A032 CK说明书(合)10.12.16修改
肌酸激酶（CK）测试盒说明书
一、原理：
肌酸激酶CK催化三磷酸腺苷和肌酸，生成磷酸肌酸，后者很快全部水解为磷酸，此时三磷酸腺苷和二磷酸腺苷仍稳定，加入钼酸铵可生成磷钼酸，可进一步还原成钼蓝，根据生成无机磷的量可算出酶的活力。
二、试剂组成与配制：（50T）
1、试剂一：液体6ml×1瓶，冷冻或者4℃保存3个月。
2、试剂二：液体1.5ml×1瓶，冷冻或者4℃保存3个月。
3、试剂三：粉剂2支，临用时每支加双蒸水2 ml，4℃保存6个月。
4、试剂四：粉剂1支，临用前每支加双蒸水6ml, 4℃保存6个月。
5、试剂五：粉剂2支，冷冻保存6个月，临用时每支加双蒸水2ml。配好的试剂–20℃以下保
存5天。
6、试剂六：液体6ml×1瓶，室温或4℃保存6个月。
7、试剂七：粉剂1支，4℃保存6个月，加双蒸水60ml，可适当加热溶解，溶解后4℃保存。
8、试剂八：粉剂2支，4℃保存6个月，临用时每支加双蒸水20ml，溶解后4℃保存。
9、2.5mol/L硫酸50ml×1瓶,室温保存6个月。
10、附带双蒸水200 ml，供配制试剂时用。
定磷剂的配制：双蒸水︰2.5mol/L硫酸︰试剂七︰试剂八= 2︰1︰1︰1。配好的定磷剂应为浅黄色，若无色则失效，若呈蓝色则为磷污染，定磷剂需现用现配。配好后4℃
可保存48小时。
三、操作表：
注意：配制好的试剂，需37°C预温5分钟，再进行测定。
1、规范操作表：
测定管测定空白管
待测样本（μl）20
试剂一（μl）80 80
试剂二（μl）20 20
试剂三（μl）50 50
试剂四（μl）100 100
试剂五（μl）50 50
旋涡混匀，37°C水浴20分钟
试剂六（μl）100 100
待测样本（μl） 20
旋涡混匀，离心3500r/min×10min，取上清定磷
上清（μl）300 300
定磷剂（μl）2000 2000 旋涡混匀，45°C水浴15分钟，蒸馏水调零，660nm处1cm光径比色，测各管的吸光度OD值。
根据标准曲线计算CK的酶活力。
注意：预试详细参照《最佳取样浓度摸索》（本说明书第四点）。
2、如果您的样本很多，可采用简便操作法：
①混合试剂的配制：测试前，将试剂一、二、三、四、五每种试剂所用量乘以样本数（n ）再乘以2（因每只测定管均需做测定空白），另再多放宽4只，混合试剂的具体配制见下表：
试剂名称 试剂一 试剂二 试剂三 试剂四 试剂 五
试剂用量（μl ）(n ×2+4)×80(n ×2+4)×20(n ×2+4)×50(n ×2+4)×100 (n ×2+4)×50
将上面所有试剂加在一起混匀制成混合试剂。
注意：配制好的试剂，需37°C 预温5分钟，再进行测定。
②简便操作表：
测定管 测定空白管 待测样本（μl ） 20
混合试剂（μl ）（已预温）300 300
旋涡混匀，37°C 水浴20分钟
试剂六（μl ） 100 100
待测样本（μl ） 20
旋涡混匀，离心3500r/min ×10min ，取上清定磷
上清（μl ） 300 300
定磷剂（μl ） 2000 2000
旋涡混匀，45°C 水浴15分钟，蒸馏水调零，660nm 处1cm 光径比色，测各管的吸光度。
根据标准曲线查找CK 酶活力。
注意：．．．
预试详细参照《最佳取样浓度摸索》（本说明书第四点）。
3、计算公式：
① 、血清计算公式：
CK U ml 7.4491OD OD CK =×=×?×根据标准曲线计算所得的酶活力活力(U/ml)样本测试前稀释倍数（/）
（（测定测定空白）- 0.0716）样本测试前稀释倍数
② 、组织计算公式：
CK mgprot U ml mgprot/ml 7.4491OD OD CK =÷=×?÷根据标准曲线计算所得的酶活力待测样本蛋白浓度活力(U/)（/）（）
（（测定测定空白）- 0.0716）待测样本蛋白浓度
注;试剂盒中没有带CK 标准品，老师按照操作表测定，可以直接套用我们的公式，但一定要注意，测定所得
一定要符合说明书第四点的要求（绝对OD 值控制在0.05—0.5之间）
四﹑最佳取样浓度的摸索：
最佳取样浓度的摸索
注意：因样品种类不同，其最佳取样浓度不同。根据CK 标准曲线(见附录)，在每测定一
种新的样品前，最好摸索一个最佳取样浓度，一般把绝对OD 值控制在0.05—0.5
之间。
1.血清（浆）最佳取样浓度的摸索：
由于正常情况下血清（浆）中的CK 活力比较低。但是如果老师的模型组的CK 活
力会明显增高，那最好在批量实验前取模型组做个预试，一旦CK 活力＞3.5U/ml ，就需
要用生理盐水将该模型组血清稀释后检测。若含量太高（曲线的平坦部分）,则看不出组
与组之间的显著性差异。
2.组织匀浆最佳取样浓度的摸索：
如果您使用本试剂盒测试某一种新的样品时，最好先做三支不同浓度的测试管。例
如测肌肉组织匀浆，取样浓度分别为1%、2%、5%，然后计算酶的浓度，选取酶的浓度
在0.01~0.1mg/ml （即：酶活力在0.35~3.5U/ml ，此段曲线基本呈直线关系）的样本浓度
为最佳取样浓度,进行批量实验。若浓度太高（曲线的平坦部分）,则看不出组与组之间
的显著性差异，需将样品浓度稀释后再测试；若浓度太低,则实验误差对测定结果影响很
大，需将样品加大浓度后测试.
这样做对科研结果分析及t 检验有很大帮助。
五、注意点：
1、所有样品均要检测测定管及测定空白管。
2、组织匀浆4℃存放不可超过10小时，组织块冷冻可延长存放时间。
3、血清4℃存放不可超过10小时，冷冻可延长存放时间。
4、此法为微量，灵敏，快速法。所以对测定管子要求严格，要没有一点磷的管子，若放
过H 3PO 4或其缓冲盐的管子，一定要洗得非常干净，用洗涤剂加水煮，再用自来水冲，
最后用蒸馏水冲。最好用一次性塑料管或者用新的玻璃管．．．．．．．．．．．．．．．．．
。这样可以避免磷污染。这一点很重要，常常是实验成败的关键因素。
5、定磷剂配好后，不可放置太久，一般4℃可保存48小时，最好现用现配。随时放冰箱。
6、最好采用简化操作法，这样快捷、准确。
7、所有配试剂的器皿要专用，或者使用新的（包括吸硫酸的吸管，及盛蒸馏水的器皿以
及吸各种试剂的吸嘴）。
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附录ⅠCK标准曲线的制备
（一）、试剂的配制：
取CK标准品（70U/支），用双蒸水溶解并稀释成0.175、0.350、0.700、1.050、1.400、1.750、
2.100、2.450、2.800、
3.150、3.500U/ml，其它试剂的配制，同前面的样本中CK测定试剂
的配制。
注意：配制好的试剂，需37°C预温5分钟，再进行测定。
（二）、简化测定操作表：
标准管标准空白管
CK标准（μl）20 混合试剂（μl）（已预温）300 300
旋涡混匀，37°C水浴20分钟
试剂六（μl）100 100
CK标准（μl） 20 旋涡混匀，离心3500r/min×10min，取上清定磷
上清（μl）300 300
定磷剂（μl）2000 2000 旋涡混匀，45°C水浴15分钟，蒸馏水调零，660nm处1cm光径比色，测各管吸光度。
（三）、测定结果：
CK酶活力（U/ml）0.1750.350 0.700 1.050 1.400 1.750 2.100 2.450 2.800 3.150 3.500 空白OD值0.2760.276 0.283 0.2880.2880.2890.290.290.274 0.276 0.294
标准OD值0.2870.330 0.403 0.4530.5120.5380.5800.6220.658 0.698 0.768
绝对OD值 0.0110.054
0.120 0.1650.2240.2490.2900.3320.384 0.422 0.474
以CK标准品浓度（U/ml）为纵坐标，以绝对OD值为横坐标，作CK标准曲线，绘图如下：
附录Ⅱ 血清中CK 测定
（一）、样本前处理：
根据《最佳取样浓度摸索》（本说明书第四点）得到的最佳取样浓度。
注意：配制好的试剂，需37°C 预温5分钟，再进行测定。
（二）、操作表：
测定管 测定空白管 待测样本（μl ） 20
试剂一（μl ） 80 80
试剂二（μl ） 20 20
试剂三（μl ） 50 50
试剂四（μl ） 100 100
试剂五（μl ） 50 50
旋涡混匀，37°C 水浴20分钟
试剂六（μl ） 100 100
待测样本（μl ） 20
旋涡混匀，离心3500r/min ×10min ，取上清定磷
上清（μl ） 300 300
定磷剂（μl ） 2000 2000
旋涡混匀，45°C 水浴15分钟，蒸馏水调零，660nm 处1cm 光径比色，测各管的吸光度OD 值。 根据标准曲线计算CK 的酶活力。
（三）、计算公式及举例：
①、计算公式：
CK U ml 7.4491OD OD CK =×=×?×根据标准曲线计算所得的酶活力活力(U/ml)样本测试前稀释倍数（/）
（（测定测定空白）- 0.0716）样本测试前稀释倍数
注：试剂盒中没有带CK 标准品，老师按照操作表测定，可以直接套用我们的公式，但一定要注意，
测定所得一定要符合说明书第五点的要求（绝对OD 值控制在0.05—0.5之间）
②、计算举例：
取小鼠血清20μl 进行CK 检测，测得测定管吸光度为0.352，测定空白管吸光度为0.278，根据标准曲线拟合方程计算CK 含量为：
7.44910.3520.2780.480/(/)CK U ml U ml =×?=活力
（）- 0.0716
附录Ⅲ 组织中CK 测定
（一）、样本前处理：准确称取样本重量，以生理盐水为匀浆介质制备成10%的组织匀浆（样本
重量克数︰生理盐水体积毫升数=1︰9），将匀浆2500转/分，离心10分钟取上清，再用生理盐水稀释成所需要的浓度，待测（最佳取样浓度见《最佳取样浓度摸索》，在本说明书第五点）。
注意：配制好的试剂，需37°C 预温5分钟，再进行测定。
（二）、操作表：
测定管 测定空白管 待测样本（μl ） 20
试剂一（μl ） 80 80
试剂二（μl ） 20 20
试剂三（μl ） 50 50
试剂四（μl ） 100 100
试剂五（μl ） 50 50
旋涡混匀，37°C 水浴20分钟
试剂六（μl ） 100 100
待测样本（μl ） 20
旋涡混匀，离心3500r/min ×10min ，取上清定磷
上清（μl ） 300 300
定磷剂（μl ） 2000 2000
旋涡混匀，45°C 水浴15分钟，蒸馏水调零，660nm 处1cm 光径比色，测各管的吸光度OD 值。 根据标准曲线计算CK 的酶活力。
（三）、计算公式及举例：
1、计算公式：
CK mgprot U ml mgprot/ml 7.4491OD OD CK =÷=×?÷根据标准曲线计算所得的酶活力待测样本蛋白浓度活力(U/)（/）（）
（（测定测定空白）- 0.0716）待测样本蛋白浓度
注：试剂盒中没有带CK 标准品，老师按照操作表测定，可以直接套用我们的公式，但一定要注意，
测定所得一定要符合说明书第五点的要求（绝对OD 值控制在0.05—0.5之间）
2、计算举例：
①、取2%大鼠肝匀浆上清液20μl 进行CK 检测，测定管吸光度为0.386，测定空白管吸光度为0.178，2%大鼠肝匀浆的蛋白浓度为2.268mgprot/ml 。则计算结果为：
7.44910.3860.178 2.2680.652/(/)
CK U mgprot U mgprot =×?÷=活力（（）- 0.0716） ②、取5%中华鲟鳃匀浆上清液20μl 进行CK 检测，测定管吸光度为0.441，测定空白管吸光度为0.314，5%中华鲟鳃匀浆的蛋白浓度为0.6429mgprot/ml 。则计算结果为：
7.44910.4410.3140.6429 1.36/(/)
CK U mgprot U mgprot =×?÷=活力（（）- 0.0716）