植物组织培养实验参考答案9
植物组织培养实验复习题
一、名词解释
1、大量元素:指含量占生物总重量万分之一以上的元素，包括C、H、O、N、P、S、K、C、Mg等。
2、微量元素:含量占生物总重量万分之一以下的元素。
3、植物生长调节剂:人工合成的对植物的生长发育有调节作用的化学物质。
4、外植体：把由活植物体上切取下来以进行培养的那部分组织或器官
5、细胞全能性：植物体的每个细胞都含有该植物全部的遗传信息。
6、基础培养基：根据植物营养原理和植物组织离体培养的要求而人工配置的营养基质。
7、愈伤组织:人工培养基上由外植体组织的增生细胞产生的一团不定形的疏松排列的薄壁细胞。
8、褐变:植物组织中多酚氧化酶被激活，使酚类物被氧化成醌类物，可抑制其他酶活性，毒害外植体。
9、茎尖脱毒:茎尖分生区的病毒传播速度很慢，利用茎尖组培获得无病毒苗，来达到脱毒的目的。
10、不定芽：凡从叶、根或芽节间或是离体培养的愈伤组织上等通常不形成芽的部位生出的芽。
11、污染率：污染数除以接种数，再乘以100%。
12、诱导率：愈伤数除以未污染数，再乘以100%。
13、成活率：成活数除以未污染数，再乘以100%。
14、接种：将表面消毒的外植体转接到无菌的培养基上的过程。
15、消毒：消灭材料上的病菌（不损伤植物材料）。
16、灭菌：利用物理或化学的方法，达到组织培养所学的无菌环境。
17、母液：欲配培养液的浓缩液。
18、无病毒苗：指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要危害病毒在植物内的存在表现为阴性反应的苗木。
19、植物组织培养：在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体，培养在无菌培养基上和人工控制的环境中，使其生长、分化、增殖，甚至长出新的植株的过程和技术。
20快速繁殖：采取培养基配制，材料灭菌，无菌培养，幼苗转移到苗床，成苗转至大田栽种五步走的繁殖培养方式
21、继代培养：继代培养是指愈伤组织在培养基上生长一段时间后，营养物枯竭，水分散失，并已经积累了一些代谢产物，此时需要将这些组织转移到新的培养基上的培养方式。
22、生根培养：将长到一定长度的微枝（>10mm）转移到生根培养基上培养。
23、玻璃化现象：试管苗的茎叶变成透明水渍状，生长畸形，增殖系数明显下降，难以诱导生根，即使诱导生根，其根系质量极差，移栽成活率极低。
24、暗培养：
25、液体培养：将所需培养物的悬浮液在液体培养基中培养的方法。
26、脱分化：一个成熟细胞回复到分生状态或胚性细胞状态的现象。
27、分化：由于细胞的分工而导致的细胞结构和功能的改变或发育方式改变的过程。
28、热处理脱毒：利用高温下使植物组织中的病毒部分钝化或完全失去活性的方法。
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29、微尖嫁接技术：把极小（<0.2mm）的茎尖作为接穗嫁接到实生砧木上（无菌种子培养获无菌
苗，种子实生苗不带毒），然后将嫁接的砧木接种到新的培养基上培养。
30、胚抢救：是指对由于营养或生理原因造成的难以播种成苗或在发育早期阶段就败育、退化的胚进行早期分离培养。
二、问答题
1、简述植物生长调节物质在组织培养中的作用？并列举常见的种类。
（1）伸长和分裂，促进生根、抑制器官脱落、性别控制、延长休)丁酸2,4IBA()吲哚眠、顶端优势、单性结实-3-IAA（吲哚乙酸）NAA(萘乙酸—D(2,4—二氯苯氧乙酸)、NOA(萘氧乙酸) (26—BA(6苄基腺嘌呤)、Kt
( 激动素)、Zt (玉M素)
2、植物组织培养主要应用在哪些方面？
①植物快速繁殖②脱除病毒③培育新品种④种质资源的保存⑤人工种子的研究⑥次生代谢产物的生产
3、MS培养基的主要成分包括哪些？
大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素
4、简述一般组织培养的操作工序。
培养器皿的清洗、培养基的配制、分装和高压灭菌；无菌操作——材料的表面灭菌和接种，培养；试管苗的驯化、移栽与初期管理
5、在我们实验室如何配制1L：MS+IAA 30g/L蔗糖+8g/L琼脂（pH 5.8）的培养基？
（1）配母液：MSI 20x MSII-MSV 200x 及IAA 贮备
（2）配培养基：1、取约750ml蒸馏水，琼脂8g煮沸溶解，加入30g蔗糖
2、取母液MSI 50ml，MSII-V 5ml，IAA于小烧杯，搅拌均匀
3、将2倒入1中，蒸馏水定容至1L ，调PH值(pH=5.8)
4、分装试管→封口→灭菌→存放。
6、简述高压灭菌锅对培养基进行灭菌的操作要点。
①首先将内层灭菌桶取出，在向外层锅加入与三脚架齐平的水。②放回灭菌桶，并装入灭菌物品。③加盖，并将盖上的排气软管插入内层桶的排气槽内，在以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，螺栓松紧一致，勿漏气。④打开电源加热，待压力上升到0.5MP时打开气阀，排净锅内冷空气后，待压力降到0MPA时关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压2 / 6
力而逐渐上升，当锅内压力上升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。⑤灭菌所需时间到后，切断电源，让锅内温度自然下降，当压力下降到零时，打开排气阀，旋松螺木栓，打开锅盖，取出物品7、规划一个植物组织培养室，绘制实验室的分区结构示意图，需要购置哪些必须仪器？
仪器：超净工作台、高压灭菌器、空调机、天平、显微镜、蒸馏水发生器、酸度计等8、如何对菊花茎段进行消毒？
流水冲洗10min→摘掉叶片，切成合适茎段装入消毒瓶→超净工作台处用75%酒精浸泡30S→无菌水漂洗1次→3min/次→封存备用。
9、如何对月季茎段进行消毒？
0.1%KMnO4(30min)→自来水冲洗→在超净工作台处用75%酒精浸泡30S→无菌水漂洗1次
（3min）→0.1%升汞浸泡10min后倒入回收瓶→无菌水冲洗3次，3min/次→封存备用。
10、以大蒜茎尖脱毒为例，简述无菌接种操作的流程和注意事项。
流程：①消毒接种工具并冷却②体视显微镜下剥茎尖③接种至DS培养基
注意事项：进无菌室之前，操作人员需着经灭菌的白色工作服，戴口罩。操作人员双手必顺进行灭菌。
11、以石斛播种为例，简述无菌接种操作的流程和注意事项。
答：操作流程：①超净工作台及工具的准备
②接种工具灭菌
③用注射器吸取0.2ml石斛种子悬浮液
④打开石斛种子培养基
⑤注射进培养基中上部
⑥封口
注意事项：①每次使用注射器之前，轻甩注射器，将其中酒精甩出，用完后，需放
入装有酒精的锥形瓶中。
②接种时试管最好不要倾斜，以免悬浮液流到试管壁上
③接种封口后，轻轻摇动试管，使悬浮液均匀的布满培养基表面。
12、以银杏胚培养为例，简述无菌接种操作的流程和注意事项。
答：操作流程：①超净工作台及工具的准备
②银杏种子消毒
③接种工具灭菌
④用接种刀从中间切开银杏种子，取出银杏胚
⑤打开培养基，用镊子夹取银杏胚，将其接到培养基上。
⑥封口
注意事项：①防止污染：接种全过程要求无菌操作。为减少污染，要求方法简3 / 6
单、
操作迅速。
②银杏胚接种时，切忌接种过深
③注意胚的形态学上端，不要接倒了。
13、继代培养有什么作用，以菊花为例，简述其继代培养的操作方法
答：作用：①改善培养环境②扩大繁殖系数③控制突变
操作方法：①超净工作台及工具的准备
②接种工具灭菌
③将菊花茎段从试管中取出，放于接种盘上
④用接种刀和镊子，将菊花茎段上的新鲜茎段切下
⑤打开继代培养基
⑥将切下的外植体快速的接入培养基上
⑦封口
14、简述离体培养污染的原因及防止措施。
原因：①外植体材料消毒不彻底②培养基灭菌不彻底③操作环境不洁净⑤操作不规范。
措施：①选择无菌或带菌少的植物材料②外植体、培养基、及仪器等严格消毒灭菌③无菌④规范操作室的消毒15、无菌操作时应注意哪些事项？
(1) 在接种4h前接种室灭菌；
(2) 在接种前15-20min，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯；
(3) 接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等；
(4) 上工作台后，用酒精棉球擦拭双手及工作台面；
(5) 接种工具蘸95%酒精，灼烧；
(6) 接种时将试管斜着，使试管口在酒精灯火焰上转动，灼烧数秒钟。接完种后，将管口在火焰上再灼烧数秒钟。
(7) 接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等；
(8) 接种完毕后要清理干净并用酒精擦工作台。
16、与常规苗相比，试管苗具有哪些特点？
(1) (2)光合作用差(3) (4)根的吸收功能弱(5)对逆境的
适应和抵抗能力差17、在植物组织培养中，通过哪些途径可以得到完整的植株？
(1)外植体→愈伤组织→根、芽→试管苗再长芽
(2)外植体→胚状体→试管苗
外植体→根、芽→试管苗(3)
18、组织培养中常用的灭菌方法？
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①高压蒸汽灭菌②过滤灭菌19、植物脱毒的主要方法有哪些？其主要原理是什么？
答：①热处理脱毒法，在一定范围内，用高于常温处理可钝化病毒活性并加速植物细胞分裂。②微茎尖培养脱毒法，病毒在植物内分布不均匀，越接近顶端分生组织，病毒浓度越稀③愈伤组织培养脱毒法，病毒在植物内分布不均匀，病毒在愈伤组织增殖中逐渐降低且在继代培养中产生抗性变异。④珠心组织培养脱毒法，病毒通过维管组织传播，而珠心组织和维管束系统无直接联系。
⑤微体嫁接离体培养脱毒法，微茎尖带毒机率小并嫁接在无菌的砧木上
20、简述植物脱毒的意义。
答：①产量提高
②品质提高
③抗病性增强
21、植物组织培养技术主要包括哪些环节？各环节的主要工作内容？
1、培养器皿的清洗
2、培养基的配制、分装和高压灭菌
3、无菌操作——材料的表面灭、试管苗的驯化、移栽和初期管理。、将培养物放到培养室培养5菌和接种422、在培养基中加入活性炭有什么作用？
1、主要是利用其吸附作用，减少一些有害物质的影响
2、使培养基变黑有利于某些植物生根
3、对形态发生和器官形成有良好的效应
23、在我们实验室如何配制1L：MS培养基工作液？
（1）10-100元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。
（2）②取适量的蒸馏水加入配制容器中③按需要量依次30g/L ⑤定容⑥调取母液及生长调节物质④加入蔗pH值⑦加琼脂(6-10g/L)完全融化后分装至培养瓶中封口⑧高压灭菌
24、简述培养基生长素/细胞分裂素比值高低对外植体生长的影响。
答：①低生长素/高细胞分裂素时，更易促进外植体长茎芽。
②生长素与细胞分裂素均衡时，促进外植体同时茎芽和根，或愈伤组织。
③高生长素/低细胞分裂素时，更易促进外植体产生根。
25、胚培养的作用有哪些？
1)在远缘杂交育种中的应用:克服杂种胚不能正常发育2)克服珠心胚的干扰,提高育种效率3)
理论研究中的应用测定休眠种子的萌发率5)缩短育种周期4)26、如何进行试管苗的驯化？
将长有完整试管苗的培养瓶由培养室转到伴遮荫的自然光下锻炼，并打开瓶盖注入少量自来水使幼苗逐渐降低温度，转向有菌，最后转向与预计栽培条件相似进行培养。
27、如何提高试管苗移栽的成活率？
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1、选择壮苗
2、加入植物生长调节物质
3、降低无机盐的浓度
4、加入少量活性炭5提供适当的环境条件6移栽过程中让试管苗从无菌向有菌逐渐过渡
28、目前鉴定脱毒苗的方法有哪些？各有何特点？
答：①视觉观察法：看植株的茎叶是否有该病毒所有的可见症状。病株较脱毒苗生长势减弱，有矮化或畸形等症状。
②生物鉴定法（指示植物法）：将一些对病毒反应敏感、病状特征显著地植物作为指示植物，利用病毒在其他植物上产生的枯斑作为鉴别病毒种类的方法。这种方法条件简单，操作方便，为一种经济而有效的鉴定方法。
③电子显微镜鉴定法：可以直接观察是否有病毒存在，了解病毒颗粒的大小、形状和结构，又可以鉴定病毒的种类。优点是方法先进，灵敏度高，能在植物粗提取液中定量测定病毒，但需要一定的设备和技术。
④抗血清鉴定法：用已知抗血清鉴定病毒的种类。这种方法特异性高，测定速度快，所以抗血清鉴定法成为植物病毒鉴定中最有用的方法之一。
⑤分光光度法：将已知浓度的病毒悬浮液，在260nm下测其光密度，并折算成消光密度，然后查找文献，测出全部核蛋白的浓度。这种方法可以定量病毒，但是需要一定的设备和技术。29、接种后离体培养物对光、温、湿等环境条件的要求？
(1) 光照：12-16h/d
80%—湿度：培养室内的湿度要求保持70%℃(2) 温度：一般25±2 (3) —10005000lx。的相对湿度
30、常用的培养基有哪些？说明其特点
①MS培养基，特点是无机盐离子浓度较高(2) white培养基，NH42SO4培养。(3)N6 KNO3
）4的花粉和花药培养。B5（酸硫胺素。适宜双子叶植物特别是木本植物的培
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植物组织培养实验基本步骤。。
植物组织培养实验基本步骤 一、母液的配置 1、MS大量元素母液的配制 将大量元素配制成10倍的母液，使用时再稀释10倍。按照配方表中用量依次分别称取扩大10倍的：NH4NO3 、KNO3 、KH2PO4 、 MgSO4·7H2O 、CaCl2·2H2O ，所有药品称取完毕后用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，最后定容至500ml，转入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 2、MS微量元素母液的配制 将微量元素配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别依次称取：MnSO4· 4H2O 、ZnSO4·7H2O 、 H3BO3 、KI 、CuSO4·5H2O 、CoCl2·6H2O ，用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，用容量瓶定容至500ml，转入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 3、MS铁盐母液配制 将铁盐配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别称取扩大100倍的：称
FeSO4·7H2O 和Na2·EDTA ，把FeSO4·7H2O和Na2·EDTA·2H2O分别置于200ml蒸馏水中，加热并不断搅拌使之溶解（磁力搅拌器，边加热，边搅拌）。保持加热，把FeSO4溶液慢慢倒入Na2·EDTA溶液中并不断搅拌，接近沸腾时停止加热，待溶液冷却后加蒸馏水到最终容积500ml，置于棕色细口瓶中，用力振荡1～2min，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名。在室温下避光保存一段时间令其充分反应后，再置于4℃冰箱中保存备用。 4、MS有机化合物母液的配制 将有机化合物配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别称取扩大100倍的：肌醇、维生素B1 、烟酸、甘氨酸、维生素B6 、蔗糖，用蒸馏水依次溶解并定容至500ml后，转入500ml 细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 二、植物激素的配置 常见激素：二氯苯氧乙酸（2，4－D）、萘乙酸（NAA）、吲哚乙酸（IAA）、吲哚－3－丁酸（IBA）、激动素（6-糠氨基嘌呤、 KT）、6－苄氨基嘌呤（6－BA）、赤霉素（GA3）、 1、生长素类： （1）、生长素类在组织培养中的主要作用是：诱导细胞的分裂和根的分化，诱导愈伤组织
选修专题植物组织培养技术时作业堂堂清
专题三植物的组织培养技术 一、选择题 1.用菊花的茎尖植物组织培养可培育出试管苗。下面关于这一过程的说法正确的是 () A.进行培养时，一次性加足营养物质以防止污染 B.整个培养过程应在光下进行，有利于长叶 C.要根据培养过程的实际情况，更换培养基 D.整个培养过程都应在密闭条件下进行，以免杂菌的污染 解析：进行植物组织培养时，外植体不能进行光合作用，因此培养基中要加入有机物。一般来说，从接种外植体到出现愈伤组织，需要经过2周时间。2周以后，由于培养基中的营养成分已接近耗尽，必须更换培养基，进行继代培养。20 d以后，可以根据愈伤组织的大小，决定是继续进行继代培养，还是进行试管苗培养。如果愈伤组织长到直径为1～1.5 cm时，即可以进行试管苗培养，否则还需要进行第二次继代培养。首次培养愈伤组织时，恒温箱的门应该关闭，不必见光，因为在无光条件下愈伤组织长得更快。在愈伤组织进行继代培养期间，可将恒温箱的门打开，让愈伤组织见光。愈伤组织见光后，颜色可以转为绿色，试管苗应该进行见光培养。 答案：C 2.下列关于花药离体培养过程的叙述中正确的是() A.花药培养成功与否与材料选择无关 B.花药培养成幼苗后，一定不能分瓶培养 C.花药培养成幼苗的过程中，除了适宜的温度、pH等，还要注意照光 D.一般地讲，材料选在单核期时花药培养成功率最高 解析：花粉植株能否培育成功受多种因素影响，其中材料的选择与培养基组成是主要影响因素；当培养获得愈伤组织或幼小植株时必须分瓶培养，才能诱导愈伤组织或幼苗分化；从花粉到幼苗阶段，由于无叶绿体，所以不需照光；对一般植物来讲，选择单核期往往成功率最高。 答案：D 3.关于花药培养产生花粉植株的途径，下列叙述错误的是() A.主要由培养基中激素的种类及用量决定途径 B.花粉经脱分化形成胚状体，再分化成丛芽，然后诱导生根 C.产生胚状体是花药离体培养中特有的途径 D.花粉先形成愈伤组织再诱导分化成植株
植物组织培养习题及答案
0．填空 1.根据培养的材料,植物组织培养分:愈伤组织培养、(器官培养、细胞格养、原生质体培养(悬浮培养 2.植物组织培养的发展分为三个阶段:萌芽阶段、奠基阶段，快速发展和快速发展和应用阶段 3，1902年,Haberlandt提出了植物细胞“全能性”学说,1934年, White出版了《植物组织培养手册》培养等类型从而使植物组织培养为一门新兴学科。 一．填空、 1，组织培养实验室必要的设备有超净工作台、高压灭菌器、调机、_天平、显微镜、_蒸馏水，发生器，酸度计 养基成分主要包括①无机营养成分、②有机营养成分)、_③植物生长调节物质、_④碳水化合物、⑤其它物质 3、培养基最常用的碳源是_蔗糖,使用浓度在1%-5%常用3% 4、糖在植物组织培养中是不可缺少的,它不但作为离体组织棱以生长的碳源而且还能维持培养基渗透压 5、在固体培养时琼脂是使用最方便、最好的凝固剂和支持物般用量6-10g/L之间 6.驯化的目的:在于于提高试管苗对外界环境条件的适应性,提高其光合作用的能力,促使试健壮,提高苗的移裁成活 7、生长素/细胞分裂素的高低决定着外植体的发育方向,其比值高:有利于根的形成和愈伤组织的形成:低:有利于芽的形成 8、培养基灭菌一般在108kPa的压力下,锅内温度达_121℃C,维持_20-30min、 9.选择外植体时应选择①选择优良的种质、②选健壮的植株、③选最适的时期和④选取适宜的大小。 10、诱导胚状体比诱导芽的优点:(1)数量多、(2)速度快、_(3)结构完整 11、试管苗的生态环境:高温且恒温、高湿、弱光、无菌 12、培养基中加入活性炭的目的:利用其吸附能力,减少一些有害物质的影响大 13、筛选培养基的方法:单因子试验法、多因子试验法、广谱实验法 14、植物培养技术:灭菌、接种种、培养、驯化四个环节 15、试管苗的驯化注意:基质、温、光、水、肥、气的综合管理 二．填空 1.绝大多数培养植物再生植株时都先经过愈伤组织阶段 2.愈伤伤组织形成大致经历诱导期、分裂期一和分化期三个时期 3、愈用植物生长调节物质时要注意:种类和浓度生长素和细胞分裂素的比值4.愈伤组织的形态发生方式主要有不定芽方式和胚状体方式 5.组织培养细胞再分化包括四个水平:细胞水平的再分化、组织水平的再分化、器官水平的再分化(器宣发生)和植株水平的分化 三．填空: 1.植物器官培养主要是指植物的根、茎、叶、花器和幼小果实的无菌培养。 2、茎尖培养根据培养目的和取材大小分为茎尖分生组织培养和普通茎尖培养两种类型。前者主要是对茎尖长度不超过,最小只有几十微米的茎尖进行培养,目的是获得无病毒植株:后者是对几毫米乃至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的培养,目的是离体快繁 3.不定芽产生的途径一是从外植体上直接产生二是从由外植体诱导产生的愈伤组织上产生 4.离体叶培养是指包括叶原基、叶栖、叶鞘、叶片、子吐等叶组织的无菌培养 5.在离体叶培养中,6-BA和KT利于芽的形成;24D利于愈伤组织的形成 四．填空 1、胚胎培养包括幼胚培养、成熟胚培养、胚乳培养、胚珠培养以及子房培养 2、离体胚的培养分为二种类型:。成熟胚培养和_幼胚培养六
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验报告 Modified by JACK on the afternoon of December 26, 2020
院(系、部) 化学与生物工程学院专业生物技术（师范）年级13级学号 姓名组别第二组课程名称植物细胞工程学实验日期 指导老师实验名称植物组织培养综合实验 一、实验目的 1.熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法 2.学习、掌握植物组织固体培养基的配制和灭菌方法； 3.掌握超净工作台上的接种方法与注意事项，了解接种室的灭菌方法； 4.了解组织培养的基本程序； 5.掌握接种的方法和材料的培养过程； 6.掌握无菌操作技术，包括外植体除菌和接种技术； 7.观察外植体的生长状况、染菌状况，剔除染菌外植体； 8.了解MS培养基和1/2MS培养基的区别 二、实验原理 1.植物细胞的全能性 一切植物都由细胞构成，细胞是构成植物体的基本结构与功能单位。 植物细胞含有全套遗传信息，具有形成完整植物的潜能。 2.植物细胞表现出全能性的条件 1.离体状态； 2.有一定的营养物质，激素和其他外界条件（无菌、温度、pH）； 3.选择性能优良、细胞全能性表达充分的基因型 3.无菌条件
把植物的组织、器官等，使其在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养基上繁殖。用于进行组织培养的组织、器官和细胞称为外植体。在组培中外植体都死带菌的，在接种前必须进行表面消毒，这时取得培养成功的最基本和重要的前体。组织培养的主要过程都是在无菌条件下进行的，所以所有的器材、植物体、接种室都应是无菌的。 4.脱分化与愈伤组织 已有特定结构与功能的植物组织，在一定条件下，其细胞被诱导改变原来的发育途径，逐步逆转其原有的分化形态，转变为具有分生能力的胚细胞的过程称为脱分化。脱分化所用的化学物质与MS培养基的区别是需要激素诱导。所以脱分化培养需在MS培养基上添加激素进行愈伤组织诱导。 5.培养基 植物组织培养常用的培养基为MS培养基。常用的凝固剂是琼脂,它的主要作用是使液体培养基凝固，琼脂本身并不提供任何营养，它只是一种高分予的碳水物从海藻中提取出来，仅溶解于热水，成为溶胶，冷却后(40℃以下)即凝固为固体状凝胶。琼脂的用量一般在4—10克／升之间。琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方式等有关外，还与高压灭菌时的温度、时间、pH值等因素有关，长时间的高温会使凝固能力下降，过酸过碱加之高温会使琼脂发生水解而丧失凝固能力，存放时间过久，琼脂变褐，也会逐失去凝固能力。MS培养基属于富盐平衡培养基，特点是：无机盐浓度较高，元素间的比例适当，离子平衡性好，具有较强的缓冲性，因而在培养的过程中可维持较好的稳定性；营养丰富，在一般培养中无须额外加
植物组织培养实验报告
如对你有帮助，请购买下载打赏，谢谢！ 院(系、部) 化学与生物工程学院专业生物技术（师范）年级13级学号姓名组别第二组课程名称植物细胞工程学实验日期2016.3-6 指导老师实验名称植物组织培养综合实验 一、实验目的 1.熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法 2.学习、掌握植物组织固体培养基的配制和灭菌方法； 3.掌握超净工作台上的接种方法与注意事项，了解接种室的灭菌方法； 4.了解组织培养的基本程序； 5.掌握接种的方法和材料的培养过程； 6.掌握无菌操作技术，包括外植体除菌和接种技术； 7.观察外植体的生长状况、染菌状况，剔除染菌外植体； 8.了解MS培养基和1/2MS培养基的区别 二、实验原理 1.植物细胞的全能性 一切植物都由细胞构成，细胞是构成植物体的基本结构与功能单位。植物细胞含有全套遗传信息，具有形成完整植物的潜能。 2.植物细胞表现出全能性的条件 1.离体状态； 2.有一定的营养物质，激素和其他外界条件（无菌、温度、pH）； 3.选择性能优良、细胞全能性表达充分的基因型 3.无菌条件 把植物的组织、器官等，使其在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养基上繁殖。用于进行组织培养的组织、器官和细胞称为外植体。在组培中外植体都死带菌的，在接种前必须进行表面消毒，这时取得培养成功的最基本和重要的前体。组织培养的主要过程都是在无菌条件下进行的，所以所有的器材、植物体、接种室都应是无菌的。 4.脱分化与愈伤组织 已有特定结构与功能的植物组织，在一定条件下，其细胞被诱导改变原来的发育途径，逐步逆转其原有的分化形态，转变为具有分生能力的胚细胞的过程称为脱分化。脱分化所用的化学物质与MS培养基的区别是需要激素诱导。所以脱分化培养需在MS培养基上添加激素进行愈伤组织诱导。 5.培养基 植物组织培养常用的培养基为MS培养基。常用的凝固剂是琼脂,它的主要作用是使液体培养基凝固，琼脂本身并不提供任何营养，它只是一种高分予的碳水物从海藻中提取出来，仅溶解于热水，成为溶胶，冷却后(40℃以下)即凝固为固体状凝胶。琼脂的用量一般在4—10克／升之间。琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方式等有关外，还与高压灭菌时的温度、时间、pH值等因素有关，长时间的高温会使凝固能力下降，过酸过碱加之高温会使琼脂发生水解而丧失凝固能力，存放时间过久，琼脂变褐，也会逐失去凝固能力。MS培养基属于富盐平衡培养基，特点是：无机盐浓度较高，元素间的比例适当，离子平衡性好，具有较强的缓冲性，因而在培养的过程中可维持较好的稳定性；营养丰富，在一般培养中无须额外加入复杂的有机成分；微量元素种类全，浓度高。这类培养基是目前使用最广泛的培养基。 6.生长调节物质 包括天然植物激素额人工激素类似物。植物激素是一类植物自身合成、同时对其生长发育具有重要调节作用的有机化合物。生长调节物质对于离题培养中的细胞分裂分
植物组织培养实验室 组培室 规划设计
植物组织培养实验室组培室规划设计 一、实验室要求理想的组织培养实验室应该建立在安静、清洁、远离污染 源的地方，最好在常年主风向的上风方向，尽量减少污染。规模化生产的组织 培养实验室最好建在交通方便的地方，便于培养产品的运送。实验室的建设均 需考虑两个方面的问题：一是所从事的实验的性质，即是生产性的还是研究性的，是基本层次的还是较高层次的；二是实验室的规模，规模主要取决于经费 和实验性质。无论实验室的性质和规模如何，实验室设置的基本原则是：科学、高效、经济和实用。一个组织培养实验室必须满足3个基本的需要：实验准备(培养基制备、器皿洗涤、培养基和培养器皿灭菌)、无菌操作和控制培养。此外，还可根据从事的实验要求来考虑辅助实验室及其各种附加设施，使实验室 更加完善。在进行植物组织培养工作之前，首先应对工作中需要哪些最基本的 设备条件有个全面的了解，以便因地制宜地利用现有房屋，或新建、改建实验室。实验室的大小取决于工作的目的和规模。以工厂化生产为目的，实验室规 模太小，则会限制生产，影响效率。在设计组织培养实验室时，应按组织培养 程序来没计，避免某些环节倒排，引起日后工作混乱。植物组织培养是在严格 无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件，需要一定的设备、器材和用具，同 时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。二、实验室组成(一)基本实 验室基本实验室包括准备室、洗涤灭菌室、无菌操作室、培养室、缓冲间，是 组织培养实验所必须具备的基本条件。如进行工厂化生产，年产4万-20万， 需3-4间实验用房，总面积60平方米。1、准备室(化学实验室)功能：又叫化 学实验室，进行一切与实验有关的准备工作：完成所使用的各种药品的贮备、 称量、溶解、器皿洗涤、培养基配制与分装、培养基和培养器皿的灭菌、培养 材料的预处理等。要求：最好有20平方米左右。要求宽敞明亮、以便于放置多个实验台和相关设备，方便多人同时工作；同时要求通风条件好，便于气体交换；实验室地面应便于清洁，并应进行防滑处理。分类：分体式-研究性质实验室，分开的若干房间将准备室分解为药品贮藏室、培养基配制与洗涤室和灭菌 室等，功能明确，便于管理，但不适于大规模生产。通间式-规模化实验室，准备室一般设计成大的通间，使试验操作的各个环节在同一房间内按程序完成。 准备试验的过程在同一空间进行，便于程序化操作与管理，试验中减少各环节 间的衔接时间，从而提高工作效率。此外还便于培养基配制、分装和灭菌的自
植物组织培养实验室(组培室)规划设计
植物组织培养实验室 (组培室规划设计 2009年 05月 31日星期日 10:18一、实验室要求 理想的组织培养实验室应该建立在安静、清洁、远离污染源的地方, 最好在常年主风向的上风方向, 尽量减少污染。规模化生产的组织培养实验室最好建在交通方便的地方, 便于培养产品的运送。 实验室的建设均需考虑两个方面的问题:一是所从事的实验的性质, 即是生产性的还是研究性的, 是基本层次的还是较高层次的; 二是实验室的规模, 规模主要取决于经费和实验性质。 无论实验室的性质和规模如何,实验室设置的基本原则是:科学、高效、经济和实用。一个组织培养实验室必须满足 3个基本的需要:实验准备 (培养基制备、器皿洗涤、培养基和培养器皿灭菌、无菌操作和控制培养。此外,还可根据从事的实验要求来考虑辅助实验室及其各种附加设施,使实验室更加完善。 在进行植物组织培养工作之前,首先应对工作中需要哪些最基本的设备条件有个全面的了解, 以便因地制宜地利用现有房屋, 或新建、改建实验室。实验室的大小取决于工作的目的和规模。以工厂化生产为目的,实验室规模太小,则会限制生产,影响效率。在设计组织培养实验室时, 应按组织培养程序来没计, 避免某些环节倒排, 引起日后工作混乱。植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件, 需要一定的设备、器材和用具, 同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。 二、实验室组成 (一基本实验室 基本实验室包括准备室、洗涤灭菌室、无菌操作室、培养室、缓冲间,是组织培养实验所必须具备的基本条件。如进行工厂化生产,年产 4万 -20万, 需 3-4间实验用房,总面积 60平方米。
植物组培自测题与参考答案(简)
第1章复习测试题 二、填空题 1．根据外植体的不同，一般可以将植物组织培养分为：植株培养、胚胎培养、器官培养、组织培养、细胞培养和原生质体培养。 2．在植物组织培养中，外植体脱分化后，再分化形成完整植株的途径有两条：一是器官发生途径，二是胚状体途径。 3．通过器官发生再生植株的方式有三种：第一种最普遍的方式是先分化芽，再分化根；第二种是先分化根，再分化芽，这种方式中芽的分化难度比较大；第三种是在愈伤组织块的不同部位上分化出根或芽，再通过维管组织的联系形成完整植株。 4．体细胞胚发生的途径可分为间接途径和直接途径。 5．植物组织培养的整个历史可以追溯到19世纪末和20世纪初。一个多世纪来，植物组织培养的发展大致可以分为探索、奠基和迅速发展三个阶段。 6．在Schleiden和Schwann所发展起来的细胞学说推动下，1902年德国植物生理学家G．Haberlandt提出了细胞全能性的设想，并成为用人工培养基对分离的植物细胞进行培养的第一人。 7．White、Gautheret和Nobecourt在1939年确立的植物组织培养的基本方法，成为以后各种植物组织培养的技术基础，他们三人被誉为植物组织培养的奠基人。 8．1958年英国人Steward等将胡萝卜髓细胞培养成为一个完整植株，首次通过实验证明了植物细胞的全能性，成为植物组织培养研究历史中的一个里程碑。 9．1960年Cocking等人用酶分离原生质体获得成功，开创了植物原生质体培养和体细胞杂交工作。同年Morel培养兰花的茎尖，获得了快速繁殖的脱毒兰花。其后，国际上相继把组织培养技术应用到兰花的快速繁殖上，建立了“兰花工业”。 10．花药培养在20世纪70年代得到了迅速发展，获得成功的物种数目不断增加，其中包括很多种重要的栽培物种。烟草、水稻和小麦等的花培育种在我国取得了一系列举世瞩目的成就。 三、是非题 （×）1．从理论上说，所有的植物细胞与组织材料都能培养成功，其培养的难易程度基本相同。 （√）2．愈伤组织是一种最常见的培养类型，因为除了茎尖分生组织培养和少数器官培养外，其它培养类型都要经历愈伤组织阶段才能产生再生植株。 （√）3．在组织培养中可采用愈伤组织诱变、花粉培养诱变等方法来进行植物育种等。 （×）4．单倍体育种已成为改良植物抗病、抗虫、抗草、抗逆性、品质等特性的新的重要手段。 （√）5．利用植物组织或细胞大规模培养，可以从中提取所需的天然有机物，如蛋白质、脂肪、糖类、药物、香料、生物碱、天然色素以及其它活性物质。 四、选择题 1．在A中培养物生长过程中排出的有害物质容易积累，由此造成自我毒害，所
植物组织培养实验参考答案9
植物组织培养实验复习题 一、名词解释 1、大量元素:指含量占生物总重量万分之一以上的元素，包括C、H、O、N、P、S、K、C、Mg等。 2、微量元素:含量占生物总重量万分之一以下的元素。 3、植物生长调节剂:人工合成的对植物的生长发育有调节作用的化学物质。 4、外植体：把由活植物体上切取下来以进行培养的那部分组织或器官 5、细胞全能性：植物体的每个细胞都含有该植物全部的遗传信息。 6、基础培养基：根据植物营养原理和植物组织离体培养的要求而人工配置的营养基质。 7、愈伤组织:人工培养基上由外植体组织的增生细胞产生的一团不定形的疏松排列的薄壁细胞。 8、褐变:植物组织中多酚氧化酶被激活，使酚类物被氧化成醌类物，可抑制其他酶活性，毒害外植体。 9、茎尖脱毒:茎尖分生区的病毒传播速度很慢，利用茎尖组培获得无病毒苗，来达到脱毒的目的。 10、不定芽：凡从叶、根或芽节间或是离体培养的愈伤组织上等通常不形成芽的部位生出的芽。 11、污染率：污染数除以接种数，再乘以100%。 12、诱导率：愈伤数除以未污染数，再乘以100%。 13、成活率：成活数除以未污染数，再乘以100%。 14、接种：将表面消毒的外植体转接到无菌的培养基上的过程。 15、消毒：消灭材料上的病菌（不损伤植物材料）。 16、灭菌：利用物理或化学的方法，达到组织培养所学的无菌环境。 17、母液：欲配培养液的浓缩液。 18、无病毒苗：指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要危害病毒在植物内的存在表现为阴性反应的苗木。 19、植物组织培养：在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体，培养在无菌培养基上和人工控制的环境中，使其生长、分化、增殖，甚至长出新的植株的过程和技术。 20快速繁殖：采取培养基配制，材料灭菌，无菌培养，幼苗转移到苗床，成苗转至大田栽种五步走的繁殖培养方式 21、继代培养：继代培养是指愈伤组织在培养基上生长一段时间后，营养物枯竭，水分散失，并已经积累了一些代谢产物，此时需要将这些组织转移到新的培养基上的培养方式。 22、生根培养：将长到一定长度的微枝（>10mm）转移到生根培养基上培养。 23、玻璃化现象：试管苗的茎叶变成透明水渍状，生长畸形，增殖系数明显下降，难以诱导生根，即使诱导生根，其根系质量极差，移栽成活率极低。 24、暗培养： 25、液体培养：将所需培养物的悬浮液在液体培养基中培养的方法。 26、脱分化：一个成熟细胞回复到分生状态或胚性细胞状态的现象。 27、分化：由于细胞的分工而导致的细胞结构和功能的改变或发育方式改变的过程。 28、热处理脱毒：利用高温下使植物组织中的病毒部分钝化或完全失去活性的方法。 1 / 6 29、微尖嫁接技术：把极小（<0.2mm）的茎尖作为接穗嫁接到实生砧木上（无菌种子培养获无菌
《植物组织培养》试题及答案教学教材
试卷编号NO： 高等函授教育《植物组织培养》试题 学号：姓名： 一名词解释：（10*2分=20分） 1、植物细胞组织培养 2、细胞全能性 3、脱分化 4、外植体 5、试管苗驯化 6、间接不定芽发生 7、双极性 8、微体嫁接 9、人工种子 10、体细胞无性系变异 二填空：（30*1分=30分） 1、目前植物组织培养应用最广泛的方面是 和。 2、由脱分化的细胞再分化出完整植株有两种途径，一种叫做，另一种叫做。 3、培养用具的常用灭菌方法有、、 。 4、某些生长调节物质及抗生素、酶类物质遇热不稳定，对其灭菌时不能进行，而要进行。 5、一般来说，黑暗条件下有利于的增殖，而往往需要一定的光照。 6、植物离体授粉技术通常包括、、 三个方面。 7、一般液体培养的继代时间较短，继代一次；而固体培
养继代时间可以长些，继代一次。 8、外植体器官发生的三种途径包括、、。 9、从再生植株倍性来看，小孢子培养通常产生植株，胚 培养通常产生植株，通常产生三倍体植株。 10、脱毒苗鉴定与检测的主要方法有、、 、。 11、在生长素中，对于许多作物花粉的启动、分裂、形成愈伤组织和胚状体起着决定性作用，但是对却有抑制作用。 12、用平板培养法培养单细胞或原生质体时，常用 来衡量细胞培养效果。 13、用药剂处理是诱导染色体加倍的传统方法。 三计算题（1*10分=10分） 某培养基的配方是MS＋BA 2.0mg/L＋NAA 0.5mg/L＋2.5%蔗糖＋0.7％琼脂粉。MS母液的浓度分别是：大量元素２０倍，微量元素500倍，铁盐100倍，有机物５０倍；BA母液浓度1.0 mg/ml ，NAA母液浓度0.1mg/ml。要配制400ml 该培养基，需要吸取各种母液各多少ml？分别称取蔗糖、琼脂粉各多少克？（要求写出计算步骤）四简答题（5*5分=25分） 1、造成组织培养过程中发生污染的原因有哪些？如何有效控制污染？ 2、简述外植体消毒的一般步骤。
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验报告 一实验目的 让植物组织经过脱分化作用，形成愈伤组织，经过再分化作用，愈伤组织又能重新分化为有结构的组织和器官，最终形成完整的植株。 二实验原理 植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。植物激素在此过程中起着重要的作用，吲哚乙酸（IAA ）和 6 –苄基氨基腺嘌呤（6 – BA ）的比例，决定了根和芽的分化。 三实验器材 （一）试剂 乙醇、IAA 或 2 ，4 – D 、HgCl 2 （或次氯酸钠）、6- 苄基氨基腺嘌呤（6-BA ） MS 培养基 （二）仪器设备 培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，三角烧瓶（100mL ），烧杯，量筒，培养皿，超净工作台，分析天平，长镊子，剪刀，橡皮筋等 三实验步骤 1. 配制培养基 （1 ）愈伤组织诱导培养基：MS 培养基（蔗糖含量为10 g/L ，2,4 – D 含量为 2 mg/L ，琼脂10 g/L ）。 （2 ）试验培养基：在MS 培养基中按表33 – 1 加入IAA 和6–BA 。 吲哚乙酸先用少量0.1 mol/L NaOH 溶解，6- 苄基氨基腺嘌呤先用少量0.1 mol/L HCl 溶解，然后用蒸馏水稀释，再加入培养基中。 2. 培养基灭菌 将配好的培养基加入琼脂加热溶解，调至pH 5.8 ，趁热分装于100 mL 三角烧瓶中，每瓶约20 mL 。待培养基冷却凝固后，用两层称量纸包扎瓶口，并用橡皮筋扎牢，然后在高压灭菌锅中121 ℃（ 1 kg/cm 2 ）下灭菌20 min 。取出三角烧瓶放在台子上，
高三生物一轮复习专题3植物组织培养技术课题2月季的花药培养课时作业新人教版选修1
课题2月季的花药培养 ［学业水平层次（A）］ 1. 被子植物花粉的发育阶段顺序正确的是（） A. 小孢子四分体时期T双核期T单核居中期T单核靠边期T花粉粒 B. 小孢子母细胞T单核靠边期T单核居中期T双核期T花粉粒 C. 小孢子母细胞T小孢子四分体时期T单核居中期T单核靠边期T双核期T花粉粒 D. 小孢子四分体时期T小孢子母细胞T双核期T单核期T花粉粒 【解析】小孢子母细胞经过减数分裂形成四个小孢子，称小孢子四分体时期，然后经 过单核居中期、单核靠边期、双核期到花粉粒。 【答案】C 2. （2015 ?临沂高二检测）下图中①②③④代表产生花粉植株的过程或中间结构，其中 在两种途径中代表的内容不相同的是（） A.①② B.①④ C.②③ D.③④ 【解析】由题图可知，①过程为脱分化过程，两途径是完全相同的，②为愈伤组织或 胚状体，是不同的。若②为胚状体，则③为分化；若②为愈伤组织，则③为再分化，因此③ 也是不同的。④均为丛芽，是相同的。 【答案】C 3. 选择花药时，一般要通过镜检来确定花粉的发育时期，下列说法正确的是（） A. 确定花粉发育时期最常用的方法是焙花青一铬矶法 B. 对某些植物的花粉细胞核不易着色时采用醋酸洋红法 C. 焙花青一铬矶法能将细胞核染成蓝黑色 D. 醋酸洋红法和焙花青一铬矶法染色过程完全一样 【解析】在选择花药时，镜检确定花粉的发育时期中，最常用的方法为醋酸洋红法； 对于某些植物的花粉细胞，因细胞核不易着色，可采用焙花青一一铬矶法；焙花青一一铬矶 法可将细胞核染成蓝黑色，醋酸洋红法与焙花青一一铬矶法染色过程不同，前者需将花药用 镊柄捣碎，后者在染色前需用卡诺氏固定液固定。 【答案】C 4?某名贵花卉用种子繁殖会发生性状分离，为了防止性状分离并快速繁殖，可以利用
植物组织培养试题及答案总结
《绪论》复习题及参考答案 一、填空： ★1、根据培养的材料，植物组织培养分：愈伤组织培养、器官培养、细胞培养、原生质体培养、悬浮培养等类型。 2、植物组织培养的发展分为三个阶段：萌芽阶段、奠基阶段和快速发展和应用阶段。 3、1902年，Haberlandt提出了植物细胞“全能性”学说，1934年，White出版了《植物组织培养手册》从而使植物组织 培养为一门新兴学科。 二、名词解释： ★1、植物组织培养(plant tissue culture)：是指通过无菌和人工控制的环境条件下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、组织、细胞及原生质体进行培养，使其再生细胞或完整植株的技术。由于培养材料已脱离了母体，又称为植物离体培养（Plant culture in vitro）。 2、脱分化（dedifferentiation）：由高度分化的植物器官、组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化。 3、再分化（redifferentiation）：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养又可以重新分化成根或芽等器官，这一过程称为植物细胞的再分化。 ★4、外植体(explant)：由活体（in vivo)植物体上切取下来的，用于组织培养的各种接种材料。包括各种器官、组织、细胞或原生质体等 ★5、愈伤组织(callus)：原指植物在受伤之后于伤口表面形成的一团薄壁细胞，在组培中则指在离体培养过程中形成的具有分生能力的一团不规则的薄壁细胞，多在植物体切面上产生。 三、问答题： 1、简述植物组织培养的理论依据？ 植物组织培养的理论依据是细胞全能性学说，即植物体的每一个细胞都携带有一套完整的基因组，并具有发育成为完整植株的潜在能力。 ★2、植物组织培养有哪些特点？ （1）培养条件可以人为控制 （2）生长周期短，繁殖率高： （3）管理方便，利于工厂化生产和自动化控制： ★3、植物组织培养的分类？ （1）根据培养对象不同：组织培养、器官培养、胚胎培养、细胞培养、原生质体培养等； （2）根据培养物培养过程：初代培养、继代培养； （3）根据培养基的物理状态：固体培养、液体培养。 ★4、植物组织培养主要应用于哪些方面？ （1）快速繁殖运用组织培养的途径，一个单株一年可以繁殖几万到几百万个植株； （2）种苗脱毒针对病毒对农作物造成的严重危害，通过组织培养可以有效地培育出大量的无病毒种苗； （3）培育和创制新品种利用组织培养可以使难度很大的远缘杂交取得成功，从而育成一些罕见的新物种； （4）大量生产次生代谢物质通过植物细胞培养获得的生物碱、维生素、色素、抗生素以及抗肿瘤药物不下50多个大类，其中已有30多种次生物质的含量在人工培养时已达到或超过亲本植物的水平。植物细胞次生物质的研制与生产硕果累累，后来居上。 （5）植物种质资源的离体保存植物组织培养结合超低温保存技术，可以给植物种质保存带来一次大的飞跃。因为保存一个细胞就相当于保存一粒种子，但所占的空间仅为原来的几万分之一，而且在-193度的液氮中可以长时间保存，不像种子那样需要年年更新或经常更新。 （6）人工种子人工种子便于贮藏和运输，适合机械化播种；繁殖速度快，不受季节和环境限制，利于工厂化生产；体细胞胚由无性繁殖体系产生，可以固定杂种优势。 第1章《实验室及基本操作》复习题及参考答案 一、填空： 1、组织培养实验室必要的设备有超净工作台、 等。 ★2、培养基成分主要包括①无机营养成分、 质。
植物组织培养实验报告
院(系、部) 化学与生物工程学院专业生物技术（师范）年级13级学号17130208 姓名组别第二组课程名称植物细胞工程学实验日期2016.3-6 指导老师实验名称植物组织培养综合实验 一、实验目的 1.熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法 2.学习、掌握植物组织固体培养基的配制和灭菌方法； 3.掌握超净工作台上的接种方法与注意事项，了解接种室的灭菌方法； 4.了解组织培养的基本程序； 5.掌握接种的方法和材料的培养过程； 6.掌握无菌操作技术，包括外植体除菌和接种技术； 7.观察外植体的生长状况、染菌状况，剔除染菌外植体； 8.了解MS培养基和1/2MS培养基的区别 二、实验原理 1.植物细胞的全能性 一切植物都由细胞构成，细胞是构成植物体的基本结构与功能单位。植物细胞含有全套遗传信息，具有形成完整植物的潜能。 2.植物细胞表现出全能性的条件 1.离体状态； 2.有一定的营养物质，激素和其他外界条件（无菌、温度、pH）； 3.选择性能优良、细胞全能性表达充分的基因型 3.无菌条件 把植物的组织、器官等，使其在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养基上繁殖。用于进行组织培养的组织、器官和细胞称为外植体。在组培中外植体都死带菌的，在接种前必须进行表面消毒，这时取得培养成功的最基本和重要的前体。组织培养的主要过程都是在无菌条件下进行的，所以所有的器材、植物体、接种室都应是无菌的。 4.脱分化与愈伤组织 已有特定结构与功能的植物组织，在一定条件下，其细胞被诱导改变原来的发育途径，逐步逆转其原有的分化形态，转变为具有分生能力的胚细胞的过程称为脱分化。脱分化所用的化学物质与MS培养基的区别是需要激素诱导。所以脱分化培养需在MS培养基上添加激素进行愈伤组织诱导。 5.培养基 植物组织培养常用的培养基为MS培养基。常用的凝固剂是琼脂,它的主要作用是使液体培养基凝固，琼脂本身并不提供任何营养，它只是一种高分予的碳水物从海藻中提取出来，仅溶解于热水，成为溶胶，冷却后(40℃以下)即凝固为固体状凝胶。琼脂的用量一般在4—10克／升之间。琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方式等有关外，还与高压灭菌时的温度、时间、pH值等因素有关，长时间的高温会使凝固能力下降，过酸过碱加之高温会使琼脂发生水解而丧失凝固能力，存放时间过久，琼脂变褐，也会逐失去凝固能力。MS培养基属于富盐平衡培养基，特点是：无机盐浓度较高，元素间的比例适当，离子平衡性好，具有较强的缓冲性，因而在培养的过程中可维持较好的稳定性；营养丰富，在一般培养中无须额外加入复杂的有机成分；微量元素种类全，浓度高。这类培养基是目前使用最广泛的培养基。 6.生长调节物质 包括天然植物激素额人工激素类似物。植物激素是一类植物自身合成、同时对其生长发育具有重要调节作用的有机化合物。生长调节物质对于离题培养中的细胞分裂分化、器官形成和个体再生等均起着重要而明显的调节作用。一般来说，基本培养基只能保证培养物的生存，维持其最低的生理活动，而只有植物激素的配合使用，才能完成离体培养物中按照需要设计的各个调节环节。常用的植物组培激素种类主要有生长素类、细胞分裂素类、赤霉素。
苏教版选修一植物组织培养技术作业
第一章第三节 课时作业 一、选择题 1.下列有关植物细胞与组织培养的叙述中，错误的是（） A .花药、胚不能作为组织培养的材料 B .植物细胞具有全能性 C.外植体指用于离体培养的植物组织片段或器官 D ?外植体可诱导出愈伤组织 解析：在进行植物组织培养的过程中，从供体植株上取下来用于培养的细胞、组织和 器官都叫做外植体。外植体可用于繁殖植株个体；花药、胚细胞也具有全能性，在特定条件下也可发育为完整的植株个体。 答案： A 2?马铃薯利用它的块茎进行无性繁殖，种植的世代多了以后往往会因感染病毒而减产， 为此农户都希望得到无病毒的幼苗进行种植。获得无病毒植株的最佳方法是（） A .选择优良品种进行杂交 B .进行远源植物体细胞杂交 C.利用茎尖细胞进行组织培养 D ?人工诱导基因突变 解析：马铃薯被植物病毒侵染后引起品质下降，可利用植物组织培养技术进行脱毒。 具体做法是选取含病毒最少或无病毒的植物细胞（如茎尖或根尖）进行组织培养，可获得无病毒植株。 答案： C 3?某组织培养实验室的愈伤组织被真菌严重污染，为查找污染原因设计了四个实验，实 验条件除图示外其他均相同。下列各图表示实验结果，据图不能得出的初步结论是（） A .污染主要不是培养基灭菌时间短造成的 培养苴灭菌吋间/min 外植体消毒时间Anin ]00r1001- 20 2224 262830 32 34 36 -1 -
B ?污染不可能来源于组织培养所用的离体组织 C.调节培养基pH 不能解决污染问题 D ?调节培养温度不能解决污染问题 解析： 本题主要考查图文转换能力， A 、C 、D 图解所示的信息是随培养基灭菌时间、 培养基pH 和培养温度的增加，污染率在 90%上下波动，说明污染源不是这三方面的原因；而 B 图解中随离体组织消毒时间的增加污染率急剧下降， 因而，该曲线表明组织培养所用的离体 组织是污染的主要因素。 答案： B 4 ?下列关于植物组织培养中的灭菌和消毒操作，错误的是 （ ） A ?外植体可以用酒精消毒 C.操作前手需用70%酒精消毒 答案： B 5.下列实例中能体现细胞全能性的是 ①用悬浮液培养胡萝卜单个细胞可形成可育的植株 组织培养的单个细胞形成可育的完整植株 A .①② B ? C.②③ D ? 解析： 细胞的全能性是指已分化的细胞仍然具有发育成完整个体的潜能。体现细胞全 能性的是由 细胞T 生物体的实例。其中①和③都是属于由分化的细胞经过培养形成可育的植 株的实例，体现了细胞的全能性。植物用种子繁殖后代，实际上就是由一个受精卵，通过细 胞的增殖和分化发育成新个体，这是由未经分化的细胞 （受精卵）发育成新个体的过程，因此不 能体现细胞的全能性。 答案： B 6 .下列关于植物组织培养中植物激素使用的说法，不正确的是 （ ） A ?植物组织培养中的关键性激素是生长素和细胞分裂素 B .先使用生长素，后使用细胞分裂素，有利于细胞分裂和分化 C.先使用细胞分裂素，后使用生长素，细胞既分裂也分化 D ?同时使用生长素和细胞分裂素时，两者用量的比例影响植物细胞的发育方向 解析： 考查植物激素对植物组织培养的影响。先用生长素，后用细胞分裂素，有利于 细胞分裂，但细胞不分化。 答案： B 7 .下列说法中错误的是（ ） A ?植物细胞进行组织培养时需要无机养料 B ?镊子等器械只需用酒精消毒 D .培养基需用高压蒸汽灭菌 （ ） ②植物用种子繁殖后代 ③用烟草 ①③ ①②③
植物组织培养试验
《植物组织培养技术》实验指导 实验一组培室设备参观及器皿的洗涤和灭菌 一、目的要求： 1．通过参观，了解组织培养室的几个主要组成部分和各部分应有的基本设备以及有关仪器的用途与功能。 2．通过实际操作，学会洗涤剂的配制和各种器皿的清洗和灭菌方法。 二、材料用具： 高压灭菌锅、烘箱、超净工作台、双筒解剖镜、酸度测定仪、空调机、控温仪、百分之一与万分之一天平、电炉、玻璃器皿（试管、三角瓶、移液管、漏斗、烧杯、容量瓶、试剂瓶、量筒酒精灯），以及镊子、解剖刀、解剖针、手术剪，肥皂、洗衣粉、重铬酸钾、浓硫酸等。三、说明： 在进行各类具体的组培实验前，首先了解组培室的结构及主要设备的用途和性能是十分必要的，总体上的了解有利于以后各实验的进行以及正确的使用各种仪器和设备。 植物组织培养是一项十分细致的工作，为了保证植物外植体不受污染，第一关就是要对各种器皿进行清洗和消毒，使它们保持无菌状态，
做这些工作同样有一套科学的方法和需要熟练的技巧，因此每个学生必须学好这套基本功。 四、方法和步骤： 首先在老师带领下参观组培室，并听取讲解，然后配制洗液，称取工业用重铬酸钾40克，溶解在500ml在水中，然后徐徐加入450ml 粗制浓硫酸（或废硫酸）配好的溶液呈红色，铬酸洗液是一种强氧化剂，去污能力强，但玻璃器皿上沾有油脂、凡士林、石蜡等则用此液无效，铬酸洗液可反复使用，直到溶液呈青褐色为止。此溶液腐蚀性强，洗涤时需注意。 每人清洗部分玻璃器皿，方法：清水洗净→泡入洗衣粉水溶液中进行洗刷→清水反复冲洗→蒸馏水淋一遍→烘干备用。 然后清洗部分较脏的玻璃器皿，方法：采用先碱后酸，即用洗衣粉洗刷后冲洗干净→晾干→侵入酪酸洗液，浸泡时间视器皿的肮脏程度而定→清水反复冲洗干净→蒸馏水淋洗一遍→烘干备用。 带有石蜡或胶布的器皿：先将其除去，再用常规洗涤，石蜡用水煮沸数次即可去掉，胶布粘着物则需用洗衣粉液煮沸数小时，再用水冲洗，凉干后浸入洗液，以后的步骤同前。 对器皿和用具进行高压灭菌，即用手提式高压灭菌锅，在1.1个大气压下保持15~20分钟。解剖刀、手术剪、解剖针、镊子等用具在接
人教版 选修一 植物的组织培养技术 作业
人教版选修一植物的组织培养技术一、选择题(每小题2分,共40分。在每小题给出的四个选项中,只有一项是符合题目要求的) 1以下实验不能说明细胞具有全能性的是( ) A.胡萝卜韧皮部细胞培育成植株 B.紫色糯性玉米种子培育成植株 C.转入抗虫基因的棉花细胞培育成植株 D.利用马铃薯的茎尖培育无病毒植株 答案:B 2在植物组织培养过程中,先使用细胞分裂素,后使用生长素,实验结果是( ) A.有利于细胞分裂,但细胞不分化 B.细胞既分裂也分化 C.分化频率提高 D.有利于分化,但不分裂 答案:B 3细胞分化是生物界普遍存在的一种生命现象,下列叙述错误的是( ) A.分化发生在生物体的整个生命进程中 B.分化是基因在特定时间和空间条件下选择性表达的结果 C.未离体的体细胞不会表现出全能性 D.分化过程中遗传物质发生了改变 解析:分化是基因的选择性表达,发生在整个生命进程中;分化过程中遗传物质没有发生改变;而细胞全能性的表现必须在离体条件下进行。 答案:D 4下列有关植物细胞与组织培养的叙述,错误的是( ) A.花药、胚不能作为组织培养的材料 B.大多植物细胞具有全能性 C.外植体是指用于培养的植物组织或器官 D.外植体可诱导出愈伤组织 解析:花药和胚均可作为外植体用于植物组织培养。但不同的是由胚培育而成的植物体含有本物种正常数目的染色体,而由花药培育而成的植物体为单倍体。其原因是花药离体培养的实质是花粉粒经过有丝分裂,直接发育成植物体。 答案:A 5下列对产生花粉植株的途径的叙述,错误的是( ) A.花粉可通过胚状体阶段发育成植株 B.花粉可先形成愈伤组织再诱导分化成植株 C.通过花粉培养产生花粉植株的途径主要取决于培养基中激素的种类及其浓度配比 D.花粉经脱分化形成胚状体,再分化出根,然后诱导生芽 解析:产生花粉植株有两种途径:一是花粉通过胚状体阶段发育成植株;二是花粉在诱导培养基上
最新 人教版 选修1 植物的组织培养技术 作业
2019-2020学年人教版选修1 植物的组织培养技术作业一、选择题(本题包括15小题，每小题3分，共45分) 1．下列不能用于植物组织培养材料消毒的化学试剂是( ) A．酒精B．次氯酸钙溶液 C．氯化钙溶液D．氯化汞溶液 答案 C 解析体积分数为70%的酒精、质量分数为0.1%的氯化汞溶液可用于外植体的消毒。在花药培养时，还可用质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液消毒花蕾。氯化钙溶液不能用作消毒剂。 2．如图为菊花的组织培养流程图。据图分析，下列说法正确的是( ) A．配制好的培养基在灭菌后要及时分装避免冷却凝固 B．图中①②③三种培养基的差异主要表现在植物激素含量方面 C．整个培养过程中需要适宜的温度和不间断的光照 D．长出丛芽和生根的过程中细胞的遗传物质会发生改变 答案 B 解析配制好的培养基应该先分装后灭菌，A错误；菊花的组织培养过程中需要每日用日光灯照射12 h，不需要提供持续的光照，C错误；长出丛芽和生根的过程是再分化的过程，是基因选择性表达的结果，该过程中细胞的遗传物质不发生改变，D错误。 3．(2019·河北张家口月考)在菊花的组织培养操作完成3～4 d 后，观察同一温室中的外植体，发现有的瓶内外植体正常生长，有的瓶内外植体死亡，你认为外植体死亡的原因最不可能是( ) A．培养条件，比如光照、温度等不适宜 B．接种时外植体未消毒
C ．接种工具灼烧后未充分冷却就接种外植体 D ．将外植体倒插入培养基中 答案 A 解析 一般来说，进行植物组织培养时，同一温室中的培养条件，如光照、温度应是相同的，若培养条件，比如光照、温度等不适宜，则所有的外植体应该全部死亡，A 符合题意；接种时外植体未消毒，杂菌危害培养物的生长，会导致外植体死亡，B 不符合题意；接种工具灼烧后未充分冷却就接种外植体，高温条件下外植体会死亡，C 不符合题意；将外植体倒插入培养基中，会导致外植体死亡，D 不符合题意。 4．(2018·广东深圳外国语中学高二下学期期中)下列有关月季花药离体培养产生花粉植株的叙述，不正确的是( ) A ．花药中的花粉经脱分化产生胚状体还是愈伤组织，主要取决于培养基中激素的种类及其浓度配比 B ．一般来说，选用单核期的花粉可提高花药培养的成功率 C ．常用醋酸洋红法来判断花粉是否处于合适的发育期 D ．胚状体和愈伤组织都具有胚芽、胚轴和胚根等结构 答案 D 解析 愈伤组织是花药或者离体组织经过脱分化后分裂形成的高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞，没有具体结构，而胚状体有胚根、胚芽和胚轴等结构，D 错误。 5．(2018·浙江杭州学军中学高二下学期第一次月考)下列关于花药接种和培养的实验操作的叙述，正确的是( ) A ．每瓶接种花药7～10个，培养温度控制在25 ℃左右，并给予光照 B ．花药培养至开裂后，将长出的愈伤组织及时转移到分化培养基上 C ．花药培养至开裂后，将释放出的胚状体整体移到新的培养基上继续培养 D ．在花药培养中，对培养出来的植株可以直接移栽 答案 B 解析 接种花药时，通常每瓶接种花药7～10个，培养温度控制在25 ℃左右，不需要光照，幼小植株形成后才需要光照，A 错误；花药培养至开裂后，将长出的愈伤组织及时转移到分化培养基上培养，以便进一步分化出再生植株，B 正确；花药培养至开裂后，如果释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培养基上，否则这些植株将很难分开，C 错误；在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，易发生染色体组的数目变化，所以对培养出来的植株要作进一步鉴定和筛选，D 错误。 6．(2018·江苏南通月考)如图为植物组织培养的流程图解，以下相关叙述不正确的是( ) 植物叶片――→a 叶组织块――→b 愈伤组织――→c 有生根发芽能力的胚状体结构――→d