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外周血单核细胞流式分析

外周血单核细胞流式分析
外周血单核细胞流式分析

外周血单核细胞流式分析

(1) 采集小鼠眼血,每只小300-500μl,新鲜外周血2500rpm 离心20 分钟,吸取上层血浆;

(2) 用PBS 或生理盐水重悬下层血细胞,稀释倍数2-4 倍,稀释倍数越高分

离效果越好;

(3) 离心管内加入Ficoll,Ficoll 上层缓慢的加入重悬细胞液,Ficoll 与重悬

细胞液比例1:2;

(4) 2000rpm 离心20 分钟,离心机设置为缓慢加速和缓慢减速;

(5) 离心后离心管内可见四层分液,从上向下依次为:PBS 血浆混合液、PBMC、Ficoll、红细胞,Z 字形吸取PBMC 分层;

(6) PBS 或生理盐水清洗细胞三次并计数;

(7) 将细胞用PBS 重悬,分组加入流式管中,每管100μl;

(8) 加入抗CD16/32 封闭抗体,4℃反应10min,除去小鼠免疫细胞表面

的非特异性染色;

(9) 根据抗体要求体积在流式管内加入抗体,常见的大比例细胞可只标记检

测抗体,以下几种情况需要同时制备空白细胞管、同型对照管、检测抗体管检测:细胞比例含量低、细胞表面标志表达较弱、首次使用的新抗体、同时标记多类标志时需要每种标记都单独制备单一抗体标记管,4℃反应30min;(10) 3ml 1×PBS 清洗一次,如需分选,用PBS 重悬后直接上机;如需分析,用1%的甲醛PBS 固定后检测,荧光染色最多保留48h。流式数据用FlowJo 软件分析。

外周血单个核细胞的分离(优质参考)

实验二十四外周血单个核细胞的分离 (Separation of mononuclear cell in peripheral blood) 免疫细胞是一组不均一的细胞群体,它包括T、B淋巴细胞、NK细胞、单核细胞/巨噬细胞以及粒细胞等,这些细胞的生物学特性,如细胞的大小、密度、表面电荷、黏附能力以及细胞表面的分子标志等均存在差异,借助这些差异可区分不同的细胞类别。外周血单个核细胞(PBMC)的分离主要有两种方法,即聚蔗糖-泛影葡胺(Ficoll-Hypaque)分离法和聚乙烯吡咯烷酮硅胶(Percoll)分离法。此处只介绍聚蔗糖-泛影葡胺分离法。 【实验原理】 血液中单个核细胞的分离常采用密度梯度离心法。市售淋巴细胞分离液是由聚蔗糖(Ficoll)和泛影葡胺(Hypaque) 按一定比例混合制成,20℃密度为1.077±0.001,单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞,其密度为1.050~1.077,而粒细胞和红细胞的密度为1.080~1.110。将待分离的细胞悬液小心铺于淋巴细胞分离液上,经离心后单个核细胞悬浮于分离液上层界面,而红细胞与粒细胞沉于管底。 【主要试剂和器材】 1.聚蔗糖-泛影葡胺分层液密度为1.077±0.001。 2.5g/L台盼蓝。 3.250U/ml肝素溶液用Hank,s液配制。 4.Hank,s液。 5.注射器、刻度离心管、吸管、滴管、血细胞计数板、载玻片、盖玻片。 6.水平离心机、显微镜。 【操作方法】 1.抽取静脉血2ml,注入含有0.2ml肝素溶液的无菌试管中摇匀,作白细胞计数和分类计数。再加入等量Hank,s液混匀。 2.取2ml分层液置于离心管中,将稀释血液沿管壁缓缓叠加于分层液上,形成清晰界面。稀释血液与分层液的容积比例以2∶1~3∶1为宜。 3.置水平离心机中,2000r/min离心20min。 4.离心后从离心管的底部到液面分为四层,依次为红细胞和粒细胞层、分层液层、单个核细胞层、血浆层(含血小板和破碎细胞)。 5. 用滴管直接吸出单个核细胞层,或吸去血浆层后再吸了该层,置于另一离心管中。 6.加入4倍量以上的Hank,s液,充分混匀,1000r/min离心l0min。离心后倾弃上清液,再用Hank,s液洗2次。 7.用含10%~20%灭活小牛血清的Hank,s液或培养液配制细胞悬液。计数,并分别计数粒细胞和单个核细胞数,同时用台盼蓝检测细胞活力,最后按实验要求将细胞悬液调整到适当浓度。【结果判断】 【注意事项】 1.将血液进行稀释可降低血液黏稠度和红细胞的聚集,提高单个核细胞的收获量。 2.温度变化可直接影响分层液的密度,即影响细胞的收获率和纯度。故应在室温(18~25℃)下进行实验,分层液使用前应预温至室温。温度过低,淋巴细胞丢失增多;温度过高,会影响淋巴细胞活性。

全血细胞分析报告单

全血细胞分析报告单 姓名:性别:年龄:日期:年月日时间: 项目结果标识参考范围项目结果标识参考范围WBC白细胞数目*10^9/L 4.0-10.0 RBC红细胞数目*10^12/L 3.5-5.5 LYM#淋巴细胞数目*10^9/L 1.0-3.3 HGB血红蛋白9/L 110-160 MID#中间细胞数目*10^9/L 0.2-0.7 HCT红细胞压积L /L 0.350 GRA#中性粒细胞数目*10^9/L 1.8-6.4 MCV平均红细胞体积f L 80-100 LYM%淋巴细胞百分比%20-45 MCH平均血红蛋白含量pg 28-33 MID%中间细胞百分比% 2.0-9.0 MCHC平均血红蛋白浓度g/L 320-360 GRA%中性粒细胞百分比%45-75 RDW-CV红细胞宽度变异系数%11.5-14.4 PDW血小板分布宽度%15.5-18.2 RDW-SD红细胞宽度标准差f L 37-55 PCT血小板压积L /L 0.100-0.282 PL T血小板数目*10^9/L 100-300 P-LCR大血小板百分比%13.0-43.0 MPV平均血小板体积f L 7-12 全血细胞分析报告单 姓名:性别:年龄:日期:年月日时间: 项目结果标识参考范围项目结果标识参考范围WBC白细胞数目*10^9/L 4.0-10.0 RBC红细胞数目*10^12/L 3.5-5.5 LYM#淋巴细胞数目*10^9/L 1.0-3.3 HGB血红蛋白9/L 110-160 MID#中间细胞数目*10^9/L 0.2-0.7 HCT红细胞压积L /L 0.350 GRA#中性粒细胞数目*10^9/L 1.8-6.4 MCV平均红细胞体积f L 80-100 LYM%淋巴细胞百分比%20-45 MCH平均血红蛋白含量pg 28-33 MID%中间细胞百分比% 2.0-9.0 MCHC平均血红蛋白浓度g/L 320-360 GRA%中性粒细胞百分比%45-75 RDW-CV红细胞宽度变异系数%11.5-14.4 PDW血小板分布宽度%15.5-18.2 RDW-SD红细胞宽度标准差f L 37-55 PCT血小板压积L /L 0.100-0.282 PL T血小板数目*10^9/L 100-300 P-LCR大血小板百分比%13.0-43.0 MPV平均血小板体积f L 7-12 全血细胞分析报告单 姓名:性别:年龄:日期:年月日时间: 项目结果标识参考范围项目结果标识参考范围WBC白细胞数目*10^9/L 4.0-10.0 RBC红细胞数目*10^12/L 3.5-5.5 LYM#淋巴细胞数目*10^9/L 1.0-3.3 HGB血红蛋白9/L 110-160 MID#中间细胞数目*10^9/L 0.2-0.7 HCT红细胞压积L /L 0.350 GRA#中性粒细胞数目*10^9/L 1.8-6.4 MCV平均红细胞体积f L 80-100 LYM%淋巴细胞百分比%20-45 MCH平均血红蛋白含量pg 28-33 MID%中间细胞百分比% 2.0-9.0 MCHC平均血红蛋白浓度g/L 320-360 GRA%中性粒细胞百分比%45-75 RDW-CV红细胞宽度变异系数%11.5-14.4 PDW血小板分布宽度%15.5-18.2 RDW-SD红细胞宽度标准差f L 37-55 PCT血小板压积L /L 0.100-0.282 PL T血小板数目*10^9/L 100-300 P-LCR大血小板百分比%13.0-43.0 MPV平均血小板体积f L 7-12

外周血单个核细胞

外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)即外周血中具有单个核的细胞,包括淋巴细胞和单核细胞。体外检测淋巴细胞首先要分离外周血单个核细胞,目前主要的分离方法是Ficoll-hypaque(聚蔗糖-泛影葡胺)密度梯度离心法,因为血液中各有形成分的比重存在差异,因此得以分离。红细胞和粒细胞密度大于分层液,同时因红细胞遇到Ficoll而凝集成串钱状而沉积于管底。血小板则因密度小而悬浮于血浆中,唯有与分层液密度相当的单个核细胞密集在血浆层和分层液的界面中,呈白膜状,吸取该层细胞递经洗涤离心重悬。本法分离单个核细胞纯度可达95%,淋巴细胞约占90%~95%,细胞获得率可达80%以上,其高低与室温有关,超过25℃时会影响细胞获得率。 ●人外周血单核细胞(PBMC)分离及培养 PBMC(peripheral blood mononuclear cell),外周血单个核细胞,顾名思义,其主要细胞类型为血液里边具有单个核的细胞,主要包括淋巴细胞(T\B),单核细胞,吞噬细胞,树突状细胞和其他少量细胞类型。其中淋巴细胞占很大一部分。分离PBMC的主要目的是为了将多核细胞和红细胞去除,从而能够很方便地模拟体外的血液免疫环境。 Ficoll是蔗糖的多聚体,呈中性,平均分子量为400,000,当密度为1.2g/ml仍未超出正常生理性渗透压,也不穿过生物膜。红细胞、粒细胞比重大,离心后沉于管底;淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分层液比重,离心后漂浮于分层液的液面上,也可有少部分细胞悬浮在分层液中。吸取分层液液面的细胞,就可从外周血中分离到单个核细胞。 ●工具/原料 全血(以10ml为例) 无菌PBS溶液(pH7.4) 或者生理盐水 蔗糖溶液(FicollPague PLUS) (GE Healthcare Life Sciences #17-1440-02) RPMI 1640培养基(Invitrogen) 胎牛血清(FBS)(GIBCO) 双抗P/S (Penicillin/ Streptomycin) (GIBCO) 二甲亚砜(DMSO)(SIGMA)

人外周血单核细胞分离技术

人外周血单核细胞分离 1.抗凝血的预离心分别取正常人新鲜抗凝全血 A: 20 mL于50 mL离心管中,以2 000 r /min 离心20 min,吸弃上层血浆,获得下层沉淀细胞约10?12.5 mL 。 2.沉淀细胞的稀释与离心分离在所获取沉淀 A中的细胞中加入Hank s液(不含Ca2+、Mg 2+, pH 7.2 ?7.6)体积比仍未1:1 , 混匀,制成细胞悬液。 B:无菌抗凝血与Hank s液或PBS以1:1体积在试管中混匀。 另取一离心管,加入LTS1077淋巴细胞分层液,然后用毛细吸管距分层液上1cm处 将细胞悬液小心而缓慢地加于其上面,使稀释血液重叠于分层液上。此时稀释后的细胞悬液 分离液淋巴细胞体积为:1:1。与用水平离心机以2000 r /min 离心20min,离心结束后,取出离心管,可见管中液体已经分层。 管内可见分为4层:最上层是血浆,含部分血小板:第二层为薄薄的白膜层,主要台 单个核细胞,还混杂有少量血小板;第三层为分离液层;第四层为粒细胞及红细胞,红细胞 沉于管底,而粒细胞则紧贴在压积红细胞上呈一层很薄的白膜 3.单个核细胞的提取、洗涤与悬浮、贴壁 吸去最上层的血浆,收集血浆层和淋巴细胞分离液交界面的单个核细胞,尽量全部吸出PBMC。加3~4倍以上体积Hanks或PBS液于所得的单个核细胞中,用毛细吸管轻轻吹判均匀,避免产小气泡,液柱高度不超过离心管的 2 / 3。混匀后离心1500r/mi n 离心 10min,低速离心有利于去除细胞悬液中留存的血小板,去上清液。 注意:还可以先用吸管把雾状层上面的液体吸走,注意不要碰到雾状层,然后在把要的部分慢慢吸出来。第二种方法,比较简单一些。 再用同样洗涤液洗涤细胞2次,1500r/min 离心10min,洗去残留的淋巴细胞分离液。再以RPMI-1640 培养基离心洗涤1次,吸尽上清,以充分去除血小板等杂质。按每毫升血液标本加0.2 mL含20%小牛血清的Hank s液(或含10%胎牛血清及25 mmol /L hepas的RPMI-1640 液3?4 mL)重新混悬细胞37 C、5% C02孵育箱中培养2?3 h 后去除上清,得到贴壁的单核细胞。于各培瓶中分别加入含10%胎牛血清的RPMI-1640

血常规报告单分析

五常规报告单分析 一、相关项目 1. RBC、Hb、MCV(平均红细胞体积)、HCT(红细胞压积)、MCH(平均 RBC血红蛋白含量)、MCHC(平均RBC血红蛋白浓度)、RDW(RBC体积分布宽度); 2. WBC、DC(LY、MO、GR)绝对值; 3. PLT、PCT(血小板比积)、PDW(血小板体积分布宽度)、MPV(平均血小 板体积) 二、各主要参数的临床意义及参考范围(★) 1.RBC及Hb增多:是指单位容积血液中RBC数及Hb量高于参考值上限。 一般经多次检查成年男性RBC>6.0×1012/L,Hb>160g/L,女性RBC>5.5×1012/L,Hb>150g/L时认为增多。可分为相对增多和绝对增多。①相对增多,是因血浆容量减少,血浆中水分丢失,血液浓缩使RBC容量相对增多。见于严重呕吐、腹泻、大量出汗、大面积烧伤等。②绝对增多,临床上称为RBC增多症,可分为原发和继发两类,原者即真红。 2.RBC及Hb减少:是指单位容积循环血液中RBC数、Hb量及血细胞比容 (HCT)低于参考值,通常称贫血。以血红蛋白为标准,成人男性Hb<120g/L,成人女性Hb<110g/L,皆可认为是贫血。临床上还根据Hb减低的程度将贫血分为四级:轻度:Hb<90g/L;中度:Hb:90-60g/L;重度:Hb:60-30g/L; 极重度:Hb<30g/L。引起减少原因包括两类:①生理性减少:婴儿从出生3个月起-15岁以前的儿童;妊娠中、后期孕妇血浆容量增加,使血液稀释,;老年人骨髓造血容量逐渐减少,使造血功能减低,均可导致RBC、Hb减少,统称生理性贫血。②病理性减少:见于各种贫血。

血细胞分析检验报告单完整版

血细胞分析检验报告单 HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】

血细胞分析检验报告单 姓名:性别:男年龄: 79 门诊号:住院号: 送检科室:荣康科床号: 02 标本类型:全血标本状态:样本编号: 临床诊断: 项目名称结果单位参考范围项目名称结果单位参考范围 白细胞↑109/L4-10血红蛋白浓度113g/L110-150 淋巴细胞109/L红细胞压积% 中性粒细胞109/L平均红细胞体积fL 单核细胞109/L平均血红蛋白含量pg 嗜酸性粒细胞109l/L平均血红蛋白浓度320g/L318-347 嗜碱性粒细胞109l/L红细胞分布宽度SD fL 淋巴细胞比率umol/L红细胞分布宽度CV% 中性粒细胞比率%血小板337109/L100-300 单核细胞比率%血小板压积% 嗜酸性粒细胞比率%平均血小板体积fL 嗜碱性粒细胞比率%血小板分布宽度fL 红细胞1012/L大型血小板比率% 送检医师:送检时间: 2017-08-11 08:10 检验医师:检验日期:2017-08-11 08:10 报告时间:2017-08-11 09:24 审核医师: 本报告仅对本标本负责,结果供医师参考,如有疑问请及时与检验科联系。 云南省荣誉军人康复医院血细胞分析检验报告单 姓名:洪文贵性别:男年龄: 79 门诊号:住院号: 送检科室:荣康科床号: 02 标本类型:全血标本状态:样本编号: 临床诊断: 项目名称结果单位参考范围项目名称结果单位参考范围 白细胞↑109/L4-10血红蛋白浓度119g/L110-150 淋巴细胞109/L红细胞压积% 中性粒细胞109/L平均红细胞体积fL 单核细胞109/L平均血红蛋白含量pg 嗜酸性粒细胞109l/L平均血红蛋白浓度330g/L318-347 嗜碱性粒细胞109l/L红细胞分布宽度SD fL 淋巴细胞比率umol/L红细胞分布宽度CV% 中性粒细胞比率%血小板289109/L100-300 单核细胞比率%血小板压积% 嗜酸性粒细胞比率%平均血小板体积fL 嗜碱性粒细胞比率%血小板分布宽度fL 红细胞1012/L大型血小板比率% 送检医师:林娜送检时间: 2017-08-16 09:17 检验医师:朱丹检验日期:2017-08-16 09:18 报告时间:2017-08-16 09:25 审核医师:谢树芝 本报告仅对本标本负责,结果供医师参考,如有疑问请及时与检验科联系。 云南省荣誉军人康复医院血细胞分析检验报告单 姓名:洪文贵性别:男年龄: 79 门诊号:住院号: 送检科室:荣康科床号: 02 标本类型:全血标本状态:样本编号: 临床诊断: 项目名称结果单位参考范围项目名称结果单位参考范围 白细胞109/L4-10血红蛋白浓度131g/L110-150

自动血细胞分析仪操作规范流程

4.操作程序 4.1开机启动 首先开启仪器主机侧面板的电源开关,然后开电脑主机,仪器主机前面板状态指示灯变为橙绿闪烁,仪器主机初始化后开始自检,自检时仪器会自动灌注稀释液、清洗液及溶血剂,并清洗液路。自检完成后,仪器进入血液细胞分析窗口。 4.2本底测试 4.2.1放置洁净的空试管于采样针下,应确保采样针轻挨试管底部。在血液细胞分析窗口,点击“排液”图标,仪器通过采样针排出稀释液到试管中。 4.2.2在血液细胞分析窗口,点击“编号”图标,进入下一个编号操作,输入“0”,再点击“确定”按钮返回血液细胞分析窗口。(注意:仪器系统软件将本底测试的顺序号设定为0,试测试数据将不存储在仪器中,但禁止将血液样本的顺序号设定为0)。 4.2.3将盛有稀释液的试管放在采样针下,按仪器前面板的“RUN”键,待听到“滴”的一声后,方可移走试管。仪器开始自动计数、测量。 4.2.4计数过程中,在窗口的右下方有WBC、RBC的计数计时器,显示WBC、RBC的计数时间。当计数时间过长或过短时,仪器会发出故障报警,并给出报警提示。若出现报警提示,即参照说明第9章《故障处理》进行处理。 4.3质量控制 首次装机或在每天进行血液样本测试之前必须对仪器进行质控,具体参照说明第5章《质量控制》进行处理。 4.4标定 若本底测试,质控结果达不至要求,且某些参数漂移变化较大,则必须对仪器进行重新标定,具体参照说明第6章《标定》进行处理。 4.5血液样本的采集 4.5.1由于所有的临床样本、质控物、标定物均可能含有人血或人的血清,具有潜在的传染性,因此在处理这些物品时必须遵守已建立的实验室或临床操作规程,穿好工作服,戴好医用手套及安全眼镜。 4.5.2采血过程避孕必须干净、无污染,必须使用合格的抗凝剂。严禁剧烈摇动采血管。在室温下,静脉血只能保存4个小时,若在短时间内不能将血样处

人外周血单核细胞分离液使用说明

人外周血单核细胞分离液使用说明 产品内容: 试剂A200mL 试剂D200mL 样本稀释液(赠品)200mL 清洗液(赠品)200mL 保存:18℃-25℃保存,有效期两年。人外周血单核细胞分离液易感染细菌,需无菌条件下操作。无菌条件下操作,启封后常温保存。如4℃保存,本分离液易出现白色结晶,影响分离效果。 操作步骤: 全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。首先取抗凝血按体积比1:1的比例加全血及组织稀释液混匀,根据稀释后的样本量大小,分以下两种情况: 情况A:稀释后血液样本小于5mL时,实验方法如下: 1.取一支15ml离心管,依次小心加入试剂A、试剂D(体积比为3:2,试剂总量与稀释后的血液样本量相等。如稀释后的血液样本为5ml,则先后加入试剂A3ml、试剂D2ml),制成梯度界面,各液面分层一定要清晰。 2.用吸管小心吸取稀释后的血液样本加于分离液液面上,400-550g,离心20-30min(注:根据血液样本量确定离心条件,血液样本量越多,离心力越大,离心时间越长,具体离心条件需客户自行摸索,以达到最佳分离效果)。 3.离心后,此时离心管中由上至下分为五层。第一层为稀释液层。第二层为透明试剂D液层。第三层为环状乳白色单核细胞层。第四层为透明试剂A液层。第五层为红细胞层。 4.用吸管小心吸取第二层试剂D层和第三层乳白色细胞层到另一15ml离心管中,往所得离

心管中加入10ml清洗液,混匀细胞。 5.250g,离心10min。 6.弃上清。 7.用吸管以5ml清洗液重悬所得细胞。 8.250g,离心10min。 9.重复6、7、8,弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。 10.差异贴壁法纯化细胞 (1)用单核细胞无血清培养基或单核细胞完全培养基以1.5-3×106个/ml的密度重悬细胞,将细胞铺于一次性细胞板或细胞瓶中,放于37℃二氧化碳培养箱中进行贴壁培养。(2)2-4小时内贴壁的为巨噬细胞前体(俗称为单核细胞)。 (3)10-24小时内贴壁的单个核细胞为内皮、内皮祖细胞、干细胞。 (4)不贴壁的为淋巴细胞。 注: a)无血清培养基中不含任何动物成分,为得到更佳培养效果可添加10%自体血浆或2-8%的胎牛血清。 b)完全培养基中含2-20%胎牛血清(血清具体含量由所培养的目的细胞而定)。 c)由于每种细胞的贴壁时间存在差异可将所得细胞分开已达简单的纯化目的,此法成本相对较低。如需获得高纯度目的细胞则需在使用分离液后选用免疫磁珠阳性或阴性分选。 情况B:血液样本大于等于5mL时,实验方法如下: 1.取一支适当的离心管,依次小心加入试剂A、试剂D(试剂A与试剂D体积比为5:3,试剂总量与稀释后的样本量相等),制成梯度界面。 2.将经稀释后的血液样本小心加于分离液之液面上,450-650g(最大离心力可至1000g),

人外周血单个核细胞分离液说明书

分离后分离前 水平离心血浆层单个核细胞层分离液层 红细胞层人外周血单个核细胞分离液说明书 货号:P9010/P9011 规格:200mL 产品简介: 本产品是一种用于分离人外周血单个核细胞的无菌、低内毒素水平的密度梯度分离液。外周血中单个核细胞(PBMC)包括淋巴细胞和单核细胞,其体积、形态和密度与其他细胞不同,红细胞和粒细胞密度较大,为1.090g/mL左右,淋巴细胞和单核细胞密度为1.075~1.090g/mL,血小板为1.030~1.035g/mL。为此利用一种密度介于1.075~1.092之间而近于等渗的溶液做密度梯度离心,使一定密度的细胞按相应密度梯度分布,从而将各种血细胞加以分离。 产品指标: 密度 1.077±0.001g/mL 渗透压 290~350mOsm/kg H2O 无菌 0.1μm 滤膜过滤保存条件: 本产品对光敏感,应该室温避光储存,保质期2年。无菌开封后,保存于室温。 操作步骤: 1.取新鲜抗凝全血(EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝 均可)或者去纤维蛋白血液,用等体积的全血 及组织稀释液或者PBS稀释全血。 2.在离心管中加入适量分离液(当稀释后血液体 积小于3mL时,加入3mL分离液;大于等于3mL, 加入等体积分离液。但二者的总体积不能超过 离心管的三分之二,否则会影响分离效果), 将稀释后的血液平铺到分离液液面上方,注意

保持两液面界面清晰。(可以使用巴氏德吸管吸取血液,然后将血液小心的平铺于分离液上,因为两者的密度差异,将形成明显的分层界面。如果样品较多加样时间较长,在离心之前出现红细胞成团下沉属正常现象。) 3.室温,水平转子500~1000g,离心20~30min(血液的体积越大所需的离心力越大,离心时间越长,最佳 的分离条件需摸索,离心转速最大不超过1200g)。 4.离心后将出现明显的分层:最上层是稀释的血浆层,中间是透明的分离液层,血浆与分离液之间的白 膜层即为单个核细胞层,离心管底部是红细胞与粒细胞。 5.小心的吸取白膜层细胞到15mL洁净的离心管中,10mL PBS或细胞洗涤液洗涤白膜层细胞。250g,离心 10min。 6.弃上清,5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞,250g,离心10min。 7.重复步骤6 8.弃上清,细胞重悬备用。 注意事项: A.开封前颠倒混匀,本分离液为无菌产品,为延长分离液保存时间,请在无菌条件下启封,避免微生物 污染。 B.分离液使用时应始终保持室温(18℃~25℃),如室内温度较低,可将分离液预热。4℃或者是温度较 低的条件下离心,可能会导致白膜层中红细胞污染加重。 C.血液样本最好为新鲜抗凝血(采血2h以内),为保持单个核细胞的活性,应避免冷冻和冷藏。 D.稀释血液或洗涤细胞,不可使用含Ca、Mg离子的缓冲液及培养液,其成分会导致血细胞凝集,大大降 低细胞得率及纯度。 E.部分塑料制品(如聚苯乙烯)因其带有的静电作用,可能会导致细胞挂壁,影响分离效果。 F.血液样本的粘稠度或者是温度差异,可能会影响分离效果,可以调节离心转数和离心时间,摸索最佳 的分离条件。 G.吸取过多的单个核细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒细胞数量增 加;吸取过多的血浆层可能会导致单个核细胞中血浆蛋白及血小板污染。

检测血红细胞分析报告

检测血红细胞分析报告 检测血红细胞分析报告 大部分人去检测血液的时候,面对那张报告单,就好像是在看天书一样,完全不知所云,以下这篇主要针对检测血红细胞分析报告,和红细胞压积偏高症状的原因和会导致什么?希望能帮到你! 1.血常规,通常指标有,红细胞,白细胞,血小板,血红蛋白.红细胞和血红蛋白下降一般是贫血,白细胞上升伴中性粒细胞比率上升可能是细菌感染.(给药给抗生素)白细胞上升伴淋巴比率上升可能是病毒感染.不过要看具体情况,因为个人体质不同,有些人会一过性的指标增高,但是只是高出参考范围一点,不能说具体有什么病,建议继续检查几次.有些是生理性的波动(正常的意思).这可能和剧烈运动,上下午时间等有关.血小板下降和凝血功能等有关系. 2.肝功能ALT(这个通常是来检测肝脏功能的,特别是对于脂肪肝,肝炎),AST,GGT,AKP(胆囊方面的)

3.肾功能,尿素,肌酐,尿酸(对痛风诊断有一定意义,也就是说这个指标高了,不肯定是痛风问题) 4.血脂:甘油三酯,胆固醇,LDL,HDL,APoA,APoB,LPa 5.电解质:K,NA,cL 2~5都是生化指标,如果高低出参考范围很多,那就要注意了,注意多检查几次,结合自身的情况咨询医生. 6.免疫指标(一般咨询医生):肝炎指标,乙肝两对半(一般人是五项阴性,或者表面抗体阳性,(打过疫苗)除此以外,建议咨询医生.)丙肝,丁,甲等其他肝炎如有阳性指标,咨询医生.肿瘤指标(AFP,cEA),等 红细胞压积偏高症状是怎么引起的?引起红细胞压积偏高症状的疾病有哪些? 病因:引起休克的原因很多,分类亦有多种方法。从临床角度按其病因和病理生理的特点可将休克分为:①心原性休克;②低血容量性休克;③感染性休克; ④过敏性休克;⑤神经原性休克;⑥其他尚有内分泌功能不全(肾上腺皮质功能减退,甲状腺功能减退等)及内分泌功能亢进(如甲状腺危象、甲状旁腺功能亢进、类癌及原发性醛固酮增多症等)所致的休克。

人外周血单核细胞分离技术

人外周血单核细胞分离 1. 抗凝血的预离心分别取正常人新鲜抗凝全血 A: 20 mL于50 mL离心管中,以2 000 r /min离心20 min,吸弃上层血浆,获得下层沉淀细胞约10~12.5 mL。 2. 沉淀细胞的稀释与离心分离在所获取沉淀 A 中的细胞中加入Hank′s液( 不含Ca2+、Mg2+, pH 7.2 ~7.6) 体积比仍未1:1,混匀,制成细胞悬液。 B: 无菌抗凝血与Hank′s液或PBS以1:1体积在试管中混匀。 另取一离心管,加入LTS1077淋巴细胞分层液,然后用毛细吸管距分层液上1cm处将细胞悬液小心而缓慢地加于其上面,使稀释血液重叠于分层液上。此时稀释后的细胞悬液分离液淋巴细胞体积为:1:1。与用水平离心机以2000 r /min 离心20min,离心结束后,取出离心管,可见管中液体已经分层。 管内可见分为4层:最上层是血浆,含部分血小板:第二层为薄薄的白膜层,主要台单个核细胞,还混杂有少量血小板;第三层为分离液层;第四层为粒细胞及红细胞,红细胞沉于管底,而粒细胞则紧贴在压积红细胞上呈一层很薄的白膜 3. 单个核细胞的提取、洗涤与悬浮、贴壁 吸去最上层的血浆,收集血浆层和淋巴细胞分离液交界面的单个核细胞,尽量全部吸出PBMC。加3~4倍以上体积Hanks或PBS液于所得的单个核细胞中,用毛细吸管轻轻吹判均匀,避免产小气泡,液柱高度不超过离心管的2/3。混匀后离心1500r/min离心 10min,低速离心有利于去除细胞悬液中留存的血小板,去上清液。 注意:还可以先用吸管把雾状层上面的液体吸走,注意不要碰到雾状层,然后在把要的部分慢慢吸出来。第二种方法,比较简单一些。 再用同样洗涤液洗涤细胞2次,1500r/min离心10min,洗去残留的淋巴细胞分离液。再以RPMI-1640 培养基离心洗涤1次,吸尽上清,以充分去除血小板等杂质。按每毫升血液标本加0.2 mL含20%小牛血清的Hank′s液( 或含10%胎牛血清及25 mmol /L

血液实验实验报告汇总

血液实验实验报告 09 生物技术 摘要:血液在体内承担着物质运输、免疫等重要的生理功能。比较不同动物的血液组成和血细胞的差异,对了了解血液的功能以及不同动物体的特征有重要意义。制作血涂片用于观察红细胞、白细胞、血小板形态;使用血细胞计数板于显微镜下直接计数,计算分别得到红细胞、白细胞数目。 关键字:血液红细胞白细胞血细胞计数血涂片 第一章前言 血液在维持内环境稳定上起着重要作用,具有运输、缓冲、防御等功能。比较不同动物的血液组成和血细胞的差异,对了了解血液的功能以及不同动物体的特征有重要意义。 动物红细胞的形态、大小、数目与动物的进化和生态适应均有一定的关系,一般来说,动物越高等,红细胞的数目越多,而体积越小,同时血细胞也高度分化;白细胞体积(除鱼类)比红细胞大,但比重却比红细胞小。白细胞按其组成又分为粒细胞和无粒细胞。在不同生理状态下,白细胞数目波动较大。 通过观察不同脊椎动物的血涂片,并在镜下计数,即可初步观察到不同脊椎动物血细胞形态变化即数目变化。 第二章材料与方法 2.1 血涂片的制作与观察 2.1.1 材料

鲤鱼、牛蛙、家鸽、家兔、小白鼠血液样品,洁净载玻片,毛吸管,瑞氏染液,蜡笔 2.1.2方法 取末血样少量置于玻片的一端,左手 持载玻片,右手以边缘平滑的推片的一端 从血滴前方后移接触血滴,血滴即沿推片 散开,推片与载片夹角保持30-45度平稳 地向前移动,载片上保留下一薄层血膜。 待干后用蜡笔在血膜两侧划线,以防染液 溢出。然后将血膜平放在染色架上,加瑞 氏染液2-3滴,使覆盖整个血膜。固定 0.5-1.0分钟,滴加等量或稍多的新鲜蒸 馏水。与染料混匀染色5-10分钟。当液 面浮现一层金黄色金属状物质,表示染液 起了作用。用蒸馏水冲去染液,待自然干燥 后,即可置血涂片于显微镜下进行镜检。 红细胞 淡红色,无核的圆形细胞,因红细胞为双凹形,故边缘部分染色较深,中心较浅,直径7-8微米。 颗粒白细胞 嗜中性颗粒白细胞:体积略大于红细胞,细胞核被染成紫色分叶状,可分1-5叶。直径10-12微米。 嗜酸性颗粒白细胞:略大于嗜中性白细胞,细胞核染成紫色,通常为2叶,胞质充满嗜酸性大圆颗粒,被染成鲜红色。直径10-15微米。 嗜碱性颗粒白细胞:体积略小于嗜酸性白细胞,细胞质中有大小不等被染成紫色的颗粒,颗粒数目较嗜酸性白细胞的颗粒少,核1-2叶,染成淡蓝色。直径10-11微米。 淋巴细胞 胞质少,常为围绕细胞核的一薄层,其中无颗粒细胞核是肾形或马 蹄形,染成蓝紫色。 血小板 血小板体形甚小,形态不规则,染淡蓝色,内含紫色颗粒,无核,常聚集成团。

不同培养基对人外周血单核细胞来源树突状细胞发育的影响

文章编号(Article ID):1009-2137(2011)04-1010-05·论著· 不同培养基对人外周血单核细胞来源 树突状细胞发育的影响 陈晨,刘元林,梁晓雷,朱恒,李红,吴英,毛宁,张毅 军事医学科学院基础医学研究所细胞生物学研究室,北京100850 摘要本研究旨在探讨RPMI1640和IMDM两种培养液对诱导人外周血单核细胞向树突状细胞(DC)发育分化的影响。利用GM-CSF+IL-4细胞因子组合,在培养条件一致的前提下,改变培养液种类,通过对成熟、未成熟DC形态观察,用流式细胞术检测细胞表型和吞噬能力、应用混合淋巴细胞反应(MLR)检测其刺激T细胞的增殖能力,用悬浮芯片技术检测DC与同种异体T细胞共培养后上清中所含细胞因子的变化,分析不同培养液对DC功能的影响。研究结果表明,两种培养液培养所得的DC在形态上无显著差异,DC的吞噬能力以及CD14和CD83的表达亦无显著差异,但应用IMDM培养的DC的CD1a表达明显降低,且对T细胞增殖的刺激能力也显著降低;IMDM培养的DC高表达IL-6、IL-8和IL-10,而IL-12的表达则显著降低。结论:不同的培养体系可获得功能不同的DC,IMDM培养的DC可能与免疫耐受有关,本研究结果为DC在临床上的应用提供了新思路。 关键词RPMI1640;IMDM;单核细胞;树突状细胞 中图分类号R329.28文献标识码A Effect of Different Culture Mediums on the Development of Monocyte-derived Dentritic Cells CHEN Chen,LIU Yuan-Lin,LIANG Xiao-Lei,ZHU Heng,LI Hong,WU Ying,MAO Ning,ZHANG Yi Department of Cell Biology,Institute of Basic Medical Sciences,Beijing100850,China Corresponding Author:ZHANG Yi,Professor,Senior Scientific Researcher.Tel:(010)66931320.E-mail:zhangyi@nic.bmi.ac.cn Abstract This study was aimed to investigate the effect of RPMI1640and IMDM on the development of human peripheral blood monocyte-derived dendritic cells.Under the same cytokines and culture conditions,the different medium types were tested,and the morphology of mature and immature dendritic cells was observed by microscopy,the cell phenotype and endocytosis ability were detected by flow cytometry.Furthermore,the immunoregulatory function of various DC was analyzed by mixed lymphocyte reaction(MLR),the expression of cytokine in culture supernatant of MLR system was also analyzed by Bio-plex technology.The results showed that there were no difference in morphology,CD14,CD83 expression and endocytosis ability between IMDM-cultured DC and RPMI-1640medium-cultured DC,but there was a lower expression of CD1a in IMDM-cultured DC.Moreover,DC cultured with IMDM displayed a significant reduction in stimulating T cell proliferation,and highly expressed IL-6,IL-8and IL-10,but low expressed IL-12.It is concluded that the different cultural mediums can induce DC with different functions and DC cultured with IMDM may correlated with induction of immune tolerance.The results of this study will provide a new idea for DC clinical application. Key words RPMI1640;IMDM;monocyte;dentritic cell J Exp Hematol2011;19(4):1010-1014 树突状细胞(dendritic cells,DC)作为一种重要的免疫辅佐细胞,是体内最强的抗原呈递细胞。它最大的特点是能够显著刺激初始型T细胞,激发机体免疫反应,在诱导免疫应答中起关键作用[1]。因此DC在人类重大疾病(如肿瘤、移植免疫等)的发病和治疗中具有重要的研究价值。由于DC在体内含量很低,约占白细胞总数的1%-2%,且缺乏特异性的表面分子加以识别与纯化,因此近年来有关DC种类和功能的研究成为焦点。目前有关DC来2+造血干细胞来源的DC,另一种是外周血单核细胞来源的DC。体外培养DC的培养液为RPMI1640[2,3],结合粒巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimu-lating factor,GM-CSF)和白介素4(interleukin-4,IL-4),可诱导获得CD1a+CD83+具有抗原呈递功 基金项目:国家重点基础研究资助项目(编号2010CB833604);国家自然科学基金面上项目(编号31070996 通讯作者:张毅,教授、研究员.电话:(010)66931320.E-mail:zhangyi@nic.bmi.ac.cn 2011-02-14收稿;2011-03-29接受 · 0101 ·中国实验血液学杂志Journal of Experimental Hematology2011;19(4):1010-1014

血细胞分析报告

竭诚为您提供优质文档/双击可除 血细胞分析报告 篇一:检测血液细胞分析报告 检测血液细胞分析报告 白细胞总数12.2乘10`9/L淋巴细胞比率30.4%中值细胞比率3.9% 淋巴细胞3.7乘10`9/L中值细胞0.5乘10`9/L中性粒细胞8乘10`9/L红细胞总数5.25乘10`12/L血红蛋白 112g/L红细胞压积51.3%高 红细胞平均体积97.8FL平均血红蛋白含量21.3pg低平均血红蛋白浓度218g/L低红细胞分布宽度11.7%血小板总数89乘10`9/L低血小板平均体积10.9FL高血小板分布宽度8FL低血小板压积0.09%低 一、血液一般检查: 1、红细胞计数(Rbc) [正常参考值] 4.0×1012- 5.3×1012个/L(400万-550万个/mm3)。

3.5×1012-5.0×1012个/L(350万-500万个/mm3)。 4.0×1012- 5.3×1012个/L(400万-530万个/mm3)。 [临床意义] 碍性贫血、缺铁性贫血等。 胞增多症、肺气肿等。 2、血红蛋白测定(hb) [正常参考值] 120-160g/L(12-16g/dL)。 110-150g/L(11-15g/dL)。 120-140g/L(12-14g/dL)。 [临床意义] 性再生障碍 血液浓缩、真性红细胞增多症、肺气肿等。 3、白细胞计数(wbc) [正常参考值] 4×109-10×109/L(4000-10000/mm3)。

15×109-20×109/L(15000-20000/mm3)。 [临床意义] 新生儿。另外采血部位不同,也可使白细胞数有差异,如耳垂血比手指血的白细胞数平均要高一些。 化脓性感染、尿毒症、 生障碍性贫血、某些传染病、肝硬化、脾功能亢进、放疗化疗等。 4、白细胞分类计数(Dc) [正常参考值] 0.01-0.05(1%-5%)。 0.50-0.70(50%-70%)。 0.005-0.05(0.5%-5%)。 0.20-0.40(20%-40%)。 0.03-0.08(3%-8%)。 [临床意义] 出血、严重组织损伤、慢性粒细胞膜性白血病及安眠药中毒等。 碍性贫血、粒细胞缺乏症等。

血细胞分析检验报告单

血细胞分析检验报告单 姓名:性别:男年龄:79 门诊号:住院号:201710024 送检科室:荣康科床号:02 标本类型:全血标本状态:样本编号: 临床诊断: 项目名称结果单位参考范围项目名称结果单位参考范围 白细胞13.75↑109/L4-10血红蛋白浓度113g/L110-150 淋巴细胞 1.63109/L 1.26-3.35红细胞压积37.0%36.6-44 中性粒细胞 6.49109/L 2.1-8.89平均红细胞体积83.1fL82.9-98 单核细胞0.39109/L0.25-0.84平均血红蛋白含量28.2pg27-32.3 嗜酸性粒细胞0.04109l/L0.01-0.4平均血红蛋白浓度320g/L318-347 嗜碱性粒细胞0.03109l/L0.01-0.07红细胞分布宽度SD40.80fL38.2-49.2 淋巴细胞比率 5.9umol/L18.3-45.7红细胞分布宽度CV14.0%12.1-14.3 中性粒细胞比率88.3%42.9-74.3血小板337109/L100-300 单核细胞比率 5.9% 4.2-11.8血小板压积0.37%0.18-0.39 嗜酸性粒细胞比率0.6%0.2-5.3平均血小板体积9.80fL9.1-11.9 嗜碱性粒细胞比率0.5%0.1-1血小板分布宽度10.60fL9.9-15.4 红细胞 4.781012/L 3.5-5.5大型血小板比率23.4%17.5-42.3 送检医师:送检时间:2017-08-11 08:10 检验医师:检验日期:2017-08-11 08:10 报告时间:2017-08-11 09:24 审核医师: 本报告仅对本标本负责,结果供医师参考,如有疑问请及时与检验科联系。

对外周血单个核细胞分离方法探讨

对外周血单个核细胞分离方法探讨韩亚萍刘源章莉莉刘婷李军黄祖瑚 2004-7-24 17:06:00 中华现代临床医学杂志 2003年11月 第1卷第9期 【摘要】目的探讨外周血单个核细胞(PBMC)的不同分离方法对分离效果、贴壁能力以及淋巴细胞的增殖活性的影响。方法取肝素抗凝血,分别用羟乙基淀粉(hydrixyethylstarch,HES)自然沉降法、HES离心沉淀法、Ficoll密度梯度离心法三种方法分离单个核细胞,直接进行贴壁计数及多种细胞因子诱导的杀伤细胞 (Cytokine-induced killer,CIK)培养。结果 HES自然沉降法、HES离心沉淀法、Ficoll 密度梯度离心法分离的PBMC回收率分别为86.4%、86.0%、85.1%。结论羟乙基淀粉离心沉淀法可有效地分离PBMC。 关键词羟乙基淀粉淋巴细胞分离液单核细胞 Study on the methods of separating peripheral blood mononuclear cells HanYaping,Liu Yuan,Zhang Lili,et al. Deparment of Infectious Diseases,The First Affiliated Hospital of Nanjing M edical University,Nanjing210029. 【Abstract】 Objective To investigate the difference among three protocols o f isolating peripheral blood mononuclear cells(PBMCs)through observing the re covery rate,t he adherent ability and lymphocytes proliferation acˉtivity of t he isolated PBMCs.Methods Use three different isolation protocols,HES(hydrixy e thylstarch)sedimentation method,HES centrifugation method and Ficoll density gradient centrifugation,to isolate PBMCs from healthy donors.Then compare thes

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