超支化聚合物化学键合毛细管电泳柱的制备及其对蛋白质的分离行为
蛋白质的盐析与透析
蛋白质的盐析与透析 一、实验目的 1.了解蛋白质的分离纯化方法 2.掌握蛋白质的盐析及透析方法 二、实验原理 在蛋白质溶液中加入一定浓度的中性盐，蛋白质即从溶液中沉淀析出，这种作用称为盐析。盐析法常用的盐类有硫酸铵、硫酸钠等。 蛋白质用盐析法沉淀分离后，需脱盐才能获得纯品，脱盐最常用的方法为透析法。蛋白质在溶液中因其胶体质点直径较大，不能透过半透膜，而无机盐及其它低分子物质可以透过，故利用透析法可以把经盐析法所得的蛋白质提纯，即把蛋白质溶液装入透析袋内，将袋口用线扎紧，然后把它放进蒸馏水或缓冲液中，蛋白质分子量大，不能透过透析袋而被保留在袋内，通过不断更换袋外蒸馏水或缓冲液，直至袋内盐分透析完为止。透析常需较长时间，宜在低温下进行。 三、实验材料和试剂 10%鸡蛋白溶液，含鸡蛋清的氯化钠蛋白溶液，饱和硫酸铵溶液，硫酸铵晶体，1%硝酸银溶液。 四、实验步骤 （一）蛋白质盐析 取10%鸡蛋白溶液5ml于试管中，加入等量饱和硫酸铵溶液，微微摇动试管，使溶液混合后静置数分钟，蛋白即析出，如无沉淀可再加少许饱和硫酸铵溶液，观察蛋白质的析出； 取少量沉淀混合物，加水稀释，观察沉淀是否会再溶解。 （二）蛋白质的透析 注入含鸡蛋清的氯化钠蛋白溶液5ml于透析袋中，将袋的开口端用线扎紧，然后悬挂在盛有蒸馏水的烧杯中，使其开口端位于水面之上。 经过10分钟后，自烧杯中取出1ml溶液于试管中，加1%硝酸银溶液一滴，如有白色氯化银沉淀生成，即证明蒸馏水中有Cl-存在。 再自烧杯中取出1ml溶液于另一试管中，加入1ml 10%的氢氧化钠溶液，然后滴加1-2滴1%的硫酸铜溶液，观察有无蓝紫色出现。 每隔20分钟更换蒸馏水一次，经过数小时，则可观察到透析袋内出现轻微混浊，此即为蛋白质沉淀。继续透析至蒸馏水中不再生成氯化银沉淀为止。 实验报告记录透析完毕所需的时间。 附：胶棉半透膜的制备 市售5%的胶棉液，加入干燥的150mL锥形瓶中，将锥形瓶横斜不断转动，使瓶的内壁和瓶口都均匀沾有胶棉液。倒出多余的胶棉液，然后倒置约1min使乙醚、乙醇不断蒸发，直到干燥。逐步剥离瓶口的薄膜，沿瓶壁薄膜夹缝注入蒸馏水，使薄膜逐步跟瓶壁胶离，轻轻取出，浸入蒸馏水中备用。 如有侵权请联系告知删除，感谢你们的配合！
毛细管电泳的基本原理及应用
毛细管电泳的基本原理及应用 摘要：毛细管电泳法是以弹性石英毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的电泳分离分析方法。该技术可分析的成分小至有机离子、大至生物大分子如蛋白质、核酸等。可用于分析多种体液样本如血清或血浆、尿、脑脊液及唾液等，比HPLC 分析高效、快速、微量。 关键词：毛细管电泳原理分离模式应用 1概述 毛细管电泳(Caillary Electrophoresis)简称CE，是一类以毛细管为分离通道，以高压直流场为驱动力的新型液相分离分析技术。CE的历史可以追溯到1967年瑞典Hjerten最先提出在直径为3mm的毛细管中做自由溶液的区带电泳(Capillary Zone Electro-phoresis，CZE)。但他没有完全克服传统电泳的弊端[1]。现在所说的毛细管电泳(CE)是由Jorgenson和Lukacs在1981年首先提出，他们使用了75mm的毛细管柱，用荧光检测器对多种组分实现了分离。1984年Terabe将胶束引入毛细管电泳，开创了毛细管电泳的重要分支: 胶束电动毛细管色谱(MEKC)。1987年Hjerten等把传统的等电聚焦过程转移到毛细管内进行。同年，Cohen 发表了毛细管凝胶电泳的工作。近年来，将液相色谱的固定相引入毛细管电泳中，又发展了电色谱，扩大了电泳的应用范围。 毛细管电泳和高效液相色谱（HPLC）一样，同是液相分离技术，因此在很大程度上HPCE与HPLC可以互为补充，但是无论从效率、速度、样品用量和成本来说，毛细管电泳都显示了一定的优势毛细管电泳（C E）除了比其它色谱分离分析方法具有效率更高、速度更快、样品和试剂耗量更少、应用面同样广泛等优点外，其仪器结构也比高效液相色谱（HPLC）简单。C E只需高压直流电源、进样装置、毛细管和检测器。 毛细管电泳具有分析速度快、分离效率高、试验成本低、消耗少、操作简便等特点，因此广泛应用于分子生物学、医学、药学、材料学以及与化学有关的化工、环保、食品、饮料等各个领域[2]。
高中化学必修二-化学键、化学反应与能量知识点总结
必修二 一、化学键与化学反应 1.化学键 1）定义：相邻的两个或多个原子(或离子)之间强烈的相互作用叫做化学键。 2）类型： Ⅰ离子键：由阴、阳离子之间通过静电作用所形成的化学键。 Ⅱ共价键：原子之间通过共用电子对所形成的化学键。 ①极性键：在化合物分子中，不同种原子形成的共价键，由于两个原子吸引电子的能力不同，共用电子对必然偏向吸引电子能力较强的原子一方，因而吸引电子能力较弱的原子一方相对的显正电性。这样的共价键叫做极性共价键，简称极性键。举例：HCl分子中的H-Cl键属于极性键。 ②非极性键：由同种元素的原子间形成的共价键，叫做非极性共价键。同种原子吸引共用电子对的能力相等，成键电子对匀称地分布在两核之间，不偏向任何一个原子，成键的原子都不显电性。非极性键可存在于单质分子中（如H2中H—H键、O2中O=O键、N2中N≡N键），也可以存在于化合物分子中（如C2H2中的C—C 键）。以非极性键结合形成的分子都是非极性分子。存在于非极性分子中的键并非都是非极性键，如果一个多原子分子在空间结构上的正电荷几何中心和负电荷几何中心重合，那么即使它由极性键组成，那么它也是非极性分子。由非极性键结合形成的晶体可以是原子晶体，也可以是混合型晶体或分子晶体。例如，碳单质有三类同素异形体：依靠C—C非极性键可以形成正四面体骨架型金刚石（原子晶体）、层型石墨（混合型晶体），也可以形成球型碳分子富勒烯C60（分子晶体）。 举例：Cl2分子中的Cl-Cl键属于非极性键 Ⅲ金属键：化学键的一种，主要在金属中存在。由自由电子及排列成晶格状的金属离子之间的静电吸引力组合而成。由于电子的自由运动，金属键没有固定的方向，因而是非极性键。金属键有金属的很多特性。例如一般金属的熔点、沸点随金属键的强度而升高。其强弱通常与金属离子半径成逆相关，与金属内部自由电子密度成正相关。 3）化学反应本质就是旧化学键断裂和新化学键形成的过程。①①①①①①①②5① 2．1）离子化合物：由阳离子和阴离子构成的化合物。 大部分盐（包括所有铵盐），强碱，大部分金属氧化物，金属氢化物。 活泼的金属元素与活泼非金属元素形成的化合物中不一定都是以离子键结合的，如AICI3不是通过离子键结合的。非金属元素之间也可形成离子化合物，如铵盐都是离子化合物。 2）共价化合物：主要以共价键结合形成的化合物，叫做共价化合物。 非金属氧化物，酸，弱碱，少部分盐，非金属氢化物。 3）在离子化合物中一定含有离子键，可能含有共价键。在共价化合物中一定不存在离子键。 3.几组概念的对比
蛋白质分离纯化的步骤
蛋白质分离纯化的一般程序可分为以下几个步骤： （一）材料的预处理及细胞破碎 分离提纯某一种蛋白质时，首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态，不丧失活性。所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎。常用的破碎组织细胞的方法有： 1. 机械破碎法 这种方法是利用机械力的剪切作用，使细胞破碎。常用设备有，高速组织捣碎机、匀浆器、研钵等。 2. 渗透破碎法 这种方法是在低渗条件使细胞溶胀而破碎。 3. 反复冻融法 生物组织经冻结后，细胞内液结冰膨胀而使细胞胀破。这种方法简单方便，但要注意那些对温度变化敏感的蛋白质不宜采用此法。 4. 超声波法 使用超声波震荡器使细胞膜上所受张力不均而使细胞破碎。 5. 酶法 如用溶菌酶破坏微生物细胞等。 （二）蛋白质的抽提 通常选择适当的缓冲液溶剂把蛋白质提取出来。抽提所用缓冲液的pH、离子强度、组成成分等条件的选择应根据欲制备的蛋白质的性质而定。如膜蛋白的抽提，抽提缓冲液中一般要加入表面活性剂（十二烷基磺酸钠、tritonX-100 等），使膜结构破坏，利于蛋白质与膜分离。在抽提过程中，应注意温度，避免剧烈搅拌等，以防止蛋白质的变性。（三）蛋白质粗制品的获得选用适当的方法将所要的蛋白质与其它杂蛋白分离开来。比较方便的有效方法是根据蛋白质溶解度的差异进行的分离。常用的有下列几种方法： 1.等电点沉淀法不同蛋白质的等电点不同，可用等电点沉淀法使它们相互分离。 2.盐析法 不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同，所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。被盐析沉淀下来的蛋白质仍保持其天然性质，并能再度溶解而不变性。 3.有机溶剂沉淀法 中性有机溶剂如乙醇、丙酮，它们的介电常数比水低。能使大多数球状蛋白质在水溶液中的溶解度降低，进而从溶液中沉淀出来，因此可用来沉淀蛋白质。此外，有机溶剂会破坏蛋白质表面的水化层，促使蛋白质分子变得不稳定而析出。由于有机溶剂会使蛋白质变性，使用该法时，要注意在低温下操作，选择合适的有机溶剂浓度。 （四）样品的进一步分离纯化
第五章 高效毛细管电泳分离技术
第五章高效毛细管电泳分离技术 第一节毛细管电泳技术发展简史及其特点 电泳是指带电粒子在电场作用下向电性相反的方向迁移的现象。据此对某些化学或生物化学组分进行分离的技术称为电泳技术。 从1930年瑞典科学家Arne Tiselius首次提出电泳法至今已有70年的历史。电泳法的发展大致可分为三个阶段。1950年以前属初创阶段，主要是界面移动自由电泳，一般在U型管内进行，无支持物。50年代至80年代中期出现了各种有支持物的电泳方法，如纸电泳、醋酸纤维电泳、琼脂糖电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等，70年代后实现了仪器的自动化。80年代后期出现了毛细管电泳方法，实现了微型化、自动化、高效、快速分析，毛细管电泳技术已经成为同现代色谱技术相比的分析化学领域中的一个令人瞩目的分支。 毛细管电泳（Capillary Electrophoresis，CE）或高效毛细管电泳（High Performance Capillary Electrophoresis，HPCE）是指以毛细管为分离室、以高压电场为驱动力的一类新型现代电泳技术。毛细管电泳仪的基本结构见图5-1。
HV（0-+30KV） 图1 毛细管电泳仪的结构图 C—毛细管；D—检测器；E—电极槽；HV—直流高压电源；Pt—铂电极；S—样品；DA—数据采集处理系统 完善的毛细管电泳仪应具备（1）有多种施压模式；（2）恒温精度高，恒温范围宽；（3）精确的进样控制；（4）检测器的灵敏度高等条件。 毛细管电泳分离技术用的是内径为5-100μm，外径为370μm，长为10-100cm的弹性熔融石英毛细管，毛细管的特点是（1）体积小；（2）散热快，可承受高电场；（3）可使用自由溶液、凝胶等为支持电解质，在溶液介质下可产生平面形状的电渗流。 毛细管电泳分离技术与传统的平板电泳和现代液相色谱分离技术相比具有很多优点：（1）高效（105-107理论塔板/米）；（2）快速（几十秒至几十分钟）；（3）分离模式多，选择自由度大；（4）分析对象广，从无机离子到整个细胞；（5）高度自动化；
2015化学键与能量全解
学案导学——化学键 高三化学备课组日期：2015年11月5日 高考考纲要求：一是电子式的书写，结合其他化学用语一起考查，如结构简式、 结构式等；二是化学键类型的判断。 知识点回顾： 一、化学键： 1．定义：。 2．形成与分类 原子之间发生电子→ 离子键 化学键 原子之间形成→ 共价键 分类：离子键、共价键、金属键（存在于金属中）等 Ⅰ、离子键： 1、定义：。 成键粒子：成键实质： 说明：静电作用既包含同种离子间的相互排斥也包含异种离子间的相互吸引。是阴、阳离子间的静电吸引力与电子之间、原子核之间斥力处于平衡时的总效应。 2、形成条件： 活泼金属元素的原子与活泼非金属元素的原子之间相互化合形成离子键 3、离子化合物定义： 注：①对于离子化合物化学式不等于分子式，在离子化合物中 不存在分子，如NaCl的晶体结构为： 在这个结构中Na+和Cl-的个数比为1:1，所以氯化钠的化学式为 NaCl。 4、表示方法------电子式：【重要补充】 ⑴．概念：由于在化学反应中，一般是原子的最外层电子发生变化，所以，为了简便起见，我们可以在元素符号周围用小黑点（或×）来表示原子的最外层电子。这种式子叫做 例如：
⑵．离子化合物的电子式表示方法： 在离子化合物的形成过程中，活泼的金属离子失去电子变成金属阳离子，活泼的非金属离子得到电子变成非金属阴离子，然后阴阳离子通过静电作用结合成离子键，形成离子化合物。所以，在离子化合物的电子式中由阳离子和带中括号的阴离子组成且简单的阳离子不带最外层电子，而阴离子要标明最外层电子多少。 如： ⑶．离子化合物的形成过程： 例题1：1）用电子式表示 Na2O NaOH MgCl2 Na2O2 Ca(OH)2NH4Cl 2)用电子式表示离子化合物的形成过程 NaBr CaF2 Ⅱ、共价键： 1、定义：原子间通过形成的化学键。成键粒子：成键实质： 2、形成条件：通常是的原子相结合。 存在范围： ①非金属单质的分子中（除气体外）：如O2．F2．H2．C60 ②非金属形成的化合物中，如SO2．CO2．CH4．H2O2．CS2 ③部分离子化合物中，如Na2SO4中的SO42-、NaOH的OH-、NH4Cl中的NH4+中存在共价键 5、分类 共用电子对不发生偏移→ 键 共 价 键共用电子对发生偏移→ 键 6、 表示方法： 1）用电子式表示 H2O NH3CO2CH4N2
蛋白质的盐析与透析
蛋白质的分离纯化 一、实验目的 1.了解蛋白质的分离纯化方法 2.掌握蛋白质的盐析及透析方法 二、实验原理 在蛋白质溶液中加入一定浓度的中性盐，蛋白质即从溶液中沉淀析出，这种作用称为盐析。盐析法常用的盐类有硫酸铵、硫酸钠等。 蛋白质用盐析法沉淀分离后，需脱盐才能获得纯品，脱盐最常用的方法为透析法。蛋白质在溶液中因其胶体质点直径较大，不能透过半透膜，而无机盐及其它低分子物质可以透过，故利用透析法可以把经盐析法所得的蛋白质提纯，即把蛋白质溶液装入透析袋内，将袋口用线扎紧，然后把它放进蒸馏水或缓冲液中，蛋白质分子量大，不能透过透析袋而被保留在袋内，通过不断更换袋外蒸馏水或缓冲液，直至袋内盐分透析完为止。透析常需较长时间，宜在低温下进行。 三、实验材料和试剂 10%鸡蛋白溶液，含鸡蛋清的氯化钠蛋白溶液，饱和硫酸铵溶液，硫酸铵晶体，1%硝酸银溶液，双缩脲试剂 四、实验步骤 （一）蛋白质盐析 取10%鸡蛋白溶液5ml于试管中，加入等量饱和硫酸铵溶液，微微摇动试管，使溶液混合后静置数分钟，蛋白即析出，如无沉淀可再加少许饱和硫酸铵溶液，观察蛋白质的析出； 取少量沉淀混合物，加水稀释，观察沉淀是否会再溶解。 （二）蛋白质的透析 注入含鸡蛋清的氯化钠蛋白溶液5ml于透析袋中，将袋的开口端用线扎紧，然后悬挂在盛有蒸馏水的烧杯中，使其开口端位于水面之上。 经过10分钟后，自烧杯中取出1ml溶液于试管中，加1%硝酸银溶液一滴，如有白色氯化银沉淀生成，即证明蒸馏水中有Cl-存在。 再自烧杯中取出1ml溶液于另一试管中，加入1ml 10%的氢氧化钠溶液，然后滴加1-2滴1%的硫酸铜溶液，观察有无蓝紫色出现。 每隔20分钟更换蒸馏水一次，经过数小时，则可观察到透析袋内出现轻微混浊，此即为蛋白质沉淀。继续透析至蒸馏水中不再生成氯化银沉淀为止。 实验报告记录透析完毕所需的时间。
化学键与能量变化
第2章化学键化学反应与能量 第1节化学键与化学反应 第一课时化学键与化学反应中的物质变化 殷培海董梅王庆峰 【目标要求】 1、通过了解化学键的含义及离子键和共价键的形成，增进对物质构成的认识。 2、通过对化学键、离子键、共价键的学习，培养想象力和分析推理的能力。 【课前预习】 1、在化学反应中，不仅有的变化，还伴随着的变化。人们利用化学反应，有时是为了，有时则是为了。 2、称为化学键。研究证实，化学反应中物质变化的实质是。 3、原子间通过形成的化学键，叫做。含有共价键的分子有：、、、，金刚石是碳原子键通过形成直接形成的。 4、电子式是一种由的式子。例如：氯化氢分子的形成可以用电子式表示为。 5、，叫做离子键。用电子式表示氯化钠的形成过程：。 6、和是化学键的两种主要类型。一般情况下， 原子间易形成离子键，而原子间形成的 是。 7、柯赛尔于1916年提出，指出原子中的电子处于最稳定状态；原子获得或失去电子变成阴、阳离子时，与 具有相同的核外电子排布；原子就是元素的负原子价数或正原子价数；阴、阳离子间以形成化合物。 路易斯于1916年提出共价键理论，指出两元素的原子间的价键可由形成。也可由 形成；两个或多个原子可以共用达到 的电子层结构，形成稳定的分子。 8、构成物质的微粒（、、）间的相互作用包括和 ，前者包括、、和， 属于后者，如中之间的。
9、人们根据化合物中，把含有的化合物称为离子化合物，如等；把只含有 的化合物称为共价化合物，如等。 10、研究物质中的化学键，可以帮助人们。例如，氯化钠熔化时要破坏其中的，这需要较多的能量，因此氯化钠的熔点。氮气分子内部存在，很难被破坏，所以在通常状况下氮气的很稳定。 【课堂难点突破】 一、分析水通电能生H2、O2的过程中化学键的变化的情况。 2H2O2H2↑＋O2↑ 水分子中H原子与O原子通过化学键结合在一起，通电后该化学键断裂，水分了变成自由的H原子、O原子，然后H的原子与H原子形成化学键，得到H2。O原子和O原子形成化学键，得到O2。 由以上分析可得到如下结论：化学反应只所以生成了新物质，从微观角度分析，是分子先变为原子，原子再重新组合成分子。从化学键角度分析，是旧化学键的断裂和新化学键的形成。 二、HCl和NaCl中都存在化学键，HCl为两种非金属元素原子形成的化学键，NaCl为金属元素原子与非金属元素原子形成的化学键，这两种物质中的化学键应有所不同。 (1)共价键 HCl分子中的化学键为H原子与Cl原子形成的，H原子的核外有1个电子，原子结构示意图为， 电子式为。Cl原子核外有17个电子，原子结构示意图为, 电子式为。二者结合时，都需要得1个电子达到稳定结构。双方各提供一个电子组成一对共用电子对，从而使双方的最外电子层都达到稳定结构，通过共用电子对产生了强烈的相互作用，把双方结合在一起，这种化学键为共价键。 用电子式可表示H原子、Cl原子形成化学键，结合为HCl分子的过程。 共价键的构成要素是双方都需要得电子，这样才能形成共用电子对。需要得电子的元素为非金属元素。 H2O的形成：CO2的形成： (2)离子键：Na原子最外层1个电子，电子式为，Cl原子最外层7个电子，电子式为。Na原子失去1个电子，次外层变为最外层，达到8个电子结构，Cl原子得到1个电子，最外层达到8个电子结构。双方不用形成共用电子对，而是1个失电子形成阳离子，1个得电子形成阴离子，阴阳离子间通过静电作用结合在一起，这种化学键叫离子键。 NaCl的形成过程可用如下电子式表示： 对比NaCl和HCl的写法，可知二者的形成实质有很大不同，二者形成化合物的电子式书写也有很大不同，通过共用电子对结合的，应写出共用电子对。通过离子键形成的应写出阴阳离子的电子式，阳离子的电子式一般就在其元素符号右上角写出所带电荷，阴离子写出得到电子后的最外层电子，并用［］表示，右上角写上所带负电荷数。 离子键的构成要素：典型的金属元素与典型非金属元素，可分别通过失电子和得电子形成阳离子和阴
化学键与化学反应(讲义及答案)
化学键与化学反应（讲义） 一、知识点睛 1.化学键与化学反应 化学键：间的相互作用。 （1）化学键与化学反应中的物质变化 化学反应的实质是断裂和形成。 （2）化学键与化学反应中的能量变化 ①从化学键的断裂和形成分析 破坏旧化学键，需要能量（E1）； 形成新化学键，需要能量（E2）。 若E1< E2，反应能量； 若E1> E2，反应能量。 ②从反应物和生成物所具有的能量分析 若反应物的总能量>生成物的总能量， 反应能量。 若反应物的总能量<生成物的总能量， 反应能量。 注：放热反应和吸热反应 a.热量的反应叫放热反应。 如：大多数化合反应、酸碱中和反应、燃烧 反应、金属与酸（或水）的反应、铝热 反应等。 b.热量的反应叫吸热反应。 如：大多数分解反应、消石灰与氯化铵的反应、 C 与水蒸气反应、C 与CO2的反应等。 2.化学键类型 （1）离子键 ①概念：之间通过形成的化学键。 ②成键元素：一般是活泼金属元素和活泼非金属元素。 ③成键微粒：阴、阳离子。 （2）共价键 ①概念：之间通过形成的化学键。 ②成键元素：一般是非金属元素。 ③成键微粒：原子。
3.离子化合物与共价化合物 （1）离子化合物 含有的化合物，如NaCl、KOH、NH4Cl 等。 （2）共价化合物 只含有的化合物，如HCl、CO2、H2O 等。 （3）判断 ①含有离子键的化合物一定是离子化合物； ②只含共价键的化合物是共价化合物； ③熔融状态下导电的化合物肯定是离子化合物。 4.化学键的表示方法（电子式法） 电子式：由元素符号和用于表示该元素原子或离子的最外层电子的“?”组成的式子。 （1）用电子式表示原子 例： （2）用电子式表示离子 ①阳离子 简单阳离子的电子式为离子符号本身。例：Na+ 复杂的阳离子除应标出电子对外，还应加中括号， 并在括号的右上方标出离子所带的电荷。 例： ②阴离子 无论是简单阴离子，还是复杂的阴离子，除应标出 电子对外，都应加中括号，并在括号的右上方标出 离子所带的电荷。 例： （3）用电子式表示物质中的化学键 ①离子键 例：、、 、 ②共价键 例：、、、、
盐析法
盐析法综述 摘要：沉淀法是利用沉淀反应，将被测组分转化为难溶物，以沉淀形式从溶液中分离出来，并转化为称量形式，最后称定其重量进行测定的方法。盐析法是其中的一种，盐析法是在中药水提液中,加入无机盐至一定浓度,或达饱和状态,可使某些成分在水中溶解度降低,从而与水溶性大的杂质分离。常作盐析的无机盐有氯化钠、硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。 关键词:沉淀法；盐析；原理；方法评价；蛋白质盐析 沉淀法 沉淀法是利用沉淀反应，将被测组分转化为难溶物，以沉淀形式从溶液中分离出来，并转化为称量形式，最后称定其重量进行测定的方法。 有机溶剂沉淀法多用于生物小分子、多糖及核酸产品的分离纯化，有时也用于蛋白质沉淀。有机溶剂的沉淀机理是降低水的介电常数，导致具有表面水层的生物大分子脱水，相互聚集，最后析出。等电点沉淀法用于氨基酸、蛋白质及其它两性物质的沉淀。但此法单独应用较少，多与其它方法结合使用。两性电解质分子上的净电荷为零时溶解度最低，不同的两性电解质具有不同的等电点，以此为基础可进行分离。、非离子多聚体沉淀法用于分离生物大分子非离子多聚物是六十年代发展起来的一类重要沉淀剂，最早用于提纯免疫球蛋白、沉淀一些细菌和病毒，近年来逐渐广泛应用于核酸和酶的分离提纯。最常用的是铅盐法，可以用于除去杂质，也可用于沉淀有效成分。沉淀法通常是在溶液状态下将不同化学成分的物质混合,在混合液中加人适当的沉淀剂制备前驱体沉淀物,再将沉淀物进行干燥或锻烧,从而制得相应的粉体颗粒。一般来说，所有固体溶质都可以在溶液中加入中性盐而沉淀析出，这一过程叫盐析。在生化制备中,许多物质都可以用盐析法进行沉淀分离，如蛋白质、多肽、多糖、核酸等，其中以蛋白质沉淀最为常见，特别是在粗提阶段。 对沉淀形式的要求 （1）沉淀的溶解度要小，以保证被测组分能沉淀完全。 （2）沉淀要纯净，不应带入沉淀剂和其他杂质。 （3）沉淀易于过滤和洗涤，以便于操作和提高沉淀的纯度。 （4）沉淀易于转化为称量形式。 盐析法 胶体的盐析 胶体的盐析是加盐而使胶粒的溶解度降低，形成沉底析出的
分离纯化蛋白质的方法及原理
（二）利用溶解度差别 影响蛋白质溶解度的外部因素有：1、溶液的pH；2、离子强度；3、介电常数；4、温度。但在同一的特定外部条件下，不同蛋白质具有不同的溶解度。 1、等电点沉淀：原理：蛋白质处于等电点时，其净电荷为零，由于相邻蛋白质分子之间没有静电斥力而趋于聚集沉淀。因此在其他条件相同时，他的溶解度达到最低点。在等电点之上或者之下时，蛋白质分子携带同种符号的净电荷而互相排斥，阻止了单个分子聚集成沉淀，因此溶解度较大。不同蛋白质具有不同的等电点，利用蛋白质在等电点时的溶解度最低的原理，可以把蛋白质混合物分开。当pH被调到蛋白质混合物中其中一种蛋白质的等电点时，这种蛋白质大部分和全部被沉淀下来，那些等电点高于或低于该pH的蛋白质则仍留在溶液中。这样沉淀出来的蛋白质保持着天然的构象，能重新溶解于适当的pH和一定浓度的盐溶液中。 5、盐析与盐溶：原理：低浓度时，中性盐可以增加蛋白质溶解度这种现象称为盐溶.盐溶作用主要是由于蛋白质分子吸附某种盐类离子后，带电层使蛋白质分子彼此排斥，而蛋白质与水分子之间的相互作用却加强，因而溶解度增高。球蛋白溶液在透析过程中往往沉淀析出，这就是因为透析除去了盐类离子，使蛋白质分子之间的相互吸引增加，引起蛋白质分子的凝集并沉淀。当溶液的离子强度增加到一定程度时，蛋白质溶解程度开始下降。当离子强度增加到足够高时，例如饱和或半饱和程度，很多蛋白质可以从水中沉淀出来，这种现象称为盐析。盐析作用主要是由于大量中性盐的加入使水的活度降低，原来溶液中的大部分甚至全部的自由水转变为盐离子的水化水。此时那些被迫与蛋白质表面的疏水集团接触并掩盖他们的水分子成为下一步最自由的可利用的水分子，因此被移去以溶剂化盐离子，留下暴露出来的疏水基团。蛋白质疏水表面进一步暴露，由于疏水作用蛋白质聚集而沉淀。 盐析沉淀的蛋白质保持着他的天然构象，能再溶解。盐析的中性盐以硫酸铵为最佳，在水中的溶解度很高，而溶解度的温度系数较低。 3、有机溶剂分级分离法：与水互溶的有机溶剂（甲醇、乙醇和丙酮等）能使蛋白质在水中的溶解度显著降低。在室温下有机溶剂会引起蛋白质变性，如果预先将有机溶剂冷却到-40°C以下，然后在不断搅拌下逐滴加入有机溶剂，以防局部浓度过高，那么变性可以得到很大程度缓解。蛋白质在有机溶剂中的溶解度也随温度、pH和离子强度而变化。在一定温度、pH和离子强度条件下，引起蛋白质沉淀的有机溶剂的浓度不同，因此控制有机溶剂浓度也可以分
高考化学 《化学键与能量变化》典型错题解析
高考化学《化学键与能量变化》典型错题解析 第一节第二部分的重点是化学键与化学反应中能量变化的关系。在化学反应中，破坏旧的化学键需要吸收一定的能量，而形成新的化学键又要释放一定的能量，所以在化学反应中，不仅有物质变化，而且伴随能量变化。 【例1】原子弹爆炸时，放出巨大能量，这是由于（）。 （A）原子在化学变化中引起电子得失的结果 （B）原子核裂变的结果 （C）分子在反应中分裂成原子的结果 （D）原子和原子结合形成分子的结果 〔错选〕：A、C、D [错因分析]其中A、C、D三项实质上是化学反应，化学反应中的能量变化与原子核反应的能量变化在数量级上相差很大的。原子弹爆炸实质上核反应的结果。正确答案为B。 【例2】下列说法正确的是（） A．大多数化合反应是释放能量的反应。 B．大多数分解反应是吸收能量的反应。 C．释放能量的反应都不需要加热。 D．吸收能量的反应都需要加热。 [错选]C、D 〔错因分析〕：释放能量的反应（比如Fe+S==FeS）在反应没有开始以前也需要加热，达到反应所需要的最低温度，待反应发生后不必再加热，反应释放的热量可以使反应继续进行下去；而Ba(OH)2·8H2O与NH4Cl 的反应是吸收能量的反应，但反应并不需要加热。所以C、D错误。正确选项为A、B。 【例3】下列说法中正确的是（） A．干冰汽化需要吸收大量的热，这个变化是吸收能量的反应。 B．酒精可用作燃料，说明酒精燃烧是释放能量的反应。 C．木炭需要加热到一定温度才燃烧，所以木炭燃烧是吸收能量的反应。 D．释放能量的反应一定是反应物的总能量高于生成物的总能量。 〔错选〕A、C 〔错因分析〕：干冰汽化是物理变化，不是化学反应，不能说是吸收或释放能量的“反应”其它如冰融化、水结冰、摩擦生热、电炉通电，都是物理变化，不能讨论是什么“反应”的问题，所以A错误；由例1的解析可以看出B正确、C错误；如果反应物的总能量高于生成物的总能量，则是释放能量的反应，如果反应物的总能量低于生成物的总能量，则是吸收能量的反应，所以D正确。正确选项BD。 【例4】“碘受热升华，破坏的是分子间作用力，未破坏I-I共价键，因此未发生吸热反应”的说法是否正确？ 解析：化学上把有热量放出的化学反应叫做放热反应，把吸收热量的化学反应叫做吸热反应。而碘升华属物理变化未发生化学反应，因此上述说法正确。 - 1 -
盐析法沉淀蛋白质的原理
盐析法沉淀蛋白质的原理 1 中性盐沉淀（盐析法） 在溶液中加入中性盐使生物大分子沉淀析出的过程称为“盐析”。除了蛋白质和酶以外，多肽、多糖和核酸等都可以用盐析法进行沉淀分离。 盐析法应用最广的还是在蛋白质领域，已有八十多年的历史，其突出的优点是： ①成本低，不需要特别昂贵的设备。 ②操作简单、安全。 ③对许多生物活性物质具有稳定作用。 ⑴中性盐沉淀蛋白质的基本原理 蛋白质和酶均易溶于水，因为该分子的－COOH、－NH2和－OH都是亲水基团，这些基团与极性水分子相互作用形成水化层，包围于蛋白质分子周围形成1nm～100nm颗粒的亲水胶体，削弱了蛋白质分子之间的作用力，蛋白质分子表面极性基团越多，水化层越厚，蛋白质分子与溶剂分子之间的亲和力越大，因而溶解度也越大。亲水胶体在水中的稳定因素有两个：即电荷和水膜。因为中性盐的亲水性大于蛋白质和酶分子的亲水性，所以加入大量中性盐后，夺走了水分子，破坏了水膜，暴露出疏水区域，同时又中和了电荷，破坏了亲水胶体，蛋白质分子即形成沉淀。
⑵中性盐的选择 常用的中性盐中最重要的是（NH4）2SO4，因为它与其他常用盐类相比有十分突出的优点： 1) 溶解度大：尤其是在低温时仍有相当高的溶解度，这是其他盐类所不具备的。由于酶和各种蛋白质通常是在低温下稳定，因而盐析操作也要求在低温下（0～4℃）进行。 2) 分离效果好：有的提取液加入适量硫酸铵 盐析，一步就可以除去75％的杂蛋白，纯 度提高了四倍。 3) 不易引起变性，有稳定酶与蛋白质结构的 作用。有的酶或蛋白质用2～3mol/L浓度的 （NH4）2SO4保存可达数年之久。 4) 价格便宜，废液不污染环境。 ⑶盐析的操作方法 最常用的是固体硫酸铵加入法。将其研成细粉，在搅拌下缓慢均匀少量多次地加入，接近计划饱和度时，加盐的速度更要慢一些，尽量避免局部硫酸铵浓度过大而造成不应有的蛋白质沉淀。盐析后要在冰浴中放置一段时间，待沉淀完全后再离心与过滤。 在低浓度硫酸铵中盐析可采用离心分离，高浓度硫酸铵常用过滤方法。
化学键与能量练习题
化学键与能量练习题2015.10.29 1．反应2C ＋O 2===2CO 的能量变化如下图所示。下列说法正确的是( ) A ．12 g C(s)与一定量O 2(g)反应生成14 g CO(g)放出的热量为110.5 kJ B ．2 mol C(s)与足量O 2(g)反应生成CO 2(g)，放出的热量大于221 kJ C ．该反应的热化学方程式是2C(s)＋O 2(g)===2CO(g) ΔH ＝－221 kJ D ．该反应的反应热等于CO 分子中化学键形成时所释放的总能量与O 2分子中化学键断裂时所吸收的总能量的差 2、灰锡(以粉末状存在)和白锡是锡的两种同素异形体。已知： ① Sn （s 、白）+2HCl （aq ）＝SnCl2（aq ）+H2（g ） ΔH 1 ② Sn （s 、灰）+2HCl （aq ）＝SnCl2（aq ）+H2（g ） ΔH 2 ③ Sn （s 、灰） Sn （s 、白） ΔH 3=+2.1 kJ/mol 下列说法正确的是 （ ） A. ΔH 1>ΔH 2 B. 锡在常温下以灰锡状态存在 C. 灰锡转化为白锡的反应是放热反应 D . 锡制器皿长期处于低于13.2℃的环境中，会自行毁坏 3．已知：CH 3COOH(aq)+NaOH(aq)＝CH 3COONa(aq)+H 2O △H=Q 1kJ ／mol 21H 2SO 4(浓)+NaOH(aq)＝2 1Na 2SO 4(aq)+H 2O(1) △H=Q 2kJ ／mol HNO 3(aq)+KOH(aq)＝KNO 3(aq)+H 2O(1) △H=Q 3kJ ／mol 上述反应均为溶液中的反应，则Q 1、Q 2、Q 3的绝对值大小的关系为 （ ） A.Q 1＝Q 2=Q 3 B .Q 2>Q 1>Q 3 C.Q 2>Q 3>Q 1 D.Q 2=Q 3>Q 1 4．（09全国卷Ⅱ11） 已知：2H 2（g ）+ O 2(g)=2H 2O(l) ΔH= -571.6KJ· mol -1 CH 4（g ）+ 2O 2(g)＝CO 2(g)＋2H 2O(l) ΔH= -890KJ· mol -1 现有H 2与CH 4的混合气体112L （标准状况），使其完全燃烧生成CO 2和H 2O(l),若实验测得反应放热3695KJ ，则原混合气体中H 2与CH 4的物质的量之比是 （ ） A ．1∶1 B ．1∶3 C ．1∶4 D ．2∶3
高效毛细管电泳的发展及应用
高效毛细管电泳的发展及应用 摘要：高效毛细管电泳（即HPCE）是在传统电泳基础上继现代高效液相色谱技术之后发展起来的一种新型高效分离技术，由于效率更高、速度更快、样品和试剂消耗量特少的特性，逐渐受到越来越多科学家们的青睐。本文结合HPCE的发展史、基本原理、分离模式以及在现实中的实际应用，对毛细管电泳做了系统的分析，并提出合理的展望。 关键字：毛细管电泳；发展史；原理；分离模式；应用 高效毛细管电泳（即HPCE）是在传统电泳基础上继现代高效液相色谱技术之后发展起来的一种新型高效分离技术，它是在熔融的石英毛细管（内径为25～100μm）中进行电泳，其管内填充缓冲液或凝胶，是近年来进展最快的分析方法之一。 毛细管电泳可以说是电泳技术和现代微柱分离相结合的产物，它具有效率更高、速度更快、样品和试剂消耗量特少的特性，因而也受到越来越多科学家们的青睐。 一、毛细管电泳的发展史 1967年在高电场作用下，以3mm直径的毛细管内进行自由溶液的区带电泳，1974年报道了以200-500μm内径玻璃毛细管内进行的区带电泳分析，早期的研究受当时检测灵敏度的影响，未获预期的高效分离效率，但为毛细管电泳分离的发展奠定了基础。 1981年人们第一次展示了毛细管区带电泳，使用75微米内径的玻璃毛细管和荧光检测器进行在线检测，在30KV电压下，分离了氨基酸和多肽类物质，塔板数高达40万，这一工作被认为是现代毛细管电泳发展的里程碑。1983年将聚胶柱制备困难的缺点。1984年使用含有表面活性剂的背景电解质，开辟了毛细管电泳另一个重要分支——胶束毛细管电动力学色谱。1987年又结合传统的等电聚焦电泳和凝胶电泳原理，并移到毛细管内进行电泳，1988年实现了微量制备的可能性，提取和分离了50μmol的蛋白质、肽和寡核苷酸等。80年代未，
化学键化学反应与能量复习总结
本章从三个方面研究化学反应：一是化学键与化学反应的关系，化学反应中物质变化的实质是旧化学键断裂和新化学键形成，这些过程伴随着能量的变化，决定了化学反应有吸热反应和放热反应；二是从反应快慢和反应进行的程度两个角度研究不同类型的化学反应，影响化学反应速率的主要因素是物质本身的性质，另外，温度、浓度、压强、催化剂、光波等外界因素也影响反应速率。当可逆反应的正、逆反应速率相等时，反应就达到了平衡状态，而条件改变时，化学平衡又要发生移动；第三个方面是人们对化学反应的利用。利用化学反应中物质的变化可以制备新物质，利用化学反应中能量的 变化可以帮助人们寻找新能源。化学反应与人类生活密切相关。 【知识网络】 【知识分类讲解】 我们已学过了很多化学反应，这些化学反应都与物质内部的化学键有密切联系。 一、化学键与化学反应 1、化学键 (1)概念：相邻原子间强烈的相互作用。 (2)作用：通过化学键把原子(包括离子)结合成物质，物质参与化学反应时需破坏化学键。 (3)类型：
可见，化学键的常见类型有共价键、离子键和金属键。通过化学键可形成金属单质、非金属单质、离子化合物、共价化合物等。 2、化学键与化学反应中的物质变化 有新物质生成的变化为化学变化。化学反应中物质变化的实质是旧化学键断裂和新化学键生成。 3、化学键与化学反应中的能量变化 (1)化学反应中的能量变化 吸热反应：吸收热量的化学反应。 放热反应；放出热量的化学反应。 (2)能量变化与化学键的关系 旧化学键断裂时，要吸收热量，新化学键形成时，要放出热量。当旧键断裂吸收的热量大于新键形成放出的热量，整个反应表现为吸热反应，反之为放热反应。 任何化学反应都伴随着能量的变化。 二、化学反应的快慢和限度 1、化学反应的快慢：化学反应速率 (1)化学反应速率：用单位时间里反应物浓度的减少或生成物浓度的增加来表示化学反应的 速率。化学反应速率用v表示，单位为mol·L-1·s-1或mol·L-1·min-1等，公式为 对反应：aA(g)＋bB(g)cC(g)＋dD(g) 用不同物质表示同一反应的速率，数值可能不同，但都可以体现出该反应的快慢。这些速率之间满足如下关系：用不同物质表示的速率之比等于这些物质的化学计量数之比，即v A∶v B∶v C∶v D＝a∶b∶c∶d。 (2)影响化学反应速率的因素： ①物质本身的性质是决定反应快慢的内因，其它条件只是决定反应快慢的外因。 ②反应物的浓度： 增大某一反应物浓度，使正反应速率增大。 增大某一生成物浓度，使逆反应速率增大。 ③温度： 升高温度，正、逆反应速度都增大。温度每升高10℃，反应速率将增加到原来的2～4倍。 ④压强 压强影响的实质是浓度的变化。压缩容器容积，压强增大，气体反应物和气体生成物浓度都增大，正、逆反应速率都增大。 ⑤催化剂 催化剂能大大加快化学反应速率，使一些化学反应在较低温度下取得较高的反应速率。化工生产中，很多反应都需要用到催化剂。
蛋白质的盐析
蛋白质的盐析 SANY GROUP system office room 【SANYUA16H-
蛋白质的盐析（验证型） 一、实验目的 了解在工业化生产过程中使用（NH4）2SO4的情况，及（NH4）2SO4使用时的注意事项。 二、实验原理 用高浓度中性盐使蛋白质从溶液中沉淀出来的方法称盐析。常用的中性盐有（NH4）2SO4、NaCl 等。高`浓度中性盐能使蛋白质沉淀是因为它具有脱水性，能脱去蛋白质胶粒水膜，又有中和蛋白质胶粒外双电层电荷的作用。不同蛋白质盐析时所需盐浓度不同，故调节盐浓度，可适当地将蛋白质分开。如球蛋白在半饱和硫酸铵溶液中沉淀，清蛋白在饱和硫酸铵溶液中沉淀，用盐析法沉淀的蛋白质并未变性，用稀释的方法或透析的方法可使之复溶。 三、器材与试剂 1、发酵溶液 2、10%的三氯醋酸溶液 3、饱和（NH4）2SO4溶液 4、（NH4）2SO4粉末 四、实验步骤 （1）取发酵溶液5ml，加饱和（NH4）2SO4溶液1ml2ml3ml4ml5ml，混匀，静止数分钟，即有白色沉淀析出，应为何物？过滤至清，除去沉淀，滤液备用。取少量沉淀，加H2O看是否复溶？ （2）取滤液0.5ml，加10%的三氯醋酸数滴，有白色沉淀产生，应为何物？然后在721分光光度计OD600下进行透光率的检测，检测时必须在倒入比色皿以后10秒内读取（为什么？）。（在进行检测时应注意将721分光光度计调整到OD600；在测量前应把机器预热半小时左右。在检测时应注意有效的检测范围是T值15%以上到70%以下）。 （3）另外，取滤液2.5ml于小烧杯中，加（NH4）2SO4粉末，随加随搅拌，直至（NH4）2SO4不能溶解为止，有白色沉淀产生，应为何物？然后过滤至清，除去沉淀，过滤备用。 （4）将（1）-（3）做的滤液中加10%三氯醋酸数滴观察有无沉淀产生。找到没有沉淀的加饱和（NH4）2SO4溶液的点。然后在721分光光度计OD600下进行透光率的检测。并且作出曲线。 （5）对大量的发酵液进行处理，在滤液中加10%三氯醋酸数滴观察有无沉淀产生。 （6）盐析曲线的制作方法：如果要分离一种新的蛋白质和酶，没有文献数据可以借鉴，则应先确定沉淀该物质的硫酸铵饱和度。具体操作方法如下：取已定量测定蛋白质或酶的活性与浓度的待分离样品溶液，冷至0℃～5℃，调至该蛋白质稳定的pH值，分6～10次分别加入不同量的硫酸铵，第一次加硫酸铵至蛋白质溶液刚开始出现沉淀时，记下所加硫酸铵的量，这是盐析曲线的起点。继续加硫酸铵至溶液微微混浊时，静止一段时间，离心得到第一个沉淀级分，然后取上清再加至混浊，离心得到第二个级分，如此连续可得到6～10个级分，按照每次加入硫酸铵的量，查出相应的硫酸铵饱和度。将每一级分沉淀物分别溶解在一定体积的适宜的pH缓冲液中，测定其蛋白质含量和酶活力。以每个级分的蛋白质含量和酶活力对硫酸铵饱和度作图，即可得到盐析曲线。 五、盐析注意事项： 1.盐析的成败决定于溶液的pH值与离子强度，溶液pH值越接近蛋白的等电点，蛋白质越容易沉淀。 2.盐析一般用的硫酸铵，容易吸潮，因而在使用前，一般先磨碎，平铺放入烤箱内60℃烘干后再称量，这样更准确。 3.在加入盐时应该缓慢均匀，搅拌也要缓慢，越到后来速度应该更注意缓慢，如果出现一些未溶解的盐，应该等其完全溶解后再加盐，以免引起局部的盐浓度过高，导致酶失活。
必修化学键化学反应与能量知识点总结
高一化学必修二 第二章化学键化学反应与能量知识回顾 王珊娜2014-6-2 一、化学键与化学反应 1.化学键 1）定义：相邻的两个或多个原子(或离子)之间强烈的相互作用叫做化学键。 2）类型： Ⅰ离子键：由阴、阳离子之间通过静电作用所形成的化学键。 Ⅱ共价键：原子之间通过共用电子对所形成的化学键。 Ⅲ金属键：化学键的一种，主要在金属中存在。 3）化学反应本质就是旧化学键断裂和新化学键形成的过程。 2．离子化合物和共价化合物 1）离子化合物：由阳离子和阴离子构成的化合物。 包含：大部分盐（包括所有铵盐），强碱，大部分金属氧化物，金属氢化物。 活泼的金属元素与活泼非金属元素形成的化合物中不一定都是以离子键结合的，如AlCl 3 不是通过离子键结合的。非金属元素之间也可形成离子化合物，如铵盐都是离子化合物。 2）共价化合物：全部以共价键结合形成的化合物，叫做共价化合物。 包含：非金属氧化物，酸，弱碱，少部分盐，非金属氢化物。 3）在离子化合物中一定含有离子键，可能含有共价键。在共价化合物中一定不存在离子键。 3.几组概念的对比 1）离子键与共价键的比较 键型离子键共价键 概念带相反电荷离子之间的相 互作用 原子之间通过共用电子对所形 成的相互作用 成键方式通过得失电子达到稳定结 构 通过形成共用电子对达到稳定 结构 成键粒子阴、阳离子原子成键性质静电作用静电作用 形成条件大多数活泼金属与活泼非 金属化合时形成离子键 同种或不同种非金属元素化合 时形成共价键(稀有气体元素除 外) 表示方法①电子式如Na＋[· · Cl· · ]－ ②离子键的形成过程： ①电子式，如H· · Cl· · ②结构式，如H—Cl ③共价键的形成过程：
蛋白纯化硫酸铵沉淀盐析法
蛋白纯化硫酸铵沉淀盐析 还能想起那些在荧屏中曾经震撼过我们，具有超能力的英雄么？ 蜘蛛侠，敏捷，灵活迅速飞流直下，忽闪直冲高楼； 绿巨人浩克，力量，速度，耐力，在我们的想象力中膨胀； 还有，我们随身携带星形盾牌，品格高尚的美国队长…… 幻想里中的人物形象存在我们的记忆力，然而生物背景出身的我们，总归要锻炼出属于自己的实验技能，即便是相同的实验步骤，每个人做出来的结果也不尽相同，差别在哪？反复练习，用心总结出属于自己的心得，转化为自己的实验“超能力”吧。本文总结了蛋白纯化硫酸铵沉淀详细的实验原理、步骤，供大家参考。 -------锻炼属于我们自己的实验“超能力”之一 我是超级蜘蛛精 看我有劲儿不？ 冲啊，我是美国队长 而我是一只冷静的科研小蜗牛 这次，我们所要分享的便是一种很常见，但是也很重要的蛋白质纯化方法：硫酸铵沉淀蛋白法，一起走进实验室吧。 硫酸铵沉淀法是粗分离蛋白时常用的纯化和浓缩蛋白的技术。蛋白质的溶解度和盐浓度密切相关，在低浓度的条件下，随着盐浓度的增加，蛋白质的溶解度
增加；但在高浓度的盐溶液里，盐离子竞争性的
结合蛋白表面的水分子，破坏蛋白表面的水化膜，溶解度降低，蛋白质在疏水作用下聚集形成沉淀。每种蛋白质的溶解度不同，因此可以用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。硫酸铵的溶解度大，解离形成大量的NH4+、SO42-离子，会结合大量的水分子，使蛋白质的溶解度下降，另外，其温度系数小，不易使蛋白质变性，因此，蛋白质粗分离时硫酸铵沉淀法是很重要的一种技术，后续可采用层析技术进一步纯化蛋白，效率更高。硫酸铵沉淀法是常用的分离免疫球蛋白的方法。 各种不同蛋白质盐析需要不同浓度的硫酸铵溶液。在实验中建议配置不同梯度浓度的硫酸铵溶液来确定蛋白质沉淀所需的最佳浓度。 （1）参照如下表格配置不同浓度的硫酸铵溶液； 例如，在25 ℃条件下，配置饱和度为100 %的硫酸铵溶液，称取767 g的硫酸铵固体，边搅拌边加入到1 L的蒸馏水中，完全溶解后，用氨水或者硫酸调节pH 到7.0。 （2）沉淀蛋白 将样品离心，去除沉淀，保留上清液并测量体积；一边搅拌一边慢慢的加入硫酸