酵菌丝体多糖的提取纯化与含量测定
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蛹虫草固体发酵菌丝体多糖的提取纯化与含量测定
作者：陈磊， 杨春清， 孙明舒， CHEN Lei， YANG Chun-qing， SUN Ming-shu
作者单位：北京协和医学院、中国医学科学院药用植物研究所,100193
刊名：
医药导报
英文刊名：HERALD OF MEDICINE
年，卷(期)：2009，28(6)
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参考文献(5条)
1.吴畏.高新华.崔星明北冬虫夏草的研究应用概况 2000(z)
2.车振明虫草多糖生物活性研究进展及其应用前景[期刊论文]-食用菌 2004(6)
3.邓岚.马耀辉虫草菌多糖的部分理化性质研究 2003(z)
4.柴建萍.白兴荣.谢道燕蛹虫草主要有效成分及其药理功效[期刊论文]-云南农业科技 2003(4)
5.徐志祥.李刚苯酚-硫酸法测定灵芝多糖含量条件的研究 2000(3)
相似文献(10条)
1.期刊论文于田田.钱和.YU Tian-tian.QIAN He生物富硒对蛹虫草菌丝体化学成分的影响-食品科技2006,31(1) 研究生物富硒对人工蛹虫草菌丝体中粗蛋白、粗脂肪、总糖、总灰分4种基本营养成分以及虫草素、腺苷、虫草多糖、虫草酸(甘露醇)、氨基酸、矿物元素6种功效成分含量的影响.结果表明,普通蛹虫草与富硒蛹虫草两者营养成分和功效成分的含量均有显著的差异,说明生物富硒对蛹虫草菌丝体化学成分含量有一定影响.
2.期刊论文董媛.朱靖宇.王虎义.左陶.马东宵.滕利荣响应面法优化蛹虫草菌丝体多糖超声波提取工艺的研究-时珍国医国药2009,20(4)
目的 利用单因素及响应面分析法优化蛹虫草菌丝体多糖超声提取工艺.方法通过单因素实验选取实验因素与水平,在单因素实验的基础上,以液料比、超声功率、提取时间为响应因子,进行3因素3水平的响应面实验,并与传统水提法进行比较分析.结果 超声提取蛹虫草菌丝体中多糖的最佳工艺条件为:提取时间504 s,提取功率466 W,液料比104:1(ml:g),提取率预测值为7.47%,验证值为7.45%,与预测值的相对误差为0.27%.结论经响应面法优化蛹虫草菌丝体多糖超声波提取工艺后,多糖得率比传统水提法有所提高,且提取时间大大减少.
3.学位论文施明珠昆虫激素对蛹虫草液体发酵培养的调控作用及蛹虫草菌丝体的药理学研究2008
本研究选择昆虫蜕皮激素(ecdysone)和保幼激素(Juvenile hormone)作为添加物探索昆虫激素对蛹虫草(Cordyceps militaris L.)液体培养的调控作用,并利用培养所得菌丝体醇提物作为试验药物,探讨其对外源性糖皮质激素氢化可的松致老龄小鼠肝、肾损伤的保护作用及其可能的机理。 将β-蜕皮激素和保幼激素Ⅲ分别按照1.2 mg/l,4 mg/l和12 mg/l的剂量添加到蛹虫草液体培养基中进行单因子和双因子处理,分析蛹虫草液体发酵过程中β-蜕皮激素和保幼激素Ⅲ对菌丝体产量、胞外多糖产量、单位菌丝体胞外多糖分泌量、菌丝体胞内多糖含量、胞内多糖产量、菌丝体虫草素含量和虫草素产量变化的影响。 β-蜕皮激素对蛹虫草液体发酵有明显的促进效应,在培养过程中测定发现,各处理组菌丝体产量7 d后达到最大值,与对照相比,β-蜕皮激素添加量为1.2 mg/l时,胞内多糖产量增加了29.2％；添加量为4mg/l时,单位重量菌丝体的虫草素含量和虫草素产量增加了65.4％和
84.7％；添加量为12 mg/l时,菌丝体、单位重量菌丝体的胞外多糖分泌量和胞外多糖产量增加了18.5％、181.7％和63.2％,显著超过了对照组。在本试验范围内若不考虑β-蜕皮激素的处理浓度,单就β-蜕皮激素对蛹虫草液体培养效果的影响,虫草素产量>胞外多糖产量>胞内多糖产量>菌丝体产量。
保幼激素Ⅲ不同处理组在培养7 d后取样测定,菌丝体产量和虫草素产量较对照组略有提高,分别增加了5.1-9.7％和0.1-21.1％,但胞内多糖和胞外多糖产量明显下降,下降幅度分别为34.5-51.6％和24.9-30.8％。保幼激素Ⅲ影响了蛹虫草液体培养过程中的生长代谢节奏,对照组胞内多糖含量、胞外多糖产量和虫草素含量在培养7d后达到最大值,而保幼激素Ⅲ不同处理组胞内多糖含量、胞外多糖产量和虫草素含量在培养1d、3 d、3 d取样分析时达到最大值。与此同时,不同浓度的保幼激素Ⅲ在处理初期对蛹虫草菌丝体生长表现出明显的抑制作用,培养1 d后测定,菌丝体产量较对照下降了52.4-59.7％,至培养第5 d,各处理的菌丝体产量才与对照相仿。 β-蜕皮激素和保幼激素Ⅲ共同处理,培养7 d后测定,菌丝体产量比对照组有所提高,提高幅度与β-蜕皮激素单因素处理组相仿：胞外多糖产量较对照组低,且随着保幼激素Ⅲ添加量的增加而下降；另一方面,胞内多糖和虫草素含量均比对照组和单因素处理组高,其中β-蜕皮激素和保幼激素Ⅲ1:4添加组(浓度分别为1.2和4.8mg/l)胞内多糖和虫草素产量比对照组分别增加了68.4％和123.2％。同时,随着复合处理组内保幼激素Ⅲ与β-蜕皮激素浓度比的提高,胞外多糖产量和虫草素含量的高峰期相应提前。 β-蜕皮激素和保幼激素Ⅲ共同处理组与对照组菌丝体醇提物在260 nm和280 nm下检测发现,HPLC图谱中峰值相似,推测β-蜕皮激素和保幼激素Ⅲ仅对蛹虫草菌丝体活性物质的产量产生影响。蛹虫草菌丝体醇提物(EECM)药理试验方法如下：将ICR雄性老龄小鼠随机分为正常组,模型组和蛹虫草菌丝体醇提物低、中、高剂量处理组
(0.167,0.334,0.668 g·kg-1·d-1),其中在肾损伤试验中增加了参仙壮肾胶囊药物对照处理组(0.250 g·kg-1·d-1)。除正常组外各处理组均肌注氢化可的松(25mg·kg-1·d-1)造模7d,给药结束后测定小鼠肝组织丙二醛(MDA)含量、ATP酶(Na+K+-ATPase,Ca2+Mg2+-ATPase)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力大小及小鼠血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质醇(Cor)的水平变化,同时通过光镜观察小鼠肝、肾组织结构病理变化。 EECM可显著提高模型小鼠肝组织中ATP酶(P<0.01)、SOD(P<0.01)和GSH-Px(P<0.05)活力；降低脂质过氧化物MDA含量
(P<0.01)：对模型小鼠因肾脏肿胀、体重减小而引起的肾脏系数病理性增大有明显的恢复作用(低、中剂量处理组,P<0.05;高剂量处理组,P<0.01);降低血清尿素氮(P<0.01)和肌酐(中、高剂量处理组,P<0.01;低剂量处理组P<0.05)含量；提高小鼠体重(P<0.01)、血清ACTH(中、高剂量处理组,P<0.01;低剂量处理组P<0.05)和皮质醇水平(P<0.01)：减轻氢化可的松引起的肝、肾组织损伤；表现出与参仙壮肾胶囊相似的修复肾损伤疗效。 通过本研究结果表明,添加β-蜕皮激素,可显著提高蛹虫草液体发酵过程中的菌丝体、虫草素和胞内、胞外多糖产量,对蛹虫草次生代谢产物虫草素的促生成影响大于蛹虫草菌丝体生长和初生代谢产物多糖的生成；添加保幼激素Ⅲ可加快蛹虫草液体发酵过程中的生长代谢节奏；保幼激素Ⅲ和β-蜕皮激素共同添加可进一步提高蛹虫草液体发酵培养过程中的虫草素和胞内多糖产量。保幼激素Ⅲ和β-蜕皮激素就不同产物的影响不尽相同,表现出有协同也有拮抗,并与相互间浓度和比例有关。二者相比,β-蜕皮激素的作用效果大于保幼激素Ⅲ。药理学研究结果表明EECM具有提高机体抗氧化能力,减轻机体因脂质过氧化而导致的肝细胞损伤,并修复细胞膜的正常生理功能来实现对肝脏损伤的保护作用；同时通过诱导机体对下丘脑-垂体-肾上腺轴进行修复,改善阳虚症状,进而增强肾小球滤过性,从而起到减轻肾损伤的效果。
4.期刊论文吴漾.李婷婷.李永乐.姚远超.滕利荣.逯家辉.WU Yang.LI Ting-ting.LI Yong-le.YAO Yuan-chao. TENG Li-rong.LU Jia-hui松茸、蛹虫草混菌共酵菌丝体多糖提取工艺的优化研究-食品研究与开发2008,29(5)
在单因素实验的基础上,采用响应面分析法研究了提取温度和时间、不同水料比对松茸、蛹虫草混菌共酵菌丝体多糖提取率的影响,建立了具有良好
预测性能的常规水浸提工艺条件的数学模型,通过响应面分析法确定了混菌共酵菌丝体多糖的最优提取工艺条件.实验结果表明,水料比对混菌共酵菌丝体多糖提取率的影响显著,最优提取工艺条件为:提取温度64℃,提取时间3 h,水料比38:1(mL:g).经验证实验验证,在该最佳工艺条件下混菌共酵菌丝体粗多糖的提取率可达18.93%,与理论计算值19.07%基本一致,该模型可较好地预测松茸、蛹虫草混菌共酵菌丝体多糖的提取率.
5.期刊论文李信.许雷.鑫德.Li Xin.Xu Lei.Pei Xinde蛹虫草(Cordyceps militaris)菌丝体液体培养基的优化
和发酵条件的研究-核农学报1998,12(1)
采用二次回归通用旋转组合设计方法,对蛹虫草菌丝体液体发酵培养基的最佳组合进行了研究,建立了培养基的反应模型,并用实验数据验证了数学模型,对培养基最佳优化组合的各种因子、影响产量的反应规律及交互作用进行了探讨,并在此基础上进行了蛹虫草菌丝体液体发酵条件的研究.结果表明
,蛹虫草菌丝体液体发酵的最适条件为:接种量6%(v/v),发酵初始pH7.0,培养基装量100ml/500ml三角瓶,发酵温度24℃～28℃,发酵周期96h.
6.学位论文王菊凤蛹虫草培养及其生理活性物质研究2006
蛹虫草(Cordycepsmilitaris)在我国传统药学上是一种重要的药材，同时也是名贵中药冬虫夏草(Cordycepssinensis)的常用替代品。虫草素(Cordycepin)和虫草多糖(Cordycepicpolysaccharide)是冬虫夏草和蛹虫草的两种主要的生物活性物质。本文研究了蛹虫草在人工固体培养条件下的光温生物学特性和光温对蛹虫草子实体中虫草素含量的影响、液体培养条件的有关参数及其对蛹虫草菌丝体生物量和蛹虫草多糖含量的影响、蛹虫草多糖的分子量分布以及蛹虫草多糖对果蝇寿命的影响。为高产优质的蛹虫草子实体和主要活性物质的生产提供了基础依据。研究表明：光照、温度、碳源和氮源都能显著影响蛹虫草的生长、生物量、虫草素和虫草多糖的含量。 (1)在固体培养过程中，蛹虫草生长发育的适宜温度是17-25℃，子实体生长的最适温度是22℃；蛹虫草菌丝体生长要求黑暗的无光条件，子实体分化形成要求光强在150LX以上，日光灯强光(6000LX)对子实体的生长发育没有不良影响；自然光强度与子实体的生物量成负相关；在子实体的生长过程中，日光灯光照强度、温度与子实体中虫草素的含量成正相关；在子实体的生长发育过程中，增加黑暗处理可增加子实体的重量和直径。 (2)正交试验表明，在液体培养条件下，蛹虫草菌丝体的生长可以利用不同浓度的碳源和氮源，其中在以碳源为6％、氮源为1％的液体培养基中生长最佳，且碳源/氮源合适的比例为6/1；液体培养条件下菌丝体适宜生长的温度范围较宽，但最适温度为25℃左右。 (3)影响蛹虫草菌丝体多糖产量的有关参数与菌丝体生长发育的最佳条件完全相同。胞外多糖在菌丝体生长的最适温度时产量到达最高，温度过高或过低都不促进胞外多糖的产生，这与菌丝体的生物量成正相关。胞内多糖则在温度为22℃时的含量最高，随着温度的升高，胞内多糖的含量逐渐降低。碳的浓度越大，越有利于生物量和代谢物质的积累。低浓度的氮有利于多糖的合成，随着氮浓度的增高，多糖的含量也随之降低。 (4)采用水相高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)对蛹虫草多糖的分子量及其分布进行了测定，结果表明，蛹虫草多糖的数均分子量(Mn)为
2.1526×104g/mol；重均分子量(Mw)为4.8895×104g/mol；分布系数(D)为2.2715。这为蛹虫草多糖的质量控制提供了依据。 (5)0.15％浓度的蛹虫草多糖可明显延长果蝇的最高寿命(雌性最高寿命延长率为21.77％)、平均寿命(雌雄延长率分别为34.3％和11.24％)及半数死亡时间(雌雄延长率分别为61.76％和23％)。因此蛹虫草多糖具有抗衰延寿作用。但是蛹虫草多糖对果蝇的延寿作用并不随培养基中虫草多糖浓度的提高而增强，只有在适当的浓度下，才能表现出显著的延寿效果。
7.期刊论文郑贵朝.喻孟君.张善信.胡事君固体培养基上蛹虫草菌丝体生长情况的观察-中国食用菌2008,27(6) 采用固体培养基对多个蛹虫草菌株的菌丝体进行培养,观察菌株差别、温度高低和培养基成分对菌丝体生长的影响.结果表明,(24±1)℃培养的菌丝长势比较好;菌株间的菌丝萌发时间和萌发后的菌丝浓密程度差别较大;菌丝萌发后的一段时间内,菌落直径增长速度呈逐步加快的趋势;培养基间、菌株间的菌丝长满培养皿所需时间差异显著;PDA培养基中添加蛋白胨等附加成分有利于菌丝的生长,其中添加配比为蛋白胨3.00g·L-1、鸡蛋15.00 g·L-1、KH2PO41.00 g·L-1、MgSO41.00 g·L-1和复合维生素0.04 g·L-1的培养效果最好.
8.期刊论文李雅洁.高燕菊.张国英.何帅.凌建亚.LI Ya-jie.GAO Yan-ju.ZHAND Guo-ying.HE Shuai.LING Jian-
ya蛹虫草菌丝体中单核苷酸类组分的高效液相色谱分析-时珍国医国药2006,17(9)
目的 测定蛹虫草菌丝体中5′-CMP(5′-胞苷酸)、5′-UMP (5′-尿苷酸)、5′-GMP(5′-鸟苷酸)、5′-IMP(5′-嘌呤核苷酸)、5′-XMP(5′-黄嘌呤核苷酸)、5′-AMP(5′-腺苷酸)等六种核苷酸的含量.方法 用反相高效液相色谱法,以SHIMADZU C18(150 mm×4.6 mm I.D, 5μm)为色谱柱;以缓冲盐(KH2PO4-H3PO4)-甲醇(99.5∶0.5, V/V, pH3.75)体系为流动相,在流速0.8 mL/min,柱温26°C,检测波长260 nm,进样量20 μl的条件下对样品中5′-核苷酸的含量进行了分析测定.结果 蛹虫草菌丝体中上述6种核苷酸含量分别为173.0,824.9,92.9,2114.0,79.6,231.4 μg/g.结论 该法快速简便,重现性好,能有效的测定样品中核苷酸类成分.
9.学位论文王莹蛹虫草富硒条件的优化及其有效成分变化的分析2008
蛹虫草(Cordyceps militaris(L.)Link.)在我国传统药学上是一种重要的药材,同时也是名贵中药冬虫夏草(Cordyceps sinensis)的常用替代品.虫草素(Cordycepin)和虫草多糖(Cordycepic ploysaccharide)是冬虫夏草和蛹虫草的两种主要的生物活性物质.硒是人体必需的微量元素.生物源有机硒在生理、药理上功效都高于无机硒,且对人体安全无毒副作用.所以开发富硒蛹虫草更具有研究意义. 本课题以蛹虫草为实验材料,系统而深入的研究了蛹虫草液体发酵条件及富硒条件的优化,并进行激光诱变,筛选优良突变菌种.为准确测定富硒蛹虫草中的硒含量,对ICP-MS等三种硒含量测定方法进行了对比研究.然后对菌丝体中的多糖及虫草素分别进行了含量测定,并对虫草素的提取纯化工艺进行了研究,结果如下. 本课题选择了对蛹虫草生长影响较大的四个因素,进行单因素及四因素三水平的正交实验.研究表明,对菌丝体生物量影响较大的因素依次为:培养时间＞硒浓度＞培养基种类＞装液量.最佳生长条件为:合成培养基,装液量为150mL/250 mL,培养时间为5天,硒浓度为2μg/mL.对富硒率影响较大的因素依次为:硒浓度＞培养基种类＞培养时间＞装液量.最佳富硒条件为:合成培养基,装液量250 mL,三角瓶加入50 mL培养基,培养6天,硒浓度为10 μg/mL.可以看出,微量的硒对蛹虫草的生长促进作用,但高浓度硒对蛹虫草菌丝体的生长有抑制作用.培养时间越长越有利于有机硒的富集,由此可以推测,有机硒是在蛹虫草生长代谢后期大量合成的. 建立了三种不同的测定蛹虫草菌丝体中不同形式硒的方法,并进行比较发现:HPLC/荧光法具有灵敏度高、干扰少、样品用量少等优点,但实验操作相对繁琐;ICP-MS法具有样品处理简单、灵敏度高、准确性好等优点,但实验仪器昂贵、测定成本高、样品用量相对较多；3,3-二氨基联苯胺比色法实验仪器要求水平低,实验操作相对简便,测定成本低,但灵敏度低.本实验室采用的是ICP-MS法,进行硒的测定. 从最优化培养条件下进行培养,对菌丝体中粗多糖进行提取、分离、纯化,通过Sevage法除蛋白,测得粗糖含量为226.3 mg/g.并发现富硒培养的菌丝体中多糖含量比未富硒的菌丝体多糖含量高.虫草多糖的含量是未富硒菌丝体的3.4倍,虫草多糖总产量增加了239.8％.同时对菌丝体中虫草素进行提取、分离、纯化,虫草素得率为15.4μg/g.发现富硒培养的菌丝体中虫草素含量比未富硒的菌丝体虫草素含量高.富硒蛹虫草菌丝体虫草素的含量是未富硒菌丝体的5.8倍,虫草素总产量增加了360.6％.
10.期刊论文宋仙妹.常继东蛹虫草菌丝体培养特性的研究-食用菌2008,30(3)
从碳源、氮源、碳氮比、微量元素、温度、培养基初始pH值、光照强度等方面探讨了蛹虫草C.M.203菌丝体培养特性.结果表明:最适碳源为玉米粉
,最适氮源为黄豆饼粉,最适碳氮比为20:1;K<'+>、Mg<'2+>、Zn<'2+>、Fe<'2+>、Cu<'2+>、Ca<'2+>和VB<,1>对蛹虫草菌丝生长影响不大;最适温度为25℃,最适pH值为7,光照强度对菌丝的生长速度有抑制作用.
本文链接：https://www.wendangku.net/doc/24961242.html,/Periodical_yydb200906039.aspx
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