植物组织培养实验设计及.doc
植物组织培养实验设计及
常用设备的使用与维护
一．实验目的
1.熟悉植物组织培养实验室的组成及设备
2.掌握植物组织培养实验室的设计要求
3.熟悉植物组织培养所需的仪器设备
二．实验原理
植物组织培养是通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。要达到无菌操作和无菌培养，就需要人为创造无菌的环境，使用无菌的器皿及器械，同时还需要人工控制的温度,光照，湿度等培养条件。无菌环境和培养条件的创造需要一定的设施及设备。
三．实验步骤
1.实验室的设计要求
功能齐全、布局合理、环境清洁、易于灭菌
2.实验室的组成及功能
实验室的组成：
洗涤室、药品室、称量室、培养基配制室、灭菌室、接种室、培养室、观察记录室、储藏室、移苗室
实验室的功能：
洗涤室用于玻璃器皿、实验用具的清洗、干燥、培养材料清洗、预处理也可在本室完成。室内应建造大型水槽和一个或几个浸泡
池，水槽最好上一内衬白瓷片的水泥槽，为防止碰坏玻璃器皿，下面可铺一活动的橡胶板。备有晾瓶架，用于放置刷净的培养器皿，配备有一定数量的周转盘或小推车，用于运输培养器皿。地面要注意防滑，排水通畅，墙壁要有耐湿、防潮功能。
药品室用于存放各种药品试剂。室内要求干燥、通风，避免光照，配有药品柜、冰箱等设备。化学试剂物品分类存放于柜中，有毒物质如升汞需要专人密封保存。原药可室温下存放，配好的母液，宜置于4℃冰箱中保存。药品室紧邻称量室较好，便于工作。
称量室进行化学药品的称量。要求干燥、密闭，无直射光照，避免腐蚀性药品和水气直接接触。有固定的水磨石平台，安放普通天平、精密天平和分析天平，要有电源插座，最好设计在阴面的房间，这样对怕光药品的保存和称量有利，称量室紧邻培养基配制室较好，以方便配制母液和培养基。房间较少时，可以与药品室合二为一。
培养基配制室主要进行母液的配制，培养基的配制、分装、包扎和灭菌前的暂时存放。在条件允许下，面积宜大不宜小，室内应有大型实验台。配有电炉、锅子、量具、培养基分装器具、吸管、培养容器、水浴锅和酸度计等。如规模较小，可与洗涤室、灭菌室合并在一起。
灭菌室主要用于培养基和器皿的灭菌以及蒸馏水的制备。建筑上要求其墙壁耐湿、耐高温、墙壁上最好有排除蒸汽的排风扇。有用于灭菌锅的二相或三相电源、供水、排水设施齐全。配有干燥箱、高压蒸汽灭菌锅、蒸馏水器或纯水机以及摆放和存放器皿、培养基的架子和橱柜。灭菌室应邻近接种室，避免灭菌后的培养基长距离搬运，增加污染机会。
接种室主要进行植物材料的表面消毒、分离切割、转接，其无菌程度的高低对组织培养的成功与否起至关重要的作用。在工作方便的前提下，接种室面积宜小不宜大，一般小的无菌室5~7m2即可。平方易吸潮，容易引起污染，有条件的应选择楼房，最好在二层或二层以上，与其他区域隔离。接种室的天花板及四壁尽可能光滑平整，地面平坦无缝，便于清洗和消毒。一般安装滑动门，以减少开关门时空气的流动，在适当位置安装1~2支紫外线灯，用以辐射灭菌。室内干爽安静，清洁明亮，门窗紧闭，减少与外界空气对流，不存放与接种无关的物品，以免形成紫外线无法照射到的死角。室内配有超净工作台、小推车、接种器械、酒精灯、酒精等。为减少接种人员进出时带入的杂菌，接种室外应设有缓冲室，供操作人员更换工作服、帽、鞋之用。为便于观察和参观，中间最好用玻璃墙隔离，接种室的门和缓冲室的门要错开，灭菌以2~3m2为宜。缓冲室最好也安装1支紫外线灯，用于环境的灭菌。
培养室是植物材料生长的场所。培养室应保持清洁，有光照、控温设备和定时设备，温度一般保持在（25±2）℃，光照强度1000~5000lx，光照时间8~26h/d，在实际工作中应根据不同的要求灵活掌握。
培养室主要用电调节温度和补充光照，用电量大。为节省能源，降低成本，其设计以充分利用空间和节省能源为原则。培养室可选两面采光，加大窗户，尽量考虑到利用自然光。采用双层玻璃以利隔热和防尘，培养室高度以比培养架略高为宜，墙壁要求有隔热、防火的性能。室内应保持整洁，切忌堆放无关物品。室内配有培养架、空调、药床等设备。
小的培养室容易控制温度、光照等环境条件，特别是培养材料较少时节能效果更为明显。培养室初次使用要用甲醛熏蒸消毒，培养期间要定期进行室内消毒工作。
观察记录室是对培养物的生长情况及实验结果进行观察、记录的场所。室内应有固定的水磨石台面，放置显微镜、解剖镜、显微照相等仪器，最好还应有一套制片和细胞学染色设备，进行制片或染色观察。室内应安静、清洁、明亮、保证仪器不振动、不受潮。
储藏室用于暂时不用的器皿、用具等的存放。储藏室最好设在楼房低层背阴处，便于物品搬运和存放，房间有良好的通风条件。
移苗室用于试管苗炼苗和移栽。移苗室应具有一定的控温、保湿、遮荫条件，一般要求温度在15~25℃，相对空气湿度在70%以上，避免强光。普通温室或塑料大棚经过适当的改造均可使用，室内配有弥雾装置、遮阳网、防虫网、移植床、营养钵及移栽基质等。
3.植物组织培养实验室基本仪器设备
一．常规设备
1 天平
使用方法及注意事项：
1.要放置在水平的地方。游码要归零。
2.调节平衡螺母(天平两端的螺母)调节零点直至指针对准中央刻度线。
3.左托盘放称量物，右托盘放砝码。根据称量物的性状应放在玻璃器皿或洁净的纸
上，事先应在同一天平上称得玻璃器皿或纸片的质量，然后称量待称物质。
4.添加砝码从估计称量物的最大值加起，逐步减小。托盘天平只能称准到0.1克。加减砝码并移动标尺上的游码，直至指针再次对准中央刻度线。
5.过冷过热的物体不可放在天平上称量。应先在干燥器内放置至室温后再称。
6.物体的质量 =砝码+游码
7.取用砝码必须用镊子，取下的砝码应放在砝码盒中，称量完毕，应把游码移回零点。
8.称量干燥的固体药品时，应在两个托盘上各放一张相同质量的纸，然后把药品放
在纸上称量。
9.易潮解的药品，必须放在玻璃器皿上（如：小烧杯、表面皿）里称量。
10.砝码若生锈，测量结果偏小；砝码若磨损，测量结果偏大。
11.称量完毕后，应当把游码拨回零刻度，把砝码放回砝码盒中。
12.当天平不用时天平罩内应放硅胶或其他中性干燥机以保持干燥。
2.冰箱
3.酸度计
使用方法：
首先、安装
①电源的电压与频率必须符合仪器铭牌上所指明的数据，同时必须接地良好，否则在测量时可能指针不稳。
②仪器配有玻璃电极和甘汞电极。将玻璃电极的胶木帽夹在电极夹的小夹子上。将甘汞电极的金属帽夹在电极夹的大夹子上。可利用电极夹上的支头螺丝调节两个电极的高度。
③玻璃电极在初次使用前，必须在蒸馏水中浸泡24小时以上。平
常不用时也应浸泡在蒸馏水中。
④甘汞电极在初次使用前，应浸泡在饱和氯化钾溶液内，不要与玻璃电极同泡在蒸馏水中。不使用时也浸泡在饱和氯化钾溶液中或用橡胶帽套住甘汞电极的下端毛细孔。
其次、校整
①将“pH—mv”开关拨到pH位置。
②打开电源开头指示灯亮，预热30分钟。
③取下放蒸馏水的小烧杯，并用滤纸轻轻吸去玻璃电极上的多余水珠。在小烧杯内入选择好的，已知pH的标准缓冲溶液。将电极浸入。注意使玻璃电极端部小球和甘汞电极的毛细孔浸在溶液中。轻轻摇动小烧杯使电极所接触的溶液均匀。
④根据标准缓冲液的pH，将量程开关拧到0~7或7~14处。
⑤调节控温钮，使旋钮指示的温度与室温同。
⑥调节零点，使指针指在pH7处。
⑦轻轻按下或稍许转动读数开关使开关卡住。调节定位旋钮，使指针恰好指在标准缓冲液的pH数值处。放开读数开关，重复操作，直至数值稳定为止。
⑧校整后，切勿再旋动定位旋钮，否则需重新校整。取下标准液小烧杯，用蒸馏水冲洗电极。
最后、测量
①将电极上多余的水珠吸干或用被测溶液冲洗二次，然后将电极浸入被测溶液中，并轻轻转动或摇动小烧杯，使溶液均匀接触电极。
②被测溶液的温度应与标准缓冲溶液的温度相同。
③校整零位，按下读数开关，指针所指的数值即是待测液的pH。若在量程pH0~7范围内测量时指针读数超过刻度，则应将量程开关置于pH7~14处再测量。
④测量完毕，放开读数开关后，指针必须指在pH7处，否则重新调整。
⑤关闭电源，冲洗电极，并按照前述方法浸泡。
4.离心机
使用方法：
1)离心前用天平保证离心管的绝对平衡。
(2)打开电源歼关，离心机自检后，开启盖门
(3)选择所需转头，用扳手安装转头，松紧适当。
(4)装载离心管后，拧好转头盖，按下离心机门盖。
(5)设定好转速、时间和温度后，按下启动按钮开始离心。
(6)离心结束后，开启门盖，拧开转头盖。
(7)取出离心管后，卸下转头，关闭电源开关。
(8)在离心机内仓恢复室温后，擦干内壁。
二，灭菌设备
高压蒸汽灭菌器
使用方法：
（1）在外层锅内加适量的水，将需要灭菌的物品放入内层锅，盖好锅盖并对称地扭紧螺旋。
（2）加热使锅内产生蒸气，当压力表指针达到 33.78kPa时，打开排气阀，将冷空气排出，此时压力表指针下降，当指针下降至零时，即将排气阀关好。
（3）继续加热，锅内蒸气增加，压力表指针又上升，当锅内压力增加到所需压力时，将火力减小，按所灭菌物品的特点，使蒸气压力维持所需压力一定时间，然后将灭菌器断电或断火，让其自然冷后再慢慢打开排气阀以排除余气，然后才能开盖取物。
注意事项：
（1）待灭菌的物品放置不宜过紧。
（2）必须将冷空气充分排除，否则锅内温度达不到规定温度，影响灭菌效果。
（3）灭菌完毕后，不可放气减压，否则瓶内液体会剧烈沸腾，冲掉瓶塞而外溢甚至导致容器爆裂。须待灭菌器内压力降至与大气压相等后才可开盖。
（4）装培养基的试管或瓶子的棉塞上，应包油纸或牛皮纸，以防冷凝水入内。
（5）为了确保灭菌效果，应定期检查灭菌效果，常用的方法是将硫磺粉末（熔点为115℃）或安息香酸（熔点为120℃）置于试管内，然后进行灭菌试验。如上述物质熔化，则说明高压蒸气灭菌器内的温度已达要求，灭菌的效果是可靠的。也可将检测灭菌器效果的胶纸（其上有温度敏感指示剂）贴于待灭菌的物品外包装上，如胶纸上指示剂变色，亦说明灭菌效果是可靠的。
（6）现在已有微电脑自动控制的高压蒸气灭菌器，只需放去冷气后，仪器即可自动恒压定时，时间一到则自动切断电源并鸣笛，使用起来很方便。
三.无菌操作设备
1.超净工作台
规格价格及产地：
产品名称、型号规格
单
价产地
经PLT-ZDS650mm宽，单人单面，34普
济型桌上型垂直、水平送
风
00朗
特850mm宽，单人单面，
桌上型垂直、水平送
风
38
00
普
朗
特
水平标准型PLT-DDS
900×750×1430mm，
单人单面，水平送风
洁净度：100级送风
风速：0.3－0.6m/s，
高档不锈钢台面，带
紫外线灯。无隔板，
进口风机，冷轧板三
道酸化工序精制烤
漆。
56
00
普
朗
特PLT-SDS
1500×700×
1430mm，双人单面，
水平送风，洁净度：
100级送风风速：
0.3-0.6m/s，高档不
锈钢台面，带紫外线
灯。无隔板，进口风
机，冷轧板三道酸化
87
00
普
朗
特
工序精制烤漆。
垂直标准型PLT-DDC
980×720×1620mm，
单人单面，垂直送风
洁净度：100级送风
风速：0.3-0.6m/s，
高档不锈钢台面，带
紫外线灯。无隔板，
进口风机，冷轧板三
道酸化工序精制烤
漆。
61
00
普
朗
特PLT-SDC
1500×720×1620，
单人单面，垂直送风
洁净度：100级送风
风速：0.3-0.6m/s，
高档不锈钢台面，带
紫外线灯。无隔板，
进口风机，冷轧板三
道酸化工序精制烤
漆。
92
00
普
朗
特
标准加1700×720×1430，
双人单面，水平送
风，洁净度：100级
12
00
普
朗
特
长型送风风速：
0.3-0.6m/s，高档不锈钢台面，带紫外线灯。无隔板，进口风机，冷轧板三道酸化工序精制烤漆。
2，接种设备
规格价格及产地：
产品名称规格
单
价产地
手术剪125mm弯尖、直尖不锈钢30
上
海140mm弯尖、直尖不锈钢30
上
海180mm弯尖、直尖不锈钢30
上
海
直镊
160mm、200mm、250mm
300mm不锈钢13、18、24、
40
上
海
枪型镊
170mm、200mm不锈钢22、30
上
海250mm、270mm、300mm镍58、68、88上
钛合金海接种棒含接种丝15
上
海手术刀柄3#、7#12
上
海手术刀片10#、11#、12#、15#，10片/包5
上
海接种专用盘Φ14cm，全不锈钢7
上
海
接种器械灭
菌器JZ-1，进口加热棒，0-300度可
调，质保两年
650
普
朗
特JZ-II，数字显示，0-300度可调，
进口加热棒，
880
普
朗
特
本生灯
用于接种器具和培养瓶瓶口的
灼烧灭菌，温度高达1300℃，可
代替酒精灯
860
台
湾
石英珠接种器械灭菌器专用灭菌材料10普朗特
无菌操作步骤及注意事项：
(1)在接种4h前用甲醛熏蒸接种室，并打开其内紫外灯进行灭菌；
(2)在接种前20min，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯；
(3)接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等；
(4)上工作台后，用酒精棉球擦拭双手，特别是指甲处。然后擦拭工作台面；
(5)先用酒精棉球擦拭接种工具，再将镊子和剪子从头至尾过火一遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干；
(6)接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等；
(7)接种完毕后要清理干净工作台，可用紫外灯灭菌30min。
若连续接种，每5天要大强度灭菌一次。
四.培养设备：
1.培养架
2.光照培养箱
光照培养箱SPX-250B-
G
250
升
B-G型采用
不锈钢内
胆，两面光
照。I-G型采
用全真空玻
980
上
海SPX-250I-
G
250
升
108
00
上
海SPX-300B-300118上
G升璃，三面光
照。控温范
围0-50℃。00海
SPX-300I-
G 300升
3.摇床
使用方法：
首先将需振荡培养的样品夹在托盘夹具上。接通电源(将随机所配的电源插头分别插头分别插在本机电源插座上)，合上电源开关，打开温控开关，此时恒温控加热部分也已进入工作状态。数字所显示的度即为工室内的实际温度，-50--100数字为预置温度值。如你需将温度控制在某一区域，只需将数字选至需控制的某一温度上，即可进行恒温。打开振荡开关，振荡部分即可工作，你可根据实际需要，将振荡速度选至0一220转/分范围之内。定时器控制振荡及温控部分。注意事项
1,仪器应置于坚固、干燥、通风性好的地面上或工作台上使用。2,供电电源应有接地装置，以免发生意外。
3,振荡培养箱带压缩机制冷的仪器，搬动时，应平行移动，任何一方倾斜角应小于45度。
4,箱内载物摆放应不影响空气流通，以后证箱内温度均匀
5,做准备工作或存取试验品时，应关闭电源。
6,在转速范围内，中速使用可延长仪器的使用寿命。
7,装培养试瓶，为了使仪器工作时平衡性能好，避免产生较大的振动，装瓶时应将所有的试瓶位布满，各瓶的培养液应大致相等，若培养瓶不足数，可将试瓶对称放置。
8,本仪器不能在有可燃性气体的环境中使用，如发现可燃性气体泄露，千万不可拔去电源插头，关闭温控器或灯开关，否则会产生电花，引起火灾。
9,每次使用结束后，必须清洁仪器内外表面，保持整洁，清理时禁止使用酸化学稀释剂、汽油、笨之类物品清洗。仪器长期使用，自然磨损属正常现象。
4.实验室常用器皿、器械
(一)玻璃器皿
要求：耐腐蚀、耐高温、高压、透明度好和便于接种。
1、培养器皿
试管适于最初消毒材料的转接和初次的继代培养要求：口径大，高度较低
规格：2cm×15cm、2.5cm×15cm、3cm×15cm
三角烧瓶要求：瓶口较大、壁较厚、耐用规格：50ml、100ml、150ml、200ml等
（1）培养皿
适用于游离细胞、原生质体、花粉等的静置培养、看护培养、无菌种子的发芽、植物材料的分离等
要求：上、下能密切吻合。
规格：直径9cm、12cm等
2、容器
烧杯、广口瓶、试剂瓶等
3、计量器皿
量筒、容量瓶及移液管等
4、其他
滴瓶、玻璃棒、漏斗、注射器等
（二）金属器具
（1）镊子类
接种、转移材料或分离茎尖用，以100ml三角瓶为培养瓶，可选用20cm长的镊子。镊子过短，容易使手接触瓶口，造成污染；镊子太长，使用起来不灵活
（2）剪刀类
一般为医用剪刀。用来剪切外植体或继代培养是分离材料（3）解剖刀
切割芽、茎段、愈伤组织等，继代时分离材料，也可用于卫校外植体的接种
（4）解剖针
转移细胞或愈伤组织，微茎尖分离及接种等
（三）其他
周转筐、搪瓷盘、移液管架、酒精灯、试管架等
器皿及用具的洗涤
新购置玻璃器皿因有游离碱性物质，课采用酸洗法洗涤。先用1﹪稀盐酸浸泡4h以上，然后用自来水冲洗；再加洗衣粉溶液及洗涤剂溶液刷洗，用自来水冲洗；最后再用蒸馏水冲洗后，沥干备用。
日常使用过得容器颖先除去瓶内残渣，用自来水冲洗，然后用10﹪~20﹪洗衣粉溶液及洗涤剂溶液浸泡、刷洗，洗衣粉及洗涤剂溶液加热后去污力更强，再用自来水冲洗，最后用蒸馏水冲洗后，沥干备用。
植物组织培养实验基本步骤。。
植物组织培养实验基本步骤 一、母液的配置 1、MS大量元素母液的配制 将大量元素配制成10倍的母液，使用时再稀释10倍。按照配方表中用量依次分别称取扩大10倍的：NH4NO3 、KNO3 、KH2PO4 、 MgSO4·7H2O 、CaCl2·2H2O ，所有药品称取完毕后用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，最后定容至500ml，转入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 2、MS微量元素母液的配制 将微量元素配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别依次称取：MnSO4· 4H2O 、ZnSO4·7H2O 、 H3BO3 、KI 、CuSO4·5H2O 、CoCl2·6H2O ，用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，用容量瓶定容至500ml，转入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 3、MS铁盐母液配制 将铁盐配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别称取扩大100倍的：称
FeSO4·7H2O 和Na2·EDTA ，把FeSO4·7H2O和Na2·EDTA·2H2O分别置于200ml蒸馏水中，加热并不断搅拌使之溶解（磁力搅拌器，边加热，边搅拌）。保持加热，把FeSO4溶液慢慢倒入Na2·EDTA溶液中并不断搅拌，接近沸腾时停止加热，待溶液冷却后加蒸馏水到最终容积500ml，置于棕色细口瓶中，用力振荡1～2min，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名。在室温下避光保存一段时间令其充分反应后，再置于4℃冰箱中保存备用。 4、MS有机化合物母液的配制 将有机化合物配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别称取扩大100倍的：肌醇、维生素B1 、烟酸、甘氨酸、维生素B6 、蔗糖，用蒸馏水依次溶解并定容至500ml后，转入500ml 细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 二、植物激素的配置 常见激素：二氯苯氧乙酸（2，4－D）、萘乙酸（NAA）、吲哚乙酸（IAA）、吲哚－3－丁酸（IBA）、激动素（6-糠氨基嘌呤、 KT）、6－苄氨基嘌呤（6－BA）、赤霉素（GA3）、 1、生长素类： （1）、生长素类在组织培养中的主要作用是：诱导细胞的分裂和根的分化，诱导愈伤组织
(医疗药品)药用植物组织培养实验指导
甘肃农业大学农学院 药用植物组织培养实验指导 柳福智编 农学院中草药栽培与鉴定教研室 2007年8月 前言 药用植物组织培养实验是根据中草药栽培与鉴定专业的培养要求，为学生开设的一门实验课程。药用植物组织培养实验的任务是使学生加深对药用植物组织培养基本理论的理解，掌握药用植物组织培养实验的基本操作技能，学习药用植物组织培养实验的基本知识，养成严格、认真和实事求是的科学态度，提高观察、分析和解决问题的能力，为将来参加工作打下良好的基础。 编者 2007年8月 学生实验守则 1、实验前认真预习，领会实验原理，明确本次实验的目的和要求，了解实验步骤和注意事项。
2、实验时要严格按照规范操作进行，仔细观察实验现象，认真记录有关数据。 3、要认真写好实验报告，实验报告要清楚、简练、整洁。 4、学生进入实验室必须严格遵守实验室规则，服从带教老师的指导。 5、爱护实验室的仪器设备，不准将实验室的仪器设备私自带出室外。 6、严格遵守操作规程及实验时应注意的事项，在使用不熟悉其性能的仪器和药品之前，应查阅有关资料或请教指导教师，不要随意进行实验，以免损坏仪器，浪费试剂，使实验失败，更重要的是预防发生意外事故。 7、实验过程中应注意防火灾、防爆炸、防腐蚀、防污染工作，牢固树立“安全第一”意识。 8、实验结束后，一切仪器试剂应放回原处，玻璃仪器要清洗干净，一些有毒、有腐蚀性的废液应倒入废液缸内。 9、实验台面要擦试干净，由值日生负责安全卫生工作，包括清理实验室，检查水、电的开关，清除垃圾和污物，关好门窗后方可离开实验室。 药用植物组织培养实验报告一般包括以下内容和要求： （1）实验名称、实验日期。 （2）实验目的写明通过本实验要达到的训练目的。
扬州市植物组织培养实验室建设指导方案
扬州市植物组织培养实验室建设指导方案 （试行） 一、建设目的 植物组织培养是20世纪30年代初期发展起来的一项生物技术。在快速繁育、种苗脱毒、远缘杂交、突变育种、基因工程和生物制品等方面都得到了应用。植物组织培养技术涉及到多项高中生命科学课程中的基础知识，例如：细胞全能性原理、细胞增殖、细胞分化、植物激素及生命的基本元素和物质等。在生物选修一《生物技术》教材中，组织培养已经作为一个专题实验，成为高中升学考试的一个考点。组织培养作为一项生物技术，它对学生的动手能力和科学素养都提出新的要求，使学生能够在知识层面、能力层面和情感层面上达到了全面的拓展。 二、建设要求 组织培养实验室面积一般为96-120平方米，学生实验依据无菌间超净工作台的多少分组进行，原则上6~8人一组。 组织培养实验基于对无菌条件的严格要求，由准备室、缓冲间、无菌室、培养室和炼苗室四部分组成。 1、准备室 功能：进行一切与实验有关的准备工作。完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、器皿洗涤、培养基配制与分装、培养基和培养器皿的灭菌、培养材料的预处理等。 设备：准备室应具备实验边台、药品柜、水池、仪器、药品、天平、纯水机（制作组织培养基用水）、酸度计、烘干箱、高压灭菌锅、超声波清洗器及常用的培养基配制用玻璃仪器等。 2、缓冲间 功能：是进入无菌室前的一个缓冲场地，减少人体从外界带入的尘埃等污染物。 要求：缓冲间需5～8平方米，保持清洁无菌。缓冲间需安装紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。 3、无菌间 功能：也叫接种室，主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的转移、试管苗的继代、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序，是植物离体培养研究或生产中最关键的一步。
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验报告 Modified by JACK on the afternoon of December 26, 2020
院(系、部) 化学与生物工程学院专业生物技术（师范）年级13级学号 姓名组别第二组课程名称植物细胞工程学实验日期 指导老师实验名称植物组织培养综合实验 一、实验目的 1.熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法 2.学习、掌握植物组织固体培养基的配制和灭菌方法； 3.掌握超净工作台上的接种方法与注意事项，了解接种室的灭菌方法； 4.了解组织培养的基本程序； 5.掌握接种的方法和材料的培养过程； 6.掌握无菌操作技术，包括外植体除菌和接种技术； 7.观察外植体的生长状况、染菌状况，剔除染菌外植体； 8.了解MS培养基和1/2MS培养基的区别 二、实验原理 1.植物细胞的全能性 一切植物都由细胞构成，细胞是构成植物体的基本结构与功能单位。 植物细胞含有全套遗传信息，具有形成完整植物的潜能。 2.植物细胞表现出全能性的条件 1.离体状态； 2.有一定的营养物质，激素和其他外界条件（无菌、温度、pH）； 3.选择性能优良、细胞全能性表达充分的基因型 3.无菌条件
把植物的组织、器官等，使其在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养基上繁殖。用于进行组织培养的组织、器官和细胞称为外植体。在组培中外植体都死带菌的，在接种前必须进行表面消毒，这时取得培养成功的最基本和重要的前体。组织培养的主要过程都是在无菌条件下进行的，所以所有的器材、植物体、接种室都应是无菌的。 4.脱分化与愈伤组织 已有特定结构与功能的植物组织，在一定条件下，其细胞被诱导改变原来的发育途径，逐步逆转其原有的分化形态，转变为具有分生能力的胚细胞的过程称为脱分化。脱分化所用的化学物质与MS培养基的区别是需要激素诱导。所以脱分化培养需在MS培养基上添加激素进行愈伤组织诱导。 5.培养基 植物组织培养常用的培养基为MS培养基。常用的凝固剂是琼脂,它的主要作用是使液体培养基凝固，琼脂本身并不提供任何营养，它只是一种高分予的碳水物从海藻中提取出来，仅溶解于热水，成为溶胶，冷却后(40℃以下)即凝固为固体状凝胶。琼脂的用量一般在4—10克／升之间。琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方式等有关外，还与高压灭菌时的温度、时间、pH值等因素有关，长时间的高温会使凝固能力下降，过酸过碱加之高温会使琼脂发生水解而丧失凝固能力，存放时间过久，琼脂变褐，也会逐失去凝固能力。MS培养基属于富盐平衡培养基，特点是：无机盐浓度较高，元素间的比例适当，离子平衡性好，具有较强的缓冲性，因而在培养的过程中可维持较好的稳定性；营养丰富，在一般培养中无须额外加
常见园艺植物组织培养培养基配方
常见园艺植物组织培养培养基配方 信息来源：生物谷更新时间：2004-12-21 1:34:00 诱导培养 草莓匍匐茎1/2MS+BA0.2 吊钟海 堂 叶片MS+BA1.0+NAA0.2 MS+BA1.0+NAA0.1 MS+NAA0.2 海石竹叶片MS+BA1.0+NAA0.2 MS+BA1.0+NAA0.1 MS+NAA0.2 马铃薯苗尖MS+BA1.0+IAA0.01 MS+BA1.0+IAA0.01 MS+BA1.0+IAA0.01 分生组织MS+NAA0.07+GA0.004 MS+NAA0.07+GA0.004 MS+NAA0.07+GA0.004 大蒜顶端分生 组织 MS / MS+NAA1.0 芽顶端B5+2ip0.5+NAA0.1 B5+2ip0.5+NAA0.1 B5+2ip0.01+NAA0.2 洋葱鲜茎B5+2,4-D1 B5+2ip1 / 花椰菜分生组织LS+IAA8.0+KIN2.56 LS+IAA8.0+KIN2.56 LS+IAA8.0+KIN0.02 油菜下胚轴、 茎段 B5+BA1.5~2.0+IBA0.2+GA0.5 B5+BA1.5~2.0+IBA0.2+GA0.5 1/2B5+NAA0.05+IAA0.1 西瓜苗端LS+KIN1.0+IAA0.05 LS+KIN2.0+IAA0.05 LS+IAA2.0 葡萄茎尖MS+NAA0.1 MS+NAA0.1 / 麝香石 竹 茎段MS+BA1.0+IAA0.01 MS+BA1.0+IAA0.01 MS+IAA0.1 唐昌蒲腋芽MS+KIN2.0+NAA0.1 MS+KIN2.0+NAA0.1 MS+NAA0.5+AC0.3 月季萌枝MS+BA0.5+NAA0.1 MS+BA0.5+NAA0.1 MS+BA0.5+NAA0.1 非洲菊茎尖MS+KT1+IAA2 MS+KT10+IAA0.5 MS+IAA10 MS+BA2+NAA0.2~0.5 MS+BA2+NAA0.2~0.5 MS+White+IBA1 康乃馨茎尖MS+KT0.5+NAA0.1 MS+KT2+NAA0.02 / MS+KT2+NAA0.2 MS+KT0.5+NAA0.02 / 仙客来球茎White+KT2.5 / / 满天星茎尖MS(或White)+BA1+ NAA0.05 MS(或White)+BA1+ NAA0.05 / 香雪球茎MS+IAA2+2,4-D5 MS+BA1+IAA0.02~0.2 / 变叶木茎段MS+BA1.5+NAA0.15 MS+BA2.5+NAA或IAA0.1 MS+NAA0.5 风信子鲜茎、花 序MS+NAA0.5~10+2,4-D 0.2~1 / / 矢车菊茎Bonner+2,4-D0.7 / / 大丽菊侧芽MS+BA1+NAA1 MS+BA1+NAA1 MS+NAA0.5~1
植物组织培养实验室 组培室 规划设计
植物组织培养实验室组培室规划设计 一、实验室要求理想的组织培养实验室应该建立在安静、清洁、远离污染 源的地方，最好在常年主风向的上风方向，尽量减少污染。规模化生产的组织 培养实验室最好建在交通方便的地方，便于培养产品的运送。实验室的建设均 需考虑两个方面的问题：一是所从事的实验的性质，即是生产性的还是研究性的，是基本层次的还是较高层次的；二是实验室的规模，规模主要取决于经费 和实验性质。无论实验室的性质和规模如何，实验室设置的基本原则是：科学、高效、经济和实用。一个组织培养实验室必须满足3个基本的需要：实验准备(培养基制备、器皿洗涤、培养基和培养器皿灭菌)、无菌操作和控制培养。此外，还可根据从事的实验要求来考虑辅助实验室及其各种附加设施，使实验室 更加完善。在进行植物组织培养工作之前，首先应对工作中需要哪些最基本的 设备条件有个全面的了解，以便因地制宜地利用现有房屋，或新建、改建实验室。实验室的大小取决于工作的目的和规模。以工厂化生产为目的，实验室规 模太小，则会限制生产，影响效率。在设计组织培养实验室时，应按组织培养 程序来没计，避免某些环节倒排，引起日后工作混乱。植物组织培养是在严格 无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件，需要一定的设备、器材和用具，同 时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。二、实验室组成(一)基本实 验室基本实验室包括准备室、洗涤灭菌室、无菌操作室、培养室、缓冲间，是 组织培养实验所必须具备的基本条件。如进行工厂化生产，年产4万-20万， 需3-4间实验用房，总面积60平方米。1、准备室(化学实验室)功能：又叫化 学实验室，进行一切与实验有关的准备工作：完成所使用的各种药品的贮备、 称量、溶解、器皿洗涤、培养基配制与分装、培养基和培养器皿的灭菌、培养 材料的预处理等。要求：最好有20平方米左右。要求宽敞明亮、以便于放置多个实验台和相关设备，方便多人同时工作；同时要求通风条件好，便于气体交换；实验室地面应便于清洁，并应进行防滑处理。分类：分体式-研究性质实验室，分开的若干房间将准备室分解为药品贮藏室、培养基配制与洗涤室和灭菌 室等，功能明确，便于管理，但不适于大规模生产。通间式-规模化实验室，准备室一般设计成大的通间，使试验操作的各个环节在同一房间内按程序完成。 准备试验的过程在同一空间进行，便于程序化操作与管理，试验中减少各环节 间的衔接时间，从而提高工作效率。此外还便于培养基配制、分装和灭菌的自
园艺植物组织培养形考一-0003
园艺植物组织培养形考一 -0003 试卷总分：100 判断题(共26题,共52分) 开始说明： 结束说明： 1.(2分) 琼脂本身营养丰富，是一种由海藻中提取的高分子碳水化合物。 √ × 2.(2分) 根据培养方式植物组织培养可分为固体培养和液体培养，其中液体培养是最常用的方法。 √ × 3.(2分)
再分化是指脱分化后具有分生能力的细胞再经过与原来相同的分化工程，重新形成各类组织和器官甚至形成完整植株的过程。 √ × 4.(2分) 一般来说，愈伤组织的增殖生长只发生在与琼脂接触的表面，而不与琼脂接触的一面极少细胞增殖，只是细胞分化形成紧密的组织块。 √ × 5.(2分) 继代培养（增殖培养）就是将初代培养得到的培养物转移到新的相同培养基上进行培养。 √ × 6.(2分) 天然有机复合物的成分比较复杂，大多含有氨基酸、激素等一些活性物质，因而能明显促进细胞和组织的增殖和分化。 √ × 7.(2分) 缓冲间是进入无菌操作区域的缓冲场地，缓冲间的门应该与无菌操作区域的门对开，使缓冲间形成空气对流，从而减少污染。
√ × 8.(2分) White培养基无机盐含量较低，常用于诱导芽的培养。 √ × 9.(2分) 超净工作台能将空气通过由特制的微孔泡沫塑料片层叠合组成的“超级滤清器”后吹送出来，形成无尘无菌的超净空气层流，从而使超净工作台面保持无菌状态。 √ × 10.(2分) 胚状体就是离体培养条件下没有经过受精过程，但经过胚胎发育过程，所形成的胚的类似物的统称。 √ × 11.(2分) 植物组织培养技术可使再生作用在更大范围内表现出来，表现为种类增加及再生部位扩大。
植物组织培养实验设计及.doc
植物组织培养实验设计及 常用设备的使用与维护 一．实验目的 1.熟悉植物组织培养实验室的组成及设备 2.掌握植物组织培养实验室的设计要求 3.熟悉植物组织培养所需的仪器设备 二．实验原理 植物组织培养是通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。要达到无菌操作和无菌培养，就需要人为创造无菌的环境，使用无菌的器皿及器械，同时还需要人工控制的温度,光照，湿度等培养条件。无菌环境和培养条件的创造需要一定的设施及设备。 三．实验步骤 1.实验室的设计要求 功能齐全、布局合理、环境清洁、易于灭菌 2.实验室的组成及功能 实验室的组成： 洗涤室、药品室、称量室、培养基配制室、灭菌室、接种室、培养室、观察记录室、储藏室、移苗室 实验室的功能： 洗涤室用于玻璃器皿、实验用具的清洗、干燥、培养材料清洗、预处理也可在本室完成。室内应建造大型水槽和一个或几个浸泡
池，水槽最好上一内衬白瓷片的水泥槽，为防止碰坏玻璃器皿，下面可铺一活动的橡胶板。备有晾瓶架，用于放置刷净的培养器皿，配备有一定数量的周转盘或小推车，用于运输培养器皿。地面要注意防滑，排水通畅，墙壁要有耐湿、防潮功能。 药品室用于存放各种药品试剂。室内要求干燥、通风，避免光照，配有药品柜、冰箱等设备。化学试剂物品分类存放于柜中，有毒物质如升汞需要专人密封保存。原药可室温下存放，配好的母液，宜置于4℃冰箱中保存。药品室紧邻称量室较好，便于工作。 称量室进行化学药品的称量。要求干燥、密闭，无直射光照，避免腐蚀性药品和水气直接接触。有固定的水磨石平台，安放普通天平、精密天平和分析天平，要有电源插座，最好设计在阴面的房间，这样对怕光药品的保存和称量有利，称量室紧邻培养基配制室较好，以方便配制母液和培养基。房间较少时，可以与药品室合二为一。 培养基配制室主要进行母液的配制，培养基的配制、分装、包扎和灭菌前的暂时存放。在条件允许下，面积宜大不宜小，室内应有大型实验台。配有电炉、锅子、量具、培养基分装器具、吸管、培养容器、水浴锅和酸度计等。如规模较小，可与洗涤室、灭菌室合并在一起。
植物组织培养实验报告
如对你有帮助，请购买下载打赏，谢谢！ 院(系、部) 化学与生物工程学院专业生物技术（师范）年级13级学号姓名组别第二组课程名称植物细胞工程学实验日期2016.3-6 指导老师实验名称植物组织培养综合实验 一、实验目的 1.熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法 2.学习、掌握植物组织固体培养基的配制和灭菌方法； 3.掌握超净工作台上的接种方法与注意事项，了解接种室的灭菌方法； 4.了解组织培养的基本程序； 5.掌握接种的方法和材料的培养过程； 6.掌握无菌操作技术，包括外植体除菌和接种技术； 7.观察外植体的生长状况、染菌状况，剔除染菌外植体； 8.了解MS培养基和1/2MS培养基的区别 二、实验原理 1.植物细胞的全能性 一切植物都由细胞构成，细胞是构成植物体的基本结构与功能单位。植物细胞含有全套遗传信息，具有形成完整植物的潜能。 2.植物细胞表现出全能性的条件 1.离体状态； 2.有一定的营养物质，激素和其他外界条件（无菌、温度、pH）； 3.选择性能优良、细胞全能性表达充分的基因型 3.无菌条件 把植物的组织、器官等，使其在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养基上繁殖。用于进行组织培养的组织、器官和细胞称为外植体。在组培中外植体都死带菌的，在接种前必须进行表面消毒，这时取得培养成功的最基本和重要的前体。组织培养的主要过程都是在无菌条件下进行的，所以所有的器材、植物体、接种室都应是无菌的。 4.脱分化与愈伤组织 已有特定结构与功能的植物组织，在一定条件下，其细胞被诱导改变原来的发育途径，逐步逆转其原有的分化形态，转变为具有分生能力的胚细胞的过程称为脱分化。脱分化所用的化学物质与MS培养基的区别是需要激素诱导。所以脱分化培养需在MS培养基上添加激素进行愈伤组织诱导。 5.培养基 植物组织培养常用的培养基为MS培养基。常用的凝固剂是琼脂,它的主要作用是使液体培养基凝固，琼脂本身并不提供任何营养，它只是一种高分予的碳水物从海藻中提取出来，仅溶解于热水，成为溶胶，冷却后(40℃以下)即凝固为固体状凝胶。琼脂的用量一般在4—10克／升之间。琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方式等有关外，还与高压灭菌时的温度、时间、pH值等因素有关，长时间的高温会使凝固能力下降，过酸过碱加之高温会使琼脂发生水解而丧失凝固能力，存放时间过久，琼脂变褐，也会逐失去凝固能力。MS培养基属于富盐平衡培养基，特点是：无机盐浓度较高，元素间的比例适当，离子平衡性好，具有较强的缓冲性，因而在培养的过程中可维持较好的稳定性；营养丰富，在一般培养中无须额外加入复杂的有机成分；微量元素种类全，浓度高。这类培养基是目前使用最广泛的培养基。 6.生长调节物质 包括天然植物激素额人工激素类似物。植物激素是一类植物自身合成、同时对其生长发育具有重要调节作用的有机化合物。生长调节物质对于离题培养中的细胞分裂分
园艺植物组织培养形考一-0002-浙江电大辅导资料
请认真阅读完再下载：预览的题目顺序完全和您自己的试题顺序完全相同再下载！ 园艺植物组织培养形考一-0002 浙江广播电视大学形成性测评系统课程代码：3305830 参考资料 试卷总分：100 判断题(共26题,共52分) 1.(2分) 缓冲间是进入无菌操作区域的缓冲场地，缓冲间的门应该与无菌操作区域的门对开，使缓冲间形成空气对流，从而减少污染。 √ × 参考答案：× 2.(2分) 愈伤组织的器官发生各种途径中，最常见的、也是多数植物具有的是“先形成芽，再在芽伸长后，在其茎的基部长出根，从而形成小植株”的再生途径。 √ × 参考答案：√ 3.(2分) 植物组织培养具有生长周期长、繁殖率较低的特点，所以短期内推广难度较大。 √ × 参考答案：× 4.(2分) 已污染的玻璃器皿需经124℃灭菌消毒处理。 √ × 参考答案：√ 5.(2分) 配制母液所需药品应采用等级较高的化学纯或分析纯试剂。 √ × 参考答案：√ 6.(2分) 相比其他培养基，MS培养基的硝酸盐含量较低。 √ × 参考答案：× 7.(2分) 胚状体就是离体培养条件下没有经过受精过程，但经过胚胎发育过程，所形成的胚的类似物的统称。 √ × 参考答案：√ 8.(2分)
Gautheret、White、Nobecourt一起被誉为组织培养学科的奠基人。 √ × 参考答案：√ 9.(2分) 琼脂本身营养丰富，是一种由海藻中提取的高分子碳水化合物。 √ × 参考答案：× 10.(2分) 天然有机复合物的成分比较复杂，大多含有氨基酸、激素等一些活性物质，因而能明显促进细胞和组织的增殖和分化。 √ × 参考答案：√ 11.(2分) 人工配制培养基的主要成分包括：水分、无机盐、有机物、植物激素、培养物的支持材料五大类。 √ × 参考答案：√ 12.(2分) 胚状体发生途径的有性后代遗传性更接近母体植株. √ × 参考答案：√ 13.(2分) 脱毒培养和器官离体快繁是植物组织培养中应用规模较小、经济效益较差的技术应用。 √ × 参考答案：× 14.(2分) 用量筒定容时，应平视溶液凹面与刻度线卡齐。 √ × 参考答案：√ 15.(2分) 在组培实验室装修时，尤其注意灭菌、洗涤区域的地面应耐湿防滑、并排水良好。 √ × 参考答案：√ 16.(2分) 根据培养方式植物组织培养可分为固体培养和液体培养，其中液体培养是最常用的方法。√
植物组织培养实验室(组培室)规划设计
植物组织培养实验室 (组培室规划设计 2009年 05月 31日星期日 10:18一、实验室要求 理想的组织培养实验室应该建立在安静、清洁、远离污染源的地方, 最好在常年主风向的上风方向, 尽量减少污染。规模化生产的组织培养实验室最好建在交通方便的地方, 便于培养产品的运送。 实验室的建设均需考虑两个方面的问题:一是所从事的实验的性质, 即是生产性的还是研究性的, 是基本层次的还是较高层次的; 二是实验室的规模, 规模主要取决于经费和实验性质。 无论实验室的性质和规模如何,实验室设置的基本原则是:科学、高效、经济和实用。一个组织培养实验室必须满足 3个基本的需要:实验准备 (培养基制备、器皿洗涤、培养基和培养器皿灭菌、无菌操作和控制培养。此外,还可根据从事的实验要求来考虑辅助实验室及其各种附加设施,使实验室更加完善。 在进行植物组织培养工作之前,首先应对工作中需要哪些最基本的设备条件有个全面的了解, 以便因地制宜地利用现有房屋, 或新建、改建实验室。实验室的大小取决于工作的目的和规模。以工厂化生产为目的,实验室规模太小,则会限制生产,影响效率。在设计组织培养实验室时, 应按组织培养程序来没计, 避免某些环节倒排, 引起日后工作混乱。植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件, 需要一定的设备、器材和用具, 同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。 二、实验室组成 (一基本实验室 基本实验室包括准备室、洗涤灭菌室、无菌操作室、培养室、缓冲间,是组织培养实验所必须具备的基本条件。如进行工厂化生产,年产 4万 -20万, 需 3-4间实验用房,总面积 60平方米。
《植物组织培养》课程标准
《园林植物组织培养》课程标准 适用专业：园林技术、烟草栽培技术 第一部分前言 植物组织培养是在无菌条件下，将离体的植物材料（器官、组织、细胞、原生质体等）培养在人工控制的条件下，使其再生形成完整植株的技术。进入21世纪，生物技术发展迅猛，在植物生产中的应用愈来愈多，植物组织培养也成为生产中不可或缺的一种手段。基于工作过程的《植物组织培养》课程开发与设计，坚持以服务为宗旨，以就业为导向，直接面向生产实践，构建学校与企业供需和谐的技术平台，通过分解组培工作过程能力，将组培企业生产环节模块化，工作过程项目化、任务化，采用多种教学方法与手段，培养具有敬业精神和协作能力的专业技术人才。 一、课程性质 《植物组织培养》是园林技术、烟草栽培技术专业学习领域中的专业核心技术课程，是基于植物组织培养生产过程，突出培养学生组织培养操作技能应用的一门工学结合的课程。 本课程重视实践能力的培养，强调通过项目实战、理论与实训一体等方法，激励学生主动思考和大胆实践，进而形成积极的职业态度和和熟练的职业能力。 该课程以《植物及植物生理》、《植物生长与环境》等为前导课程，学习完本课程，学生直接进入顶岗实习阶段，在园林技术专业职业能力培养中起到了明显的支撑作用。 二、课程设计思路 围绕“工学结合，能力为本”的理念，通过校企合作，共同开发，根据组培具体工作岗位的典型工作任务，依照岗位对组培工作的职业能力要求，兼顾学生未来的可持续发展，运用项目引导教学、现场教学、企业实景教学等多种教学方法和手段，以培养学生组培职业工作能力为重点，选取教学内容。 1、面向职业岗位，注重素质结构 本课程是面向组培企业培养基制作工、组织培养接种工和组培苗驯化管理员3个岗位的需要，培养掌握组培核心职业能力的专业人才，提倡在全面素质结构基础上培养职业能力。 2、基于工作过程，建立职场环境 根据组培工作的内容，依照一般组培的工作流程，组织课程内容。依托“洋兰组培生产任务”、“铁皮石斛有机基质无土栽培技术研究”等课题，充分利用真实职业环境，组织参与真实职业活动，积累经验，锻炼学生的心智，培养学生合作共事能力，并使学生熟练掌握职业所需的主要知识、技能、态度和关键能力。 3、采用项目途径，开展体验参与 本课程构建“教、学、做一体”教学模式，以项目为载体，让学生在教师的指导下，通过实践、参与和合作等方式，实现项目目标，感受成功。在学习过程中进行情感和策略调整，以形成积极的学习态度，促进职业能力的提高。 4、注重过程评价，促进学生发展 建立能激励学生学习兴趣和自主学习能力发展的评价体系。注重学生学习的积极性和自信心。评价要有利于促进学生综合能力和健康人格的发展，促进教师不断提高教育教学水平，促进本课程的不断发展与完善。
植物组织培养实验参考答案9
植物组织培养实验复习题 一、名词解释 1、大量元素:指含量占生物总重量万分之一以上的元素，包括C、H、O、N、P、S、K、C、Mg等。 2、微量元素:含量占生物总重量万分之一以下的元素。 3、植物生长调节剂:人工合成的对植物的生长发育有调节作用的化学物质。 4、外植体：把由活植物体上切取下来以进行培养的那部分组织或器官 5、细胞全能性：植物体的每个细胞都含有该植物全部的遗传信息。 6、基础培养基：根据植物营养原理和植物组织离体培养的要求而人工配置的营养基质。 7、愈伤组织:人工培养基上由外植体组织的增生细胞产生的一团不定形的疏松排列的薄壁细胞。 8、褐变:植物组织中多酚氧化酶被激活，使酚类物被氧化成醌类物，可抑制其他酶活性，毒害外植体。 9、茎尖脱毒:茎尖分生区的病毒传播速度很慢，利用茎尖组培获得无病毒苗，来达到脱毒的目的。 10、不定芽：凡从叶、根或芽节间或是离体培养的愈伤组织上等通常不形成芽的部位生出的芽。 11、污染率：污染数除以接种数，再乘以100%。 12、诱导率：愈伤数除以未污染数，再乘以100%。 13、成活率：成活数除以未污染数，再乘以100%。 14、接种：将表面消毒的外植体转接到无菌的培养基上的过程。 15、消毒：消灭材料上的病菌（不损伤植物材料）。 16、灭菌：利用物理或化学的方法，达到组织培养所学的无菌环境。 17、母液：欲配培养液的浓缩液。 18、无病毒苗：指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要危害病毒在植物内的存在表现为阴性反应的苗木。 19、植物组织培养：在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体，培养在无菌培养基上和人工控制的环境中，使其生长、分化、增殖，甚至长出新的植株的过程和技术。 20快速繁殖：采取培养基配制，材料灭菌，无菌培养，幼苗转移到苗床，成苗转至大田栽种五步走的繁殖培养方式 21、继代培养：继代培养是指愈伤组织在培养基上生长一段时间后，营养物枯竭，水分散失，并已经积累了一些代谢产物，此时需要将这些组织转移到新的培养基上的培养方式。 22、生根培养：将长到一定长度的微枝（>10mm）转移到生根培养基上培养。 23、玻璃化现象：试管苗的茎叶变成透明水渍状，生长畸形，增殖系数明显下降，难以诱导生根，即使诱导生根，其根系质量极差，移栽成活率极低。 24、暗培养： 25、液体培养：将所需培养物的悬浮液在液体培养基中培养的方法。 26、脱分化：一个成熟细胞回复到分生状态或胚性细胞状态的现象。 27、分化：由于细胞的分工而导致的细胞结构和功能的改变或发育方式改变的过程。 28、热处理脱毒：利用高温下使植物组织中的病毒部分钝化或完全失去活性的方法。 1 / 6 29、微尖嫁接技术：把极小（<0.2mm）的茎尖作为接穗嫁接到实生砧木上（无菌种子培养获无菌
园艺植物组培育苗技术分析
园艺植物组培育苗技术分析 发表时间：2018-11-14T16:23:14.937Z 来源：《建筑学研究前沿》2018年第22期作者：邓伟斌 [导读] 组培育苗，即组织培养育苗技术，其属于一种典型的生物技术，其应用范围很广。 广东美景园林建设有限公司 516000 摘要：在社会发展进程中，园林工程成为重要的项目之一，旨在为改善当前城市环境污染严重的现状，净化城市空气，为人们提供一个优质的生活环境，是促进城市可持续发展的重要举措。园林工程建设体系中，组培育苗技术不断衍生，其是园艺植物培育的一种重要途径，该种技术所产生的培育效果甚为理想。对此，在此次研究中，我们以广东地区园艺植物组培育苗技术为对象展开系统化的分析，旨在提高城市园林植物培育水平。 关键词：园艺植物；组培育苗；技术 组培育苗，即组织培养育苗技术，其属于一种典型的生物技术，其应用范围很广，其所产生的价值意义是不可替代的，其是种苗工厂化、规划化生产的主要方式。现如今，植物脱毒技术、离体快繁技术等逐步被应用到草莓、马铃薯与兰花等植物育苗之中，获取了理想的培育效果，这对于我国苗木快繁与肿瘤脱毒而言意义重大。以下我们就组织培育苗产业的基本发展现状展开分析。 一、组织育苗产业发展现状分析 关于组培育苗的研究，最早的研究起源于美国。1943年，美国的专家与学者展开了系列的分析与研究，从中发现，植物生长点周边的病毒浓度比较低，甚至很多区域根本没有病毒[1]。在此基础上，专家们利用植物的茎尖开展组织培养，获得了脱病毒苗，主要是利用脱毒苗来实现快速繁殖，进而生产出大量的脱毒种苗。1958年，我国的相关专家彭爱红等展开了研究，提出胡萝卜的韧皮部细胞培养得到了完整植株，且该植株可以开花结果，进而使得该技术逐步被应用到农业生产领域，其推广效果甚佳。 在我国，关于无病毒种苗与植物快速繁殖的研究最早开始于上世纪70年代。鉴于组织培养技术的繁殖系数比较大，且繁殖速度比较快，以获得无病毒性的植株，且获得了极高的经济效益。如今，组培育苗技术在我国得到了广泛的应用，其在育种、育苗等方面均取得了理想的效果。兰花是我国十大名花之一，其在广东地区的种植规模很大，广西省百色市乐业县与那坡县、广东省韶关市翁源县、广东省佛山市顺德区等被誉为“中国兰花之乡”。组培育苗技术在兰花种苗生产中的应用是最为典型的。1960年，茎尖组培技术研发并运用成功，获得了无病毒性的兰花组培苗，主要是借助原球茎继代培养方式来达到兰花试管苗生产的效果。目前，我国的组培技术正在逐步完善，通过应用组培技术，使得广东地区的兰花种植技术呈现商品化与规模化的态势发展，进而产生了一种新格局。我国在离体快繁育苗技术方面的研发起步比较晚，可是，发展速度还是很快的，特别是广东、广西与海南等地。当前，广东地区已然对100多种花卉观叶植物展开科学的组培，年产苗木高达500万株，其发展势头比较好。 二、园艺植物组培育苗技术 1、光自养组织培养技术 光自养组织培养技术即植物无糖组织快繁技术，其主要是在组培时，将CO2输入其中，将其作为重要的糖源，旨在为植物体生长提供所需的碳资源，经过系列的生长发育，再加之环境内各项因子的管控，能确保试管苗从兼养型逐步向自养型方向转变，进而衍生出一种生产种苗速度更快、种苗更优质的新型植物快繁技术。和传统的组培技术相比，无糖组织培养主要是将CO2作为重要的碳源，能减少糖类物质应用而产生的微生物污染问题，能实现对污染率的有效控制[2]。此外，结合植物的实际需要，需强化对组培微环境的合理化控制，其在相应条件下可以为植物的生长提供良好的生长环境，可提高植物生长速率，以确保植物可健康而茁壮的生长。同时，光自养组培主要是把多孔型无机材料视为重要的培养基质，如石沙子、纤维、成型岩棉等，这些材料不但成本低，也具有良好的透气性。据肖玉兰等专家的研究，应用此种组培技术，可大大提高小植株的生根质量。然而，在实际操作中，无糖组织培养微繁殖的试验与研究虽然成功，但是之其需要注意的问题也比较多。例如，相关人员应加深对组培苗生长环境、培养机制、生理特点等的认知，只有掌握各项条件要素，才能为无糖组织培养提供相应的参考。另外，植物材料限制问题突出。其和普通微繁殖相比，无糖组织培养要求外植体必须要具备高质量的茎和芽，若想更好的开展光合作用，促进植物健康而茁壮的成长，要求植株要具备足够的叶面积或携带子叶的体细胞胚亦可。 2、开放组织培养技术 开放组培是利用抗菌剂来代替高压灭菌与超净工作台，运用塑料杯来代替以往的组培瓶，让整个操作脱离以往组培严格无菌的环境，可在自然而开放的有菌条件下开展组织培养工作。开放组培无需作高压灭菌与超净工作台处理，仅仅是在培养基内加入抑菌剂，从而达到抑制病菌生长与蔓延的效果[3]。应用此种组培方法，其优势在于对整个组培操作过程进行简化，大大降低组培成本。然而，在实际应用过程中也遭遇了相应的问题，如植物类型不同，其应如何选择抗菌素、抗生素与防腐剂组合以及抗生素浓度、浸泡时间等问题，这些均需要通过一定的试验才可完成。 3、非试管苗快繁技术 非试管苗快繁技术主要是利用生物技术原理，将计算机控制技术作为重要的载体来打造新型育苗技术。借助计算机平台能够精确的模拟环境各要素，这为离体植物生长发育提供合适的营养、光、水、温等环境，能促进种苗健康而茁壮的成长，其为此种技术的核心点，其和以往扦插嫁接技术与新型组织培养技术具有共同之处，但是也存在着一定的差距。此种技术对果树育苗意义深远，特别是对樱桃、杏、梅、李等难以生根的果树效果明显。经过多年研究，以往的组培技术型在果树生根培养和炼苗等技术阶段存在着严重障碍。尽管很多果树品种可以完成芽增殖与培养工作，但是，仍旧无法克服生根难的问题。非试管快繁技术主要是在全光开放环境下取代了试管环境，运用蛭石、珍珠岩等透气、疏松与不含糖的无机基质[4]，使用物理灭菌方式来替代以往的灭菌方法，借助叶片自身光合作用来启动生根基因，进而达到快速成苗的效果。此种技术主要是和计算机的环控技术进行有效的结合，运用离体材料的生根与光合作用来模拟最佳环境，进而满足光合自养过程的最优化。 结束语 综上所述，为打造更为和谐、健康的城市环境，政府部门必须重视园林工程建设，重视对先进园艺植物组培育苗技术的应用，从而培育出更为优质的植物苗，进而提高园艺植物组培水平。在此次研究中，结合广东地区发展实况，笔者针对园艺植物组培育苗技术的研究进
第五章 植物组织培养技术实验方案
第五章植物组织培养技术 一、植物组织培养中的基本概念 (1) 植物组织培养技术: 在无菌培养的条件下，将离体的植物器官（根，茎，叶，花，果实等）、组织（形成层，花药组织等）、细胞（体细胞，生殖细胞等）以及原生质体等培养在人工配制的培养基上，并给予适当的培养条件，使其长成完整植株的过程。 (2) 理论依据： 植物细胞的全能性，即指植物机体的每个细胞都含有该物种全套的基因组，具有发育成完整个体的潜力。 (3) 外植体： 从活体植株上切下的，用于组织培养的细胞、组织和器官。一般包括茎尖、根、茎、叶、花、种子等器官以及他们形成的体细胞胚等材料。 (4) 分化： 在个体发育过程中，由一种相同的细胞类型经细胞分裂后逐渐在形态、结构和功能上形成稳定性差异，产生不同的细胞类群的过程称为细胞分化。 (5) 脱分化： 已经高度分化的植物器官、组织或细胞，在切割损伤和培养物内外因素的共同作用下，逐渐丧失原来的分化结构和功能，最后形成无组织的细胞团或愈伤组织的过程。 (6) 愈伤组织： 在人工培养基上由外植体脱分化形成的一团无序生长的薄壁细胞。（具有细胞分裂能力）。 (7) 再分化： 已经脱分化的细胞在一定条件下，又可经过愈伤组织或胚状体，再分化出根和芽，形成完整植株，这一过程叫作再分化。 (8) 不定芽： 在高等植物正常的个体发育中，芽一般是只从茎尖或叶腋等的一定位置生出。所以这种象顶芽、腋芽、副芽等均在一定部位生出的芽，称为定芽。与此相反，凡从叶、根、或茎节间等通常不形成芽的部位生出的芽，则统称为不定芽。 (9) 胚状体： 在离体植物细胞、组织或器官培养过程中，由一个或一些体细胞，经过胚胎发生和发育过程，形成的与合子胚相类似的结构。 二、植物组织培养过程（菊花为例） 1、培养基的配制: 方法：培养基干粉配制法 称取培养基干粉42g加水加热煮沸溶解后定溶至1L，按照需要的浓度分别加入激素。 （其中生根用的植物激素NAA为0.2mg/1000ml） 用1mol/L NaOH和1mol/L HCl调节pH至5.8。将配好的培养基迅速分装至150ml组培瓶中，拧上盖子，放入灭菌锅121℃，灭菌20min。 2、菊花接种与培养：
植物组织培养试验
《植物组织培养技术》实验指导 实验一组培室设备参观及器皿的洗涤和灭菌 一、目的要求： 1．通过参观，了解组织培养室的几个主要组成部分和各部分应有的基本设备以及有关仪器的用途与功能。 2．通过实际操作，学会洗涤剂的配制和各种器皿的清洗和灭菌方法。 二、材料用具： 高压灭菌锅、烘箱、超净工作台、双筒解剖镜、酸度测定仪、空调机、控温仪、百分之一与万分之一天平、电炉、玻璃器皿（试管、三角瓶、移液管、漏斗、烧杯、容量瓶、试剂瓶、量筒酒精灯），以及镊子、解剖刀、解剖针、手术剪，肥皂、洗衣粉、重铬酸钾、浓硫酸等。三、说明： 在进行各类具体的组培实验前，首先了解组培室的结构及主要设备的用途和性能是十分必要的，总体上的了解有利于以后各实验的进行以及正确的使用各种仪器和设备。 植物组织培养是一项十分细致的工作，为了保证植物外植体不受污染，第一关就是要对各种器皿进行清洗和消毒，使它们保持无菌状态，
做这些工作同样有一套科学的方法和需要熟练的技巧，因此每个学生必须学好这套基本功。 四、方法和步骤： 首先在老师带领下参观组培室，并听取讲解，然后配制洗液，称取工业用重铬酸钾40克，溶解在500ml在水中，然后徐徐加入450ml 粗制浓硫酸（或废硫酸）配好的溶液呈红色，铬酸洗液是一种强氧化剂，去污能力强，但玻璃器皿上沾有油脂、凡士林、石蜡等则用此液无效，铬酸洗液可反复使用，直到溶液呈青褐色为止。此溶液腐蚀性强，洗涤时需注意。 每人清洗部分玻璃器皿，方法：清水洗净→泡入洗衣粉水溶液中进行洗刷→清水反复冲洗→蒸馏水淋一遍→烘干备用。 然后清洗部分较脏的玻璃器皿，方法：采用先碱后酸，即用洗衣粉洗刷后冲洗干净→晾干→侵入酪酸洗液，浸泡时间视器皿的肮脏程度而定→清水反复冲洗干净→蒸馏水淋洗一遍→烘干备用。 带有石蜡或胶布的器皿：先将其除去，再用常规洗涤，石蜡用水煮沸数次即可去掉，胶布粘着物则需用洗衣粉液煮沸数小时，再用水冲洗，凉干后浸入洗液，以后的步骤同前。 对器皿和用具进行高压灭菌，即用手提式高压灭菌锅，在1.1个大气压下保持15~20分钟。解剖刀、手术剪、解剖针、镊子等用具在接
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验报告 一实验目的 让植物组织经过脱分化作用，形成愈伤组织，经过再分化作用，愈伤组织又能重新分化为有结构的组织和器官，最终形成完整的植株。 二实验原理 植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。植物激素在此过程中起着重要的作用，吲哚乙酸（IAA ）和 6 –苄基氨基腺嘌呤（6 – BA ）的比例，决定了根和芽的分化。 三实验器材 （一）试剂 乙醇、IAA 或 2 ，4 – D 、HgCl 2 （或次氯酸钠）、6- 苄基氨基腺嘌呤（6-BA ） MS 培养基 （二）仪器设备 培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，三角烧瓶（100mL ），烧杯，量筒，培养皿，超净工作台，分析天平，长镊子，剪刀，橡皮筋等 三实验步骤 1. 配制培养基 （1 ）愈伤组织诱导培养基：MS 培养基（蔗糖含量为10 g/L ，2,4 – D 含量为 2 mg/L ，琼脂10 g/L ）。 （2 ）试验培养基：在MS 培养基中按表33 – 1 加入IAA 和6–BA 。 吲哚乙酸先用少量0.1 mol/L NaOH 溶解，6- 苄基氨基腺嘌呤先用少量0.1 mol/L HCl 溶解，然后用蒸馏水稀释，再加入培养基中。 2. 培养基灭菌 将配好的培养基加入琼脂加热溶解，调至pH 5.8 ，趁热分装于100 mL 三角烧瓶中，每瓶约20 mL 。待培养基冷却凝固后，用两层称量纸包扎瓶口，并用橡皮筋扎牢，然后在高压灭菌锅中121 ℃（ 1 kg/cm 2 ）下灭菌20 min 。取出三角烧瓶放在台子上，