基因工程练习题
第一章绪论
1基因:是指DNA分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列，是遗传物质的最小功能单位。
2管家基因与奢侈基因：具有相同遗传信息的同一个体细胞间其所利用的基因并不相同，有的基因活动是维持细胞基本代谢所必须的，而有的基因则在一些分化细胞中活动，这正是细胞分化、生物发育的基础。前者称为管家基因，而后者被称为奢侈基因
结构基因与调节基因：结构基因是可以转录成为各种RNA（rRNA,tRNA,snRNA）直接行使功能，或者转录成信使RNA（mRNA）然后翻译成多肽链，最终形成各种功能蛋白质和酶。从广义上讲，任何一种能够调节或限制其他基因活性的基因都可以叫做调节基因。
移动基因：转座子属于可移动的遗传因子
重叠基因：它的同一部分DNA可以编码两种不同的蛋白质，也就是说同一部份DNA存在2个重叠基因
3基因组:是指一个生物体、细胞器或病毒的全部基因
4断裂基因:被间隔序列间隔成若干个部分，而形成不连续形式的基因，是真核基因的普遍形式
5假基因:是一类在基因组中稳定存在，序列组成也酷似正常基因，但不能表现出任何功能的DNA序列。
6启动子：DNA链上能指示RNA转录起始的DNA序列称为启动子，(1)-35序列提供RNA聚合酶全酶识别位点，(2)-10序列是酶与DNA紧密结合的位点，(3)RNA 合成的起始点
7复制子：DNA 中发生复制的独立单位称为复制子(Replicon)，这是一段具有特殊结构的DNA序列，载体有复制起点才能使与它结合的外源基因在宿主细胞中独立复制繁殖。
8增强子：就是远离转录起始点（1 ~ 30 kb）、决定基因的时间、空间特异性表达、增强启动子转录活性的DNA序列，其发挥作用的方式通常与方向、距离无关。9单克隆抗体：由单一细胞克隆生成的抗体是单克隆抗体，所有这些抗体分子都是相同的并以同样的亲合力结合在抗源的相同部位上
10黏性末端：由限制性内切酶切割后在双链DNA的切口处产生交替互补的单链末端
11操纵子：是指染色体控制蛋白质（酶）合成的功能单位，操纵子包括调节基因、操纵基因和结构基因
12终止子：模板DNA上存在终止转录的特殊信号称为终止子。
13克隆：是指从一个共同祖先无性繁殖下来的一群遗传上同一的DNA分子细胞或由个体所组成的特殊的生物群体
14亚克隆：就是对已经获得的目的DNA进行重新克隆，其目的在于对目的DNA 进一步分析或者进行重组改造。
15cDNA：由RNA逆转录形成的DNA
2.问答题
（1）DNA是遗传物质的证明试验是什么？
Avery肺炎双球菌转化实验 : 噬菌体转染实验进一步证实
（2）第一个得到限制性核酸内切酶的科学家是谁？
H. O. Smith得到第一个限制酶
（3）基因工程的开创试验是谁做的，基因工程的突破性试验是谁做的，基因工程的元年是谁做的，基因最早是由谁认准提出的？
Berg的开创性实验将SV40的DNA片断与噬菌体的DNA片断连接起来
Boyer-Cohen的突破性实验有卡那霉素抗性基因的大肠杆菌R6-5质粒与含有四环素抗性基因的另一种大肠杆菌质粒pSC101连接成重组质粒，具有双重抗药性。后来又把非洲爪蟾核糖体基因片断同pSC101质粒重组，转化大肠杆菌，并在菌体内成功转录出相应的mRNA。这是第一次成功的基因克隆实验。
1973年为基因工程的元年丹麦人 1909年丹麦学者W.L.约翰森提出了基因这一名词,用它来指任何一种生物中控制任何性状而其遗传规律又符合于孟德尔定律的遗传因子,并且提出基因型和表现型这样两个术语,前者是一个生物的基因成分,后者是这些基因所表现的性状。
（4）基因工程的定义，三要素是，四要素是？
在分子水平上，提取（合成）不同生物的遗传物质，体外切割，再与载体拼接重组，然后把重组DNA分子引入细胞或生物体内，使这种外源DNA（基因）在受体细胞中进行复制与表达，按人们的需要繁殖扩增基因或生产不同的产物或定向创造生物的新性状，并能稳定遗传。
三要素：供体载体受体
四要素：供体载体受体工具酶
（5）基因工程的步骤与特征。
（1）获——获取目的基因（2）连——基因+载体=重组体（3）转——重组体的转化与扩增（4）筛——筛选鉴定（5）表——基因表达。
特征：跨物种性无性繁殖
（6）基因工程产生的理论基础与技术突破有哪些。
理论上的三大发现：第一发现了生物的遗传物质是DNA而不是蛋白质，第二明确了DNA的双螺旋结构和半保留复制机制。第三遗传密码子的破译。2技术上的三大发现，第一利用限制酶和连接酶外切割和连接DNA片段，第二质粒改造成载体以携带DNA片段克隆，第三逆转录酶的使用打开真核生物基因工程的一条通道。
基因工程诞生的技术突破：1. 限制性内切酶2发现了DNA连接酶3使用小
4感受态体系经过氯化钙处理的大肠杆菌容易吸收噬菌体DNA。5琼脂糖凝胶电泳，可将不同长度的DNA分离开。6. DNA测序技术
（7）基因工程在农业生产中的主要应用有哪些。（详见课本206--210）
增加抗逆性（抗虫或抗病）-改变株高提高耐储藏能力和抗寒能力提高光合作用能力
第二章工具酶
工具酶：应用于基因工程的各种酶的总称
同裂酶：也称异源同工酶，是指来源不同但具有相同识别序列的一类限制酶
同尾酶：即指来源和识别序列都不同，但能够产生相同黏性末端的一组限制性核酸内切酶
切口前移标记：双链DNA在DNA酶1的作用下形成单链切口，DNA聚合酶1的作用下利用5`到3`外切活性从切口的5`端逐步水解核苷酸时，酶的聚合活性则利用切口的3`游离羟基逐个加上单核苷酸，使得切口向下游离。
Kl enow聚合酶：大肠埃细菌DNA聚合酶I经枯草杆菌蛋白酶处理，获得N端三分之二的大太段即为.
2.问答题
（1）限制性内切核酸酶的种类有哪几种，其中称作剪刀的是
Ⅰ型限制性内切酶具有限制和修饰两种功能；酶的识别位点与切割位点不一致，并随机切割DNA。这类酶的作用需要Mg2+，S-腺苷甲硫氨酸及ATP激活
Ⅱ型限制性内切酶具有限制和修饰两种功能；酶的识别位点专一，并在固定位臵上切割双链。这类酶的作用仅需要Mg2+
Ⅲ型限制性内切酶具有限制和修饰两种功能；酶的识别位点专一，在固定位臵上切割双链，但对于固定位臵上的碱基对不专一。这类酶的作用需要Mg2+、S-腺苷甲硫氨酸及ATP激活
（2）限制性内切酶的命名
限制性酶名称的第一个字母（大写，斜体）代表该酶来源的微生物属名：第二，第三字母（小写，斜体）代表微生物的种名：若该微生物有不同的变种和品系，则加上该变种和品系的第一个字母，若从同一微生物发现多种限制性内切酶，则依照发现和分离的先后顺序用罗马字母表示。
（3）限制性内切酶的基本特征。
1. 每一种酶都有各自特异的识别序列
2. 限制性内切核酶识别序列具有180。旋转对称的回文结构
3. 有些酶具有同裂酶或同尾酶的特性
4. 有些同裂酶对于切割位点上的甲基化碱基的敏感度有所不同
5. 识别序列的长短、识别序列的相邻序列效应、位点偏爱及星号活性影响DNA的切割
（4）影响限制性内切酶活性的因素（前四条详见课本49--50）
1. DNA的纯度和结构
2. DNA的甲基化程度
3. 酶切消化反应的温度
4. 盐离子浓度
5. 缓冲体系
6. 反应体积和甘油浓度
7. 酶切反应的时间
（5）T4-DNA和T7-DNA及Taq DNA聚合酶聚合酶的特征。
T4-DNA聚合酶的特征：,5‘到3’DNA聚合酶活性和3；到5‘核酸外切酶活性2无dNTP时，可从任何3’-OH端外切3：只有一种dNTP时外切至互补核苷酸暴露时停止，并可发生取代反应，4在四种dNTP都存在时，聚合酶活性占主导地位。
T7-DNA聚合酶的特征同T4-DNA聚合酶相似，但持续合成的能力是目前已知最强的一种，现已经过处理，使其失去外切活性，获得测序酶 Taq DNA聚合酶基本特征：1耐热2. 对Mg2+敏感3. 具有5’→3’聚合酶活性和5’→3’外切酶活性，忠实性差4. 有些物质可以起抑制作用。
（6）反转录酶有哪三种活性。
①DNA聚合酶活性；以RNA为模板，催化dNTP聚合成DNA的过程。此酶需要RNA为引物，多为色氨酸的tRNA，在引物tRNA3′－末端以5′→3′方向合成DNA。反转录酶中不具有3′→5′外切酶活性，因此没有校正功能，所以由反转录酶催化合成的DNA出错率比较高[1]。
②RNase H活性；由反转录酶催化合成的cDNA与模板RNA形成的杂交分子，将由RNase H从RNA5′端水解掉RNA分子[1]。
③DNA指导的DNA聚合酶活性；以反转录合成的第一条DNA单链为模板，以dNTP为底物，再合成第二条DNA分子
（7）DNA连接酶的种类与连接方式
1.大肠杆菌DNA连接酶（由NAD+供能）
2. T4DNA连接酶（由ATP供能）
连接方式：1.以黏性末端的方式连接
2. 利用T4DNA连接酶以平末端的方式进行
3. 加人工接头后以黏性末端的方式连接
（8）提高平头连接效率的方法
1加大酶用量，2加大平头末端底物浓度，增加分子间的碰撞机会，3加入10%的PEG8000，促进分子间的有效作用，4加入单键阳离子（NACL），最终浓度150-200mM
（9）S1核酸酶，Bal 31核酸酶，碱性磷酸酶，T4多聚核苷酸激酶，末端脱氧核苷酸转移酶的特征与主要用途。
S1核酸酶：内切带缺口或缺刻的双链DNA或RNA 1.去除DNA片断的单链突端2.去除cDNA合成时形成的发夹结构
Bal 31核酸酶：单链内切双链外切的核酸酶诱发DNA突变
碱性磷酸酶：1.去除DNA和RNA的5’-磷酸基，然后用T4多聚核苷酸激酶催化下，用放射性标记的ATP进行末端标记。
2.去除载体DNA 5’-磷酸基，防止自身环化。
T4多聚核苷酸激酶：在DNA、RNA dNR NR的5"oh上加磷主要用于5’-OH端的磷酸化
末端脱氧核苷酸转移酶：不需要模板
1. 给载体或cDNA加上互补的同聚物尾巴
2. 用于DNA片断3’末端的放射同位素标记
第三章载体
载体：在基因工程操作中，把能携带外源DNA进入受体细胞的运载工具叫载体报告基因：基因工程中利用载体上特地引入的一些具有特殊标志意义的基因，可用来证明载体已经进入宿主细胞，并用来将含有目的基因的宿主细胞从基它细胞中识别区分甚至挑选出，这种具有标志意义的基因称为报告基因。
蓝白斑选择原理：大肠杆菌β-半乳糖苷酶可分成2部分即α肽段（N-端的146个aa）和C-段。α肽段的基因位于载体上并含有不影响其ORF（open reading）
的多克隆位点（MCS），而C-段的基因位于工程菌E. coli DH5α上。二者在同一菌株中表达时，菌株中的C-段与载体上的α肽段互补而具有酶活性，能将无色化合物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)切割成半乳糖和深蓝色的物质5-溴-4-靛蓝。在MCS上插入新基因将会改变其ORF而使得载体上的α肽段不能与菌株中的C-段互补而不能无色化合物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)切割成半乳糖和深蓝色的物质5-溴-4-靛蓝产生白斑。选择转入的阳性克隆即选择白斑。
pBR322：F. Bolivar和R.L. Rodriguez人工构建载体。
PUC18：在pBR322的基础上改造而成。属正选择载体。
溶菌周期：噬菌体吸附到寄主细胞表面之后，注入DNA，噬菌体的DNA进行复制及蛋白质的合成，并组装成噬菌体颗粒，最后使寄主细胞裂解，释放出子代噬菌体颗粒的过程
烈性噬菌体：感染细菌后立即在菌体内复制和合成蛋白质外壳，重新组装成噬菌体颗粒，并导致细菌细胞解体，释放出大量子代噬菌体
温和噬菌体：感染细菌后，将自己的DNA整合到细菌的染色体DNA中，一起复制和传代。这样的噬菌体为温和噬菌体
原噬菌体：整合到细菌染色体的噬菌体DNA随细菌的染色体复制而复制，称为原噬菌体
cos DNA两端各有12bp的粘性末端，粘性末端形成的双链区域称为cos 位点
科斯克隆：应用cosmid载体在大肠杆菌中克隆大片端的真核基因组DNA技术，叫?柯斯克隆?
基因打靶：是指通过DNA定点同源重组，改变基因组中的某一特定基因，从而在生物活体内研究此基因的功能
2.问答题
（1）基因工程对载体的要求与载体的功能
1.在宿主细胞内能独立和稳定的自我复制。
2. 有选择性标记（报告基因）
3.具有多种单一的核酸内切酶识别切割位点外源DNA插入其中不影响载体的复制
4.分子量小，装载能力高，拷贝数多。
5.容易从宿主细胞中分离纯化，并具有好的安全性。
载体功能：1. 运送外源基因高效转入受体细胞
2. 为外源基因提供复制能力或整合能力
3. 为外源基因的扩增或表达提供必要的条件
（2）根据质粒的自主复制特性和可转移特性可以分为哪几类？
根据自主复制分为，1严紧型复制控制的质粒1-3拷贝，2松弛型复制控制的质粒10-60拷贝。根据可转移分：1接合型质粒：能在天然条件下自发从一个细胞转移到另一个细胞（结合作用）2非接合型质粒：不能在天然条件下发生结合作用。
（3）构建质粒克隆载体的基本原则
（1）选用合适的出发质粒（2）获得构建质粒克隆载体的元件（3）组装合适的选择标记基因（4）选用合适的启动子（5）提高外源DNA的容量（6）需要灭活出发质粒上的某些编码基因（7）在达到目的前题下应力求简单
（4）人工构建的 噬菌体载体有两种类型
①插入型载体②替换型载体
DNA的非必须区两端。
（5）什么是体外包装，体外包装的过程和方法。
（6）柯斯质粒（黏性质粒）载体构成及特点。
特点
克隆能力：
（7）M13噬菌体载体的生活周期
（8）YAC和 BAC分别代表什么，YAC的组成结构
酵母人工染色体载体（YAC）
细菌人造染色体载体（BAC）
组成：（1）着丝粒区（2）端粒（TEL）（3）复制起点（4）克隆位点（5）在酵母中的标记基因（6）细菌的复制起点 ori和抗生素标记Ampr
（9）S1核酸酶，Bal 31核酸酶，碱性磷酸酶，T4多聚核苷酸激酶，末端脱氧核苷酸转移酶的特征与主要用途。
（10）Ti质粒的基因结构及转化对象。（课本201）
转化对象：裸子植物、双子叶被子植物、禾谷类单子叶植物（玉米）
第四章载体
目的基因：将那些已被或准备要分离、改造、扩增或表达的基因
外源基因：通常我们把插入到载体内的那个特定的片断基因称为?外源基因?。基因的组装：需要把较短的合成片断拼接成较长的基因，这个过程叫基因的组装基因文库：将某种生物细胞的整个基因组DNA切割成大小合适的片段，并将所有这些片断都与适当的载体连接，引入相应的宿主细胞中保存和扩增。理论上讲，这些重组载体上带有了该生物体的全部基因，称为基因文库
基因组文库:是指将某种生物的全部基因组DNA切割成一定长度的DNA片段克隆到某种载体上而形成的集合
cDNA文库:是指某生物某一发育时期所转录的mRNA经反转录形成的cDNA片段与某种载体连接而形成的克隆的集合
2.问答题
（1）获取目的基因的方法有哪些，常用的有哪些，了解如何选择获取方法。（132页第五章）
1.鸟枪法
2.直接分离法
3.人工化学合成法
4.反转录法
5.聚合酶链反应法
鸟枪法：优点：速度快，简单易行，成本较低，并能获得与天然基因组DNA一样的有内含子的真核基因DNA片断第一步是组建基因文库。第二步是检索
（2）化学获取目的基因的前提有哪些，该方法的用途有哪些？
化学合成目的基因的前提条件是基因的DNA序列已知
1. 直接合成天然基因
2. 合成引物（20mer左右）
3. 合成探针序列
4. 合成连接子和接头
（3）基因组文库的大小的计算公式
答：
p: 筛选概率（99%）
f: 插入载体的DNA片断的平均长度占整个基因组DNA长度的百分数，X代表文库中每个克隆所含的外源DNA片段的平均长度，Y代表该生物基因组DNA的大小。
N：所需的重组载体数（克隆数）
（4）基因组文库构建的一般步骤
（1）染色体DNA大片段的制备①物理切割法超声波（300bp）或机械搅拌（8kb）②酶切法内切酶Sau3A进行局部消化。可得到10-30kb的随机片断。（2）载体与基因组DNA大片段的连接①粘性末端直接连接载体与外源DNA大片段的两个末端都有相同的粘性末端②人工接头法人工合成的限制性内切酶粘性末端片断③同聚物加尾（3）重组体导入受体细胞
（5）cDNA文库构建的一般步骤（课本141—143）（分高用答案一，分低用答案二）
一：1、总RNA（total RNA）提取
2、 mRNA的分离纯化
①原理
利用mRNA都含有一段polyA尾巴，将mRNA从总RNA（rRNA、tRNA等）中分离纯化。mRNA只占总RNA的1%-2%。
② mRNA的分离纯化
Column（柱）
分离mRNA用商业化的Oligo dT纤维柱。
3、cDNA的合成
① cDNA第一链合成
逆转录酶能以RNA为模板合成DNA。
用Oligo dT（或随机引物）作引物，合成cDNA的第一链。
②降解mRNA模板
用碱处理或用RNaseH降解mRNA-DNA杂交分子中的mRNA。
③ cDNA第二链合成
剩下的cDNA单链的3’末端一般形成一个弯回来的双链发卡结构（机理不明），可成为合成第二条cDNA链的引物。用DNA聚合酶合成第二链DNA.。
④去掉发卡结构
用核酸酶S1可以切掉发卡结构（但这会导致cDNA中有用的序列被切掉！）4、cDNA与载体连接
在双链cDNA末端接上人工接头，即可与载体连接，转入受体菌。或借助末端转移酶给载体和双链cDNA的3’端分别加上几个C或G，成为粘性末端
5、cDNA重组体导入受体细胞
二：a 总RNA（total RNA）提取b mRNA的分离纯化c cDNA的合成① cDNA第一链合成②降解mRNA模板③ cDNA第二链合成④去掉发卡结构d cDNA与载体连接
第五章载体
（1）载体上理想的酶切位点应符合的条件
1.位于载体上特定的酶切位点要尽可能少，最好是单一酶切位点。
2.在酶切位点之前要有一个较强的启动子，使插入的目的基因可在该启动子的指
导下高效表达。
3.选择的载体必须在连接重组后对基因转录和翻译过程中的编码区读框不改变（2）平端连接情况下，实现黏性末端连接的方法有哪些，并说明优缺点
1、直接连接
5’端与3’端并列靠近的时间太短，不容易被连接酶连接。
T4DNA连接酶虽然能连接平末端，但效率很低，只有粘性末端的1%。
2、人工加尾形成?粘性末端?
1.同聚加尾法
①原理:DNA末端转移酶能在没有模板的情况下给DNA的3’-OH端加上脱氧核苷酸。分别给载体和插入片断加上互补的核苷酸。
优点：能把任何片段连接起来缺点：不能把插入片段再切下来。
2.衔接物(linker)连接
① linker: 用化学合成法合成的一段10-12bp的特定限制性内切酶识别位点序列的平端双链。
linker的作用
用T4 DNA连接酶连到平端DNA上，然后再用酶切，形成一个人工粘性末端。③优点：
1）可以用内切酶把插入片段切下来
2）能给载体连接上Polylinker
④缺点：
如果插入片段内部也有该酶位点，不能切下完整的插入片段
3. DNA接头 (adapter)连接法
① adapter
一头平末端、另一头粘性末端（某种酶切位点序列）。
② adapter的作用
用T4DNA连接酶连到DNA分子的两端，直接成为人工粘性末端。
接头自我连接
优点：连上后就能用。缺点：接头与接头会彼此以粘性末端接在一起，影响与DNA片段的连接。
⑤防止自我连接
先用小牛肠碱性磷酸酶（CIP）处理接头，水解掉其5’端的磷酸，防止自我连接。
（以后再用T4多核苷酸激酶加上磷酸）:
（3）DNA体外连接的结果及注意事项
1. 载体自身环化连接（能存活）
2. 载体之间互相连接（能存活）
3. 插入片段互相连接（不能存活）
4. 一个载体与几个插入片段重组（能存活）
5. 几个载体与一个插入片段重组（能存活）
6. 一个载体与一个插入片段重组（能存活）
注意事项：1、插入片断与载体的酶切位点近可能互补
2.插入基因的开放阅读框（ORF）正确
3.防止载体自身环化连接
4.DNA插入的方向要正确
（4）了解黏性末端连接的几种情况
一、同种内切酶生产的黏性末端的连接
二、同尾酶生产的黏性末端的连接
三、不同黏性末端的连接
第六章重组DNA导入受体细胞
感受态：就是细菌吸收转化因子的生理状态
转化?大肠杆菌捕获质粒DNA的过程
转染：大肠杆菌捕获噬菌体DNA的过程
转化率：每 g DNA转化成功的细菌克隆数
2.问答题
（1）大肠杆菌作为受体细胞应具备的条件
1.感受态细胞 3. DNA重组缺陷
2.限制性内切酶缺陷型 4. 符合安全标准
（2）转化的过程详见110页第二段
(1)吸附(2)转入(3)自稳(4)表达
（3）PEG（聚乙二醇）使细胞壁具有通透性，允许DNA进入。CaCl2使细胞膜具有通透性，允许DNA进入。
CaCl2使细胞膜具有通透性，允许DNA进入。
（4）外源基因导入植物细胞的方法。
1. 叶盘法
2. 电击法
3.基因枪法
4. 土壤农杆菌（agrobacterium）介导
叶盘法实际上是对共培养法加以改进后而创立的一种转化方法。用农杆菌感染叶片外植体并短期共培养。在培养过程中，农杆菌的vir基因被诱导，它的活化可以启动T-DNA向植物细胞的转移。共培养后，也要进行转化的外植体的筛选、愈伤组织的培养、诱导分化等步骤，以得到再生植株
第七章重组体的鉴定与筛选
转化子：就是掺入或导入外源DNA后获得了新的遗传标志的细菌细胞或其他受体细胞。
Southern blotting：用DNA探针检测DNA样品从宿主细胞中提取DNA（或质粒载体），再用探针杂交
Northern blotting:;用DNA（或RNA）探针检测RNA样品从宿主细胞中提取RNA，再用探针杂交
worthern blotting:采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，?探针?是抗体，?显色?用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。
2.问答题
（1）核酸探针制备的思路（课本121）
（2）哪些检测方法易出现假阳性，哪些较准确。
（3）菌落原位杂交筛选。（课本120）
对应的菌斑或噬菌斑位臵不变，可以直接找出阳性菌落。
（4）酶联免疫吸附测定（ELISA）的原理与步骤
原理：一抗（primary antibody）：与目标分子的特异结合。
二抗（secondary antibody）：与一抗的特异性结合。
酶连（enzyme-linke）：二抗上携带一种酶能催化一种反应将无色的底物转变为有色的物质（或发光），再通过比色测定有色物质的含量（或光强度），从而推测目标分子的含量
（1）固定样品（2）一抗结合（3）二抗结合（4）显色反应（5）比色
（5）植物转化体报道基因有哪些。
（1）大肠杆菌的β-D-葡萄糖醛酸糖苷酶（β-D-glucuronidase，GUS）；（2）细菌和萤火虫的荧光素酶（luciferase）；
（3）水母绿色荧光蛋白（GFP）基因
第八章目的基因的表达
1.问答题
（2）原核表达系统的注意事项
1外源基因不能带有内含子2. 必须用cDNA3. 不能直接用真核基因组DNA4. 必须利用原核细胞的调控原件（启动子等）5. 防止外源基因产物对宿主细胞的毒害
（3）最佳启动子必须具备的条件
①必须是一种强启动子②应呈现低水平的基础转录③应是可诱导型的
（4）外源蛋白在大肠杆菌中的表达部位
1. 细胞质中表达
2. 周质中表达
3. 胞外表达
（5）影响外源基因表达效率的因素
1. 启动子的结构对表达效率的影响（1） -35区和-10区的碱基顺序（2）-35区与-10区之间的距离
2. 转译起始序列对表达效率的影响（1）S-D序列（2）起始密码AUG
3. 启动子与外源基因之间的距离
4. 转录终止区对表达效率的影响
5.载体拷贝数及稳定性对表达效率的影响
6.外源蛋白在菌体中的稳定性对表达效率的影响
（6）提高表达水平常用的方法
选择强启动子序列，如tac 等
调整S-D序列与AUG碱的距离
改变起始密码上面的几组密码子
增加mRNA的拷贝数和稳定性
减轻宿主细胞的代谢负荷
第九章基因工程的主要技术原理
（1）电泳有哪几种，分辨率决定于什么，哪种分辩率最高，染色的方法有哪些。
琼脂糖凝胶电泳，聚丙烯酰胺凝胶电泳
空隙大小决定其分辨分子大小的能力
聚丙烯酰胺凝胶电泳优点是比琼脂糖凝胶的分辨率高的多
前者溴化乙锭EB是扁平分子，能插入DNA碱基之间，但不与琼脂糖结合。EB
在300nm紫外光照射下能发红色荧光，即可显示DNA泳带在凝胶中所处的位臵。荧光强度与DNA含量及大小成正比
后者可以用EB来染色；也可以用银染色:银离子(Ag+)可与核酸形成稳定的复合物，然后用还原剂(如甲醛)使Ag+还原成银颗粒，可把核酸电泳带染色黑褐色。（2）了解电泳的原理。
在确定的条件下，带电粒子在单位电场强度作用下，单位时间内移动的距离（即迁移率）为常数，是该带电粒子的物化特征性常数。不同带电粒子因所带电荷不同，或虽所带电荷相同但荷质比不同，在同一电场中电泳，经一定时间后，由于移动距离不同而相互分离。
2. 电泳迁移率同电场的强度和分子本身所带的净电荷数目成正比。
3. 电泳迁移率同分子与介质的摩擦系数成反比
4.摩擦系数主要与分子的大小、形状以及介质的粘度有关。
5.如果电场强度一定（电压和电极距离）、电泳介质相同（电泳液和凝胶）：
分子在电场中迁移的速度主要取决于分子本身的大小和形状。
形状相似的分子的迁移速度主要与分子量相关: 分子量越大，移动越慢。
（3）相同分子量的DNA哪种电泳最快，哪种次之。
闭合环状卷曲超螺旋迁移最快，线性分子次之
伸展开环状最慢
(4)P CR技术的原理与步骤，发明人，应用，与反应体系。引物设计的原则与特点。（课本31和32页）
1971年Khorana提出体外人工复制DNA的设想。当时由于引物和DNA聚合酶及DNA测序技术都没有解决，设想未能实现1985年Cetus公司的科学家K.B. Mullis 发明了PCR，使这一设想变成现实Mullis由此获得1993年诺贝尔化学奖
原理：
步骤：第一步变性:94-95 oC下5分钟，模板DNA双链完全变性成单链。第二步:复性:50-60 oC下1分钟，引物优先与模板复性。第三步延伸:72 oC下1-2分钟，Taq DNA聚合酶在引物的3‘端上加上核苷酸。第四步变性:94 oC下1分钟，新合成的DNA双链又变性成单链模板。第五步重复
5）了解两种测序方法。课本36和37页
高中生物《基因工程》练习题(含答案解析)
高中生物《基因工程》练习题 题号一二总分 得分 一、单选题（本大题共20小题，共20.0分） 1.如图为DNA分子的某一片段，其中①②③分别表示某种酶的作用部位，则相应的酶依次为（） A. 解旋酶、限制酶、DNA连接酶 B. 限制酶、解旋酶、DNA连接酶 C. 限制酶、DNA连接酶、解旋酶 D. DNA连接酶、限制酶、解旋酶 2.下列有关基因工程技术的叙述，正确的是（） A. 重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和运载体 B. 所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列 C. 选用细菌为重组质粒受体细胞是因为质粒易进入细菌细胞且繁殖快 D. 只要目的基因进入受体细胞就能成功实现表达 3.如图为基因表达载体的模式图。下列有关基因工程的说法错误的 是（） A. 基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建 B. 任何基因表达载体的构建都是一样的，没有差别 C. 图中启动子和终止子不同与起始密码子和终止密码子 D. 抗生素抗性基因的作用是作为标记基因，用于鉴别受体细胞中是否导入了载体 4.一些细菌能借助限制性核酸内切酶抵御外来入侵者，而其自身的基因组DNA经预先修饰能躲避 限制酶的降解。下列在动物体内发生的过程中，与上述细菌行为相似的是（） A. 巨噬细胞内溶酶体杀灭病原体 B. T细胞受抗原刺激分泌淋巴因子
C. 组织液中抗体与抗原的特异性结合 D. 疫苗诱导机体产生对病原体的免疫 5.某目的基因两侧的DNA序列所含的限制性核酸内切酶位点如图所示，最好应选用下列哪种质粒 作为载体（） A. B. C. D. 6.下图是研究人员利用供体生物DNA中无限增殖调控基因制备单克隆抗体的思路流程。下列相关 叙述正确的是（） A. 酶a、酶b作用位点分别为氢键和磷酸二酯键 B. Ⅰ是经免疫的记忆细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交瘤细胞 C. 筛选出既能无限增殖又能产生专一抗体的Ⅱ必须通过分子检测 D. 上述制备单克隆抗体的方法涉及转基因技术和动物细胞核移植技术 7.下列关于基因工程技术的说法，正确的是（） A. 切割质粒的限制酶均只能特异性地识别3-6个核苷酸序列 B. PCR反应中两种引物的碱基间应互补以保证与模板链的正常结合 C. 载体质粒通常采用抗生素抗性基因作为标记基因 D. 目的基因必须位于重组质粒的启动子和终止子之间才能进行复制 8.在其他条件具备的情况下，在试管中进入物质X和物质Z，可得到相应产物Y．下列叙述正确 的是（）
基因工程练习题(附答案)
基因工程练习题 1、在基因工程中使用的限制性核酸内切酶，其作用是( ) A、将目的基因从染色体上切割出来 B、识别并切割特定的DNA核苷酸序列 C、将目的基因与运载体结合 D、将目的基因导入受体细胞 2、基因工程中常用细菌等原核生物作受体细胞的原因不包括( ) A、繁殖速度快 B、遗传物质相对较少 C、多为单细胞，操作简便 D、DNA为单链，变异少 3、基因工程是DNA分子水平的操作，下列有关基因工程的叙述中，错误的是( ) A、限制酶只用于切割获取目的基因 B、载体与目的基因可以用同一种限制酶处理 C、基因工程所用的工具酶是限制酶，DNA连接酶 D、带有目的基因的载体是否进入受体细胞需检测 4、运用现代生物技术，将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因整合到棉花细胞中，为检测实验是否成功，最方便的方法是检测棉花植株是否有( ) A、抗虫基因 B、抗虫基因产物 C、新的细胞核 D、相应性状 5、转基因动物转基因时的受体细胞是( ) A、受精卵 B、精细胞 C、卵细胞 D、体细胞 6、基因工程中常见的载体是( ) A、质体 B、染色体 C、质粒 D、线粒体 7、水母发光蛋白由236个氨基酸构成，其中Asp、Gly、Ser构成发光环，现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记，在转基因技术中，这种蛋白质的作用是( ) A、促使目的基因导入宿主细胞中B、促使目的基因在宿主细胞中复制 C、使目的基因容易被检测出来 D、使目的基因容易成功表达 8、运用现代生物技术的育种方法，将抗菜青虫的Bt基因转移到优质油菜中，培育出转基因抗虫的油菜品种，这一品种在生长过程中能产生特异的杀虫蛋白质，对菜青虫有显著抗性，能大大减轻菜青虫对油菜的危害，提高油菜产量，减少农药使用，据以上信息，下列叙述正确的是( ) A、Bt基因的化学成分是蛋白质 B、Bt基因中有菜青虫的遗传物质 C、转基因抗虫油菜能产生杀虫蛋白是由于具有Bt基因 D、转基因抗虫油菜产生的杀虫蛋白是无机物 9、人的糖蛋白必须经内质网和高尔基体进一步加工合成，通过转基因技术，可以使人的糖蛋白基因得以表达的受体细胞是( ) A、大肠杆菌 B、酵母菌 C、T 噬菌体 D、质粒DNA 4 10、不属于质粒被选为基因运载体的理由是（） A．能复制 B.有多个限制酶切点C．具有标记基因D．它是环状DNA
基因工程的应用练习题共10页
基因工程的应用练习题 一、选择题 1、下列各项中，说明目的基因完成了表达的是 A、棉珠中含有杀虫蛋白基因 B、大肠杆菌中具有胰岛素基因 C、酵母菌中产生了干扰素 D、抗病毒基因导入土豆细胞中 2、转基因动物是指 A、提供基因的动物 B、基因组中增加外源基因的动物 C、能产生白蛋白的动物 D、能表达基因信息的动物 3、抗病毒转基因植物成功表达后，以下说法正确的是 A．抗病毒转基因植物，可以抵抗所有病毒 B．抗病毒转基因植物，对病毒的抗性具有局限性或特异性 C．抗病毒转基因植物可以抗害虫 D．抗病毒转基因植物可以稳定遗传，不会变异 4．如果通过转基因技术，成功改造了某血友病女性的造血干细胞，使其凝血功能全部恢复正常。当她与正常男性结婚，婚后所生子女的表现型为 A．儿子、女儿全部正常 B．儿子、女儿中各一半正常 C．儿子全部有病，女儿全部正常 D．儿子全部正常，女儿全部有病5．若利用基因工程技术培育能固氮的水稻新品种，其在环保上的重要意义是A．减少氮肥的使用量，降低生产成本 B．减少氮肥的使用量，节约能源C．避免氮肥过多引起环境污染 D．改良土壤结构 6．疗白化病、苯丙酮尿症等人类遗传病的根本途径是 A．口服化学药物 B．注射化学药物 C．采用基因治疗 D．利用辐射或药物诱发致病基因突变7．在基因诊断技术中，所用的探针DNA分子中必须存在一定量的放射性同位素，后者的作用是 A．为形成杂交的DNA分子提供能量 B．引起探针DNA产生不定向的基因突变 C. 作为探针DNA的示踪元素D．增加探针DNA的分子量 8．下列关于基因工程应用的叙述，正确的是 A．基因治疗就是把缺陷基因诱变成正常基因 B．一种基因探针能检测水体中的各种病毒 C．基因诊断的基本原理是DNA分子杂交D．原核基因不能用来进行真核生物的遗传改良 9．采用基因工程的方法培育抗棉虫，下列导入目的基因的作法正确的是 ①将毒素蛋白注射到棉受精卵中②将编码毒素蛋白的DNA序列，注射到棉受精卵中 ③将编码毒素蛋白的DNA序列，与质粒重组，导入细菌，用该细菌感染棉的体细胞，再进行组织培养 ④将编码毒素蛋白的DNA序列，与细菌质粒重组，注射到棉的子房并进入受精卵 A．①② B．②③C．③④ D．④① 10．科学家能利用基因工程技术培育出特殊的西红柿、香蕉，食用后人体内可产生特
基因工程原理练习题及其答案
基因工程原理练习题及其答案 一、填空题 1．基因工程是_________年代发展起来的遗传学的一个分支学科。 2．基因工程的两个基本特点是：(1)____________，(2)___________。 3．基因克隆中三个基本要点是：___________；_________和__________。 4．碱裂解提取溶液I中的葡萄糖的作用________________、_______________、______________________________。 5．同一质粒不同构型在电泳过程中迁移速率为。 6．部分酶切可采取的措施有：(1)____________(2)___________ (3)___________等。7．第一个分离的限制性切核酸酶是___________；而第一个用于构建重组体的限制性切核酸酶是_____________。 8．限制性切核酸酶BsuRI和HaeⅢ的来源不同，但识别的序列都是_________，它们属于_____________。 9．DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_____________切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段，具有两种酶活性：(1)____________；(2)________________的活性。10．为了防止DNA的自身环化，可用_____________去双链DNA__________________。11．EGTA是____________离子螯合剂。 12．测序酶是修饰了的T7 DNA聚合酶，它只有_____________酶的活性，而没有_______酶的活性。 13．切口移位(nick translation)法标记DNA的基本原理在于利用_________的_______和______的作用。 14．欲将某一具有突出单链末端的双链DNA分子转变成平末端的双链形式，通常可采用_________或_______________。 15．反转录酶除了催化DNA的合成外，还具有____________的作用，可以将DNA- RNA杂种双链中的___________水解掉。 16．基因工程中有3种主要类型的载体：_______________、_____________、______________。 17．就克隆一个基因(DNA片段)来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：_______________、_____________、______________。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。 18．琼脂糖凝胶的分辨力与胶浓度的关系是。 19．如果改变反应条件就会影响酶的专一性和切割效率，称为________________。20．影响限制性切酶活性的因素________________、________________、________________、________________。 21．连接反应的实用温度为________________。 22．pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体。pUC系列的载体是通过 和两种质粒改造而来。它的复制子来自，Amp 抗性基因则是来自。
2018年高考生物-基因工程与细胞工程-专题练习及答案解析
2018年高考生物专题练习 基因工程与细胞工程 1．(2017东北三省三校一联,38)马铃薯是重要的经济作物,人类在(马铃薯的)基因育种方面取得丰硕成果。（1）马铃薯是双子叶植物,常用__________法将目的基因导入马铃薯体细胞中。构建好的基因表达载体包括目的基因、__________、__________、__________、复制原点五部分。 （2）马铃薯得病会导致产量下降。基因工程中常用的抗病基因为__________(写一种即可)。 （3）科学家还培育出抗除草剂的转基因马铃薯,主要从两个方面进行设计： ①修饰除草剂作用的靶蛋白,使其对除草剂__________,或使靶蛋白过量表达,植物吸收除草剂后仍能正常代谢。 ②引入酶或酶系统,在除草剂发生作用前__________。 （4）将目的基因导入受体细胞后,还需对转基因植物进行__________。 2．(2017湖北武汉一模,38)基因敲除是应用DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。“基因敲除细胞”的构建过程如下： 第一步,从小鼠囊胚中分离出胚胎干细胞(ES),在培养基中扩增。这些细胞中需要改造的基因称为“靶基因”;第二步,构建基因表达载体。取与靶基因序列同源的目的基因(同源臂),在同源臂上接入neo R(新霉素抵抗基因)等。由于同源臂与靶基因的DNA正好配对,所以能像“准星”一样,将表达载体准确地带到靶基因的位置; 第三步,将表达载体导入胚胎干细胞,并与其内靶基因同源重组,完成胚胎干细胞的基因改造; 第四步,基因改造后的胚胎干细胞增殖、筛选。基本原理如图所示。 请根据上述资料,回答下列问题。 （1）实施基因工程的核心步骤是__________,基因表达载体中的__________是位于基因首端的有特殊结构的DNA片段;在构建的过程中所需要的工具酶是__________。 （2）如果要获得一只含目的基因的小鼠,则选择的受体细胞通常是__________,原因是__________。 （3）上述资料中neo R基因的作用最可能是__________。为了鉴定目的基因是否成功表达,有时进行抗原—抗体杂交,目的蛋白相当于__________。 （4）该项技术具有广阔的应用前景,请试举一例：__________。 3．(2017河北衡水中学一模,38)科学家从某细菌中提取抗盐基因,转入烟草并培育成转基因抗盐烟草。下图是转基因抗盐烟草的培育过程,含目的基因的DNA和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点。请分析回答下列问题。
基因工程测试题
基因工程测试题 一、选择题： 1.人的糖蛋白必须经内质网和高尔基体进一步加工合成。通过转基因技术可以使人的糖蛋白基因得以表达的受体细胞是( ) A.大肠杆菌 B.酵母菌 C.肺炎双球菌 D.乳酸菌 2.下列有关基因工程的叙述，正确的是( ) A．DNA连接酶将碱基对之间的氢键连接起来B．目的基因导入受体细胞后，受体细胞即发生基因突变C．限制性核酸内切酶识别序列越短，则该序列在DNA 中出现的几率就越大 D．常用的载体有大肠杆菌、噬菌体和动植物病毒等 3.我国科学家运用基因工程技术，将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因导入棉花细胞并成功表达，培育出了抗虫棉。下列叙述不正确的是( ) A.抗虫基因的提取和运输需要专用的工具酶和载体 B.重组DNA 分子中替换一个碱基对，不一定导致毒蛋白的毒性丧失 C.抗虫棉的抗虫基因可通过花粉传递到近缘作物，从而造成基因污染 D.转基因抗虫棉是否具有抗虫特性是通过检测棉花对抗生素抗性来确定的
4.如图是获得抗虫棉的技术流程示意图。卡那霉素抗性基因(kan r)常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基 生长。下列叙述正确的是( ) A.构建重组质粒过程中需要限制性核酸内切酶和DNA 连接酶 B.愈伤组织的分化产生了不同基因型的植株 C.卡那霉素抗性基因(kan r)中有该过程所利用的限制性核酸内切酶的识别位点 D.抗虫棉有性生殖后代能保持抗虫性状的稳定遗传 5.上海医学研究所成功培育出第一头携带人白蛋白基因的转基因牛。他们还研究出一种可大大提高基因表达水平的新方法，使转基因动物乳汁中的药物蛋白含量提高30 多倍，以下与此有关的叙述中正确的是( ) A.“转基因动物”是指体细胞中出现了新基因的动物 B.“提高基因表达水平”是指设法使牛的乳腺细胞中含有更多的人白蛋白基因 C.只有从转基因牛乳汁中才能获取人白蛋白，是因为人白蛋白基因只在牛乳腺细胞中含有
基因工程原理练习题及其答案
基因工程复习题 题型：名词解释（10个）30分；填空（每空1分） 20分；选择题（每题1分）10分；简答题（4个）20分；论述题（2个）20分。 第一章绪论 1.名词解释： 基因工程：按照预先设计好的蓝图，利用现代分子生物学技术，特别是酶学技术，对遗传物质DNA直接进行体外重组操作与改造，将一种生物（供体）的基因转移到另外一种生物（受体）中去，从而实现受体生物的定向改造与改良。 遗传工程广义：指以改变生物有机体性状为目标，采用类似工程技术手段而进行的对遗传物质的操作，以改良品质或创造新品种。包括细胞工程、染色体工程、细胞器工程和基因工程等不同的技术层次。狭义：基因工程。 克隆：无性(繁殖)系或纯系。指由同个祖先经过无性繁殖方式得到的一群由遗传上同一的DNA分子、细胞或个体组成的特殊生命群体。 2．什么是基因克隆及基本要点? 3.举例说明基因工程发展过程中的三个重大事件。 A) 限制性内切酶和DNA连接酶的发现（标志着DNA重组时代的开始）；B) 载体的使用；C) 1970年，逆转录酶及抗性标记的发现。 4.基因工程研究的主要内容是什么？ 基础研究： 基因工程克隆载体的研究 基因工程受体系统的研究 目的基因的研究 基因工程工具酶的研究 基因工程新技术的研究 应用研究： 基因工程药物研究 转基因动植物的研究 在食品、化学、能源和环境保护等方面的应用研究 第二章基因克隆的工具酶 1.名词解释： 限制性核酸内切酶：一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列，并使每条链的一个磷酸二酯键断开的内脱氧核糖核酸酶。 回文结构：双链DNA中的一段倒置重复序列，当该序列的双链被打开后，可形成发夹结构。 同尾酶：来源不同、识别序列不同，但产生相同粘性末端的酶。 同裂酶：不同来源的限制酶可切割同一靶序列和具有相同的识别序列 黏性末端：DNA末端一条链突出的几个核苷酸能与另一个具有突出单链的DNA末端通过互补配对粘合，这样的DNA末端，称为粘性末端。 平末端：DNA片段的末端是平齐的。 限制性核酸内切酶的酶活性单位（U）：在酶的最适反应条件下，在50μl容积中，60分钟内完全切割1μg λDNA所需的酶量为1个酶活性单位（unit 或U） 限制性核酸内切酶的星活性：指限制性内切酶在非标准条件下，对与识别序列相似的其它序列也进行切割反应，导致出现非特异性的DNA片段的现象。
高二生物选修三基因工程测试题(含答案)
1 基因工程测试题 姓名____________ 一、选择题 1．已知某种限制性内切酶在一线性DNA 分子上有3个酶切位点，如图中箭头所指，如果该线性DNA 分子在3个酶切位点上都被该酶切断，则会产生a 、b 、c 、d 四种不同长度的DNA 片段。现在多个上述线性DNA 分子，若在每个DNA 分子上至少有1个酶切位点被该酶切断，则从理论上讲，经该酶切后，这些线性DNA 分子最多能产生长度不同的DNA 片段种类数是 ( ) A ．3 B ．4 C ．9 D ．12 2．下图是将人的生长激素基因导入细菌B 细胞内制造“工程菌”的示意图。已知细菌B 细胞内不含质粒A ，也不含质粒A 上的基因。判断下列说法正确的是 ( ) A ．将重组质粒导入细菌 B 常用的方法是显微注射法 B ．将完成导入过程后的细菌涂布在含有氨苄青霉素的培养基上，能生长的只是导入了重组质粒的细菌 C ．将完成导入过程后的细菌涂布在含有四环素的培养基上，能生长的就是导入了质粒A 的细菌 D ．目的基因成功表达的标志是受体细胞能在含有氨苄青霉素的培养基上生长 3．下列关于基因工程的叙述，错误的是（ ） A ．目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物 B ．限制性核酸内切酶和DNA 连接酶是两类常用的工具酶 C ．人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性 D ．载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA 的细胞和促进目的基因的表达 4. 将 ada （腺苷酸脱氨酶基因）通过质粒pET28b 导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。下列叙述错误的是（ ） A 、每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒 B 、每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点 C 、每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一个ada D 、每个插入的ada 至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子 5.北极比目鱼中有抗冻基因，其编码的抗冻蛋白具有11个氨基酸的重复序列，该序列重复次数越多，抗冻能力越强，下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，有关叙述正确的是（ ） A 、过程①获取的目的基因，可用于基因工程和比目鱼基因组测序 B 、多个抗冻基因编码区依次相连成能表达的新基因，不能得到抗冻性增强的抗冻蛋白， C 、过程②构成的重组质粒缺乏标记基因，需要转入农杆菌才能进行筛选 D 、应用DNA 探针技术，可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其完全表达 6.在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是（ ） A 用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸 B 用DNA 连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体 C 将重组DNA 分子导入原生质体 D 用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞 7.下列关于基因工程的叙述，正确的是: ( ) A.基因工程往往以细菌抗药性基因为目的基因 B.重组DNA 的形成和扩增是在细胞内完成的 C.基因工程育种能够定向地改造生物性状，快速形成新物种 D.限制性内切酶和DNA 连接酶是构建重组DNA 必需的工具酶 8．下列有关基因工程和蛋白质工程的叙述，正确的是( ) A ．基因工程需对基因进行分子水平操作，蛋白质工程不对基因进行操作 B ．基因工程合成的是天然存在的蛋白质，蛋白质工程合成的可以不是天然存在的蛋白质 C ．基因工程是分子水平操作，蛋白质工程是细胞水平（或性状水平）操作 D ．基因工程完全不同于蛋白质工程 9．PCR 是一种体外迅速扩增DNA 片段的技术，下列有关PCR 过程的 叙述，不正确的是( ) A ．变性过程中破坏的是DNA 分子内碱基对之间的氢键 B ．复性过程中引物与DNA 模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成 C ．延伸过程中需要DNA 聚合酶、A TP 、四种核糖核苷酸 D ．PCR 与细胞内DNA 复制相比所需要酶的最适温度较高 10.“工程菌”是指（ ） A ．用物理或化学方法诱发菌类自身某些基因得到高效表达的菌类细胞株系 B ．用遗传工程的方法，使同种不同株系的菌类杂交，得到的新细胞株系 C ．用基因工程的方法，使外源基因得到高效表达的菌类细胞株系 D ．从自然界中选取能迅速增殖的菌类 二、非选择题 11. 为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。 (1)获得耐盐基因后，构建重组DNA 分子所用的限制性内切酶作用于图中的__________处，DNA 连接酶作用于____________处。(填“a ”或“b ”) (2)将重组DNA 分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和_____________法。 (3)由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要利用_______________技术，该技术的核心是__________和__________。 (4)为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的________作探针进行分子杂交检测．又要用__________方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。 12．在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kan ）常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下图为获得抗虫棉的技术流程。 请据图回答： （1）A 过程需要的酶有 _______________________________________。 （2）B 过程及其结果体现了质粒作为运载体必须具备的两个条件是____________________________________________________________。 （3）C 过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外，还必须加入_____________。 （4）如果利用DNA 分子杂交原理对再生植株进行检测，D 过程应该用__________________________________________________作为探针。 线性DNA 分子的酶切示 意图
基因工程作业题及答案
第二章 1. 名词解释：核酸内切酶、核酸内切限制酶、同裂酶、同尾酶、核酸外切酶、末端脱氧核苷酸转移酶 答： 核酸内切酶：是一类从多核苷酸链的内部催化磷酸二酯键断裂的酶。 核酸内切限制酶：是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列（4—8bp），并由此处切割DNA双链的核酸内切酶。 同裂酶：识别位点的序列相同的限制性内切酶。 同尾酶：识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端。 核酸外切酶：是一类从多核苷酸链的一头开始催化降解核苷酸的酶。 末端脱氧核苷酸转移酶：可以不需要模板，在单链DNA或突出的双链DNA 3’-OH端随机 添加dNTPs的酶 2. 限制性内切核酸酶的命名原则是什么？ 答：限制性内切核酸酶按属名和种名相结合的原则命名的，即：属名+种名+株名+序号； 首字母：取属名的第一个字母，且斜体大写； 第二字母：取种名的第一个字母，斜体小写； 第三字母：(1)取种名的第二个字母，斜体小写； (2)若种名有词头，且已命名过限制酶，则取词头后的第一字母代替。 第四字母：若有株名，株名则作为第四字母，是否大小写，根据原来的情况而定，但用正体。 顺序号：若在同一菌株中分离了几种限制酶，则按先后顺序冠以I、Ⅱ、Ⅲ、…等，用正体。 3．部分酶切可采取的措施有哪些？ 答：1）缩短保温时间 2）降低反应温度 3）减少酶的用量 4. 在序列5'-CGAACATATGGAGT-3'中含有一个6bp 的Ⅱ类限制性内切核酸酶的识别序列，该位点的序列可能是什么? 答：回文序列是：5'-CATA TG-3， 5．什么是限制性内切核酸酶的星号活性? 受哪些因素影响? 答：Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。条件的改变，限制酶的特异性就会松 动，识别的序列和切割都有一些改变，改变后的活性通常称第二活性，而将这种因 条件的改变会出现第二活性的酶的右上角加一个星号表示，因此第二活性又称为星 活性。 概括起来，诱发星活性的因素有如下几种：(1)高甘油含量(>5％, v／v)；(2)限制性 内切核酸酶用量过高(>100U／ugDNA)；(3)低离子强度(<25 mmol／L)；(4)高pH(8．0 以上)；(5)含有有机溶剂，如DMSO，乙醇等；(6)有非Mg2+的二价阳离子存在(如 Mn2+，Cu2+，C02+，Zn2+等)。 第三章 1．如何将野生型的λ噬菌体改造成为一个理想的载体? 答：①删除λ噬菌体的非必需区，留出插入空间；并在余下的非必须区内制造限制酶切点 ②引进某些突变表型，作为选择标记 ③突变某些基因，使它成为安全载体 ④删除λDNA必须区段上常用的限制酶切点
基因工程测试题经典
xxxXXXXX 学校XXXX 年学年度第二学期第二次月考 XXX 年级xx 班级 姓名：_______________班级：_______________考号：_______________ 一、选择题 （每空？ 分，共？ 分） 1、下列有关基因工程和蛋白质工程的叙述，正确的是 A ．蛋白质工程的流程和天然蛋白质合成的过程是相同的 B ．基因工程合成的是天然存在的蛋白质，蛋白质工程合成的可以不是天然存在的蛋白质 C ．基因工程是分子水平操作，蛋白质工程是细胞水平（或性状水平）操作 D ．基因工程完全不同于蛋白质工程 2、PCR 是一种体外迅速扩增DNA 片段的技术，下列有关PCR 过程的叙述，不正确的是 A ．变性过程中破坏的是DNA 分子内碱基对之间的氢键 B ．复性过程中引物与DNA 模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成 C ．延伸过程中需要DNA 聚合酶、ATP 、四种核糖核苷酸 D ．PCR 与细胞内 DNA 复制相比所需要酶的最适温度较高 3、35．采用基因工程技术将人凝血因子基因导入山羊受精卵，培育出了转基因羊。但是人凝血因子只存在于该转基因羊的乳汁中。下列有关叙述，正确的是（ ） A ．人体细胞中凝血因子基因的碱基对数目，小于凝血因子氨基酸数目的3倍 B ．可用显微注射技术将含有人凝血因子基因的重组DNA 分子导入羊的受精卵 C ．在该转基因羊中，人凝血因子基因只存在于乳腺细胞，而不存在于其他体细胞中 D ．人凝血因子基因开始转录后，DNA 连接酶以DNA 分子的一条链为模板合成mRNA
4、ch1L基因是蓝细菌拟核DNA上控制叶绿素合成的基因．为研究该基因对叶绿素合成的控制，需要构建该种生物缺失ch1L基因的变异株细胞．技术路线如图所示，对此描述错误的是（） 5、下图表示基因工程中目的基因的获取示意图，不正确的是： A、同种生物的基因组文库大于cDNA文库 B、③表示PCR技术，用来扩增目的基因 C、从基因文库中要得到所需目的基因，可根据目的基因的有关信息来获取 D、只要基因的核苷酸序列已知，就只能通过人工合成的方法获取 6、图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序 列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为：C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。下列分析中正确的是：
(完整版)基因工程练习题
2007-2008学年度东城中学高三生物第十二单元 基因工程练习题 1、基因工程又叫基因拼接技术。 (1)在该技术中，切割DNA 的工具是限制酶，它能识别某一特定核苷酸序列，使两个核苷酸之间的 断开。限制酶切割产生的DNA 片段末端有两种形式，分别是 、 。 (2)基因工程中常用“分子缝合针”是连接酶，根据酶的来源不同可分为 、 两类，其中前者只可以连接 ，后者既可以连接 也可以连接 。 2.(10分)生物学家通过基因工程培育出了能够通过乳房生物反应器生产人的血清蛋白。 （1） “分子手术刀” _ _ ， （2） “分子缝合针” ， （3） “分子运输车” 基因进入受体细胞的载体 。 （4）操作步骤：从人的___基因组文库_________获取目的基因；目的基因与 ____________结合构建基因表达载体；在基因表达载体中还应插入___________和 终止子。然后把基因表达载体导入牛的__受精卵__________，通过发育形成的牛 体细胞含人的_________________，成熟的牛产的的奶中含有 ___________________，证明基因操作成功。 （5）人的基因在牛体内能表达,说明人和牛___________ 3、限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G ↓GATCC —，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点 是—↓GATC —。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有一个酶Ⅱ的切点。 （1）请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。 （2）请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。 （3）在DNA 连接酶作用下，上述两种不同限制酶切割 后形成的黏性末端能否连接？为什么？ ４、聚合酶链反应（PCR ）是生物学家在实验室以少量 样品制备大量DNA 的生化技术，反应中新合成的DNA 又可以作为下一轮循环反应的模板。其过程如右图所示： （1）反应系统中应加入哪些物质？__少量样品基因、A TP 、DNA 解旋酶等酶4种游 —↓GATC —……—↓GATC — — CTAG ↑—……— CTAG ↑— 用酶Ⅱ切割 目的基因 — GATC —……— GATC — —CTAG —……—CTAG — 目的基因
基因工程测试题及答案
基因工程测练题 1、将人的抗病毒干扰基因“嫁接”到烟草的DNA分子中，可使烟草获得抗病毒的能力，形成转基 因产品。试分析回答： (1) 人的基因工程之所以能接到植物体中去，原因是：。(4)不同生物间基因移植成功，说明生物共有一套，从进化的角度看，这些生物具 有。 (3) 烟草具有抗病毒能力，说明烟草体内产生：。 (4) 烟草DNA分子被“嫁接”上或“切割”掉某个基因，实际并不影响遗传信息的表达功能。这说 明。 (5) 有人认为，转基因新产品也是一把双刃剑，有如船能载舟也能覆舟，甚至可能带来灾难性的 后果，你是否支持这一观点？如果支持，请你举出一个可能出现的灾难性后果的实例： 。 2、1990年对一位缺乏腺苷脱氨酶基因，而患先天性体液兔疫缺陷病的美国女孩进行基因治疗， 其方法是首先将患者的白细胞取出作体外培养，然后用逆转录病毒将正常腺苷脱氨酶基因转入人工培养的白细胞中，再将这些转基因白细胞回输到患者的体内，经过多次治疗，患者的免疫功能趋于正常。 （1）在基因治疗过程中，逆转录病毒的作用相当于基因工程中基因操作工具中的，此基因工程中的目的基因是，目的基因的受体细胞是。 （2）将转基因白细胞多次回输到患者体内后，兔疫能力趋于正常是由于产生了，产生这种物质的两个基本步骤是、。 3、在植物基因工程中，用土壤农杆菌中的Ti质粒作为运载体，把目的基因重组入Ti质粒上的 T-DNA片段中，再将重组的T-DNA插入植物细胞的染色体DNA中。 （1）科学家在进行上述基因操作时，要用同一种分别切割质粒和目的基因，质粒的黏性末端与目的基因DNA片段的黏性末端就可通过而黏合。 （2）将携带抗除草剂基因的重组Ti质粒导入二倍体油菜细胞，经培养、筛选获得一株有抗除草剂特性的转基因植株。经分析，该植株含有一个携带目的基因的T-DNA片段，因此可以把它看作是杂合子。理论上，在该转基因植株自交F1代中，仍具有抗除草剂特性的植株占总数的，原因。（3）种植上述转基因油菜，它所携带的目的基因可以通过花粉传递给近缘物种，造成“基因污染”。如果把目的基因导入叶绿体DNA中，就可以避免“基因污染”，原因是: 。
基因工程练习题
一．单选题 1、下面是5种限制性内切酶对分子的识别序列和剪切位点图(↓表示剪切点、切出 的断面为黏性末端): 限制酶1:限制酶2: 限制酶3:限制酶4: 限制酶5:请指出下列哪组表达正确( ) A.限制酶2和4识别的序列都包含4对碱基 B.限制酶3和5识别的序列都包含5对碱基 C.限制酶1和3剪出的黏性末端相同 D.限制酶1和2剪出的黏性末端相同 2、科学家用纳米技术制造出一种“生物导弹”,可以携带分子。把它注射入组织中,可以通过细胞的内吞作用的方式进入细胞内,被释放出来,进入到细胞核内,最终整合到细胞染色体中,成为细胞基因组的一部分,整合到细胞染色体中的过程,属于 ( ) A.基因突变 B.基因重组 C.基因互换 D.染色体变异 3、某病毒的基因组为双链,其一条链上的局部序列为,以该链的互补链为模板转录出相应的,后者又在宿主细胞中逆转录成单链(称为)。由这条链为模板复制出的单链上,相应的局部序列应为 ( ) A. B. C. D. 4、下列关于目的基因导入受体细胞的描述不正确的是( ) A.基因枪法导入植物体细胞的方法比较经济有效 B.显微注射技术是转基因动物中采用最多的方法 C.大肠杆菌最常用的转化方法是:使细胞的生理状态发生改变 D.农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞最常用的方法 5、科学家已能运用基因工程技术,让羊合成并由乳腺分泌抗体。下列相关叙述中正确的是( ) ①该技术将导致定向变异 ②连接酶把目的基因与运载体黏性末端的碱基对连接起来形成氢键
③蛋白质中的氨基酸序列可为合成目的基因提供资料 ④受精卵是理想的受体细胞 A.①②③④ B.①③④ C.②③④ D.①②④ 6、下面各项中与蛋白质工程没有直接关系的是( ) A.利用各种高科技手段分析蛋白质的分子结构 B.研究并改变某种蛋白质相关基因的碱基序列 C.设计和制造自然界中没有的人工蛋白质 D.用基因替换的方法治疗人的某种遗传病 7、下列关于基因工程技术的叙述,正确的是( ) A.切割质粒的限制性核酸内切酶均特异性地识别6个核苷酸序列 B.反应中温度的周期性改变是为了聚合酶催化不同的反应 C.载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因 D.抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达 8、从某海洋动物中获得一基因,其表达产物为一种抗菌性和溶血性均较强的多肽。目前在的基础上研发抗菌性强但溶血性弱的多肽药物,首先要做的是( ) A.合成编码目的肽的片段 B.构建含目的肽片段的表达载体 C.依据氨基酸序列设计多条模拟肽 D.筛选出具有优良活性的模拟肽作为目的肽 9、如图所示某湖泊的食物网,其中鱼、鱼为两种小型土著鱼,若引入一种以中小型鱼类为食的鲈鱼,将出现的情况是( ) A.鲈鱼的产量不能弥补土著鱼的减少量 B.土著鱼在与鲈鱼的竞争中处于劣势 C.浮游动物总量锐减后再急升 D.浮游植物总量急升后再锐减 10、在1957年,美国的生态学家H.T.Odum对佛罗里达州的银泉进行了生态系统营养级和能量流动的调查,下表是调查结果。表中的①②③④分别表示不同的营养级,⑤为分解者。表中NP=GP-R。下列叙述中不正确的是( )
基因工程原理练习题及其答案
基因工程复习题分；30个）分；填空（每空1分） 20分；选择题（每题1分）10题型：名 词解释（104分。2个）20个）20分；论述题（简答题（绪论第一章 名词解释：1.基因工程：按照预先设计好的蓝图，利用现代分子生物学技术，特别是酶学技术，
对直接进行体外重组操作与改造，将一种生物（供体）的基因转移到另外一种遗传物质DNA生物（受体）中去，从而实现受体生物的定向改造与改良。遗传工程广义：指以改变生物有机体性状为目标，采用类似工程技术手段而进行的对遗传物质的操作，以改良品质或创造新品种。包括细胞工程、染色体工程、细胞器工程和基因工程等不同的技术层次。狭义：基因工程。 克隆：无性(繁殖)系或纯系。指由同个祖先经过无性繁殖方式得到的一群由遗传上同一的DNA 分子、细胞或个体组成的特殊生命群体。 2．什么是基因克隆及基本要点 3.举例说明基因工程发展过程中的三个重大事件。 A) 限制性内切酶和DNA连接酶的发现（标志着DNA重组时代的开始）；B) 载体的使用；C) 1970年，逆转录酶及抗性标记的发现。 4.基因工程研究的主要内容是什么 基础研究： 基因工程克隆载体的研究 基因工程受体系统的研究 目的基因的研究 基因工程工具酶的研究 基因工程新技术的研究 应用研究： 基因工程药物研究 转基因动植物的研究 在食品、化学、能源和环境保护等方面的应用研究 第二章基因克隆的工具酶 1.名词解释： 限制性核酸内切酶：一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列，并使每条链的一个磷酸二酯键断开的内脱氧核糖核酸酶。 回文结构：双链DNA中的一段倒置重复序列，当该序列的双链被打开后，可形成发夹结构。 同尾酶：来源不同、识别序列不同，但产生相同粘性末端的酶。 同裂酶：不同来源的限制酶可切割同一靶序列和具有相同的识别序列 黏性末端：DNA末端一条链突出的几个核苷酸能与另一个具有突出单链的DNA末端通过互补配对粘合，这样的DNA末端，称为粘性末端。 平末端：DNA片段的末端是平齐的。 限制性核酸内切酶的酶活性单位（U）：在酶的最适反应条件下，在50μl容积中，60分钟内完全切割1g DNA所需的酶量为1个酶活性单位（unit 或U） 限制性核酸内切酶的星活性：指限制性内切酶在非标准条件下，对与识别序列相似的其它片段的现象。DNA序列也进行切割反应，导致出现非特异性 的．
基因工程综合练习题
选修三基因工程综合练习题 第I卷（选择题） 1．下列有关基因工程中限制性内切酶的描述，错误 ．．的是（） A.一种限制性内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列 B.限制性内切酶的活性受温度影响 C.限制性内切酶能识别和切割RNA D.限制性内切酶可从原核生物中提取 2．下列叙述符合基因工程概念的是() A.B淋巴细胞与肿瘤细胞融合,杂交瘤细胞中含有B淋巴细胞中的抗体基因 B.用紫外线照射青霉菌,使其DNA发生改变,通过筛选获得青霉素高产菌株 C.将人的干扰素基因重组到质粒后导入大肠杆菌,获得产生人干扰素原的菌株 D.自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后其DNA整合到细菌DNA上 3．将人的生长激素基因导入鲫鱼，培育出能快速生长的鲫鱼新品种。该育种方法属于（） A．诱变育种B．转基因技术 C．单倍体育种D．杂交育种 4．采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目的基因的做法正确的是() ①将毒素蛋白注射到棉受精卵中 ②将编码毒素蛋白的DNA序列注射到棉受精卵中 ③将编码毒素蛋白的DNA序列与质粒重组，导入细菌，用该细菌感染棉的体细胞，再进行组织培养 ④将编码毒素蛋白的DNA序列与细菌质粒重组，注射到棉的子房并进入受精卵 A．①②B．②③C．③④D．④① 5．若利用细菌大量生产人胰岛素，则下列叙述不正确的是() A．需有适当运载体将人胰岛素基因导入细菌 B．需有适当的酶对运载体与人胰岛素基因进行切割与黏合 C．重组后的DNA，须在细菌体内转录，翻译成人胰岛素 D．人胰岛素基因与运载体DNA混合后，只得到一种DNA分子(重组DNA) 6．下列四条DNA分子，彼此间间具有粘性末端的一组是
(完整版)基因工程的基本工具练习题及答案
第三次生物练考题 命题人：王娜 选择题答案： 题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 答案 一、选择题（每小题5分，共计70分） 1、在基因工程中使用的限制性核酸内切酶，其作用是( ) A、将目的基因从染色体上切割出来 B、识别并切割特定的DNA核苷酸序列 C、将目的基因与运载体结合 D、将目的基因导入受体细胞 2、下列四条DNA分子，彼此间具有粘性末端的一组是（） ①② ③④ A．①②B．②③C．③④D．②④ 3、基因工程是DNA分子水平的操作，下列有关基因工程的叙述中，错误的是( ) A、限制酶只用于切割获取目的基因 B、载体与目的基因必须用同一种限制酶处理 C、基因工程所用的工具酶是限制酶，DNA连接酶 D、带有目的基因的载体是否进入受体细胞需检测 4、下列有关基因工程的叙述，正确的是：（） A．DNA连接酶的作用是将两个黏性末端的碱基连接起来 B．目的基因导入受体细胞后，受体细胞即发生基因突变 C．目的基因与运载体结合的过程发生在细胞外 D．常使用的运载体有大肠杆菌、噬菌体和动植物病毒等5、下列关于DNA连接酶的叙述中，正确的是（） A. DNA连接酶连接的是两条链碱基对之间的氢键 B. DNA连接酶连接的是黏性末端两条链主链上的磷酸和脱氧核糖 C. DNA连接酶连接的是黏性末端两条链主链上的磷酸和核糖 D. 同一种DNA连接酶可以切出不同的黏性末端 6、实施基因工程第一步的一种方法是把所需的基因从供体细胞内分离出来，这要利用限制性内切酶。从大肠杆菌中提取的一种限制性内切酶EcorI，能识别DNA分子中的GAATTC序列，切点在G与A之间。这是应用了酶的（） A.高效性 B.专一性 C.多样性 D.催化活性受外界条件影响 7、下列有关质粒的叙述，正确的是（） A．质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器 B．质粒是细菌细胞质中能自主复制的小型环状DNA分子 C．质粒只有在侵入宿主细胞后才能在宿主细胞内复制 D．细菌质粒的复制过程一定是在宿主细胞外独立进行的 8、右图所示为限制酶切割某DNA分子的过程，从图中可知，该限制酶能识别的碱基序列及切点是 A.CTTAAG，切点在C和T之间 B.CTTAAG，切点在G和A之间 C.GAATTC，切点在G和A之间 D.GAATTC，切点在C和T之间 9、关于右图DNA分子片段的说法正确的是（） A．限制性内切酶可作用于①部位，解旋酶作用于③部位 B．②处的碱基缺失导致染色体结构的变异 C．把此DNA放在含15N的培养液中复 制2代，子代中含15N的DNA占3/4 D．该DNA的特异性表现在碱基种类和（A+T）/（G+C） 的比例上 10、基因治疗是指：（） A．运用人工诱变的方法，使有基因缺陷的细胞发生基因突变而恢复正常 B．运用基因工程技术，把有缺陷的基因切除，达到治疗疾病的目的 T A G G C C A T T A C C G G T A ① G A T A T G C A T A T 15N 14N ② ③ … … …
(完整word版)基因工程单元练习题
基因工程练习题 1．(10分)目前基因工程所用的质粒载 体主要是以天然细菌质粒的各种元 件为基础重新组建的人工质粒， pBR322质粒是较早构建的质粒载体， 其主要结构如图一所示。 (1)构建人工质粒时要有抗性基因，以便于_ 。 (2)pBR322分子中有单个EcoRⅠ限制酶作用位点，EcoRⅠ只能识别序列—GAA TTC—，并只能在G与A之间切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoRⅠ的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端。 (3)pBR322分子中另有单个的BamHⅠ限制酶作用位点，现将经BamHⅠ处理后的质粒与用另一种限制酶BglⅡ处理得到的目的基因，通过DNA连接酶作用恢复_________键，成功地获得了重组质粒，说明_____________________________。 (4)为了检测上述重组质粒是否导入原本无ampR和tetR的大肠杆菌，将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图二的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图三的结果(空圈表示与图二对照无菌落的位置)。与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是____________，图三结果显示，多数大肠杆菌导入的是________________。 4．下图表示科学家通过基因工程培育抗虫棉时，从苏云金芽孢杆菌中提取抗虫基因“放入”棉花细胞中与棉花的DNA分子结合起来而发挥作用的过程示意图。请据图回答下列有关问题：
(1)图中科学家在进行①操作时，要用同一种___________ 分别切割目的基因和运载体， 运载体的黏性末端与目的基因DNA片段的黏性末端就可通过__________（键名）而结合， 遵循原则。 (2)在获得目的基因的过程中，PCR技术相当重要。PCR扩增反应需要在一定的缓冲溶液 中加入DNA模板、分别与两条模板链相结合的两种、四种脱氧核苷酸和 的DNA聚合酶。 (3)图中的III是导入了目的基因的受体细胞，经培养、筛选最终获得一株有抗虫特性的 转基因植株。经分析，该植株含有一个携带目的基因的DNA片段，因此可以把它看作是 杂合子。理论上，在该转基因植株自交产生的F1中，仍具有抗虫特性的植株占总数 的，原因是 _ (4)上述抗虫棉植株的后代种子种植下去后，往往有很多植株不再具有抗虫性，原因是_ ，要想获得纯合体，常采用的方法是________ __。 (5)科学家最初在做抗虫实验时，虽然用一定的方法已检测出棉花的植株中含有抗虫基 因，但让棉铃虫食用棉的叶片时，棉铃虫并没有被杀死，这说明______ _。科学家在 研究的基础上又一次对棉花植株中的抗性基因进行了修饰，然后在让棉铃虫食用棉的叶 片，结果食用的第二天棉铃虫就死亡了 5．为扩大可耕地面积，增加粮食产量．黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国 科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。 （1）获得耐盐基因后，构建重组DNA 分子所用的限制性内切酶作用于图中的处， D NA 连接酶作用于处。（填“a”或“b ” ） （2）将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有基因枪法和法。 （3）由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要利用技术，该技