龙血素! 抑制大鼠背根神经节细胞辣椒素诱发的电流反应

大鼠胰岛细胞原代培养

大鼠戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后,无菌取出胰腺,置于4℃Ｈａｎｋｓ液中,用眼科小剪刀将胰腺剪成1ｍｍ3大小的组织块,加入0.5ｇ·Ｌ-1胶原酶,37℃恒温水浴振荡消化15ｍｉｎ,将已消化至细颗粒状组织吸出,并用大量4℃Ｈａｎｋｓ液终止消化,余下未消化完全的组织加入少量37℃Ｈａｎｋｓ液,用粗口径吸管轻轻吹打,直至大部分组织被消化成细颗粒状,用大量4℃Ｈａｎｋｓ液终止消化。混合前后两部分的消化产物,用Ｈａｎｋｓ液低速离心洗涤3次后,将组织置于含100Ｕ·ｍｌ-1青霉素,100ｍｇ·Ｌ-1链霉素,11.1ｍｍｏｌ·Ｌ-1葡萄糖,10ｍｍｏｌ·Ｌ-1Ｈｅｐｅｓ和7%的胎牛血清的完全ＲＰＭＩ1640培养液中,用150目(108μｍ)尼龙筛网过滤,以除去未被消化的组织和结缔组织。将已分离好的胰岛细胞和细胞团,置于含上述培养液内的培养瓶内培养。24ｈ后,吸出未贴壁的细胞悬液,低速离心以收集细胞,显微镜下计数后,以每孔一定数量胰岛细胞团接种于24孔细胞培养板内,继续培养48ｈ后用于实验。 我分离胰岛细胞后,用DTZ染色,发现溶液中含有许多小颗粒,放入温箱中也未发生变化,镜下观察没有看到文献中所说的红染细胞。我是将100mg双硫腙粉末溶于10mlDMSO中，用滤纸过滤，用时用KRBB缓冲液稀释100倍。胰岛细胞分离是将成年大鼠胰腺用胶原Ⅴ酶消化后，过150目网取滤过液，再过400目网取网上细胞，加入L-DMEM培养。方法是我根据文献稍作改动后实施的。胰岛细胞分离和染色对于我都是第一次做，请高手指点一下。 溶液中如果有紫黑色小颗粒，那就是DTZ，过滤除的不净。没有红染的细胞就是没有胰岛啊。还有，我总觉得150目太密了，很多胰岛都滤不过去吧 大鼠胰岛细胞原代培养 一周龄Wistar大鼠，断颈处死，于75%乙醇浸泡15分钟，无菌取出胰脏，于冰冷无菌D-Hanks液中漂洗，用眼科剪仔细清除脂肪、包膜、血管等胰外组织，转入青霉素小瓶中，加入少量无菌D-Hanks液，用眼科剪剪成0.1-1.0mm3大小的碎片，用滴管轻轻吸出上层细小脂肪碎块和油滴，再用无菌D-Hanks液反复清洗8~10次，加入10倍体积无菌消化酶液[胰蛋白酶-胶原酶消化液：0.05g胰蛋白酶(Sigma)，0.025g Ⅴ型胶原酶(Sigma，663U/mg)，0.05g葡萄糖，溶于100 mL无Ca2+、Mg2+的0.01mol/LPBS（pH值为7.4）溶液，用0.22μm微孔滤膜滤菌]，38℃±1℃消化，消化过程中不断震荡，10分钟后吸出上面酶液弃去，用无菌D-Hanks液将组织块清洗2~3次，加入新鲜酶液继续消化，重复上述步骤。此时组织块边缘模糊，再将组织块浸入消化酶液中，38℃±1℃消化10分钟，将消化酶液与组织块分开，组织块重新加入新鲜消化酶液进行消化；而原消化酶液1500rpm离心10分钟，取沉淀即为消化下的细胞，重新用无菌D-Hanks 悬浮，离心，重复1~2次，再用培养基洗2~3次，用培养基悬浮即得细胞悬液；将消化过的组织块重复消化5~6次至组织块消化完全，重复以上操作，合并几次所得细胞悬液，计数，调整细胞浓度为2×105个细胞/mL，将细胞悬液接种于24孔塑料培养板中，每孔1mL，置于37℃，5%CO2，饱和湿度培养箱中培养。由于成纤维细胞贴壁要比胰岛细胞迅速，接种15小时后，轻轻振荡培养板，将上面未贴壁的细胞接入新的培养板中，可除去部分成纤维细胞。将新培养板中细胞培养48小时后，换新鲜配置的含有2.5ng/mL 的碘乙酸的培养基培养5小时，可除去绝大部分成纤维细胞，而胰岛细胞不受伤害，换不含碘乙酸的培养基洗2次，并换不含碘乙酸的培养基在37℃，5%CO2，饱和湿度培养箱中培养，每隔3天换培养液，获得单层胰岛细胞， 胰岛细胞移植的研究进展 人类至今已有100多年用移植方法治疗糖尿病的历史，胰岛细胞移植治疗糖尿病存在两个障碍：组织来源不足和免疫排斥反应。 一．胰岛细胞的来源

辣椒常见病虫害及防治措施

辣椒常见病虫害及防治措施 辣椒常见病虫害及防治措施 病虫害是制约辣椒丰产的一大障碍。辣椒主要病虫害有：青枯病、疮痂病、病毒病、黄萎病、疫病、炭疽病、软腐病、菌核病、灰霉病、绵疫病等10种。 一、病毒病 1.症状。植株矮化、叶片深绿、皱缩、蕨叶状；或呈叶脉失绿变黄的花叶；果实有凹陷褐色条斑。 2.防治。清除辣椒地周围杂草。全生育期都要重视防蚜虫。发病前要用20%病毒A500～700倍液，或1.5%植病灵1000倍液喷苗，秋茬辣椒还要特别注意遮阴防雨及前期灌水降温。 二、黄萎病 1.症状。是危害棚室较严重的病害。病菌在土壤里从根部伤口侵入。植株半边叶片中午天热时萎蔫，逐渐变黄。也有整株萎蔫枯黄而死，维管束褐色的。 2.防治。每667平方米用50%多菌灵1.5千克，定植时按1：50配成药土穴施。缓苗后用50%托布津500倍液，加50%多菌灵800倍液混合灌根。 三、疫病 1.症状。幼苗发病时，在茎基部出现水浸状暗绿色软腐、苗倒伏。叶片病斑暗绿色、病健分界明显，扩展快。 2.防治。种植适宜的抗病品种。实行3年以上的液，每次打药除喷叶正背面和茎秆外，还要使药流入根部，并喷雾所有裸露的株间地面。 四、炭疽病 1.症状。果实表面初生水浸状黄褐色病斑，扩大成长园形或不规则形，凹陷，有稍隆起的同心轮纹，病斑边缘红褐色。潮湿时，病斑上产生浅红色粘稠物质。 五、灰霉病

1.症状。幼苗初期子叶先端变黄后扩展到幼茎，缢缩变细、折倒。茎初期水渍状不规则病斑，后变褐色至灰白色，病斑扩展到绕茎一周时，其上端枝叶萎蔫枯死，潮湿时病部表面长有灰色霉状物。 2.防治。加强田间管理，通风降湿，防冻保温。春茬辣椒用生长素抹花或喷花时，在每千克生长素药液中加1克速克灵或农利灵。 六、绵疫病 1.症状。主要危害果实。发病初期果面出现水渍状园斑，以后逐渐扩大，最后遍及整个果实。病部稍凹陷，呈黄褐色到暗褐色。 2.防治。选用抗病品种避免连作。防止秋后积雨，及时除病果。 七、菌核病 1.症状。在苗期茎基部出现水渍状病斑后变为棕褐色。潮湿时长出白棉絮状菌丝，软腐，若干燥茎部收缩呈立枯状而死。 2.防治。喷洒杀菌剂：40%菌核净可湿性粉剂1500～2000倍液；50%速克灵可湿性粉棘剂1500～2000倍液；50%托布津可湿性粉剂400倍液。每10天喷药一次，共2～3次。 八、青枯病 1.症状。青枯病又称细菌性枯萎病。从株高30厘米开始叶片萎蔫下垂，夜间暂时恢复，以后全株枯死。近地面茎内（维管束）变为褐色用手挤压有污白色粘液溢出。 2.防治。实行三年以上轮作制度。发病严重地，结合整地，增施消石灰调整土壤酸碱度呈微碱性。 九、疮痂病 1.症状。又称细菌性斑点病。叶上初呈水浸状黄绿色小斑点后为不规则形，边缘隆起暗褐色，中间凹下淡褐色，表面粗糙，叶缘、叶尖变黄、干枯脱落。 2.防治。播种前对种子进行消毒处理。发病初期可用1∶1∶200倍波尔多液。或农用链霉素或新植霉素4000倍液；或用50%琥胶肥酸铜400倍液喷雾，每隔7～10天喷1次，连喷2～3次。 十、软腐病 1.症状。主要危害果实。初在果实上产生水浸状暗绿色病斑，逐渐变褐色，随后果实腐烂发臭。

小鼠脑动脉血管平滑肌细胞使用说明

小鼠脑动脉血管平滑肌细胞 小鼠脑动脉血管平滑肌细胞产品说明： 为使能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。 派瑞金提供的小鼠脑动脉血管平滑肌细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。研发的小鼠脑动脉血管平滑肌细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。 同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。 小鼠脑动脉血管平滑肌细胞注意事项： 1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。 2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。 3. 请用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。 4. 建议收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。 5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。 小鼠脑动脉血管平滑肌细胞其他相关小鼠原代细胞： 小鼠小肠粘膜上皮细胞小鼠大隐静脉平滑肌细胞 小鼠肺微血管内皮细胞小鼠冠状动脉平滑肌细胞 小鼠肺血管平滑肌细胞小鼠大隐静脉内皮细胞 小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞小鼠冠状动脉内皮细胞 小鼠气管上皮细胞小鼠骨细胞 小鼠气管平滑肌细胞小鼠滑膜细胞 小鼠肺成纤维细胞小鼠骨骼肌细胞 小鼠支气管上皮细胞小鼠表皮细胞 小鼠支气管成纤维细胞小鼠真皮成纤维细胞 小鼠肺大静脉平滑肌细胞小鼠破骨细胞 小鼠肺大动脉平滑肌细胞小鼠皮肤肥大细胞

胚胎大鼠背根神经节摘取方法的研究

５９６ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｕｄｉｏｌｏｇｙａｎｄＳｐｅｅｃｈＰａｔｈｏｌｏｇｙ２０１０．Ｖｏｌ１８．Ｎｏ．６?技术与方法? 胚胎大鼠背根神经节摘取方法的研究’ 王士杰１黄畸辉１雷雳１王鸿１范尔钟’李颖 【摘要】目的探讨一种简便、快速、高效摘取胚胎大鼠背根神经节的方法。方法分别采用先剪除头部、四肢、腹部，后打开椎管的传统方法和直接固定打开椎管的方法摘取胚胎大鼠背根神经节，计算两种方法的用时和获得的神经节数量，并进行统计学比较。结果采用传统方法，每只胎鼠平均用时２９．２０±１．６１ｍｉｎ，平均获得２０．４０±１．１７个神经节，每分钟可获得０．６８士０．０２个神经节，每个神经节平均用时１．４４±０．０１ｍｉｎ；采用直接固定打开椎管法，每只胎鼠平均用时２４．１０士１．６３ｍｉｎ，平均获得３０．５０２＝０．９７个神经节，每分钟可获得１．２３士０．０３个神经节，每个神经节平均用时０．７９±０．０１ｍｉｎ，两种方法间的上述各项指标比较，差异均有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０１）。结论直接固定打开椎管法能在更短时间内获得更多数量的背根神经节，操作简单，可为细胞培养奠定良好的基础。 【关键词】背根神经节；椎管；摘取 ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６—７２９９．２０１０．０６．０２２ 【中图分类号】Ｒ７６４．４【文献标识码】Ａ【文章编号】１００６—７２９９（２０１０）０６—０５９６－－０２ 背根神经节（ｄｏｒｓａｌｒｏｏｔｇａｎｇｌｉｏｎ，ＤＲＧ）又称脊神经节，是躯体和内脏感觉的初级中枢，富含感觉神经元…。动物实验研究结果表明［ｚ］，将背根神经元植人耳蜗后，可以替代受损的感觉上皮并与螺旋神经节细胞形成连接，具有初步的传导功能，这为临床治疗感音神经性聋带来了希望。但采用文献报道［３。１的传统摘取方法，操作难度相对较大，获取神经节数鼍相对较少。本研究探索了一种快速简便、实用性更强、效果更佳的背根神经节摘取方法，为神经元的体外培养和耳蜗移植研究奠定基础，现介绍如下。 １材料与方法 １．１手术器械与动物Ｏｌｙｍｐｕｓ体视显微镜１台、组织镊１把、组织剪１把、蚊式钳１把、游丝镊２把、眼科剪一把、直径１０ｃｍ培养皿１个、与培养皿面积相符的硅胶１块、注射针头４个、怀孕１７～１８天的Ｗｉｓｔａｒ大鼠４只（共有胚胎大鼠５０只）。 １．２方法 １．２．１胚胎大鼠的获取将怀孕１７～１８天的Ｗｉｓｔａｒ大鼠放入装有乙醚的容器中进行麻醉。待麻醉成功后颈椎脱臼快速致死。在大鼠下腹部“Ｔ”型剪开皮肤及皮下组织，含有胚胎的“Ｙ”型子宫显露，剪开子宫及胎膜。取出胚胎大鼠。实验分次进行．共使用４只孕鼠。获得了５０只胚胎大鼠。分别以传统方法和新方法各对２５只胚胎大鼠摘取背根神经节。１．２．２传统方法摘取胚胎大鼠背根神经节剪除胚胎鼠的头部、四肢以及腹部，获取胚胎鼠的脊柱，然后将脊柱放入培养皿内，在体视显微镜下打开椎管及摘取神经节。首先去除 ＊国家自然科学基金项目（３０７７２４０６）；国家。十五”科技攻关项目（２００４ＢＡ７２０Ａ１８—０２）；国家。十一五”科技支撑计划（２００７ＢＡｌｌ８８１２） ｌ首都医科大学附属北京同ｆ二医院北京市耳鼻咽喉科研究所 耳鼻咽喉头颈科学教育部重点实验室（首都医科大学）（北京 １００００５） 通讯作者：黄丽辉（Ｅｍａｉｌ：ｈｌｉｈｕｉ８９＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｒｎ）脊柱背侧的皮肤及皮下组织，显露椎骨。然后用游丝镊轻轻逐个离断椎弓，暴露椎管及脊髓。最后小心牵起脊髓，神经节从椎问孔被带出，然后逐个摘取（图１）。 圈ｌ传统方法摘取背根神经节方框内为背根神经节，黑色箭头所指为脊髓，黄箭头所指为椎骨 图２直接固定打开椎管取出脊矗后蓝箭头所指为神经节．黄箭头所指为椎骨 １．２．３直接固定打开椎管法摘取胚胎大鼠背根神经节将胚胎鼠按俯卧位直接放于培养皿内的硅胶上，用注射针头固定其四肢。首先用眼科剪沿胚胎大鼠的背部正中线剪开皮肤（从尾椎至颈椎），用游丝镊小心向两侧分离皮肤，使椎骨暴露，椎管轮廓清晰可见。然后将胚胎鼠移至体视硅微镜下，用眼科剪沿椎管走向从尾椎至颈椎剪开椎骨，使脊髓充分暴露。然后用游丝镊轻轻将脊髓取出，清理剩余的脊膜组织，再用眼科剪修剪椎骨。扩大开口，使圆形或椭圆形神经节完全暴露。最后用游丝镊从椎间孔内将神经节逐个取出（图２）。１．２．４统计学方法分别计算两种方法的用时和摘取的神经节数量。用ＳＰＳＳ统计软件。以ｔ检验分析两组之间的差异，Ｐ＜Ｏ．０５为有显著性差异。 ２结果 两种方法摘取每只胎鼠平均用时、每只胎鼠平均获得的神经节数量、每分钟获得的神经节数星和每个神经节用时见表１，町见直接固定打开椎管法摘取每只胎鼠的平均用时及摘取每个神经节平均用时比传统方法短，每只胎鼠获得的神经节数量及每分钟获得的神经节数量多于传统方法，差异有 统计学意义（Ｐ＜０．０１）。

辣椒苗期主要病害及其防治

辣椒苗期主要病害及其 防治 文档编制序号：[KKIDT-LLE0828-LLETD298-POI08]

辣椒苗期主要病害及其防治 一、猝倒病防治方法： ①建立无病苗床。选择地势高，排水方便，无病原的地块建苗床。床土选用无病新土，肥料用腐熟的。使用旧苗床，则床土和苗床四周均应消毒。②加强苗期管理。播种时适当稀播，子叶展开后及时间苗。正常天气要加强苗床通风，晴天中午前后揭去全部覆盖物，让秧苗直接晒太阳，使之生长健壮。适当节制浇水，降低床内湿度。冷天作好防寒保温工作。发现病苗及时拔除，立即用生石灰∶草木灰1∶10的比例配成黑白灰撒入苗床。③药剂防治。出现少数病苗时，立即喷64%杀毒矾可湿性粉剂600倍液，75%百菌清可湿性粉剂1000倍液，或40%疫霉灵200倍，或用铜铵合剂400倍液喷洒。苗床湿度大时，不宜再喷药水，而可用甲基托布津或甲霜灵等粉剂拌草木灰或干细土撒于苗床上。 二、.立枯病防治方法： 加强苗期管理，防止苗床内出现高温、高湿状态。增施磷钾肥，增强秧苗抗病力。苗床床土消毒可用50%福美双可湿性粉剂。发病初期可喷洒20%甲基立枯灵乳油1000倍或36%甲基硫菌灵悬浮剂500倍液，也可喷5%井岗霉素1500倍液等。一般每7天喷一次，连喷二、三次。当苗床同时出现猝倒病和立枯病时，可喷%普力克水剂800倍加50%福美双粉剂500倍的混合液。或用绿亨1号（95%恶霉灵）4000倍液浇灌。 三、.灰霉病防治方法： ①农业防治。加强苗床、栽培棚室的通风，降低里面的湿度。适当控制浇水，浇水应在上午进行，以便排湿，减少夜间结露。做好田园清洁，及时清除病叶、病枝、病果，集中烧毁或深埋。提倡深沟高畦、窄畦，覆盖地膜栽培，以利于降低湿度；不过份密植；增施磷钾，增强抗性。②药剂防治。发病初期及时喷药。可用50%的速克灵可湿性粉剂

小鼠血管平滑肌细胞原代培养方法的改良解读

小鼠血管平滑肌细胞原代培养方法的改良 [ 08-10-30 13:48:00 ] 作者：吴建芳编辑：studa20 【摘要】目的建立一种简单方便但高效的血管平滑肌细胞原代培养方法。方法改良酶消化法。结果用该法培养细胞传代生长快，细胞纯度达98% 以上，足以满足各种细胞试验需求。结论与传统方法相比该法简单经济，试验成功率高，节省材料和时间，而且可获得更多纯度较高的细胞。吴建芳（1972～），女，汉族，青海籍，副教授，硕士 【关键词】小鼠动脉血管平滑肌细胞原代培养 Abstract Objective To create a simple and effective primary culture methods for mouse vascular smooth muscle cells (VSMC). Methods Reformed enzymatic digestion. Results VSMC was grown well and fast, the purity is more than 98% which can meet various cell tests. Conclusion Comparing with traditional methods , this approaches can save much time and more materials, also have better cell quantities and purity. Key words Mouse Aorta VSMC Primary cult 在心血管疾病的基础研究中，对血管平滑肌细胞生物特性的研究是极其重要的一部分，其对揭示血管病变机理至为关键。体外培养平滑肌细胞是常用试验模型，近年来随着细胞培养技术的发展，原代培养的成功率有所提高，但仍然存在许多问题，经验不足者往往要花费大量时间、精力去摸索，不但影响试验进程而且浪费材料，而有些组织材料是极为昂贵且很难获得的，所以为了提高平滑肌细胞原代培养的成功率，并在有限的材料下获得好的结果，我们大胆采用了酶消化法（常规采用组织块培养法），从取材方法及消化步骤等方面进行了改良，试验结果证实该法简单经济，成功率高，细胞生长快，纯度高，现介绍如下。 1 材料与试剂 1．1 组织来源：C57BL/6J小鼠(鼠龄8周以后)主动脉。 1．2 试剂：鼠抗SMC-α -actin ,Cy2 conjugated affinity purified anti-mouse IgG［H/L］，戊巴比妥钠注射液。 1．3 培养基：在DMEM 培养基中添加１５％胎牛血清、１％青霉素、链霉素、１％谷氨酰胺，过滤除菌备用（不要超过四4周）。 1．4 酶消化液：Collagenase TypeⅡ 7 mg 溶于5 ml DMEM 培养基中(无血清)，过滤除菌即用。

新生大鼠背根神经节神经元的分离、培养及鉴定

新生大鼠背根神经节神经元的分离、培养及鉴定 张雨尧;梁宸;胡学昱 【期刊名称】《医药前沿》 【年(卷),期】2015(000)021 【摘要】目的：建立一种简单、稳定、高效的新生大鼠背根神经节神经元原代培养方法。方法：摘取新生24h SD大鼠背根神经节，采用0.25%胰酶和0.1%Ⅳ型胶原酶消化，制成单细胞悬液，接种于Neurobasal/B27无血清培养液中。将培养3d的DRGn于倒置相差显微镜下进行形态学观察，扫描电镜行细胞形态学检测，应用β-tubulinⅢ进行免疫细胞化学染色，鉴定细胞纯度。结果：体外培养的背根神经节神经元生长状态良好，纯度可达到(92±6)%。结论：本实验方法简单、稳定、高效，可以获得高纯度的背根神经节神经元。%Objective To establish an simple, efficient, reliable method for the purification culture system of dorsal root ganglion neurons derived from new born rats.Methods Dorsal root ganglions harvested from new born SD rats were digested with the mixture of trypsin and collegoneaseⅣ, then turned into single cel l suspension and plated in neuralbasal media. The purified rate was evaluated according to cell count and β-tubulinⅢ immunocytochemistry stain.Results Cultured dorsal root ganglion cells could survive healthily. The purification rate of neurons was(92±6)%.Conclusion The method, which is used for culture and purification of DRGn, is a simple, efficient and reliable way. Using it could obtain highly purify neurons.

大鼠二型糖尿病造模方法

大鼠二型糖尿病造模方法 Prepared on 22 November 2020

大鼠2型糖尿病模型建立方法讨论 专业：药理班级：六班姓名：刘畅学号：150517 摘要：据国际糖尿病联合会（InternationalDiabetesFederation，IDF）估计，现在全球约%的成年人患有糖尿病。到2035年，该病患者人数预计会上升至亿。在2013年，全球约有亿成年人患有糖尿病，中国的糖尿病患者人数居全球之首，调查统计人数为亿。糖尿病导致约510万人死亡，平均大约每6秒钟就有1人死于糖尿病。2012年1月9日，中国健康教育中心公布的“中国慢病监测及糖尿病专题调查”结果显示，我国18岁及以上居民糖尿病患病率为2。6%，60岁以上老年人患病率高达%。因此，为治疗糖尿病建立简单、稳定、经济的动物模型非常重要。因2型糖尿病患者人数占糖尿病患病人数的90%以上，本文主要综合讨论高糖高脂饲料联合链脲佐菌素大鼠2型糖尿病模型的建立方法和注意事项。得出结果为：使用体重在190g~240g之间的雄性SD大鼠，通过连续两次腹腔注射小剂量链脲佐菌素并辅以去抗氧化剂处理，合理饲养并通过尾静脉采血方法建立的2型糖尿病模型较理想。 关键词：2型糖尿病，SD大鼠模型，链脲佐菌素STZ， 糖尿病（diabetes）是一种以胰岛素分泌缺陷和胰岛素作用不足所致的以高血糖为特征的葡萄糖、蛋白质、脂质代谢紊乱的综合征，基本治疗方案包括饮食治疗、运动治疗、药物治疗、糖尿病监测及糖尿病教育。病因主要有遗传因素、病毒感染、肥胖等，临床表现为“三多一少”即多尿、多饮、多食和体重减轻。长期的高血糖最终会引起很多严重的并发症，包括心脑血管疾病、糖尿病神经病变、糖尿病视网膜病变，糖尿病肾病、糖尿病足、感染、糖尿病酮症酸中毒、高渗性昏迷等[1]。 糖尿病分为1型糖尿病（Type1diabetes）和2型糖尿病 （Type2diabetes）两种，1型患者因自身免疫β细胞破坏所致，每日胰岛素分泌量非常少，空腹基值及糖刺激后峰值均明显低于正常值，表现为绝对分泌不足。2型糖尿病细分为两类：体重正常患者胰岛素分泌量低于正常人，糖刺激后峰值低并且延迟出现；肥胖糖尿病人胰岛素分泌量大于正常人，空腹基值和糖刺激后高峰明显高于正常人，但延迟出现，因此，表现为相对性胰岛素分泌不足且释放反应迟钝。胰岛素分泌不足的原因可能为：遗传因素、自身免疫、胰岛素拮抗。糖尿病患者中约有90%～95%属于2型糖尿病。 2型糖尿病，即非胰岛素依赖型糖尿病（non-insulin-dependentdiabetesmellitus，NIDDM），根据体重可分为肥胖和不出现肥胖两

辣椒苗期主要病害及其防治

辣椒苗期主要病害及其防治 一、猝倒病防治方法： ①建立无病苗床。选择地势高，排水方便，无病原的地块建苗床。床土选用无病新土，肥料用腐熟的。使用旧苗床，则床土和苗床四周均应消毒。②加强苗期管理。播种时适当稀播，子叶展开后及时间苗。正常天气要加强苗床通风，晴天中午前后揭去全部覆盖物，让秧苗直接晒太阳，使之生长健壮。适当节制浇水，降低床湿度。冷天作好防寒保温工作。发现病苗及时拔除，立即用生石灰∶草木灰1∶10的比例配成黑白灰撒入苗床。③药剂防治。出现少数病苗时，立即喷64%杀毒矾可湿性粉剂600倍液，75%百菌清可湿性粉剂1000倍液，或40%疫霉灵200倍，或用铜铵合剂400倍液喷洒。苗床湿度大时，不宜再喷药水，而可用甲基托布津或甲霜灵等粉剂拌草木灰或干细土撒于苗床上。 二、.立枯病防治方法： 加强苗期管理，防止苗床出现高温、高湿状态。增施磷钾肥，增强秧苗抗病力。苗床床土消毒可用50%福美双可湿性粉剂。发病初期可喷洒20%甲基立枯灵乳油1000倍或36%甲基硫菌灵悬浮剂500倍液，也可喷5%井岗霉素1500倍液等。一般每7天喷一次，连喷二、三次。当苗床同时出现猝倒病和立枯病时，可喷72.2%普力克水剂800倍加50%福美双粉剂500倍的混合液。或用绿亨1号（95%恶霉灵）4000倍液浇灌。 三、.灰霉病防治方法： ①农业防治。加强苗床、栽培棚室的通风，降低里面的湿度。适当控制浇水，浇水应在上午进行，以便排湿，减少夜间结露。做好田园清洁，及时清除病叶、病枝、病果，集中烧毁或深埋。提倡深沟高畦、窄畦，覆盖地膜栽培，以利于降低湿度；不过份密植；增施磷钾，增强抗性。②药剂防治。发病初期及时喷药。可用50%的速克灵可湿性粉剂1500～2000倍液；50%朴海因可湿性粉剂1000～1500倍液；25%多菌灵可湿性粉剂400～500倍液；75%百菌清500倍液。每隔7～10天喷一次，共2～3次。40%施佳乐悬浮剂800～1000倍液对灰霉病有

人脑血管平滑肌细胞培养

1100 Human Brain Vascular Smooth Muscle Cells 人脑血管平滑肌细胞 血管平滑肌细胞是许多动脉疾病的细胞水平的根源。血管平滑肌细胞的加速生长潜能是血管疾病进展的关键因素。最新研究表明血管平滑肌细胞表达的ICAM-1 和VCAM-1能促进血管壁的炎症反应，并且与血管疾病的发展及稳定性有关.人血管平滑肌细胞的体外培养是血管研究中的重要模型，并将对血管疾病的药理学和治疗研究提供大量信息. 细胞培养说明 注意：冷冻保存的细胞非常脆弱。将小瓶置于37°C水浴，然后尽快移入培养物中，尽量减少操作。 经过以下步骤后开始培养细胞 1.准备多聚赖氨酸包被的培养瓶(2μg/cm2，推荐用T-75的培养瓶)。向T-75瓶内加入10ml 无菌水，然后加入15μl多聚赖氨酸原液(10mg/ml,ScienCell cat. no. 0413).将培养瓶放入培养箱中过夜(至少在37°C中过一小时) 2.准备完全培养基：用70%的酒精为培养基和添加物的外表面消毒，然后放到无菌的地方。在无菌环境下打开每一个添加物小管并用吸管加入到基本培养基中。用培养基冲洗每一个小管以保证添加物全部加入基本培养基中。 3.用无菌水冲洗多聚赖氨酸包被的培养瓶两次并向瓶内加入20 ml完全培养基。将培养瓶放入超净台中，然后融化细胞。 4. .将小瓶放入37°C水浴中，轻轻地握住并旋转小瓶直到完全融化。将小瓶立刻移出水浴，擦干，用70%的酒精冲洗小瓶，然后放到无菌环境中。小心地打开盖子，注意手指不要碰到里面。用1ml eppendorf吸管轻轻重悬管内容物。 5.将管中内含物放入均匀的，多聚赖氨酸包被的培养瓶中。推荐接种密度为5,000 cells/cm2。注意：细胞融化后不推荐稀释和离心，因为这些操作比培养基中DMSO残留物对细胞的伤害大。血管平滑肌细胞接种在多聚赖氨酸包被的培养瓶中能促进细胞帖壁。 6.盖好盖子，轻轻地摇晃培养瓶以使细胞分布均匀，如需气体交换则打开瓶盖。 7.将培养容器放入培养箱中。 8.为了得到良好的结果，在培养开始后至少16个小时内不要动培养物。第天天更换培养基以去除残留的DMSO和未贴壁的细胞，然后每隔一天进行如上操作。培养良好的细胞将呈现纺锤体形，通常细胞呈均匀的丛状或板状而不是单个分散的细胞，并且细胞数量在培养2-3天后会加倍。 维持培养

大鼠胰岛细胞原代培养方法的改良

大鼠胰岛细胞原代培养方法的改良 中国医科大学附属第一医院内分泌科(沈阳110001)　吴志香*　王玉霞△　刘国良 摘　要　目的:探讨一种简单易行的大鼠胰岛细胞培养方法,获取尽可能多的高质量胰岛,并寻找进行体外实验研究的最佳时间和条件。方法:运用胶原酶 原位灌注法分离胰腺, F ico ll400纯化胰岛细胞,双硫腙(D T Z)染色鉴定胰岛,运用倒置显微镜观察细胞生活状态, 放免法检测胰岛素分泌考察胰岛功能。结果:每只大鼠可分离438±27个胰岛 胰腺,细胞存活率为92.3±2.3%,GS IS实验中胰岛素释放指数S I为3.25±0.26。结论:本分离纯化方法可获得数量多,质量高的胰岛细胞,为原代胰岛细胞的体外研究提供实验条件。 主题词　细胞培养　胰岛 生理学　胰岛 分离和提纯　大鼠 An i m provem en t m ethod of pr i m ary culture of w istar ra t pancrea tic islets D ep artm en t of Endocrino logy,the F irst A ffiliated Ho sp ital,Ch ina M edical U n iversity (Shenyang　110001)W u Zh ix iang　W ang Yux ia　L iu Guo liang ABSTRACT　O b jective:To study the effects of iso lating and cu ltu ring the rat pancreatic islets in vitro.M ethods:A fter in traductal infu si on of8210m l co ld H ank’s balanced so lu ti on con tain ing1m g m l of type co llagenase,pancreas w ere su rgically p rocu red and digested at37℃fo r15220m in,and stopped digesti on by co ld H ank’s so lu ti on w hen the em u lsi on appeared.T he islets w ere pu rified by discon tinou s F ico ll den sity gradien t(25%,23%,20.5%and11%)cen trifugati on,and the degree of pu rity w as defined as dith izone stain ing.A n i m ati on of islets w as ob served and in su lin secreti on w as detected. R esu lts:438±27islets w ere p rocu red from one rat,and su rvival rate w as92.3±2.3%,Gluco se sti m u lated in su lin secreti on in vitro show ed the m ean value of in su lin in the low2gluco se m edium w as39.74±2.73mM ,w h ile that of h igh2gluco se m edium w as128.94±8.72mM,the S I w as3.25±0.26.Conclu si on:T h is m ethod cou ld ob tain large quan tities and h igh quality islets,w h ich offered better experi m en tal conditi on s fo r cell study. KEY WORD S　Cell cu ltu re　Istets of langerham s physi o logy　Istets of langerham s iso lati on pu rificati on　R ats 近年来许多有关糖尿病方面的研究均利用体外培养的胰岛细胞株作为研究对象,然而源自肿瘤细胞系的细胞株毕竟在基因表达功能上与正常细胞有差别,因此,本研究采用了培养的大鼠原代胰岛细胞作为研究对象,以期更接近在体研究的结果,同时又可避免在体研究很难避免的混杂因素。 材料与方法 1　实验材料　实验动物选择两月龄的健康W istar大鼠,体重250±23g,购自中国医科大学实验动物中心。主要试剂有 型胶原酶(co llagenase typ e ,Sigm a);R PM I1640及 *辽宁中医药大学附属第一医院 △中国医科大学附属第四医院DM E M培养基(G I BCO)、胎牛血清(FB S, H yclone)、青霉素、链霉素(华北制药厂)、F ico ll 400(Pharm acia)、H ank’s液,40目不锈钢网, H EPES(Sigm a)、D T Z(Sigm a)、(OA,北京华美)。胰岛素放免药盒(北京原子高科技核技术应用股份有限公司灵敏度:1.5m I U L;精密度:批内Cvv5%,批间Cvb10%) 2　实验方法 2.1胰岛细胞的分离纯化:胰腺的原位灌注:W istar大鼠禁食16h后,10%水合氯醛腹腔麻醉,常规消毒后经腹中线开腹。暴露胆管,寻找胆管穿过胰腺进入十二指肠处,320丝线穿过(暂不结扎),充分暴露胰尾,在肝门胆管分叉处逆行胆管插管,少量推入含冷却的胶原酶(1m g m l)

辣椒病虫害防治大全

辣椒病虫害防治大全 Company Document number：WUUT-WUUY-WBBGB-BWYTT-1982GT

辣椒病虫害防治大全 辣椒病害种类很多，按生育阶段可分为苗期病害和成株期病害。 苗期病害有:碎倒病、立枯病、灰姑病;成株期病害有:疫病、枯萎病、 青枯病、根腐病、病毒病等。 辣椒的虫害，根据辣椒植株上危害部位可分为:地上害虫和地下 害虫:地上害虫有烟青虫、马铃薯飘虫、斜纹夜蛾等;地下害虫有:小 地老虎等。 1.碎例病碎倒病多发生在.早春苗床上，常见的症状有:烂种、 死苗和碎倒三种。烂种是播种后，在其尚未萌发或刚发芽时就遭受 病菌浸染而死亡;碎倒是幼苗出土后，真叶尚未展开前，通受病菌浸 染.致使幼茎基部发生水演状暗斑，继而绕茎扩展，逐渐缩组呈细线 状.子叶未及凋萎，幼苗地上部因失去支撑能力而倒伏地面。苗床湿 度大时，在病苗及其附近床面上常密生白色棉絮状菌丝，可区别于立 枯病。 防治方法:(1)加强苗床管理:根据苗情适时适量放风，避免低温 高湿条件出现，不要在阴雨天浇水。(2)苗期喷施%%磷 酸二氢钾、%-0. 1 %氯化钙等提高抗病力。(3)药剂防治:碎倒 病多发区，每平方米苗床，可选用40%五氯硝基苯9-10克，加细土 千克拌匀，播前1次浇足底水，待水渗下后.取1/3药土撒在 畦面上，把催好芽的种子播上.再把余下的2/3药土覆盖在上面，防 病效果90写以上，残效期1个月左右;或发病前或发病初期用 %普力克水剂400倍液喷淋，每平方米喷淋兑好的药液2-3 升。此外，也可在整畦后，用福尔马林100倍水液，均匀浇泼床土，每 平方米用药液5千克，然后筱盖塑料薄膜.闷盖7-10天以后掀开塑 料薄膜，让床土敞露4-5天再播种。(4)如未进行苗床土壤处理，出 苗后发病的.将病株及周围的土壤铲除，再撒58%雷多米尔—锰 锌500倍粉剂或75%百菌清粉剂60。倍或64%杀毒矾可湿性粉剂 500倍液或应用蔬菜壮苗素、甲荃托布津、甲霜灵等拌草木灰或干细

罗梅：糖尿病大鼠胰岛α细胞胰岛素受体分布及含量的研究

罗梅：糖尿病大鼠胰岛α细胞胰岛素受体分布及含量的研究 背景动物实验和临床研究均发现代谢综合征包括糖耐量异常以及 2型糖尿病时胰岛素升高，但是对胰高血糖素的抑制效应减弱或消失。同时，有证据表明胰高血糖素分泌和胰岛素敏感性呈负相关，对胰岛素越不敏感的个体其胰高血糖素水平越高，这提示除了骨骼肌、脂肪和肝脏等胰岛素经典靶组织的外周胰岛素抵抗以外，还可能存在胰岛α细胞对胰岛素的抵抗。我们最近的研究发现S TZ糖尿病大鼠胰岛α细胞分泌的N P Y含量增加，予以胰岛素治疗不能令其下降，也提示胰岛α细胞对胰岛素的抵抗。迄今对胰岛素的外周抵抗已有大量研究，但对胰岛α细胞的胰岛素抵抗国内外未见报道。 目的明确糖尿病时是否存在α细胞对胰岛素的抵抗并探讨α细胞的胰岛素抵抗是否与α细胞上胰岛素受体的改变有关。 方法本研究采用免疫组织化学的双重荧光标记法对正常Wis tar大鼠和大剂量STZ诱导的1型糖尿病大鼠以及高脂饮食加小剂量STZ诱导的肥胖2型糖尿病大鼠胰岛的胰高血糖素、N P Y和胰岛素蛋白质含量进行了测定，同时对α细胞上胰岛素受体的分布和含量进行了初步观察。

结果1.2型糖尿病大鼠胰岛内胰高血糖素、N P Y及胰岛素蛋白含量均显著高于对照组，提示胰岛α细胞存在胰岛素抵抗；1型糖尿病大鼠胰岛内胰高血糖素和 NP Y蛋白含量也显著升高，但胰岛素蛋白含量明显低于正常。2.在正常Wistar大鼠和1型糖尿病大鼠、2型糖尿病大鼠胰岛α细胞均有胰岛素受体蛋白表达。 3.大剂量STZ诱发的1型糖尿病大鼠胰岛α细胞上胰岛素受体的含量比正常Wister大鼠明显减少（下图），受体减少的原因尚不清楚，有待进一步研究。4 .与正常Wister大鼠比较，高脂饮食和小剂量 STZ诱发的2型糖尿病大鼠胰岛α细胞上胰岛素受体的含量也有下降趋势，但无统计学意义，分布无明显变化。 解释1.本研究结果显示 2型糖尿病大鼠胰岛内胰岛素蛋白表达增高的同时，伴有胰高血糖素及 N P Y蛋白和N P Y m R N A表达增高，即高胰岛素不能抑制α细胞胰高血糖素及N P Y的表达，提示胰岛α细胞对胰岛素的抵抗。 2.2型糖尿病大鼠α细胞上胰岛素受体呈减少趋势。 3.α细胞胰岛素抵抗似与α细胞胰岛素受体数目变化无明显关系，是否与胰岛素受体结合能力降低、酪氨酸激酶活性降低或受体后其它环节抵抗有关值得进一步研究。 正常大鼠胰岛α细胞胰岛素受体×400 1型糖尿病大鼠胰岛α细胞胰岛素受体×400

小鼠肺血管平滑肌细胞使用说明

小鼠肺血管平滑肌细胞 小鼠肺血管平滑肌细胞产品说明： 为使客户能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。 派瑞金提供的小鼠肺血管平滑肌细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。研发的小鼠肺血管平滑肌细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。 同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。 小鼠肺血管平滑肌细胞注意事项： 1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。 2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。 3. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。 4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。 5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。 小鼠肺血管平滑肌细胞其他相关小鼠原代细胞： 小鼠小肠粘膜上皮细胞小鼠大隐静脉平滑肌细胞 小鼠肺微血管内皮细胞小鼠冠状动脉平滑肌细胞 小鼠肺血管平滑肌细胞小鼠大隐静脉内皮细胞 小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞小鼠冠状动脉内皮细胞 小鼠气管上皮细胞小鼠骨细胞 小鼠气管平滑肌细胞小鼠滑膜细胞 小鼠肺成纤维细胞小鼠骨骼肌细胞 小鼠支气管上皮细胞小鼠表皮细胞 小鼠支气管成纤维细胞小鼠真皮成纤维细胞 小鼠肺大静脉平滑肌细胞小鼠破骨细胞 小鼠肺大动脉平滑肌细胞小鼠皮肤肥大细胞

辣椒病害图片

辣椒病害 茄果*病虫2010-10-03 15:23:36 阅读19 评论0 字号：大中小订阅 辣 椒炭疽病 照片名称：辣椒炭疽病 【英名】Anthracnose 【病原】Colletotrichum sp，Colletotrichum gloeosporioides,Colletotrichum capsici 【症状】炭疽病是辣椒的一种常见病害，各地普遍发生，通常减产20％～30％，严重地区也有减产50％以上的。叶、果均可能受害。发病初期叶片上出现水浸状褪绿斑，渐渐变成圆形病斑，中央灰白色，长有轮纹状黑色小点，边缘褐色。生长后期危害果实，成熟果受害较重，病斑长圆形或不规则形，褐色，水 浸状，病部凹陷，上面常有不规则形隆起轮纹， 密生黑色小点，空气湿度高时，边缘出现浸润圈。环境干燥时，病部组织失水变薄，很容易破裂。茎及果 梗受害，病斑褐色凹陷，呈不规则形，表皮易破裂。 【发病规律】病菌主要以菌丝体潜伏于种子内，或以分生孢子附着于种子表面，或以拟菌核和分生孢子盘在落地的病株残体上越冬。翌年，越冬菌源产生分生孢子，借助风雨传播，由寄主伤口和表皮直接侵

入，借助气流、昆虫、育苗和农事操作传播并在田间反复侵染。调运未消毒的带菌种子，可以远距离传播此病害。病菌繁殖适温12～33℃，最适温度27℃。空气相对湿度95％以上，分生孢子萌发时侵染能力最强。因此，高温多雨或高温高湿、窝风积水、田间郁闭、长势衰弱、密度过大、氮肥过多以及病毒病发生较重的地块，炭疽病发生也很重。露地栽培时多从6月上中旬进入结果期后开始发病。 【防治方法】 ①选种抗病品种甜椒如鲁椒1号、鲁椒3号、早杂2号、苏椒2号、早丰1号、茄椒1号、皖椒2号、 长丰、吉农方椒等；辣椒如早杂2号、中子粒、细线椒等。 ②选播无病种子和进行种子消毒设立无病留种田或从无病株上采集种子。买来的种子必须进行消毒处理，可用55℃温水浸种10分钟或用50℃温水浸种30分钟，取出后用清水冲洗，冷却后催芽播种。也可用冷水浸种10～12小时后，再用1％硫酸铜溶液浸种5分钟，取出后加上适量消石灰或草木灰拌种，立即播种。或用50％多菌灵可湿性粉剂500倍液浸种1小时，清水冲洗，催芽播种。 ③轮作实行2～3年以上轮作，前茬最好是瓜类蔬菜、豆类蔬菜，且地势高燥，排灌方便，通风良好。 ④加强栽培管理采用营养钵或穴盘进行护根育苗，防止病菌由根系伤口侵入。定植前深翻土地，多施优质腐熟有机肥，增施磷、钾肥，提高植株抗病能力。避免栽植过密，采用高畦栽培、地膜覆盖，促进辣椒根系生长。未盖地膜的，生长前期要多中耕，少浇水，以提高地温，增强植株抗性。夏季高温干旱，适宜傍晚浇水，降低地温。雨季及时排水，防止地面积水，以保护根系。适时采收，发现病果及时摘除。 ⑤药剂防治发病初期摘除病叶病果，而后喷药，可喷75％百菌清可湿性粉剂600倍液，或50％施保功可湿性粉剂1500～2 500倍液，或 7.6％冠菌清干粒剂 1000～ 1200倍液，或68.75％易保水分散性粒剂1000倍液，或50％混杀硫悬浮剂500倍液，或50％多菌灵可湿性粉剂500倍液，或80％炭疽福美可湿性粉剂800倍液，或2％农抗120水剂 150倍液，或70％代森锰锌可湿性粉剂500倍液，或40％灭病威悬浮剂500倍液，或65％代森锌可湿性粉剂500倍液，或50％代森铵水剂800倍液，或70％甲基托布津可湿性粉剂800倍液，或1：1：200波尔多液等。每隔7～10天喷1次，连喷2～3次。 照片名称：辣椒炭疽病