大鼠原位肝移植模型的手术技巧
临床军医杂志(C li n J M ed O ffic)2008年8月第36卷第4期
技术与方法
大鼠原位肝移植模型的手术技巧
王振猛1,唐 乙2,宋少华3,陆智杰1,王全兴2,俞卫锋1 (1.上海东方肝胆外科医院 麻醉科,上海 200438;2.解放军第二军医大学 基础部免疫学教研室,上海 200433;3.上海长征医院 移植科,上海 200003)
摘要:目的 探讨建立稳定的大鼠原位肝移植模型的外科手术技巧,为研究肝脏缺血再灌注损伤提供技术支持。方法 110只雄性SD 大鼠随机配对后分别作为供体和受体,通过改良Kam ada 二袖套!法施行大鼠原位肝移植。结果 改良K a m ada 法建立大鼠原位肝移植模型共52例,7d 生存率88.5%,7例长期存活大于100d 。结论 大鼠原位肝移植模型的建立需要极度的耐心和娴熟的手术技巧,模型的建立有助于研究肝脏缺血再灌注损伤,移植免疫及器官保存。关键词:原位肝移植;动物模型;大鼠中图分类号:R 617 R 657 3
文献标志码:A
文章编号:1671 3826(2008)04 0638 03
Operati on skills for O rthotopic L i ver Transplantati on in R ats
W ang Zhen m eng 1,T ang Y i 2,Song Shao hua 3,Lu Z hi jie 1,W ang Q uan x i ng 2,Y uW ei feng 1 (1.D epart m ent of A nest hesio l o gy ,Shangha i Eastern H epatob iliary Surg ery H osp ita,l Shangha i 200438,Ch i na ;2.D epart m ent o f I mm uno l ogy ,Co lleg e o f Basic M ed ica l Science of Second M ilitary M ed ica l U n iversity ,Shanghai 200433,Ch i na ;3.D epa rt m ent o f T ransp l anta ti on ,Shangha i Changzheng H osp ita,l Shangha i 200002,Ch i na)
Abstract :Ob jective To i m prove t he operati on technique fo r o rt ho t op ic li v er transplan tati on i n rats ,and illustra te t he hepa ti c is che m ia repe rf us i on i njury i n fut u re study .M ethods O ne hundred and ten m a le SD ra tw ere random l y pa ired as donor and receptor and w ere perfor m ed w ith ortho topic liver transp l antation by m od ifi ed K a m ada ?s t w o cuffs techn i que .R esu lts A s a result ,88.5%o f t he 52ra ts w ith ortho topic li ve r transp l anta ti on surv ived mo re t han 7days and 7ones surv ived l onger than 100days .Conc l u si on Ex tre m e patience and skillful surg ical techn i ques are necessa ry for rat ortho topic liver transp l antation m ode,l wh i ch is helpful t o the study on hepa tic ische m i a reperfusi on i n j ury ,transplantation i m mun it y and org an preservation .K ey w ord s :o rt ho t op ic li v er transplan tati on ;an i m a lm ode;l rat S tarzl 于1963年首先为一先天性胆道闭锁的儿童施行肝脏移植手术后,肝移植术已逐渐成为各种急慢性肝功能衰竭的有效的治疗手段,但肝脏缺血再灌注损伤仍不可避免,并已成为移植肝功能不佳或原发性无功能的主要原因,在术后1周内需再次行肝移植的患者中移植肝无功能约占81%
[1]
。
大鼠肝脏移植模型是研究肝脏缺血再灌注损伤、移植免疫、器官保存等基础理论的理想模型,对于进一步探讨围术期肝脏缺血再灌注损伤具有重要的意义。目前国内关于大鼠肝移植模型建立的文章已比较多,本文主要从手术细节方面具体讨论手术技巧和需要注意的问题。1 材料与方法
1.1 材料 供受体均采用封闭群SD 雄性大鼠,购自第二军医大学实验动物中心,重200~250g ,实验室清洁级饲养,随机配对后以体重较轻者为供体。门静脉袖套采用内径
2.2mm,外径2.6mm 的套管鞘,袖套长约3mm,下腔静脉袖套使用内径
3.0mm,外径3.6mm 的聚乙烯奶品吸管,袖套长3mm,袖套均留2mm 柄部供夹持,以刻槽器在管壁上刻槽以防止打结时丝线滑脱。胆总管套管应用外径1mm 的一次性硬膜外麻醉导管,长6mm,两端修剪成斜面。显微器械购自上海手术器械厂。结扎线用5-0普通丝线,血管缝合线用7-0号丝线,均购自上海金环医疗用品厂。灌注及保存液均为4#乳酸钠林格液,其中每m l 灌注液中含肝素25U,地塞米松20 g ;肝素化液为4#生
收稿日期:2008 05 05
作者简介:王振猛(1978 ),男,山东邹县人,医师,在读医学博士(责任者:俞卫锋教授,E m ai:l y w f 808@sohu co m )。
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第4期大鼠原位肝移植模型的手术技巧 王振猛,等
理盐水,每m l含肝素50U。
1.2 手术方法
1.2.1 供体 按照改良K a m ada法[2]行大鼠原位肝移植术。乙醚吸入麻醉成功后,腹腔内迅速注射苯巴比妥(50 m g/kg),大鼠取仰卧位,腹部大十字切口,剑突牵引,置腰垫,将肠袢移至腹腔外左侧,覆盖湿纱布,远离肝脏剪断肝镰状韧带、冠状韧带,游离并双结扎离断左膈下静脉。游离肝盘状乳头突表面韧带以充分暴露盘状乳头突。双结扎离断食管静脉,离断肝胃韧带,游离肝动脉并挂线待灌注后打结。分离胆道,距离左右肝管汇合部1.5cm处插管,结扎后远端剪断,留牵引线一根备用。暴露幽门静脉并挂线待灌注后打结。剪开肝尾状叶的韧带和下腔静脉以及肾静脉表面的后腹膜及结缔组织膜,暴露肾静脉并双重结扎离断。将左肾静脉至肝尾叶之间的下腔静脉完全游离,肝尾状叶后部穿线结扎右肾上腺静脉,然后剪开右侧肝食管韧带。暴露右腰静脉,注入4#肝素生理盐水2m,l棉球按压止血;将后腹膜分离至腹主动脉分叉处,约肝素化后2m i n由腹主动脉分叉处穿刺置入套管针。剪开膈肌,夹闭胸主动脉,剪开心脏及下腔静脉胸内段,在套管针穿刺点以下剪开下腔静脉,匀速注入4#灌注液20m,l同时在供肝表面缓慢浇冰水保持低温。依次结扎并离断肝动脉和幽门静脉。钝性游离门静脉,并在脾静脉水平以喇叭形切口离断。剪断膈肌,稍微提起肝脏钝性游离下腔静脉在左肾静脉水平以喇叭形切口离断。以林格液保存在不锈钢碗并置入4#冰箱中。
1.2.2 修肝 将不锈钢碗放在自置冰槽中,修剪肝下下腔静脉,剔除多余结缔组织后套入袖套,然后同法处理门静脉,将套管针置入门静脉袖套处,注入4#林格液10m,l 进一步冲洗肝脏并观察是否有冲洗液由肝上及肝下下腔静脉流出。沿肝上下腔静脉内壁剪除胸内段下腔静脉,然后将肝上下腔静脉前壁的肌肉全部剪掉,后壁则保留部分膈肌。左侧穿一较长血管缝合线供缝合,右侧穿一短血管缝合线供牵引。供肝保存于4#。
1.2.3 受体 受体术前应禁食8~10h,麻醉前10m i n肌注阿托品0.03m g,乙醚持续吸入维持麻醉。取腹部纵切口,胸骨柄根部结扎并牵拉以利于暴露,以自制U!型拉钩牵引双侧肋弓。彻底止血,肠袢移至腹腔左侧,以温盐水纱布包裹。基本处理同供体,不同点在于直接结扎并离断肝动脉,不处理幽门静脉及右肾静脉,右肾上腺静脉结扎后不离断。左右肝管分支结扎后近肝侧剪断,并留置牵引线。检查所需用具后,血管夹夹闭门静脉,进入无肝期计时,近肝侧门静脉分支内注入2m l室温林格液将肝内血管床残留血液驱回体循环,血管夹夹闭肝下下腔静脉。由左侧膈下向右置入沙氏钳,连同部分膈肌一起钳夹,注意不要钳夹肺组织并观察大鼠呼吸及心跳情况。贴近肝表面剪断肝上下腔静脉,近肝侧剪断门静脉,剪断肝下下腔静脉,同时保留少量汇入部的肝尾状叶。供肝原位置入,先缝合左右两侧血管壁,然后从肝上下腔静脉左侧后壁水平连续外翻缝合,前壁也采用连续外翻缝合,吻合结束前肝上下腔静脉内注入少量室温保存液,将肝内气泡排出。将供肝翻向头侧,以直血管钳夹紧门静脉,尽量靠近断端,稍微向尾侧松门静脉血管夹,剪刀贴近血管钳剪开受体门静脉前壁,在门静脉背侧预留丝线结扎,弯血管钳夹住袖套柄,室温保存液冲洗受体及供肝门静脉内壁,排出气泡后将供肝门静脉袖套置入受体门静脉内。以预留线双重结扎,开放门静脉血流。释放沙氏钳,无肝期结束计时。同法将下腔静脉袖套置入受体内,开放下腔静脉。受体胆总管以预留的两根牵引线固定稳妥后,剪开受体左右胆管汇合部,将供肝胆总管套管插入受体胆总管内,丝线结扎并与供肝预留的胆道丝线结扎。检查腹腔有无出血并以棉球吸尽腹腔内液体,肠袢还纳腹腔内,腹壁逐层缝合。
2 结果
术后从苏醒翻身开始计时,存活超过24h视为手术成功[3]。供体手术时间30~39m in,供肝准备时间13~21 m i n,受体手术时间47~66m i n,受体无肝期时间17~26 m i n,7d生存率88.5%(46/52),最长存活的7例超过100d。2例失败于门静脉袖套滑脱出血(2例),空气栓塞(2例),肝上下腔吻合口出血(1例),胆漏(1例)。远期死于供肝慢性失功能、腹腔感染、肺部感染和营养不良。
3 讨论
3.1 麻醉 供体以腹腔内注射苯巴比妥(50m g/kg)为首选,该法不会染污空气且不对术者造成影响。受体仍以乙醚持续吸入麻醉为最佳,其浓度可控制,在无肝期容易终止,同时乙醚诱导快,苏醒快,对大鼠术后恢复有利[4]。但乙醚会增加呼吸道分泌物,受体术前应当肌注阿托品,围术期可将大鼠舌拉出减少通气障碍。在受体无肝期内,因为缺少肝脏代谢,麻醉深度难以控制,应撤去乙醚。初学者经常因专心手术而忘记麻醉深度致大鼠呼吸心跳停止,因此应密切注意大鼠呼吸情况,如有呼吸频率减慢,应暂停手术操作并停止麻醉,待呼吸平稳后再继续麻醉和手术。一般而言,呼吸停止后的复苏常难以奏效。
3.2 肝脏灌注 腹主动脉穿刺置管后要防止血液倒流入注射器内,胸主动脉钳夹要确实,剪开胸内段下腔静脉时应避免损伤胸主动脉,然后可开始灌注,在腹主动脉穿刺点以下剪开肝下下腔静脉,注意防止损伤腹主动脉影响灌注效果。灌注要缓慢均匀,速度不宜过快,约维持在2~3m l/ m i n,灌注过快易于引起肝细胞水肿,灌注过慢则会引起灌注不足。经腹主动脉灌注1m i n即可发现肝脏颜色变淡,否则应及时予门静脉灌注。灌注时应间断的将0#冰水浇在肝脏表面,灌注满意的肝脏无水肿并保持原有质感,呈土黄色,肝叶边缘锐利。
3.3 修肝 根据供肝门静脉直径选择相应大小的门静脉袖套,口径不能太小,以刻槽器在管壁上刻槽以便丝线结扎时不易滑脱。清除供肝门静脉周围脂肪结缔组织,幽门静
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临 床 军 医 杂 志 第36卷
脉应紧靠门静脉结扎离断,留结尽量小,以免大团线结残留袖套内影响套管操作和门脉血流通畅。套管时将袖套柄对准胆管以确保受体套管时柄部向上,便于夹持,结扎时应保证丝线在套管的槽内,防止滑落。对于下腔静脉,要求基本同门静脉,套管时将袖套柄对准尾状叶的切状缘。修剪肝上下腔静脉时,先将下腔静脉周围全部展开并充分暴露,观察血管壁的边界。然后提起肝上下腔静脉胸内段与膈肌平面成一定角度,于腔静脉壁与膈肌环交界处剪一小口作为突破口沿上腔静脉壁和膈肌环交界处将肝上下腔静脉胸内段全部修剪掉。沿膈肌环将前壁剩余膈肌组织修剪掉,后壁则保留部分膈肌。缝牵引线时应保证前壁比后壁略多一些,以便于缝合。
3.4 下肝 采用由左侧经膈下向右侧放置的方式置入沙氏钳,钳夹时应避免夹住肺组织,并注意观察呼吸情况,如发现呼吸减慢,则先放松后再慢慢夹住,然后以橡皮泥自制凹槽在大鼠左侧固定钳柄,尽力使钳子头部上撬便于显露下腔静脉后壁。离断肝上下腔静脉时应使剪刀尽量贴近肝脏并注意保护左膈下静脉的线结,离断门静脉时同时使剪刀尽量贴近肝脏以保留尽可能多的门静脉,离断肝下下腔静脉则应将剪刀略微上挑,避免损伤周围组织及血管,同时保留少量汇入部的肝尾叶以便于套管。
3.5 下腔静脉的吻合 下腔静脉的吻合是手术成功的关键,要求吻合速度快,吻合口不漏血漏气且无狭窄。早期训练时要先确保缝合的效果,要求针距基本相等,缝合组织不宜过多或过少,无出血及狭窄,待熟练后再要求速度。一定要辨认清楚下腔静脉的前后壁层次,尤其是吻合接近完毕时前后壁贴近不易辨认,容易出现前后壁缝合为一层而造成吻合口狭窄。出针要沿缝针弧度,不可扯拉以免撕裂血管,每缝完一针后均要求排线。先缝合右侧牵引线再缝合左侧,然后将针从右侧牵引处由血管外原位进入血管内,第一针应紧靠牵引处,再由左向右缝合后壁,后壁缝合结束后从右侧牵引处由血管内原位进入血管外,由右向左缝合前壁,应注意观察供受体前壁的长度,根据吻合口的不同大小调整针距,一般而言易出现供体前壁比受体要长。早期手术时易出现无肝期结束后大鼠呼吸减慢,肝脏颜色变暗的情况,其原因为气体栓塞,因此必须充分排气。首先前壁缝合1或2针后由肝上下腔静脉由供肝内打水,同时以湿棉签轻轻按压供肝;在吻合最后2或3针前,应保证供受体未吻合的下腔静脉前壁长度基本一致,助手再次向供肝内打水排气,然后牵引左侧尾线,避免气体进入。
3.6 袖套置入技术 门静脉袖套置入非常关键,关键到无肝期的时间。早期操作常感到受体门静脉过短,袖套置入困难,反复操作致门脉撕裂直至没有足够长度的门静脉可供套入,最后彻底失败,还会出现结扎线从套管处滑脱引起出血或狭窄,供体的门静脉扭转致血流不畅等情况。因此门静脉套管时首先要尽量靠离断处夹住血管,将血管夹略微松开并向下一些重新夹住使门静脉充盈,然后紧贴血管钳剪开门静脉前壁并冲洗,于供肝门静脉背侧预留丝线结扎,助手以直血管钳夹紧供肝门静脉,以弯血管钳夹住受体门静脉套管柄,术者将套管针由门静脉袖套置入供肝内并打水至袖套由水流出以进一步排清供肝内气体,然后术者暴露门脉后置入袖套,最后当术者打紧第一个结后,助手放开血管钳再打第二个结。结扎时要求双线结扎,第一根线结扎在供体套管线结的尾侧,第二根线结扎在头侧,以免线结在受体血管内引起血栓。同时还要注意袖套不要插入过深以免影响幽门静脉回流。下肝时保留少量受体汇入部的肝尾叶,右肾上腺血管丛结扎后不要剪断,可作为固定支撑点,使受体下腔静脉充分张开,套管前应向受体下腔静脉内打水排气以防止气栓。套管后应以棉球吸干腹腔内液体,检查下腔静脉周围有无出血,有时会出现肝下下腔静脉出血,可能由于汇入下腔静脉的分支引起的,应在袖套头侧结扎。其他注意事项同门静脉套管。
3.7 其他方面 手术时可考虑在背部垫一2c m高的腰垫,并随操作的部位而相应调整以达到最佳的暴露效果。操作应小心细致,动作轻柔,镊子剪刀等尖锐器械不可触及供肝表面。肝脏质地脆弱,棉签按压时间过长,压力过大,都会出现肝挫伤淤血导致微血栓形成,影响灌注质量,手术时应遵循一定的操作顺序,避免反复翻动肝脏,建议按照顺时针的顺序依次处理。大鼠术中出血量应<0.5m,l>2m l 多于24h内死亡[5]。术前禁食保证胃部空虚利于操作,但时间不可过长,禁食时间最好控制在8~10h。受体手术过程中应注意保温,冲洗套管时最好用37#林格液,关腹后经阴茎背静脉补液1~2m l以补充术中液体丢失量。为便于手术操作可自制一些简易工具,如U!型拉钩有助于暴露受体术野,橡皮泥自制凹槽可用于固定沙氏钳并利于肝上上腔静脉的吻合。
总之,大鼠肝移植模型是一种复杂、精细的手术,熟练掌握该技术需要极度的耐心与细心和不懈的艰苦训练。该模型是目前研究肝脏保护、肝缺血再灌注和供肝保存的最佳方法,模型的建立必将促进肝脏保护方面研究的进展。
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通络救脑注射液对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆及氧化应激反应的影响
2012年12月1日第12期No．12 1 Dec． 2012 中医学报 CHINA JOURNAL OF CHINESE MEDICINE 第27卷总第175期Vol．27 Serial No．175 *基金项目：北京中医药大学自主课题(编号:2011－JYBZZ － XS077) 通络救脑注射液对阿尔茨海默病模型大鼠学习 记忆及氧化应激反应的影响 * Effects of Tongluo Jiunao Injection on learning and memory and oxidative stress response for Alzheimer's Disease Rat Models 刘洋Liu Yang 1，李澎涛Li Pengtao 2，刘希伟Liu Xiwei 1，南一楠Nan Yinan 1，都文渊Du Wenyuan 1 1．北京中医药大学基础医学院中西医结合基础(病理)，北京110029 Integration of Traditional Chinese Medicine and Western Medicine Subject (Pathology )in Basic Medical College of Beijing University of Traditional Chinese Medicine ， Beijing ，China 1100292．北京中医药大学东直门医院，北京100700 Dongzhimen Hospital of Beijing University of Traditional Chinese Medicine ，Beijing ，China 100700 摘要：目的:探讨通络救脑注射液(Tong Luo Jiu Nao injection ， TLJN )对阿尔茨海默病(Alzheimer ’s Disease ，AD )模型大鼠的防治作用及其抗氧化机制。方法:采用脑内定位注射β淀粉样蛋白(βamyloid1-42)建立AD 大鼠模型，在模型建立成功的同时给予TLJN 治疗。采用Morris 水迷宫进行AD 大鼠的行为学检测，用化学比色法检测大脑皮质丙二醛(MDA )的含量。结果:与正常组比较，AD 模型组大鼠的逃避潜伏期明显延长(P ＜0．01)，目标象限停留时间明显缩短(P ＜0．01);TLJN 治疗组大鼠逃避潜伏期明显缩短(P ＜0．05)，目标象限停留时间明显增加(P ＜0．05)。AD 模型组大鼠脑皮质中MDA 含量增加(P ＜0.01);TLJN 治疗组，脑皮质MDA 含量显著减少(P ＜0．01)。结论:TLJN 具有改善学习记忆能力，对抗大鼠神经系统的退行性病变有一定的作用，可能通过抑制AD 模型大鼠脑皮质MDA 产生发挥其保护作用。 Abstract :Objective :To explore the preventive and therapeutic effect and anti-oxidation mechanism of Tong Luo Jiu Nao injection (TLJN )in Alzheimer's Disease (AD )rat models．Methods :The AD rat model was established by injecting β-amyloid1-42into the rat brain ，and successful model rats were given TLJN injection treatment at the same time．The behavioral changes of the AD rats were test-ed with Morris water maze．Chemical colorimetry was used to measure malondialdehyde (MDA )content in the cerebral cortex．Results :Compared with the control group ，the escape latent period of AD rats was significantly longer (P ＜0．01)，retention time of the target quadrant significantly obviously reduced (P ＜0．01);After TLJN treatment ，the escape latent period of AD rats was significantly shorter (P ＜0．05)，and retention time of the target quadrant was significantly increased (P ＜0．05)．In AD model group ，the MDA content in cerebral cortex was increased significantly (P ＜0．01);while after TLJN treatment ，the MDA content in cerebral cortex was decreased obviously (P ＜0．01)．Conclusions :TLJN treatment has certain effects on improving learning and memory ability of AD rats and resisting retrogression of rats nervous system ，and plays protective role in AD rats possibly via inhibiting the production of MDA．关键词：阿尔茨海默病;通络救脑注射液;Morris 水迷宫;学习记忆;氧化应激反应;大鼠 Key words :Alzheimer's Disease (AD );Tongluo Jiunao injection ;Morris water maze ;learning-memory ;oxidative stress response ;rat 中图分类号CLC number ：R285．5 文献标识码Document code ：A 文章编号Article ID ：1674－8999（2012）12－1614－03阿尔茨海默病（Alzheimer ’ s Disease ，AD ）是一种继心血管病、癌症、脑卒中后严重威胁人类健康的高发性神经退变性疾病。但目前临床上对于AD 的病因和发病机制尚不完全清楚， 对于其治疗仍旧是一个世界性的难题。近些年来，对于AD 的发病机制研究方面取得了很多进展，主要集中在遗传因素、环境因素、免疫-炎性机制、氧化应激和细胞凋亡等方面，而氧化应激在AD 中的作用越来越受到研究者的重视。结合本研究团队多年体内外实验研究， 发现AD 的中医病机关键为“毒损脑络”［1-2］ 。因此，本实验采用大鼠双侧海 马注射A β1-42这一致毒片段以模拟“毒损脑络”病证，观察“毒损脑络”病证下AD 大鼠学习记忆变化情况及氧化应激反应的改变，采用针对该中医病机关键具有解毒通络作用的中药复方通络救脑注射液进行干预， 通过Morris 水迷宫行为学检测方法观察药物干预后大鼠学习记忆的改善情况及通络救脑注射液的作用机制，为通络救脑注射液的临床应用提供体外实验依据。 1 材料与方法 1．1 动物分组 清洁级雄性SD 大鼠32只，体质量（250?20）g ，购自北 京维通利华实验动物中心。随机分成正常对照组（正常组）、 A β海马注射组（模型组）、A β海马注射+通络救脑注· 4161·
2型糖尿病大鼠模型研究概况
2型糖尿病大鼠模型研究概况 【摘要】目的：综述近年来2型糖尿病(T2DM)大鼠模型的研究进展及对其优缺点进行评价和未来同类模型的展望。方法：主要对T2DM大鼠模型的建立技术和方法进行综合性评价。结果：T2DM大鼠模型目前可以分为自发性T2DM 和实验性T2DM模型,且仍有较大发展空间。结论：经过综合评价研究，认为各种建模方法均有优缺点，目前较认可的是实验性T2DM大鼠模型，因价格低廉，造模方便而广受欢迎，但仍缺乏一定的造模标准。 【关键词】2型糖尿病；动物模型；研究概况 随着经济社会的发展，人们的饮食结构、生活方式等发生了很大改变，糖尿病发病率显著上升，尤其T2DM占了较高比例，大概占了糖尿病发病率的90%。T2DM是因人体胰岛素分泌相对不足或靶细胞对胰岛素敏感性降低继而引发糖、蛋白质、脂肪和水电解质等代谢紊乱所导致的疾病。患者典型表现为三多一少，即多饮、多食、多尿表现，同时还伴有身体消瘦、疲乏、烦躁、口渴等临床症状。 选择一些合适的动物模型进行动物试验成了我们研究糖尿病的良好途径，我们可以从中比较一些糖尿病药物的作用效果以及其药动学的特点，在临床用药上对评价某套治疗方案的可行性及预后等具有十分重要的参考意义。 目前研究的临床T2DM动物模型主要集中在大鼠上，这可能是由于大鼠作为T2DM动物模型相对较稳定且与人T2DM表现相似的优点。因此我们在下面综述近几年来国内外有关临床T2DM大鼠模型研究的情况。 总体上来说，目前临床T2DM研究的大鼠模型主要分为两类，一类是自发性T2DM大鼠模型，另一类则是实验性T2DM大鼠模型，考虑到成本及方便程度，目前以后者居多。 1 实验性T2DM大鼠模型 1.1 单纯高脂高糖引发的T2DM 在试验中，通过较长时间给予大鼠过量的高糖高脂饮食，发现能够诱导出较满意的T2DM大鼠模型，从而能为进一步研究奠定良好的基础。目前认为其机理可能是高糖高脂饲料会导致胰岛B细胞超负荷，进而使胰岛细胞发生损伤、萎缩甚至死亡，胰岛的功能因此下降，继而建立起伴胰岛素抵抗的T2DM模型。鲁瑾[1]等采用61%的高脂饮食，饲养大鼠7周后，大鼠就出现了高胰岛素血症，且形成了明显的胰岛素抵抗，是一个十分可靠的胰岛素抵抗模型。张丽锋[2]等给予W istar大鼠脂肪热比为59%的饲料, 喂养4周，均出现胰岛素抵抗，多项研究试验表明高脂饮食可以诱发产生可靠的糖尿病大鼠模型。 1.2 应用STZ药物诱导产生的大鼠模型由于高糖高脂饲料相对用时较长，且饲料成本相应较高，因此合理使用链脲菌素(STZ)是目前许多研究者所推崇的
大鼠二型糖尿病造模方法
大鼠二型糖尿病造模方法 Prepared on 22 November 2020
大鼠2型糖尿病模型建立方法讨论 专业：药理班级：六班姓名：刘畅学号：150517 摘要：据国际糖尿病联合会（InternationalDiabetesFederation，IDF）估计，现在全球约%的成年人患有糖尿病。到2035年，该病患者人数预计会上升至亿。在2013年，全球约有亿成年人患有糖尿病，中国的糖尿病患者人数居全球之首，调查统计人数为亿。糖尿病导致约510万人死亡，平均大约每6秒钟就有1人死于糖尿病。2012年1月9日，中国健康教育中心公布的“中国慢病监测及糖尿病专题调查”结果显示，我国18岁及以上居民糖尿病患病率为2。6%，60岁以上老年人患病率高达%。因此，为治疗糖尿病建立简单、稳定、经济的动物模型非常重要。因2型糖尿病患者人数占糖尿病患病人数的90%以上，本文主要综合讨论高糖高脂饲料联合链脲佐菌素大鼠2型糖尿病模型的建立方法和注意事项。得出结果为：使用体重在190g~240g之间的雄性SD大鼠，通过连续两次腹腔注射小剂量链脲佐菌素并辅以去抗氧化剂处理，合理饲养并通过尾静脉采血方法建立的2型糖尿病模型较理想。 关键词：2型糖尿病，SD大鼠模型，链脲佐菌素STZ， 糖尿病（diabetes）是一种以胰岛素分泌缺陷和胰岛素作用不足所致的以高血糖为特征的葡萄糖、蛋白质、脂质代谢紊乱的综合征，基本治疗方案包括饮食治疗、运动治疗、药物治疗、糖尿病监测及糖尿病教育。病因主要有遗传因素、病毒感染、肥胖等，临床表现为“三多一少”即多尿、多饮、多食和体重减轻。长期的高血糖最终会引起很多严重的并发症，包括心脑血管疾病、糖尿病神经病变、糖尿病视网膜病变，糖尿病肾病、糖尿病足、感染、糖尿病酮症酸中毒、高渗性昏迷等[1]。 糖尿病分为1型糖尿病（Type1diabetes）和2型糖尿病 （Type2diabetes）两种，1型患者因自身免疫β细胞破坏所致，每日胰岛素分泌量非常少，空腹基值及糖刺激后峰值均明显低于正常值，表现为绝对分泌不足。2型糖尿病细分为两类：体重正常患者胰岛素分泌量低于正常人，糖刺激后峰值低并且延迟出现；肥胖糖尿病人胰岛素分泌量大于正常人，空腹基值和糖刺激后高峰明显高于正常人，但延迟出现，因此，表现为相对性胰岛素分泌不足且释放反应迟钝。胰岛素分泌不足的原因可能为：遗传因素、自身免疫、胰岛素拮抗。糖尿病患者中约有90%～95%属于2型糖尿病。 2型糖尿病，即非胰岛素依赖型糖尿病（non-insulin-dependentdiabetesmellitus，NIDDM），根据体重可分为肥胖和不出现肥胖两
大鼠原位肾脏移植模型的建立
中国组织工程研究与临床康复第15卷第18期 2011–04–30出版 Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research April 30, 2011 Vol.15, No.18 ISSN 1673-8225 CN 21-1539/R CODEN: ZLKHAH 3347 Department of Urology, Affiliated Hospital, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071, China Mai Hai-xing★, Master, Department of Urology, Affiliated Hospital, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071, China maimark24@ https://www.wendangku.net/doc/f119016176.html, Correspondence to: Chen Li-jun, Doctor, Professor, Master’s supervisor, Department of Urology, Affiliated Hospital, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071, China chenlijun829@ https://www.wendangku.net/doc/f119016176.html, Received: 2010-10-26 Accepted: 2010-12-02 解放军军事医学科学院附属医院泌尿外科，北京市100071 麦海星★，男，1981年生，广东省阳江市人，汉族，2008年解放军第四军医大学毕业，硕士，主要从事肾脏移植的研究。 maimark24@ https://www.wendangku.net/doc/f119016176.html, 通讯作者：陈立军，博士，教授，硕士生导师，解放军军事医学科学院附属医院泌尿外科，北京市100071 chenlijun829@ https://www.wendangku.net/doc/f119016176.html, 中图分类号:R617 文献标识码:B 文章编号:1673-8225 (2011)18-03347-04 收稿日期：2010-10-26 修回日期：2010-12-02 (20101026009/W ? W) 大鼠原位肾脏移植模型的建立★ 麦海星，曲楠，赵立，黄晨，王亚林，李学超，李建涛，陈立军 Rat models of orthotopic kidney transplantation Mai Hai-xing, Qu Nan, Zhao Li, Huan Chen, Wang Ya-lin, Li Xue-chao, Li Jian-tao, Chen Li-jun Abstract BACKGROUND:There are many ways to prepare kidney transplantation models in rats; however, there are still many problems about operation time, transplantation effect and so on. OBJECTIVE: To study the microsurgical technique of establishing a reliable rat model of orthotopic kidney transplantation. METHODS: Kidney transplantation was performed from SD to Wistar strain (allogeneic),the donor’s artery and renal vein were put on the self-make rubber septum and underwent the end to end anastomosis surgeon with the receptor’s arteriae renalis and renal vein. After that, the donor’s bladder valva was inosculated with the receptor’s bladder. All the rats were divided into two groups: control group and Cyclosporin A (CsA) group, each group included 30 rats. The control group received 1 mL D-hanks each day after transplantation; the CsA group received subcutaneous injection of CsA for 15 mg/kg. The serum creatinine levels were observed at days 3, 5 and 10 after transplantation, pathological changes were also observed at 10 days after transplantation. RESULTS AND CONCLUSION: Rat orthotopic kidney transplantation was performed in 60 rats, and the successful rate was 85%. The serum creatinine level in the CsA group was lower than that in the control group (P < 0.05), but the survival time in the CsA group was longer than that in the control group (P < 0.05). Allografts of the control group exhibited typical severe acute rejection. It is indicated that this rat model of kidney transplantation is a reliable model with good reproducibility and high achievement ratio. Mai HX, Qu N, Zhao L, Huan C, Wang YL, Li XC, Li JT, Chen LJ.Rat models of orthotopic kidney transplantation. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu. 2011;15(18): 3347-3350. [https://www.wendangku.net/doc/f119016176.html, https://www.wendangku.net/doc/f119016176.html,] 摘要 背景：目前已有多种大鼠肾移植模型建模方式,但在移植时间、移植效果等方面都存在各种问题。 目的：探讨建立稳定、可靠的大鼠原位肾脏移植模型的方法。 方法：以SD大鼠为供体Wistar大鼠为受体行原位肾移植术。供体肾动脉、肾静脉在自制橡胶垫片上分别与受体的肾动脉、肾静脉端端吻合，供体输尿管膀胱瓣与受体膀胱吻合。将实验动物随机分为2组，对照组移植后每日腹腔内输注1 mL D-hanks 液；环孢素A组移植后每日皮下注射环孢素A 15 mg/kg。记录大鼠生存时间并于移植后第3，5，10天测定血肌酐值，移植后第10天，光镜下观察移植肾病理改变。 结果与结论：大鼠原位肾脏移植成功率为85%。移植后第5，10天环孢素A组血清肌酐值显著低于对照组(P < 0.05)。环孢素A组大鼠肾移植后存活天数明显长于对照组(P < 0.05)，移植肾病理可见排斥明显减轻。提示该模型稳定性强、重复性好，具有较高的成功率。 关键词：模型，动物；肾；移植；显微外科；大鼠 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2011.18.028 麦海星，曲楠，赵立，黄晨，王亚林，李学超，李建涛，陈立军.大鼠原位肾脏移植模型的建立[J].中国组织工程研究与临床康复，2011，15(18):3347-3350. [http://www.crte https://www.wendangku.net/doc/f119016176.html, https://www.wendangku.net/doc/f119016176.html,] 0 引言 大鼠是目前器官移植实验中最常用的实验动物[1-5]。由于大鼠的肾血管短，手术视野小，端端吻合难度较大，因而以往实验大多采用端侧吻合，但这须阻断大鼠体循环，导致其下半身在吻合期间处于缺血状态。当开放血管夹后，将发生严重的缺血-再灌注损伤[6-9]。有的方法采用带有与供肾动脉和肾静脉相连的主动脉和下腔静脉片，分别与受者肾动脉、肾静脉端端吻合，膀胱与膀胱吻合，但术中往往发现主动脉与肾动脉管径相差甚远，吻合后容易漏血。另一种方法利用供、受体动、静脉袖口式套叠，此方法提高了受体的存活率并缩短了手术时间，但因所用的套管管径有限，在翻转血管壁形成袖口时，使血管腔变狭小，影响移植肾脏血流的恢复，腹腔静脉与肾静脉作端端吻合时，因静脉壁薄弱常引起静脉壁撕裂而导致手术失败。 不阻断大鼠体循环的肾血管端端吻合原位肾移植技术的建立，避免了上述的缺点，采用端端吻合法减少了供肾的缺血-再灌注损伤，术后动物的存活率较采用端侧吻合者有明显提高[10-12]。 实验采用供体肾动脉、肾静脉分别与受体的肾动脉、肾静脉端端吻合，供体输尿管膀胱瓣与受体膀胱吻合的方法。施行大鼠肾移植。
稳定大鼠原位肝移植模型的建立
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２００９年５月第６卷第１３期 图１腹主动脉灌注图２修肝及套管 圈３肝脏血管系统吻合完成 当延长供肝的冷缺血时间并不明显增加术后死亡率及并发症的发生。而术中过多地牵动供肝则会明显影响供肝的质量嗍。手术分离时尽可能去除血管壁周围的筋膜、结缔组织等。防止再通后造成套管腔狭窄及血栓形成。 ３．２供肝灌注 先松开门静脉夹，再松开肝下下腔静脉夹，均缓慢松开。灌洗压力过大容易引起供肝的细胞器肿胀、细胞坏死和淋巴细胞浸润，导致细胞内钙超载和能量代谢障碍．从而影响移植肝的质量。本研究采用的是经腹主动脉的灌注法。以１￣２ＩｌｉＯｎ的速度灌注腹主动脉，灌注液体经过肝动脉和门静脉系统回流入肝脏，从而保证肝脏得到充分、缓慢而均匀的灌注，提高供肝的质量。 ３．３袖套管放置 套管必须保证硬度适中、内壁光滑。由于不重建肝动脉，而胆道血供多由肝动脉供应．故供肝胆总管不应保留过长．有利于减少胆道并发症。在脾静脉水平安放门静脉袖套较为方便。在左肾静脉水平剪断ⅣＣ。有利于袖套的翻转。 ３．４受体手术 笔者在进腹时习惯取中上腹横切口，而此过程中笔者建议结扎左右腹壁下静脉，首先该血管相对较粗大，出血会影响术野，其次该血管的出血量相对于只有１２一１３“血容量的大鼠来讲会是术后出血性休克死亡的重要原因。受体术前１５ｒｎｉｎ常规给予阿托品对于预防术后肺炎、肺不张有较好的效果ｆＩｑ。供肝恢复血供后对于肝门部的处理，使用血供较好的大网膜覆盖，既有加压防止出血、使胆漏和胆道感染局限化的作用，同时可以适当供给胆道血供，可以预防胆道并发症的发生【ｌｌｌ。受体阻断门静脉后，经门静脉注入羟乙基淀粉 ?论著? 注射液可将肝内残存的血液及时推人体循环。起到“自身输血”的作用。在ＳＶＣ的吻合过程中，缝线不宜过紧。防止血管狭窄。供肝门静脉及ＩＶＣ“套管法”吻合前，必须排出阻断夹后方的一段积血。以防止血栓栓塞。Ｐａｅｈｅｃｏ等旧研究表明，随门静脉淤血时间的延长。再灌注后闲肠道内菌群移位而使内毒素骤升。如此可激活肝脏Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞，产生大量的ＴＮＦ—Ｏｔ及一系列的级联反应。从而对供肝及受者的肺脏产生损伤１７．Ｌａ－ｌ川。同时．ＩＶＣ阻断时间的延长会导致血钾浓度显著升高。在供肝恢复血供的过程中．应缓慢放开无创血管夹，而且应按顺序先放开门静脉。后放开肝上上腔静脉，尽量使心脏逐渐适应血容量的增加。 ４结论 重复是技巧之母．所以大量的练习是提高手术技巧的关键。认真、耐心、仔细的手术是成功的关键。对于供肝的提早冷缺血处理及对供肝植入后的细心操作。使得手术成功的机会大大增加。 【参考文献】 【１】ＫａｍａｄａＮ，ＣａＭｅＢＹ．ＡｓｕｒｇｉｃａｌｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅｗｉｔｈｆｉｖｅｈｕｎｄｒｅｄｔｈｉｒＩｙｌｉｖｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓｉｎｔｈｅｒａｔ【Ｊ】．Ｓｕｒｇｅｒｙ，１９８３，９３（Ｐｔｌ）：６４－６９． 【２】宇汝胜，汪泳，钱海鑫．大鼠原位肝移植模型的手术操作技巧探讨阴．肝胆胰外科杂志．２００８．２０（１）：７－９． 【３】权毅，付华。徐亮．大鼠原位肝移植模型的建立和术式改进阴．中国现代医学杂志．２００６．１６（２）：２２６－２２９． 【４】ＷａｎＣＤ，ＣｈｅｎｇＲ，ＷａｎｇＨＢ。ｅｌａ１．１ｒａｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙｅｆｆｅｅｔａｏｆｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍａｄｉｐｏｓｅｔｉｓｓｕｅｓｉｎａｒａｔｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃｌｉｖｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｍｏｄｅｌ陬ＨｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙＰａｎｃｒｅａｔＤｉｓＩｎｔ，２００８，７（１）：２９—３３． 【５】汪根树。陈规划，朱晓峰．大鼠小体积原位肝移植模型的建立田．中国实验诊断学，２００６，（１０）：儿１９－１１２２． 【６】贾凯，徐钧．二袖套法大鼠原位肝移植术的改进们．山西医科大学学报，２００６，３７（４）：３５６－３５８． 【７】ＴｉａｎＹ，ＪｏｅｈｕｍＷ，Ｇ∞晒ｅｖＰ，ｅｔａ１．Ｋｕｐｆｆｅｒｃｅｌｌ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔＴＮＦ－Ｍｐｈａｓｉｇｎａｌｉｎｇｍｅｄｉａｔｅｓｉｎｊｕｒｙｉｎｔｈｅａｒｔｅｒｉａｌｉｚｅｄｓｍａｌｌ—ｆ打一ｓｉ∞ｌｉｖｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｉｎｔｈｅＩｎｏｕｏｅ叽ＰｌｏｃＮａｉｌＡｃａｄＳｃｉ．２００６，１０３（１２）：４５９８－舢奶． 【８】ＵｍｔａＫＮａｎｙｅｎＢ，Ｂｍｕｈ＆ｅｔａ１．Ｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｕｒｖｉｖａｌｉｎｒａｔｌｉｖｅｒｔｒａｒｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎｗｉｔｌｌｅｘｔｅｎｄｅｄｃｏｌｄｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ：ｒｏｌｅ０ｆｐｏｒｔａｌｖｅｉｎｃｌａｍｐｉｎｇｔｉｍｅＩＪ］．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，１９９８，２８（２）：３６６－３７３． 【９】邵堂雷，蔡伟耀，张明钧，等．影响肝移植鼠近期存活的术中因素分析叨．上海第－－ｇｇ科大学学报，２００１，２１（３）：２２３—２２５． 【１０】彭勇，龚建平，刘长安，等．大鼠原位肝移植模型制作过程中麻醉方法的选择【Ｊ】．中华普通外科杂志，２００３，１２０）：６７３－－６７６． 【１ｌ】常顺伍，郑树森，梁廷波，等．大鼠原位肝移植术中胆道重建方法的改进【Ｊ】．中华器官移植杂志２００７，（１）：１３—１６． 【１２】ＰａｅｈｅｅｏＥＧ，ＧｏｒａｅａＭＣ，ＲｏｄｒｉｇｕｅｓＧ凡ｅｔａ１．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｌｉｖｅｒｉａｅｈａｅｍｉｅｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｉｎｃｉｒｒｈｏｔｉｃｒａｔｓｓｕｂｍｉｔｔｅｄｔｏｈｅｐａｔｉｃｉｓｅｈａｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ【Ｊ】．ＡｅｔａＣｉｒＢｒａｓ，２００６，２１：２４－２８． 【１３】ＯｌｌｕｏｇｌｕＥ，ＫｅｒｅｍＭ，ＰａｓａｏｇｌｕＨ，ｅｔａ１．Ｄｅｌａｙｅｄｅｎｅｒｇｙｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ０ｆｉｓｃｈｅｍｉｃｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｏｎｈｅｐａｔｉｃｉｓｃｈｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙｉｎｒａｔｓ仞．ＥｕｒＳｕｒｇＢｅｓ，２００６，３８：１１４－１２１． 【１４］Ｋａｓｈｔｉ气Ｍｅｈｒａｂｉ气ＰａｈｌａｖａｎＩＳ，ｅｔａ１．Ａｒｅｖｉｅｗｏｆｖａｒｉｏｕｓｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｏｆｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃｌｉｖｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｉｎｔｈｅ呲忉．ＴｒａｎｓｐｌａｎｔＰｒｏｅｔ２００５，３７：１８５－１８８． （收稿日期：２００９－０２—１７） ＣＨＩＮＡＭＥＤＩＣＡＬ ＨＥＲＡＬＤ中目医琦导囊３５ 万方数据
大鼠原位肾脏移植模型
大鼠肾移植模型制作 大鼠肾移植模型目前仍是肾移植实验研究中非常有价值和常用的动物模型。这一模型具有许多优点：显微外科技术的应用使建立稳定可靠的实验动物模型成为可能；大鼠繁殖快，成本较低；有大批基因型明确的纯系大鼠供选择如SD大鼠、Wistar大鼠等。这一术式的基本方法如下。 一、手术器械 显微外科手术器械包，手术显微镜1台，自制S拉钩（用橡皮筋一端带弯成S形大头针）4个，眼科剪1把，其它外科器械若干及纱布、棉球、棉片和橡皮条等。 二、实验动物及麻醉 根据实验目的选择同一品系或不同品系的大鼠，一般8～10周龄，体重150～250g，供鼠雌雄不限，受鼠最好为雄性大鼠，供受者体重相仿。腹腔注射0.3％戊巴比妥2ml/100g或氯胺酮 10mg/100g体重或已醚吸入麻醉均可。 三、供肾切取术 腹部正中切口，切开皮肤、腹直肌和腹膜，充分暴露左肾，以湿纱布覆盖周围组织器官。 1.供肾血管游离：使用棉签和无齿眼科镊钝性分离左肾动静脉及其分支，游离与其连接的腹主动脉和下腔静脉，结扎肾上腺动、静脉。在游离完毕的左肾动脉上方和右肾动脉下方的腹主动脉部和腹主动脉远端及左肾静脉上下方的下腔静脉各以1号细丝线围绕，勿结扎。
2.左肾原位灌洗：以Lee氏夹阻断左肾动脉下方的腹主动脉血流，以血管钳夹闭腹主动脉和下腔静脉远端，在肾动脉以下的腹主动脉上切一小口插管，注入500u/ml肝素等渗盐水2ml使全身肝素化，然后相继结扎左肾动脉以上的腹主动脉和左肾静脉以下的下腔静脉，在左右肾静脉开口之间剪断下腔静脉，进行低温灌洗。用4℃等渗盐水10ml/min自腹主动脉插管处推注，灌洗5分钟，见左肾和附属血管完全苍白，停止灌注。 3.输尿管、膀胱分离：以小弯蚊式钳轻轻提起膀胱底，钝性分离膀胱和输尿管，并逐渐延伸至左肾门，注意适当保留部分输尿管周结缔组织（其内有输尿管滋养血管），整块剪下左肾肾血管、灌洗段腹主动脉和下腔静脉、左输尿管及膀胱，立即置入4℃平衡盐溶液中保存。 4.供肾处理：4℃平衡盐溶液冰浴中修剪供肾血管、输尿管和膀胱。把连接肾动脉的腹主动脉修剪成一3×2mm2的椭圆形动脉瓣，并将连接左输尿管的膀胱亦修剪成直径3mm的膀胱瓣。 四、供肾原位移植术 受者麻醉后，将肠管推向右侧，湿纱布保护内脏器官和周围组织，用自制拉钩牵引暴露左肾及其周围组织。 1.受者血管游离：如前述钝性分离左肾动、静脉及其分支，并分离此处下腔静脉、腹主动脉和左输尿管肾门端，仔细除去左肾动脉根部腹主动脉血管外结缔组织，并结扎此处腹主动脉分支。用眼科剪锐性分离左肾，4号丝线结扎肾动、静脉远心端和左输尿管肾门部，将连有左肾动脉根部的腹主动脉完全分离，小心去除血管外结缔组织，并结
大鼠辅助性原位肝移植的体会
【摘要】目的研究大鼠辅助性原位肝移植模型的手术技巧及术后并发症的预防。方法30只SD大鼠作供体。30只SD大鼠为受体。通过“袖套法”施行大鼠辅助性原位肝移植。结果24h存活率76％(19/25)；周存活率56％(14/25)。结论熟练的显徽外科技术是模型成功与否的关键。 【关键词】肝脏；移植；大鼠 Parital auxiliary orthotopic liver transplantation in rats LONG Guang-hui, XIAO Ping, XIE Yong, et al. Department of Hepatobiliary Surgery，Peking University Shenzhen Hospital，Guangdong，518036 [Abstract］Objective To investigate the method and technique of parital auxiliary orthotopic liver transplantation in rats. Methods 30 cases of parital auxiliary orthotopic liver transplantation in SD rats were performed using cuf-tecnique and microsurgery method. The successful rate, operation time and complications were observed. Results The general successful rate was 90%, the survival rate of post-operation 24-hour and one week was 76％(19/25)and 56％(14/25)respectively. Conclusion Meticulous and skilled microsurgical technique is the key to successful operation. [Key words］liver; transplantation; rat 近年来，辅助性原位肝移植因其手术创伤相对较小、供体来源比较容易获取以及术后不必长期服用免疫抑制剂等优点已经越来越多地受到临床医生的重视[1]。但是，该该移植方法目前也有其一定的局限。其中又以供肝与移植肝功能竞争导致移植肝萎缩最为明显[2]。因此，建立动物辅助性原位肝移植模型了解供肝与移植肝功能竞争的机理是解决这一难题的重要研究手段。70年代大鼠原位肝移植模型获得成功后[3,4]。原位肝移植的动物模型已经逐渐成熟并被实验研究广泛采用。但是，辅助性原位肝移植的动物模型尚不多见。本实
大鼠肝脏移植模型制作
大鼠肝脏移植模型制作 大鼠原位肝移植是研究器官保存、肝脏缺血再灌注损伤、免疫抑制剂、移植排斥反应以及免疫耐受机理等方面常用的动物模型。最初由Lee在1973年报道，经过许多学者的改进，其手术基本稳定，根据肝上下腔静脉吻合方式，大鼠原位肝移植可分为“二袖套法”和“三袖套法”，下面简单的将大鼠肝脏移植的模型制作介绍一下。 一、手术器械 显微外科手术器械包，手术显微镜1台，自制S拉钩（用橡皮筋一端带弯成S形大头针）4个，眼科剪1把，其它外科器械若干及纱布、棉球、棉片和橡皮条等。 二、供、受者大鼠的选择 根据不同的研究目的选择不同的动物品系，在同种移植模型中，一般采用两种纯系健康大鼠，如Lewis大鼠，Brown Norway 大鼠（BN），DA大鼠等，国内应用Wistar，SD大鼠也比较多。如果是异种移植可以选用豚鼠－大鼠，仓鼠－大鼠等不同品系的动物。 三、术前准备 供、受者术前禁食14h，自由饮水，采用乙醚吸入麻醉麻醉的方法，提高手术的安全性，受者术前肌肉注射阿托品0.03mg，防治分泌物阻塞呼吸道。 四、供者手术 麻醉成功后，经阴茎背静脉注射50U/ml肝素稀释液3.0ml，使供者全身肝素化。十字切口入腹，经腹主动脉穿刺灌洗供肝；灌洗前，剪开膈肌，阻断腹主动脉，离断胸腔段肝上下腔静脉，灌洗至流出液澄清为止，约需灌洗液20～30ml。游离肝下下腔静脉，分离结扎离断右肾静脉和右肾上腺静脉，自肠系膜上静脉置管，缓慢注入20ml含肝素的林格氏液，于右肾静脉下方离断肝下下腔静脉，剪开胆总管前壁，近肝端插入外径1.0mm，长4.0mm 的聚乙烯管约2.0mm（可用硬膜外导管制成），结扎固定后远肝端离断之，分离结扎离断肝固有动脉；游离门静脉，结扎离断其分支幽门静脉、脾静脉，于脾静脉下方离断门静脉，锐性分离肝周韧带，结扎左膈下静脉，绕肝上下腔静脉环切膈肌及其腱膜，保留2.0mm
1型糖尿病大鼠模型的建立及观察_张巨彪
7 摘要：目的探讨链脲佐菌素（STZ ）建成可靠、稳定的1型大鼠糖尿病模型情况。方法选取 SDF 级雄性Wistar 大鼠70只，分成3个实验组，各20只和对照组10只，实验组大鼠一次性腹腔注射STZ 30、65、100mg /kg ，对照组10只大鼠腹腔注射枸橼酸缓冲液，用拜安易血糖仪检测血糖，7d 后血糖＞16．65mmol /L 判定为1型糖尿病动物模型。观察大鼠的血糖、体质量、饮水量、胰岛素和C 肽等指标。结果大鼠注射STZ 65mg /kg 7d 后，大部分血糖值达到成模标准，并出现糖尿病表现，持续观察7周，有18只大鼠成模，未见糖尿病转复，糖尿病症状明显。结论腹腔一次性注射STZ 65mg /kg 剂量可成功制备1型糖尿病大鼠模型。 关键词：链尿佐菌素；1型糖尿病模型；大鼠 Establishment and Observation of Type I Diabetic Rat Models ZHANG Ju-biao 1， SU Xiu-lan 2，OUY-ANG Xiao-hui 1 ．（1．Department of Tumor Surger ， Inner Mongolia Autonomous Region People's Hospital ，Hohhot 010010，China ；2．Central Lab of Inner Mongolia Medical University ，Hohhot 010010，China ） Abstract ：Objective To establish type I diabetic rat models by intraperitoneal injection of streptozoto-cin and observe the stability of diabetic changes in rats．Methods 70male Wistar rats were divided into 3experiment groups of 20rats each and 1control group of 10rats．The experiment groups were intraperitoneally injected by 30mg /kg ，65mg /kg ，and 100mg /kg STZ respectively ，while the control group was injected cit-rate buffer．Bayer blood glucose meter was adopted to test the blood glucose ，setting ＞16．65mmol /L after 7d as the type 1diabetic animal model．The fasting blood glucose level ，body weight ，water intake ，insulin and C-peptide of the rats at different time points were observed /measured．Results In the group of injection by 65mg /kg STZ ，after 7days most rats reached the model blood glucose standard and had diabetic manifes-tation ，after continuous observation of 7weeks ，18rats were qualified as the model with obvious symptoms and without conversion．Conclusion With the dose of 65mg /kg of STZ through one intraperitoneal injection ，type 1diabetic rat models can successfully established． Key words ：Streptozotocin ；Type 1diabetic models ；Rat 糖尿病已成为严重威胁人类身体健康和生命的 疾病。它是一种以持续性高血糖为特征的内分泌障碍疾病，可导致全身性代谢紊乱并继发眼、肾、神经和心血管等器官的慢性进行性病变，最终引起功能损伤及衰竭。1型糖尿病及其并发症的病因、发病机制尚未完全阐明，预防和治疗仍不完善，干细胞（stem cells ）是体内存在的一类特殊细胞，有自我更新和不断增生的能力，又具有多向分化的潜能，只要掌握了胰腺干细胞的特异标志、转化调控机制、培养及分离技术，就可以体外操纵干细胞，进行大量扩增和定向诱导分化，最后将得到能分泌胰岛素的胰岛 样细胞［1-2］，用于治疗1型糖尿病。因此，建立较理 想的动物模型研究该病的发病机制和治疗具有重要意义。目前，国内外普遍使用STZ 制备糖尿病大鼠 动物模型。该项实验根据吴清洪报道的方法［3］ ，采用简单的腹腔一次注射的方法制备稳定并且可靠的动物模型。1材料与方法 1．1实验动物的选择和喂养SDF 级成熟Wistar 雄性大鼠70只（体质量220 280g ），购自内蒙古大学实验动物中心，饲养室内氨浓 度＜20g /L ， 相对湿度40% 70%，室温18 25℃，保证良好的通风，避免增加造模后大鼠的感染概率，普通饲料喂养，饮水自由。 1．2主要仪器和试剂拜安易血糖检测仪及试纸（美国Bayer 公司）；STZ （美国Sigma 公司）；胰岛素、C 肽放射免疫分析药盒（均购自内蒙古泽生耗材）。 1．3主要实验试剂的配制STZ 液称取STZ 粉剂0．2g ，溶于pH 4．5，浓度为0．1mmol/L 的枸橼酸三钠-枸橼酸缓冲液20mL 中，制成1%溶 液，经0．22μm 滤器过滤除菌，要求5min 内配制完成，配好后，10min 内用完，STZ 和枸橼酸缓冲溶液低温保存，新鲜配制。 1．4实验分组和大鼠糖尿病模型的制备采取国内外普遍使用的STZ 制备糖尿病大鼠模型，根据徐 华等［4］ 报道， 雄性大鼠易于成模，且成模后血糖稳定性好，故选取成熟雄性大鼠用于实验。将所有大鼠（70只）使用代谢笼单只喂养，适应性喂养1周， 1周内注意观察大鼠的饮食情况、体质量等健康状况， 1周后，选取空腹血糖介于2．92 6．92mmol /L 的大鼠为实验对象。将空腹血糖介于2．92 6．92mmol /L 的大鼠随机分为4组，实验组（60只）分别接受STZ 液一次性腹腔注射，剂量为30、65、100mg /kg ，对照组（10只）注射枸橼酸三钠-枸橼酸缓冲液。实验前 大鼠禁食、水12h 。分别于注射后3、 7、14、28d 采用剪尾法采集血样，用拜安易血糖仪检测空腹血糖，7d 后空腹血糖＞16．65mmol /L ，出现多饮、多食、多尿 · 533·医学综述2013年1月第19卷第2期Medical Recapitulate ， Jan．2013，Vol．19，No．2