植物染色体标本的制备和染色体核型分析研究进展

植物染色体制片与观察实验报告

植物染色体制片与观察实验报告（洋葱组） 姓名：蔡梦雅 1230170010 同组成员：曹鉴云陈锦容刘艳马彦霞 一、中文摘要：染色体（Chromosome），是细胞内具有遗传性质的物体，易被碱性染料染成深色，又叫染色质。其本质是脱氧核甘酸，是细胞核内由核蛋白组成、能用碱性染料染色、有结构的线状体，是遗传物质基因的载体。这里我们用洋葱染色体作为代表使用压片法制片并且进行观察。 二、关键词：染色体洋葱压片法 三、引言：洋葱（onion）是百合科（Liliaceae）葱属中以肉质鳞片和鳞芽构成鳞芽的2年生草本植物，其学名为Allium cepa L，染色体数为2n=2x=16。由表1和图1可见,洋葱的8对染色体中,有7对(第1~7对)染色体,臂比在1·01~1·70之间,为中部着丝点染色体,1对(第8对),臂比为4·74,为近端部着丝点且带随体的染色体;依据STEB-BINS[4]的核型分类标准,洋葱的染色体核型在遗传进化上属较古老的2A型。100多年来有关染色体与染色体组结构功能的研究一直是生命科学最活跃的研究领域之一，现今人们完成基因组测序后回到对染色体上进行基因定位和作图，因此有关染色体的研究在基因组合功能基因组时代都有重要意义，陈瑞阳教授历时25年的研究完成的《中国主要植物染色体研究》对我国2834种植物染色体数目进行了报道，完成了1045种植物的核型分析，积累了宝贵的染色体基础数据创建了我国植物染色体研究信息平台。研究染色体进化与生物进化的有不可分割的关系,国际对染色体的化学成分,DNA含量,碱基组成和以染色体数目、形态、结构、大小等为特征的核型进化与物种形成和演化关系的研究,为揭示生物进化趋势提供染色体方面的科学资料，总的来说对染色体的研究在各类学科领域内都有着重要的意义。国内外对洋葱的研究主要在其成分和药用方面，在细胞遗传上张自力和陈瑞阳等对洋葱的C带显示法进行过研究，田秋元等对洋葱的核型分析及有关制片方法进行了探讨。植物根尖的分生细胞的有丝分裂，每天都有分裂高峰时间，此时把根尖固定，经过染色和压片，再置放在显微镜下观察，可以看到大量处于有丝分裂各时期的细胞核染色体。我们设计了不同的实验方案探究如何制作优良的植物染色体玻片，掌握染色体技术。 四、材料与方法： 1.取材 洋葱（Aillum cepa）的鳞茎 2.实验器具和药品 2.1器具 a.载玻片 b.盖玻片 c.烧杯 d.量筒 e.培养皿 f.滤纸 g.玻璃棒 h.镊子i.手术刀 2.2药品 a.0.1mol/L醋酸钠溶液 b.0.25%秋水仙素 c.冰醋酸 d.无水乙醇 e.1mol/LHcl f.纤维素酶 g.果胶酶 h.卡宝品红 2.3试剂配制 卡诺固定液：用3份无水酒精，加入1份冰醋酸（现配现用）。 酸解液：一份无水乙醇与一份1mol/L 盐酸1:1进行配制。 酶解液：用0.4g的纤维素酶和0.15g的果胶酶溶解在20ml蒸馏水里。

人类染色体的识别及核型分析

生命与环境科学学院实验报告 实验课名称遗传学实验实验名称人类染色体的识别及核型分析成绩______________ 姓名王大锤实验报告系列年级学号组别一时间2015.温度6℃ 实验原理及目的 实验目的 1、学习并掌握染色体核型的分析方法； 2、熟悉人类染色体的特征； 3、了解人类染色体结构畸变的表示方法。 实验原理 1．染色体组型（核型）的基本含义 含义：生物体细胞所有可测定的染色体表型特征的总称。 包括：染色体的总数，染色体组的数量，每个染色体组内染色体基数，每条染色体的形态、长度、着丝粒的位置，随体或次缢痕等。 染色体组型是物种特有的染色体信息之一，具有很高的稳定性和再现性。 2．人类染色体特征 Denver体制 1960年，在美国Denver市召开了第一届国际遗传学会议，讨论并确定正常人核型（karyotype）的基本特点即Denver体制，成为识别人类各种染色体病的基础。 3.染色体显带标本 显带技术（banding technique）：用各种不同方法，以及用不同染料处理染色体标本后，每条染色体上出现明暗相间或深浅不同带纹的技术。 每条染色体带纹相对固定，可用于鉴别。 显带技术种类：Q带、G带、C带、R带、T带. G带是目前被广泛应用的一种带型。主要是被Giemsa染色后而显带，故称之为G显带技术，其所显示的带纹分布在整个染色体上。 4.遗传学中一些常用于对染色体和核型分析的指标描述 界标(landmark)：稳定、明显标记的指标.包括末端、着丝粒和带. 区（region）：两相邻界标之间. 带（band）：着色处.（浅、深；亮、暗）. 臂（arm）：p、q 实验材料、仪器及试剂 1.人类染色体标本——非显带标本和显带标本 2.直尺，剪刀，计算机等。 实验步骤 ①染色体制片 制片方法：植物染色体——压片法（酸解、酶解） 动物染色体——滴片法（骨髓细胞、外周血细胞）标本种类：非显带染色体；显带染色体 图片要求：染色体分散；数目全；形态好 ②选择最佳图象拍照 ③测量、计算 ④配对 ⑤剪贴 ⑥排列 排列原则：从大到小；短臂向上；着丝粒在一条线上；性染色体单排。

实验七 植物染色体标本的制备与观察实验报告

细胞及遗传学实验报告陈香燕201008030103 生科1班 实验七植物染色体标本的制备与观察 （一）实验目的 学习植物染色体标本的制备技术，掌握染色体的技术方法，了解染色体的生物学意义。 （二）实验原理 植物染色体标本的制备，常用分生组织，如根尖、茎尖和嫩叶做材料。常规压片法仍是当今观察植物染色体常用的方法，其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤。由于秋水仙素可以阻断细胞在分裂中期纺锤体（微管二聚体）的形成，以至于不能拉动染色体分开向细胞两极，因此可以使细胞分裂停止在分裂中期，再经过染色，压片，镜检之后便可观察到细胞的染色体形态。 （三）实验用品 一、材料：蚕豆 二、试剂

1.Carnoy固定液 2.0.1%秋水仙素溶液 3.1mol/L HCl 4.Schiff试剂 5.亚硫酸水溶液（漂洗液） 6.Carbor fuchsin （卡宝品红）染液 配方1：原液A：称取3g碱性品红，溶于100ml 70%酒精中（此液可无限期保存）。 原液B：取10ml 原液A，加入90ml 15%石炭酸（苯酚）水溶液（两周内使用）。 染色液：55ml 原液B加6 ml冰醋酸和6 ml 37%甲醛（此液适用于植物原生质体培养中细胞核和核分裂的染色）。 配方2：取配方1中的染色液2~10 ml，加90~98ml 45%醋酸和1.8g 山梨醇（此液适用于核和染色体的一般形态观察，具有广泛适用性）。 （四）实验方法步骤 1.取材：将蚕豆种子培养在培养皿内的湿滤纸上，室温或28°C 下发芽，待胚根长达1~2cm时，切取0.5cm长的根尖部分。 2.预处理：将切下的根尖浸入0.1%秋水仙素液中，室温下处理 3~4h。 3.水解：把根尖投入预热的58~60°C 1mol/L热HCl中，恒温条 件下水解14~15min 4.染色：倒去热HCl,滴加卡宝品红少许，染色5~10分钟。

核型分析实验报告

核型分析 摘要植物核型分析是指对植物细胞染色体的数目、形态、长度、带型和着丝粒位置等内容的分析研究,是植物分类和遗传研究的重要手段。本实验利用Photoshop软件，对栽培四棱大麦的染色体进行核型分析。本方法主要是物理分析法，在本试验中，我们先对大麦的染色体进行配对，再利用Photoshop软件对染色体进行分析，并测量了大麦染色体的臂长和随体长。 1.引言 核型指染色体组在有丝分裂中期的表型，包括染色体数目、大小、形态特征的总和。一个体细胞中的全部染色体，按其大小、形态特征(着丝粒的位置）顺序排列所构成的图像就称为核型。将待测细胞的核型进行染色体数目、形态特性的分析，确定其是否与正常核型完全一致，称为核型分析。以目前的技术水平，已实现使用计算机自动完成核型分析，我们学生也可以利用Adobe Photoshop 很容易地完成染色体的测量、排序等工作，再利用Excel 表格和Photoshop结合做出核型模式图。 2.实验材料 2.1实验材料 栽培四棱大麦的分散良好的有丝分裂中期细胞的显微照片、Adobe Photoshop等软件2.2实验方法 2.2.1绘制核型图 在Photoshop中对照片进行必要的处理。首先是剪裁照片，用套索工具将每条染色体分离出来，对染色体进行配对并将每条染色体的着丝点排在一条线上，并对染色体进行适当的旋转变换。其次是利用标尺工具测量每条染色体的臂长、随体长。再根据测量结果计算出染色体的臂比，总长，随体长，相对长度等数据。 2.2.2写出核型公式 根据上面的测量结果写出四棱大麦的核型公式。 2.2.3画核型模式图 将所测并经过计算后的数据在Excel表格中绘制成堆积柱形图，并在Photoshop里切出着丝点和次缢痕。除此之外，还需将整个图像转换成黑白。 3.结果与讨论 3.1染色体核型分析图 图1 染色体核型分析图

去壁低渗法制备植物染色体标本实验

去壁低渗法制备植物染色体标本实验 方法步骤： 1、材料培养：将高粱的种子充分浸种后，摆在铺有滤纸的培养皿内，在25℃温 箱发芽培养 2、预处理：待根长至0.5-1cm时,切取根尖立即放入盛有0.2%秋水仙素和 0.002mol/L 8-羟基喹啉水溶液等量混合液的小瓶中预处理2-3小时3、前低渗：切取分裂旺盛的部分根尖（1mm），放入0.075mol/L氯化钾低渗液中， 在25℃条件下处理30分钟。以下可分两种方法进行处理 4、（1）吸去前低渗液，立即加入甲醇：冰醋酸（3：1）固定液固定不少于1h。（2）水洗：将固定好的材料用蒸馏水洗三次，除去材料中的固定液，在1mol/L 的HCl于60℃处理15分钟。 （3）酶解去壁：在小瓶内加入混合酶液（酶液量以浸过材料为合适），在25℃下酶解30-60分钟 （4）后低渗：吸去酶液，慢慢加入(25±0.5) ℃的双蒸水,轻轻洗一次,然后在双蒸水中浸泡10分钟。 5、悬液法： （1）制备细胞悬液：倒去双蒸水，用镊子立即将材料夹碎形成细胞悬液 （2）固定：向细胞中加入新配制的甲醇：冰醋酸（3：1）固定液1-2ml，使成细胞悬液时间在10分钟到数小时不等。 （3）去沉淀：静置片刻使大块组织沉淀，然后取上层细胞悬液于另一个小瓶中。（4）去上清夜：将上层细胞悬液静置30分钟左右，即可见细胞沉淀，用吸管轻轻吸去上清夜，留约0.5ml左右细胞悬液置备标本 (5)标本制备:在一张经过充分洗净脱脂,并预先在蒸馏水中冷冻的清洁载玻片 上,用吸管滴2-3滴细胞悬液,立即将载玻片一端抬起,并轻轻吹 气，使细胞迅速分散，然后在酒精灯火焰上微微加热烤干。 （6）染色：经干燥的玻片标本，用Giemsa染色液染色30分钟，然后用自来水细流冲洗，甩干水珠空气干燥 6、在显微镜下寻找典型的中期染色体，注意观察中期染色体的长臂、短臂和着丝粒位置，并尽可能找到具随体染色体。

染色体核型分析系列之三大技术介绍

染色体核型分析三大技术介绍 ·概念 是细胞遗传学研究的基本方法，是研究物种演化、分类以及染色体结构、形态与功能之间关系所不可缺少的重要手段。经行核型分析后，可以根据染色体结构和数目的变异来判断生物的病因。染色体核型分析技术，传统上是观察染色体形态。但随着新技术的发现与应用，染色体核型分析三大技术包括：GRQ带技术、荧光原位杂交技术、光谱核型分析技术。 ·三大技术介绍 一、GRQ带技术 人类染色体用Giemsa染料染色呈均质状,但是如果染色体经过变性和(或)酶消化等不同处理后,再染色可呈现一系列深浅交替的带纹,这些带纹图形称为染色体带型。显带技术就是通过特殊的染色方法使染色体的不同区域着色,使染色体在光镜下呈现出明暗相间的带纹。每个染色体都有特定的带纹,甚至每个染色体的长臂和短臂都有特异性。根据染色体的不同带型,可以更细致而可靠地识别染色体的个性。染色体特定的带型发生变化,则表示该染色体的结构发生了改变。一般染色体显带技术有G显带(最常用),Q显带和R显带等。 百奥赛图提供的小鼠染色体核型分析服务，就是利用Giemsa染色法，对染色体染色后进行显带分析，保证基因敲除小鼠在染色体水平阶段没有发生变异，从而确保基因敲除小鼠可以正常繁殖。

二、荧光原位杂交技术 荧光原位杂交(fluorescenceinsituhybridization,FISH)是在20世纪80年代末在放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性分子细胞遗传技术,以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法,探针首先与某种介导分子结合,杂交后再通过免疫细胞化学过程连接上荧光染料。FISH的基本原理是将DNA(或RNA)探针用特殊的核苷酸分子标记,然后将探针直接杂交到染色体或DNA 纤维切片上,再用与荧光素分子耦联的单克隆抗体与探针分子特异性结合,来检测DNA序列在染色体或DNA纤维切片上的定性、定位、相对定量分析，可判断单个碱基突变。此时，一个染色体核型，即为一个碱基。近年来，采用荧光原位杂交技术，将荧光素标记的探针进行染色体核型特定位点的检测和标记，可以精确地检测染色体上DNA链中，单个碱基的突变，从而大大提高了染色体核型分析的精度。 三、光谱核型分析技术 SKY(spectralkaryotying)光谱染色体自动核型分析是一项显微图像处理技术,SKY通过光谱干涉仪,由高品质CCD获取每一个像素的干涉图像,形成一个三维的数据库并得到每个像素的光程差与强度间的对应曲线,该曲线经傅立叶变换之后得到该像素的光谱,再经由软件分析之后用分类色来显示图像或将光谱数据转换成相应的红绿蓝信号后以常规方式显示。

去壁低渗法制备植物染色体标本及染色体组型分析

去壁低渗法制备植物染色体标本及染色体组型分析 植物染色体的常规压片技术在植物细胞遗传学研究中发挥了重要作用，特别是许多植物的染色体计数和组型分析都是用这种方法完成的，但这种方法也存在一定缺陷，如染色体很难完全散开，容易产生重叠、变形、断裂，影响显带结果等，给核型分析增加了不少困难。另外，在当前植物染色体Giemsa分带研究中，由于压片法很难完全除掉细胞质及细胞壁对染色体的覆盖，因而常常造成Giemsa带可重复性较低，使植物染色体Giemsa分带研究受到一定的影响。其次，由于植物染色体处理方法尚不理想，影响到亚显微结构的研究。因此改革植物染色体压片法是促进植物染色体的研究，特别是植物染色体Giemsa分带和亚显微结构研究的重要关键。20世纪70年代以来，一些从事植物染色体研究的学者，参照动物及人类染色体标本制备技术，开展了对植物细胞去壁、低渗、火焰干燥方法的研究，取得了很好的结果，目前这种方法已广泛用于染色体计数、组型分析、显带、显微操作、原位杂交等分子细胞遗传学研究领域。 染色组通常是指生物体细胞染色体所有可测定的表型特征的总称，包括染色体的总数，染色体组的数目，组内染色体基数、每条染色体大小、形态等。它是物种特有的染色体信息之一，具有很高的稳定性和再现性。染色组型分析是对染色体进行分组，对核型的各种特征进行定量和定性的描述，如对染色体长度、着丝点位置、臂比和随体有无等。为细胞遗传学、分类学和进化遗传学等研究提供实验依据。 【实验用品】 1．材料：蚕豆（Viciafaba） 2．器材和仪器：恒温培养箱，显微摄影设备，载玻片，酒精灯，冰箱，恒温水浴锅、135胶卷，剪刀，镊子，解剖针，刀片及毫米尺。 3．试剂：对二氯苯饱和溶液，甲醇，冰醋酸，70%酒精，纤维素酶，果胶酶，Giemsa原液，1/15mol/L(pH6.8—7.2)磷酸缓冲液，0.075mol/LKCl。 【方法步骤】 1．制片 (1)．取材：先将种子浸泡若干小时，然后转人一垫有湿润滤纸的培养皿中，置25℃恒温培养箱中萌发，待幼根长至1—2cm取材。 (2)．预处理：将取下的根尖置于盛有对二氯苯饱和水溶液或1mL0.2%秋水仙素的小瓶中预处理2—3小时。 (3)．前低渗：将根尖，放入0.075mol/L氯化钾低渗液中，在25℃条件下处理30分钟。 (4)．酶解去壁：倒去KCI溶液，用蒸馏水充分洗净。加人混合酶液（纤维素酶与果胶酶各占2.5%），25—30℃下酶解2h左右，在酶解过程中最好轻轻摇动瓶子，促使酶解反应更加充分。 (5)．后低渗：倒去酶液，用蒸馏水慢慢冲洗2—3次，然后在蒸馏水中停留10—30min进行后低渗处理。 (6)．固定：甲醇：冰酸酸(3：1)固定液固定30min。 (7)．涂片：取2—3个根尖置于擦干的洁净载玻片上，切下顶端1—2mm，滴上1—2滴甲醇—冰醋酸(3：1)固定液，用镊子迅速捣碎根尖组织，均匀涂布于载玻片上，在酒精灯火焰上掠过3—4次。 (8)．染色：Giemsa原液与1/15M磷酸缓冲液以20：1混合，分装入染色

植物染色体常规分析技术

第一章植物染色体常规分析技术 染色体由DNA和组蛋白构成，不仅是生物，包括植物，的遗传信息载体，起到调节基因活动和有性后代重组频率的作用，而且还控制着真核生物的育性。因此无论是在植物遗传育种，还是在植物系统进化领域，染色体研究技术都是重要手段之一。此外该技术还是染色体分带、基因和基因组原位杂交技术的基础。也就是说染色体常规分析技术是生物学研究的基本技术之一，学习掌握该技术是学生将来从事科学研究工作的必要知识储备。 仪器设备、试剂及其他用品 明视野显微镜（每人一台）；水浴锅一个；控温培养箱一台；载玻片，盖玻片若干(清水洗过，70%酒精保存备用，用前纱布擦干)；纱布，滤纸若干；钟表镊子, 铅笔(未销)，双面刮胡刀片各一个；500ml烧杯（或广口瓶）若干只；培养皿若干（最好直径90mm）；小药瓶或1.5ml 塑料离心管若干。 对二氯代苯饱和水溶液；0.002M八羟基喹啉；改良石炭酸品红；1mol/L盐酸；0.1mol/L盐酸；45%乙酸； 材料 玉米、燕麦、小麦、蚕豆种子，洋葱、大葱鳞茎或种子，最好当年产。或者自己准备其他感兴趣的材料，如校园及周围环境中采集和市场购买，要有一定数量,至少几百颗。有意向后及时与老师联系，了解你预备的种子是否适合用于实验，因有些种子存在休眠，短时间不能萌发。实验流程 1 种子和鳞茎根尖的培养 种子培养前首先进行种子筛选，去除空瘪和霉变者以及杂质，保留饱满种子,10至30倍自来水浸泡24小时。取培养皿内垫湿滤纸，将浸泡后的种子铺于培养皿内，注意滤纸表面不要有流动水，种子量要适当，不要太多而互相堆积在一起，室温培养即可。每天流水洗一次，培养过程中如发现有霉烂种子及时清除以免影响种子萌发。 鳞茎培养采用水培。取烧杯一只盛满自来水，将鳞茎外部干皮和鳞茎盘底部残留泥土及根去掉，洗净，坐于烧杯口上，使底部浸泡水中。 虽然是染色体分析实验，一定不要忽略材料培养，要提供具体材料以理想的培养条件。只有根尖生长旺盛，才可能获得具有高比例分裂细胞的根尖，这是得到满意中期分裂相的前提。一般质量好的根尖为乳白色，可见大量根毛。 2 预处理 所谓预处理是指使用化学试剂和物理方法（如低温）抑制细胞纺锤体微管的形成和活动，保证更多的细胞处于有丝分裂中期，同时使染色体缩短变粗利于观察。待根尖伸长约1厘米，取根尖或在小种子情况下，如小麦，连带种子置小药瓶内对二氯代苯饱和溶液中处理3-6小时。注意环境温度不要过高以免产生药物毒害作用。还要注意不要盖瓶盖，保证材料呼吸所需氧气供应。如果处理时间较长，如超过5小时，应该间隔一定时间摇晃小药瓶以增加溶液中的溶解氧。 3 固定 固定就是在化学试剂的作用下使细胞内染色体结构保持不变。染色体制片常用的固定剂为卡诺固定液。方法很简单，倾去预处理液，加卡诺固定液[95%(或100%)酒精:冰乙酸=3:1]固定过夜。常温下材料在固定液可以保存一周左右，冰箱冷藏可以保存一个月左右。保存时间过长，压片时染色体粘连而不易分散。 4 解离 解离的作用是使根尖分生组织的细胞易于分散。一般是将材料从固定液中取出装入小瓶或离心管中，蒸馏水洗一次，加入1mol/L盐酸，放入事先预热到60℃的水浴锅中，保持5至10分钟取出，用吸管吸出解离液，加入蒸馏水洗一次，加45%醋酸软化。 5 染色和压片 染色和压片的目的是使细胞中的染色体着色并分散开以利于染色体形态结构的观察。截取

植物细胞染色体标本的制作与观察

普通生物学实验课须知 1.新生进实验室之前要认真阅读实验室基本知识。 2.每次进入实验室的时间为以课表为准，提前10分钟进入实验室。 3.应严格按照实验平台上预约时间进入实验室进行实验，不来者，视为旷课。如因特殊情况请假，需在实验开始前至少三天向指导教师说明，在选课平台系统中取消原预约时间，重新预约，一次不做实验或一次不交报告，即按不及格论处。 4.预习实验内容和有关知识，写好预习报告（手写）,前四部分内容（一、实验目的，二、实验原理，三、实验器材与试剂，四、实验步骤与操作方法），无预习报告者扣10分。 5. 实验过程中应认真操作，仔细观察实验现象，做好原始记录(三个实验需要用相机或手机拍照，DNA指纹图谱实验需用U盘拷贝实验结果，请自备拍照工具和U盘)。 6. 预习、课堂操作、课堂纪律、善后处理、实验报告是评分的依据。 7. 实验完毕，要将自己使用的仪器刷洗干净，药品按序恢复原位，台面擦净，把自己做实验的一套东西找齐，经指导老师检查合格并签字后方可离开。 8. 值日生要认真清扫地面、水槽、台面，检查水、电、门窗是否关好。 9. 实验讲义：实验预约系统中可以下载，也可到生命科学与技术学院网站下载。 10. 实验报告模板见附件，需注明姓名、学号、组号、做实验具体时间。

植物细胞染色体标本的制作与观察 上课地点：化学楼120 上课时间：选课时 任课教师：陈丽杰办公地点：生化楼215 电话：84706308 课程要求： 预习实验内容，掌握实验目的及原理、仪器和试剂、实验步骤； 手写完成预习报告（实验名称、实验目的、实验原理、实验器材与试剂、实验方法与步骤），课堂检查预习报告情况。 实验注意事项： 1、实验台上物品按实验室管理老师要求摆放整齐； 2、实验废物按实验室管理老师要求收集； 3、实验结束后，经老师检查后方可离开。 实验纪律： 1、按时上课 2、穿实验服（白大衣） 3、不许吃东西，课堂严禁大声喧哗 4、手机静音 实验成绩： 预习报告：20分 实验操作：40分 报告内容：结果和讨论40分

染色体核型分析

姓名程开源系年级2010级临床医学八年制同组者孙琳、孙晶鑫、窦云德 科目分子细胞生物学题目染色体核型分析学号201000232012 【实验目的】 1.了解小白鼠睾丸细胞染色体的形态及数目。 2.初步掌握小白鼠睾丸细胞染色体的玻片标本制作方法。 3.观察动物细胞染色体的数目和形态。 【实验原理】 染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染色体。小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织。骨髓细胞中，有丝分裂指数相当高，因此可以直接得到中期细胞而不必象淋巴细胞或其它组织那样要经过体外培养；对大型动物通常采用对骨骼、脊或胸骨穿刺术吸取红骨髓，小型动物多采用剥离术取股骨以获得骨髓细胞。 制作染色体标本的先决条件 1. 细胞具有旺盛的分裂能力 选择活跃的组织：胸腺，骨髓，睾丸，小肠 施加药物使细胞分裂：PHA 2. 设法得到大量的中期细胞：秋水仙素 (1) PHA：粗细胞分裂，使淋巴细胞返幼，变为淋巴母细胞 (2) 秋水仙素：破坏微管装配，使纺锤体不能形成，使大量细胞停止在分裂中期。 (3) 低渗作用：水进入细胞内，细胞内容空间变大，染色体间的距离拉大，易于染色体展开 (4) 空气干燥：使细胞和染色体展开 (5) 固定：用甲醇：冰醋酸=3:1作用使蛋白质变性，对染色体内的组蛋白讲，变性后硬度增加，保持了染色体的“及时形态”，对细胞膜蛋白讲，变性使细胞膜硬度增强，形成屏障作用，防止了细胞内物质外溢和丢失。 对于小鼠精巢染色体标本的制作，一般包括以下几个要点: 1. 用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处; 2. 用低渗法使将细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上; 3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载片上展平, 经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象。 【实验材料】 1.材料：小白鼠。 2.试剂：秋水仙素、0.3%KCl溶液、甲醇、冰醋酸、磷酸缓冲液（pH=6.8）吉 姆萨原液。 3.器械：手术刀、手术剪、镊子、试管架、解剖盘、注射器、针头、吸管、离 心管、离心机、玻片(冰片)、天平、试镜纸、二甲苯、吸水纸、香柏油、烧杯、水浴锅。 【实验步骤】 4.取雄性小鼠以每克体重4ug注射秋水仙素，经14-16小时后，断头法杀死小 鼠，取出睾丸，用生理盐水（0.9%的NaCl）吸去血污。 5.放入装有1ml 0.3% KCl 液的小烧杯中剪碎（呈乳白色）。

植物染色体核型分析 日文版

３１ 植物染色体の核型分析の試み １ 研究の動機 生物の授業で体細胞分裂について学習し、生物には相同染色体が２本ずつ含まれることを学んだ。このことを身近な植物について、核型分析を行って調べてみたいと思った。 ２ 実験方法 染色体標本を得るためには、根の先端の分裂組織（根端分裂組織）を用いた。 （１） 発根処理 ここで紹介するキク科のエンシュウハグマについては、0.01％のハイポネクス水溶液に浸し、エアーポンプで空気を送りながら2～3週間放置した。キンポウゲ科のケキツネノボタンの場合は水につけても発根しなかったため、採集場所で新鮮な根を切り取り、その場でコルヒチン処理した。（２）コルヒチン処理→固定→解離処理上記の操作で発根したもの、あるいは直接切り取ったものを、0.002mol/?-８-オキシキノリンと0.1％コルヒチンの１：１混合液に常温で４～５時間浸した。続いてその根端をカルノア液（エタノール：酢酸＝３:１混合液）に移し、冷蔵庫（４℃）で顕微鏡観察前日まで保存した。そして実験の24時間前には解離処理のため、１mol/?塩酸と45％酢酸の１:９混合液に移し、冷蔵庫（４℃）に入れておいた。 （３） 顕微鏡観察（押しつぶし法） 解離処理した根をスライドグラス上に置き、先端から１～２㎜程度のところで切り、残した先端部を柄付き針で潰した後、酢酸オルセイン液を加えてさらに潰した。続いてカバーグラスを気泡が入らないようにかぶせ、ずれないように注意しながら上から軽くたたいた。最後にろ紙をかぶせてカバーグラスの上から指で強く押した。作成したプレパラートを顕微鏡で観察し、分裂中期の染色体がうまく散らばった細胞を探した。そして、ディジタルカメラまたはフィルムカメラによる顕微鏡写真撮影装置で撮影した。 （４） 核型分析 撮影した写真をプリントアウトし、染色体の形状にそって切り取り、全体長や長腕、短腕の長さを基準に相同染色体の組み合わせをつくり、全体長の長い順に並べた。ケキツネノボタンついては、各染色体の長腕及び短腕の長さをノギスで計り、データを表計算ソフトを用いて分析した後、核型イディオグラムを作成した。 ※ 私達が用いた「押しつぶし法」は、物理的な力を加えることから、染色体を変形させてしまう恐れもある。従って、相同染色体を見つける作業においてもこのことを念頭におき、一部で完全に形状が一致しない場合でも、全体とのバランスを見て止むを得ないとすることもあった。 ３ 実験結果 （１）キツネノボタン （キンポウゲ科キンポウゲ属） ケキツネノボタンは、水辺や水田の近くなどの湿った土壌に生育するキンポウゲ科の植物である。本校近くを流れる二俣川周辺にも生育するが個体数が少なく、十分な根端試料がとれなかったので、磐田市内のひょうたん池（磐田市西貝塚）周辺および旧豊岡村の水田の畔に生育していたものを用いた研究結果を示す。 ア ひょうたん池周辺で採集したもの ２つの核型分析が可能な染色体標本Ａおよび標

植物染色体标本的制备和观察

植物染色体标本的制备和观察 摘要：植物染色体标本的制备，其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤。本实验主要是介绍了解常规压片法和去壁低渗法制备植物染色体标本的基本原理和方法 关键词：大蒜、洋葱、染色体、去壁低渗法、压片、标本 【实验目的】 掌握常规压片法和去壁低渗法制备植物染色体标本的基本原理和方法。 【实验原理】 植物染色体标本的制备，常用分生组织，如根尖、茎尖和嫩叶做材料。常规压片法仍是 当今观察植物染色体常用的方法，其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤。但压片法的不足之处是染色体很难分散开，染色体容易变形和断裂。而去壁低渗法则能较好地克服这弊端，方法也较简单，不需要特殊设备。它是借助纤维素酶和果胶酶将细胞间的果胶质和组成细胞壁的α-纤维素、半纤维素溶解掉，使植物细胞只有质膜，然后按哺乳类动物染色体标本制备的方法——低渗、火焰干燥法制备植物染色体标本。实验证明，这一技术可以显著提高染色体的分散程度，现已广泛应用于植物染色体显带，妹染色单体交换等研究，大大促进了植物细胞遗传学研究的发展。 【实验仪器、材料和试剂】 （一）仪器、用具培养箱、显微镜、剪刀、镊子、刀片、培养皿、滤纸、吸水纸、青霉素瓶、染色缸、载玻片、 盖玻片、玻璃板、酒精灯 （二）百合根尖，大蒜 （三）试剂1．Giemsa 母液：原液的配制：Giemsa 粉0.5g 甘油（AR）33ml 甲醇（AR）33ml 先将少量甘油加入研鉢中，将Giemsa 粉充分研细，再倒入剩余甘油，并在56℃温箱中保温2 小时，然后再加入甲醇混匀，贮存在棕色瓶内。 2．磷酸缓冲液、甲醇、冰醋酸、混合酶液、秋水仙素（或对二氯苯） 3．改良苯酚品红染色液。 【方法与步骤】 （一）压片法制备染色体标本 1．取材把大蒜（百合）根尖茎置于盛水的小烧杯上，放在25℃温箱中发根，待根长至2cm 左右，于上午9～11 时剪下根尖。 2．预处理将剪下的根尖0.02%秋水仙素溶液中，浸泡处理4 小时。(对照组不做处理) 3．固定用水洗净处理过的根尖，经甲醇-冰醋酸（3∶1）固定6～12 小时，再经95%、85%酒精各半小时，最后转入70%酒精中，4℃保存备用。 4．解离取出根尖，用蒸馏水洗净放入1N HCl中60℃解离8～10min，再用蒸馏水洗净。5．染色改良苯酚品红染色液染色5～10min 。 6．压片 把根尖放在载玻片上，切取分生区部分，加一滴染液，用镊子捣碎，盖上盖玻片，然后在盖玻片上放上一滤纸，用铅笔上的橡皮头轻轻敲打盖片，使细胞和染色体分散。 7．镜检。 实验结果与分析

实验五-人类染色体标本制备

实验五人类染色体标本制备 【目的要求】 1．熟悉人外周血淋巴细胞培养的原理。 2．初步掌握人类外周血淋巴细胞染色体标本的制备方法。 3．了解正常人非显带染色体核型特征及核型分析方法。 【实验原理】 人类间期细胞核中的遗传物质染色质，在细胞进入分裂期时，经逐级螺旋形成染色体。 在分裂期的中期，染色体达到最大程度的凝集，表现为短而粗的典型结构。人外周血的有形 成分中，只有白细胞有核，而白细胞中只有淋巴细胞(主要是小淋巴细胞)具有潜在的细胞分 裂能力。 培养液中加入有丝分裂刺激剂植物血凝素(PHA)可使处于G0期、具有潜在分裂能力的淋 巴细胞转化为具有分裂能力的淋巴母细胞，并进入旺盛的有丝分裂周期；加入纺锤体抑制剂 秋水仙素可使处于分裂过程的淋巴细胞停滞在分裂中期，在收获细胞时，用低渗剂0.075 mol/L KCl对细胞进行低渗处理，可使胞膜胀破，染色体均匀分散；经离心、固定、制片等 过程，最终可获得便于观察分析的染色体标本。 制备的染色体标本片，不经特殊处理，直接染色，在显微镜下观察识别，并进行核型分 析的过程称为染色体非显带核型分析。 【实验用品】 (一) 材料：人外周静脉血。 (二) 器材：吸管、刻度离心管、量筒、5ml注射器、6号针头、台式离心机、试管架、 冷藏载玻片（一端磨砂）、铅笔、酒精灯、超净工作台、恒温水浴箱、载玻片、止血带、酒 精棉球、显微镜、废液缸。 (三)试剂 1. RPMI1640培养液 (1) RPMI1640：RPMI1640固体培养基10.4 g,溶于1000 ml双蒸水中，抽滤除菌。 (2) RPMI1640培养液：每100 ml RPMI1640培养液中含RPMI 1640 80 ml、灭活的小牛血 清20 ml、PHA 50 mg、青霉素(终浓度100 U/ml)、链霉素10000 μg (终浓度100 μg /ml)， 15磅、20min高压灭菌的NaHCO3调pH至7.2～7.4，分装20小瓶，每瓶5 ml。 (3) 配制方法 配制过程所需的玻璃器具先用浅水洗刷干净，烘干，放入清洁液中浸泡2 d，取出后用自来水冲洗15次，蒸馏水冲洗3次，双蒸水冲洗1次，烤干后包装，15磅20 min高压灭菌。 新瓶塞等橡胶类制品用水洗刷后，用0.5mol/L NaOH煮沸20min，自来水冲洗；用0.5mol/L HCl煮沸20 min，自来水冲洗，蒸馏水冲洗，在双蒸水中浸泡24h；浸泡后取出晾干，包装后高

实验八 植物染色体标本的制备与观察

实验八 植物染色体标本的制备与观察 一、实验目的 1、掌握常规压片法制备植物染色体标本。 2、了解中期染色体的形态和结构以及染色体的生物学意义。 二、实验原理 染色体是细胞分裂时期遗传物质存在的特定形式，是染色质紧密包装的结果，对染色体的观察在研究生物进化、发育、遗传和异变中有十分重要的作用。 植物染色体标本的制备，常用分生组织如根尖、茎尖和嫩叶做材料。常规压片法仍是当今观察植物染色体常见的方法，其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤，简单易操作，但是染色体易变形、难分散开。 三、实验仪器、材料和试剂 （一）仪器、用具：显微镜、剪刀、镊子、刀片、培养皿、滤纸、吸水纸、青霉素瓶、染色缸、载玻片、盖玻片、玻璃板、酒精灯。 （二）材料：蚕豆(Vicia faba , 2n=2x=12)、黑麦(Secale cereale , 2n=2x=14)、大麦(Hordeum sativum, 2n=2x=14)、普通小麦(Triticum aestivum , 2n=2x=42)、玉米(Zea mays , 2n=2x=20)、豌豆(Pisum sativum , 2n=2x=14)、洋葱（Aillum cepa ，2n ＝16）等根尖。 （三）试剂 1、 Carnoy 固定液、1%秋水仙素(或对二氯苯)。 2、苯酚品红染色液。 四、实验方法与步骤压片法制备染色体标本： (1) 取材：把蚕豆种子预先浸泡12h ，然后转入垫有湿润滤纸的培养皿中上面蒙上湿纱布，置25℃温箱中暗培养发根，经过48h 后幼根长至1—2cm 左右，于上午9—11时剪下根尖。 (2) 预处理：将剪下的根尖置于对二氯苯饱和水溶液或0.1％秋水仙素溶液中，浸泡处理2-4 h 。 (3) 固定：用水洗净处理过的根尖，经Carnoy 固定液中固定2-4h ，转入70％乙醇中，4℃保存备用。 (4) 解离：取出根尖，用蒸馏水洗净，放入l M HCl 中60℃解离8－10min ，再用蒸馏水洗净。 (5) 染色：改良苯酚品红 染色5—10min 。 (6) 压片：把根尖放在载玻片上、切取分生区部分、加一滴45 %醋酸，盖上盖玻片，用力垂直猛压，盖玻片上放上一滤纸，用铅笔上的橡皮头轻轻敲打盖片，使细胞和染色体分散。 （7）镜检 五、实验结果

人类染色体核型分析方法

人类染色体核型分析方法 实验原理 核型(Karyotype）一词在20世纪20年代首先由苏联学者T. A. Levzky 等人提出。核型分析的发展有三项技术起了很重要的促进作用，一是1952年美籍华人细胞学家徐道觉发现的低渗处理技术，使中期细胞的染色体分散良好，便于观察；二是秋水仙素的应用便于富集中期细胞分裂相；三是植物凝集素（PHA）刺激血淋巴细胞转化、分裂，使以血培养方法观察动物及人的染色体成为可能。 核型是指染色体组在有丝分裂中期的表型，包括染色体数目、大小、形态特征等。核型分析是对染色体进行测量计算的基础上，进行分组、排队、配对并进行形态分析的过程。核型分析对于探讨人类遗传病的机制、物种亲缘关系与进化、远缘杂种的鉴定等都有重要意义。将一个染色体组的全部染色体逐个按其特征描绘下来，再按长短、形态等特征排列起来的图像称为核型模式图，它代表一个物种的核型模式。1960年，丹佛会议上，提出了人类有丝分裂染色体命名标准体制草案，为以后的所有命名方法奠定了基础。1963年，伦敦会议上，正式批准Patan 提出的A、B、C、D、E、F、G七个字母表示七组染色体的分类法。1966年，芝加哥会议上，提出人类染色体组和畸变速记符号的标准命名体制。 A组（1-3号）

1号：最大的中央着丝粒染色体，长臂靠近着丝粒外有次缢痕。2号：最大的亚中着丝粒染色体。 3号：中央着丝粒染色体，比1号小三分之一。 B组（4-5号）：为较大的亚中央着丝粒染色体，二者不易区分。C组（6-12号，X）：中等近中央着丝粒染色体，彼此难区分。 6、7、9、11号：着丝粒略近中央。 8、10、12号：偏离中央。 9号：q有次缢痕。 X位于6、7之间。 D组（13-15号）：中等近端着丝点染色体，p常有随体。 E组（16-18号） 16号：中等中央着丝粒染色体，q上有次缢痕。 17号：较小，近中央着丝粒染色体。 18号：较小，近中央着丝粒染色体，p比17号更短。 F组（19-20号）：小的中央着丝粒染色体，彼此不易区分。 G组（21-22号，Y）：小的近端着丝粒染色体。 21、22号：p常有随体，q常呈分枝状彼此不易区分。 Y：p无随体，q通常平行靠近 实验试剂 Geimsa染色液等。 实验设备 摄影显微镜，显微测微尺，染色缸，吹风机等。

染色体核型分析

细胞遗传学（染色体核型）分析 克隆性染色体异常是诊断恶性血液病的重要依据。许多特异性染色体畸变和特定的恶性血液病亚型相联系，因而成为恶性血液病诊断分型的重要指标；诊断时的染色体核型对恶性血液病具有独立的预后价值，对于治疗方案的选择具有指导意义；同时染色体畸变可作为监测白血病缓解、复发及突变的重要参考指标，也为分子学研究提供了重要线索。比如t(9;22)异常的急性淋巴细胞白血病、复杂染色体异常的白血病预后很不好，应尽早进行异基因造血干细胞移植等。WHO制定的恶性血液病分型系统中，将染色体核型作为最重要的分型及诊断指标，发现重现性异常的染色体可提前作出AML的诊断。很多染色体异常导致特异性的白血病融合基因。染色体分析除用于各类恶性血液病患者，如急、慢性白血病、MDS、MPNs、淋巴瘤、多发性骨髓瘤(MM)患者外，还可用于儿童遗传性疾病、先天性畸形的染色体检测，以及习惯性流产、不孕不育等疾病的诊断。但是染色体分裂相的制备和分析具有一定的难度，需要时间长，因此导致临床染色体的诊断缺乏及时性，往往发报告时间需要一个月甚至更长的时间；染色体核型分析需要细胞分裂才能完成，因此需要细胞具有良好的分裂活性，部分患者的细胞不分裂就不能观察到可供分析的中期分裂相（正常染色体分裂相，核型排列后如图3和图4），在一定程度上影响了患者的确诊和治疗。此外染色体一般只能分析20-30个分裂相细胞，敏感性只有百分之一，当异常细胞比例较低时，也难以发现异常的染色体。异常染色体核型的判断需要经验丰富的技术人员，尤其对一些复杂染色体异常，或异常较小的染色体，往往难以正确判断。采用染色体全自动扫描暨自动核型分析系统可以加快染色体检测和发报告速度。通过加用一些促细胞分裂的试剂可增加可供分析的核型。

实验四 植物染色体标本的制备与观察

实验四 植物染色体标本的制备与观察 一、实验目的 1、掌握常规压片法制备植物染色体标本。 2、了解中期染色体的形态和结构以及染色体的生物学意义。 二、实验原理 染色体是细胞分裂时期遗传物质存在的特定形式，是染色质紧密包装的结果，对染色体的观察在研究生物进化、发育、遗传和异变中有十分重要的作用。 植物染色体标本的制备，常用分生组织如根尖、茎尖和嫩叶做材料。常规压片法仍是当今观察植物染色体常见的方法，其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤，简单易操作，但是染色体易变形、难分散开。 三、实验仪器、材料和试剂 （一）仪器、用具：显微镜、剪刀、镊子、刀片、培养皿、滤纸、吸水纸、青霉素瓶、染色缸、载玻片、盖玻片、玻璃板、酒精灯。 （二）材料：蚕豆(Vicia faba , 2n=2x=12)、黑麦(Secale cereale , 2n=2x=14)、大麦(Hordeum sativum, 2n=2x=14)、普通小麦(Triticum aestivum , 2n=2x=42)、玉米(Zea mays , 2n=2x=20)、豌豆(Pisum sativum , 2n=2x=14)、洋葱（Aillum cepa ，2n ＝16）等根尖。 （三）试剂 1、 Carnoy 固定液、1%秋水仙素(或对二氯苯)。 2、苯酚品红染色液。 四、实验方法与步骤压片法制备染色体标本： (1) 取材：把蚕豆种子预先浸泡12h ，然后转入垫有湿润滤纸的培养皿中上面蒙上湿纱布，置25℃温箱中暗培养发根，经过48h 后幼根长至1—2cm 左右，于上午9—11时剪下根尖。 (2) 预处理：将剪下的根尖置于对二氯苯饱和水溶液或0.1％秋水仙素溶液中，浸泡处理2-4 h 。 (3) 固定：用水洗净处理过的根尖，经Carnoy 固定液中固定2-4h ，转入70％乙醇中，4℃保存备用。 (4) 解离：取出根尖，用蒸馏水洗净，放入l M HCl 中60℃解离8－10min ，再用蒸馏水洗净。 (5) 染色：改良苯酚品红 染色5—10min 。 (6) 压片：把根尖放在载玻片上、切取分生区部分、加一滴45 %醋酸，盖上盖玻片，用力垂直猛压，盖玻片上放上一滤纸，用铅笔上的橡皮头轻轻敲打盖片，使细胞和染色体分散。 （7）镜检 五、实验结果

植物染色体标本的制备和观察

植物染色体标本的制备和观察 摘要：目的1、掌握常规压片法制备植物染色体标本的基本原理和方法；2、学会观察和统计植物细胞的染色体数目；3、了解和学习去壁低渗法进行植物染色体制片的基本原理和方法。方法大蒜的根尖是分裂比较旺盛的，我们可以利用秋水仙素处理根尖使得大蒜根尖的细胞分裂处于分裂中期，然后经固定染色等处理将染色体染色固定，以便观察。结果大蒜的染色体有16条，都被染色成红色的条状或细丝状物质。结论大蒜染色体有16条。 关键词：植物染色体；大蒜；秋水仙素 前言 染色体是遗传物质的载体，本实验便是观察染色体的形态和数目。植物染色体标本的制备，常用分生组织，如根尖、茎尖和嫩叶做材料。常规压片法仍是当今观察植物染色体常用的方法。其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤，即可观察到较多的、处于有丝分裂中期的细胞和染色体。由于现在洋葱发根较难，我们采用的是大蒜根尖进行相关实验。 材料与方法 1.实验材料 大蒜根尖、白姜花的根尖、野百合的根尖等。 2.实验试剂： 0.02%秋水仙素；改良苯酚品红染液；卡诺氏固定液，1N盐酸，浓盐酸：95%乙醇（1:1）解离液。 3. 实验用具 显微镜、剪刀、镊子、刀片、培养皿、吸水纸、滴管、载玻片、盖玻片。 4.实验植物和试剂 大蒜根尖、 0.02%秋水仙素；改良苯酚品红染液；卡诺氏固定液，1N盐酸；70%酒精；95％乙醇；85％乙醇；蒸馏水 5.实验方法和步骤 5.1 取材先将大蒜浸泡若干小时，然后转入一个垫有湿润滤纸的培养皿中，置25℃恒温培养箱中萌发，待幼根长至1~2cm时，于上午9~11时剪下根尖。 5.2 预处理将剪下的根尖放进装有0.02%秋水仙素溶液的烧杯中，浸泡处理3～4小时。