(PAS反应与联苯胺反应)

实验三PAS反应与联苯胺反应

一：实验目的：

掌握显示细胞中多糖和过氧化物酶反应的原理和方法。

二：实验原理：

1、高碘酸—希夫试剂反应简称PAS（Periodic Acid Schiff reaction）反应。组织内的多糖等都用PAS法来显示。其化学基础是利用过氧酸的氧化作用打开C—C键，将CH2OH—CH2OH变成CHO—CHO。同样，对CH2OH—CHO，CH2OH—COOH，CH2OH—CH2NH2等物质均有氧化作用而放出醛基，这种新生的醛基和无色品红作用形成紫红色化合物（见图1）。颜色的深浅与糖类的多少有关。

2、细胞内的过氧化物酶能把许多胺类化合物氧化为有色化合物（见图2），用联苯胺处理样本，细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为兰色的苯胺蓝，进而变为棕色产物，因而可以根据颜色反应来判断过氧化物酶的有无或多少。

三：实验材料与试剂

1.材料：土豆块茎、洋葱根尖或鳞茎表皮。

2.器具：显微镜、载波片、单面刀片、培养皿、镊子、染色钵、盖玻片、吸水纸。

3.试剂：

（1）过碘酸酒精溶液：

过碘酸（高碘酸）0.4g

95%酒精35ml

0.2 mol/L醋酸钠5ml （即17.2g醋酸钠溶于1000ml 蒸馏水）

蒸馏水10ml

该液需保存于冰箱，包黑纸，如变黄则失效。

（2）Shiff试剂（详见指导书P75页）

（3）0.1%钼酸铵溶液：称取0.1 g钼酸铵溶于100 ml 0.85%盐水

（4）联苯胺混合液（临用前配制）

联苯胺0.2g

95%乙醇100ml

3%H2022滴

（5）亚硫酸水溶液：取200ml自来水，加10ml10％的偏重亚硫酸钠水溶液和10ml1mol/L 的HCl，三者于使用前混匀。

（6）70％乙醇

四：实验的方法和步骤

1 PAS反应

（1）把马铃薯块茎徒手切成薄片，放入高碘酸溶液浸泡10min，用70%乙醇中浸片刻（2）将薄片浸入Schiff 试剂染色15分钟

（3）取出放入亚硫酸水中洗3次，每次1min

(4) 蒸馏水冲洗片刻，压片观察

2. 联苯胺反应

（1）把洋葱根尖徒手切成20-40 μm厚的薄片或用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块（2）浸在溶有0.1%钼酸铵的0.85%盐水溶液中5 min（钼酸铵起催化作用）

（3）浸在联苯胺溶液内2 min至切片出现蓝色

（4）在0.85%盐水溶液中洗1 min

（5）将薄片置于载玻片上展开，盖上盖玻片，显微镜检查

五：实验结果

1．PAS反应：块茎组织细胞内可见到紫红色或深红色的淀粉颗粒，对照片无色或色淡。2．联苯胺反应：切片中含过氧化物酶部位呈现蓝色或棕色。

六：作业：

绘图表示PAS反应与联苯胺反应的染色结果，并分析。

图1

图2