HIV检测方法

HIV 实验室诊断
人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)及其相关标志的检测是预防 HIV 感染和艾滋病临床治疗中重要的环节，在艾滋病的防治工作中具有重要作用，如艾滋病的 诊断、HIV 感染的诊断、血源及器官供体的筛选、流行病学调查、艾滋病病人及 HIV 感染 者的病情动态观察、临床治疗疗效考核以及 HIV 疫苗的安全性和效果鉴定等。 HIV 感染标志分为病毒标志、免疫标志和相关标志三大类。病毒标志是指直接从 HIV 感染者体内分离出病毒或检出 HIV 组成成分(抗原或核酸)。免疫标志是指 HIV 感染所产生 的 HIV 抗原、抗体等免疫物质。相关标志是指 HIV 感染后与艾滋病病情进展有密切关系的 某些标志，如 CD4 细胞、CD8 细胞，β2 微球蛋白、有关细胞因子等。这些标志的测定可 为 HIV 感染及临床疗效的考核提供极为重要的诊断、治疗和预后指征。目前 HIV 抗体的检 测是艾滋病实验室检测中最常用的方法，因为 HIV 抗体是患者感染 HIV 后最容易检出并且 持续时间最长的免疫学标志，而且抗体的检测方法大多简便、经济，易于推广应用。 在介绍各种 HIV 实验室诊断方法之前，为了使实验室工作人员能够有效地确保结果准 确、可靠、优质，我们必须对作为一种感染因子的 HIV 以及由它所导致的致命性危害有基 本的认识。实验室工作人员应特别注意病毒的结构、抗原组成，人体的免疫反应，诊断试 验的基本原理、试验结果的解释，以及为了准确而有效地提供实验诊断所必需的质量保证 措施。如果由于缺乏技术专长或基本知识而造成不正确的试验结果是不可原谅的。现将有 关内容扼要介绍如下： 一、人类免疫缺陷病毒(HIV)概述 （一） 年份 1981 艾滋病病原体的发现和命名 事 由 命 名
美国首先在洛杉矶男性同性恋中发现 5 例以 往很罕见的卡氏肺囊虫肺炎和 26 例卡波济氏 肉瘤患者，这些病人均表现有严重的免疫缺 陷，但原因不明。
1982 年将这种新的疾病命名为 “获得性免疫缺陷综合征” Acquired Immuno Deficiency
Syndrome，AIDS，即艾滋病 淋巴结病相关病毒 Lym phadenopathy Associated
1983
从艾滋病流行学资料分析很可能是由病毒引 起的。 法国巴斯德研究所 Montagnier 等首先从 多发性淋巴结病综合症病人分离到一种新的 逆转录病毒
Virus，LAV
1984
美国国立癌症研究所 Robert Gallo 等报道从艾 滋病病人活检组织分离到一种新的逆转录病 毒与其以前发现的 HTLV-1 和 HTLV-Ⅱ不同。
人类嗜 T 淋巴细胞Ⅲ型病毒 Human T-cell Lymphatropic Virus
typeⅢ，HTLV-Ⅲ AIDS Related Virus， ARV
1984
美国加州大学分离出艾滋病相关病毒

年份 1986
事
由
命
名
国际病毒分类委员会将上述病毒统一命名为 人类免疫缺陷病毒
Human Immunodeficiency Virus， HIV 新发现的病毒命名为 HIV-2， 原来 发 现 且 已 广 泛 流 行 的 HIV 称 HIV-1。
1986
Montagnier 等又从西非病人体内分离出一种 具有相似生物学特性，而致病性、抗原性及分 子生物学特征有明显差别的新病毒。
(二)HIV 病毒的形态结构、分类和分型 HIV 病毒是带有包膜的 RNA 逆转录病毒， 在分类上属于逆转录病毒科中的慢病毒亚科。 目前发现有 HIV-1 和 HIV-2 两型。 现已将 HIV-1 分为 M 组， 10 个亚型(A-J)和 O 组， 共 HIV-2 也至少有 6 个亚型（A-F） 。在我国流行的是 HIV-1，检测到的亚型有 8 种之多，其中 B 亚 型几乎见于我国各个地区，而 C 亚型主要见于我国西南和西北地区，E 亚型则多见于东南 沿海和西南边境地区。 HIV 病毒呈球形或卵圆形颗粒，直径 100-140mm，具有包膜。包膜是在病毒出芽释放 过程中获得的。从脂质膜上延伸出来的刺和园头是糖蛋白(gp)。病毒颗粒内部为核心，具有 蛋白质衣壳，里面有两个相同拷贝的核酸(RNA)和病毒的三种酶：逆转录酶(RT)、整合酶和 蛋白酶。 HIV 基因组(RNA)含有 9 个基因，可分为结构基因和调节基因。结构基因包括 gag、pol 和 env3 个，皆为调节基因。 (三)与诊断技术密切相关的 HIV 抗原 由三个结构基因编码的 HIV-1 抗原如下： 1、gag 蛋白：位于病毒颗粒内核心部位，主要有分子量为 55000 道尔顿的蛋白质(P)， 称 P55。P55 抗原是前体蛋白，在感染过程的早期产生，尔后裂解成其他核蛋白，包括 P24、 P17 和 P15 等。 2、env(包膜)糖蛋白：包膜抗原皆为糖蛋白(gp)，根据分子量分别称为 gp160、gp120 和 gp41。gp160 是前体蛋白，是在感染过程中产生的一种成份，随后裂解成 gp120 和 gp41。 gp120 是外膜蛋白，组成外膜的 72 个刺突和园头。gp41 为跨膜蛋白。二者共同参与病毒与 突主细胞 CD4 分子的粘附。 3、pol(聚合酶)蛋白质：包括 P66(RT)、P51 和 P31(整合酶或核酸内切酶)。 尽管 HIV-1 和 HIV-2 抗原之间有交叉，但它们也有各自的特异性抗原。 大多数交叉反应是由抗核心抗原的抗体所致， 因为这二种不同病毒的 gag 抗原是非常保 守的。各自的这些特异性抗原在 HIV-1 和 HIV-2 是相似的，但分子量可略有不同。例如， HIV-2 的跨膜蛋白抗原称为 gp36，而某些人则称之为 gp41，又如主要的核心抗原为 P24， 但在 HIV-2 又称 P26。 (四)HIV 感染的生物学和免疫应答
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机体感染 HIV 后，HIV 能够侵袭许多带有 CD4 表面抗原的细胞(称 CD4+细胞)，主要有 T4 淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、树状细胞和胶质脑神经细胞等。CD4 是 gp120 的受体。 由于感染 HIV，细胞表面表达大量包膜糖蛋白，可以与周围细胞发生细胞膜融合，形成多 核巨细胞。通过这种方式在细胞间播散病毒，可免受抗体的作用。HIV 感染引起 T4 细胞明 显减少的机理主要由于：1、HIV 直接杀伤 T4 细胞；2、细胞融合间接地损伤 T4 细胞；3、 HIV 感染 T4 细胞，发生抗原性变化，引起自身免疫，通过调理吞噬作用损作 T4 细胞，T4 细胞表面表达 gp120 位点处吸着特异性抗体， 通过抗体依赖细胞介导的细胞毒作用 （ADCC） 损伤 T4 细胞。另外，由于 T4 细胞免疫功能损伤，B 细胞对各种抗原产生抗体的功能也受到 影响，使整个机体免疫功能严重破坏，导致各种机会性感染性疾病的发生。T4 细胞计数是 反映临床症状的敏感信息，因此 T4 淋巴细胞总数<200/mm3 是诊断 AIDS 的重要指标。 人体能对 HIV 的侵入产生抗体应答，通常是在 HIV 感染 2-10 周内机体产生抗体。 但也 有极少数人感染数月乃至数年后仍测不出抗体，故阴性结果并不说明受检者绝无感染。绝 大多数人在感染过程中都会对各种病毒抗原成份产生免疫应答，抗体滴度可高达 1：50000， 但也可以很低。感染早期（血清阳转时）及病程后期（免疫缺陷）时，抗体滴度均较低。 低滴度抗体血清学反应较弱，如果测定方法不够灵敏，可能导致假阴性结果。值得注意的 是，并非每个 HIV 感染者对其所产生的免疫应答都完全相同。如某些人可能对 P24 有较强 的应答。如果检测试剂主要是测定抗 gp41 的抗体，它就不太可能对仅有抗 P24 和 gp120 抗 体的血清得出阳性结果。抗 gag 蛋白（P55、P24）抗体通常在感染早期即出现，抗 env 和 pol 产物的抗体同时或稍后产生。感染后至抗体出现前有段间歇期（2-6 周，可长至 3 个月） 称“窗口期” 。 大多数病毒感染者都有 IgM 抗体产生，但 HIV 感染者中似乎不完全有 IgM 应答。对于 有 IgM 抗体应答者，在窗口期检出 IgM 抗体是有益的。 HIV 基因组可整合到宿主细胞 DNA 上使机体终身带有病毒，但机体可能很多年不出现 症状，成为 HIV 无症状感染者，只是查血时发现抗—HIV 阳性。尔后，在某些因素作用下， 病毒被激活后并开始大量复制出现症状和各种合并症，则发展成艾滋病病人，HIV 病毒很 容易发生变异这是研制有效疫苗的主要困难之一。 二、HIV 实验室诊断 人体感染 HIV 后， 血液中最先出现 HIV 抗原， 然后很快消失直到疾病后期才重新出现。 几周后出现 IgM 抗体并很快消失，此后,IgG 抗体出现并一直存在。因此，HIV 感染的实验 室诊断以抗体检测为主，病毒及相关抗原的检测为辅。 抗体检测分为初筛试验和确证试验两种，初筛试验为阳性的血清必须进一步确证，确 证为阳性的方可报告为 HIV 感染阳性。 多聚酶链式反应(PCR)主要用于检测血浆中 HIV 的 RNA 含量，目前主要用于预测母亲 将 HIV 传染给胎儿的可能性以及新生儿的 HIV 感染状况。此外，尚可用于判断病人的预后 及监测抗病毒治疗的效果。
3

（一）标本收集 HIV 感染者血清标本的收集按常规方法进行， 静脉抽血， 不加抗凝剂。 标本在室温或 4℃ 冰箱静置 24 小时，待血清析出后作抗体检测。污染标本可短时间离心后取上清液作检测， 但解释结果时应慎重。 用于检测 HIV 抗原的血液样本与检测抗体的样本的处理有所不同，根据需要，血液样 本需进行核酸处理。采用定量 PCR 方法检测病毒含量时，加入肝素的血浆，检测的 RNA 含量较未加肝素的血浆样本高。 检验人员应注意自身的防护，在未证实之前，所有的标本均应当作“阳性”标本看待。 （二）HIV 抗体的初筛检测 初筛试验的要求是敏感性高， 理论上要求达到 100%， 尽可能避免漏掉可能阳性的对象， 相对来说，对特异性要求不是太严，允许有少量假阳性，这些假阳性可以通过重复试验和 确证试验排除。 HIV 抗体初筛检测的方法很多， 如酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)、明胶颗粒凝集实验(gelatine particle agglutination assay, PA)、乳胶凝集实验(latex agglutination assay, LA)、各种快速检测实验(rapid tests)、放射免疫实验(radio immunoassay) 等。这些实验使用的抗原早期是完整病毒的裂解产物，称为第一代试剂，这种抗原常常由 于含有宿主细胞的成分而出现假阳性反应，为了获得可接受的特异性而稀释标本使试剂的 敏感性也有所下降，同时这种抗原制备和纯化都比较困难，危险性大。第二代试剂使用重 组或合成多肽 HIV 抗原，选择与免疫反应相关的抗原决定簇，敏感性和特异性均有所提高， 这类抗原制备也更为安全、容易、重复性好。应该注意的是重组抗原有时由于含有载体的 组分而出现假阳性结果，多肽抗原由于缺乏合适的立体构象有可能使敏感性下降从而导致 假阴性。使用重组或合成多肽抗原制备的双抗原夹心法试剂盒常常被称为第三代试剂，这 种试剂可以检测针对 HIV 抗原的所有抗体亚类，包括 IgG、IgA、IgM、IgE、IgD，同时不 需要将标本过度稀释来保证特异性，因而具有较高的敏感性。第四代试剂除使用重组或合 成多肽抗原外还包被了 P24 抗体，可同时检测抗原和抗体。 1．酶联免疫吸附实验 酶联免疫吸附实验（ELISA）是最常见的 HIV 抗体检测方法，
它具有准确性高、价格低廉、判断结果有客观标准、结果便于记录和保存等优点，适合于 大批量标本的检测，是献血员筛选和临床诊断最常用的方法。 （1）方法和原理：使用最多的 ELISA 方法是间接法，这种方法的原理是将 HIV 抗原 包被到微孔板或其他固相载体上， 如标本中含有 HIV 抗体， 则抗体就会和固相载体上的 HIV 抗原结合，洗涤去除未结合的非特异性抗体，加入酶标记的抗人免疫球蛋白抗体与 HIV 抗 体结合，形成 HIV 抗原－HIV 抗体－酶标记的抗人免疫球蛋白抗体复合物，最后加入底物 发生酶催化的显色反应，测定光密度值(optical density, OD)，与判断标准进行比较，就可以 得出标本中 HIV 抗体是阳性或阴性的结果了。间接法使用的标记抗体通常是抗人 IgG，为 了提高敏感性有时也加入抗人 IgM。这种方法的特异性由包被于固相载体上的 HIV 抗原决
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定，相对来说特异性不高，存在非特异性问题。 另一种常用的 ELISA 方法是双抗原夹心法，将 HIV 抗原包被到固相载体上，标本中的 HIV 抗体与抗原结合形成复合物，由于抗体的双价或多价性，它同时还能与其他抗原结合， 加入酶标记的同一类 HIV 抗原分子时，后者就会与固相载体上的抗体结合，形成 HIV 抗原 －HIV 抗体－酶标记 HIV 抗原复合物，最后加入底物发生酶催化的显色反应，测定光密度 值，与判断标准进行比较，就可以得知标本中 HIV 抗体是阳性还是阴性。 还有一种 ELISA 方法是竞争法。它的主要特点是酶标记抗体是特异性的 HIV 抗体。标 本中的 HIV 抗体与酶标记 HIV 抗体竞争固相载体上的 HIV 抗原， 操作时同时加入标本和酶 标记 HIV 抗体， 如标本中的抗体浓度高， 酶标记 HIV 抗体就不能与固相载体上的 HIV 抗原 结合或结合得很少，显色反应就较弱，相反，如标本中的 HIV 抗体含量很少或没有，大量 的酶标记 HIV 抗体将与固相载体上的 HIV 抗原结合，显色反应就很强。因而在竞争法中， 光密度值与标本中的抗体含量呈负相关关系。这种方法是将标本与酶标抗体同时加入，需 时更短，另外这种方法具有较好的特异性。 （2）结果的判断：ELISA 方法是根据临界值(cut off value, CO)判断结果的。临界值是 将检测的阳性和（或）阴性对照的 OD 值代入厂商提供的计算公式计算出来的判断阳性和 性结果的界值。对于间接法和双抗原夹心法，标本 OD 值与临界值的比值大于等于 1（S／ CO≥1）为阳性；对于竞争法，标本 OD 值与临界值的比值小于等于 1（S／CO≤1）为阳 性。 2．从尿液中测抗体 尿液艾滋病病毒（HIV－1）抗体酶联免疫诊断试剂盒（CalypteTMHIV-1 尿液 EIA）是 酶免疫测定方法在体外检测尿液中 HIV－1 抗体。此法用于实验室辅助临床 HIV 感染诊断。 在确定标本 HIV－1 抗体的结果之前，根据美国疾病控制中心推荐的 HIV 抗体的诊断步骤， 此项检测重复阳性的标本，用卡里普特公司的剑桥生物 HIV－1 尿液 Western Blot 试剂盒进 行确诊。 近年与血液检查相比，尿液检查有多种优点。在尿液中一般不存在 HIV 病毒。卡里普 特公司的剑桥生物 HIV－1 尿液 Western Blot 试剂盒， 可对于尿液 EIA 重复阳性标本做确认 实验。 尿液艾滋病病毒（HIV－1）抗体酶联免疫诊断试剂盒（calypteTMHIV-1 尿液 EIA）是 利用重组的 HIV－1 表面抗原在尿液中检测 HIV－1 抗体。 微孔板的孔中包被 gp160 膜抗原。 把尿液标本或对照与标本缓冲液一起加入孔中温育。如果标本中存在 HIV－1 膜抗原的抗 体，它们将与孔中的抗原结合。标本缓冲液用来减低孔中其它蛋白及抗体对孔壁的非特异 性结合。通过洗涤去除未结合的物质。然后加入碱性磷酸酶标记的羊抗人免疫球蛋白抗体 并温育。酶联物与孔中结合到抗原的 HIV－1 抗体结合。洗涤去除未结合的酶联物，然后加 入底物（p-NPP） 。如标本中含有 HIV－1 抗体，酶将使孔内液体由无色变为黄色，颜色的 强度与标本中抗体含量成正比。反应用 EDTA 终止，用酶标仪在 405nm 处测吸收峰而读取
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结果。 试剂盒中包括阳性及阴性对照，每板应做 2 个阳性对照及 3 个阴性对照，将阴性对照 平均吸收值加 0.18 得到 cutoff 值，标本是通过与 Cutoff 值比较来判断是否为阳性或阴性。 第一次检测阳性标本应用同一标本再重复检测，如果重复检测仍为阳性，标本为重复 阳性标本。 重复阳性标本用卡里普特公司的剑桥生物 HIV－1Wester Blot 试剂盒进一步确认。 3．胶体金法检测 HIV1/2 抗体实验 胶体金法检测 HIV 抗体是一种不需要任何仪器设备的血清／血浆检测法，它利用免疫 层析分析原理来快速检测血清／血浆中是否含有 HIV 抗体，从而用于判断人体是否受到 HIV1 型／HIV2 型病毒感染。 （1）方法和原理 试剂盒采用高度特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术来定性检测血清／血浆中 是否含有 HIV 抗体，试剂盒含有被事先固定于膜上测试区（T）的重组 HIV 抗原和质控区 （C）的抗-protein A 抗体。 测试时，血标本滴入试剂盒加样孔（S）内，血标本中的 HIV 抗体与预包被在膜上的 protein A 胶体金结合物反应。然后，混合物随之在毛细管向上层析，在测试区（T）与固定 在膜上的重组 HIV 抗原反应。 如果血清中含有 HIV－1 抗体或 HIV－2 抗体， 在测试区内 （T） 会出现一条红色条带，表明是阳性结果。如果在测试区内（T）没有出现红色条带，则血清 中不含有 HIV 抗体，表明是阴性结果。无论 HIV 抗体是否存在于血清中，混合物都会继续 向上层析至质控区（C） ，质控区的抗 Protein A 与 Protein A 胶体金结合物反应出现一条红色 条带。质控区内（C）所显现的红色条带是判定是否有足够血标本，层析过程是否正常的标 准，同时也作为试剂的内控标准。 （2）结果判定 阳性（＋） ：两条红色带出现。一条位于测试区内（T） ，另一条位于质控区内（C） 。 阴性（－） ：仅质控区（C）出现一条红色条带，在测试区内（T）无红色条带出现。 无效：质控区（C）未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已变质损坏。在 任何情况下，应重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供 应商联系。 注意：由于样本中 HIV 抗体滴度的不同，测试区（T）内的红色条带会显现出不同深浅 的颜色。但是，本试剂盒的测试结果不能做为判定样本中抗体滴度高低的依据。 4. 明胶颗粒凝集试验 明胶颗粒凝集试验(PA)是一种快速的 HIV 血清抗体的检测方法。先将样品稀释，然后 加入包被抗原的明胶颗粒， 混匀后保温(一般为室温)。 由于操作方便， 且无需特殊仪器设备， 很适合于对少量标本的检测。当血清或血浆中有 HIV 抗体存在时，经 HIV 抗原致敏的明胶 颗粒与抗体发生抗原—抗体相互作用，产生肉眼可见的凝集反应。 (1) 操作方法
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① 待测血清从 1：4 开始作倍比稀释。 ② 1：8 血清稀释孔加 25μ1 非致敏粒子，1：16 血清稀释孔加 25μ1 致敏粒子。 ③ 设置阳性对照血清，使其终末滴度为 1：128。 ④ 振荡混匀，加好盖板，室温(20℃)静置 2 小时观察结果 (2)结果观察 ① 明胶颗粒沉积在孔底，周边平滑，或形成致密圆圈为阴性结果； ② 孔底呈现均匀的凝集现象，或形成一个大的边缘不整齐的圆圈，为阳性结果。 (3)注意事项 标本应为新鲜标本，无溶血。若标本与致敏粒子、非致敏粒子均出现反应，应将标本 先和非致敏粒子吸附，然后再作检测。
明胶颗粒凝集试验
孔号 待检血清 血清稀释液 未致敏颗粒 致敏颗粒 稀释度 (三)、确证（确认）试验 确证（确认）试验主要用蛋白印迹试验(Western Blot, WB)。蛋白印迹法是将 HIV 病毒 蛋白用十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶(SDS-Polyacrylamide Gel)电泳。 将分子量大小不等 的蛋白带分离开来，然后再把这些已经分离的不同蛋白带电转移到硝酸纤维膜上。将此膜 切割成条状，每一条硝酸纤维膜上均含有经电泳分离过的 HIV 病毒抗原。将待检血清样品 用稀释液稀释成 1：100，再把它直接放到硝酸纤维膜上，并静置一段时间，使其充分接触 反应，血清中若含有 HIV 抗体，就会与硝酸纤维膜条上的抗原带相结合。经过冲洗去掉未 结合的多余抗体，并加入抗人－IgG 酶结合物，洗去未结合的抗人－IgG 酶结合物，加入底 物， 即可使有反应的抗原、 抗体结合条带呈现紫褐色， 这表示阳性反应。 此法一般是在 ELISA 或其它初筛检测阳性后再用来确认。 1、 结果判断 a、膜条没有条带出现表示阴性（一） b、待检标本出现条带的色度小于弱阳性对照 gp120 带色度时表示可疑（±） 。 c、待检标本出现的条带色度相当于弱阳性照 gp120 带色度但比强阳性条带的色度弱时 表示（+） 。 d、待检标本出现的条带色度相当于或大于强阳性对照 gp120 带色度时表示（++） 。 GAG P55 ， P24， P17
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1
2
3
25μl 25μl 25μl 75μl 25μl 25μl 25μl 25μl
1：4 1 : 16 1 : 32
25μl

ENV POL
gp160, p65,
gp120, p51,
gp41 p32
(1)以上三个基因组里各出现任何一条带，而且其色度在“+”或“±”以上者表示阳性。 最近，美国 CDC 规定：在 P24，gp41,gp120/gp160 四条带中出现任何二条带者表示阳性。 (2)有一个或多个条带但不符合阳性标准者表示可疑。 (3)未出现任何条带者表示阴性。 2、注意事项： a、每次反应之间，要充分洗净。 b、反应条件是室温 20-30℃。 c、试剂条只能用镊子夹取，不能用手接触。 d、每次试验需设强阳性、弱阳性和阴性对照。 （四）检验程度 初筛试验每一次检测阴性者可报告阴性，若第一次检测阳性，则需进行复测，复测时 （最好用不同类型的试剂）可同时测定两孔，判定方法如下： 第一次检测 （-） （+） （+） （-） （-） （+） （-）/（+） 第 2 次检测 结果判定 阴性 阴性 阳性
初筛阳性的标本不能发报告，必须将血样或血袋送本省（本市）艾滋病监测检验中心 确认实验室进一步做确证试验。 确证试验阳性者， （市） 由省 监测中心给送检单位发出抗-HIV 阳性报告，同时上报卫生厅（局）和卫生部疾病控制司备案。确认试验阳性和可疑的血袋 均需送确认实验室妥善处理，绝对不能发出使用。 三、PCR 在 HIV 检测中的应用 聚合酶链反应技术(Polymerase Chain Reaction,PCR)又称无细胞分子克隆或特异性 DNA 序列体外引物定向酶促扩增技术，是近年来发展起来的一种的短时间内大量扩增特定 DNA 片段的新技术。应用该方法，可很容易地查到原先那些由于 DNA 拷贝数少而不足以检测出 来的病毒 DNA 或其它致病基因，从而大大地推动了疾病的 DNA 诊断和分子克隆基因组 DNA 工作的发展。由于该项技术可将极微量的 DNA 特异地扩增上百万倍，甚至能检测到 单分子或每 10 万个细胞中仅含 1 个 DNA 分子的样品。它是一种选择性体外扩增 DNA 或 RNA 片段的方法，其特性是由两个人工合成的引物序列决定的。所谓引物就是与待扩增 DNA 片段两翼互补的寡核苷酸，其本质是 ssDNA 片段。待扩增 DNA 模板加热变性后，两 引物分别与两条 DNA 的两翼序列特异复性。此时，两引物的 3’端相对，5’端相背。在合适 条件下，由 TaqDNA 聚合酶催化引物介导的 DNA 合成，即引物的延伸。这种实验过程是在 温度控制下进行的， 一个变性--复性--延伸的过程就是一个 PCR 循环。 PCR 就是在合适条件 下的这种循环的不断重复； 延伸的产物经第二循环变性， 亦与引物互补， 作为引物引导 DNA
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合成的新模板；因此，第二循环后延伸的模板由第一循环的 4 条增为 8 条，依此类推，以 后每一个循环后的模板均比前一个循环增加 1 倍。理论上讲 PCR 扩增 DNA 产量是呈指数 上升的。PCR 技术具有特异性强、敏感性高、快速、简便、对起始材料质量要求低等特点。 PCR 用于检测 HIV 的优点如下：1.与传统检测抗体的方法相比，其灵敏度和特异性更 高，从而对 HIV 的定量检测提供了有效的手段；2.不依赖于宿主的免疫反应，无须等到免 疫系统对 HIV 产生抗体后才能检定宿主受 HIV 感染的状态，这有利于对血清阳转以前标本 的检测和对阳性母亲所生婴儿的 HIV 感染的调查； 3.对潜伏状态的 HIV 的检测不依赖于 HIV 在宿主细胞的生长活性。综上所述，PCR 是对 HIV 核酸检测的有效手段，是对 HIV 病毒分 离、血清学抗体检测方法的必要补充。在 HIV 感染的确诊和艾滋病诊断中，核酸的检测对 病原活动的监控更加有效方便，因为核酸复制的有无和数量是体内病毒复制情况的直接反 映。多聚酶链式反应(PCR)主要用于检测血浆中 HIV 的 RNA 含量，目前主要用于预测母亲 将 HIV 传染给胎儿的可能性以及新生儿的 HIV 感染状况。此外，尚可用于判断病人的预后 及监测抗病毒治疗的效果。 四、艾滋病病原学诊断中的几个问题。 1、明确不同实验方法的意义和适应范围：HIV 血清学检测分为初筛和确证两类。初筛 实验出现的阳性结果，应再次重复实验，若仍为阳性，则应用确证实验去证实，只有确证 实验是阳性的标本方可报告为 HIV 抗体阳性。 另外， 能引起艾滋病的病毒分为两型， HIV-1 即 和 HIV-2，两型病毒间只有少部分抗原有交叉（主要是 Gag 基因编码的核蛋白） 。因而各型 病毒试剂只能有效地检测出同型病毒的抗体。 2、针对 HIV 感染不同时期选用不同的检测手段。HIV 原发感染后的两周内，用任何方 法均无法查到病毒的存在，2 周后出现病毒血症，此时可用抗原检测方法、检查病毒抗原或 测定病毒逆转录酶活性，而不能用血清学方法，因为抗体要到感染后 6-8 周才会出现。此后 就只能用抗体检测方法，直到艾滋病的出现，因为在这段时间 HIV 抗原很难从血清中查到， 待发展到艾滋病阶段时才会重新出现。 3、HIV 抗体测定的灵敏度、特异度和预测值：
表1
检验结果 有 阳性
HIV 抗体测定的灵敏度、特异度和预测值
抗体情况 无 假的 阳性(b) 真的 阴性（d） 都无抗体 (b+d) 所有阳性 试验（a+b） 所有阴性 试验（c+d） 总 计 总 计
真的 阳性（a） 假的
阴性
阴性(c) 都有抗体 （a+c）
(a+b+c+d)
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敏感性：是指在有抗体存在的标本中，检出抗体的准确性。敏感性低的试验将有许多假 阴性。 敏感性=a/a+c 特异性：是指在没有抗体存在的标本中，检测其抗体缺失的准确性。特异度低的试验将 有许多假阳性。 特异性=d/b+d 理想的是，一种试验应当具有 100%的敏感性和 100%的特异性。但实际上，没有一种 生物试验能满足这样的要求。但在敏感性和特异性最高的试验方法当中现行的 HIV 检测方 法还是可取的，在理想的实验室条件下，许多市售的 HIV 抗体试验方法的敏感性和特异性 都在 99%以上。除非由于检验人员造成人为误差，这种检验方法所固有的特性是不会出现 明显改变的。 阳性试验预测值（PPV）a/a+b 阴性试验预测值（NPV）d/c+d 试剂的敏感性和特异性可以衡量它的优劣，但并不能决定一个测定结果正确与否的可 能性大小，后者是由测定的预测值决定的。一个测定的阳性或阴性预测值，即这个阳性或 阴性的结果是真阳性或真阴性的可能性。这除与所用试剂的优劣有关外，还取决于测定对 象本身患病率的高低。如表 2 所示，一个阳性 HIV 血清检测结果的真实性，对旧金山同性 恋人群可高达 99.88%，而对正常人则为 18.94%，反之，一个阴性结果的真实性对前者不足 90%，而对后者则高达 99.997%。
表2
ELISA 法 HIV-1 抗体测定的预测值
预 测 值 阴 性
人
群 阳 性 99.88 18.94 89.06 99.997
旧金山同性恋人群 美国非高危人群
因而我们在实际检测工作中，对我国普通公民初筛试验结果阴性的预测值是非常高的, 即可初步排除 HIV 感染的可能性，而出现阳性结果，则必需慎之又慎，要严格经蛋白印迹 等确定实验证实后方可报告。相反，对来自疫区的外国人或在疫区长期居住的归国人员可 疑阴性结果，则不能轻易放过，以免因漏诊而造成严重的后果。 4、 HIV 抗体检测反应强度与 HIV 感染的概率 许多 HIV 抗体检测方法除了是一种定性实验外，还同时是一种半定量实验。这可表现 于测定不同稀释度的血清的反应性，得出阳性血清的最高稀释度，而 ELISA 方法则可根据 光密度（0D）值的强度直接确定。反应性越强的血清，含有 HIV 抗体的可能性也就越大。 例如，表 3 中的 HIV 感染率为 30/10 万的正常献血员，中等强度反应时，HIV 抗体阳性概 率仅为 1.13%，而在高强度反应时该概率则激增到 86.1%，与同样强度的来自 HIV 感染率
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极高的吸毒人群（45000/10 万）的概率相近。
表3
人 群
HIV 感染机率与 ELISA 反应强度的关系
HIV 感染率 ( /10 万) 30 95 150 45000 低 度 0.0007 0.0022 0.0036 1.91 ELISA 反应强度(%) 中 度 1.13 3.48 5.39 96.6 高 度 86.1 95.2 96.9 99.9
非高危献血员 高危献血 军 人
吸毒者 注： （1） （2）
数字表示相应强度反应的血清中含有 HIV 抗体的概率（%） ； 低度为 OD<1，中度为 16。
5、检测结果的处理，如果在 HIV 检测中发现了阳性结果，一方面应立即按国家法定乙 类传染病上报程序迅速上报。对已成年患者应通知本人，并向其说明阳性检测结果的意义 以及 HIV 感染与艾滋病之间的关系，同时还要忠告他（她）有义务不从事可将病毒传给他 的活动。另一方面，检测单位也有责任为患者保密，以使其在原来的环境中生活下去。这 不仅仅是出于对患者的人道，避免因无知而产生的歧视，同时也是有效控制艾滋病蔓延的 重要保证。可以想象，如果艾滋病病人或 HIV 感染者一经发现，就被赶出单位、学校、家 庭，还会有谁再来做检侧。这样势必会使携带 HIV 的人潜伏于社会无法被发现，艾滋病将 传播得更快、更广。
（湖北省疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心）
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全国艾滋病检测技术规范(2015年修订版)

附件1 全国艾滋病检测技术规范 National Guideline for Detection of HIV/AIDS （2015年修订版） 中国疾病预防控制中心 二○一五年十二月

全国艾滋病检测技术规范National Guideline for Detection of HIV/AIDS （2015年修订版） 中国疾病预防控制中心 二○一五年十二月

前言 艾滋病在我国的流行已数十年，随着感染者和临床病人的不断增加、感染人群的变化，艾滋病检测工作量逐渐加大，对监测和检测的需求也不断增加，承担艾滋病检测的实验室已遍及全国各级医疗、疾病预防控制、采供血、妇幼保健机构，出入境检验检疫、军队等各个系统。为了尽早发现HIV感染者和艾滋病病人，及早提供咨询、治疗，同时为适应基层艾滋病检测工作需求，在新的形势下，根据《关于艾滋病抗病毒治疗管理工作的意见》、《中国预防与控制艾滋病中长期规划（1998—2010年）》、《中国遏制与防治艾滋病十二五行动计划的通知（国办发[2012]4号）》、“四免一关怀”等国家艾滋病防治重要方针政策和十三五防治工作重点，在广泛征求各省、市疾病预防控制机构和医疗机构意见的基础上，在中华人民共和国卫生和计划生育委员会艾滋病专家及省级专家的参与下，中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心对《全国艾滋病检测技术规范（2009年版）》进行修改、增补和完善，制定出《全国艾滋病检测技术规范（2015年版）》（以下简称《规范》），使其既能满足目前艾滋病检测工作的实际需求，又能体现检测技术的发展。 本次《规范》修订工作立足于我国目前检测状况，结合发达国家使用的指南，主要对以下几个方面内容进行了修改、增补和完善：（1）完善了不同的检测策略，并将其整合为独立的一章；（2）增加了HIV-1新

水中大肠杆菌地检测方法

附件 水肠杆菌群检测方法－多管发酵法 NIEA E201.54B 一、方法概要 本方法系用以检测水中革兰氏染色阴性，不产生生孢子之杆状好氧或兼性厌氧菌，且能在35 ± 1 ℃、 48 ± 3小时发酵乳糖并产生酸及气体之大肠杆菌群（Coliform group）；在不同体积或不同稀释度之水样所 产生之结果，以「100 mL水中最大可能数（MPN/100 mL）」表示100 mL水中存在之大肠杆菌群数目。 二、适用围 本方法适用地面水体、地下水体、废水、污水及水源水质水样肠杆菌群之检验。 三、干扰 (一) 水样中含有抑制或促进大肠杆菌群细菌生长之物质。 (二) 检测使用的玻璃器皿及设备含有抑制或促进大肠杆菌群细菌生长的物质。 四、设备 (一) 量筒：100至1000 mL之量筒。 (二) 吸管：有0.1刻度之10 mL灭菌玻璃吸管或市售无菌塑料吸管，或无菌微量吸管（micropipet）。 (三) 试管：大小约150 × 15 mm之试管或有盖螺旋试管。 (四) 发酵管（fermentation tube）：大小约22 × 9 mm之玻璃管。 (五) 稀释瓶：容量约100 mL可灭菌之硼硅玻璃制品。 (六) 锥形瓶：200至2000 mL之可灭菌硼硅玻璃制品。 (七) 采样容器：容量120 mL以上无菌之硼硅玻璃瓶或无菌塑料有盖容器，或市售无菌袋。 (八) 冰箱：温度能保持在4 ± 2℃者。 (九) 天平：待测物重量大于2 g时，须能精秤至0.01 g；待测物重量不大于2 g时，须能精秤至0.001 g。 (十) 培养箱：温度能保持在35 ± 1℃者。 (十一) 高压灭菌釜：温度能维持在121℃（压力约15 lb/in2或 1.1 Kg/cm2）灭菌15分钟以上者。

HIV检测方法

HIV 实验室诊断
人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)及其相关标志的检测是预防 HIV 感染和艾滋病临床治疗中重要的环节，在艾滋病的防治工作中具有重要作用，如艾滋病的 诊断、HIV 感染的诊断、血源及器官供体的筛选、流行病学调查、艾滋病病人及 HIV 感染 者的病情动态观察、临床治疗疗效考核以及 HIV 疫苗的安全性和效果鉴定等。 HIV 感染标志分为病毒标志、免疫标志和相关标志三大类。病毒标志是指直接从 HIV 感染者体内分离出病毒或检出 HIV 组成成分(抗原或核酸)。免疫标志是指 HIV 感染所产生 的 HIV 抗原、抗体等免疫物质。相关标志是指 HIV 感染后与艾滋病病情进展有密切关系的 某些标志，如 CD4 细胞、CD8 细胞，β2 微球蛋白、有关细胞因子等。这些标志的测定可 为 HIV 感染及临床疗效的考核提供极为重要的诊断、治疗和预后指征。目前 HIV 抗体的检 测是艾滋病实验室检测中最常用的方法，因为 HIV 抗体是患者感染 HIV 后最容易检出并且 持续时间最长的免疫学标志，而且抗体的检测方法大多简便、经济，易于推广应用。 在介绍各种 HIV 实验室诊断方法之前，为了使实验室工作人员能够有效地确保结果准 确、可靠、优质，我们必须对作为一种感染因子的 HIV 以及由它所导致的致命性危害有基 本的认识。实验室工作人员应特别注意病毒的结构、抗原组成，人体的免疫反应，诊断试 验的基本原理、试验结果的解释，以及为了准确而有效地提供实验诊断所必需的质量保证 措施。如果由于缺乏技术专长或基本知识而造成不正确的试验结果是不可原谅的。现将有 关内容扼要介绍如下： 一、人类免疫缺陷病毒(HIV)概述 （一） 年份 1981 艾滋病病原体的发现和命名 事 由 命 名
美国首先在洛杉矶男性同性恋中发现 5 例以 往很罕见的卡氏肺囊虫肺炎和 26 例卡波济氏 肉瘤患者，这些病人均表现有严重的免疫缺 陷，但原因不明。
1982 年将这种新的疾病命名为 “获得性免疫缺陷综合征” Acquired Immuno Deficiency
Syndrome，AIDS，即艾滋病 淋巴结病相关病毒 Lym phadenopathy Associated
1983
从艾滋病流行学资料分析很可能是由病毒引 起的。 法国巴斯德研究所 Montagnier 等首先从 多发性淋巴结病综合症病人分离到一种新的 逆转录病毒
Virus，LAV
1984
美国国立癌症研究所 Robert Gallo 等报道从艾 滋病病人活检组织分离到一种新的逆转录病 毒与其以前发现的 HTLV-1 和 HTLV-Ⅱ不同。
人类嗜 T 淋巴细胞Ⅲ型病毒 Human T-cell Lymphatropic Virus
typeⅢ，HTLV-Ⅲ AIDS Related Virus， ARV
1984
美国加州大学分离出艾滋病相关病毒

艾滋病检测点各项管理制度

1、实验室检测工作依据国家有关法律、法规和技术标准进行。 2、质量方针：公正、科学、准确、有效。 3、技术负责人负责制定实验室的质量方针、质量目标，审批新技术、新项目的推广应用等工作。 4、质量负责人负责检查实验室业务活动的开展情况，组织实验室内部质量审核等工作。 5、实验室检测结果不受行政及任何外来因素影响。 6、所有实验室人员必须经过上岗前业务培训后持证上岗。

一、实验室工作人员必须遵守《中华人民共和国传染病防治法》、《性病管理办法》、《艾滋病管理条例》。 二、对按规定和要求检测的对象进行登记和HIV抗体初筛检测。 三、做好初筛标本的收集和检测工作，及时按要求将检测出的阳性标本送上级有关实验室复检。 四、检测出的阴性标本血清存留1年，不得擅自处理。 五、实验室实行保密制度，未经许可不得向无关人员及单位提供任何检测情况。

1、实验室人员必须严格遵守各项安全规章制度。 2、非实验室工作员工不得进入实验室。 3、检测人员必须经过培训上岗，掌握各项安全防护知识。 4、检测人员皮肤受损、患病，不得进行操作。 5、检测人员进入实验室不得佩戴首饰。 6、检测人员进入实验室必须穿隔离衣、戴手套及其它防护用具。 7、检测人员离开实验室前必须脱去隔离衣并洗手。 8、严禁在实验室内进食、饮水、吸烟和化妆。 9、对所有带入实验室的物品应事先进行安全检查。 1 0、污染或可能造成污染的物品在带进实验室前必须进行消毒。 1 1、H I V测试样品转送其它实验室时应防止对人和环境的污染。 1 2、实验室的空气、物表、器具应定期进行消毒。 1 3、发生意外事故时应立即进行紧急处理，并报告实验室负责人，根据具体情况采取相应办法。

大肠杆菌检测方法

大肠菌群及检验 、大肠菌群介绍 大肠菌群并非细菌学分类命名，而就是卫生细菌领域得用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指得就是具有某些特性得一组与粪便污染有关得细菌，这些细菌在生化及血清学方 面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37 C能分解乳糖产酸产气得革兰氏阴性 无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌与阴 沟肠杆菌等。 大肠菌群分布较广，在温血动物粪便与自然界广泛存在。调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动得场所以及有粪便污染得地方，人、畜粪便对外界环境得污染就是大肠菌群在自然界存在得主要原因。粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其她型别较多。 大肠菌群就是作为粪便污染指标菌提出来得，主要就是以该菌群得检出情况来表示食品 中有否粪便污染。大肠菌群数得高低，表明了粪便污染得程度，也反映了对人体健康危害性得大小。粪便就是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者得粪便，所 以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染得可能性，潜伏着食物 中毒与流行病得威胁，必须瞧作对人体健康具有潜在得危险性。 大肠菌群就是评价食品卫生质量得重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生

工作中。 二、大肠菌群检验方法： 由于大肠菌群指得就是具有某些特性得一组与粪便污染有关得细菌，即:需氧及兼性厌氧、在37 C能分解乳糖产酸产气得革兰氏阴性无芽胞杆菌。因此大肠菌群得检测一般都就是按照它得定义进行。 目前国内采用得进出口食品大肠菌群检测方法主要有国家标准与原国家商检局制订得行业标准。两个标准方法在检测程序上略有不同。 (一)国家标准：国家标准采用三步法，即：乳糖发酵试验、分离培 养与证实试验。 乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。 36 ± C培养48戈h,观察就是否产气。 分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36 ±1 C培养18-24h，观察菌落形态。 证实试验：挑取平板上得可疑菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36 ±1 C 培养24±2h,观察产气情况。 报告：根据证实为大肠杆菌阳性得管数，查MPN表，报告每100ml (g)大肠菌群得 MPN 值。

艾滋病(HIV)检测方法汇总

艾滋病（HIV）检测方法汇总 一、艾滋病简介 艾滋病日的概念来源于1988年，全球卫生部大臣关于艾滋病预防计划的高峰 会议上(W orld Summit of Ministers of Health on Programmes for AIDS Prevention)提 出的。从此，这个概念被全球各国政府、国际组织和慈善机构采纳。从此，这个概念被全球各国政府、国际组织和慈善机构采纳。自1981年世界第一例艾滋病病 毒感染者发现至今，短短20多年间，艾滋病在全球肆虐流行，已成为重大的公共 卫生问题和社会问题，引起世界卫生组织及各国政府的高度重视。为号召全世界人民行动起来，团结一致共同对抗艾滋病，1988年1月，世界卫生组织在伦敦召开 了一个有100多个国家参加的“全球预防艾滋病”部长级高级会议，会上宣布每年的12月1日为“世界艾滋病日” (World Aids Day) ;1996年1月，联合国艾滋病规划署(UNAIDS)在日内瓦成立;1997年联合国艾滋病规划署将“世界艾滋病日”更名为“世 界艾滋病防治宣传运动”，使艾滋病防治宣传贯穿全年。 二、艾滋病（HIV）检测方法 (一)抗体检测 主要有酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫荧光试验(IFA)。ELISA用去污剂裂解HIV或感染细胞液提取物作抗原，IFA用感染细胞涂片作抗原进行抗体检测，如果 发现阳性标本应重复一次。为防止假阳性，可做Westernblot(WB，蛋白印迹法)进 一步确证。 WB法是用聚丙烯酰胺凝胶电泳将HIV蛋白进行分离，再经传移电泳将不同 蛋白条带转移于硝酸纤维膜上，加入病人血清孵育后，用抗人球蛋白酶标抗体染色，就能测出针对不同结构蛋白抗体，如抗gp120、gp41、P24抗体，特异性较高。 快速检测法，也称为金标法，也是抗体检测的一种方法，根据免疫层析法的原理，用于HIV抗体检测的定性检测。 (二)抗原检测 用ELISA检测P24抗原,在HIV感染早期尚未出现抗体时,血中就有该抗原存在.由于P24量太少,阳性率通常较低。现有用解离免疫复合物法或浓缩P24抗原， 来提高敏感性。

艾滋病检测点标准操作规程(胶体金法)

HIV抗体检测标准操作规程（SOP文件） 1、目的： 为了规范本卫生院艾滋病检测点的正常运行，保证艾滋病抗体检测的准确，确保实验室生物安全，特制定本操作规程。 2、适用范围： 适用于本卫生院艾滋病抗体检测从标本的采集、处理、检测到报告的全过程。 3、职责： 各检测工作人员按标准操作规程进行艾滋病抗体检测，本院艾滋病检测工作领导小组负责对检测活动全过程及各项生物安全措施执行情况进行监督。 4、标准操作程序： 4.1样品的采集和处理 4.1.1样品的采集： 4.1.1.1血清样品采集：用真空采血管抽取5mL静脉血，室温下自然放置1-2小时，待血清凝固和血块收缩后在用4000rmp离心15min，吸出血清备用。 4.1.1.2抗凝血样品采集：用加有抗凝剂的真空管或用消毒注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管，反复轻摇，分离血浆和血细胞备用。 4.1.1.3采样注意事项： 4.1.1.3.1采集样品应按临床采血技术规范及试剂盒说明书要求进行。 4.1.1.3.2采集标本时应注意安全，直接接触HIV感染者或艾滋病病人血液和体液的操作应戴双层手套。 4.1.2样品的保存： 用于抗体检测的血清或血浆样品应存放与-20℃以下，短期（1周）内进行检测的样品可存放于2-8℃。 4.1.3样品的运送： 4.1.3.1实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类、采样时间。

4.1.3.2将试管放入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒。在试管的周围垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。 4.1.4样品的接收： 4.1.4.1含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训的工作人员打开，用后的包裹应进行消毒。 4.1.4.2核对标本与送检单，检查样品管有无破损及遗漏。如发现遗漏应立即将尚存留的样品移出、对样品管和盛器消毒，同时还要报告有关领导和专家。 4.2检验方法和步骤 4.2.2快速检测法（胶体金法） 4.2.2.1原理 采用胶体金免疫技术和层析原理，定性测定血清样本中的HIV1+2抗体。 4.2.2.2操作步骤 4.2.2.2.1将标本平衡至室温。 4.2.2.2.2将所需数量的测试卡从包装盒中拿出平衡至室温，打开铝箔包装袋，平置于台面上并编号（与样本编号相对应）。 4.2.2.2.3用微量加样器取试剂说明书规定的样本血清或血浆，加到测试卡的加样处。 4.2.2.2.4在试剂说明书规定的时间内观察结果。 4.2.2.3结果判定： 4.2.2.3.1阳性：在检测区和对照区位置出现两条紫红色条带。如果检测区的条带隐约可见，建议对该样本重复试验，并使用其他厂家的试剂确认。 4.2.2.3.2阴性：只在对照区出现一条紫红色条带。 4.2.2.3.3无效：对照区未出现紫红色条带。 4.2.2.3.4注意：在规定的时间内不论测试区内的色带颜色深浅与否均应判为阳性。 4.3仪器的使用和维护 4.3.1设立常用仪器的维护制度，以保证正常运转；根据使用情况更换必要的部件： 4.3.2冰箱 定期检查温度并作好记录，必须每天检查和记录冷冻和冷藏室的温度。 4.3.3定期检查其他仪器设备。 4.4 HIV抗体筛查结果的记录、解释与报告 4.4.1筛查试验呈阴性反应出具HIV抗体阴性报告。 4.4.2筛查试验呈阳性反应，可出具“HIV抗体待复检”报告，不能出阳性报告。同时应尽快进行以下处理： 4.4.2.1填写HIV抗体筛查报告，经检测者、复核者和签发者审核签字。 4.4.2.2尽可能重新采集受检者的血样。

艾滋病检测点制度(参考Word)

三十六实验室安全操作规范 1、在安排工作人员的进入实验室区域时，要根据其工作种类和所涉及的生物试剂，对实验室环境做好安全检查。 2、进入HIV或其他生物实验室应穿隔离衣、戴手套，必要时带防护眼镜，以防污染暴露的皮肤和衣物。不用带手套的手触摸皮肤、口唇、眼睛、耳朵和头发。 3、实验人员正在进行实验操作时，禁止非实验人员进入实验室。 4、实验人员在进行实验操作时，禁止做与操作无关的事。 5、实验室工作人员在处理感染性材料之后，脱去手套洗手后，方可离开实验室。 6、实验室内不许进食、喝水、抽烟、擦拭眼睛、化妆和储藏食物。 7、如接触物传人性危险大，可戴双层手套（两副）以增加保护。操作时手套破损，应立即丢弃、洗手并戴上新手套。 8、实验室的柜厨或冰箱内不允许储藏食物。 9、严禁用嘴吸加样或取样，必须使用移液器来操作实验室的所有液体。 10、利器处理需严格按照利器处理规范进行。

11、实验操作中，有感染性物质溅出后，对工作面必须及时消毒。对大量溅出的浓度高的传染物在清洁之前应用1%次氯酸钠溶液浸泡，然后戴上手套擦净。 12、对用于病原体消毒的消毒剂需要有标记。 13、感染性废弃物在移出实验室（或一次性处理）之前，必须高压灭菌消毒（121℃，15磅，30分钟）。 14、每次检测工作完毕，要对工作台面进行消毒。工作台面应当用0.1%~0.2%次氯酸或含氯消毒溶液消毒。用消毒液消毒后要干燥20min以上。 15、需要在实验室以外消毒的材料必须放在坚固的、不渗透的密闭容器进行转运。做好实验室内部的防鼠防虫工作。 三十七 HIV实验室安全防护 （一）、个人防护及保健 1、防护服 （1）艾滋病实验室应为每个工作人员配备足够的防护服，包括白大衣、隔离衣或一次性工作服。平时应将清洁的防护服置于实验室清洁区内专用存放处。 （2）离开实验室是，应脱去防护服。每次穿过的污染的防护服应及时放入污衣袋中，待消毒后方可洗涤或废弃。 （3）当含有HIV的液体（样品或病毒培养液）及有可能溅到工作人员时，应使用防渗透（如塑料）围裙。

大肠杆菌检测方法

大肠菌群及检验 一、大肠菌群介绍 大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。 大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。 大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。 大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工

作中。 二、大肠菌群检验方法： 由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，即：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行。 目前国内采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有国家标准和原国家商检局制订的行业标准。两个标准方法在检测程序上略有不同。 （一）国家标准：国家标准采用三步法，即：乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。 乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。 分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。 证实试验：挑取平板上的可疑菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。 报告：根据证实为大肠杆菌阳性的管数，查MPN表，报告每100ml（g）大肠菌群的MPN值。

国家级艾滋病哨点监测问卷(2015)-Word版

DUS调查问卷 健康调查问卷（Ⅰ） A01监测地点浙江省（自治区、直辖市）嘉兴市 强制戒毒所单位（监测对象具体征集单位） A02哨点类型DUS A03哨点所在地行政区划国标码330402 A04问卷编号□□□（001—999） A05调查日期□□□□年□□月□□日 A06样本来源①强制戒毒所√②社区③美沙酮门诊（尿检阳性者） 你好，我叫……，来自……。我们正在进行一项调查，目的是了解人们对一些健康问题的知识和行为状况。请放心，本次调查不记名，我们会对你的回答保密。我们希望你的回答是你个人的真实情况。调查大约会占用你10分钟时间，调查结束时我可以为你提供一些帮助（例如你可以咨询一些健康方面的问题，我会尽量解答）。希望你支持我们的工作。谢谢！ 询问调查对象：请问你最近是否参加过此项调查？若回答“是”则结束此次访问。 B01性别①男②女 B02出生年年 B03婚姻状况①未婚②在婚③同居④离异或丧偶 B04户籍所在地①本省②外省（请注明省）③外籍（请注明国）（跳至B06）B05民族族 B06文化程度①文盲②小学③初中④高中或中专⑤大专及以上 C01 一个感染了艾滋病病毒的人能从外表上看出来吗？①能②不能③不知道C02 蚊虫叮咬会传播艾滋病吗？①会②不会③不知道C03 与艾滋病病毒感染者或病人一起吃饭会感染艾滋病吗？①会②不会③不知道C04 输入带有艾滋病病毒的血液会得艾滋病吗？①会②不会③不知道C05 与艾滋病病毒感染者共用注射器有可能得艾滋病吗？①可能②不可能③不知道C06 感染艾滋病病毒的妇女生下的小孩有可能得艾滋病吗？①可能②不可能③不知道C07 正确使用安全套可以减少艾滋病的传播吗？①可以②不可以③不知道C08 只与一个性伴发生性行为可以减少艾滋病的传播吗？①可以②不可以③不知道 D01你目前主要使用哪种毒品?（可选一或两项） ①海洛因②可卡因③鸦片④大麻⑤吗啡⑥冰毒⑦杜冷丁⑧K粉(氯氨酮) ⑨摇头丸⑩麻古?其它（请注明） D02你曾经注射过毒品吗? ①是②否（跳至E01）③拒答 D03最近一个月，你注射过毒品吗? ①是②否（跳至D05）③拒答 D04你最近一个月平均每天注射吸毒多少次？①次②拒答 D05你曾经与别人共用过针具吗？①是②否（跳至E01）③拒答 D06最近一个月，你注射毒品时与别人共用过针具吗？①是②否（跳至E01）③拒答 D07你最近一个月注射毒品时，与别人共用针具的频率如何？ ①未共用②有时共用③每次都共用④拒答

常用的HIV诊断方法

HIV/AIDS艾滋病诊断是一个十分严肃的问题，任何诊断的错误结果无论是假阴性还是假阳性，对家庭和社会都会造成十分严重的后果。HIV检测是诊断HIV感染及艾滋病的重要实验室依据之一，要知道是否感染了HIV可以通过检测病毒的抗体、抗原、核酸或通过病毒培养来确定。常用于诊断HIV/AIDS的方法是HIV抗体检测，它是诊断HIV/AIDS的主要指标，也是世界卫生组织和我国卫生部推荐使用的HIV感染诊断方法。为了最大限度地保证诊断结果准确，HIV诊断采用特殊的检测策略，即先用敏感性高的初筛试剂进行初筛，如果阳性再用特异性强的确认试剂进行确认。检测HIV抗体常用的初筛方法有酶联免疫吸附试验(ELISA)、凝集试验和各种快速诊断方法，确认的方法有蛋白印迹法(WB)、放射免疫沉淀试验(RIP)、间接免疫荧光试验(IFA)等。一般先用ELISA做初筛试验;如果阳性，再用蛋白印迹法来确认。以下介绍一下较常用的HIV抗体测定的方法。 一．初筛试验方法 1．酶联免疫吸附试验（ELISA） 酶联免疫吸附试验简称酶标法，是最常用初筛检测方法，在HIV抗体的测定中有四种模式：间接法、双抗原夹心法、捕获法和竞争法，其中以间接法用的最多。 1）间接法：将HIV抗原纯化后固定于微孔板上，然后加入待测标本，清洗后加酶标记抗人免疫球蛋白（IgG），清洗后加入底物，产生有色反应即为阳性。（见图1） 2）双抗原夹心法：将HIV抗原固定于微孔板上,然后加入待测标本，清洗后加入酶标记的HIV抗原，清洗后加入底物，产生有色反应即为阳性。（见图2）

3）捕获法：将非特异性的兔抗人免疫球蛋白抗体固定于微孔板上，然后加入待测标本,清洗后加入酶标记的HIV抗原，清洗后加入底物，产生有色反应即为阳性。（见图3） 4）竞争法：：将HIV抗原固定于微孔板上,然后同时加入待测标本和一定数量的酶标HIV抗体，如果标本中有HIV抗体,即与加入的酶标HIV抗体竞争结合固定在微孔板上的抗原，标本中HIV抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体就愈少，清洗后加入底物。结果判断与间接法相反，产生有色反应即为阴性，无色反应的为阳性（见图4）

大肠杆菌 菌落总数检测步骤

大肠杆菌及菌落总数检测方法 为了对鸡精产品的微生物指标进行有效的控制，对微生物的检测就显的十分重要。 下面是鸡精产品的大肠杆菌及菌落总数实验检测方法。 一、大肠杆菌： 1）培养基准备（以3.5g乳糖胆盐发酵琼脂为例） 双料试管配制 A、用量杯量取加热的100ML蒸馏水（实验前需对蒸馏水进行高压灭菌处理，处理方法详见注一）。 B、用0.1g称量天平秤取7g乳糖。 C、将A、B混合均匀，并用10ml吸管各取10ml混合液分别注入三根装有小导管的试管中（此三根为双料试管，即双倍原料）。 单料试管配制 A、用量杯量取加热的100ML蒸馏水（实验前需对蒸馏水进行高压灭菌处理，处理方法详见注一）。 B、用0.1g称量天平秤取3.5g乳糖。 C、将A、B混合均匀，并用10ml吸管各取10ml混合液分别注入六根装有小导管的试管中（此六根为单料试管，即单倍原料）。 2）将配制好的试管放入灭菌锅进行115℃进行灭菌10min。3）将灭菌过后的试管放置在无菌室，常温保存一周。

4）若要对生产的样品检测其大肠杆菌，其步骤如下：A、量取灭菌后的蒸馏水225ml加温后与25g样品混合均匀。（样品需要在无菌室中，有封盖的塑料杯中进行混合） B、取三个玻璃培养皿，分别标上-1、-2、-3标记。 C、取两根新试管取9ml蒸馏水分别标为a、b。 D、用吸管吸取1ml样品液体，注入-1培养皿中，并盖上盖子。 E、用吸管吸取1ml样品液体，注入a试管中，记为-2培养基液。 F、用吸管吸取1ml a试管中的液体，注入到b试管中，记为-3培养基液。 G、用1ml吸管取样品液体分别注入3根单料试管中，用10ml吸管取样品液体分别注入双料试管中 H、用1ml吸管取-2培养试管液体，分别注入到单料试管中。 I、装好液体的试管，用试管塞封好，放到36℃±1℃的恒温培养箱中24小时培养。 J、24小时培养后，取出并用肉眼观察试管的颜色及冒气泡情况，若有其中的任意状况，说明有大肠杆菌，需要通过美兰做进一步的检测。 二、菌落总数的测定 1、取平板计数琼脂23.5g与100ml灭菌后的蒸馏水混合均

艾滋病检测方法有什么

艾滋病检测方法有什么 艾滋病这种传染病一般是通过血液啊，母乳啊或者是性传播的方式传染来的，得了这种疾病的患者一般是治愈率还是比较低的，那么我们从生活中是否也对这方面的疾病有所了解呢，多了解一些关于艾滋病的知识可以更好的进行了解，也可以减少疾病的发生，而艾滋病检测方法有什么呢，很多人都不知道，我们来了解一下啊。 一、酶联免疫吸附试验（ELISA） 目前应用的ELISA法有8种之多。它们的特异性和敏

感性超过99%。 二、颗粒凝集法（PA） PA为快速、简便的一种筛选方法。如属阳性，应经WB 证实。PA不需任何特殊仪器，其结果用肉眼可判别。全过程仅需5分钟。缺点有假阳性，且价格昂贵。 三、快速试剂

(一)人类免疫缺陷病毒(HIV)1+2型抗体诊断试剂(胶体硒法) 雅培人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂(胶体硒法)是用于体外，肉眼观察，定性的免疫分析，检测血清或血浆中的HIV-1和HIV-2抗体，用于帮助受感染个体的HIV-1和HIV-2抗体。本品仅用于无偿献血员现场初筛及临床紧急情况的使用，本品检测阳性者，需进行进一步筛查确认。 (二)InstantCHEKTM-HIVl+2金标快速诊断试剂 InstantCHEKTM-HIV1+2是一种快速、简单、灵敏的检验方法，用以检测艾滋病病毒(HIV-1和HIV-2)的抗体。该方法

适用于初筛检测，凡由该试剂测定为阳性者，需用另一种方法检测如ELISA或用蛋白印记法确定。 四、HIV-抗体确认实验 免疫印迹试验（WB）、条带免疫试验（LIATEK HIVⅢ）、放射免疫沉淀试验（RIPA）及免疫荧光试验（IFA）。国内常用的确认试验方法是WB。 (一_免疫印迹实验(westernblot，WB)是广泛用于许多传染病诊断的实验方法，就HIV的病原学诊断而言，它是首选的用以确认HIV抗体的确认实验方法，WB的检测结果常常被作为鉴别其他检验方法优劣的“金标准”。

HIV 1耐药检测技术规范

HIV-1耐药检测技术规范 1 范围 本章规定了HIV-1耐药基因型检测的实验室条件、方法、结果判定及质量控制,适用于血浆、血清和滤纸干血斑样品的HIV-1耐药基因型测定。 2 规范性引用文件 Antiretroviral drug resistance testing in adult HIV-1 infection: 2008 recommendations of an International AIDS Society-USA panel. Clin Infect Dis 47（2）: 266-85. Guidelines for the Use of Antiretroviral Agents in HIV-1-Infected Adults and Adolescents. DHHS 2008; Available at: https://www.wendangku.net/doc/0610438802.html,/guidelines. Update of the Drug Resistance Mutations in HIV-1: Spring 2008, Top HIV Med. 2008;16（1）: 62-68. 3 HIV-1耐药检测的意义 3.1 耐药监测 用于HIV-1感染人群和抗病毒治疗人群的耐药性监测和检测。用于新近感染人群的耐药性监测，了解耐药毒株流行的情况，

并采取防控措施，用于治疗前人群的监测，指导制． 定一线抗病毒治疗方案；用于抗病毒治疗人群的耐药性监测，进行HIV-1耐药发生、发展趋势以及影响因素的分析，指导和完善大规模公共卫生模式抗病毒治疗的程序，以及制定二线治疗方案。 3.2 耐药检测 用于个体患者的耐药检测。在抗病毒治疗前进行耐药检测，可指导临床医生制定抗病毒治疗方案，保证抗病毒治疗的效果；在抗病毒治疗过程中进行耐药检测，可指导临床医生分析治疗失败的原因，并制定补救治疗方案。 4 HIV-1耐药检测实验室要求 4.1 实验室功能分区 实验室原则上应分为4个独立工作区：试剂准备区、样品处理区、扩增区、扩增产物分析区，并设在不同房间。前两区为扩增前区，后两区为扩增后区。见第四章“HIV核酸检测”。 4.2 人员 进行HIV-1耐药基因型检测的人员须具有艾滋病检测实验室的上岗资格，接受过省级以上艾滋病实验室生物安全培训，须具有国家级实验操作技术培训合格证。 4.3 设施和设备 HIV根据检测项目配备相应的设施和设备。见第四章“

水中大肠杆菌的检测方法

附件 水中大肠杆菌群检测方法－多管发酵法 NIEA 一、方法概要 本方法系用以检测水中革兰氏染色阴性，不产生内生孢子之杆状好氧或兼性厌氧菌，且能在35 ± 1 ℃、48 ± 3小时发酵乳糖并产生酸及气体之大肠杆菌群（Coliform group）；在不同体积或不同稀释 度之水样所产生之结果，以「100 mL水中最大可能数（MPN/100 mL）」表示 100 mL水中存在之大肠杆菌群数目。 二、适用范围 本方法适用地面水体、地下水体、废水、污水及水源水质水样中大肠杆菌群之检验。 三、干扰 (一) 水样中含有抑制或促进大肠杆菌群细菌生长之物质。 (二) 检测使用的玻璃器皿及设备含有抑制或促进大肠杆菌群细菌生长的物质。 四、设备 (一) 量筒：100至1000 mL之量筒。 (二) 吸管：有刻度之10 mL灭菌玻璃吸管或市售无菌塑料吸管，或无菌微量吸管（micropipet）。 (三) 试管：大小约150 × 15 mm之试管或有盖螺旋试管。

(四) 发酵管（fermentation tube）：大小约22 × 9 mm之玻璃管。 (五) 稀释瓶：容量约100 mL可灭菌之硼硅玻璃制品。 (六) 锥形瓶：200至2000 mL之可灭菌硼硅玻璃制品。 (七) 采样容器：容量120 mL以上无菌之硼硅玻璃瓶或无菌塑料有盖容器，或市售无菌袋。 (八) 冰箱：温度能保持在4 ± 2℃者。 (九) 天平：待测物重量大于2 g时，须能精秤至 g；待测物重量不大于2 g时，须能精秤至 g。 (十) 培养箱：温度能保持在35 ± 1℃者。 (十一) 高压灭菌釜：温度能维持在121℃（压力约15 lb/in2或 Kg/cm2）灭菌15分钟以上者。 (十二) 高温干热烘箱：如用于玻璃器皿等用具之灭菌，温度须能保持在 160℃达2小时或170℃达1小时以上者。 (十三) 接种环：为白金或镍铬合金制，适用于细菌接种或移植，亦可使用无菌塑料制品。 (十四) p H计：精确度达 pH单位。 五、试剂 (一) 试剂水：蒸馏水或去离子水，导电度在 25 ℃时小于2 μ mho / cm（μS / cm）。 (二) 培养基，应使用市售商品化培养基。 １、硫酸月桂酸胰化蛋白胨培养基（Lauryl sulfate tryptose broth，简称LST） 1倍浓度LST培养基含有下列成份：

大肠杆菌的检验方法

大肠杆菌的检验方法 样品制备： 以无菌操作取25 g样品,放入装有225 mL稀释剂的灭菌均质杯内,于8000 r/min均质1～2min,制成1:10样品匀液(也可用灭菌乳钵研磨的方法代替)。 稀释样品匀液根据对样品污染情况的估计,用稀释剂将样品匀液制成一系列十倍递增的样品稀释液,如10**-2、10**-3、10**-4……。从制备样品匀液至稀释完毕,全过程不得超过15min。 LST和EC初步筛选： 对每个样品,选择适宜的三个连续稀释度的样品稀释液。每个稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白(月示)(LST)肉汤,每管接种1mL。将接种管置于36±1℃培养48±2h。 观察试管的产气情况：检查倒管内是否有气泡产生,用直径为3mm的接种环将所有48±2h内产气的LST肉汤管培养物移种于EC肉汤管中。将所有接种的EC肉汤管在30min内放入带盖44.5±0.5℃水浴箱内,培养48±2h。 EMB平板： 取其产气管的培养物划线接种于伊红美蓝(EMB)平板,36±1℃培养24±2h。 检查平板上有无具黑色中心有光泽或无光泽的典型菌落。

如有典型菌落,则从每个平板上至少挑取2个典型菌落；如无典型菌落,则从每个平板上至少挑取2个可疑菌落。用接种针接触菌落中心部位,移种到营养琼脂斜面上,36±1℃培养18～24h。 生化试验： 将斜面培养物移种到下列培养基中进行生化试验。 1 色氨酸肉汤：在36±1℃培养24±2h后,加Kovacs氏试剂0.2～0.3mL,上层出现红色为靛基质阳性反应。 2 MR-VP培养基：在36±1℃培养48±2h。以无菌操作移取培养物1 mL至 13mm×100mm试管中,加5％α-萘酚乙醇溶液0.6mL,40％氢氧化钾溶液0.2mL和少许肌酸结晶,振摇试管后静置2h,如出现伊红色,为VP试验阳性。 将MR-VP培养物的剩余部分再培养48h滴加5 滴甲基红溶液。如培养物变红色,为甲基红试验阳性,若变黄色则为阴性反应。 3 Koser氏枸椽酸盐肉汤：于36±1℃培养96h记录有无生长。 4 LST肉汤：于36±1℃培养48±2h,观察试管中是否产气。 5 革兰氏染色：取18h营养琼脂斜面培养物作革兰氏染色。大肠杆菌为革兰氏阴性。 大肠杆菌与非大肠杆菌生化鉴别如下：

3HIV筛查检测点作业指导书

ISO15189质量管理体系范本文件（第三册） 艾滋病筛查检测点作业指导书 文件编号：LQXFYBJY-3-HIV-01~27 第A版 编制：张海青 审核：张海青 批准：白秀静 生效日期：2015年8月1日 临朐县妇幼保健院检验科

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艾滋病筛查检测点工作制度 1.为加强对艾滋病检测点的管理，确保检验质量，提高检测水平，特制定本制度。 2.本检测点为艾滋病筛查检测点。其检测点的任务是承担本地区艾滋病病毒抗体筛查和阳性反应标本的输送。 3.检测点工作人员要加强艾滋病防治和检测技术等业务知识的学习，熟悉生物安全操作知识和消毒技术。检测人员必须接受岗前培训和复训。 4.严格执行各项操作规程，防止差错和意外事故的发生。若遇意外事故和职业暴露事件应立即处理，并立即报告有关领导和部门。 5.检测点内不准吸烟、饮水、吃零食和会客。检测点用品（包括工作服）不得用做其它用途。严格分区操作制度。 6.严格执行安全操作规程加强个人防护，工作时要带手套，穿工作服和隔离衣，必要时要戴口罩，眼镜和帽子等防护设施。 7.掌握各种仪器设备的使用方法，做好仪器设备的使用、保管和使用记录，定期对仪器设备进行维护和校准，并做好记录。 8.废弃物要分类放置，标示明显，工作完毕，要立即进行消毒处理。同时,做好工作台面和工作环境的消毒工作。 9.检测点门口应贴有生物安全标志，检测点内要保持清洁整齐，未经领导许可，谢绝参观实验室。搞好水、电等安全保卫工作。 10.搞好室内质量控制工作，严格按照规定要求做好内部质量控制和外部质量控制，绘出质控图，并积极参加上级业务部门组织的质量控制，以保证检测质量。 11.做好保密工作，妥善保管检测记录及资料，不得擅自修改和销毁，不得向无关人员或单位提供任何检测情况。 12.做好初筛阳性样品的保存和送检工作，按时完成上级和站内交给的工作任务。

艾滋病检测方法有哪些 如何检测艾滋病

艾滋病检测方法有哪些如何检测艾滋病 一提起艾滋病，很多人都会避而远之，“谈艾色变”是很多人的第一反应。一些人怀疑自己感染了艾滋病，每天生活在恐惧与压力中，苦不堪言，这是人们对艾滋病相关知识缺乏了解所致。其实，艾滋病检测并不神秘，是一种非常普通与常见的检查。 艾滋病主要的检测方法： (一)抗体检测 主要有酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫荧光试验(IFA)。快速检测法，也称为金标法，也是抗体检测的一种方法，根据免疫层析法的原理，用于HIV抗体检测的定性检测。 (二)抗原检测 用ELISA检测P24抗原,在HIV感染早期尚未出现抗体时,血中就有该抗原存在.由于P24量太少,阳性率通常较低。现有用解离免疫复合物法或浓缩P24抗原，来提高敏感性。 (三)核酸检测 用PCR法检测HIV基因，具有快速、高效、敏感和特异等优点，目前该法已被应用于HIV感染早期诊断及艾滋病的研究中。 (四)病毒分离 常用方法为共培养法，即用正常人外周血液分离单个核细胞，加PHA刺激并培养后，加入病人单个核细胞诊断及艾滋病的研究中。 艾滋病常用的检测方法： (一)酶联法 即“酶联免疫法”，简称ELISA。它的中心就是让抗体与酶复合物结合，然后通过显色来检测。步骤其实很简单：ELISA用血清来检测，首先血液要经过至少半个小时的凝集，然后取血清(这是有些网友不理解为什么医院抽完了血对血置之不理的原因，其实是误会)。将酶复合物用稀释液稀释后，加血清及阴性、阳性对照，还有就是质控品(这是严格的要求，它的范围必须在质控范围内)。经过一个小时的孵育，然后洗板，加底物，半个小时避光反应后加终止液即完成反应部分，然后就是读数。由数值来判断结果的阴性或阳性。严格的讲，如果第一次检测为阳性的话，无论是哪个实验室，必须按照CDC的HIV操作规程来进行第二次检测，第二次的方法必须与第一次的不同，如还是阳性，将送艾滋病确认实验室确认。 (二)快速法 即“金标法”，又叫“胶体金法”，金标法是国际上较为先进的灵敏，特异，快速，简便，准确率高的体外诊断方法。测定结果仅凭特制的检测试纸在短时间内即可获得。金标法(艾滋病检测试纸)，取血后滴在试纸上，用15分钟的时间观察该试纸有无颜色变化。 艾滋病快速检测法可以在家里自己检测，操作简单方便，不需要特殊的仪器，在艾滋病试纸上先滴两滴血，再滴一滴稀释液，然后等待15分钟读取结果。结果判读也很简单，如果试纸上出现一条红色的直线，说明是阴性，如果是两条红线，就是阳性。如果检测出现阳性，按照HIV检测流程，需要进行复测。 使用快速法(艾滋病试纸)进行艾滋病自我检测应该在专业人员指导下进行，以确保整个自测操作过程规范正确，结果准确可靠。 (三)蛋白免疫印迹法(WB) 艾滋病确诊实验室常用的方法，主要用于确认试验，当初筛出现阳性时，需采用此方法进行确认实验。基本原理是HIV全病毒抗原经过SDS?PAGE电泳,将分子量大小不等的蛋白带分离开来,然后再把这些已经分离的不同蛋白带电转移到硝酸纤维素膜上。将此膜切割成条状,每一条硝酸纤维素膜上均含有经电泳分离过的HIV病毒抗原。将待检血清样品用稀释液稀释成1/100,再把它直接加到硝酸纤维素膜上,恒温震荡,

艾滋病检测点上岗培训考试题目

艾滋病检测点上岗培训考试题目 姓名：单位： 1、以下那些机构不能设置艾滋病检测点（ D ） A.构村卫生所 B.乡镇卫生院 C.社区卫生服务中心（站） D. 二级以上医疗机 2、以下那些不是艾滋病检测点的职能（ D ） A.HIV抗体快速检测 B.快速检测阳性样品送上级实验室复检 C.接受上级实验室的管理 D.HIV抗体ELISA检测 3、艾滋病检测点人员要求是（ C ） A.1-2名市级以上培训人员 B.1-2名市级以上培训并获得上岗证书人员 C.1-2名市级以上培训并获上岗证书医技人员 D.1-2名省级以上培训人员 4、艾滋病检测点非必备仪器设备是（ ACD ） A.普通冰箱 B.生物安全柜 C.离心机 D.加样器（仪） 5、艾滋病检测点使用试剂应具备哪些要求（ ABD ） A.高敏感性或特异性 B.经国家食品药品监督管理局注册批准 C.批批检合格 D.在有效期内 6、以下那些机构不能设置艾滋病筛查实验室（ C ） A.县级人民医院 B.县级疾控中心 C.社区卫生服务中心（站） D.医学科研教学单位 7、艾滋病筛查实验室检测人员应具备以下哪些条件（ ABC ） A.获得省级以上培训证书 B.从事血清血检测工作2年以上 C.其中中级职称人员一名 D.本科以上学历 8、免疫层析技术中常用的标记物有（ BCD ） A.明胶颗粒 B.胶体金 C.胶体硒 D.A蛋白 9、常用的快速检测技术有（BCD ） A.明胶颗粒凝集试验 B.免疫层析（硒标） C.免疫层析（金标） D.免疫渗滤 10、HIV快速检测中使用的抗原一般是（ ABE ） A.GP160 B.GP120 C.GP41 D.P24 E GP36 11、免疫层析检测艾滋病抗体，可以使用的标本有（ABCD ） A.新鲜血浆 B.新鲜血清 C.抗凝全血 D.无抗凝处理全血 12、明胶颗粒试验检测艾滋抗体时要注意哪些问题（BC ） A.后带现象 B.前带现象