胎牛血清,小牛血清,新生牛血清之间的区别,保存及用法

胎牛血清，小牛血清，新生牛血清之间的区别，保存及用法

1、来源不同：

胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰怀孕母牛的时候,通过心脏穿刺采血获取的

胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。组份与比例不同：两者所含的促细胞生长细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组份与比例不同，用途与用法不同：某些细胞必需胎牛血清才能生长，而有些细胞只需小牛血清即可，使用浓度不同，一般在5%-10%，有特殊要求的浓度在20%。血清保存和使用须注意：血清应保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超过一个月。解冻血清时，应先将血清至于2-8℃冰箱，并经常摇匀使之溶解，然后至室温放置使之升温，绝对不可将冷冻的血清直接放入37℃水浴或者温箱中，如放在37℃解冻，颜色加深，粘稠度也会增加，血清在解冻和热灭活后，应按用量分装并于-20℃保存，避免反复冻融。

2、胎牛血清，小牛血清和新生牛血清三种之间的区别：

这三种血清的成份，总体没有什么明显差别，只是有一些成分与其生存环境有关，如上述有人说的抗体很少等。此外，因生长发育的需要，有些成分在小牛出生后会发生一些变化。不过还没有搞清楚它与其它的血清之间的差别。有一点可以肯定，胎牛血清中的部分功能蛋白与小牛血清中的含量有差别。

3、最为重要的一点是：

胎牛本身生活在一个洁净环境当中，其血清与外界隔绝，只要生产工艺科学规范，其质量肯定要比后两者好。

4、根据牛出生时间和血清采制分离方法分为：

（1）胎牛血清：八月龄胎牛心脏穿刺取血;

（2）新生牛血清：出生12-24小时新生牛静脉采血;又可细分为：a.高级新生牛血清：采血后静置自然析出的血清;b.标准新生牛血清：c.经离心分离的血清;d.普通新生牛血清：融血或微融血的血清;

（3）小牛血清：出生三月龄小牛动脉采血分离血清;

血清是血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。对血清的成分和作用的研究虽有很大进展，但仍存在一些问题。

胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。

一般选用血清种类可以根据ATCC及实验需要来选择

其实，除了一些比较娇贵的细胞，如干细胞之类的，其余的大部分细胞培养，用国产的足以!而且四季青之类的口碑也颇好，性能也比较稳定，所以很多实验室都在用。抛开法好一点的文章来说，这是个明智的选择。如果想做好文章，那就要和国际接轨了，烧一点钱，影响因子提高点，也值啊

新生牛血清病毒检测细胞培养法

细胞培养法检测新生牛血清病毒 1原理 某些病毒在其敏感的宿主细胞内增殖时，可引起细胞病变，即出现细胞变圆、细胞破裂、细胞融合等现象。细胞培养法的主要特点是：广泛的适用性、操作方法简单、成本较低并且该技术方法成熟。主要缺点是：特异性差、敏感性较低、检测速度慢。该方法首先使用无病毒血清对实验用Vero细胞进行培养增值，然后分别制备阴性供试品、阳性供试品以及待测试供试品。将Vero细胞均匀分为至少3份，分别加入以上供试品。然后再适宜的温度条件下培养，每日进行观察，最多观察21天并记录细胞病变情况。 2材料和方法 2.1材料 2.1.1病毒 牛腹泻病毒；狂犬病毒；牛腺病毒、牛细小病毒、牛副流感病毒、呼肠孤病毒。 2.1.2细胞 Vero细胞(非洲绿猴肾细胞系)：购自中国生物制品检定所 2.1.3试剂 无病毒污染的新生牛血清：阴性对照品使用； MEM培养基：细胞基础培养基； 胰蛋白酶：消化细胞。 2.1.4仪器设备 ①专门的病毒实验室:生物安全柜(CBK一D201)操作，符合国家生物安全要求； ②洁净工作台； ③倒置显微镜； ④冰箱； ⑤离心机； ⑥离心管、注射器、吸管。 2.1.5阳性病毒 将BVDV等，六种病毒在Vero细胞上连续传代至病毒滴度为5.0lgCCID50/mL以上时进行合并，分为若干批，零下70℃冻存，作为阳性病毒对照液。 2.2方法 2.2.1非血吸附病毒检查是指利用传统的细胞培养或利用其他的对不具有动物血细胞吸附性质的病毒进行检测方法的统称。 2.2.2细胞制备 以细胞密度为2~3×105/mL的Vero细胞，接种到适宜的细胞培养瓶后置于37℃培养箱培养，每天镜下观察细胞的分裂增殖情况，并记录形成良好单层的时间(镜下观察细胞生长成片率达90%以上为良好单层)。注意将制备的细胞及时进行编号和标注，以免造成混淆。 2.2.3供试品检测 取良好单层细胞培养瓶，弃掉Vero细胞旧营养液，在方瓶中分别加入胰蛋白酶消化液0.8mL，待可见细胞面呈松散状态，弃掉胰蛋白酶消化液，方瓶中分

胎牛血清解冻和灭活

解决血清使用中的常见问题 1、如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损？ 将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。 长时间储存在2－8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此，推荐在-20℃以下储存血清，并避免反复冻融。 我们建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时，请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。 2、血清中包含絮状沉淀，它们是什么，怎么处理？ 沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性，不会影响产品性质。要除去沉淀，离心血清（400g，1-2分钟）或者简单的让其沉淀在瓶子底部，将血清小心的转移到另一个无菌瓶里（一般不建议采用过滤的方法除去沉淀，因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤）。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以，使用产品时要摇动并加热血清至37℃，沉淀会自然消失。 3、实验室如何选择适合的血清？ 国内一致认为HYCLONE的血清是最好的，但是根据我在北美的经历，国外一般认为GIBCO比HYCLONE好，所以并不是价格决定质量，但是总的来说这两种价格普遍偏贵，一般不是太娇气的细胞，国产的就够用了。此外，由于国内HYCLONE，GIBCO并没有生产线，我们只能从代理商那里买，而代理商又鱼龙混杂，所以买到假货的可能性也很大。所以，我一般会从直销员那里买血清，有的国外生物公司由于刚刚进入中国，知名度不高，但是其实在国外已经做得很不错了，如Wisent等，他们在国内有办事处，我会从那里拿，血清的品质和HYCLONE不相上下，但价格相对优惠很多。 4、如何避免血清中产生沉淀？ 按如下操作可避免沉淀的产生： （1）解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。（2）血清分装冻存时，须规则摇晃均匀（小心勿造成气泡），使温度与成分均一。（3）勿直接由-20℃直接至37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。 （4）勿将血清置于37℃太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，从而影响血清的品质。 （5）血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。（6）若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。

牛血清在细胞培养中的作用与质量要求

牛血清在细胞培养中的作用与质量要求

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牛血清在细胞培养中的作用与质量要求生物技术已经被世界各国视为一种高技术,在整个科学技术中占据了特殊的显著地位,特别是生命科学的发展更离不生物技术,生命科学的发展备受各国的重视。我国在很多大学中都设立了生命科学院。现代生物技术一般认为包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术,而这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切关系，特别是在医药领域的发展,细胞培养更具有特殊的作用和价值。比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多是通过细胞培养来实现的。基因工程乙肝疫苗很多是以CHＯ细胞作为载体;细胞工程中更是离不细胞培养，杂交瘤单克隆抗体，完全是通过细胞培养来实现的，既使是现在飞速发展的基因工程抗体也离不开细胞培养。正在倍受重视的基因治疗、体细胞治疗也要经过细胞培养过程才能实现，发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。总之，细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了很关键的核心作用。细胞培养的发展，培养基的质量又是关键,而培养基的主要成份中动物血清对细胞的生长繁殖发挥着重要甚至是难以替代的作用。在动物血清的应用中牛血清又是最为广泛的，所以牛血清是医药生物技术产品中重要的原材料之一。保证牛血清质量也是促进生物制品质量提高的重要环节。? 一、牛血清在细胞培养基中的主要功能 牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份,具有极为重要的功能。?１.提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营 2. 提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物养物。? 质活力。 3．有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用。? 4．是细胞贴壁、铺展在塑 5.起酸碱度缓冲液作用。? 6．提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时料培养基质上所需因子来源。? 使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。 二、牛血清的主要成份 血清是一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已为人所知,但还有一部分尚不清楚,而且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。?1.蛋白质是牛血清中主要成份。除包括可携带金属离子、脂肪酸和自身是激素类蛋白外主要还有白蛋白,球蛋白。纤维粘连素细胞促进细胞附着; α2巨球蛋白抑制胰蛋白酶的作用；胎牛血清中含胎球蛋白促细胞附着;转铁蛋白 能结合铁离子,减少其毒性和被细胞利用。?2.多肽:血小板促生长因子能促细胞分裂,是多肽家庭的主要成员之一,是主要的促细胞增殖因子；成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因

细胞生长促进试验筛选新生牛血清

细胞生长促进试验筛选新生牛血清 高丽美 陈俊斐 颜建国 冯敏 许玲敏 忻亚娟 陈念良 庄成 摘要 目的 建立适合人二倍体细胞培养血清的筛选方法。方法 通过测定细胞倍增时间和进行细胞 生长促进试验对15批次的新生牛血清作了筛选,并将筛选出的11批次血清用于大规模细胞培养,观察细胞的生长维持情况。结果 发现细胞倍增时间与相对生长率无明显相关性(P>0 05)。在大规模细胞培养中,相对生长率97%以上的血清更适合二倍体细胞生长。结论 细胞生长促进试验比细胞倍增时间测定更能客观地反映血清促人二倍体细胞的生长能力。细胞生长促进试验可能是较佳的,筛选适合人二倍体细胞培养的血清的方法 关键词:新生牛血清;细胞倍增时间;细胞生长促进试验;人二倍体细胞中图分类号:R33 文献标识码:A 文章编号:1007 0931(2008)08 0012 02 Screening of Newborn Calf Serum by the Method of C ell Growth Promotion Assay GAO li mei,CHEN Jun fei,Y AN Jian guo ,et al.(Zhe jiang Acade my o f Medic al Scie nce s ,Hangzhou ,Zhe jiang ,310013,China.) Abstract O bjective To establish a screening method of serum suitable for c ulture of human diploid cells.Methods Two methods of determination of cell doubling time and cell growth promotion ass ay were us ed to screen the ne wborn calf serum (NCS).A total of 11i n 15different batches of NCS were selec ted and used for large scale cell culture so as to obs erve the cell growth s tatus.Results There was no significant correlati on between the cell doubling time and relative growth rate (P>0 05).The NCS which the rel ative growth rate of cells cultured in was above 75%was more sui table for the growth of human diploid cells in large scale culture.Conclus ion The me thod of Cell growth promotion ass ay is better than the one of determination of cell doubling ti me in reflecti ng the growth ability of human dipl oid cells in the serum.Cell gro wth promotion as say is a more s uitable method for screening NCS used for human diploi d cells cul ture. K ey words Newborn calf serum;Cell doubling ti me;Cell growth promotion as say;Human diploid cell 作者单位:浙江省医学科学院,浙江杭州 310013 在细胞培养中,新生牛血清(NBCS)具有极其重要的作用,但由于血清是一种很复杂的混合物,往往会因小牛产地、出生后采血时间等不同,造成其批次间质量的差异[1],所以众多应用新生牛血清进行生产的企业,会通过各种筛选方法,选择适合本企业细胞培养的、质量稳定的血清。本实验拟通过对细胞倍增时间测定,生长促进试验两种筛选方法进行比较,以建立适合人二倍体细胞培养的最佳血清的筛选方法。 材料与方法 1 新生牛血清 15批次筛选新生牛血清分别由杭州四季青生物工程材料有限公司,郑州佰安生物工程有限公司,兰州民海生物工程有限公司提供。对照新生牛血清由杭州四季青生物工程材料有限公司提供。 2 人胚肺二倍体细胞 人胚肺二倍体细胞(KMB17)由本 所细胞室提供。 3 细胞培养液 由本所配液室提供。 4 细胞倍增时间测定[2] 4 1 人胚肺二倍体细胞(KMB17),代数23代,经胰蛋白酶消化,加入含10%筛选血清细胞培养液,细胞计数,按1!104/ml 的细胞浓度接种于24孔板,每批血清接种8孔,5%C O 2培养箱37?培养,每天计数1孔细胞,连续观察1周。 4 2 细胞倍增时间的测定,取细胞峰值前一天计得数(Y)、接种细胞数(X)及生长时间(T)计算倍增时间,倍增时间=T/A A=log 2Y /X 。 5 细胞生长促进试验[3] 5 1 人胚肺二倍体细胞(KMB17),代数23代,经胰蛋白酶消化,加入无血清的细胞培养液,将细胞浓度调至2!105,取9 5ml 注入25cm 2塑料瓶,再加入0 5ml 待筛选或对照血清,配制成5%血清浓度的生长液,每批血清培养3瓶,37?培养。 5 2 7d 后,细胞经胰蛋白酶消化,将每批血清的3瓶细胞

ELISA定量检测新生牛血清中乙脑抗体方法的初步验证

ELISA定量检测新生牛血清中乙脑抗体方法的初步验证 发表时间：2016-05-16T16:34:07.347Z 来源：《医药前沿》2016年4月第10期作者：姚亮钱浩洲张景海[导读] 沈阳药科大学辽宁沈阳 10163）新生牛血清是乙脑疫苗生产中重要的原辅料，新生牛血清中如含有乙脑抗体将影响乙脑疫苗的正常生产。 姚亮钱浩洲张景海 （沈阳药科大学辽宁沈阳 10163） 【摘要】目的：对定量检测新生牛血清中乙脑抗体的ELISA方法进行初步验证。方法：对ELISA方法的灵敏度、精密性、特异性、线性和在新生牛血清中的适用性进行验证。结果：该法的灵敏度为1:4096；板内和板间CV平均值分别为1.2%和2.0%；抑制率均>79%；线性较好，相关系数r均>0.993;在新生牛血清中的检测回收率均>90%。结论：该法具有较高的灵敏度、精密性、特异性和线性，适用于检测新生牛血清中的乙脑抗体。 【关键词】乙脑抗体；ELISA；新生牛血清 【中图分类号】R446.11 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）10-0152-02 Primary validation of quantitative ELISA for Japanese encephalitis antibody in new born bovine serum Yao Liang Qian Haozhou Zhang Jinghai .Shenyang Pharmaceutical University 10163,China 【Abstract】Objective To Validate the quantitative ELISA for antibody against Japanese Encephalitis Virus (JEV) in newborn bovine serum. Methods The method was verified for sensitivity, precision, specificity, linearity and determined for Antibody against JEV in new born bovine serum. Results The sensitivity of the method was 1:4096;The mean CVs of determination results of test samples in various wells and on various plates were 1.2% and 2.0% respectively; All inhibitions ratio were >79%;The linearity was good,all correlation coefficientsr were >0.993;Every recovery was>90% in new born bovine serum. Conclusion The method for detection of antibody against Japanese Encephalitis Virus (JEV) in newborn bovine serum was applicative, which showed high sensitivity, precision, specificity and linear. 【Key words】Japanese encephalitis antibody; ELISA ; New born bovine serum 新生牛血清是乙脑疫苗生产中重要的原辅料，新生牛血清中如含有乙脑抗体将影响乙脑疫苗的正常生产。《中国药典》中检测新生牛血清原辅料中乙脑抗体的方法为蚀斑减少中和试验法，但该法检测时间长、操作步骤复杂、检验量受限。ELISA法检测新生牛血清中乙脑抗体的商品化试剂盒已经出现，如能采用ELISA法检测新生牛血清中乙脑抗体，将提高检测速度和效率，为证实ELISA法检测新生牛血清中乙脑抗体的可靠性，本文特做此验证。 1.材料与方法 1.1 主要试剂 抗原：乙型脑炎灭活疫苗（作为乙脑抗原使用）；抗体：牛乙型脑炎病毒阳性血清 标记物：酶标羊抗牛IgG；测试样品：来自5个厂家各2批的新生牛血清，并已经蚀斑减少中和试验法检测为乙脑抗体为阴性。 1.2 主要材料 96孔酶标板；封口膜。 1.3 主要仪器 单道移液器（1～10?L）；单道移液器（50～200?L ）；多道移液器（50～200?L）；漩涡混旋仪；计时器；酶标仪450nm。 1.4 方法的验证 1.4.1灵敏度验证将牛乙型脑炎病毒阳性血清从1:128倍开始作2倍倍比稀释，ELISA方法检测乙脑抗体（A450值），同时检测阴性血清（A450值），将P/N≥ 2.1的最大血清稀释度作为检测的灵敏度。 1.4.2精密性验证用乙脑抗原包被96孔酶标板，第一板连续包被30孔，第二板和第三板各连续包被10孔，对同一血清样本重复测定50次，检测A450值，计算板内及板间变异系数，验证方法的精密性。 1.4.3特异性验证用过量的乙型脑炎灭活疫苗作为乙脑抗原中和不同浓度的牛乙脑阳性血清9份，用建立的ELISA方法在同一条件下检测牛乙脑阳性血清和中和后的牛乙脑阳性血清A450值，计算抑制率。 1.4.4线性验证将合适浓度的牛乙脑阳性血清梯度稀释，按照建立的ELISA方法，检测A450值，作出回归方程、相关系数和线性图。 1.4.5该法在新生牛血清中检测乙脑抗体的适用性将牛乙脑阳性血清分别加入五个厂家各两批的阴性新生牛血清中测定回收率，以评价ELISA方法检测新生牛血清中乙脑抗体的适用性。 2.结果 2.1灵敏度 P/N值≥2.1的最大牛乙脑阳性血清稀释度为1:4096，表明该方法的灵敏度为1:4096。

牛血清在细胞培养中的作用与质量要求

牛血清在细胞培养中的作用与质量要求． 牛血清在细胞培养中的作用与质量要求 生物技术已经被世界各国视为一种高技术，在整个科学技术中占据了特殊的显著地位，

特别是生命科 学的发展更离不生物技术，生命科学的发展备受各国的重视。我国在很多大学中都设立了生命科学院。现代生物技术一般认为包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术，而这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切关系，特别是在医

药领域的发展，细胞培养更具有特殊的作用和价值。比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多是通过细胞培养来实现的。基因工程乙肝疫苗很多是以CHO细胞作为载体；细胞工程中更是离不细胞培养，杂交瘤单克隆抗体，完全是通过细胞培养来实现的，既使是现在飞速发展的基因工程抗体也离不开细胞培养。正在倍受重视的基因治疗、体细胞治疗也要经过细胞培养过程才能实现，发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。总之，细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了很关键的核心作用。细胞培养的发展，培养基的质量又是关键，而培养基的主要成份中动物血清对细胞的生长繁殖发挥着重要甚至是难以替代的作用。在动物血清的应用中牛血清又是最为广泛的，所以牛血清是医药生物技术产品中重要的原材． 料之一。保证牛血清质量也是促进生物制品质量提高的重要环节。

一、牛血清在细胞培养基中的主要功能 牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，具有极为重要的功能。 1.提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的

低分子营养物。 2. 提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。 3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和 热原质结合，起到解毒作用。 4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。 5.起酸碱度缓冲液作用。 6.提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。 二、牛血清的主要成份 血清是一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已为人所知，但还有一部分尚不清楚，而且血清组成及生理条件和营养条年龄、随供血动物的性别、含量常． 件不同而异。 1.蛋白质是牛血清中主要成份。除包括可携带金属离子、脂肪酸和自身是激素类蛋白外主要还有白蛋白，

胎牛血清制备

胎牛血清制备 Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT

胎牛血清制备 一、目的: 为了保障胎牛血清产品质量的均一性和稳定性，制定以下操作方法，以规范胎牛血清生产制备。 二、操作方法： （一）采血 1、挑选出大约8月龄以上的健康妊娠母牛，经剖腹获取小牛。 2、将小牛清洗干净后，侧放在万级洁净房间内的采血台上，固定四肢及头部。 3、用来苏水清洗心脏外部，刮去心脏外部牛毛，露出心脏外部一侧皮肤，用2%碘酒擦拭消毒。 4、在心脏部位切开一道10厘米左右的切口，取出近心血管，先用2%碘酒消毒，再用75%的酒精消毒，用止血钳夹住血管，切开1厘米左右的切口进行插管，插好管后打开血管的止血钳，让牛血顺采血管流入另一个洁净房间内的采血瓶中。 5、采血瓶采血前经干烤灭菌（180℃ 2小时）后，按无菌操作注入10毫升左右经高压灭菌的生理盐水后加塞封口，于采血前半小时放入37℃恒温箱备用。采血前先晃动瓶内生理盐水，使其充分湿润瓶壁后倒出，再进行采血并加塞封口。将采血后的采血瓶放37℃恒温室2小时，再放入4℃冷库 4小时以备离心。 （二）离心 将准备好的采血瓶放入离心套筒调好平衡后，对称放入离心机，按1800转/分钟离心50分钟后，放入4℃冷库备用。 （三）抽血清 取出4℃冷库离心好的采血瓶，注意轻抬轻放，以免将下层血块和血清混层。将经过高压灭菌装有两孔瓶塞的5000ml大瓶的抽气孔一端的管子接好空气滤器，再接到压缩机抽气口上。打开压缩机，用抽血清孔的管子轻轻抽取采血瓶内的上清液，注意控制好抽管，避免抽到下层血块。将抽好的血清分装，即为粗制胎牛血清，放入-20℃冷库冷藏备用。 （四）血清过滤

胎牛血清品牌

胎牛血清品牌整理 第一类，最高级别，是专门用于干细胞的特级胎牛血清 1、Hyclone的特级胎牛血清 目前，性能最好的血清，还是要说说Hyclone的特级胎牛血清，货号是SH30070.03，它是Hyclone的“招牌菜”。 Hyclone特级胎牛血清（Defined FBS），货号SH30070，是世界上唯一经过40纳米过滤的顶级胎牛血清，极佳的促细胞生长作用及产品稳定性。内毒素含量≤10EU/ml，血红蛋白含量≤10mg/dl。 此血清可以广泛用于各种细胞培养，包含任何干细胞系的培养。 因为美国那边有疯牛病，无法进口。实际上，40nm的过滤，已经将全部的病毒、支原体处理掉，同时，是用于科研级别的，洁净程度非常高。不让进口，只是我们国家为了保护本国畜牧业的一个手段，针对牛肉方面，而胎牛血清是受到殃及而已。 2、Gibco的特级胎牛血清 稍次一点的是Gibco公司在美国原装生产的特级胎牛血清，这款血清，货号是16000-044，是100nm过滤3次，内毒素和血红蛋白含量都可以与Hyclone的SH30070.03相媲美。也可以用于培养大部分的干细胞系。同样是美国来源，所以渠道特殊。 3.TCB的特级胎牛血清 TCB（Tissue Culture Biologicals）公司作为一家生物行业类的著名供应商，成立于1978年，大部分血清的采集和加工都在加利福尼亚。每一批的原材料都经过严格筛选，所有的产品都在FDA认证的cGMP车间进行！ TCB 公司一贯重视产品质量，为客户提供最优质的血清及相关产品，经过多年的发展，公司产品种类丰富，各种品质的血清和培养基能满足所有实验室的需求。 TCB 公司经过美国食品药品监督管理局（FDA）和美国农业部（USDA）的授权认证。与人相关的产品符合疾控中心（CDC）的相关法规。 TCB是美国农业部（USDA）动植物检疫局（APHIS）兽医处（VS）下属的国家动物进出口中心（NCIE）的检疫认可单位，允许可控原材料、组织、细胞等的进出口贸易！ 4. Bioind特优级胎牛血清 血源来自北美和澳大利亚BioInd公司的生产完全符合GMP的要求，并通过ISO9000:2001 和ISO 13485:2003质量认证。 以安全，稳定，高效为原则的BioInd公司，所有的产品质量均完全符合国际标准。Biological Industries主营细胞培养类产品，BioInd工厂加工的胎牛血清均符合USDA标准及欧洲标准血清。根据美国农业部标准，原始血清均采自未发生疯牛病（BSE）和口蹄疫（FMD）疫情的

胎牛血清制备

胎牛血清制备 一、目的: 为了保障胎牛血清产品质量的均一性和稳定性，制定以下操作方法，以规范胎牛血清生产制备。 二、操作方法： （一）采血 1、挑选出大约8月龄以上的健康妊娠母牛，经剖腹获取小牛。 2、将小牛清洗干净后，侧放在万级洁净房间内的采血台上，固定四肢及头部。 3、用来苏水清洗心脏外部，刮去心脏外部牛毛，露出心脏外部一侧皮肤，用2%碘酒擦拭消毒。 4、在心脏部位切开一道10厘米左右的切口，取出近心血管，先用2%碘酒消毒，再用75%的酒精消毒，用止血钳夹住血管，切开1厘米左右的切口进行插管，插好管后打开血管的止血钳，让牛血顺采血管流入另一个洁净房间内的采血瓶中。 5、采血瓶采血前经干烤灭菌（180℃ 2小时）后，按无菌操作注入10毫升左右经高压灭菌的生理盐水后加塞封口，于采血前半小时放入37℃恒温箱备用。采血前先晃动瓶内生理盐水，使其充分湿润瓶壁后倒出，再进行采血并加塞封口。将采血后的采血瓶放37℃恒温室2小时，再放入4℃冷库 4小时以备离心。 （二）离心 将准备好的采血瓶放入离心套筒调好平衡后，对称放入离心机，按1800转/分钟离心50分钟后，放入4℃冷库备用。 （三）抽血清 取出4℃冷库离心好的采血瓶，注意轻抬轻放，以免将下层血块和血清混层。将经过高压灭菌装有两孔瓶塞的5000ml大瓶的抽气孔

一端的管子接好空气滤器，再接到压缩机抽气口上。打开压缩机，用抽血清孔的管子轻轻抽取采血瓶内的上清液，注意控制好抽管，避免抽到下层血块。将抽好的血清分装，即为粗制胎牛血清，放入-20℃冷库冷藏备用。 （四）血清过滤 1、将-20℃冷库内的粗制血清取出化冻。 2、将化冻后的粗制血清用经过高压灭菌的12层医用脱脂棉纱布进行初滤。 3、把初滤后的血清倒入大罐进行混合。 4、将装好滤芯的滤器做密封性试验和发泡试验合格后，经过高压灭菌，在洁净室内用无菌操作法将滤器按滤柱孔径由大到小的顺序进行组装，并装上压力表。把滤器大孔径一端和蠕动泵出口进行连接。 5、用蠕动泵将大罐内的血清送入滤器进行过滤。 6、将滤出的血清在百级净化操作台上进行分装后，即为精制胎牛血清，送-20℃冷库储存。 三、注意事项： 1、在操作过程中，要经常用75%的酒精对手部进行消毒，同时避免 接触牛血或血清，特别是有伤口的部位，以免感染。 2、在采血插管过程中，插管避免接触到未消毒的部位，尽量深入血 管，使牛血能快速流完为好，并固定好插管，避免脱离动脉血管。 3、在抽血清的过程中，控制好压缩机的压力大小，避免压力过大， 抽到下层的沉淀物。 4、在过滤过程中，控制好压力的大小，避免超过滤柱工作压力。

新生牛血清行业产品价格分析报告

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新生牛血清行业产品价格分析 (最新版报告请登陆我司官方网站联系) 公司网址: https://www.wendangku.net/doc/251079160.html, 1

目录 新生牛血清行业产品价格分析 (3) 一、新生牛血清产品价格特征 (3) 二、2010-2014年中国新生牛血清产品价格走势 (3) 三、主流产品价位调查 (4) 四、价格与成本及其它因素的关系 (4) 五、重点企业价格策略分析 (5) 六、2015-2019年中国新生牛血清产品价格走势预测 (5) 2

新生牛血清行业产品价格分析 一、新生牛血清产品价格特征 我国新生牛血清生产企业数十家，大部分企业规模较小，不同品牌价格有一定的差距。国内新生牛血清产品市场上进出口品牌并存，进口品牌价格昂贵，大大高于国产品牌。一方面进口产品过高的价格令普通消费者望而却步，一方面质低价廉的产品又不能适应中层消费者的需求。消费者呼唤适合中国市场的品牌引领消费。 我国新生牛血清行业发展较晚，最初的国新生牛血清市场完全依靠进口来满足行业需求，随着国家政策的大力支持，下游行业的需求前景，我国新生牛血清生产企业发奋图强，不断提高技术水平，研发出了一系列国产产品。进口新生牛血清产品价格昂贵，质量较高，而国产品牌价格较低，质量水平不高，有待改善。随着国产产品的增多，整体市场价格呈现降低趋势。 二、2010-2014年中国新生牛血清产品价格走势 图表1：2010-2014年我国新生牛血清市场平均价格走势 单位：元/ml 数据来源：千讯咨询 3

三、主流产品价位调查 图表2：2014年主要品牌新生牛血清产品价位分析 数据来源：公司资料 四、价格与成本及其它因素的关系 新生牛血清行业上游原材料主要是牛等，相较其他制造业来说，原材料在整个生产成本中较小。原材料价格的波动将影响新生牛血清公司生产成本进而影响新生牛血清公司的盈利水平。 近几年来，国内新生牛血清行业生产成本不断上涨，造成部分中小企业经营困难，国内生产成本提高主要有四个方面的原因：一是原材料价格上涨比较明显，媒体报道得也比较多；二是企业用工成本的上涨，可以说全国不少地方劳动力成本都在上升；三是像能源比如煤、电等资源价格上涨，影响企业生产经营；四是企业融资成本上升，比如由于利率上调，中小企业贷款利率上浮提高，中小企业通过民间借贷的利率也在上升，所以整个融资成本是上升的。 原材料价格上涨、能源和资源成本的大幅上涨、用工成本的增加，以及企业管理费用的提高等是新生牛血清产品价格上涨的主要原因。 通常原材料涨价的成本应该通过产业链向下传导，这支持了新生牛血清产品价格上涨，但最终决定价格涨跌的关键是供求关系。一些本来应该提价的产品价格提不上去，正是因为这些产品本身产能增加，竞争很激烈，价格上涨乏力。 4

胎牛血清,小牛血清,新生牛血清之间的区别,保存及用法

胎牛血清，小牛血清，新生牛血清之间的区别，保存及用法 1、来源不同： 胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰怀孕母牛的时候,通过心脏穿刺采血获取的 胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。组份与比例不同：两者所含的促细胞生长细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组份与比例不同，用途与用法不同：某些细胞必需胎牛血清才能生长，而有些细胞只需小牛血清即可，使用浓度不同，一般在5%-10%，有特殊要求的浓度在20%。血清保存和使用须注意：血清应保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超过一个月。解冻血清时，应先将血清至于2-8℃冰箱，并经常摇匀使之溶解，然后至室温放置使之升温，绝对不可将冷冻的血清直接放入37℃水浴或者温箱中，如放在37℃解冻，颜色加深，粘稠度也会增加，血清在解冻和热灭活后，应按用量分装并于-20℃保存，避免反复冻融。 2、胎牛血清，小牛血清和新生牛血清三种之间的区别： 这三种血清的成份，总体没有什么明显差别，只是有一些成分与其生存环境有关，如上述有人说的抗体很少等。此外，因生长发育的需要，有些成分在小牛出生后会发生一些变化。不过还没有搞清楚它与其它的血清之间的差别。有一点可以肯定，胎牛血清中的部分功能蛋白与小牛血清中的含量有差别。 3、最为重要的一点是： 胎牛本身生活在一个洁净环境当中，其血清与外界隔绝，只要生产工艺科学规范，其质量肯定要比后两者好。 4、根据牛出生时间和血清采制分离方法分为： （1）胎牛血清：八月龄胎牛心脏穿刺取血; （2）新生牛血清：出生12-24小时新生牛静脉采血;又可细分为：a.高级新生牛血清：采血后静置自然析出的血清;b.标准新生牛血清：c.经离心分离的血清;d.普通新生牛血清：融血或微融血的血清; （3）小牛血清：出生三月龄小牛动脉采血分离血清; 血清是血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。对血清的成分和作用的研究虽有很大进展，但仍存在一些问题。

新生牛血清病毒检测血吸附法

血吸附法检测新生牛血清病毒 1原理 有些病毒在其敏感宿主细胞中增殖，并不引起细胞病变，但在细胞表层存在病毒蛋白质，用一定百分比的红细胞悬液覆盖细胞表面，置于不同温度条件下一定时间，显微镜下观察，即可出现红细胞被吸附的现象。血吸附法的技术主要特点是:敏感性高、速度快、成本低。主要缺点是:病毒特异性检查问题尚未解决，结果判定的客观性较差，是间接检查病毒存在的方法，技术程序也还比较陈旧。该方法首先使用无病毒血清对实验用Vero细胞进行培养增值，然后分别制备阴性供试品、阳性供试品以及待测试供试品。取两瓶细胞，分别加入供试品。然后在适宜的条件下处理，然后观察实验结果。 2材料和方法 2.1材料 2.1.1病毒 牛副流感病毒。 2.1.2细胞 Vero细胞(非洲绿猴肾细胞系)：购自中国生物制品检定所； 2.1.3试剂 无病毒污染的新生牛血清：阴性对照品使用； MEM培养基：细胞基础培养基； 0.85%生理盐水：洗脱血细胞； 胰蛋白酶：消化细胞； 鸡血； 豚鼠血。 2.1.4仪器设备 ①专门的病毒实验室：生物安全柜(CBK一DZOI)操作，符合国家生物安全要求； ②洁净工作台； ③倒置显微镜； ④冰箱； ⑤离心机； ⑥离心瓶、注射器、吸管。 2.1.5阳性病毒 将牛副流感病毒在Vero细胞上连续传代至病毒滴度为5.0lgCCID50/ml以上时进行合并，分为若干批，零下70℃冻存，作为阳性病毒对照液。 2.2方法 2.2.1细胞制备 以细胞密度为2~3×105/mL的Vero细胞，接种到适宜的细胞培养瓶后置于37℃培养箱培养，每天镜下观察细胞的分裂增殖情况，并记录形成良好单层的时间(镜下观察细胞生长成片率达90%以上为良好单层)。注意将制备的细胞及时进行编号和标注，以免造成混淆。 2.2.2红细胞悬液配制 取体重300一500g豚鼠，心脏采血2一3mL放入内含3一5mL生理盐水的离心管中，盖栓、轻摇。豚鼠血加入生理盐水洗三次，800一1000转/分钟离

MTT配制、原理、操作步骤、结果分析、注意事项

MTT配制、原理、操作步骤、结果分析、注意事项 一、MTT是什么 MTT是一种粉末状化学试剂，全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，汉语化学名为 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。（可参考Sigma，货号M5655，Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide）二、MTT法用来做什么 简单地说：是一种检测细胞存活和生长的方法。 MTT主要有两个用途 1．药物（也包括其他处理方式如放射线照射）对体外培养的细胞毒性的测定； 2．细胞增殖及细胞活性测定。 三、为何MTT可以用来做上述工作 检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值（OD值），来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强（如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小）。 四、实验所需材料 1．MTT 溶液的配制通常MTT 配成的终浓度为5mg/ml,须用PBS或生理盐水做溶剂。 市面上一般MTT的包装为100mg,250mg或1g 1.1 对于100mg这样的小包装，厂家都是将MTT放入小管中的，个人建议不要再用天平称量分装，而应该一次性将其全配制成溶液，如100mg用20mlPBS来溶解。具休做法：预先在50ml离心管（没有的话，可用培养瓶替代）加入20ml PBS，从中先吸取500-1000ul PBS装入含MTT的小管中，吹打若干次后将其移入50ml离心管，然后再混匀。可以重复几次，以使小管中的MTT不残留于管内。将MTT 完全混匀后，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，分装避光(避光袋或是黑纸、锡箔纸包住)可长期保存于-20度。按细胞培养板每孔需加10ul计算，一般每96孔板约需1ml，所以分装时可考虑每管分装1ml。 1.2 对于大包装，可按上述方法称取一部分溶解，也有人将粉剂分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加。 注意事项： l 在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。 l 配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感 l MTT一般最好现用现配，过滤后4度避光保存两周内（个人曾做过4度避光保存4周的MTT溶液，效果仍然不错）有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用。 l MTT有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套. 2．MTT甲瓒溶解液 2.1 二甲基亚砜DMSO，可以直接溶解，无需配制，使用方便，溶解速度快，但对人体毒性较大，且需去除原培养液，在去除培养液的过程中，可能会把结晶去掉，导致结果不稳定。

药典三部2015版 通则 3604新生牛血清检测要求

药典三部(2015版)-通则-3604 新生牛血清检测要求． 3604 新生牛血清检测要求 本品系从出生14小时内未进食的新生牛采血分离血清，经除菌过滤后制成。牛血清生产过程中不得任意添加其他物质成分。新生牛血清应进行以下检查，符合规定后方可使用。 如采用经过验证的病毒灭活工艺处理的牛血清，大肠杆菌噬菌体及病毒检测必须在灭活前取样进行。

pH值应为7.00～8.50。 蛋白质含量采用双缩脲法（通则0731第三法）或其他适宜方法测定，应为35～50g/L。 血红蛋白用分光光度法或其他适宜的方法测定，应不高于 200mg/L。 以蒸馏水为空白对照，使用1cm光路的比色杯，直接测定供试品在576nm、623nm及700nm波长下的吸光度值，每个供试品至少测定2次，计算平均测定值。按照下式计算供试品中血红蛋白含量： 血红蛋白含量（mg/L）=[(A×115)－(A×102)－(A×39.1)]×10 700623576式中 A、A、A为供试品在576nm、623nm及700nm波长下700623576的平均吸光度值。 渗透压摩尔浓度应为250～330mOsmol/kg（通则0632）。 细菌内毒素检查应不高于10EU/ml（通则1143凝胶限度试验）。支持细胞增殖检查用Sp2/0-Ag14或适宜的传代细胞进行。细胞复苏后，用待测样品配制的培养液至少连续传三代后使用，取对数 生长期的细胞用于试验。 （1）细胞生长曲线的测定取供试品按10%浓度配制细胞培养4的细胞浓度接种细胞，每天计数活细胞，连续观含10液，按每1ml6/ml。察1周，并绘制生长曲线，细胞的最大增殖浓度应不低于10（2）细胞倍增时间的测定按生长曲线计算细胞的倍增时间。取细胞峰值前一天的细胞计数（Y）、接种细胞数（X）及生长时间（T）计算。

血清在细胞培养中的作用和质量要求

天津市灏洋生物制品科技有限责任公司 血清在细胞培养中的作用和质量要求 现代生物技术包括基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程，这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切的关系，特别是在生物医药领域，细胞培养更具有特殊的作用和价值。比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多都是通过细胞培养来实现的，基因工程乙肝疫苗大多是以CHO细胞作为载体；基因工程抗体药物的制备也离不开细胞培养。细胞工程领域更离不开细胞培养技术，杂交瘤单克隆抗体的研究制备完全是通过细胞培养来实现的，发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。总之，细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了很关键的核心作用。细胞培养的发展，培养基的质量是关键，而培养基的构成中动物血清对细胞的生长繁殖起着重要作用。在动物血清中牛血清的应用又是最广泛的，所以牛血清的质量好坏直接影响生物制品的质量和安全性，保证牛血清质量也是促进生物制品质量提高的重要环节。 一、牛血清的主要成分 牛血清是一种成分复杂的混合物，其大部分成分已为人所知，但还有一部分仍不清楚，而且血清的组成及含量通常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而存在差异。牛血清主要成分有以下几类： 1、蛋白质类除包括可携带金属离子、脂肪酸和自身是激素类蛋白外还有白蛋白、球蛋白、α-巨球蛋白（抑制胰蛋白酶的作用）、胎牛血清中含胎球蛋白（促进细胞附着）、转铁蛋白（能结合铁离子，减少其毒性和被细胞利用）、纤维粘连素（促进细胞附着生长）等； 2、多肽类主要是一些促进细胞生长和分裂的生长因子，最主要的生长因子是血小板生长因子，还有成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等，虽然在血清中含量很少，但对细胞的生长和分裂也起着重要作用； 3、激素类激素对细胞的作用是多方面的。包括： 胰岛素：促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸，与促细胞分裂有关； 类胰岛素生长因子：能与细胞表达的胰岛素受体结合，从而有胰岛素同样的作用： 促生长激素：促进细胞增殖的效应； 氢化可的松：血清中含有微量该成分，它可能具有促细胞贴附和增殖作用。但有人证明，血清中的氢化可的松，在细胞密度较高时可能有抑制细胞生长和诱导细胞发生分化的作用。 4、其他成分如氨基酸、葡萄糖、微量元素等。在合成培养基中这些成分

细胞培养中的注意事项

细胞培养中的注意事项 1 冷冻管应如何解冻？ 取出冷冻管后，须立即放入37C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。 2 细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO？ 除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。 3 可否使用与原先培养条件不同之培养基？ 不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。 4 可否使用与原先培养条件不同之血清种类？ 不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。 5 何谓FBS, FCS, CS, HS ? FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum)是相同的意思，两者都是指胎牛血清，FCS乃错误的使用字眼，请不要再使用。CS (calf serum) 则是指小牛血清。HS(horseserum)则是指马血清。 6 培养细胞时应使用5 %或10% CO2？或根本没有影响？ 一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7g时，细胞培养时应使用10% CO2；当培养基中NaHCO3为每公升1.5 g时，则应使用5%CO2培养细胞。 7 何时须更换培养基？ 视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。 8 培养基中是否须添加抗生素？ 除于特殊筛选系统中外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。 9附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA浓度？应如何处理？ 一般使用之trypsin-EDTA 浓度为0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4Na。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于–20C，避免反复冷冻解冻造成trypsin之活性降低，并可减少污染之机会。 10 悬浮性细胞应如何继代处理？ 一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。 11 欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？ 欲回收动物细胞，其离心速率一般为300xg (约1,000rpm)，5 - 10分钟，过高之转速，将造成细胞死亡。 12 细胞之接种密度为何？ 依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因。 13 细胞冷冻培养基之成份为何？ 动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5 - 10% DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 -95%原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO稀释时会放出大量热能，故不可