斑马鱼常见病
斑马鱼常见鱼病
鱼病种类很多。按照发生原因得不同，大体分为两类：一类就是非感染性疾病，一类就是感染性疾病。两类疾病对斑马鱼得健康均可形成严重得危害。其中以感染性疾病造成得危害较为严重，常常可形成大规模得爆发或感染，严重影响斑马鱼得质量与实验结果得准确性。斑马鱼属于鲤科鱼类。感染鲤科鱼类动物得病原均有可能感染斑马鱼。本章将对斑马鱼中常见疾病及可能得应对方法做一个简单得介绍。
第一节细菌性疾病
1、分支杆菌病
病原：海分支杆菌（M、marinum）、脓肿分支杆菌（M、abscessus）、龟分支杆菌(M、Chelonae)、偶发分支杆菌(M、Fortuitum)、草分支杆菌(M、Peregrinum) 与嗜血分支杆菌(M、Haemophilum)等。分支杆菌属就是一类细长或略带弯曲得需氧杆菌，该属细菌一般不易着色，需要进行抗酸性染色，此外染色时需要加温或者延长染色时间。该病能引起鱼结核病。
临床症状与病变：溃疡、出血、头部周围充血、鱼鳞凸起，鱼鳍磨损，皮肤或者鳃苍白等。内脏器官会有白色结节出现（图3、1）。
图3、1分支杆菌感染病理图。
左侧，宝刀鱼头肾组织感染分支杆菌产生得白色肉芽肿；中间，分支杆菌感染产生得肉芽肿切片（其切片内含有空腔得巨噬细胞）；右侧，分支杆菌感染雨肠道切片得抗酸染色（抗酸菌染色呈红色，非抗酸菌染色呈蓝色）
显微观察与诊断：诊断时根据上诉症状，再取内脏中得小结节做涂片，进行抗酸染色后如发现长杆形得抗酸菌，基本就可以确诊。也可根据分支杆菌16S rDNA基因保守序列设计引物，PCR扩增一段924bp得特异性片段，对其测序就可快速得出鉴定结果。
防治：一般来说分支杆菌感染很难用抗生素进行根治，有文献报道50 ppm卡拉霉素对其有一定得控制作用。此外，优化饲养条件对其预防也有一定作用。
2、细菌性败血症
病原：嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、温与气单胞菌(Aeromonas sobria），河弧菌生物变种（Vibrio fluvialis），产碱假单胞菌(Pseudomonas alcaligenes)，豚鼠气单胞菌（A、caviae）等气单胞菌属。气单胞菌属均为革兰氏阴性菌，其中就是嗜水气单胞菌能产生外毒素，具有溶血性、肠毒性及细胞毒性。
临床症状与病变：体表及内脏充血, 出血, 突眼, 腹部膨大,有淡黄色或红色腹水, 肝、脾、肾肿大, 花肝, 脾紫黑色, 严重贫血等。
显微观察与诊断：显微镜下可见红细胞肿胀，有时发生溶血，在脾、肝、胰、肾中均有较多得血源性色素沉着。在病鱼腹水或者内脏检出嗜水气单胞菌PCR确诊。
3、滑动细菌（细菌性鳃病、环境性鳃病）
病原：黄杆菌属(Flavobacterium spp、)、屈桡杆菌属(Flexibacter spp、)；淡水养殖中常被检测出来得菌尾柱状黄杆菌(Flavobacterium columnare)与嗜鳃黄杆菌(F、branchiophilum)。其中，柱状黄杆菌不能用含英语丰富得培养基培养，因会被其她生长快得细菌覆盖而使其长不出来，故分离该菌必须用贫营养得培养基。
临床症状与病变：病鱼行动缓慢，反应迟钝，呼吸困难，鱼鳍与鱼尾表现特征性得腐蚀，颜色发白。（图3、2）
图3、2滑动细菌感染鱼得病理图。
左侧，烂尾病。右侧，细菌性鳃病（BGD）得病鱼鳃湿片，可见明显得上皮组织增生，上皮组织将初级鳃丝（P）逐渐融合。
显微观察与诊断：鱼体发黑，鳃上肿胀，粘液增多，上皮增生，次级鳃瓣融合，有些鳃瓣坏死，病变部位可见大量细菌。PCR确诊。
防治：防治鱼过度拥挤，保持好得水质，在运输前两天内尽量少喂食或者不喂食。一旦出现此病，用氯胺或者过氧化氢进行处理。
4、细菌性肠炎症
病原：初步认为就是肠型点状气单胞菌。本菌为革兰氏阴性短杆菌，琼脂培养基上培养后，菌落周围可产生褐色色素，半透明。
临床症状与病变：病鱼离群独游，游动缓慢，体色发黑，腹部膨大，两侧上有红斑，肠壁充血发炎，弹性差，有很多淡黄色粘液，肛门红肿。
显微观察与诊断：主要根据两点做出判断：A 肠道充血发红，肛门红肿外突，肠腔内有很多淡黄色粘液；
B 从肝、肾中可以检测出产气单胞菌。进一步确认病原可以染色观察到细菌，PCR确诊。此外，许多传染性疾病，均能引起肠道充血发炎，例如，肠炎性出血病，与肠炎病一样，肠道也发红充血，但肠道往往多处有紫红色瘀斑、瘀点。
5、竖鳞病
病原：初步认为就是水型点状假单胞菌(Pseudomonas punctatat f、ascitae)。这种菌均为短杆状，近圆形，单个排列，具有运动能力，无芽孢，革兰氏阴性。琼脂菌落呈圆形，24h培养后中等大小。有人认为此病
就是气单胞菌引起得，发生竖鳞病得斑马鱼体内也可以检测到气单胞菌；此外也有人认为就是一种循环系统得疾病，由于淋巴回流障碍引起得。
临床症状与病变：病鱼离群独游，游动缓慢，无力，体表粗糙, 鳞囊内积水, 鳞片竖起，用手指轻压鳞片，渗出液就从鳞片下喷射出来，鳞片也随之脱落。病鱼严重贫血，鳃，肝，脾，肾得颜色均变淡。（图3、3）
图3、3 竖鳞病斑马鱼
游动缓慢，无力，体表粗糙，鳞片竖起，腹部膨大有腹水，眼睛突出显微观察与诊断：根据其症状，如鳞片竖起，眼球突出，腹部膨大有腹水，轻压鳞片可喷射出可初步判断。进一步确认病原可以染色观察到细菌，PCR确诊。
6、赤皮病
病原：荧光假单胞菌（P、Fluorescens），属假单胞菌科。革兰氏阴性菌，有运动能力。琼脂培养基上菌落呈圆形，20h左右开始产生绿色或者黄绿色素。
临床症状与病变：病鱼体表局部或大部分出血发炎，鳞片脱落，特别就是鱼体两侧与腹部最为明显。鳍充血，鳍得末端腐烂，鳍条间得组织也被破坏，使鳍条呈扫帚状，形成蛀鳍。体表得皮肤出血发炎, 鳞片脱落。
显微观察与诊断：根据外表症状即可诊断。染色观察到细菌，PCR确诊。本病病原菌不能侵入健康鱼得皮肤，因此病鱼有受伤史，这点对于诊断具有重要意义。
7、鱼鳔炎( aerocystitis,鱼鳔细菌性感染)
病原：细菌与真菌感染都时有报道，不能确定其具体得细菌类型，有报道在患有鳔炎得病鱼中发现有嗜水气单胞菌与霍乱弧菌，因此瞧起来似乎为细菌机会性致病得。
临床症状与病变：嗜睡，聚集鱼池底部，鱼鳍基部出现红斑。
显微观察与诊断：鱼鳔出现大范围损伤与严重慢性炎症。组织切片可见明显坏死，革兰氏染色可见大量细菌群落。（图3、4）
防治：由于目前鱼鳔炎得病菌及致病机理尚未清楚，所以还无好得治疗方法。遇到病鱼及时隔离。
图3、4鱼鳔细菌性感染鱼得病理图。
左侧鱼鳔感染细菌后腹鳍与背鳍出现红斑；右侧，患有鱼鳔炎得病鱼得鱼鳔切片染色，箭头处可见大量革兰氏阴性菌
第二节寄生虫疾病
1、单细胞寄生虫
1、1、天鹅绒疾病
病原：淡水天鹅绒（Piscinoodinium pillulare）属鞭毛虫纲，腰鞭毛虫目。
生活史：腰孢子虫阶段—滋养体—分裂前体—腰孢子虫。
临床症状：精神萎靡，浮于水体表面，呼吸困难。
显微观察与诊断：皮肤或者鱼鳃湿片可见滋养体；鳃感染上皮增生，皮肤感染上皮增生与坏死；切片中见滋养体（卵形得、不透明、无运动能力）。（图3、5）
防治：对于出现病症得鱼用盐水浸泡，及时隔离，彻底清洗鱼缸。
图3、5天鹅绒疾病鱼得病理图
鞭毛虫感染鳃组织切片染色，可见鞭毛虫（X）及早期阶段得鞭毛虫滋养体（箭头方向）
1、2、微孢子虫病
病原：微孢子虫（Microsporidiun）属于微孢子门，微孢子目，特定种属名：Paeudoloma neurophilia，孢子呈梨形、卵圆形，孢子小，内部构造需在电镜下才能瞧清楚。
生活史：专性细胞内寄生，复杂生命周期，产生具有传染性与抵抗性得孢子，通过摄入具有传染性得孢子感染。
临床症状：衰弱与脊柱弯曲（图3、6）
显微观察与诊断：中枢神经系统（脊索与后脑）可见孢子（湿片或切片）
防治：目前对微孢子虫最有效得控制手段就是紫外线（UV）对水体进行照射，尚未发现对该病有作用得抗生素。
图3、6微孢子虫病鱼得病理图。
左侧，A鱼：微孢子虫感染导致体型瘦弱；B鱼：微孢子虫感染导致脊柱侧弯；右侧，A：头部组织得微孢子虫吉姆萨染色；B：微孢子虫湿片得电子超微结构。
1、3、白点病
病原：多子小瓜虫（Ichthypothirius multifiliis）（纤毛虫纲、膜口目，凹口科）。
临床症状与病变：粘液过多、呼吸困难与精神萎靡，皮肤有凸起得白色结节。
显微观察与诊断：湿片见纤毛虫，确诊见到滋养体，寄生部位发现虫体。（图3、7）
防治：发病鱼体可以采用1:4-5000稀释得福尔马林浸泡。
图3、7白点病鱼得病理图。
左侧，白点病鱼体表面可见寄生得纤毛虫；右侧，白纤毛虫得湿片观察可见鳃得上皮组织下生长有白纤毛虫得滋生体（箭头）
2、多细胞寄生虫
2、1、毛细线虫病（Capillariasis）
病原：毛细线虫(Capillaria sp、)，Pseudocapillaria tomentosa就是第一个兼并得感染斑马鱼得毛细线虫，具有广泛得宿主。属毛细科，卵生，卵随寄主粪便排入水中，开始分裂，形成幼虫，但幼虫并不出壳，鱼吞食含有幼虫得卵而感染。
临床症状与病变：病鱼发黑，衰弱，嗜睡，毛细线虫以其头部钻入寄主肠壁黏膜层，破坏组织，引起肠壁发炎，剖检肝肿大与贫血（图3、8）。
显微观察与诊断：肠道湿片显示充满特殊虫卵，组织切片见蠕虫位于肠壁，感染组织严重蜂窝织炎；椭圆形、具有双极囊得卵存在；确诊还需要观察到虫体或者分离虫体，PCR确诊。
防治：对该病得治疗通常采用伊佛霉素与左旋咪唑，目前这两种药物尚未在斑马鱼身上试用。
图3、8毛细线虫病鱼得病理图。
毛细线虫感染鱼体组织得切片观察，切片中可见炎症从内皮层扩展到内腔。
2、2、肾粘孢子虫病
病原：粘原虫（粘原虫门，粘孢子虫纲），两极虫属（Myxidium）或楚克拉虫属（Zschokkella）。鱼体吞食孢子或者孢子粘附鳃或者皮肤感染。
临床症状与病变：一般无明显临床症状，可在多个器官中形成可见白色包囊。
显微观察与诊断：病变组织切片见虫体，粘孢子具有特殊得极囊。可以采用亚甲基蓝或者吉姆萨等特殊方法染色。组织切片观察到虫体。（图3、9）
防治：福尔马林浸泡可以有效得治疗与预防该病。
图3、9肾粘孢子虫病鱼得病理图。
肾粘孢子虫得吉姆萨染色图，在图中可见虫体得两个极囊（箭头）
第三节真菌性疾病
1、水霉病（白毛病）
病原：最常见得就是水霉（Saprolegnia）与绵霉（Achlya）两个属得种类，属水霉科。菌丝一段像根样扶着在水产动物得损伤处，分枝多而纤细，可深入至损伤、坏死得皮肤及肌肉，具有吸收营养得功能；伸出体外得菌丝形成肉眼能见得灰白色絮状物。
临床症状与病变：病鱼最初感染水霉菌时，肉眼瞧不出任何症状，当肉眼瞧到时，菌丝已向外生长，呈灰白色棉毛状, 病鱼焦躁不安，患处肌肉腐烂。由于霉菌能分泌大量蛋白质分解酶，机体受刺激后分泌大量粘液，鱼体开始焦躁不安，与其她固体发生摩擦，此后，预提负担过重，食欲减退，瘦弱而死。
显微观察与诊断：病变部压片，以显微镜检查时，可观察到水霉病得菌丝及孢子囊等；观察体表棉絮状得覆盖物；观察到水霉等得菌丝及孢子囊，培养霉菌鉴定种类以确诊。
2、鳃霉病
病原：鳃霉，属水霉目，寄生在鳃上得鳃霉菌丝较粗直而少弯曲，分枝很少，不进入血管与软骨，仅在鳃小片上生长。
临床症状与病变：病鱼失去食欲，呼吸困难，鳃上粘液增多，鳃上出血，呈现花鳃；病重时，病鱼高度贫血，整个鳃呈青灰色。
显微观察与诊断：病变部压片，以显微镜检查时，可观察到鳃上有大量鳃霉寄生。
第四节非感染性与先天性疾病
1、肾钙质沉着症
钙在肾小管与集合管种沉积而成，当水中有较高浓度得CO2（>12mg/L）或者食物中钙镁浓度较高时会出现该病症。
临床症状与病变：一般无明显临床症状
显微观察：组织切片可见肾小管与集合管种有嗜碱性、水晶状得沉积物。（图3、10）
诊断：肾组织切片中钙得沉积。
图3、10 肾钙质沉着症病鱼得组织切片。
切片中可见肾小管与肾集合管内有嗜碱性得晶体存在。
2、心脏病
临床症状与病变：心脏区域非常肿胀，切开出现严重出血与大块得血栓
显微观察：心包腔中充满血液或者蛋白样渗出物；组织切片可见心室扩张，充满液体。（图3、11）
诊断：剖检心脏出血，组织学确定。
防治：发病原因待定，尚无治疗方法。
图3、11 斑马鱼心脏病得病征与病理图。
左侧，斑马鱼心包积液导致心脏外凸；右侧，心脏病斑马鱼组织切片。由图可见，围心腔(E)内被流动液包裹（V区为心室）
3、卵巢相关炎症
临床症状与病变：腹部扩张，卵巢成实心。瘤状物。甚至从内到外体表现出白色得溃疡。（图3、12）
显微观察：严重慢性炎症，纤维素增生，纤维素瘤
诊断：组织学变化。
防治：雌性斑马鱼未及时将卵排出可能就是该病发生得一个原因，因此需要定期将雌鱼体内得卵排出。
图3、12 斑马鱼卵巢相关炎症得病征与病理图。
左侧，斑马鱼卵巢炎，病鱼体侧会形成白色溃疡；右侧，卵巢炎斑马鱼得组织切片，其卵巢内可见退化得卵与纤维组织围绕整个卵巢腔(箭头)。
5、气泡病
病因：水中某种气体过饱与，一般越幼小得个体越敏感，可引起幼鱼大批死亡，甚至全部死光；较大得个体亦有患气泡病得，但较少见。
症状：鱼最初感到不舒服，在水面做混乱无力游动，不久在体表及体内出现气泡，随着气泡得增大及体力得消耗，鱼逐渐失去游动能力而浮在水面，不久即死。（图3、13）
诊断：解剖及用显微镜检查，可见鳃、鳍及血管内有大量气泡，引起栓塞而死。
防治：气泡病就是水体得氧气过饱与所致，因此要对水体得氧气进行实时准确检测。
图3、13 气泡病斑马鱼病征图。
左侧，眼睛上方与鳃部长有气泡。右侧，气泡病致死得斑马鱼，腮与鱼鳍内含有大量气泡。
6、碰伤或者擦伤
病因：在捕捞或者养殖过程中，使用得工具不合适或操作不慎所致。
症状：鳞片脱落，皮肤擦伤。
诊断：见到上述症状即可诊断。
引自
文献综述-斑马鱼及其应用
斑马鱼及其研究应用 作者：杜颖指导老师：张源淑 摘要：斑马鱼作为一种新兴的重要模式动物之一，体外受精、胚胎透明，因此可在显微镜下直接观察发育过程及检测药物引起的内脏组织变化，在生命科学领域中应用前景十分广阔。斑马鱼体型小,适合高通量研究,还具有生长繁殖周期短及其与人类高度相似的基因组等优点，已经广泛用于人类疾病模型的建立、新药研发和药物的筛选，此外，斑马鱼还被应用于毒理学、发育生物学和遗传学等的研究。因为斑马鱼对污染物反应灵敏，现已用于监测环境污染物及污水检测。本文主要从几个方面对斑马鱼的研究进展进行了整理和归纳。 关键字：斑马鱼模式动物科学研究发育感染药物 Zebrafish and Its Application Abstract:Zebrafish as an important model animal emerging, its in vitro fertilization, transparent embryo, internal organs can be directly observed during the development and testing organ change caused by drugs under the microscope, has very broad application prospects in the field of life sciences. zebrafish also has a live, high-throughput, growth and short reproduction cycles and highly similar to the human genome, etc., it is widely used in modeling human diseases, drug screening, and secondly, zebrafish also is applied in toxicology research, developmental biology and genetics, etc.. Because of its sensitivity, it has been used to monitor environmental pollutants and water testing.This paper mainly from several aspects of zebrafish research progress has been collated and summarized Key words:zebrafish Animal models Scientific research Development Infection Drug 斑马鱼(Danio rerio)又名蓝条鱼、花条鱼、蓝斑马鱼、印度鱼、印度斑马鱼,产于孟加拉、印度东部、巴基斯坦、缅甸、尼泊尔等地,是一种常见的热带淡水硬骨鱼。属辐鳍鱼纲( Actinopterygii)鲤科( Cyprinidae)。斑马鱼身体细长,呈纺锤形，成鱼体长约4-6cm,因全身布满深蓝色条纹似斑马样而得名。斑马鱼雌雄鉴别容易,雄鱼体型细长，颜色偏黄，条纹较为显著，纵纹为柠檬色；雌鱼身体肥胖，颜色较淡，纵纹呈蓝色加银灰色，在性成熟后腹部肥大。雌鱼每次可产卵300多枚，鱼卵易收集，其胚胎透明,繁殖能力强且生长发育速度快，对饲养要求低，可高密度饲养，与其他实验动物相比有很大优势，是一种非常受欢迎的实验动物模型。近三十年来，已有约20个斑马鱼品系的基因数据库资料，全球已有超过1500个斑马鱼实验室，而我国也有超过250个实验室利用斑马鱼开展相关研究。英国桑格研究所（Wellcome Trust Sanger Institute）于2013年完成了斑马鱼的参考基因组，研究人员在此基础上比较了斑马鱼与人类基因组的异同，并进行了系统性的全基因组分析.在此综合近几十年的研究，在胚胎及遗传发育学、基因组学、药物筛选、疾病模型的建立等方向探讨斑马鱼的研究成果及进展。 1.胚胎及遗传生物学方向 斑马鱼的发育分为6个阶段：卵裂期，囊胚期，原肠胚期、分裂期、成形期
病毒性病害防治药剂大汇总
病毒性病害防治药剂大汇总 病毒性病害是农作物病害中一类特殊的病害，具有病情复杂、难以防治的特点，号称“植物癌症”，其主要症状类型有花叶、变色、条纹、枯斑或环斑、坏死、畸形等。常见的病毒性病害有烟草花叶病毒病、番茄花叶病毒病、辣椒花叶病毒病、小麦花叶病毒病、水稻黑条矮缩病、番茄病毒病、烟草病毒病等。这类病害危害大、分布广、无特效农药，近年来，围绕着香菇多糖、葡聚烯糖、寡聚酸碘、氨基寡糖素、盐酸吗啉胍、宁南霉素等成分开发防治病毒性病害的制剂成为开发的热点。 表 1 常见的防治病毒性病害的已登记的农药产品 香菇多糖主要是从伞菌科真菌香菇的子实体中提取纯化得到的β-1,3-葡聚糖，为香菇的重要药用成分，于1968年首次提纯获得。 1.1 理化性质
棕色液体，无可见悬浮物和沉淀；密度(20℃)1.13g/mL；不可燃；对包装材料无腐蚀性；无热爆炸性；闪点＞150℃；pH：4.0～6.0，稀释稳定性(稀释20倍)合格，低温稳定性和热贮稳定性合格，常温2年贮存稳定，不能与碱性物质混用。 研究表明，香菇多糖的主链和侧链的有序构象是单一螺旋构象，胶体结构的结合区域会形成多螺旋构象，其立体结构为右手心三度螺旋，晶格为六角形。香菇多糖的一级结构具有β-(1→3)连接的吡喃葡聚糖主链，在主链中葡萄糖的C6位上含有支点(每5个葡萄糖有2个支点)，其侧链是由β-(1→6)键和β-(1→3)键相连的葡萄糖聚合体组成，在侧链上也含有少数内部β-(1→6)键的葡聚糖。 1.2 毒性 10%香菇多糖母药和1%香菇多糖水剂大鼠经口LD50雌雄性动物均＞4 640 mg/kg；大鼠经皮LD50雌雄性动物均＞2 000 mg/kg；对家兔皮肤、眼均无刺激性；豚鼠皮肤变态反应(致敏性)试验未出现红斑、水肿及其他皮肤过敏症状，按照我国农药致敏率强度分级标准评定为弱致敏物。1%香菇多糖水剂属低毒杀菌剂。环境生物安全性评价：10%香菇多糖母药对蜜蜂急性触杀毒性LD50＞80.00 μg/蜂，为“低毒级”；对蜜蜂经口毒性LC50(4 8h)＞2.00×103 mg/L，为“低毒级”；对斑马鱼急性毒性LC50(96 h)＞100 mg/L，为“低毒级”；对家蚕急性毒性LC50(96 h)＞2.00×103 mg/L，为“低毒级”；对
斑马鱼(Danio rerio)的资源管理：综述
斑马鱼（Danio rerio）的资源管理：综述Christian Lawrence 摘要 斑马鱼最近成为了一个卓越的生物医学研究的模型的脊椎动物。它作为人类疾病和发展的模型，这个同样令人喜欢的特征为它受欢迎做出了贡献；即繁殖力高，体积小，迅速的繁衍周期，在早期胚胎发育早期的光学透明性，也有许多其他学科的研究者长期致力于它的研究，包括动物行为，鱼类生理，水产毒理学。尽管如此，严谨的饲养斑马鱼的技术还是不够发达。虽然斑马鱼有一个相当大的身体，都和畜牧业有直接或间接的关系，这个信息有许多不同的来源，而且它很少被应用到发展中国家的标准协议。这项综述是尝试把可利用的与斑马鱼生物学和文化相关的科学资料整合到一个这项领域的概述，可以用于研究中的这个重要的动物模型的使用效率的改善。这个综述还强调了在那些领域需要做进一步的研究。
目录 1.简介 2.斑马鱼的自然历史 2.1 喜好的栖息地及分布2.2 繁殖和行为 2.3 寿命 2.4 食性 3.斑马鱼文化 3.1 水化学 3.1.1 温度 3.1.2 PH值 3.1.3 硬度 3.1.4 盐度 3.1.5 溶氧 3.1.6 含氮废物 4.营养，食性和饲养方法4.1 营养需求 4.2 食性 4.3 饲养
5.繁殖和养殖技术 5.1 繁殖 5.2 养殖技术 5.3 产卵率 6.幼体培育 6.1 幼体生物学 6.2 食性和营养 6.3 水质 6.4 生长率和存活率 7.成体培育 7.1 保持密度 7.2 遗传育种计划 8.总结 致谢 参考文献
1.简介 在过去的二十年里，斑马鱼已成为一个研究遗传学和发展的重要的脊椎动物模型，近来，也包括人类疾病和筛查治疗药物。大量的有利的性质，包括它体积小，快速的发展和繁殖速度，早期发展过程中的光学透明性，比较容易的遗传选育和与人类相似的遗传特点，而且它将很有可能在其他领域的研究中刺激经济的增长，特别是它的基因组草案的进一步完善和令人振奋的用来做扩展研究的可利用的工具和方法。 鉴于斑马鱼作为一个相当重要的实验模型，伴随着的是它大量使用和相关培育设施的建立和维修的大额的经济耗费，在一定程度令人惊讶的是它的畜牧业不发达。当与其他的养殖鱼类相比，像罗非鱼，斑点叉尾鮰和鲤鱼，公开的饲养标准完全不符合要求。在有关养殖技术的信息交流中，众多的研究机构之间的房屋斑马鱼养殖技术已经基本不存在，和任何已经取得的进展都非常孤立，没有同行业内人士的利益评价。这种情况的一个不幸结果是，许多斑马鱼的设施可能运作在一个次级水平，当调查人员初次接触这个模型，在为新建立的养殖设施制定一个标准的作业程序，没有科学严谨的资源可以咨询时，这个情况只会进一步加剧。 尽管公布的饲养标准缺乏，斑马鱼任然是一种非常好的研究动物。很久以前，它作为一种发展模型出现，斑马鱼是研究各种鱼类各方面生物学的材料。多年来，研究人员利用这些具体实际的优势，现在用
斑马鱼的内分泌系统研究进展(王华飞)
毕业论文 论文题目：斑马鱼的内分泌系统的研究 学生姓名：王华飞 学号：1113030228 所在院系：生物工程学院 专业名称：生物技术 届别：2015届 指导教师：陈锦云 淮南师范学院教务处
目录 前言： (4) 1、作为模式生物斑马鱼的优点 (4) 2、斑马鱼内分泌系统研究在医学方面的发展 (4) 2.1斑马鱼模型能在医学上的应用原因 (5) 2.2 用斑马鱼突变体构来建疾病模型 (5) 2.3.神经学研究的模式生物 (5) 3、斑马鱼内分泌系统研究在环境检测中的应用 (7) 3.1斑马鱼能用与环境检测的原理 (7) 3.2筛选环境中的内分泌干扰物 (7) 4、斑马鱼内分泌系统研究在新药研究方向的应用 (8) 4.1斑马鱼内分泌系统模型在新药筛选中的应用 (8) 4.2在动物生殖内分泌学中的应用 (9) 5、人工内分泌统的基础 (10) 5.1人工内分泌系统的原理 (10) 5.2人工内分泌系统在未来研究中的展望 (11) 参考文献： (11)
斑马鱼内分泌系统的研究进展 学生：王华飞 （指导老师：陈锦云） （淮南师范学院生物工程学院） 摘要：本文综述了模式生物斑马鱼内分泌系统的研究进展。研究人员把斑马鱼的研究主要归纳为以下几个方面：1.突变体做为模型来研究人类的内分泌疾病;2.了解了其发病机制并且研制出了新药;3.斑马鱼内分泌系统的研究还在环境检测及毒理学方面有着重要的应用;4.最后展望在未来科技中人工内分泌系统。 关键词：斑马鱼；人工内分泌系统；医学；环境；药物 Study on the endocrine system in zebrafish Abstract:This paper reviews the research progress of zebrafish endocrine system. Researchers to zebrafish studies are summarized as the following aspects: 1. The mutant do as a model to study human endocrine disease; 2. Understanding the pathogenesis and the development of a new drug; 3. Zebrafish endocrine system research is still in the environment detection and toxicological aspects of has a important application. 4. Finally, the prospect in the future science and technology artificial endocrine system Keywords: zebrafish; artificial endocrine system; medical environment; drug;
全氟辛烷磺酸对斑马鱼脂代谢和糖代谢毒理作用研究-遗传学专业毕业论文.pdf
全氟辛烷磺酸对斑马鱼脂代谢和糖代谢毒理作用研究-遗传学专业毕业论文.pdf
温州医学院硕士学位论文全氟辛烷磺酸对斑马鱼脂代谢和糖代 谢毒理作用研究摘要 全氟辛烷磺酸(Perfluorooctanesulfonic acid，PFOS)是一种应用广泛的全氟化表面活性剂。现有的研究表明：PFOS已经广泛渗透到地球的各种环境介质中，甚至包括地球的两极；是一类具有全身多脏器毒性的环境污染物：包括遗传毒性、 雄性生殖毒性、神经毒性、发育毒性和内分泌干扰作用等。但是目前还鲜见其在糖脂代谢上的研究，在水生生物中的研究和数据更是匮乏。我们以野生型AB系斑马鱼为研究对象，研究在低剂量、长时间暴毒下，PFOS是否以及如何影响脂类、糖类代谢。实验可分为两个部分： 成鱼实验：亲代斑马鱼，自8hpf开始暴露于一系列不同浓度(0，0．02，0．1，0．5I．tM)的PFOS中。暴露150天，固定其中的一部分，用于制备组织病理切片，以观察其内脏组织结构；固定另一部分内脏，用于制备透射电镜超微切片，研究PFOS暴露对肝细胞和小肠上皮细胞超微结构的影响。暴露180天，从各PFOS暴露组分别选取成熟的雌雄斑马鱼繁殖F1代，并且分为持续暴毒组和清水脱毒组继续养殖至50dpf，分别制备病理切片观察组织结构；检测暴露180天后，亲代斑马鱼的各项血液生化指标，包括血糖，血清甘油三酯，血清总胆固醇；同时检测斑马鱼的基本生长指数：肥满度和肝脏指数。． 仔鱼实验：运用荧光定量PCR技术，分别检测96hpf急性窗口期暴毒斑马鱼样本代谢相关基因的表达变化和F1代脱毒斑马鱼样本相关基因的表达变化。 利用IPA构建两个信号通路，分析基因间的调控关系。 研究发现了较为明显的由PFOS引起的各种体内糖脂代谢的紊乱现象：HE 染色的病理切片表明，暴露时间150天的亲代0．51xM组雄鱼普遍存在肝脏脂肪化积累现象；由亲代0．1斗M PFOS暴露组所产脱毒50天养殖的F1代，雌鱼和雄鱼都出现了明显的肝脏脂肪累积，脂肪化程度比在亲代中稍低。对暴露时间达180天的斑马鱼进行血糖、血清甘油三酯和总胆固醇的检测，表明血糖受影响不大，只在O．1“M组雄鱼有小幅上升；血清甘油三酯，随着PFOS暴露浓度的升高 有显著降低的趋势；血清总胆固醇，在雌鱼和雄鱼中检测的结果有明显差异。对同时期鱼进行生长指数的测定结果，肥满度在0．51xM组显著升高和肝体指数在各暴露组显著降低，表明PFOS对斑马鱼基本代谢状况确实存在影响。 对暴露150天的斑马鱼肝脏和小肠进行透射电镜超微切片，发现了脂肪化程度严重的肝细胞(雄鱼)：在超微结构上，细胞内可见大大小小的脂滴，肝糖原降低，且部分细胞核因脂质的挤压而发生变形；细胞内胆小管的微绒毛变稀疏、排列紊乱；细胞间胆小管数量下降；线粒体嵴模糊；肝细胞超微结构中与物质运 1
斑马鱼动物模型的应用介绍
斑马鱼动物模型的应用 斑马鱼（Danio rerio）属于辐鳍亚纲（Actinopterygii）鲤科（Cyprinidae）短担尼鱼属（Danio）的一种硬骨鱼，原产于南亚，是一种常见的热带观赏鱼，因其体侧具有斑马一样暗蓝与银色相间的纹条而得名。 斑马鱼个体小，易于饲养，成体长4-5cm，雄鱼体修长，雌鱼体肥大。可在有限空间里养殖相当大的群体，可满足样本需求量大的研究。斑马鱼发育迅速，在28.5℃培养条件下受精后约40min完成第一次有丝分裂，之后大约每隔15min分裂一次，24h后主要器官原基形成，相当于28d的人类胚胎，幼鱼孵出后约3个月达到性成熟。雌雄鱼通过调控光周期控制14:10（光照:黑暗）产卵时间，成熟鱼每周可产卵一次，一尾雌鱼每次可产卵100-300枚。胚胎体外受精，体外发育，胚体透明，易于观察。受精卵直径约1mm，易于进行显微注射和细胞移植等操作。 一、斑马鱼的品系 经过30多年的研究应用和系统发展，已有约20个斑马鱼品系，斑马鱼基因数据库-ZFIN （http://zfin/org）里有相关的资料可供查询和下载。目前研究中常用的斑马鱼野生型品系主要为AB 品系、Tuebingen（Tu）品系、WIK 品系，斑马鱼基因组计划所用品系是Tu。AB 品系是实验室常用的斑马鱼品系，由单倍体细胞经早期加压法获得。Tu品系斑马鱼具有胚胎致死突变基因，用于基因组测序前敲除该致死突变基因。WIK品系较Tu品系具有更多的形态多样性。此外，还保存有3000多个突变品系和100多个转基因品系。这些品系资源对于利用斑马鱼开展各种科学研究起着很大的推动作用。 二、斑马鱼突变品系的筛选 斑马鱼突变的方法主要有三种：已基亚硝脲（ENU）化学诱导、γ或χ射线照射和插入诱变。ENU是一种DNA烃基化试剂，在生殖细胞减数分裂前诱导碱基对的替换，诱导产生的突变率为0.1%-0.2%，涉及单个基因的突变。射线照射导致染色体大片段的缺失或染色体重排，产生突变率达1%。插入诱变是以逆转录病毒为载体，用显微注射法将目的基因片段导入斑马鱼受精卵，整合到基因组中，干扰正常基因表达。射线照射产生的突变率是ENU 化学诱导的10倍，但由于突变涉及多个基因，突变的表型是受若干基因调控的结果，不利于基因功能的分析，因此，ENU化学诱导法是斑马鱼突变的主要方法。研究含有纯合致死
最新生物学常见模式生物资料
模式生物 生物学家通过对选定的生物物种进行科学研究，用于揭示某种具有普遍规律的生命现象。此时，这种被选定的生物物种就是模式生物。比如：孟德尔在揭示生物界遗传规律时选用豌豆作为实验材料，而摩尔根选用果蝇作为实验材料，在他们的研究中，豌豆和果蝇就是研究生物体遗传规律的模式生物。由于进化的原因，许多生命活动的基本方式在地球上的各种生物物种中是保守的，这是模式生物研究策略能够成功的基本基础。选择什么样的生物作为模式生物首先依赖于研究者要解决什么科学问题，然后寻找能最有利于解决这个问题的物种。19世纪末20世纪初，人们就发现，如果把关注的焦点集中在相对简单的生物上则发育现象的难题可以得到部分解答。因为这些生物更容易被观察和实验操作，因此，除了在遗传学研究外，模式生物研究策略在发育生物学中获得了非常广泛的应用，一些物种被大家公认为优良的模式生物，如线虫、果蝇、非洲爪蟾、蝾螈、小鼠等。 随着人类基因组计划的完成和后基因组研究时代的到来，模式生物研究策略得到了更加的重视；基因的结构和功能可以在其它合适的生物中去研究，同样人类的生理和病理过程也可以选择合适的生物来模拟。 目前在人口与健康领域应用最广的模式生物包括，噬菌体、大肠杆菌、酿酒酵母、秀丽隐杆线虫、海胆、果蝇、斑马鱼、爪蟾和小鼠。在植物学研究中比较常用的有，拟南芥、水稻等。随着生命科学研究的发展，还会有新的物种被人们用来作为模式生物。但它们会有一些基本共同点： 1）有利于回答研究者关注的问题，能够代表生物界的某一大类群； 2）对人体和环境无害，容易获得并易于在实验室内饲养和繁殖； 3）世代短、子代多、遗传背景清楚； 4）容易进行实验操作，特别是具有遗传操作的手段和表型分析的方法。 背景 早在20世纪最初的20年中，甚至更早到19世纪，人们就发现，如果把关注的焦点集中在相对简单的生物上则发育的现象难题可以得到部分解答。因为这些生物的细胞数量更少，分布相对单一，变化也较好观察。由于进化的原因，细胞生命在发育的基本模式方面具有相当大的同一性，所以利用位于生物复杂性阶梯较低级位置上的物种来研究发育共通规律是可能的。尤其是当在有不同发育特点的生物中发现共同形态形成和变化特征时，发育的普
斑马鱼简介
它是发育生物学家的得力助手，是医学研究的后起之秀，是环境监测的哨兵，是指示兵，是药物研发的新宠，它就是脊椎类模式动物明星斑马鱼（zebrafish，Danio rario）。 一、斑马鱼基本特点： 原产地：热带淡水鱼，原产于喜马拉雅山南麓的印度、巴基斯坦、孟加拉和尼泊尔等南亚国家。成鱼体长3-100px，略呈纺锤形，头小而稍尖，吻较短，身躯玲珑而纤细，因其体侧具有像斑马一样纵向的暗蓝色与银色相间的条纹而得名。 http://www.mun.ca/biology/desmid/brian/BIOL3530/DEVO_03/ch03f09.jpg 斑马鱼是体外受精发育，胚体透明。胚胎发育快，受精后3天左右孵化出膜，天左右开口进食，约3个月达到性成熟，寿命可达2年以上。斑马鱼可常年产卵，繁殖周期3-4天，一对成年斑马鱼每次可产卵200-300枚，受精率通常在70%以上。养殖温度一般在23-31℃，15℃左右仍可存活，最佳养殖温度在25-28摄氏度之间，pH值在6.8~7.8，硬度在2~6之间。 二、斑马鱼作为模式生物的起源和发展 1938年，美国布朗大学Roosen-Rung教授首次报道斑马鱼发育形态学研究成果。1950年代，美国罗格斯大学K. Kenneth Hisaoka教授首次报道斑马鱼毒理学研究成果。1972年，美国俄勒冈大学George Streisinge教授开始斑马鱼发育生物学研究和模式动物建立工作。1989年，美国俄勒冈大学Monte Westerfield教授出版斑马鱼研究圣经The Zebrafish Book第一版。1998年，首个斑马鱼模式生物数据库ZFIN成立（https://www.wendangku.net/doc/356019832.html,）。1998年，全球第一家斑马鱼药物研发
物质对淡水鱼(斑马鱼)急性毒性测定方法
《水质物质对淡水鱼(斑马鱼)急性毒性测定方法》 编制说明 （征求意见稿） 国家环境保护总局南京环境科学研究所 2008年03月
目次 1．任务来源及工作过程 (1) 1.1任务来源 (1) 1.2工作过程 (1) 2．修订本标准的必要性及法律依据 (2) 2.1 必要性及目的意义 (2) 2.2 修订本标准的法律依据 (3) 3．标准修订的原则与技术路线 (3) 3.1 标准修订的原则 (3) 3.2技术路线 (5) 4．标准适用范围 (5) 4.1 试验方法选择 (5) 4.2 试验用鱼选择 (6) 5. 标准的主要内容说明 (6) 5.1 方法原理 (6) 5.2 试剂和材料 (6) 5.3 仪器设备 (7) 5.4 干扰及消除 (8) 5.5 样品 (8) 5.6 试验步骤 (9) 5.7 结果计算 (10) 6. 参考文献 (10)
1．任务来源及工作过程 1.1任务来源 本标准由2006年国家质检总局（国质检财函[2007]971号）和2007年国家质检总局（国质检财函[2007]9909号）和国家环保总局2006 年（环办函（2006）371 号）下达编制任务，由国家环境保护总局南京环境科学研究所负责起草，项目编号为992号。本标准是在已颁布的GB/T 13267-91《水质物质对淡水鱼(斑马鱼)急性毒性测定方法》文本基础上修订的。 1.2工作过程 国家环境保护总局南京环境科学研究所为本标准的修订单位，根据标准修订要求成立了标准编制组，主要成员如下： 表1 编制组主要成员名单 姓名职称专业备注 周军英研究员环境生物项目负责人，制定方案 韩志华助研环境毒理主要人员，组织实施、执笔人 单正军研究员环境毒理主要人员，审定 石利利研究员环境化学主要人员，审定 卜元卿助研环境毒理主要人员，具体实施 其他略参加人 1.2.1 标准开题论证 标准修订任务下达后，国家环境保护总局南京环境科学研究所即投入了前期的调研工作，并于2007年2月12~13日在南京召开了《水质物质对淡水鱼（斑马鱼）急性毒性测定方法》标准修订开题论证会。会议邀请了浙江大学、南京大学、沈阳化工研究院等与标准制订有关的各方面专家5人，专家组认真听取了承担单位的汇报，详细审阅了承担单位提交的开题报告材料，经过充分讨论，提出了专家组意见。专家组肯定了标准编制原则、技术路线并提出了专家组修改意见，标准修订组根据专家意见对方案进行了修改和补充。
基于斑马鱼的模式生物的关于人类疾病的最新研究进展
基于斑马鱼的模式生物的关于人类疾病的最新研究进展 摘要：作为一种理想的生物实验模型，斑马鱼在生物学和人类疾病发面有着广泛的科研价值。参考以斑马鱼物生物模型所得的实验研究对于人类疾病的防治有重要的借鉴意义。 关键词：斑马鱼，模式生物，人类疾病 正文： 随着现代生物科学的不断发展，传统的以单一生物模型为研究模板的方式已经不能 满足日益丰富的研究内容，越来越多的生物学研究开始转向以模式生物为研究对象。由于 模式生物的基因在进化的保守性以及遗传密码的通用性，模式生物为其他的实验生物提供 了良好的实验模板，因此，选择合适的模式生物可以使实验祈祷事半功倍的效果。[1] 就目前所用于科学实验的模式生物而言，主要有果蝇，大肠杆菌，斑马鱼，小鼠， 酵母菌和拟南芥等。其中，斑马鱼以其容易捕获，易于饲养，生长周期短，繁殖能力强， 基因组与人类有高度保守性，使得斑马鱼及其胚胎在模式生物研究领域起着不可替代的重 要作用[2]。早在1981年，在Oregon带血的著名遗传学家Streisinger等就在Nature杂志 上发表了第一篇关于斑马鱼的科研论文。自此之后，斑马鱼就开始广泛的运用于发育与遗 传毒理学、生物学、医学、环境毒理学和药物研发等多个领域。[3]在这里主要介绍斑马鱼 及其胚胎在人类疾病模型构建中的研究应用。 一、关于造血疾病的模型研究 斑马鱼血小板和人类的有所差异，主要为带有稀疏细胞质巨大细胞核的有核细胞。但在电镜下表面较为光滑，染色质细密，较易于观察。不过最主要的是两者在生理功能上 具有某些相似性，包括血小板的黏附、激活聚集和释放反应等。所以斑马鱼作为模式生物 研究血小板具有较强的可行性。Gregory等[4]通过将斑马鱼幼鱼暴露在FeCl3中，利用激光损伤的方法损伤血管壁，构建血管闭塞模型。发展了激光介导血栓形成的方法，并通过这 个方法来了解斑马鱼血小板功能的变化。Langenau等[5]将源于小鼠的c-myc基因与斑马鱼 胚胎的Rag2基因融合，再在这个基因的尾部连接上GFP基因，之后植入到斑体细胞，从而影响了造血细胞的的基因表达，建立了斑马鱼白血病模型。 二、关于神经系统疾病的模型研究 在斑马鱼关于人类神经系统的疾病研究主要指关于阿尔茨海默病(AD)，帕金森综合 症(PD)，亨廷顿舞蹈症(HD)以及肌肉萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)的疾病研究。
斑马鱼
新型模式动物斑马鱼在分子生物学和医学中的应用举例 摘要：斑马鱼由于其独特的生物学特性作为一种新型的模式动物在医学、分子生物学、发育生物学、环境监测和毒性检测等方面在国内外得到了广泛的应用。本文概述了其在分子生物学和医学中的具体应用两例，展示了其在实验动物学中诱人的发展前景。 关键词：斑马鱼、模式动物 斑马鱼(又名蓝条鱼、花条鱼、斑马担尼鱼，Brachydanio rerio)，鲤科，原产自印度、孟加拉国。体长为4-6cm。雌雄鉴别较容易，雄鱼的蓝色条纹偏黄，间以柠檬色条纹；雌鱼的蓝色条绞偏蓝而鲜艳，间以银灰色条纹，身体比雄鱼丰满粗壮，各鳍均比雄鱼短小。饲养容易，对水质要求不严，水质为中性，水温以22～26℃为宜。耐热性和耐寒性都很强，可在10℃以上的水中很好地生长，属低温低氧鱼。可与其他小型鱼混养，对食物不挑剔，各种动物性饲料，干饲料均可，很少患病。繁殖比较容易，繁殖水温以24℃为宜。每尾雌鱼每次产卵约300余粒，体型较大者有时可产上千粒。卵子体外受精，体外发育，胚胎发育同步且速度快，胚体透明。受精卵约经36h孵化，两天后仔鱼卵黄囊消失，可游动摄食。发育温度要求在25-31℃。幼鱼三个月可达性成熟。斑马鱼凭借自身优势，已成为理想的脊椎动物模型。 实例一：“绿色”胰岛β细胞发育转基因斑马鱼模型[1]。第一:克隆表达载体,挑选酶切鉴定后阳性的克隆作注射准备。第二：显微注射，即让外源性DNA片段进入斑马鱼基因组。第三：生殖系转基因系的筛选和建立，即蔡斯体视荧光显微镜下筛选胰岛位置特异性表达绿色荧光蛋白(GFP)的胚胎．建立生殖系稳定遗传的Fl代胰岛β细胞转基因斑马鱼系。第四：应用PCR和WISH证实为转基因斑马鱼系。第五：形态学观察，荧光显微镜下观察荧光标记并拍摄得到荧光标记物于胚胎侧面和背面的整体分布图。第六：应用化学遗传学方法破坏斑马鱼胰岛β细胞，模型建立。斑马鱼的应用为高通量筛选具有胰岛β细胞保护和再生作用的药物(包括中药、草药、小分子化台物等)提供了理想的动物疾病模型，为糖尿病这一核心病机的治疗带来了机会。 实例二：flk—GFP斑马鱼模型[2]，它是研究抗血管生成药物的理想动物模型。方法如下：成年flk一GFP转基因斑马鱼交配，产卵，待分裂至16—256细胞期时，将鱼卵随机置于96孔培养板(U底)中。实验组，每孔载入3个胚胎及鱼水(速溶海盐40 g加蒸镏水1000 mL)200μl，于4 hpf(hourpost fenilized,受精后小时数)时，自化合物库中加样，使加药后终浓度为10μmol·L-1；28℃培养箱中,培养至24 hpf；于倒置荧光显微镜下，观察flk—GFP转基因斑马鱼的血管生成情况。于同一培养板中，留出一列孔，不予加药，作为对照组。近年来随着肿瘤发病机制研究的不断深入，分子靶向药物的研究成为肿瘤治疗学研究的热点之一。血管生成抑制剂就是其中一类。斑马鱼通过血管芽的发育形成血管，与哺乳动物的血管形成途径需要相同的生物活性物质。flk—GFP转基因斑马鱼是一种在血管内皮细胞表面表达GFP的转基因动物，研究者可以在多孔板中观察斑马鱼胚胎的血管生成发育过程，从而能直接快速地筛选出影响血管形成过程和形状的化合物。因而，flk—GFP斑马鱼已成为研究血管生成独特的模式生物。 斑马鱼不仅在分子生物学和医学中得到广泛应用，在发育生物学、遗传学、毒性评价、胚胎毒性技术中都有应用[3]。如由于斑马鱼胚胎发育迅速、具有透光性，各器官正处于发育形成阶段，对水质污染和受压状态非常敏感，可用来监测水质的细微变化；能耐受的氧含量范围宽，所需溶液少，尤其适用于代谢物的检测；胚胎的急性毒性实验与成鱼具有很好的相关性，完全可以替代成鱼用于急性毒性检测；OECD也将斑马鱼胚胎检测技术列为测定和评价化学品毒性，尤其是致畸性的标准方法，并制定了详细的操作指南(OECDTG212)。此外，斑马鱼已经作为人类疾病研究模型，而且也被认为是人类基因组计划中功能染色体组研究的理想模型。以上综述可见，斑马鱼的发展前景是十分诱人的，它将在更宽广的领域得到更深入
磷酸三苯酯对斑马鱼早期生命阶段的神经毒性研究
2016年第11卷 第1期， 254-260生态毒理学报 Asian Journal of Ecotoxicology Vol．11，2016 No．1， 254-260基金项目：国家自然科学基金项目（No．21377118） 作者简介：彭涛（1989-），男，硕士生，研究方向为生态毒理学，E-mail ：52382967@qq．com *通讯作者（Corresponding author ），E-mail ：sunliwei@zjut．edu．cn DOI ：10．7524/AJE．1673-5897．20150506001 彭涛，王思思，任琳，等．磷酸三苯酯对斑马鱼早期生命阶段的神经毒性研究［ J ］．生态毒理学报，2016，11（1）：254-260Peng T ，Wang S S ，Ｒen L ，et al．Neurotoxicity of triphenyl phosphate on the early life stages of zebrafish ［J ］．Asian Journal of Ecotoxicology ，2016，11（1）：254-260（in Chinese ） 磷酸三苯酯对斑马鱼早期生命阶段的神经毒性研究 彭涛1，王思思1，任琳2，芮倩倩2，邵璐滢2，孙立伟3，"，傅正伟 1 1．浙江工业大学生物工程学院，杭州3100322．浙江工业大学海洋学院，杭州3100323．浙江工业大学环境学院，杭州310032收稿日期：2015-05-06录用日期：2015- 05-29摘要：磷酸三苯酯（triphenyl phosphate ，TPP ）作为多溴联苯醚类阻燃剂的替代产品， 是一类生产和需求量均相当高的有机磷酸酯类阻燃剂，目前已在多种环境介质以及生物体内均有不同程度检出。由于结构和有机磷农药具有相似性，其对生物的神经毒性值得关注。本研究以斑马鱼为实验动物，研究了TPP （5 625%g ·L -1）的胚胎发育毒性和行为毒性，并通过检测乙酰胆碱酯酶活性以及神经系统相关基因的转录水平，探讨其可能的毒性机制。研究发现，TPP 可导致斑马鱼胚胎孵化时间延长，体长变短，心率变慢。同时，TPP 暴露也可以影响斑马鱼幼鱼在持续光照和明暗周期刺激下的游泳行为，表现为低浓度增加而高浓度降低其游泳速度。而TPP 暴露后幼鱼乙酰胆碱酯酶活性以及神经发育相关基因转录水平的变化可能是导致其行为毒性的原因。虽然实验中所设定的暴露浓度高于环境中一般浓度，但TPP 在短期暴露中所表现出的胚胎和神经发育毒性表明TPP 对于水生生物可能存在一定风险，需要进一步研究加以确认。 关键词：有机磷酸酯阻燃剂；胚胎毒性；行为毒性；基因转录；乙酰胆碱酯酶文章编号：1673-5897（2016）1-254-07中图分类号：X171．5 文献标识码：A Neurotoxicity of Triphenyl Phosphate on the Early Life Stages of Zebrafish Peng Tao 1，Wang Sisi 1，Ｒen Lin 2，Ｒui Qianqian 2，Shao Luying 2，Sun Liwei 3，"，Fu Zhengwei 1 1．College of Biotechnology and Bioengineering ，Zhejiang University of Technology ，Hangzhou 310032，China 2．Ocean College ，Zhejiang University of Technology ，Hangzhou 310032，China 3．College of Environment ，Zhejiang University of Technology ，Hangzhou 310032，China Ｒeceived 6May 2015accepted 29May 2015 Abstract ：Triphenyl phosphate （TPP ）belongs to the family of organophosphate flame retardants （OPFＲs ）．Due to the phase-out of some brominated flame retardants ，the production and use of TPP has gradually increased as alter-natives．TPP is a frequently detected contaminant in the environment and wildlife ，and the effects of TPP on the de-veloping nervous system are of concern since OPFＲs are structurally similar to organophosphate pesticides．In this study ，the zebrafish were employed as experimental animal ，and the developmental toxicity of TPP （5 625%g ·L -1）on embryo and the behavioral toxicity on larvae were investigated．Moreover ，in order to explore the underlying mechanisms ，the activity of acetylcholinesterase （AChE ）enzyme and the transcriptional responses of nervous sys-
台湾地区斑马鱼研究现状
HEREDITAS (Beijing) 2012年9月, 34(9): 1089―1096 ISSN 0253-9772 https://www.wendangku.net/doc/356019832.html, 综 述 收稿日期: 2012?03?01; 修回日期: 2012?09?12 基金项目:马偕中原合作计划项目(编号：MMH-CY-9905; MMH-CY-10001; MMH-CY-10005)资助 作者简介:陈吉芳, 博士后, 研究方向：转基因斑马鱼。Tel: 886-32653546; E-mail: randeonneo@https://www.wendangku.net/doc/356019832.html, 通讯作者:萧崇德, 助理教授, 研究方向：建立斑马鱼疾病模式。E-mail: cdhsiao@https://www.wendangku.net/doc/356019832.html,.tw 网络出版时间: 2012-8-7 15:00 URL: https://www.wendangku.net/doc/356019832.html,/kcms/detail/11.1913.R.20120807.1500.003.html DOI: 10.3724/SP.J.1005.2012.01089 台湾地区斑马鱼研究现况 陈吉芳1, 陈持平2, 萧崇德1,3 1. 中原大学生物科技系, 中坜 32023; 2. 马偕纪念医院医学研究部, 淡水 25160; 3. 中原大学奈米科技中心, 中坜 32023 摘要: 台湾地区斑马鱼研究起始于1996年, 在经历了约8年的萌芽期(1996~2003年)之后, 目前已进入到茁壮 期(2004~现今), 现今全台湾共有83个实验室使用斑马鱼作为实验材料, 台湾地区斑马鱼研究社群的研究主题可大致分成3大类: (1) 胚胎发育; (2)人类疾病; (3) 生物技术。累积至今与斑马鱼相关论文发表总数已达到342篇。自2010年起, 台湾也成立了两个斑马鱼种质资源库(TZCAS 与ZeTH)。在种质资源库的充分协助下, 目前许多医院的临床医师、工程与生物信息相关领域的研究人员, 也开始加入斑马鱼研究社群进行跨领域的整合性研究, 成为现今台湾地区斑马鱼研究的一大特色。 关键词: 斑马鱼; 种质资源库; 台湾地区 Zebrafish research in Taiwan CHEN Chi-Fang 1, CHEN Chih-Ping 2, HSIAO Chung-Der 1,3 1. Department of Bioscience Technology , Chung Yuan Christian University , Chung-Li 32023, Taiwan, China ; 2. Department of Medical Research , Mackay Memorial Hospital , Tamsui 25160, Taiwan, China ; 3. Center of Nanotechnology , Chung Yuan Christian University , Chung-Li 32023, Taiwan, China Abstract: The initiation time for zebrafish research in Taiwan was around 1996 and experienced eight years (1996-2003) to establish the fundamental base. From 2004 onwards, zebrafish research project and population in Taiwan is exponentially increasing to a total number of 83 independent research laboratories at this moment. Three major research topics of devel-opmental biology, human disease, and biotechnology are conducted by zebrafish community in Taiwan. Up to now, 342 scientific refereed papers have been published by Taiwan researchers. By 2010, two zebrafish stock centers of TZCAS and ZeTH have been established to provide fish resources to zebrafish community. By the fully support of two zebrafish stock centers, attending physicians and experts in the fields of engineering and bioinformatics are working together with zebrafish people and obtained fruitful results in zebrafish researches in recent years. Keywords: zebrafish; stock center; Taiwan
生理学实验--斑马鱼视动反应讲义
斑马鱼视动眼动反应 实验目的： 观察视觉行为学的表现 掌握评判视觉功能的行为学手段 实验原理： 行为学虽是一门古老的学科，但至今仍是神经生理研究中不可或缺(indispensable)的一个活跃领域。经典行为学实验一般不依赖或很少需要精密的测量仪器，而是靠我们去观察和思考。眼动(optokinetic response, OKR)和视动(optomotor response, OMR)反应均是视觉刺激诱发的运动行为。脊椎动物从低等的鱼、蛙到高等的灵长类和人都有此行为反应。此现象无需学习训练就易诱导、较稳定、易观察，所以作为一种客观指标广泛运用于视觉功能的检测和评价。 脊椎动物为了获得对运动图像刺激在视网膜上稳定清晰的成像，通过视觉通路和相应的运动神经参与做出生理性行为的适应调整从而能够对视觉刺激做出良好反应，这些表现涉及视动、眼动或视动性头震颤(Optokinetic head nystagmus, OKHN)。如果行为学的表现不正常，可以推测它们的固有神经连接出现异常。斑马鱼具有脊椎动物类似的视觉通路，经典的视觉行为学有眼动反应和视动反应。 眼动(光动)反应：斑马鱼在光适应一段时间后会对移动的光栅进行注视，试图确保移动视觉图像能稳定地高分辨地呈现在视网膜上。如果光栅是在一个围绕幼鱼的圆筒上移动时(图1)，斑马鱼的眼睛就会一直追随光栅直到其眼睛不能再转动，然后有一个急速的眼颤动(ocular nystagmus)以回复到最初水平。之后又进行下一个追随反应，如此循环。周围视觉环境周期性运动时引起的有规律的眼或头追踪运动(慢相运动)即为眼动反应或视动性头震颤。五天龄(5dpf) 的幼鱼视觉系统就已非常成熟(viewed in Bilotta, 2001)，适合行为学检测。该行为学指标常用于筛选与视功能相关的不同遗传背景或操作的幼鱼。 视动反应：视动反应是指斑马鱼对移动的目标有一种追逐的行为。当将成年斑马鱼放在一个圆形光栅的内部时，斑马鱼对光栅的追随行为会表现为一种圆周性运动(图2)。 图1 眼动反应装置图2 成鱼视动反应装置