中,用蒸馏水定容至100ml,混匀,4℃冰箱中保存备用。 4.2.2.2 DNS 试剂(3,5-二硝基水杨酸) 将6.3g DNS和262ml 2mol/LNaOH溶液,加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中,再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠,搅拌溶解,冷却后加蒸馏水定容至1000ml,贮于棕色瓶中,7-10天后使用。

分光光度法测定芦丁颗粒剂中总黄酮含量

分光光度法测定芦丁颗粒剂中总黄酮含量 《成都大学学报:自然科学版》2010年第1期 | 姚倩郭晓强张良蕾肖飞何钢黄酮类化合物是广泛存在于植物界的一类天然产物,具有抗氧化及抗自由基作用,可用于心脑血管疾病、肿瘤、炎症等的治疗.槐米中含有大量的黄酮类物质,本研究采用碱提酸沉法从槐米中提取芦丁等黄酮类成分,制成芦丁颗粒剂,并采用分光光度法对所含总黄酮进行了测定.实验结果表明,该方法快速、准确、灵敏,适合于控制所制颗粒剂中有效部位的含量. 1 仪器与材料 1.1 仪器 实验所用仪器包括:2802PC型紫外扫描仪(尤尼柯上海仪器有限公司),UV一1800型紫外可见分光光度计(苏州莱顿科学仪器有限公司),CT15RT型台式高速离心机(上海天美科学仪器有限公司),AS5150A超声波清洗器(天津奥特塞恩斯仪器有限公司). 1.2 材料 实验所用材料包括:实验用芦丁对照品由中国药品生物制品检定所提供;实验所用试剂均为分析纯,由成都科龙试剂厂生产. 2 方法与结果 2.I 测定方法 2.1.1 对照品溶液的制备. 精密称取芦丁对照品约1O ITlg,置50 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,制得对照品溶液. 2.1.2 供试品溶液的制备. 将芦丁颗粒研细,取约2 g,置50 mL量瓶中,加甲醇20 30 mL,摇匀,超声30 S,用甲醇稀释至刻度,制得供试品溶液. 2.1.3 黄酮含量测定方法. 分别精密量取芦丁对照品溶液与供试品溶液各 3 mL,分置25 mL量瓶中,加5%NaNO~溶液1 mL,摇匀,静置6 min,再加人10%(NO3) 溶液1 mL,摇匀,继续静置6 min,加4%的NaOH溶液5 mL,用蒸馏水稀释至刻度,摇匀,静置15 min,于505 nln波长处测定吸光度,分别记为As及.另在25 mL量瓶中制备一不含黄酮的试剂空白,测定其在506 nln 波长处的吸收度,记为.并以以( 一)及( 一)比值计算总黄酮含量. 2.2 空白干扰试验

实验一可溶性糖含量的测定——蒽酮法

实验十二胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响 血糖是指血液中糖,由于正常人血液中糖主要是葡萄糖,所以一般认为,血糖是指血液中的葡萄糖。正常人空腹血糖浓度为4.4~6.7mmol/L(80~ 120mg/100ml)。 血糖是糖在体内的运输形式。全身各组织都从血液中摄取葡萄糖以氧化供能,特别是脑、肾、红细胞、视网膜等组织合成糖原能力极低,几乎没有糖原贮存,必须不断由血液供应葡萄糖。当血糖下降到一定程度时,就会严重妨碍脑等组织的能量代射,从而影响它们的功能。所以维持血糖浓度的相对恒定有着重要的临床意义。 血糖浓度的调节 血糖浓度能维持相对恒定是由于机体内存在一整套高效率的调节机制,精细地控制着血糖的来源与去路,使之达到动态平衡。 神经系统的调节作用 神经系统对血糖浓度的调节作用主要通过下丘脑和自主神经系统对所控制激素的分泌,后者再通过影响血糖来源与去路关键酶的活性来实现。神经系统的调节最终通过细胞水平的调节来达到目的。 下丘脑一方面通过内脏神经作用于肾上腺髓质,刺激肾上腺素的分泌;另

一方面也作用于胰岛α-细胞,使其分泌胰高血糖素;同时还可以直接作用于肝。三方面共同作用的结果是使肝细胞的磷酸化酶活化,使糖原分解加速;糖异生关键酶的活性增加,糖异生作用增加,从而使血糖浓度升高。 下丘脑还可通过兴奋迷走神经,使胰腺β-细胞分泌胰岛素,同时还可直接作用于肝,使肝细胞内糖原合成酶活化,促进肝糖原的合成;此外还抑制糖异生途径,促进糖的氧化和转化,总体上使血糖的去路增加,来源减少,最终达到使血糖浓度降低的目的。 激素 使血糖浓度降低的激素 :胰岛素 使血糖浓度升高的激素:胰高血糖素、肾上腺素、肾上腺皮质激素、生长素、甲状腺素 它们对血糖的调节主要是通过对糖代谢各主要途径的影响来实现的。 在激素发挥调节血糖浓度的作用中,最重要的是胰岛素和胰高血糖素。肾上腺素在应激时发挥作用,而肾上腺皮质激素、生长激素、甲状腺素等都可影响血糖水平,但在生理性调节中仅居次要地位。 胰岛素 使肌肉和脂肪组织细胞膜对葡萄糖的通透性增加,利于血糖进入这些组织进行代谢。 诱导葡萄糖激酶、磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶的合成,加速细胞内葡萄糖的分解利用。 通过使细胞内cAMP含量减少,激活糖原合成酶和丙酮酸脱氢酶系,抑制磷酸化酶和糖异生关键酶等,使糖原合成增加,糖的氧化利用、糖转变为脂肪的反应增加,血糖去路增快;使糖原分解和糖异生减少或受抑制,使血糖来源减少,最终使血糖浓度降低。 胰高血糖素 主要通过提高靶细胞内cAMP含量达到调节血糖浓度的目的。细胞内的cAMP 可激活依赖cAMP的蛋白激酶,后者通过酶蛋白的共价修饰改变细胞内酶的活性,即激活糖原分解和糖异生的关键酶,抑制糖原合成和糖氧化的关键酶,使血糖升高。 肾上腺素

实验二十一可溶性总糖的测定(蒽酮比色法)

实验二十一可溶性总糖的测定(蒽酮比色法) 一、目的 掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。 二、原理强酸可使糖类脱水生成糠醛,生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合,形成糠醛的衍生物,呈蓝绿色,该物质在620 nm 处有最大吸收. 在10 -100ug 范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。 这一方法有很高的灵敏度,糖含量在30ug 左右就能进行测定,所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下,采用这一方法比较合适。 三、仪器、试剂和材料 1 . 仪器 (1)分光光度计 (2 )电子顶载天平 (3 )三角瓶:50m1 X 1 (4 )大试管:9 支 (5)试管架,试管夹 (6 )漏斗,漏斗架 (7 )容量瓶:50rnl X 2 (8 )刻度吸管:1m1X3 ,2m1X1 ,5mlX1 (9 )水浴锅 2 . 试剂 (1)葡萄糖标准液:l00ug/ml (2 )浓硫酸 (3)蒽酮试剂:0.2g 蒽酮溶于100 ml 浓H2SO4 中当日配制使用。 3 . 材料小麦分蘖节。 四、操作步骤 1. 葡萄糖标准曲线的制作

取7支大试管,按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液: 在每支试管中立即加入蒽酮试剂 4.0m1 ,迅速浸于冰水浴中冷却,各管加完后一起浸于沸水浴中,管口加盖玻璃球,以防蒸发。自水浴重新煮沸起,准确煮沸lOmin 取出,用流水冷却,室温放置10min ,在620 nm波长下比色。以标准葡萄糖含量(ug)作横坐标,以吸光值作纵坐标,作岀标准曲线。 2. 植物样品中可溶性糖的提取 将小麦分蘖节剪碎至2mm以下,准确称取lg,放入50m1三角瓶中,加沸水25m1,在水浴中加盖煮沸10min,冷却后过滤,滤液收集在50m1容量瓶中,定容至刻度。吸取提取液2m1,置另一50m1容量瓶 中,以蒸馏水稀释定容,摇匀测定。 3 .测定 吸取lml已稀释的提取液于大试管中,加入 4.0ml蒽酮试剂,以下操作同标准曲线制作。比色波长 620nm,记录吸光度,在标准曲线上查出葡萄糖的含量(ug )。 查表所得糖含量(ug )乂稀释倍数 五、结果处理 查表所得糖含量Cug)乂稀释倍数心 植物样品含糖壘(%)=: 样品重(町xm% X10° 六、注意事项 1 .该显色反应非常灵敏,溶液中切勿混入纸屑及尘埃。 2 . H 2 SO 4 要用高纯度的。 3. 不同糖类与蒽酮的显色有差异,稳定性也不同。加热、比色时间应严格掌握。 七、思考题 1.用水提取的糖类有哪些? 2 . 制作标准曲线时应注意哪些问题?

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