Thermo Scientific NE-PER核蛋白-胞浆蛋白抽提试剂盒
描述
Thermo Scientific NE-PER核蛋白-胞浆蛋白抽提试剂盒提供了高效的细胞裂解和抽提方法，可在两个小时之内完成胞浆蛋白与核蛋白的分离操作。
NE-PER核蛋白-胞浆蛋白抽提试剂盒的特性：
? 快速—在两个小时之内获得胞核与胞浆内的可溶性蛋白组分
? 可靠—NE-PER试剂盒已经被950篇以上的发表文献引用
? 通用–适用于培养细胞或组织（仅适用于新鲜样本）的核蛋白抽提
? 可扩展—两种规格试剂盒，满足从细胞和组织中抽提样本的应用需求
? 方便—操作简单，无需超速梯度离心
? 兼容性好—获得样本适合于多种下游应用，包括免疫印迹、凝胶迁移分析、蛋白分析、报告基因分析以及酶活性分析
NE-PER试剂盒为用户提供了高效的核蛋白抽提方法，用户只需拥有台式微量离心机、离心管和移液器，进行简单的分步式细胞裂解及核蛋白与胞浆蛋白离心分离即可。NE-PER试剂盒能够高效地将胞浆蛋白与核蛋白溶解和分离为不同组分，交叉污染以及基因组DNA/mRNA 的干扰均降到了最低。一旦经过脱盐或稀释，分离后的蛋白即可用于免疫分析和蛋白相互作用实验，如迁移率分析(EMSA)、免疫共沉淀(Co-IP)和拉下实验。
分离胞核和制备核蛋白抽提物的方法很多，但大多数制备核蛋白抽提物的制备方法都很耗时，并需要机械匀浆、冻融循环、反复离心或透析，而这些都可能影响核蛋白的完整性。NE-PER 核蛋白-胞浆蛋白抽提试剂盒使用了基于试剂的分离方案，能够分步裂解细胞并从胞浆中分离出完整的细胞核，然后再从基因组DNA与mRNA中抽提核蛋白。这一温和的过程可在两小时之内完成，且使用培养细胞时仅需标准的桌台式离心机即可。此外，用户还可以从细胞培养物或组织样本中分离得到具有活性的核蛋白与胞浆蛋白。
本试剂盒能够从两百万个细胞中提出200至500μg胞浆蛋白和100至200μg的核蛋白（浓度为1mg/mL）。一般情况下，胞浆蛋白与核蛋白之间的交叉污染在10%左右。本方法分离得到的主要是细胞核中的可溶蛋白，而非与染色质结合的蛋白或核膜整联蛋白。可通过调整核抽提试剂（NER）的体积来改变胞核抽提物的蛋白浓度，而不会对抽提效率造成显著影响。从细胞中专一地抽提核蛋白是许多基因调控研究的关键，然而现有的许多分离细胞核、制备核蛋白抽提物的方法都十分耗时，且需要进行机械匀浆、冻融循环、重复离心或透析等操作，对许多脆弱的核蛋白的完整性造成影响。NE-PER试剂盒能够克服这些问题，通过EMSA及其他分析技术为用户提供高质量的浓缩核蛋白抽提物。
α-突触核蛋白与帕金森病
soluble protein which one kind of central nervous system synapse, expresses, gets sick the morbidity with Parkinson to have the close relationship. Alpha - the synapse nucleoalbumin in each physiology, under environmental factor's influence exceptionally expresses and gathers, through biochemistry and so on a series of oxidized stress responded, has produced to neuron's toxic effect, thus participated in the occurrence which Parkinson gets sick. To Alpha - the synapse nucleoalbumin's chemical property, the accumulation mechanism and influencing factor's understanding and the research, will be very advantageous the prevention which and the treatment will get sick in Parkinson. 【Key words】Alpha - synapse nucleoalbumin; Parkinson sickness; Louis minute 帕金森病是一种中老年人常见的运动障碍疾病，以黑质多巴胺能神经元变性缺失和路易小体形成为病理特征，临床上表现为静止性震颤，运动迟缓，肌强直和姿势步态异常等。 α-突触核蛋白是一种在健康人的脑组织中广泛分布的 可溶性蛋白，它是帕金森病的发病机制中最重要的蛋白，因为它是路易小体的主要结构成分，α-突触核蛋白聚集与路易小体的形成及多巴胺能神经元的死亡密切相关。本文就α-
蛋白质提取与制备的原理和方法
蛋白质提取与制备蛋白质种类很多，性质上的差异很大，既或是同类蛋白质，因选用材料不同，使用方法差别也很大，且又处于不同的体系中，因此不可能有一个固定的程序适用各类蛋白质的分离。但多数分离工作中的关键部分基本手段还是共同的，大部分蛋白质均可溶于水、稀盐、稀酸或稀碱溶液中，少数与脂类结合的蛋白质溶于乙醇、丙酮及丁醇等有机溶剂中。因此可采用不同溶剂提取、分离及纯化蛋白质和酶。 蛋白质与酶在不同溶剂中溶解度的差异，主要取决于蛋白分子中非极性疏水基团与极性亲水基团的比例，其次取决于这些基团的排列和偶极矩。故分子结构性质是不同蛋白质溶解差异的内因。温度、pH、离子强度等是影响蛋白质溶解度的外界条件。提取蛋白质时常根据这些内外因素综合加以利用。将细胞内蛋白质提取出来。并与其它不需要的物质分开。但动物材料中的蛋白质有些可溶性的形式存在于体液（如血浆、消化硫等）中，可以不必经过提取直接进行分离。蛋白质中的角蛋白、胶原及丝蛋白等不溶性蛋白质，只需要适当的溶剂洗去可溶性的伴随物，如脂类、糖类以及其他可溶性蛋白质，最后剩下的就是不溶性蛋白质。这些蛋白质经细胞破碎后，用水、稀盐酸及缓冲液等适当溶剂，将蛋白质溶解出来，再用离心法除去不溶物，即得粗提取液。水适用于白蛋白类蛋白质的抽提。如果抽提物的pH用适当缓冲液控制时，共稳定性及溶解度均能增加。如球蛋白类能溶于稀盐溶液中，脂蛋白可用 稀的去垢剂溶液如十二烷基硫酸钠、洋地黄皂苷（Digitonin）溶液或有机溶剂来抽提。其它不溶于水的蛋白质通常用稀碱溶液抽提。 蛋白质类别和溶解性质 白蛋白和球蛋白: 溶于水及稀盐、稀酸、稀碱溶液，可被50%饱和度硫酸铵析出。真球蛋白 : 一般在等电点时不溶于水，但加入少量的盐、酸、碱则可溶解。拟球蛋白: 溶于水，可为50%饱和度硫酸铵析出 醇溶蛋白: 溶于70～80%乙醇中，不溶于水及无水乙醇 壳蛋白: 在等电点不溶于水，也不溶于稀盐酸，易溶于稀酸、稀碱溶液 精蛋白: 溶于水和稀酸，易在稀氨水中沉淀 组蛋白: 溶于水和稀酸，易在稀氨水中沉淀 硬蛋白质: 不溶于水、盐、稀酸及稀碱 缀合蛋白(包括磷蛋白、粘蛋白、糖蛋白、核蛋白、脂蛋白、血红蛋白、金属蛋白、黄素蛋白和氮苯蛋白等) : 此类蛋白质溶解性质随蛋白质与非蛋白质结合部分的不同而异，除脂蛋白外，一般可溶于稀酸、稀碱及盐溶液中，脂蛋白如脂肪部分露于外，则脂溶性占优势，如脂肪部分被包围于分子之中，则水溶性占优势。 蛋白质的制备是一项十分细致的工作。涉及物理学、化学和生物学的知识很广。近年来虽然有了不改进，但其主要原理仍不外乎两个方面： 一是利用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配于可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析、有机溶剂提取、层析和结晶等； 二是将混合物置于单一物相中，通过物理力场的作用使各组分分配于不同区域而达到分离的目的，如电泳、超离心、超滤等。由于蛋白质不能溶化，也不能蒸发，所能分配的物相只限于固相和液相，并在这两相间互相交替进行分离纯化。 制备方法可按照分子大小、形状、带电性质及溶解度等主要因素进行分类。按分子大小和形态
脑核蛋白抽提
Brain Nuclear Extracts (2/97, AG; modified from David Frank) Lysis Procedure 1. Place small piece of frozen ctx (approx one hemisphere of E18 Ctx) in 1 ml PBS lysis buffer. 2. Homogenize with dounce homogenizer (5 strokes with A, 5 strokes with B). 3. Transfer homogenate to eppendorff tube. Spin at 4 C for 5 mins. 4. Discard supernatant, resuspend pellet (nuclei) in 1 ml Extraction Lysis Buffer. 5. Sonicate nuclei with two 15 sec bursts. 6. Spin at 4 C for 15 mins. 7. Recover supernatant and transfer to new tube. 8. Quantify protein concentration by Bradford Assay. Label tubes and freeze at -70 C. 9. To run lysate in gel, suspend required amount in 2X SDS sample buffer (50 μl) with b-mercapto-ethanol, boil, cool on ice, and load. Note: To make whole brain lysate, go directly to step 4 and start by placing tissue in 1 ml extraction buffer.
汉坦病毒@
汉坦病毒
Hantavirus
汉坦病毒属病原学
布尼亚病毒科汉坦病毒属，-ssRNA分3个节段 L RNA M RNA
包膜
S RNA
G2包膜糖蛋白
血凝
核衣壳蛋白 RNA聚合酶
G1包膜糖蛋白
受体吸附、中和抗原
细胞培养：金黄地鼠肾细胞、Vero细胞、 恒河猴肾细胞等多种细胞中缓慢增殖， 可形成包涵体
易感动物：黑线姬鼠、乳小白鼠等
黑
线
姬
小白鼠
鼠
汉坦病毒型别、动物宿主、致病性及分布
病毒型别
动物宿主
汉滩病毒
黑线姬鼠
（hantaan
virus，HTNV）
首尔病毒
褐家鼠
（Seoul virus，
SEOV）
辛诺柏病毒
草原
（Sin Nombre 鹿鼠
virus，SNV ）
所致疾病
分布地区
肾综合征出血热
（hemorrhagic fever with renal syndrome， HFRS）
朝鲜，中国 和远东地区
HFRS
中国，朝鲜
（高热、出血、肾损 和日本等
害）
汉坦病毒肺综合征
南、北美洲
（hantavirus
pulmonary syndrome，
HPS） （急性肺水肿，成
人呼吸窘迫征，青壮年多见）
HFRS的特点
9人群普遍易感，隐性感染少
9临床特征：
高热、出血、肾损害
三痛＝头痛、眼眶痛、腰痛
三红＝面部、颈部、胸部潮红
95期临床表现：
发热期、低血压休克期、少尿期、
多尿期、恢复期 9病死率：~15% 9免疫性：持久
病毒性出血热病的“3H”：
hyperpyrexia
hemorrhage
hypotention
5
凯基核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒
凯基核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒 Cat Number：For Research Use Only Store at -20℃for one year Expire date： 一、试剂盒说明 本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取核蛋白和/或胞浆蛋白，提取制备过程简便。制备的核蛋白和胞浆蛋白能保持天然活性，并且纯度较高。提取的蛋白可用于进一步的转录因子活性分析、凝胶阻滞实验(gel shift assay)、免疫共沉淀、Western Blotting、酶活性测定等后续蛋白质研究。 二、试剂盒组份 三、操作步骤 Ⅰ 实体组织蛋白的提取 1、组织样本，将组织剪切成小块，加入适量的冰冷PBS均浆后，静置5 min ， 弃沉淀，小心吸取上清转移至另一离心管中； 2、上清4℃离心500×g，3 min，弃上清，估计细胞压积PCV（离心后的 紧实细胞体积）； 3、每20μL细胞压积中，加入200μL预冷的Buffer A【使用前每mL Buffer A加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制剂】，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上10～15min； 4、加入11μL冷Buffer B，最大转速涡旋剧烈振荡5s，放置冰上1min； 5、再次最大转速涡旋剧烈振荡5s后，4℃离心，16000×g,5min； 6、尽快将上清转入另一预冷的洁净微量离心管，置于冰上，即得胞浆蛋白； 7、在离心沉淀物（细胞核）中加入100μL预冷的Buffer C (使用前每mL Buffer C加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制剂)，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上40min，每间隔10 min涡旋剧烈振荡 15 seconds； 8、4℃离心，16000×g,,10min，尽快将上清转入一预冷的洁净微量离心管， 即得核蛋白； 9、上述提取的胞浆蛋白和核蛋白进行蛋白定量（Braford法或BCA法）， 分装并保存于-80℃，避免反复冻融。 Ⅱ 培养细胞蛋白提取
蛋白-细胞核蛋白提取方法
提取细胞核蛋白的步骤： 1.向培养细胞的平皿中加入少量（保证在1.5ml TUBE内能放下）冷PBS(或1*D-Hanks) 2.，用细胞刮刀尽可能多的刮下细胞，收集到1.5ml的离心管中。 在预冷的离心机中，４度，1000rcf，1－3分钟，沉降细胞。 为尽可能多的获得细胞，可将一次离心后的上清再重复刮细胞一次； 2. 将细胞重悬于cell lysis buffer中（加入体积106细胞/200uL，体积估计方法还是没确 定,should be sufficient; 一般就是一个10cm平皿加1ml cell lysis buffer）,添加蛋白酶抑 制剂；先破细胞膜，得到细胞核（没有用B DOUNCE）； 冰上放置（不震荡，可偶尔用枪轻吹）30分钟至1小时（此时核膜没有破，有核染色为证），充分裂解； cell lysis buffer： 5mM PIPES pH 8.0 85mM KCL, 0.5% NP40, 1% protein inhibitor; 3. ４度，1000rcf，20分钟，上清为胞质蛋白（蛋白浓度比较低，如需要检测，建议先 浓缩一下），沉淀为细胞核； 此时可以将沉淀冻存于－70℃； 4. 将沉淀重悬于100-200 ul nucleai lysis buffer（体积视目的蛋白表达丰度而定，一般 50-100ul）中，添加蛋白酶抑制剂，冰上放置30分钟至1小时（每5分钟震荡一次），充分裂解；可以观察到沉淀慢慢消失，溶液变澄清； nucleai lysis buffer：成分同SDS lysis buffer； 50mM Tris-Cl pH 8.1, 10mM EDTA, 1% SDS, 1% protein inhibitor; 5. 四度，最大转速离心，10分钟以上（尽可能沉淀完全），上清即为细胞核蛋白； （此文档部分内容来源于网络，如有侵权请告知删除，文档可自行编辑修改内容， 供参考，感谢您的配合和支持） 编辑版word
提取蛋白的常规方法
1、原料的选择 早年为了研究的方便，尽量寻找含某种蛋白质丰富的器官从中提取蛋白质。但至目前经 常遇到的多是含量低的器官或组织且量也很小，如下丘脑、松果体、细胞膜或内膜等原材料， - 105 - 蛋白质提取与制备Protein Extraction and Preparation 因而对提取要求更复杂一些。 原料的选择主要依据实验目的定。从工业生产角度考虑，注意选含量高、来源丰富及成 本低的原料。尽量要新鲜原料。但有时这几方面不同时具备。含量丰富但来源困难，或含量 来源均理想，但分离纯化操作繁琐，反而不如含量略低些易于获得纯品者。一般要注意种属 的关系，如鲣的心肌细胞色素C 较马的易结晶，马的血红蛋白较牛的易结晶。要事前调查 制备的难易情况。若利用蛋白质的活性，对原料的种属应几乎无影响。如利用胰蛋白酶水解 蛋白质的活性，用猪或牛胰脏均可。但若研究蛋白质自身的性质及结构时，原料的来源种属 必须一定。研究由于病态引起的特殊蛋白质（本斯.琼斯氏蛋白、贫血血红蛋白）时，不但 使用种属一定的原料，而且要取自同一个体的原料。可能时尽量用全年均可采到的原料。对 动物生理状态间的差异（如饥饿时脂肪和糖类相对减少），采收期及产地等因素也要注意。 2、前处理 a、细胞的破碎 材料选定通常要进行处理。要剔除结缔组织及脂肪组织。如不能立即进行实验，则应冷 冻保存。除了提取及胞细外成分，对细胞内及多细胞生物组织中的蛋白质的分离提取均须先 将细胞破碎，使其充分释放到溶液中。不同生物体或同一生物体不同的组织，其细胞破坏难 易不一，使用方法也不完全相同。如动物胰、肝、脑组织一般较柔软，作普通匀浆器磨研即 可，肌肉及心组织较韧，需预先绞碎再制成匀桨。 ⑴机械方法 主要通过机械切力的作用使组织细胞破坏。常用器械有：①高速组织捣碎机（转速可达 10000rpm，具高速转动的锋利的刀片），宜用于动物内脏组织的破碎；②玻璃匀浆器（用两 个磨砂面相互摩擦，将细胞磨碎），适用于少量材料，也可用不锈钢或硬质塑料等，两面间
蛋白质提取与制备的原理和方法
蛋白质提取与制备的原理和方法 蛋白质提取与制备蛋白质种类很多，性质上的差异很大，既或是同类蛋白质，因选用材料不同，使用方法差别也很大，且又处于不同的体系中，因此不可能有一个固定的程序适用各类蛋白质的分离。但多数分离工作中的关键部分基本手段还是共同的，大部分蛋白质均可溶于水、稀盐、稀酸或稀碱溶液中，少数与脂类结合的蛋白质溶于乙醇、丙酮及丁醇等有机溶剂中。因此可采用不同溶剂提取、分离及纯化蛋白质和酶。 蛋白质与酶在不同溶剂中溶解度的差异，主要取决于蛋白分子中非极性疏水基团与极性亲水基团的比例，其次取决于这些基团的排列和偶极矩。故分子结构性质是不同蛋白质溶解差异的内因。温度、pH、离子强度等是影响蛋白质溶解度的外界条件。提取蛋白质时常根据这些内外因素综合加以利用。将细胞内蛋白质提取出来。并与其它不需要的物质分开。但动物材料中的蛋白质有些可溶性的形式存在于体液（如血浆、消化硫等）中，可以不必经过提取直接进行分离。蛋白质中的角蛋白、胶原及丝蛋白等不溶性蛋白质，只需要适当的溶剂洗去可溶性的伴随物，如脂类、糖类以及其他可溶性蛋白质，最后剩下的就是不溶性蛋白质。这些蛋白质经细胞破碎后，用水、稀盐酸及缓冲液等适当溶剂，将蛋白质溶解出来，再用离心法除去不溶物，即得粗提取液。水适用于白蛋白类蛋白质的抽提。如果抽提物的pH用适当缓冲液控制时，共稳定性及溶解度均能增加。如球蛋白 类能溶于稀盐溶液中，脂蛋白可用 稀的去垢剂溶液如十二烷基硫酸钠、洋地黄皂苷（Digitonin）溶液或有机溶剂来抽提。其它不溶于水的蛋白质通常用稀碱溶液抽提。 蛋白质类别和溶解性质 白蛋白和球蛋白: 溶于水及稀盐、稀酸、稀碱溶液，可被50%饱和度硫酸铵析出。 真球蛋白: 一般在等电点时不溶于水，但加入少量的盐、酸、碱则可溶解。 拟球蛋白: 溶于水，可为50%饱和度硫酸铵析出 醇溶蛋白: 溶于70～80%乙醇中，不溶于水及无水乙醇 壳蛋白: 在等电点不溶于水，也不溶于稀盐酸，易溶于稀酸、稀碱溶液 精蛋白: 溶于水和稀酸，易在稀氨水中沉淀 组蛋白: 溶于水和稀酸，易在稀氨水中沉淀 硬蛋白质: 不溶于水、盐、稀酸及稀碱 缀合蛋白(包括磷蛋白、粘蛋白、糖蛋白、核蛋白、脂蛋白、血红蛋白、金属蛋白、黄素蛋白和氮苯蛋白等) : 此类蛋白质溶解性质随蛋白质与非蛋白质结合部分的不同而异，除脂蛋白外，一般可溶于稀酸、稀碱及盐溶液中，脂蛋白如
真核细胞裂解和总蛋白提取试验的标准操作规程
真核细胞裂解和总蛋白提取试验的标准操作规程（编号：032） 1、目的及适用范围 该SOP用来规范真核细胞裂解以及细胞中总蛋白提取的操作。 2、主要仪器 细胞刮刀、冰盒、冷冻台式高速离心机、垂直混匀仪、微量移液器 3、试剂及配制方法 3.1 PBS（pH7.4）：NaCl 8g、KCl 0.2g、Na2HPO4·12H2O 3.58g、 KH2PO4 0.24g，定容至1L。3.2细胞裂解液：1% NP40、150mM NaCl、20mM Hepes pH7.5、10% glycerol、mM EDTA；使用时在每40mL细胞裂解液中加入1片蛋白酶抑制剂cocktail，保存于-20℃。 4、相关器皿的预处理 所有相关容器和器具均需要预冷 5、操作步骤 5.1 吸出要收获的细胞的培养基。 5.2 用PBS洗细胞2次，以完全除去培养基，置于冰上。 5.3 加入合适体积的细胞裂解液（具体加入的量可参照问题向导2），用细胞刮刀将细胞刮下后用移液器将细胞裂解液收集至离心管中。 5.4 将离心管置于冰上10min。 5.5 将离心管放入垂直混匀仪，于4℃中快速垂直混匀30min，以使细胞充分裂解。 5.6 30min后，将离心管拿出，于4℃下12000rpm离心15min。 5.7 吸取上清于新的离心管中，上清即为收获的细胞总蛋白；弃去沉淀，沉淀为细胞核和未破碎的 细胞。 6、问题向导 6.1如果要收取的蛋白为核内蛋白，可以在细胞裂解液里加入0.1%-0.5% 的Triton-100，以裂解核膜，释放核蛋白。 6.2加入的细胞裂解液的量根据收获细胞的培养皿规格以及想要获得的目的蛋白的浓度来决定，正常情况下的比例为： 100mm 皿：1.0mL-1.2mL 63
α—突触核蛋白与帕金森病相互关系研究进展
α—突触核蛋白与帕金森病相互关系研究进展α-突触核蛋白是一种可溶性小分子蛋白主要在中枢神经系统的突出前末梢 表达。近年来关于α-突触核蛋白和帕金森病等神经退行性病的密切关系被广泛报道越来越多。在本综述中，详细介绍了α突触核蛋白的构成、生理功能和作用、病理生理、聚合机制等方面的研究进展，从α-突触核蛋白的角度理解帕金森病的发生机制。 标签：α-突触核蛋白；中枢神经系统 帕金森病（Parkinson’s Disease，PD）发病率在65岁以上人群中高达1%，神经系统退行性疾病中排在第二位，尤其男性罹患为多[1]。PD的临床特点集中在严重的运动性症状，包括静止性震颤、肌强直、姿势反射异常以及运动减少[2-3]。这些症状障碍可以与自主神经功能障碍、抑郁障碍、痴呆等其他神经精神功能障碍伴发[4]。病理学上PD特点为黑质致密部多巴胺神经元显著的退行性变，导致纹状体投射区或脑干多巴胺神经元投射的减少以及一系列运动皮质系统有关的运动功能障碍。这一神经退行性变伴随着存活多巴胺神经元和受累神经细胞胞浆和突触中路易小体的表现，但具体机制目前尚不清楚[5]。 尽管许多研究者试图阐明选择性多巴胺神经退化的机制，但PD仍是一种病理研究不明的散发性神经退行性疾病。基因和环境危险因素目前收到广泛的关注，但神经退行过程的始动因素目前仍不清楚[6]。基于目前研究，迟发型原发性PD是由于复杂的多重易感基因和环境因素引起的。此外，若干PD单基因家族类型以發病早和显性或隐性以遗传染色体病为特征。在众多与PD可能的基因中，四种PD有关的突变包括α-synuclein[7]、parkin[8]、泛素羧基末端水解酶（ubiquitin carboxy-terminal hydrolase L-1）[9]和DJ-1[10]。 尽管伴有特殊基因缺陷的家族性PD患者只占所有发病人群的一小部分，但对这些病例的研究可以有助于我们发现造成多因素散发性PD的核心蛋白通路。与α-syn编码有关的基因突变受到的重视，原因就在于在大多数家族性或散发性PD患者中，病理发现其路易小体中存在大量α-Syn纤维沉积[11-12]。 这一观察发现说明了尽管α-syn属于PD患者中不常见突变，但通过一些不正常的代谢性过程的积累，这些蛋白在家族或散发性PD的病例中起到了重要作用。 1 α-syn的分布和结构 α-Syn和β-Syn、γ-Syn同属于synuclein家族[13]，该家族蛋白只存在于脊椎动物中。α-Syn在脑部（尤其是新皮层、海马、纹状体、丘脑和小脑）的突触前末梢中广泛表达[14-15]。α-syn基因定位于4q21[16]。所有突触核蛋白的基因排序均类似，但是只有alfa-Syn与疾病相关。α-Syn最初在太平洋电鳗”加州电鯆”的放电器官中被发现。数百种保守的α-syn蛋白类似物存在于人类、鸟类、小鼠、
胞浆蛋白—核蛋白抽提试剂盒说明书
胞浆蛋白—核蛋白抽提试剂盒 产品编号产品名称包装 SINP001 胞浆－核蛋白抽提试剂盒50× 产品简介：细胞核和细胞浆目前成为研究细胞组分的两个热点，获得高浓度的细胞核蛋白和细胞浆蛋白成为得到好的研究结果的重要实验过程。本试剂盒主要原理是在低渗透压条 件下，使细胞充分膨胀，然后破坏细胞膜，释放出细胞浆蛋白，离心得到细胞核沉 淀。最后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。本试剂盒是本公司 非放射性EMSA试剂盒（cat; SIDET001, SIDET003, SIDET004,）实验成功的重要部 分，经BCA测定24cm2贴壁细胞(或50ml规格培养瓶养的悬浮细胞)抽提物，核蛋白 浓度约为 2.5ug/ul或更高。抽提得到的蛋白可以用于Western，EMSA， footprinting，报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。本试剂盒可足够您进行 50次抽提操作！ 包装清单： 试剂包装总量 5X Buffer A 1瓶35ml/瓶 2X Buffer B1支 1.5ml/支 Solution I（溶液I）1支 1.75ml/支 Solution II（溶液II）1支 1.75ml/支 Solution III（溶液III）1支 1.5ml/支 PMSF Solution 1支0.85ml/支 User Manual (说明书) 1份1份/Kit 保存温度： 4℃保存。 Ⅰ.准备抽提试剂：按照下列方法制备胞浆－核蛋白抽提液： 1.制备3ml胞浆蛋白裂解液I ： 试剂体积 5X Buffer A0.6ml Solution I（溶液I）30ul Solution II（溶液II）30ul PMSF Solution 15ul dd-H2O 2.325ml 总体积 3.0ml 注：PMSF Solution须在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入。
简单实用的核蛋白提取方法
Subject: Nuclear(核) Protein Extraction Materials: Tissue(liver, spleen, testis, etc), CHB, CRB, PBS, 10% NP40 Centrifuge, Eppendorf tube, Micropipette, tip Methods ①Sacrifice the mice by cervical dislocation. ②Pick the organ and put it into the vials(CryoTube) . ③Add 700 ?of PBS and Homogenization. ④Centrifuge (4000rpm, 5 min, RT) ⑤Aspirate supernatant, resuspend the tissue pellet in (5×volume of pellet) CHB. ⑥Incubate it on ice for 10min. ⑦Centrifuge (4000rpm, 10 min, RT) ⑧Aspirate supernatant. ⑨Resuspend tissue pellet in (3×volume of pellet) CHB-NP40.(10%NP40 : 1?/100?) ⑩Vortexing and pumping(30 times) ?Centrifuge (4000rpm, 10 min, 4℃) ?Remove the supernatant into a EP-tube and then put it into a -20℃freezer. (Cytoplasm ) ?Resuspend the pellet : Add 200?of CRB + 12?of 5M NaCl by gently pipetting. ?Incubate it on ice for 30 min. ?Centrifuge (12000rpm, 10 min, 4℃)
生工 细胞核蛋白提取试剂盒
细胞核蛋白质提取试剂盒 Nucleoprotein Extraction Kit 产品编号：C500009 包装规格：50 Assays 产品简介 本试剂盒提供独特的组份，采用特殊的非离子型去污剂，以及焦磷酸钠等数种蛋白磷酸酶和蛋白酶抑制试剂，能够在非变性和低渗的条件下裂解细胞，经过洗涤去除大部分胞质蛋白和膜蛋白，释放的细胞核能够保持完整，再用Lysis Buffer 对 细胞核蛋白质进行抽提的同时可以保持核蛋白质的活性，因此该产品可合适用于SDS-PAGE 电泳、Western Blot 、免疫共沉 淀、EMSA 、Pull Down 和转录调控等后续蛋白质或分子生物学相关实验的研究，每次可以从107 个培养细胞或200 mg 动物 组织提取核蛋白质，本试剂盒可以使用50次。 产品特点 1. 提取的核蛋白质可以最大限度的保持蛋白质的活性，可以用于EMSA ，转录因子分析的实验。 2. 可以从50x107 个培养细胞或50x200 mg 动物组织提取核蛋白。 3. 整个实验过程只需要45分钟左右。 4. 在提取的过程中，最大限度的减少了膜和胞质蛋白对核蛋白的污染。 5. 不需要超速度离心，可以同时处理多个样品。 运输和保存条件 常温下运输，在收到后，将磷酸酶抑制剂，PMSF 和DTT 在-20℃的环境中保存，其余2-8℃保存，保质期一年。 产品组成 成分 C500009 Lysis Buffer 10 mL Hypotonic Buffer 50 mL 磷酸酶抑制剂 300 μL PMSF 600 μL DTT 60 μL 操作步骤 A 实体组织蛋白的提取 1. 在每1mL 冷Hypotonic Buffer 加入5 μL 磷酸酶抑制剂，10 μL PMSF 和1 μL DTT 混匀。冰上保存数分钟待用。 2. 将100-200mg 固体组织置于培养皿中，手术剪将小块充分剪碎，尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织，用PBS 洗涤两次，离心，取沉淀后加入0.6 mL 冷Hypotonic Buffer 混匀， 4℃下玻璃匀浆器上下手动匀浆30-50 次。或超声破碎细胞，每次30 sec ，3～4 次，每次间隔1 min ，置于冰上冷却。均质匀浆或超声破碎细胞后应镜检，细胞破碎率不小于90％，同时没有明显的组织小块。 3. 转移到1.5 mL 预冷的离心管，手指弹管壁使沉淀悬起，冰浴10 min ，震荡10 秒钟，混匀。 4. 在4℃，800g (3000 rpm)离心5 min ，立即弃上清，再加0.4 mL 冷Hypotonic Buffer 震荡洗涤沉淀 30sec ，再 4℃，2500 g (5000 rpm) 离心5 min ，弃掉上清。 s a n g o n b i o t e c h
蛋白质提取常用试剂及操作方法
蛋白质提取常用试剂及操作方法 一、原料选择和前处理 （一）原料的选择 早年为了研究的方便，尽量寻找含某种蛋白质丰富的器官从中提取蛋白质。但至目前经常遇到的多是含量低的器官或组织且量也很小，如下丘脑、松果体、细胞膜或内膜等原材料，因而对提取要求更复杂一些。原料的选择主要依据实验目的定。从工业生产角度考虑，注意选含量高、来源丰富及成本低的原料。尽量要新鲜原料。但有时这几方面不同时具备。含量丰富但来源困难，或含量来源均理想，但分离纯化操作繁琐，反而不如含量略低些易于获得纯品者。一般要注意种属的关系，如鲣的心肌细胞色素C 较马的易结晶，马的血红蛋白较牛的易结晶。要事前调查制备的难易情况。若利用蛋白质的活性，对原料的种属应几乎无影响。如利用胰蛋白酶水解蛋白质的活性，用猪或牛胰脏均可。但若研究蛋白质自身的性质及结构时，原料的来源种属必须一定。研究由于病态引起的特殊蛋白质（本斯.琼斯氏蛋白、贫血血红蛋白）时，不但使用种属一定的原料，而且要取自同一个体的原料。可能时尽量用全年均可采到的原料。对动物生理状态间的差异（如饥饿时脂肪和糖类相对减少），采收期及产地等因素也要注意。 （二）前处理 1.细胞的破碎 材料选定通常要进行处理。要剔除结缔组织及脂肪组织。如不能立即进行实验，则应冷冻保存。除了提取及胞细外成分，对细胞内及多细胞生物组织中的蛋白质的分离提取均须先将细胞破碎，使其充分释放到溶液中。不同生物体或同一生物体不同的组织，其细胞破坏难易不一，使用方法也不完全相同。如动物胰、肝、脑组织一般较柔软，作普通匀浆器磨研即可，肌肉及心组织较韧，需预先绞碎再制成匀桨。 ⑴机械方法 主要通过机械切力的作用使组织细胞破坏。常用器械有：①高速组织捣碎机（转速可达10000rpm，具高速转动的锋利的刀片），宜用于动物内脏组织的破碎；②玻璃匀浆器（用两个磨砂面相互摩擦，将细胞磨碎），适用于少量材料，也可用不锈钢或硬质塑料等，两面间隔只有十分之几毫米，对细胞破碎程度较高速捣碎机高，机械切力对分子破坏较小。小量的也可用乳钵与适当的缓冲剂磨碎提取，也可加氧化铝、石英砂及玻璃粉磨细。但在磨细时局部往往生热导致变性或pH 显著变化，尤其用玻璃粉和氧化铝时。磨细剂的吸附也可导致损失。 ⑵物理方法 主要通过各种物理因素的作用，使组织细胞破碎的方法。 Ⅰ.反复冻融法 于冷藏库或干冰反复于零下15～20℃使之冻固，然后缓慢地融解，如此反复操作，使大部分细胞及细胞内颗粒破坏。由于渗透压的变化，使结合水冻结产生组织的变性，冰片将细胞膜破碎，使蛋白质可溶化，成为粘稠的浓溶液，但脂蛋白冻结变性。 Ⅱ.冷热变替法 将材料投入沸水中，于90℃左右维持数分钟，立即置于冰浴中使之迅速冷却，绝大部分细胞被破坏。 Ⅲ.超声波法 暴露于9～10 千周声波或10～500 千周超声波所产生的机械振动，只要有设备该法方便且效果也好，但一次处理量较小。应用超声波处理时应注意避免溶液中气泡的存在。处理一些
蛋白质提取的几种简单方法
蛋白质的提取方法 选择材料及预处理 以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识，但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析，有机溶剂提取，层析和结晶等；二是将混合物置于单一物相中，通过物理力场的作用使各组分分配于来同区域而达到分离目的，如电泳，超速离心，超滤等。在所有这些方法的应用中必须注意保存生物大分子的完整性，防止酸、硷、高温，剧烈机械作用而导致所提物质生物活性的丧失。蛋白质的制备一般分为以下四个阶段：选择材料和预处理，细胞的破碎及细胞器的分离，提取和纯化，浓细、干燥和保存。 微生物、植物和动物都可做为制备蛋白质的原材料，所选用的材料主要依据实验目的来确定。对于微生物，应注意它的生长期，在微生物的对数生长期，酶和核酸的含量较高，可以获得高产量，以微生物为材料时有两种情况： （1）得用微生物菌体分泌到培养基中的代谢产物和胞外酶等； （2）利用菌体含有的生化物质，如蛋白质、核酸和胞内酶等。植物材料必须经过去壳，脱脂并注意植物品种和生长发育状况不同，其中所含生物大分子的量变化很大，另外与季节性关系密切。对动物组织，必须选择有效成份含量丰富的脏器组织为原材料，先进行绞碎、脱脂等处理。另外，对预处理好的材料，若不立即进行实验，应冷冻保存，对于易分解的生物大分子应选用新鲜材料制备。 蛋白质的分离纯化 一，蛋白质（包括酶）的提取 大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液，少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中，因些，可采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。 （一）水溶液提取法 稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂，通常用量是原材料体积的1-5倍，提取时需要均匀的搅拌，以利于蛋白质的溶解。提取的温度要视有效成份性质而定。一方面，多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大，因此，温度高利于溶解，缩短提取时间。但另一方面，温度升高会使蛋白质变性失活，因此，基于这一点考虑提取蛋白质和酶时一般采用低温（5度以下）操作。为了避免蛋白质提以过程中的降解，可加入蛋白水解酶抑制剂（如二异丙基氟磷酸，碘乙酸等）。 下面着重讨论提取液的pH值和盐浓度的选择。
核蛋白提取试剂盒使用说明
核蛋白提取试剂盒使用说明 货号：R0050 规格：50T/100T 产品内容： 试剂盒组成50T100T 浆蛋白抽提试剂25ml50ml 核蛋白抽提试剂5ml10ml PMSF300ul1ml 保存：核/浆蛋白抽提试剂4℃保存，PMSF于-20℃保存。 产品简介： 核蛋白提取试剂盒提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提核蛋白的方法。整个过程只需约60分钟就可以将核蛋白和浆蛋白从细胞中分离出来。得到的蛋白可以用于Western blot等实验。本试剂盒通过浆蛋白抽提试剂使细胞膨胀破裂，释放出胞浆蛋白，再通过离心得到细胞核。然后通过核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。本试剂盒可以抽提50/100个样品（每个样品约2×106个Hela细胞，40mg）。 操作方法： 裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。 一、对于体外培养细胞： 1．根据用量取适当的浆蛋白抽提试剂和核蛋白抽提试剂加入PMSF，使
PMSF的最终浓度为1mM。PMSF需现用现加，若目标蛋白含有丰富的半胱氨酸，可以在两种蛋白抽提液中加入DTT至终浓度0.5mM。 2．对于贴壁细胞，去除培养液，用PBS洗一遍，用细胞刮刀收集细胞，或用EDTA消化后吹打下细胞（最好不用胰酶硝化，以免胰酶消化目的蛋白）。500g离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清留下沉淀备用。 3．对于悬浮细胞：用PBS洗一遍，500g离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清，留下细胞沉淀备用。 4．每20ul细胞沉淀加入200ul浆蛋白抽提试剂（2×106个细胞沉淀约20ul或40mg）。 5．用移液器吹打或高速涡旋15秒（可适当延长），必须使细胞沉淀完全分散开成单细胞悬液。细胞沉淀分散不完全会导致蛋白产量降低。 6．冰浴10分钟。 7．最高转速剧烈涡旋10秒，4℃12000～16000g离心10分钟。 8．上清即为抽提得到的细胞浆蛋白，立即吸取上清至预冷的样品管中备用，进行后续的PAGE、Western等实验，但蛋白浓度较低，可根据需要进行相应浓缩。 9．沉淀即为细胞核，要完全吸尽残余的上清（避免细胞浆蛋白的污染），加入50-100ul核蛋白抽提试剂。 10．用移液器吹打或高速涡旋15秒（可适当延长）至沉淀完全分散，冰浴10分钟。 11．最高转速剧烈涡旋10秒，4℃12000～16000g离心10分钟。
核蛋白提取试剂盒说明书
核蛋白提取试剂盒说明书 货号：R0050 规格：50T/100T 产品内容： 试剂盒组成50T100T 浆蛋白抽提试剂25ml50ml 核蛋白抽提试剂5ml10ml PMSF（100mM）300μl1ml 保存：核/浆蛋白抽提试剂4℃保存，PMSF于-20℃保存。 产品简介： 本试剂盒提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提核蛋白的方法。整个过程只需约60分钟就可以将核蛋白和浆蛋白从细胞中分离出来。得到的蛋白可以用于Western blot等实验。本试剂盒通过浆蛋白抽提试剂使细胞膨胀破裂，释放出胞浆蛋白，再通过离心得到细胞核。然后通过核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。本试剂盒可以抽提50/100个样品（每个样品约2×106个Hela细胞或40mg组织）。 操作方法： 裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。 一、对于体外培养细胞： 1．根据用量取适当的浆蛋白抽提试剂和核蛋白抽提试剂加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。PMSF需现用现加，若目标蛋白含有丰富的半胱氨酸，可以在两种蛋白抽提液中加入DTT至终浓度0.5mM。 2．对于贴壁细胞，去除培养液，用PBS洗一遍，用细胞刮刀收集细胞，或用EDTA消化后吹打下细胞（最好不用胰酶硝化，以免胰酶消化目的蛋白）。500g离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清留下沉淀备用。3．对于悬浮细胞：用PBS洗一遍，500g离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清，留下细胞沉淀备用。4．每20μl细胞沉淀加入200μl浆蛋白抽提试剂（2×106个细胞沉淀的体积约20μl或40mg）。 5．用移液器吹打或高速涡旋15秒（可适当延长），必须使细胞沉淀完全分散开成单细胞悬液。细胞沉淀分散不完全会导致蛋白产量降低。
细胞核质蛋白分离
介绍 核蛋白抽提试剂可以从哺乳动物培养的细胞或组织中逐步分离和制备细胞质和细胞核提取物。不变性的活性蛋白在不到两小时内纯化。在细胞颗粒中加入前两种试剂会导致细胞膜破裂和细胞质内容的释放。用离心法从细胞质提取液中提取完整细胞核后，用第三试剂从细胞核中提取蛋白质。用这种产品提取的核和细胞质组分提取物一般污染率不到10%，这对于大多数涉及核提取物的实验来说是足够的纯度 核抽提物比起全细胞裂解物通常更适合于进行基因调控研究。全细胞裂解液中的细胞成分对核蛋白的相互作用和稳定性有不利影响，核蛋白更集中于核提取物，而非全细胞裂解物。核提取物/试剂与多种下游应用兼容（包括Western blotting，BCA蛋白定量分析（产品编号23225），凝胶移位（产品编号20148），报告基因和酶活性的测定） 重要产品信息 ●此试剂盒适用于新鲜（未冷冻）的细胞或组织样品。使用蛋白酶抑制剂维持提取物的完 整性和功能。使用前，将蛋白酶抑制剂加入CRE I和NER浓缩物中以减少试剂稀释（浓缩蛋白酶抑制剂eg.100x）。不需要添加蛋白酶抑制剂到CER II。 ●如果在随后应用中需要大量的核提取物或出现问题，透析前用核提取物清除多余的盐。 试剂盒中的洗涤剂是不可透析的，但它主要是在细胞质中。使用Thermo Scientific?Slide-A-Lyzer?小型透析装置进行透析。另外，无回收蛋白或条块分割的不利影响下，NER 用于提取液的体积可以减小2倍可以得到更集中的核提取物。 ●在4°C条件下执行所有离心步骤，保持细胞样本和提取物在冰上。 额外所需材料 ●蛋白酶抑制剂 ●磷酸盐缓冲盐水(PBS) 细胞培养制备 ●贴壁细胞，用胰蛋白酶-EDTA消化，然后在500g离心5分钟。对于悬浮细胞，通过离 心在500G 5分钟收获。 ●用PBS重悬细胞颗粒冲洗细胞 ●1-10×106细胞转移至1.5ml离心管，并在500G 离心2-3分钟 ●使用吸管小心地去除和丢弃上清液，使细胞颗粒尽可能干燥。 ●在细胞中加入冷的CRE I（表1）。使用表1所示的试剂体积进行细胞质和核蛋白提取 不同细胞体积对应的试剂体积 红细胞压积(μL) CER I (μL) CER II (μL) NER (μL) 10 100 5.5 50 20 200 11 100 50 500 27.5 250 100 1000 55 500 *Hela细胞2×106细胞相当于20μL红细胞体积.
核蛋白提取protocol
Cytoplasmic and Nuclear Protein Extraction Materials: Reagents: Low Salt Buffer-For 10mL 200μL of 1M HEPES pH 7.9 2.5mL of glycerol 15μL of 1M MgCl2 200μL of 1M KCl 8μL of 250mM EDTA 100μL of 100mM DTT郃DD FRESH! 50μL of 100mM PMSF郃DD FRESH! 6.927mL of dH2O High Salt Buffer-For 10mL 200μL of 1M HEPES pH 7.9 2.5mL of glycerol 15μL of 1M MgCl2 2.67mL of 3M KCl 8μL of 250mM EDTA
100μL of NP-40 100μL of 100mM DTT郃DD FRESH! 50μL of 100mM PMSF郃DD FRESH! 4.357mL of dH2O Sucrose Buffer w/o NP-40-For 10mL 3.2mL of 1M Sucrose 300μL of 0.1M CaCl2 20μL of 1M MgAc 4μL of 250mM EDTA 100μL of 100mM DTT郃DD FRESH! 50μL of 100mM PMSF郃DD FRESH! 6.326mL of dH2O Sucrose Buffer w/ NP-40-For 1mL 1mL of Sucrose Buffer w/o NP-40 5μL of NP-40 Procedure: PERFORM ALL STEPS ON ICE! 1. Collect cells from 1 confluent T75 (scraping or trypsinizing, doesn抰matter). 2. Wash cells once with ice-cold PBS and repellet. 3. Resuspend cells in 1mL ice-cold PBS and transfer to an eppendorf tube. 4. Pellet cells at 200xg for 5 minutes. 5. Resuspend cells in 200mL Sucrose buffer with NP-40 by gently pipetting with a 1000mL tip, and incubate on ice for 5 minutes to lyse. 6. Pellet nuclei by centrifugation at 1500xg for 5 minutes and transfer the supernatant (cytoplasmic fraction) to a new tube. (NOTE: It抯best to leave the last 50mL at the bottom of the tube out of your cytoplasmic fraction, this reduces the likelihood of contaminating the cytoplasmic fraction with nuclear protein.) 7. Gently resuspend the nuclei in 1mL Sucrose buffer without NP-40. 8. Pellet the nuclei at 1500xg for 5 minutes. Discard supernatant. This and the above step removes leftover cytoplasmic contaminants using a sucrose cushion. 9. Gently resuspend nuclei in 50mL LOW salt buffer (nuclei should be semi-granular, and intact). 10. Add 0.2X volume HIGH salt buffer and gently flick tube. 11. Continue adding 0.2X HIGH salt buffer and gently flicking until 1X volume has been added OR the nuclei begin to shrink and viscosity increases (it generally takes me about 0.4X volume with HeLa cells). 12. Incubate tubes on the rotary platform in the cold room for 20 minutes 13. Centrifuge at 13000xg for 15 minutes. 14. Retain supernatant (nuclear fraction). QC Controls: β-Tubulin and PARP Western Blots on both nuclear and cytosolic samples NOTE: This method is low-salt, so it does not disrupt cytoskeletal interactions, which means you WILL pellet most if not all of any cytoskeletal proteins. This includes nuclear cytoskeletal proteins.