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球 菌

球      菌
球      菌

球菌

1.如何从脓汁标本中分离出A群乙型链球菌?写出检验程序、所用培养基、生化反应及结果。

答脓汁

2.如何确定从标本中分离的细菌为葡萄球菌?并确定其有无致病性。

答:①直接镜检,经革兰染色后镜检发现革兰染色阳性呈葡萄状排列的球菌,可初步报告疑为葡萄球菌,需进一步分离培养鉴定。②分离培养:血培养需经增

菌后转种血平板进一步鉴定,若无细菌生长,需连续观察7天,并以血平板确定有无细菌的生长。脓液、尿道分泌物、脑脊液沉淀物可直接接种血平板,37℃过夜,可形成直径约2-3mm、产生不同色素的菌落。金葡菌菌落周围有透明溶血环。

③试验鉴定:血浆凝固酶试验,甘露醇发酵试验,耐热核酸酶试验,肠毒素测定,SPA检测。致病性葡萄球菌菌落周围有透明溶血环,血浆凝固酶试验阳性,甘露醇发酵试验阳性,耐热核酸酶试验阳性,SPA检测有A蛋白的存在。

3.如何从尿道分泌物中分离出淋病奈瑟菌?写出检验程序、试验及结果。

初报分离培养(巧克力平板)

5%CO235℃ 48h

可疑菌落(无色透明菌落)

G-双球菌

氧化酶、触酶试验

均阳性

葡萄糖、蔗糖发酵试验

肠杆菌

淋病奈瑟菌

1.什么是不耐热肠毒素(LT)?它的物理性质、基本结构、致病机理及与霍乱毒素(CT)的关系如何。

答:LT是肠产毒型大肠杆菌产生的致病物质,因对热不稳定,故称为不耐热肠毒素。其65℃30min可被破坏。LT分为LT-Ⅰ和LT-Ⅱ,LT-Ⅱ与人类疾病无关,LT-Ⅰ是引起人来胃肠炎的致病物质。其结构包括1个A亚单位和5个B亚单位,其中A亚单位是毒素的活性部分。B亚单位与肠粘膜上皮细胞表面的GM1神经节苷脂结合后,使A亚单位穿越细胞膜与腺苷环化酶作用,令胞内ATP转变为cAMP。胞质内cAMP水平增高后,导致肠粘膜细胞内的水、氯和碳酸氢钾等过度分泌到肠腔,同时钠的吸收减少,导致可持续几天的腹泻。LT-Ⅰ与霍乱肠毒素两者间的氨基酸的同源性达75%,他们的抗原高度交叉。

2.什么是O157:H7大肠杆菌?其致病物质和所致疾病是什么?

答:O157:H7为肠出血性大肠杆菌的一个血清型,为出血性结肠炎和溶血性

尿毒综合征的病原体。其致病物质是其表达的志贺毒素。

3.如何根据O抗体和H抗体的变化特点判断肥达试验的结果?

答:若O、H凝集效价均超过正常值,则肠热症的可能性大,若两者均低,肠热症的可能性小,若O不高H高,可能预防接种或非特异性回忆反应,若O高H不高,则可能感染早期或与伤寒沙门菌O抗原有交叉反应的其他沙门菌感染。

4.对肠热症患者进行微生物学检查时标本采集应注意什么?

答:根据不同的疾病、不同的病程取不同的标本。肠热症第1、2周取外周血,第2、3周取粪便、尿液,全程可取骨髓分离培养细菌。

5.简述对疑似痢疾患者进行病原学诊断的常规及快速方法。

答:常规鉴定:①初步鉴定②最后鉴别③鉴别试验④血清学鉴定⑤非典型菌株可用传代法及毒力试验进行鉴定。

快速诊断:①直接凝集②免疫荧光菌球法③协同凝集试验④乳胶凝集试验⑤分子生物学方法

非发酵革兰阴性杆菌

1.假单胞菌属的代表菌种是何菌?其生物学性状有何特点?

答:铜绿假单胞菌是假单胞菌属的代表菌种。其生物学特性主要有4℃不生长,而42℃生长。在血琼脂、麦康凯培养基上均可形成5种不同形态的菌落,在普通培养基上可产生多种色素。

2.非发酵菌鉴定原则及初步分群试验

答:分群依据:①氧化酶试验②葡萄糖氧化发酵③动力④麦康凯培养基上生长情况。

3.假单胞菌的概念及其共同特点

答:假单胞菌属为需氧、有鞭毛、无芽胞、无荚膜的革兰阴性菌,氧化酶试验阳性,多为腐生菌,少数为植物和动物寄生菌,大多为条件致病菌。其共同特点是:革兰阴性、直或微弯、较细长、散在排列、无芽胞、有荚膜,多数有鞭毛,专性需氧,生长温度范围广,最适生长温度35℃,少数能在4℃或42℃生长。生长中可产生各种水溶性色素。

4.简述铜绿假单胞菌的检验方法

答:①标本的采集:按疾病和检查目的,采取不同的标本。

②标本直接检查:直接显微镜检查;抗原检测;核酸检测。

③分离培养和鉴定。

棒状杆菌属

1.简述白喉棒状杆菌的致病过程。

答:白喉棒状杆菌存在于白喉患者的喉头气管及鼻腔粘膜,有时皮肤、结膜等部位也可见到。传染源为患者及带菌者,细菌多随飞沫或污染的物品传播,感染后白喉棒状杆菌在鼻咽部粘膜处繁殖并产生外毒素,引起局部炎症和全身中毒症状。白喉杆菌在侵犯局部增殖,产生外毒素致病。

2.简述白喉杆菌体外毒力试验的原理、方法及结果判断。

答:①琼脂平板毒力试验。将含有20%牛血清肉汤琼脂分注与平皿中,每只平皿10ml,50℃冷却,在凝固之前,将浸有白喉抗毒素血清稀释液的滤纸条沉

于琼脂内,制成平板(Elek平板)。在与滤纸条相垂直的方向将待检菌画

直线接种,划线宽度约6-7mm,两端与皿壁连接。同时,与之相距10mm 处平行划线接种一标准产毒菌株,作为阳性对照。37℃培养24-48小时,若菌苔两侧出现斜向外延伸的乳白色沉淀线,并与其邻近的标准产毒株的沉淀线相吻合,则为产毒株。

②SPA协同凝集试验:将白喉抗毒素IgG先吸附在SPA上,再加入待检菌培

养物上清液。若有白喉外毒素,则与SPA-IgG结合出现可见的凝集反应。

③对流电泳:将已知的白喉抗毒素和待检菌培养液分置琼脂板两孔之中,电泳

30min后,若两孔之间出现白色沉淀线,表明待检菌为产毒株。

革兰阳性需氧杆菌

1.临床上对疑似的炭疽患者怎样鉴定病原。

答:若从标本中检出革兰阳性大杆菌,两端平截、呈竹节状排列,并有明显荚膜,在人工培养基上生长可产生芽孢,呈卵圆形,小于菌体,位于菌体中央;在普通琼脂平板上形成灰白色、扁平、干燥、无光泽的菌落;动力阴性,牛乳凝固试验、噬菌体裂解试验、串珠试验和青霉素抑菌试验均为阳性,则可报告:“检出炭疽芽胞杆菌”。有条件者可应用DNA探针,其敏感性高,特异性强。其他鉴定试验作为参考指标,可根据具体情况酌情选做。同时应注意与其它芽胞杆菌相鉴别。

放线菌属与诺卡菌属

分支杆菌

1. 简述结核菌素试验的原理、方法及结果分析和实际应用。

答:(1)原理:结核菌素试验属于迟发型超敏反应,用结核菌素试剂作皮肤试验,感染过结核分枝杆菌或接种过卡介苗者,一般都出现阳性反应。

(2)方法:取5UPPD或OT0.1ml注射于前臂掌侧皮下,经48—72h检查反应情况。应特别注意局部有无硬结,不能单独以红晕为标准。

(3)结果分析:①阳性注射部位硬结、红肿直径0.5—1.5cm之间。

这表明机体曾感染过结核,出现超敏反应,但不表示正患结核病;②强

阳性硬结直径超过1.5cm以上,表明可能有活动性结核,应进一步

检查;③阴性注射部位有针眼大的红点或稍有红肿,硬结直径小于

0.5cm,说明无结核感染,但应考虑下述情况:如受试者处于原发感

染的早期,或正患有其他传染病(如荨麻疹等)、霍奇金病、结节病、艾

滋病。

(4)应用:①选择BCG接种对象及测定接种效果,结核菌素反应阴性者应接种BCG;②结核菌素试验对婴幼儿可做诊断结核病之用;③可在未

接种BCG的人群中作结核分枝杆菌感染的流行病学调查;④可借用其测

定肿瘤病人的细胞免疫功能。

2. 结核分枝杆菌细胞壁中脂质含量高,这一特点有何意义?

答:结核分枝杆菌胞壁含脂质多,与其染色性、抵抗力、生长速度及致病性等特性有密切关系,脂质中的分枝菌酸使其具有抗酸性;细胞壁含大量脂质,可防止菌体内水分的丢失,故对干燥的抵抗力特别强;同时影响营养物质

的吸收,故生长缓慢,且脂质中的磷脂、索状因子、蜡质D、硫酸脑苷脂等毒性成分以不同机制致病。

3.简述从标本中检验结核分枝杆菌的方法。

答:1.显微镜检查

(1)直接涂片染色镜检:是一种临床常用的简易快速的检查方法。直接涂

片法是用接种环取病人痰液中浓厚部分或离心沉淀(3000r/min,20min)

的尿沉淀物2—3接种环涂片,涂片要厚。经自然于燥和火焰固定后进

行齐-尼抗酸染色,或作金胺“o”荧光染色。前法用油镜检查,后法用

荧光显微镜高倍镜检查。镜检时应仔细查遍整个涂片或观察至少100

个视野。结核分枝杆菌抗酸染色后呈红色,其它细菌和细胞为蓝色。经

荧光染色的结核分枝杆菌,在黑色背景中呈亮黄色。涂片镜检结果应报

告“找到抗酸性杆菌’’或“未找到抗酸性杆菌”,而不能报告“找到结

核分枝杆菌”。

(2)浓缩集菌涂片检查法:如果直接涂片镜检不易检出结核杆菌,应采用浓

缩集菌涂片检查法,以提高结核杆菌的检出率。所谓浓缩集菌涂片即为

将采集标本离心,取沉淀涂片,或是采用漂浮集菌法,集菌后标本经反

复多次使涂层加厚,一般取3—4个接种环,涂抹面积大约直径在15mm

即可,干燥固定后染色镜检。

2.核酸检测用PCR法快速诊断结核分枝杆菌感染。设计结核分枝杆菌特异rRNA片段的引物进行扩增,然后用结核分枝杆菌rRNA序列特异

的DNA探针与之杂交。PCR技术的特异性与敏感性均大于95%。

3.抗PPDIgG的检测用ELlSA法检测患者血清中抗PPDIgG,可作为活动性结核分枝杆菌感染的快速诊断方法之一。肺结核病人的血清阳性率为

80%—90%。

4.简述抗酸染色的步骤及结果,并举出两种抗酸菌。

答:①初染:石炭酸复红加温染5min②脱色:3%的盐酸酒精脱色1min③复染:美兰染1min

结果:抗酸菌为红色,非抗酸菌为蓝色。

结核分枝杆菌与麻风分枝杆菌均为抗酸菌

5.一患者怀疑患有肺结核,如何进行微生物学检查?(包括标本采集至报告结果的全过程,检查方法应有传统方法和快速检查方法。)

答:1)标本采集:根据感染部位不同,采集不同的标本。

2)标本直接检查:①显微镜检查②核酸检测③抗PPDIgG的检测。

3)分离培养与鉴定

4)药物敏感性试验

5)免疫学诊断

6)动物接种

厌氧性细菌

1.临床常见的致病性厌氧芽胞梭菌有哪些?其致病条件是什么?

答:临床常见的致病性厌氧菌主要有破伤风梭菌、产气荚膜梭菌、肉毒梭菌与艰难梭菌。其致病条件是大面积创伤、局部供血不足。

5 2.简述破伤风梭菌的形态及培养特性。

答:形态:菌体细长,由周鞭毛,能运动。无荚膜。芽胞正圆形,比菌体大,

位于菌体顶端,使细菌呈鼓槌状。

培养特性:专性厌氧菌普通培养基不易生长。在血平板上37℃培养48小时始见薄膜状爬行生长,伴?溶血。

6 3.简要列出破伤风的防治措施。

答:①采用注射破伤风类毒素的主动免疫法,作为特异性预防。

②迅速对伤口进行清创扩创,防止形成厌氧微环境,是十分重要的防治措

施。

③特异性治疗使用抗毒素。

6 4.简要比较无芽胞厌氧菌与厌氧芽胞梭菌的感染特点。

答:

5.产气荚膜梭菌的形态结构及培养特性。

答:革兰阳性粗大杆菌,芽胞位于次极端,呈椭圆形,无鞭毛。在菌体内可形成明显的荚膜。厌氧,但不如破伤风梭菌厌氧严格。最适生长温度45℃时,繁殖周期仅为8min,在血平板上,多数菌株有双层溶血环。在蛋黄琼脂平板上,菌落周围出现乳白色浑浊圈。在牛奶培养基内能分解乳糖产酸产生“汹涌发酵”现象。

6 6.肉毒梭菌的致病机理及防治原则

答:其致病物质是肉毒毒素,肉毒毒素是已知最剧烈的神经毒素。肉毒毒素经胃肠道吸收入血后,作用于中枢神经系统的脑神经核和外周神经-肌肉接头处,阻碍乙酰胆碱的释放,引起运动神经末梢功能失调,导致肌肉麻痹。

6 7.试举出四种由产气荚膜梭菌引起的疾病名称。

答:气性坏疽、食物中毒、坏死性肠炎、深部脓肿。

6 8.为什么所有的脆弱类杆菌对青霉素具有耐药性?治疗应选用哪些抗生素。答:因脆弱类杆菌是革兰阴性菌,青霉素的作用位点是五肽交联桥,革兰阴性菌无五肽交联桥,所以对青霉素耐药。治疗应选用氯霉素、氨苄青霉素、甲硝唑等。

粪菌移植是怎么一回事

“粪菌移植”是怎么一回事? A04陈颖婷 近日我科收住了一位肠道炎症患者,在禁食的情况下,长期反复出现腹泻,考虑肠道菌群失调,与家属充分沟通后,决定行中消化道粪菌移植,术前停抗生素24小时。经鼻肠管注入冰冻解冻菌液250ml (含25ml乳果糖),现密切观察患者的大便次数,性状,量等情况。这次的粪菌移植对于我们科室来讲也是首例。 那么什么是粪菌移植疗法呢? 粪菌移植是从健康人粪便中分离功能菌群,然后移植到患者消化道,通过重建患者肠道菌群而实现对疾病的治疗。 粪菌移植适用于哪些患者呢? 适用于胃肠道疾病适应难辨梭状芽孢杆菌感染肠病,炎症性肠病,抗生素相关性腹泻,肠易激综合征,复发性CDI,坏死性小肠结肠炎,顽固性便秘,食物肠道过敏,自身免疫相关性肠病等。 粪菌移植的作用机制是怎样的呢? 粪菌移植作用机制大量补充肠道的有益菌,抑制肠道的致病菌,补充抗菌物质补充免疫抗体,调节肠道内环境,改善肠道的舒适度,修复病变的肠粘膜,下调或上调细胞因子,补充各种消化酶,促进肠道的营养物质吸收。调节肠道菌群与脑的信号通路。 粪菌移植的发展背景 早在东晋317-420年时期,就有葛洪著《肘后备急方》用新鲜的粪汁或发酵的粪水治病:"饮粪汁一升,即活"的记载。明代李时珍的

《本草纲目》记载了多种用人粪治病的方法用来治疗严重腹泻,发热,腹痛,呕吐等,可见古人对粪菌移植疗法也颇有研究。 1958年,美国外科医生的首次报道FMP治疗严重伪膜性肠炎。1983年fmt治疗难辨梭状芽孢杆菌感染。1989年,borody用以治疗慢性便秘,溃疡性结肠炎,克罗恩病。由于全球CDI的挑战胃肠道微生物复杂性在健康中和和预防疾病的作用凸显,粪菌移植引起了极大的关注。2012年7月,美国胃肠病学杂志重点推荐了最新应用粪菌移植治疗难辨梭状芽孢杆菌。2014年粪菌移植技术被美国《时代周刊》评为2013年时代医学突破之一。 全世界已经治疗超过5000例尚未报道严重的不良事件,缺乏有效对比资料,高质量临床实验证据FMT适用于治疗常规手段治疗失败的肠道细菌相关性疾病,是选择性治疗,而不是治疗普通疾病或者严重疾病的初级治疗。 粪菌移植常见并发症及处理又有些什么呢? 粪菌移植后可能出现腹胀,腹泻,呕吐,发热等因对症于补充电解质液体,并寻找发生的原因,操作过程中可能出现上下消化道黏膜损伤,出血,穿孔,感染,应立即请外科会诊,防止正常粪便污染,供菌者留份时间过长而造成。粪菌被污染应及时进行粪菌移植术,其他可能发生的,无法预料的情况等。

解淀粉芽孢杆菌

生防菌解淀粉芽孢杆菌研究进展 吴一晶,林艺芬,林河通,等(包装与食品机械,2012,30(6): 49-52)解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),属于芽孢杆菌属(Bacillus sp.),是一种具有广谱抑菌活性的细菌,具有较强的次生代谢产物产生能力,能产生多种抑菌物质。 1 解淀粉芽孢杆菌生物学特性 解淀粉芽孢杆菌,需氧,革兰氏染色阳性,呈短杆状(0.7~0.9μm×1.8~3.0μm) ,具有运动性,中生椭圆形孢子。硝酸盐还原阳性,接触酶阳性,水解淀粉,液化明胶,吲哚试验阴性,V-P 反应阴性,甲基红反应阴性。Luria-Bertani 液体培养基中形成菌膜,在固体培养基上菌落呈淡黄色,不透明,表面粗糙,边缘不规则。 解淀粉芽孢杆菌抑菌物质的提取、分离方法主要有大孔树脂法、酸碱沉淀法、硫酸铵沉淀法、色谱法等。经研究发现,解淀粉芽孢杆菌的抑菌物质主要是抑菌蛋白、脂肽类物质和聚酮化合物等。 1抑菌蛋白 张宝俊等采用盐酸沉淀法提取解淀粉芽孢杆菌LP-5 发酵液的抗菌粗蛋白,并用DEAE-52离子交换层析和Sephadex G-100 凝胶层析进行纯化,得到一种等电点为6.33、分子量为20.3 kD的抗菌蛋白。刘俏等采用截留分子量为70 000的双酚A 型聚砜中空纤维膜超滤提取解淀粉芽孢杆菌活性蛋白。 2 脂肽类物质 信珊珊等利用红外吸收光谱法对解淀粉芽孢杆菌WH1 产抗菌活性物质进行了鉴定,推测其抗菌物质为Surfactin 类脂肽。Caldeira 等利用LC-ESI-MS 和抗真菌试验相结合的方法,发现解淀粉芽孢杆菌CCMI 1051 的抗菌物质为具有抗真菌活性的Iturin 和Surfactin,其分子量为1000~1100 Da。Yu 等应用FAB MS/MS CID 分析表明,具有抑制立枯丝核菌( Rhizoctonia solani) 的解淀粉芽孢杆菌B94 的有效成分为3 种Iturin A 的同分异构体。Rao 等应用HPLC 和MEKC 方法研究了解淀粉芽孢杆菌B128 的抑菌成分,结果表明其抑菌成分为Iturin A,且应用RP-HPLC能很好地分离出Iturin A 的同分异构体。 邓建良等通过PCR 技术探索脂肽抗生素合成酶的相关基因,利用酸沉淀法制备活性粗提物,最后通过HPLC-ESI-MS 和MALDI-TOF-MS 对抗菌粗体液中活性物质进行定性定量分析,发现其抑菌成分主要是C14-Fengycin A、C16-Fengycin A、C17-Fengycin A、C17-Fengycin B 和C16-Iturin A 等5 种脂肽抗生素。Chen 等利用酸沉降法得到抑菌粗提物,再通过生物活性制导分馏、真空闪蒸色谱法、半制备型高效液相色谱纯化,最后利用

芽孢杆菌属

第一、芽孢杆菌属的分类 一、芽孢杆菌属微生物特性 芽孢杆菌属,革兰氏阳性菌,需氧或兼性厌氧,产生芽孢,大多数无荚膜,以周生鞭毛运动。细胞呈直杆状,常以成对或链状排列,具圆端或方端。由于芽孢杆菌属的微生物能够形成芽孢的特性使得他们能够抵抗各种极端环境如高温、极酸、极盐,而且对各种杀菌剂具有抵抗力,因此,他们在各种自然环境中都能被分离到。芽孢杆菌属微生物具有共同的特性,都能够形成带有芽孢的生物膜,且代谢产物相似,都能产生环肽、抗生素、酸(多聚谷氨酸、聚天冬氨酸)和聚多糖等。 二、芽孢杆菌的分类方法 分类学是研究生物分类的原理、方法和实践的科学,包括分类、命名、描述和鉴定等内容。目前细菌分类主要是采取多项分类技术。多项分类的概念是Colwell于1968年提出的,原理是利用微生物多种不同的信息,包括表型、基因型和系统发育的信息,综合起来研究微生物分类和系统进化的过程。概括的讲,多项分类是传统的表型分类、数值分类和分子分类等方法的综合应用,因而可以更客观地反映生物间的系统进化关系。目前,多项分类法被认为是研究各级分类最有效的手段,可用于所有水平上分类单位的描述和定义。 2、1经典分类(表型特征) 表型是由于基因和环境因素相互作用引起的,在细胞、器官和整体水平上能检测和观察到的特征。一般,原核生物的表型特征能区分不同菌种但不能区分菌株。表型特征包括形态学特征、生理生化特征、抗生素的敏感性、噬菌体分型、血清学分析。表型特征虽然不能说明物种之间的亲缘关系,但它却是人们认识微生物实际重要性和研究生物进化的基础,仍然是分类研究的基础。 芽孢杆菌,菌体杆状,直或近直,0.3~2.2×2.1~7.0um,多数运动,鞭毛典型侧生,形成抗热内生孢子,严格好氧或兼性厌氧。由于实验条件的限制,传统芽孢杆菌的分类主要是根据形态学特征即好氧或厌氧和有无芽孢形成。Gibson和Gorden依据芽孢的形状(卵形或球形)以及它们在菌体或芽孢囊中的位置,提出芽孢形态群体概念,将芽孢杆菌分为三个类群。由于这个种的分离方法是以群体来划分的,它对芽孢杆菌分类鉴定有着非常重要的作用。群1、孢囊不显著膨大,芽孢椭圆或柱形,中生到端生,革兰氏阳性 A、生长在葡萄糖洋菜上的淡染细胞的原生质中有不着色的球状体 1、严格好氧;不产生乙酰甲基甲醇................................................巨大芽孢杆菌 2、兼性厌氧;产生乙酰甲基甲醇....................................................蜡状芽孢杆菌 B、生长在葡萄糖洋菜上的淡染细胞的原生质中没有不着色的球状体 1、7%氧化钠中生长;石蕊牛奶不产酸 a、在pH5.7生长;产生乙酰甲基甲醇 (1)水解淀粉;硝酸盐还原到亚硝酸盐 ①兼性厌氧;利用丙二酸盐..............................................地衣芽孢杆菌 ②好氧;不利用丙二酸盐..................................................枯草芽孢杆菌 (2)不水解淀粉;硝酸盐不还原到亚硝酸盐........................短小芽孢杆菌 b、在pH5.7不生长;不产生乙酰甲基甲醇................................坚强芽孢杆菌 2、7%氯化钠中生长;石蕊牛奶产酸...............................................凝结芽孢杆菌 群2、椭圆形芽孢使孢囊膨大,芽孢中生到端生,革兰氏阳性、阴性或可变 A、从碳水化合物产气 1、产生乙酰甲基甲醇;从甘油形成二羟基丙酮............................多粘芽孢杆菌 2、不产生乙酰甲基甲醇;不形成二羟基丙酮................................浸麻芽孢杆菌

芽孢杆菌营养缺陷型的筛选检出与鉴定

实验二、芽孢杆菌氨基酸营养缺陷型菌株的筛选、检出与鉴定 一、实验目的 掌握各种培养基的配制方法; 理解选育营养缺陷突变株的选育原理; 掌握细菌氨基酸营养缺陷型的诱变、筛选与鉴定方法; 获得芽孢杆菌氨基酸营养缺陷型菌株并对其鉴定。 二、实验原理 营养缺陷型是指野生型菌株由于基因突变,致使细胞合成途径出现某些缺陷,丧失合成某些物质的能力,必须在基本培养基中外源补加该营养物质,才能正常生长的一类突变菌株。其本质是一种减低或消除末端产物浓度,以解除反馈控制的代谢调控中间产物或分支合成途径中末端产物得以积累。营养缺陷型菌株广泛应用于氨基酸、核苷酸、维生素的生产中。也广泛应用于基因定位、杂交及基因重组等研究中的遗传标记制作。 筛选营养缺陷型菌株一般具有四个环节:诱变处理、淘汰野生型、营养缺陷型的检出、鉴定缺陷型[1]。 1.诱变处理 基因突变可分为自发突变和诱发突变,许多物理、化学、生物因素对微生物都有诱变作用,这些能使突变率提高到自发突变水平以上的因素称为诱变剂,对于氨基酸营养缺陷型的诱变常选用亚硝基胍。 亚硝基胍(NTG,N-甲基-N-硝基-亚硝基胍)为诱变剂,在低致死率的情况下又很强的诱变作用,有超诱变剂之称。在碱性时NTG 能形成重氮甲烷(CH2N)、烷化DNA 而使基因突变:pH5-5.5 时,NTG 形成HNO2,本身也是诱变剂;pH 6.0 时,NTG 本身不变化,可作用于核蛋白而引起诱变效应。它的主要作用是引起DNA链中GA向AT转变。NTG 是—种超诱变剂,杀菌力较弱,诱变作用较强,其作用部位又往往在 DNA的复制叉处,易造成双突变。一般选用NTG 处理时,诱变频率较高,可使百分之几十的细菌发生营养缺陷型突变。NTG也是一种致癌因子,在操作时要特别注意,切勿直接与皮肤接触,凡有亚硝基胍的器皿都的要用1mol/LNaOH溶液浸泡,使残存的亚硝基胍分解破坏,然后清洗[2]。 2.淘汰野生型 诱变处理后的个体,营养缺陷型的比例较低,可采用菌丝过滤法、抗生素法、高温杀菌法除去野生菌,从而达到浓缩营养缺陷型菌株的目的。 菌丝过滤法:该方法只适用于真菌,在基本培养基中野生型孢子可以发育成菌丝体,而突变型的不可以,这样经诱变后的孢子在基本培养基中培养一段时间后过滤,重复几次后就可达到浓缩突变型菌体的作用。 抗生素法:是利用野生型菌株能在基本培养基中生长,而缺陷型不能生长,将诱变处理液在基本培养基中培养让野生型生长一周,而缺陷型无法生长,加入一定量的抗生素,使活化的野生型杀死,保存了缺陷型。在选择抗生素时,细菌可以用青霉素,酵母可用制霉菌素。高温杀菌法:本实验利用芽孢杆菌类的芽孢和营养体对热敏感性的差异,诱变后的细菌形成芽孢后把处在芽孢阶段的细菌移到基本培养液中,振荡培养一定时间,野生型芽孢萌发,而营养缺陷型芽孢不能萌发。此时将培养物加热到80℃,维持一定时间,野生型细胞大部分被杀死,缺陷型则得以保留。 3.营养缺陷型的检出 营养缺陷性的检出方法包括影印法、夹层法、限量补充法、逐个检出法。 影印法:先将一较平皿直径小1cm的金属圆筒蒙上一层灭菌的丝绒,用金属夹夹住,灭菌。在完全培养基上长出的全部菌落在丝绒上轻轻一压,使之成为印模,标记方位。将基本培养

黏液型铜绿假单胞菌对抗生素的耐药性分析

黏液型铜绿假单胞菌对抗生素的耐药性分析 目的探讨黏液型铜绿假单胞菌(PA)的耐药性和耐药特征,指导临床合理使用抗菌药物。方法采用湖南天地人微生物分析系统对辽阳市二院2009年1月~2012年12月临床分离的95株黏液型铜绿假单胞菌耐药情况进行数据分析。结果黏液型铜绿假单胞菌对美洛培南100.0%敏感,其余抗菌药物的耐药率为2.1%~35.8%;2009年~2012年黏液型铜绿假单胞菌对除美洛培南以外的其他抗生素耐药性有上升趋势。结论黏液型铜绿假单胞菌对抗生素体外药敏试验耐药性较低,但由于产生生物膜,体内呈耐药现象。临床治疗选药时必须考虑黏液型铜绿假单胞菌在体内存在生物膜的影响因素,应加强监测,指导临床合理使用抗生素并控制医院耐药菌感染的流行。 标签:黏液型铜绿假单胞菌;耐药性;生物膜;抗菌药物 铜绿假单胞菌广泛分布于各种水、空气,及正常人的皮肤、肠道和呼吸道等处,是土壤中最常见细菌之一,也是临床上常见的条件致病菌,可引起人体多部位感染。因其易定植、易变异以及多重耐药性的特征,已成为医院感染的重要病原菌之一。全国革兰阴性菌耐药监测(NPRS)数据显示,近年来铜绿假单胞菌在所有院内感染的革兰阴性菌中位居前列[1]。本文对本院分离出的95株黏液型铜绿假单胞菌进行耐药性分析,以指导临床合理使用抗生素。 1 资料与方法 1.1 一般资料 菌株来源于2009年1月~2012年12月辽阳市第二人民医院临床分离的95株黏液型铜绿假单胞菌(排除同一患者相同部位重复分离到的相同细菌),以铜绿假单胞菌ATCC27853为药敏实验质控菌株(购自中国药品生物制品检定所)。 1.2 仪器与试剂 哥伦比亚血琼脂培养基(贝瑞特生物技术(郑州)有限公司生产,批号:0011219),伊红美兰培养基(自制),伊红美兰琼脂(杭州天和微生物试剂有限公司生产,生产批号:120531),湖南天地人微生物分析系统TRB-200B(湖南长沙天地人生物科技有限公司生产),湖南天地人非发酵菌科生化药敏试验卡(湖南天地人生物科技有限公司生产,批号:2012829)。 1.3 方法 严格按照《全国临床检验操作规程》将送检标本接种在血培养基和伊红亚甲蓝培养基,取血培养基上生长良好的可疑菌落进行分离培养,取纯培养菌落配制0.5麦氏单位细菌悬液,用湖南天地人微生物分析系统非发酵菌科细菌药敏鉴定板进行鉴定,经鉴定为铜绿假单胞菌,药敏结果均通过专家分析系统。抗生素的

铜绿假单胞菌感染

铜绿假单胞菌感染 百科名片 铜绿假单胞菌(绿脓杆菌)在自然界分布广泛,对人类而言,属于条件致病菌。长期应用激素、免疫抑制剂,进行肿瘤化疗、放射治疗等导致病人免疫功能低下,以及手术后或某些治疗操作后(气管切开、保留导尿管等)的病人易导致本菌感染,故认为该菌为医院内感染的重要病原菌之一。 [编辑本段]病原 铜绿假单胞菌是假单胞菌属的代表菌种,在琼脂平板上能产生蓝绿色绿脓素,感染伤口时形成绿色脓液。本菌为无荚膜、无芽胞、能运动的革兰阴性菌,形态不一,成对排列或短链状,为专性需氧菌,最适宜生长温度为370C,致病性铜绿假单胞菌在420C 时仍能生长,据此可与荧光假单胞菌等进行鉴别,本菌生长对营养要求不高。菌体0抗原有两种成分,一为内毒素蛋白,是一种保护性抗原,另一为酯多糖,具有特异性,根据其结构可将铜绿假单胞菌分成12个血清型,此外还可利用噬菌体或铜绿假单胞菌素分型。铜绿假单胞菌对外界环境抵抗力较强,在潮湿处能长期生存,对紫外 线不敏感,湿热550C 1小时才被杀灭。 [编辑本段]流性病学 正常人皮肤,尤其潮湿部位如腋下、会阴部及耳道内,呼吸道和肠道均有该菌存在,但分离率较低。铜绿假单胞菌感染常在医院内发生,医院内多种设备及器械上均曾分离到本菌,通过各种途径传播给病人、病人与病人的接触也为传播途径之一。除院内感染外,铜绿假单胞菌还可引起与医院环境无关的感染,近年来对此已有更多的认识,它已成为足穿刺感染、心内膜炎、滥用药物所致的骨髓炎、眼部感染、新生儿感染性外耳炎、游泳池等引起的皮肤病的主要病原菌,亦是战伤感染的常见致病 菌。 [编辑本段]发病机制 铜绿假单胞菌的多种产物有致病性,其内毒素则在发病上无重要意义。其分泌的外毒素A(PEA)是最重要的致病、致死性物质,进入敏感细胞后被活化而发挥毒性作用,使哺乳动物的蛋白合成受阻并引起组织坏死,造成局部或全身疾病过程。动物模型表明:给动物注射外毒素A后可出现肝细胞坏死、肺出血、肾坏死及休克等,如果注射外毒素A抗体则对铜绿假单胞菌感染有保护作用。铜绿假单胞菌尚能产生蛋白酶,有外毒素A及弹性蛋白酶同时存在时则毒力最大;胞外酶S是铜绿假单胞菌所产生的一

多粘类芽孢杆菌

多粘类芽孢杆菌 Bacillus polymyxa(Paenibacillus polymyxa) 产品性能: 本品属微生物农药(多粘类芽孢杆菌专利产品:已获得中国发明专利授权(ZL02151019.9))是通过有效成分-多粘类芽孢杆菌产生的抗菌物质和位点竞争的作用方式,杀死和控制病原菌,从而达到防治病害的目的,同时对初发病的青枯病,具有一定的治疗作用。 Properties of products: This product belongs to the microbicides (Paenibacillus polymyxa is a patented product: it has been obtained patent for an invention(ZL02151019.9) ), It reach to the purpose of prevention and treatment of diseases by their active ingredient syetem-antimicrobial substance that (Paenibacillus polymyxa) generated and the way of site competition to kill and control pathogenic bacteria, and it has some therapeutic functions to bacterial and fungal wilt that at the initial stage of disease occoured 使用技术和使用方法:

铜绿假单胞菌1

1.简述 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa),习称绿脓杆菌,为假单胞菌属菌种,广泛分布在土壤,水及空气中,故可通过环境和生产的各个环节污染药品,本菌是常见的化脓性感染菌,由于本菌对许多抗菌药物具有天然的耐药性,国内外药典均将铜绿假单胞菌列为检查项目之一。 铜绿假单胞菌按增菌,分离、纯培养、革兰染色、镜检及生化试验等步骤进行检验。 2. 仪器、设备和用具(见大肠埃希菌2) 3. 试液、指示液 3.1 0.9%无菌氯化钠溶液或磷酸盐缓冲液。 3.2 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液。 3.3 1%盐酸二甲基对苯二胺试液。 3.4盐酸试液 3.5 氯仿(三氯甲烷) 4.培养基 4.1营养肉汤培养基。 4.2胆盐乳糖(BL)培养基。 4.3营养琼脂培养基。 4.4溴代十六烷基三甲胺。 4.5绿脓菌素测定用培养基(PDP琼脂)。 4.6明胶培养基。 4.7硝酸盐胨水培养基。 5.对照用菌液 铜绿假单胞菌[CMCC(B)10104]营养琼脂斜面培养物少许,接种至5ml营养肉汤培养基内,于36℃±1℃培养18~24h后,用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至1:106,使对照菌加入量含10~100cfu/0.1ml,菌数测定在做阳性对照实验的同时用营养琼脂浇碟或平板涂布经培养后计数确定。 6.操作方法

6.1供试品的取样量(见细菌、霉菌和酵母菌计数5.3)。 6.2供试液的制备:(见细菌、霉菌和酵母菌计数7);(大肠埃希菌6.2)。 6.3增菌培养 取胆盐乳糖培养基2份,每份100 ml,1份加入1:10供试液10ml(相当于供试品1g或1ml)。另1份加入与供试液等量的稀释剂作阴性对照。于36℃±1℃培养18~24h(必要时可延至48 h)。阴性对照菌应无菌生长。 6.4分离培养 轻轻摇动上述增菌培养液,以接种环沾取1~2环培养液(如有菌膜应挑取之),划线接种于溴代十六烷基三甲胺琼脂平板,于36℃±1℃培养18~24h。铜绿假单胞菌在该培养基平板上的典型菌落为扁平、圆形或无定形、边缘不齐,光滑湿润,呈灰白色,周边略呈扩散现象,在菌落相邻处常有融合现象。菌落周围常有水溶性蓝绿色素扩散,使培养基显蓝绿色,但亦有不产色素的菌株。菌落还有粗糙型和粘液型等,应注意挑选。 6.5纯培养 供试品分离平板生长6.4所述典型菌落或呈疑似菌落时,以接种针轻轻接触单个菌落的表面中心,沾取培养物,应挑取2~3个疑似菌落,分别接种营养琼脂斜面,培养,作以下检查。 6.6革兰染色镜检(见SOP-UIS 08 00) 6.6.1革兰染色。 6.6.2镜检结果。 铜绿假单胞菌为革半阴性、无芽孢杆菌,单个,成对或成短链排列。 6.7生化试验 用铜绿假单胞菌[CMCC(B)10104]做生化试验的阳性对照株。 6.7.1 氧化酶试验 取一小块白色洁净的滤纸置平皿内,以无菌玻璃棒挑取营养琼脂斜面培养物少许,涂在滤纸上,随即滴加1滴新配制的1%二盐酸二甲基对苯二胺试液,在30s内,纸片上的培养物出现粉红色,逐渐变为紫红色,即为氧化酶试验阳性反应。若培养物不变色或仅显粉色为阴性反应。 6.7.2 绿脓菌素试验 取营养琼脂斜面培养物接种于绿脓菌素测定用培养基(PDP)斜面上,36℃±1℃培养24h后,观察斜面有无色素,如有色素,在试管内加氯仿3~5ml,以无菌玻棒搅碎培养基并充分振摇。使培养物中的色素完全萃取在氯仿液内。静置片刻,待氯仿分层,用吸管将氯仿移至另一试管中,加入盐酸试液(1mol/L)约1ml,振摇后静置片刻,如在盐酸液层内出现粉红色、即为阳性反应,无粉红色出现为阴性反应。本试验可用未接种的PDP琼脂培养基斜面作阴性对

1例铜绿假单胞菌定植的病例分析

1例铜绿假单胞菌定植的病例分析 在临床实验室中,铜绿假单胞菌的分离率几乎均占首位,由于其耐药率逐渐上升,治疗效果不理想,受到院感工作者、微生物检验人员的高度关注。围绕着铜绿假单胞菌的科研课题、文章亦占相当比例。相对于这种浓厚的学术氛围,临床医生对痰中分离的铜绿假单胞菌却没有那么高的兴趣,原因是细菌报告与临床符合率太低。临床药师在临床工作中,可以对痰液检中检出的铜绿假单胞菌进行一定的药学监护,以配合临床医生共同制定抗感染方案。 一病例摘要 男性患者,60岁,汉族,因“颅脑外伤术后昏迷1月” 入院。患者因车祸至头部外伤,于外院急诊行“右侧额颞顶部硬膜下血肿清除术,去大骨瓣减压术”,患者术后持续昏迷,呼吸机辅助呼吸。之后患者出现发热,体温最高达40℃,血培养示:肺炎克雷伯杆菌,考虑为中心静脉导管感染,痰培养示:铜绿假单胞菌及真菌,给予“头孢哌酮舒巴坦、万古霉素、氟康唑等”抗感染治疗。病情无好转,由120送入我院进一步诊治。入院诊断为:1.重度颅脑外伤并广泛蛛网膜下腔出血,右侧颞叶脑挫伤出血,右侧额颞顶部硬膜下血肿清除术,去大骨瓣减压术后;2.肺部感染并呼吸衰竭;3.血导管感染。收入我院ICU时,患者中度昏迷,T 38.5℃,自主呼吸浅快,经气切处接呼吸机辅助呼吸,双肺散在大量痰鸣,左肺可闻及少量低调哮鸣音,经气切处吸出大量稠脓痰,黄绿色,血常规显示WBC 15.5×109/L,入院头三天中段尿培养示:光滑假丝酵母菌,对伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B及氟胞嘧啶敏感;痰培养示:铜绿假单胞菌,仅对哌拉西林敏感;血培养示:鲍曼不动杆菌,对氨曲南、头孢他啶、头孢吡肟、美罗培南、亚胺培南敏感。结合药敏结果先后给予氨曲南、头孢噻肟舒巴坦、米卡芬净、氟康唑等抗感染治疗,十天后患者病情平稳,无发热,血象正常,双肺呼吸音粗,未闻及啰音,转入普外科治疗。病程中,患者的肝肾功能均在正常范围,无特殊。 二分析与讨论 该患者入院后连续三天在尿液、痰液、血液中检出细菌和真菌,综合分析病情后,给予了针对真菌和鲍曼不动杆菌的治疗,所用药物均对铜绿假单胞菌耐药,治疗十天后,患者感染症状明显得到控制,提示在此病例中,铜绿假单胞菌很可能是定植菌。 1 发生定植的原因 正常的宿主上呼吸道有大量生理菌群,通过营养竞争、占位保护等作用拮抗外籍菌群的定植,完整的黏膜也是宿主重要的防御屏障。在多种因素如严重基础疾病、抗生素过度使用、机械损伤等的作用下导致这些

黏液型铜绿假单胞菌药敏谱分析

黏液型铜绿假单胞菌药敏谱分析 发表时间:2017-03-07T16:36:48.963Z 来源:《心理医生》2016年35期作者:陈婕1 冉津2 龚国忠1(通讯作者) [导读] 美罗培南能够抑制细菌细胞壁的合成而产生抗菌作用。这两种药能够对黏液型铜绿假单胞菌的生物膜起到破坏的作用,从而杀死细菌。 (1遂宁市中心医院检验科四川遂宁 629000) (2雅安职业技术学院检验系四川雅安 625000) 【摘要】目的:基于黏液型铜绿假单胞菌分泌粘液形成生物保护膜的原因,研究其临床药敏谱,给临床提供可靠地实验结果,以指导临床用药。方法:收集我院2014年-2016年临床标本分离出的黏液型铜绿假单胞菌67株作为研究对象,上机鉴定,鉴定出是铜绿假单胞菌后采用K-B纸片扩散法测试黏液型铜绿假单胞菌对14种抗菌药物的活性,记录分析结果。结果:67株黏液型铜绿假单胞菌对美罗培南、舒普深的敏感率为100%,亚胺培南的敏感率97.2%,替卡西林/克拉维酸钾的敏感率为86.9%,多粘素E的敏感率为80.6%,而哌拉西林的敏感率为48.6%,氨曲南的敏感率为22.2%。结果显示美罗培南、舒普深效果最好。结论:本文研究发现,黏液型铜绿假单胞菌因其分泌粘液,形成无色清亮透明菌落,上机无法完成药敏实验,因此可以选择敏感性高的美罗培南、舒普深等药敏纸片进行药敏实验。 【关键词】黏液型铜绿假单胞菌;药物敏感试验;耐药;生物膜 【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231(2016)35-0047-02 Analysis of drug sensitivity spectrum of the mucoid Pseudomonas aeruginosa 【Abstract】Objective Based on the reasons for the formation of the protective biomenbrane of mucus from Pseudempnas aeruginosa,to study it's clinical drug sensitivity spectrum,so as to provide basis for reasonable selection of antibiotics in clinical practice.Methods We collected 67 strains of mucoid Pseudempnas aeruginosa from clinical samples in our hospital from 2014 to 2016 as the research object,identification on the machine,after Pseudomonas aeruginosa was identified,the activity of 14 antimicrobial agents was tested by K-B disk diffusion method,then record and analysis the results. Results All of the 41 strains of mucoid Pseudomonas aeruginosa,the sensitivity of meropenem,Sulperazon was 100%,the sensitivity of imipenem was 97.2%,the sensitivity of ticarcillin/potassium clavulanate was86.9%,the sensitivity of multi-cadherinn E was 80.6%,while the sensitivity of piperacillin was 48.6%,aztreonam was 22.2%.The results showed that the best antibiotics were meropene and Sulperazon.Conclusion This study found that,because of the mucoid Pseudomonasaerug inosa secretes mucus,forming a colorless and transparent colonies,drugsusceptibility testing can not be completed on the machine,so we can choose the high sensitivity of drug paper such as meropenem,Sulperazon to complete the antibiotics susceptibility testing. 【Key words】Mucoid Pseudempnas aeruginosa; Antibiotics susceptibility test; Resistance;Biomenbrane 铜绿假单胞菌是一种常见的条件致病菌,本菌为专性需氧菌,属于非发酵革兰氏阴性杆菌。菌体细长且长短不一,有时呈球杆状或线状,成对或短链状排列。菌体的一端有单鞭毛,在暗视野显微镜或相差显微镜下观察可见细菌运动活泼。生长温度范围25~42℃,最适生长温度为25~30℃,特别是该菌在4℃不生长而在42℃可以生长的特点可用以鉴别。在普通培养基上可以生存并能产生水溶性的色素,如绿脓素与带荧光的水溶性荧光素等。在血平板上会有B-溶血环。铜绿假单胞菌分为黏液型和非黏液型。虽然外观上不一样,但经报道两种形态的血清型无明显差异[1]。因此尚可根据CLSI解释标准选用抗生素进行药敏试验。但黏液型铜绿假单胞菌产生大量藻酸盐更易形成生物膜,从而逃逸机体免疫清除或增强对抗生素的耐药性,给临床常规治疗带来了困难。非黏液型铜绿假单胞菌在渗透压较高,NaCl较多,磷酸盐较少等环境条件下易转化为黏液型铜绿假单胞菌[2]。本文针对黏液型铜绿假单胞菌,分析常规抗生素对其的体外活性情况,以便给临床提供可靠的实验结果,更好的选择抗生素进行治疗。 1.材料与方法 1.1 病例来源 收集我院2014年-2016年黏液型铜绿假单胞菌肺部感染的患者67例作为研究对象,平均年龄65,男性17例,女性24例。每位患者做痰或肺泡灌洗液标本培养,痰标本要求是涂片镜检上皮细胞≤10/LP,白细胞≥25/LP,符合痰培养标准的标本。肺泡灌洗液由临床医生无菌操作获取,分离致病菌为黏液型铜绿假单胞菌。所有标本分离出的致病菌菌排除了污染。 1.2 主要仪器与试剂 细菌鉴定卡、VITEK-2均为法国梅里埃公司提供,M-H琼脂由重庆庞通医疗器械公司提供,药敏纸片由康泰生物科技公司生产。 1.3 细菌鉴定与药敏实验 标本培养和纯化严格按照《全国临床检验操作规程》第三版进行。初代标本分五区划线接种在血平板上,置于35℃、5%的CO2孵箱培养12~24h,在血平板上3~5区有疑是菌落生长的才处理,菌落生长为无色、小露滴样、边缘不规则、不溶血、清亮透明菌落。转种到血平板上纯化,再经18~24h培养后长大而融合、粘稠、透明胶冻样菌落,原始区可有绿脓素与带荧光的水溶性荧光色,菌落溶血不典型可有可无。有铜绿假单胞菌的特殊气味。分纯后使用梅里埃公司提供的自动鉴定仪以及原装鉴定卡进行细菌鉴定。同时选择美罗培南、舒普深、哌拉西林、头孢他啶、亚胺培南、多粘素E、替卡西林、阿米卡星、替卡西林/克拉维酸钾、哌拉西林、庆大霉素、环丙沙星、头孢吡肟、氨曲南药敏纸片做K-B纸片扩散法药敏实验。细菌鉴定为铜绿假单胞菌根据细菌菌落特性判断为黏液型。记录药敏结果。 1.4 质控菌株 铜绿假单胞菌TACC,大肠埃希菌TACC,金黄色葡萄球菌TACC,阴沟肠杆菌TACC,均购自卫生部临床检验中心。 1.5 统计分析 细菌药敏间耐药性比较χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。 2.结果 2.1 药物敏感性 67株黏液型铜绿假单胞菌中,63株来源于痰液,4株来源于肺泡灌洗液。此菌对14种抗生素的药敏结果显示美罗培南、舒普森效果最好,敏感性为100%,而效果较差的哌拉西林敏感性为48.6%,氨曲南22.2%。其他抗生素敏感性结果如下表。 表黏液型铜绿假单胞菌的药敏结果

铜绿假单胞菌检查

铜绿假单胞菌检查 1 简述 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa),习称绿脓杆菌,为假单胞菌属菌种,广泛分布在土壤,水及空气中,人和动物的皮肤、肠道、呼吸道均有存在,故可通过环境和生产的各个环节污染药品,本菌是常见的化脓性感染菌、在烧伤、烫伤、眼科及其他外科疾患中长引起继发感染,由于本菌对许多抗菌药物具有天然的耐药性,增加了治疗的难度。国内外药典均将铜绿假单胞菌列为检查项目之一。 铜绿假单胞菌按增菌,分离、纯培养、革兰染色、镜检及生化试验等步骤进行检验。 2 仪器、设备和用具(见大肠埃希菌2)。 3 试液、指示液 3.1 0.9%无菌氯化钠溶液或磷酸盐缓冲液[附录3.1,3.3]。 3.2 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液[附录3.2]。 3.3 1%盐酸二甲基对苯二胺试液[附录2.1]。 3.4 盐酸试液[附录2.12]。 3.5 氯仿[附录1.57]。 4 培养基 4.1 营养肉汤培养基[附录 5.1]。 4.2 胆盐乳糖(BL)培养基[附录 5.6]。 4.3 营养琼脂培养基[附录 5.2]。 4.4 溴代十六烷基三甲胺[附录 5.14]。

4.5 绿脓菌素测定用培养基(POP琼脂)[附录 5.26]。 4.6 明胶培养基[附录3.27]。 4.7 硝酸盐胨水培养基[附录 5.28]。 5 对照用菌液 铜绿假单胞菌[CMCC(B)10104]营养琼脂斜面培养物少许,接种至5ml营养肉汤培养基内,于36±1℃培养18~24h后,用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至1:106,使对照菌加入量含10~100cfu(一般用量为0.1ml),菌数测定在做阳性对照实验用营养琼脂浇碟或平板涂布经培养后计数确定。 6 操作方法 6.1 供试品的取样量(见细菌、霉菌和酵母菌计数5.3)。 6.2 供试液的制备(见细菌、霉菌和酵母菌计数7);(大肠埃希菌6.2)。 6.3 增菌培养 取胆盐乳糖培养基2份,每份100ml,1份加入1:10供试液10ml(相当于供试品1g或1ml)。另1份加入与供试液等量的稀释剂作阴性对照。于36℃±1℃培养18~24h(必要时可延至48h)。阴性对照菌应无军生长。 6.4 分离培养 轻轻摇动上述增菌培养液,以接种环取1~2环培养液(如有菌膜应挑取之),划线接种于溴代十六烷基三甲胺琼脂平板,于36℃±1℃培养18~24h。铜绿假单胞菌在该培养基平板上的典型菌落为扁平、

我院黏液型铜绿假单胞菌临床分布及耐药性分析

我院黏液型铜绿假单胞菌临床分布及耐药性分析 发表时间:2019-08-16T15:19:26.917Z 来源:《医药前沿》2019年18期作者:张美陈其霞李翠(通讯作者)[导读] 近几年宫颈癌发病率不断增加,并且年轻患者越来越多。因此,为了降低宫颈癌的危害性应早诊断和早治疗。(重庆市綦江区人民医院检验科重庆 401420) 【摘要】目的:探究我院黏液型铜绿假单胞菌临床分布及耐药性,为临床合理选择抗菌药物提供依据。方法:将2017年1月—2019年4月期间在我院分离的黏液型铜绿假单胞菌临床分布和耐药性情况进行研究分析。结果:在分离出的155株黏液型铜绿假单胞菌的感染疾病方面,慢性梗阻性肺病50株(32.26%),慢性支气管炎42株(27.10%),肺结核29株(18.71%),支气管扩张伴感染13株(8.39%),恶性肿瘤伴肺感染9株(5.81%),肺气肿、肺炎、肾病各4株(2.58%);在黏液型铜绿假单胞菌的耐药性方面,氨曲南、哌拉西林、等均有一定的耐药性,其中对氨曲南的耐药性最高,为13.9%,对哌拉西林他唑巴坦的耐药性最低,仅为1.2%,未发现对碳青霉烯类耐药的黏液型铜绿假单胞菌。结论:黏液型铜绿假单胞菌分布较广,对多种抗菌药物均有耐药性,临床医生应根据药敏结果并考虑细菌生物膜影响因素,根据患者具体情况来选择适合的抗菌药物,从而取得更好的治疗效果。【关键词】黏液型铜绿假单胞菌;生物膜;临床分布;耐药性【中图分类号】R378 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752(2019)18-0126-02 近年来黏液型铜绿假单菌在我院临床标本中的分离呈上升趋势,黏液型铜绿假单胞菌是细菌为适应生存环境分泌的多糖基质,可与邻近细菌、血小板、纤维蛋白原等粘附聚集形成生物膜细菌,对抗菌药物具有顽强的抵抗性。因此对我院2017年1月—2019年4月检出的黏液型铜绿假单胞菌感染患者进行研究,报告如下。 1.资料与方法 1.1 一般资料 将2017年1月—2019年6月期间在我院分离的155例黏液型铜绿假单胞菌感染患者作为研究对象,所有患者当中男性86例,女性69例,患者年龄51~83岁,患者平均年龄70.2±9.2岁。所有患者各项基础信息经检验不具有显著性差异(P>0.05)。 1.2 研究方法 对所有患者的疾病类型和抗菌药物使用情况进行调查。集中对患者进行痰液标本采集,随后对痰液中的细菌进行分离和鉴定,将得到的菌株采用纸片琼脂扩散法进行药敏实验,本次研究所用的抗菌药物分别为亚胺培南、美罗培南、氨曲南、哌拉西林、、哌拉西林他唑巴坦、头孢他啶、头孢吡肟、左氧氟沙星、环丙沙星、阿米卡星和庆大霉素,对所有分离的黏液型铜绿假单胞菌的耐药情况进行研究分析。 1.3 仪器与试剂 血平板、麦康凯平板、M-H琼脂培养基购于生物梅里埃公司,药敏纸片购于OXID公司。所培养的细菌用BDphoenix Tm-100提供的阴性菌板条进行细菌鉴定。药敏实验采用K-B纸片扩散法,药物敏感性按照美国临床实验室标准(CLSI)2016版进行判定。质控菌株ATCC25922大肠埃希菌,ATCC27853铜绿假单胞菌。数据采用WHONET 5.6软件进行统计分析。 2.结果 2.1 黏液型铜绿假单胞菌检出感染部位情况 在黏液型铜绿假单胞菌的感染疾病方面,慢性梗阻性肺病50株(32.26%),慢性支气管炎42株(27.10%),肺结核29株(18.71%),支气管扩张伴感染13株(8.39%),恶性肿瘤伴肺感染9株(5.81%),肺气肿、肺炎、肾病各4株(2.58%),见表1。 表1 黏液型铜绿假单胞菌检出感染部位情况对比 2.2 黏液型铜绿假单胞菌的耐药情况,见表2。 表2 黏液型铜绿假单胞菌对抗菌药物的耐药性比较

药理学习题-利尿药类

A型题 1 常用利尿药作用的产生主要是通过(C) A降低肾血管阻力,增加肾血流量 B 提高肾小球滤过率 C 抑制肾小管对电解质和水的重吸收 D 对抗ADH的作用 E、抑制肾素释放,使醛固酮分泌减少 2 呋塞米和依他尼酸的主要作用部位是(D) A、肾小球 B、近曲小管 C、远曲小管 D、髓袢升支 E、集合管 3 通过竞争醛固酮受体而起利尿作用的药物是(D) A、呋塞米 B、乙酰唑胺 C、氢氯噻嗪 D、螺内酯 E、氨苯喋啶 4呋塞米的主要不良反应不包括(C) A、水、电解质紊乱 B、耳毒性 C、急性肾功能衰竭 D、高尿酸血症 E、胃肠道反应 5具有利尿抗利尿双重作用的药物是(E) A、50%葡萄糖 B、山梨醇 C、甘露醇 D、呋塞米 E、氢氯噻嗪 11药物中毒时加速毒物排泄应选用(D) A、氨苯喋啶 B、氢氯噻嗪 C、乙酰唑胺 D、呋塞米 E、甘露醇 12 治疗轻中度水肿应选(B) A、呋塞米 B、氢氯噻嗪 C、螺内酯 D、氨苯喋啶 E、乙酰唑胺

13下列哪项与氢氯噻嗪的不良反应不符(E) A、升高血脂 B、升高血糖 C、增加血浆肾素活性 D、升高血尿酸 E、升高血钾 X型题 20噻嗪类利尿药应慎用的情况包括(ABC) A、痛风患者 B、糖尿病患者 C、肾功能不全者 D、低血钙者 E、高钾血症者 22高效利尿药的不良反应有(ABCE) A、水和电解质紊乱 B、耳毒性 C、胃肠道反应 D、性激素样副作用 E、高尿酸血症 27痛风患者不易使用的利尿药是(ABD) A、氢氯噻嗪 B、呋塞米 C、氨苯喋啶 D、三氯噻嗪 E、螺内酯 29 可用于青光眼的药物有(ABCDE) A、噻马洛尔 B、乙酰唑胺 C、毛果芸香碱 D、甘露醇 E、毒扁豆碱 二名词解释 32 脱水药:又称渗透性利尿药是一通过提高血浆渗透压而产生组织脱水作用的药物 三填空题 34血液流经肾小球经肾小球滤过而形成(原尿)但绝大部分被(重吸收)影响原尿量的主要原因有(肾血流量)和(有效滤过压) 35 正常人每日可生成原尿(180)升,而终尿仅(1-2)L,约占原尿量的1%(99%)的水、钠被肾小管重吸收,如果药物能使肾小管重吸收减少1%则终尿量可增加(1)倍 37 呋塞米的利尿特点为作用(强大)(迅速)而(短暂)

胶质类芽孢杆菌功能及基因组学研究进展

第26卷 第9期2014年9月V ol. 26, No. 9Sep., 2014 生命科学 Chinese Bulletin of Life Sciences 文章编号:1004-0374(2014)09-0000-08 DOI: 10.13376/j.cbls/20140 收稿日期:2013-; 修回日期:2013-基金项目:国家自然科学基金青年科学基金项目(31200388);国家高技术研究发展计划(“863”计划)(2013AA102802-04);中央级公益性科研院所专项资金资助项目(IARRP-2014-4) *通信作者:E-mail: jli@https://www.wendangku.net/doc/fa16502022.html, 胶质类芽孢杆菌功能及基因组学研究进展 马鸣超,姜 昕,李 力,李 俊* (1 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所,北京 100081;2 农业部微生物产品质量安全风险评估实验室(北京),北京 100081) 摘 要:胶质类芽孢杆菌(Paenibacillus mucilaginosus )因其具有多功能、强抗逆等特点而成为微生物肥料的首选菌种,它在农业生产中表现出提高土壤速效钾与速效磷含量、促进作物生长、提高作物产量和品质等多方面的效应,一直是研究的重点和热点。首次从P . mucilaginosus 的系统发育地位及快速检测技术、生物学功能、基因组学研究进展等方面进行综述,以期提供读者对该细菌生物学特征及其功能的认识,以推动其在生态农业中的应用。 关键词:胶质类芽孢杆菌;分类地位;生物学功能;基因组学 中图分类号: Q93;S182 文献标志码:A Function and genomics of Paenibacillus mucilaginosus MA Ming-Chao, JIANG Xin, LI Li, LI Jun * (1 Institute of Agricultural Resources and Regional Planning, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China; 2 Laboratory of Quality &Safety Risk Assessment for Microbial Products (Beijing), Ministry of Agriculture, Beijing 100081, China) Abstract: Paenibacillus mucilaginosus , a production strain of microbial fertilizers, had attracted considerable attention of researchers due to its growth-promoting properties of crops. These included releasing mobile nutritional ions, dissolving K, P and other beneficial elements. This review summarized its phylogenetic position, morphological characteristics, rapid detection technology, biological functions and genomics research. The results would broaden the understanding of P. mucilaginosus on biological functions and be meaningful to solve the problems in the applications. Key words: P . mucilaginosus ; phylogene; biological functions; genomics 胶质类芽孢杆菌(P . mucilaginosus ),又名胶冻样类芽孢杆菌,是类芽孢杆菌属(Paenibacillus )中的一个重要菌种。因它能够分解硅酸盐和铝硅酸盐组成的含钾矿物,释放出钾离子而俗称为硅酸盐细菌;目前所说的硅酸盐细菌还包括土壤类芽孢杆菌(Paenibacillus edaphicus )和环状芽孢杆菌(Bacillus circulans )。进一步研究发现P . mucilaginosus 还能活化磷元素和其他营养元素,并通过其菌体自身代谢产生有机酸、氨基酸、激素等物质促进植物的生长,改善植物营养及生长条件,同时产生胞外多糖,具有增强植物非特异性免疫能力的作用,有些菌株还具备固氮的功能 [1-3] 。同时,该菌种通过产大量荚 膜和胞外多糖,能在不同的环境条件下生长繁殖,其具备的多功能、强抗逆等特点使之成为近几年微生物肥料的首选菌种。据统计,全国约有20 多个省(区) 30 多种作物,近57万hm 2 耕地上使用该菌种制成的微生物肥料,并在农业生产中表现出提高土壤速效钾与速效磷含量、促进作物生长、提高

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