Zeiss LSM 780 激光扫描共聚焦显微镜光路设置和不同扫描模式的使用

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Zeiss LSM 780 激光扫描共聚焦显微镜光路设置和不同扫描模式的使用

作者：李华丽

来源：《科技创新与应用》2015年第27期

摘要：对于使用激光扫描共聚焦显微镜的研究者来说，实验设计、样品准备、仪器操作

和后期图片处理是一个实验至关重要的四步，前两步是任何一个研究者都必须具备的能力，否则无从谈起上机实验，后期图片处理无非就是修饰润色使图片从视觉上更美观，而对大多数从事生物学医学领域的研究者来说，仪器的操作可能是最关键的一步，而仪器操作中光路的设置和不同扫描模式的选择可能是最难掌握和最难学习的模块，因为这部分可能涉及一些物理光谱学的知识。文章就以自己实验室Zeiss LSM 780激光扫描共聚焦显微镜为例，简要介绍其三种光路设置和五种不同扫描模式如何选择使用，希望对使用者有所帮助。

关键词：激光扫描共聚焦显微镜；光路设置；扫描模式

引言

随着现代科学技术的飞速发展，各种荧光蛋白、荧光染料和精密光学元件不断出现[1-5]，激光扫描共聚焦显微镜技术得到了极大的发展，各种公司，各种型号的共聚焦系统不间断问世或完善，广泛应用在细胞生物学医学领域[6-8]。广泛的应用使得这一设计精密又操作复杂的仪器必须让有需要的研究者方便学习和掌握。就以蔡司公司为例，科学技术的发展和适应市场的需要，不同型号的共聚焦系统逐步上市和使用，LSM 510、510 Meta、700、710、780等在硬件技术提高的同时，操作软件也在一步步简化。文章以华南农业大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室的一台超高灵敏度检测Zeiss LSM 780系统为例，介绍其光路设置和不同扫描模式的选择，因为它是目前蔡司公司推出的上述普通激光扫描共聚焦显微镜中型号最高的一款，它的光路设置和扫描模式的配置将集上述所有型号系统的内置设置于一身，希望能给实验者提供较全面的指导。

1 Zeiss LSM 780 激光扫描共聚焦显微镜三种光路设置

（1）最“傻瓜式”一键操作：Zeiss LSM 780使用Zen 2011软件，软件操作界面有一个Resue按钮。如果使用者在此之前在这台仪器上做过同样的实验或本次实验与之前某次实验使用的荧光标签一样或光谱数据类似，并且在此仪器上还保留有实验数据，那只需在操作软件中打开之前的一张图片，然后点击Reuse按钮，软件将自动完成光路配置，并且光路中所有参数都是你打开的那张图片的参数。（2）“傻瓜式”操作：如果使用者第一次使用该仪器，或本次实验与前面实验不使用同样或光谱数据类似的荧光标签，又或者使用同样的标签但在此仪器上没有存留实验数据，那么需要在操作界面中找到一个Smart Setup按钮，点击打开Smart Setup 对话框，在Configure your experiment表格中，在Dye列表下直接选择荧光物质名称或在