棉花T-DNA插入突变体材料的创制与突变性状考察

棉花T-DNA插入突变体库构建的材料创制与突变性状考察

目录

摘要.............................................................................................................................I Absract...........................................................................................................................II 缩略表......................................................................................................................III 1.前言.. (1)

1.1植物功能基因组研究 (1)

1.2利用突变体开展正向和反向遗传学研究 (2)

1.3突变体库构建的方法 (3)

1.3.1理化诱导构建突变体库 (4)

1.3.2采用RNAi技术构建突变体库 (4)

1.3.3植物转座子和逆转座子插入构建突变体库 (5)

1.3.4农杆菌介导的T-DNA插入构建突变体库 (6)

1.4Gene trap技术及其在植物功能基因组研究中的应用 (6)

1.4.1Enhancer trap (6)

1.4.2Gene trap (7)

1.4.3Promoter trap (7)

1.5植物组织培养概述 (8)

1.5.1植物组织培养概况 (8)

1.5.2棉花组织培养理论基础 (8)

1.5本课题研究的意义与技术路线 (9)

2.材料与方法 (10)

2.1实验材料 (10)

2.1.1品种 (10)

2.1.2农杆菌菌株和转化载体 (10)

2.2实验方法 (11)

2.2.1棉花遗传转化 (11)

2.2.1.1棉花外植体的准备 (11)

2.2.1.2农杆菌的活化 (12)

2.2.1.3农杆菌侵染棉花下胚轴 (12)

2.2.2各时期材料不同部位GUS检测 (14)

2.2.3T1代植株田间性状调查 (15)

2.2.4一个黄化突变材料的分子鉴定 (15)

2.2.4.1黄花材料的阳性鉴定 (16)

2.2.4.2阳性植株T-DNA插入位点的侧翼序列分离 (17)

3.结果与分析 (20)

华中农业大学2014届专业学位硕士毕业

3.1组织培养结果 (20)

3.2性状调查结果 (21)

3.3农艺性状统计 (23)

3.4植株染色观察 (24)

3.4.1T0代转基因植株及田间植株地上部分染色 (24)

3.4.2萌发种子染色 (27)

3.4.3转基因植株幼苗染色 (28)

3.4.4转基因植株无菌苗根系染色 (28)

3.4.5组织培养获得的胚染色 (29)

3.5黄化苗的分子鉴定与侧翼序列分离 (31)

4讨论 (33)

4.1组织培养材料替换后的条件控制 (33)

4.2转基因植株的鉴定 (33)

4.3突变性状调查 (33)

4.4黄化材料的继续研究 (34)

参考文献： (35)

附录 (40)

1转化载体报告基因（Gus）序列信息 (40)

2试剂盒法提取棉花DNA步骤 (41)

3PCR产物的回收与纯化 (42)

PCR产物回收 (42)

PCR产物纯化 (43)

4黄化材料侧翼序列分离的原始序列 (43)

致谢 (45)