茯苓菌种质量标准及检验规程

作者：付杰王克勤苏玮方红邓芬

【摘要】目的规范茯苓菌种分离、培育方法，制定茯苓菌种质量标准及检验规程。方法在传统产区选择2～3代，体重2.5 kg以上的优质鲜菌种作为种苓，进行（母种、原种、栽培种）的分离与培养。结果制定了茯苓菌种质量标准及检验规程。结论标准及规程的建立保证了茯苓菌种的质量。

【关键词】茯苓菌种质量标准检验规程

茯苓为传统常用中药材，在我国有着两千多年应用历史［1］，人工栽培的尝试始见于一千五百多年前南北朝时期的《本草经集注》，爰至南宋，栽培技术已臻完备，宋《癸辛杂识》记载的使用新鲜菌核作种的“肉引栽培”方法，一直沿用至20世纪60年代［2］。20世纪70年代初，在华中农业大学杨新美教授指导下，湖北成功地研制出“茯苓纯菌丝菌种”，并以其代替传统“肉引”作为种源，开创了茯苓的“菌种栽培”［3］。该种技术经三十多年应用，已在全国广泛推广。但是，由于各地在菌种分离、培育等具体方法方面存在一定差异，导致菌种质量不一［4］。1999～2002年，本课题组在承担“九五”国家重点科技攻关项目“茯苓药材规范化种植研究”期间，初步规范了茯苓菌种分离、培育方法，制定了茯苓菌种质量标准及检验规程。目前，该项研究仍在继续进行。现将该项工作的初试情况报道如下。

1 茯苓菌种的分级用于分离茯苓菌种的鲜茯苓菌核称为种苓，由种苓直接分离、培育的一级菌种，称为茯苓母种；母种经扩大培育的二级菌种，称为茯苓原种；原种经扩大培育的三级菌种，直接用于栽培种植，称为茯苓栽培菌种。

2 种苓来源及标准

2.1 种苓来源在传统产区，选择优良栽培菌株（品系），提前进行培育；在栽培培育出的新鲜菌核中，进行认真挑选。

2.2 种苓标准2～3代，体重2.5 kg以上的优质鲜菌核；个体较大，近球形；外皮较薄，颜色黄棕色或淡棕色，有明显的白色或淡棕色裂纹；生长旺盛，切或掰开后，内部苓肉色白，茯苓气味浓郁，有较多乳白色或淡青色浆汁渗出；外皮完整，无虫咬损伤，无腐烂异样。

2.3 种苓的储存与运输种苓选定后要及时进行分离使用；若需暂短储存或运往他地使用，必须埋在湿沙内，以防干燥。

3 培养基制备

3.1 母种培养基原料为马铃薯（去皮）200 g，葡萄糖20 g，松根或松木屑煎汁40 ml，琼脂20 g，水1 000 ml；将松根（或松木屑）加适量水（以淹没2～3 cm为度），煎煮30 min，用八层纱布（用水浸湿后拧干）过滤，取滤液静置1 h使沉降，取上清液浓缩至约40 ml，备用。将马铃薯去皮（挖去发芽薯块芽眼），洗净，切成薄片，用水冲洗干净，称取200 g，加水1 000 ml，煮沸至软而不烂为度，用八层纱布（用水浸湿后拧干）过滤，取滤液。称取琼脂20 g，加入马铃薯滤液中，煮至全部溶化。溶液中加入葡萄糖，搅拌溶化，再加入松根（或松木屑）煎汁，并加水补足1 000 ml，分装于试管或三角瓶中；将配制的母种培养基置高压灭菌锅内，用1.0 kg/cm2压力（温度121.3℃）灭菌30 min；试管趁热摆放斜面，冷却后，备用。

3.2 原种培养基原料为小麦粒90%，松木屑10%，营养液（1%蔗糖、0.4%硝酸铵或硫酸铵）；将麦粒精选，除去瘪粒、杂质，洗净，置40℃左右温度的营养液中浸泡10 h，取出，滤干。将滤出的小麦粒与5%松木屑混拌均匀，装入400 ml盐水瓶或聚丙烯硬塑料瓶内，边装料边振摇，并用扁形铁钩或木棒稍压实，使之均匀装至瓶肩处。将另5%松木屑用营养液润湿，盖在瓶内培养基料表面，厚约0.4 cm。用锥形木棒在瓶中扎一直洞约至瓶底，揩净瓶内壁、外壁沾有的物料，塞紧棉塞或具海绵塞的瓶盖。瓶盖外部用二层报纸包裹，用棉索或橡筋进行包扎；将配制的原种培养基置高压灭菌锅内，用1.4 kg/cm2压力（温度129℃）灭菌2 h，或置常压灭菌灶内，用流通蒸气（100℃）灭菌8～10 h；灭菌后慢慢冷却，备用。

3.3 栽培种培养基（松木屑型培养基）原料为松木屑78%，米糠（或麦麸）20%，蔗糖1%，熟石膏1%，水料比1∶1.0～1.2；首先将蔗糖溶于水中。将米糠（或麦麸）与熟石膏混匀，再加入松木屑，拌匀。然后加入溶化了的蔗糠水，翻拌均匀，使培养基料含水量为44%～70%。即紧握培养基料使指间稍见渗水为度。培养基料配制后放置30 min，待水份均匀透入料中，进行装袋。将聚丙烯塑料袋（ф12 cm，高24 cm，厚4丝）折角呈方底形，把配制的培养基料装入袋中，每袋400 g左右，随后压实并抹平表面，揩净袋口内外壁表面沾有的物料，套入硬塑料颈圈，把袋口向外翻出 1.4～2.0 cm，盖上具海绵塞的塑料套盖，套盖外部用两层报纸包裹，用棉索或橡筋进行包扎；将配制的栽培种培养基置常压灭菌灶内，用流通蒸气（温度100℃）灭菌8～10 h，或置高压灭菌锅内，用1.4 kg/cm2压力（温度129℃）灭菌2 h；灭菌后慢慢冷却，备用。