细胞工程复习
细胞工程复习
细胞工程基础
1、细胞工程：是指以生物细胞或组织为研究对象，按照人们的意愿进行工程学操作，从
而改变生物性状，以获得生物产品，为人类生产和生活服务的科学。
2、细胞工程的研究内容可分为七大类：
1）器官、组织和细胞培养
2）原生质体培养
3）植物胚胎培养
4）动物胚胎培养
5）转基因动植物
6）胚胎干细胞
7）染色体工程
3、实验室组成
1）动物细胞工程实验室组成：无菌操作室、培养室、细胞学鉴定室、制备室、储藏室、清洗灭菌室
2）植物细胞工程实验室组成：无菌操作室、制备室、清洗灭菌室以及具备光照条件的培养室和试管苗移栽所需的温室
4、玻璃器皿清洗注意事项
1）浸泡：用水浸泡——①初次使用：经稀盐酸（5%）浸泡；②用过的：用后立即用清水浸泡。
2）刷洗：宜选用软毛刷和优质的洗涤剂。器皿数量大时，可使用超声波清洗器清洗，冲洗干净
3）酸洗：刷洗不掉的微量杂质经过清洗液的强氧化作用可被除掉。常用的清洗液：浓硫酸、重铬酸钾及蒸馏水配制而成。具有高度腐蚀性，酸缓慢放入水中。
4）冲洗：用水充分冲洗，不留任何残迹，然后用蒸馏水漂洗数次，烘箱内烘干备用。
5、物理灭菌方法
1）湿热灭菌
2）过滤除菌
3）干热灭菌
4）紫外线灭菌
6、化学灭菌方法：1）熏蒸消毒；2）药剂喷雾消毒
7、无菌操作室消毒
8、培养基的成分（植物）：
9、培养基的成分（动物）：
10、生物安全：是指对由动物、植物和微生物等生物体给人类健康和自然环境可能造成
的不安全的防范，主要是针对病原微生物或具有潜在危害的重组DNA等生物危险的防范。
11、生物安全实验室分为四级：
植物细胞工程
12、植物细胞全能性的含义：
1）每个植物细胞都具有它母体的全部遗传特性
2）每一个细胞都可以在特定条件下发育成为母体一样的植株。
13、植物细胞具有全能性的原因
14、一个已分化的细胞要实现其全能性一般要经历两个过程：一是脱分化，二再分化
15、实现细胞全能性的条件：①具有较强全能性的细胞从植物组织抑制性影响下解脱出来，使其处于独立发育的离体条件下；②赋予离体细胞一定刺激，包括营养物质、植物激素、光周期、温度，酸碱度
16、细胞分化：是指由发育起始状态的合子沿个体发育方向不断分化形态结构、生理功能不同的细胞、组织、器官而最终形成完整植株的过程，即由于细胞的分工而导致其结构和功能改变或发育方式改变的过程。
17、分化细胞差异与功能相适应，其含义为：
18、在一个分化的成熟细胞中，通常仅5%~10%的基因处于活化状态。
19、脱分化（去分化）
20、高等植物细胞脱分化和再分化示意图
21、植物愈伤组织
22、分类
23、长期培养物形态发生潜力的丧失（三种学说）
1）生理学说
2）遗传学说
3）竞争学说
24、外植体的极性：通常是指在器官、组织甚至细胞中，在不同的轴向上存在某种形态结构和生理生化上的梯度差异。
25、植物激素对愈伤组织培养的调控作用：
（1）生长素
（2）细胞分裂素
（3）脱落酸
（4）乙烯
26、器官发生：是指植物根、茎、叶、花、果实等器官的分化与形成。
器官发生的三种方式：第一种是先形成芽，然后在芽形成的茎基部长根而形成小植株：
第二种是先根后芽
第三种是在愈伤组织的不同部位分别形成芽和根，然后两者结合
起来形成一株植物，这种情况在很多植物中均发生。
27、体细胞胚（SE）或胚状体的含义：①体细胞胚是离体培养的产物，只限于离体培养范围使用，以区别体于无融合生殖胚；②体细胞胚起源于非合子细胞，区别于由受精卵发育而成的合子胚；③体细胞经过了胚胎发育过程，具有胚根、胚芽和胚轴的完整结构，并与原外植体的微管组织无联系，是个相对独立的个体，区别于组织培养中以器官发生方式分化的不定芽和不定根。
与器官发生相比，体细胞胚胎发生在组织学上具有明显的特点：
第一、体细胞胚最根本的特征为两极性
第二、体细胞胚的微管组织分布是独立的“Y”字形结构，与外植体组织无结构上的联系，出现所谓的生殖隔离现象，这种结构便于细胞的分化和全能性的分化第三、由体细胞胚形成的再生植株其遗传性相对稳定，差异性远小于由器官发生途径形成的再生植株
28、影响体细胞胚胎发生的因素
1、氮源
2、生长素
3、组织起源
29、P56人工种子示意图
30、控制胚性细胞同步化的方法
1、抑制剂法促进细胞同步分裂
2、低温处理促进细胞同步分裂
3、渗透压控制同步化法
4、同步胚的分段收集筛选法
5、通气法
动物细胞培养技术
1、动物细胞培养是用无菌操作的方法将动物细胞体内的组织或器官取出，模拟动物体内的
生理条件，在体外进行培养，并观察细胞的生长、发育及衰老等生命现象的技术
2、生物学特征的两重性
1、基本生物学特征与体内细胞相似
2、差异性
3、细胞分化;在个体发育中，细胞后代在形态结构和功能上发生稳定性差异过程。
4、去分化（也叫脱分化）：是指各种分化细胞，逐渐失去各自的形态与功能个性，表现出某种趋同性的过程。
5、体外培养细胞的形态
1、贴附型细胞:在体外培养时能贴附于支持物表面生长，大致分为
1）成纤维细胞型：
2）上皮细胞型：
3）游离细胞型：
4）多型细胞型：
2、悬浮型细胞：
6、接触抑制和密度抑制
接触抑制：细胞相互接触后，如果培养的是正常细胞，由于细胞的相互接触能抑制细胞的运动，这种现象称接触抑制。（接触抑制可作为区别正常细胞与癌细胞标志之一）密度抑制：细胞接触汇合成片后，随发生接触抑制，但只要营养充分，细胞仍然能够进行增殖分裂，因此细胞数目仍在增多。但当细胞密度进一步增大，培养液中的营养成分减少，代谢产物增多时，细胞因营养的枯竭和代谢物的影响，则发生密度抑制，导致细胞分裂停止。
7、传代：当细胞增殖到一定密度时，则需要分离出一部分细胞并更新营养液，否则将会影响细胞的继续生存。
8、培养细胞生命期：是指细胞在体外培养条件下持续增殖和生长的时间。
9、细胞系的生长过程（P230）
10、细胞系：初代培养细胞一经传代后便改称细胞系。
细胞株：细胞系经过克隆或用其他方法而得到的由单一类型的细胞群体建立的亚系。
无限细胞系：细胞获得持久性增殖的能力的细胞群体。
11、细胞“一代“：是指从细胞接种到分离再培养时的一段时间。
细胞生长曲线（P231）
12、细胞培养的一般过程
传代培养传代时要特别注意：①细胞没有生长到足以覆盖瓶底壁的大部分表面以前，不要急于传代；②原代培养时细胞多为混杂生长，上皮样细胞和成纤维细胞并存的情况很多见，传代时不同细胞有不同的消化时间，因而要根据需要注意观察并及时进行处理；③首次传代时细胞接种数量要多一些，使细胞能尽快适应新环境而利于细胞生存和增殖。
冻存细胞的复苏的原则：冻存细胞较脆弱，要轻柔操作，融化要快速，解冻后直接加入完全生长培养基。
13、细胞克隆培养：又称单细胞分离培养，即把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使之重新繁衍成为一个新的细胞群体的培养技术。
克隆形成率或克隆率：细胞群中单个细胞形成克隆的百分数
14、单细胞分离培养技术分三种，其中饲养层克隆法
15、动物细胞大规模培养方法与微生物细胞相比，有显著差别：
①动物细胞比微生物细胞大得多，无细胞壁，耐机械强度低，对剪切力敏感，适应环境
能力差；
②倍增时间长，生长缓慢，易受微生物污染，培养时须用抗生素；
③培养过程需氧量少；
④培养过程中细胞相互粘连以集群形式存在；
⑤原代培养细胞一般繁殖50代即退化死亡；
⑥代谢产物具有生物活性，生产成本高，但附加值也高。
方法：1、转瓶培养
2、反应器贴壁培养
3、悬浮培养
4、固定化培养：
固定化培养方法：
（1）微载体培养系统
（2）中空纤维培养系统
（3）微囊培养系统
优点：①可防止细胞在培养过程中受到物理损伤；②活性蛋白不能从囊中自
由出入半透膜，从而提高细胞密度和产物含量，并方便分离纯化处理
缺点：①微囊制作复杂，成功率不高；②微囊内死亡的细胞会污染正常产物；
③收集产物必须破壁，不能实现生产连续化。
16、细胞分裂指数：体外培养细胞的生长、分裂增殖能力，可用分裂指数来表示。分裂指数是指细胞群体中分裂细胞所占的百分比，即细胞群的分裂相数/1000个细胞。
17、细胞同步化：是指研究细胞周期的不同阶段的生化特征，必须获得与细胞周期一致性的细胞。
18、细胞融合：是指两个会两个以上来源相同或不同的细胞合并成一个细胞的过程。
19、杂种细胞：是指当异核体同步进入有丝分裂后，细胞核的核膜崩解，而且不同来源的核染色体汇合，使得融合细胞内只含有一个源自不同基因组的细胞核。由于这个细胞核是由不同亲本的细胞核融合形成，因此，这个细胞即称为杂种细胞。
20、人工诱导细胞融合方法
1）病毒诱导融合
2）化学方法诱导融合
3）电诱导融合
21、细胞融合的关键步骤是两亲本细胞的质膜发生融合，形成同一的质膜（细胞膜）。
22、杂交细胞的筛选：①非选择性筛选；②选择性筛选
非选择性筛选：根据杂交细胞的表型特征和物理特性的差异，用机械方法筛选杂交细胞的方法。包括:①利用细胞形态、大小、密度与颜色标记上的差异，可以识别和筛选杂交细胞；②通过离心方法可以筛选不同密度的杂交细胞；③利用杂种细胞在显微镜下可辨别的特性，可用显微操作技术进行分选；④在不同亲本细胞上加不同的荧光标记后细胞融合产生双亲标记，然后利用荧光激活分选技术对杂种细胞进行筛选。
选择性筛选：通过改变培养基成分或添加药物对杂种细胞进行筛选的方式。（原理P265）
1）利用基因缺陷互补的筛选
2）利用抗性标记筛选
3）利用营养缺陷的筛选
4）利用温度敏感突变特性的筛选
23、克隆化培养：是指使单个杂交细胞在一个独立空间中生长增殖，最终扩增为一群相对较纯的，且能够稳定表达某些特定性状的细胞群体的培养方式。
24、杂交瘤：是指肿瘤细胞与正常细胞的融合。专指淋巴细胞杂交瘤，获得目的：用来生产单克隆抗体。具体方法
25、抗原逃逸变种：虽然单一的肿瘤抗原也可诱导体内产生抗肿瘤的免疫细胞，但是若肿瘤组织不再表达该抗原时，就会逃逸免疫细胞的杀伤，使肿瘤复发。
26、细胞融合在基础理论方面的应用
1）基因定位：是指某一特定基因在染色体上的位置被确定的过程。
原理：
27、杂交瘤技术的基本原理：是将骨髓瘤细胞与淋巴细胞进行融合，获得杂交瘤细胞。杂交瘤细胞既具有B淋巴细胞分泌特异性抗体的功能，又具有骨髓瘤细胞能够在体外长期快速生长的特性。
28、单克隆抗体（McAb）的特性
1、高度特异性
2、高度稳定性
3、高抗体活性
4、不可知性
29、基因工程抗体：是将抗体的基因重组并克隆到表达载体中，在适当的宿主中表达并折叠成有功能的一种抗体分子的技术。
30、建立T细胞杂交瘤的方法
1、用作融合亲本的瘤系
2、特异T淋巴细胞的富集
3、细胞融合
4、融合细胞的筛选
5、抗原特异的杂交瘤的筛选
6、克隆化过程
胚胎工程
1、胚胎移植：
2、胚胎移植的基本程序P277
3、供体的选择时，应考虑：①具有遗传学价值；应选择生产性能优良的无遗传缺陷的品种
或个体；②供体最好是有一胎以上的正常繁殖史既往繁殖力记录较高的母畜，或已充分发育成熟的后备母畜；③健康状况良好，无生殖器官疾病，发情周期正常。
4、受体的选择应注意:①健康状况良好、无生殖器官疾病、发情周期正常的适繁母畜；②体
型过小的母畜不宜作受体。
5、超数排卵：在动物发情周期的适当时期，用促性腺激素进行处理，诱发其卵巢上大量卵
泡同时发育并排卵的技术。
6、供体超排中常用的生殖激素
1）促性腺激素
1、促卵泡素（FSH）
2、促黄体素（LH）
3、孕马血清促性腺激素（PMSG）
4、人绒毛膜促性腺激素（hCG）
5、促排卵3号
2）孕激素
3）前列腺素
7、超排的基本原理
影响卵泡的发育及排卵的三个因素
1、垂体分泌的促性腺激素
2、卵泡产生的雄激素
3、卵泡液的作用
8、胚胎回收：也称采卵，就是把胚胎从供体的生殖道中冲洗出来，提供移植或其他胚胎工程研究应用。
方法：手术回收和非手术回收
牛的胚胎回收（大家畜非手术回收）P283
羊、猪或其他中小动物（手术回收）
9、净化处理：就是把检出的胚胎移入含胚胎培养液的捡卵杯中冲洗2或3次，以除去附着于胚胎上的污染物。
10、胚胎的保存：是指胚胎在正常发育温度下暂时储存于体内或体外而不使其失去活力；或者将其保存于低温或超低温情况下，使细胞处于新陈代谢和分裂速度减慢或停止的状态，一旦恢复正常发育温度时，又能继续发育。
11、胚胎冷冻保存的原理（概括）P289
12、胚胎冷冻方法
（1）常规冷冻法（慢速冷冻法或逐步降温法），需专用冷冻仪，是目前生产中广泛采用并且最为成功的冷冻方法。
（2）一步冷冻法：利用高浓度的抗冻剂使胚胎在冷冻前脱水，从而减少冷冻过程中细胞内冰晶的形成，
（3）玻璃化法
如何减少高浓度溶液对胚胎的毒害作用：①通过两步平衡胚胎；②缩短平衡时间；
③降低平衡温度；④使用蔗糖、海藻糖等抗毒性物质。
13、体外受精技术主要包括：卵母细胞的获取，未成熟卵母细胞的体外成熟培养，精子的体外获能，成熟卵母细胞与获能精子的体外受精，受精卵的体外培养和移植。
14、精子获能：哺乳动物的精子必须在子宫或输卵管内存留一段时间，并经发生一定的生理变化，才能获得受精能力，将此现象称为精子获能。
15、超活化运动：
16、顶体反应：获能时精子头部的去能因子被除掉，引起精子头部质膜形态上的发生改变，同时顶体内酶被激活，这一过程称为顶体反应。其主要变化：精子质膜与顶体外膜融合，出现空泡结构，顶体内膜暴露，顶体酶释放。
17、体外发育阻断：体外培养液中缺少像体内那样对胚胎发育有利的物质。
18、影响胚胎发育的因素：（P299）
1）培养液的体积
2）培养液渗透压
3）氧气含量的变化
4）水分
5）培养液中的缓冲成分
6）培养液中过氧化物对胚胎发育的影响（解除过氧化物毒性的过氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶）
7）培养液中胚胎数的影响（多枚胚胎培养）
19、共同培养系统：是将胚胎与其他组织细胞（体细胞）共同培养，组织细胞产生的物质供胚胎发育所需，从而有利于胚胎克服体外发育阻断，改善胚胎发育。
20、克隆：在生物学中，是指一个细胞或个体以无性繁殖方式产生遗传物质完全相同的一群细胞或一群个体。在动物繁殖学中，是指不通过精子和卵子的受精过程而产生遗传物质完全相同新个体的一门胚胎生物技术。
21、动物克隆的基本原理：（P303）
22、胚胎分割：就是采用显微操作系统将哺乳动物附植前的胚胎分成若干个具有继续发育潜力部分的生物技术，运用胚胎分割可获得同卵双生后代。
23、胚胎融合：是指通过显微操作技术使2枚或2枚以上的受精卵或胚胎发育成为1枚胚胎的技术，由此发育而成的个体称为嵌合体。
24、克隆技术尚需进一步解决的问题
1.提高成功率
2.解决部分个体生理或免疫缺陷问题
3.解决受体细胞质与供体细胞核周期相容性的问题
4.通过核移植产生的重构胚能否完成整个发育过程的问题
5.减少或避免供体线粒体的带入
25、动物的性别控制：是通过对动物的正常生殖过程进行人为干预，使成年雌性动物产生人们所期望的性别后代的一门技术。
26、动物性别控制原理:(P311)
动物干细胞技术
1、胚胎干细胞具有体外培养无限增值、自我更新和分化为三个胚层组织细胞的能力，因而
被称为“万能细胞”。
2、干细胞：是指具有无限或较长期的自我更新能力，并能产生至少一种高度分化子代细胞
的细胞。
干细胞分类：
1)根据细胞分化潜能的大小：全能干细胞、三胚层多能干细胞、单胚层多能干细胞和
单能干细胞；
2)根据细胞来源不同：胚胎性干细胞和成体干细胞
3、ES细胞的来源（3种途径）
早期胚胎(主要途径)
妊娠早期胎儿组织
体细胞核移植胚胎
诱导多能性干细胞
4、ES和EG细胞系的特性和鉴定（P324）
一、特性
1）无限增值性
2）分化潜能性
3）种系传递性
二、鉴定方法
1）形态学特征
2）特异性标志分子的表达
3）分化潜能的检测
5、细胞分化：是指同一来源的细胞在细胞分裂过程中，细胞间产生形态结构、生化特征和
生理功能有稳定性差异的过程。
6、ES/EG细胞维持为分化的分子机制
1）LIF/STAT3通路
2）Oct-4
7、ES细胞体外诱导分化的方法：基因外诱导和基因修饰
转基因动物
1、转基因动物：是指通过基因工程技术将目的基因导入生殖细胞、早期胚胎干细胞或早期
胚胎，使之整合到受体细胞的基因组中，经发育而产生的个体。
2、转基因动物的6个常用技术（P333）
一、原核期胚胎的显微注射技术
二、反转录病毒技术
三、慢病毒载体技术
四、精子载体技术
五、体细胞核移植转基因技术
六、胚胎干细胞介导技术
3、动物转基因技术在生命科学基础研究领域中的应用：
1）研究基因结构和功能
2）研究组织表达特异性
3）研究发育相关基因的表达与调控
4）基因多级调节系统的研究
5）细胞功能的研究
动物染色体过程
1、染色体过程：是指人们按照一定的设计，有计划地合并、添加、替换、消减或易位单条
染色体或染色体片段，对生物染色体组成或染色体结构进行改造，以定向改变物种遗传特性的新技术。
2、动物的单倍体育种：是指人工单性生殖，其方法主要包括雌核发育和雄核发育。
3、染色体的结构变异
1）染色体缺失
2）染色体重复
3）染色体倒位
4）染色体易位
4、染色体结构的改造
1）染色体片段的删除和重排
2）染色体的易位工程
5、染色体数目变异（2种情况）
6、“赫特威效应”原理
7、雌核发育鉴别
1、以颜色、形态作为鉴别依据
2、生化方法鉴别
3、细胞学方法
4、遗传标志方法
8、染色体加倍技术
1．化学诱导方法
2．物理诱导方法
3．生物学方法
9、人工染色体：是指人工组建的具有染色体功能的DNA分子。
细胞培养实验和Western Blot实验报告
细胞培养实验和Western Blot实验报告 姓名：张人龙学号：YX16100508115 专业：中医骨伤科学 实验一：细胞培养 1.实验目的 初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本操作过程，为生物工程在医学上的应用打下基础。 2.实验原理 从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代，这一过程称为细胞培养。细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与体内实验互为补充，可同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象，耗费少，比较经济，因此成为生物学研究的重要手段。近年来，在体细胞遗传、分化、胚胎发生、肿瘤发生、免疫学、细胞工程、放射生物学以及老年学等一系列的研究领域中得到广泛的应用，并取得了丰硕的成果。细胞培养可分为原代培养和传代(继代)培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。 细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。所有离体细胞的生长都受温度、渗透压、pH值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的规范和要求，特别是无菌操作是细胞培养成败的关键。 3.实验用品 3.1 材料和标本乳兔、HeLa细胞(人宫颈癌细胞) 3.2 器材和仪器手术器械、平皿、培养瓶、吸管、离心管(灭菌后备用)、酒精灯、烧杯、超净工作台、二氧化碳培养箱、倒置显微镜。 2.3 试剂含有5％小牛血清的MEM培养液、0.01mol／L PBS，0.25％胰蛋白酶一0.02％EDTA混合消化液、75％乙醇。 4.实验方法 4.1 原代细胞培养 4.1.1 原理 细胞培养(Cell culture)是模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。近年来，广泛地应用于分子生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、细胞工程等领域，发展成一种重要生物技术，并取得显著成就。由体内直接取出组织或细胞进行培养叫原代培养。原代培养细胞离体时间短，性状与体内相似，适用于研究。一般说来，幼稚状态的组织和细胞，如：动物的胚胎、幼仔的脏器等更容易进行原代培养。
上海交大细胞工程期末试题2008b
一、选择题（每题1分，共计12分） 1、体外培养in vitro包括那三个层次（ABD）。 A细胞培养B组织培养 C大规模培养D器官培养 2、现在一般皆公认（B）为“组织培养之父”动物细胞培养的奠基人，因为他的实 验表明，为细菌学家早已应用的凹玻片悬滴制备细胞培养技术，不仅可以维持组织上体外生长数周，而且是一种能对生物学知识做出十分重要贡献的研究方法。 A Wilhelm Roux B Ross Granville Harrison C M.T.Burrows D Alexis Carrel E W.H.Lewis 3、培养的哺乳动物细胞一定要防止污染，特别是生物学污染，常见的生物学污染主要 是（ABC）。 A真菌B细菌C支原体 D炭疽菌E放线菌F病毒 4、在每一次传代培养过程中，培养物将首先被蛋白酶消化而被制备成细胞悬液，再用 于种植。种植后的细胞都要经历相似的恢复和生长过程。根据每一次传代培养的细胞生长变化的过程，习惯上把每一代细胞的生长过程分为（ABC）三个阶段。 A潜伏期B指数生长期C停滞期 D衰退期E贴壁黏附期F铺展期 5、“生物导弹”是指（D）。 A单克隆抗体 B杂交瘤细胞 C产生特定抗体的B淋巴细胞 D在单抗上连接抗癌药物
6、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞（D）。 A容易产生各种变异B具有更强的全能性 C取材十分方便D分裂增殖的能力强 7、对细胞全能性的表述正确的是（D）。 A非离体植物细胞能够表现全能性 B动物细胞融合标志着动物细胞全能性的实现 C单克隆抗体的制备原理依据是细胞的全能性 D花粉可培育成单倍体，是细胞全能性的体现 E受精卵发育到囊胚阶段的内细胞团具有完全的细胞全能性 8、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（A）。 A经过免疫的B淋巴细胞 B没经过免疫的T淋巴细胞 C经过免疫的T淋巴细胞 D没经过免疫的Ｂ淋巴细胞 9、引起大规模细胞培养过程中的细胞凋亡的主要直接因素有哪些？（ABC） A有毒物质或抑制因子产生B营养成分耗尽 C其他物理因素D细胞遗传物质突变 10、大规模细胞培养方法比较多，大致可分为（ABC）。 A悬浮培养 B固定化培养 C载体培养法 D培养瓶培养 E96孔板培养
细胞工程复习题
细胞工程复习题 一、名词解释（每小题3分，共21分）1．酶工程： 2．继代培养 3．人工种子： 4．单倍体培养： 5．微细胞： 6．胚胎工程： 7．克隆： 8．蛋白质工程： 9．外植体： 10．动物细胞与组织培养： 11．组织工程： 12．雌核发育： 13．胚胎融合： 14．转基因动物： 15．生物化学工程： 16．愈伤组织： 17．看护培养： 18．细胞固定化： 19．染色体工程 20．细胞重组： 21．基因工程技术： 二、简答题 1．细胞工程的重要应用体现在哪些方面
2．何为植物细胞两相培养技术建立植物细胞的两相培养系统必须满足的条件是什么 3．动物细胞体外培养有哪些特点 4．动物器官培养技术中，传统的器官培养方法主要有哪些 5．什么是细胞核移植技术以鱼类细胞核移植为例，其技术要点有哪些方面6．植物组织培养与植物细胞培养有什么区别 7．何为细胞悬浮培养怎样做到悬浮培养细胞的同步化 8．动物细胞生物反应器培养生产的生物制品主要有哪些种类 9．什么是试管动物试管动物技术主要包括哪几个主要技术环节 10．何为体细胞克隆技术多莉羊是怎样培育出的 11．芦荟组织培养快速繁殖中，通过哪些途径可以得到完整的植株 12．人工种子利用有何优势 13．用于动物细胞与组织培养的生物反应器应具备哪些基本要求
14．何为胚胎移植主要包括哪些关键技术 15．转基因动物技术的应用主要体现在哪几个方面 三、论述题 1．请阐述单克隆抗体的制备过程 2．植物组织培养技术主要包括哪些环节各环节的主要工作内容有哪些 3．请阐述原生质的分离，纯化和活力鉴定的技术过程 四、计算题 μ和ppm浓度各是什么1．有一培养基的IAA浓度是1.5/ mg L，问其/ mol L （分子量） 2．培养基的配方是 2.0/0.5/ +++水解酪蛋白 MS BA mg L NAA mg L 500mg/L+3%蔗糖+%琼脂粉。MS母液的浓度分别是：大量元素10倍，微量元素100倍，铁盐100倍，有机物100倍；BA母液浓度ml，NAA母液浓度ml。要配制800ml 该培养基，需要吸取各种母液各多少ml分别称取蔗糖、琼脂粉各多少克 3．要配制1mol/L的 NaOH100ml, 要称取98%的固体NaOH多少克要配制1mol/L的HCl1000 ml,要量取浓HCl多少ml（NaOH分子量40，HCl分子量，浓HCl含量38%，比重） 五、填空题 1．生物工程操作的对象是什么这是与化学工程等其他工程类学科最明显的不同
[小学]南京师范大学生命科学学院2012年《细胞工程》期末重点总结
[ 小学] 南京师范大学生命科学学院2012 年《细胞工 程》期末重点总结 南京师范大学生命科学学院细胞工程期末重点一( 名词解释 发育阻滞: 体外受精的早期胚胎在体外发育过程中，往往会停滞在某一阶段不再发育，此现象称为发育阻滞。 胚胎移植: 也称受精卵移植、借腹怀胎，是指将良种母畜配种后，从其生殖道内取出受精卵后早期胚胎，移植到同种的、生理状态相同的母畜体内，使之继续发育称为新个体的技术。 组织工程: 指应用工程学和生命科学的原理和方法来研究开发用于修复或改善人体病损组织或器官的结构、功能的生物活性替代物的一门科学。人- 鼠嵌合抗体:就是用人源性抗体的一部分代替鼠源性抗体的一部分，使之保留对抗原的特异性，又具备与补体和细胞结合的功能，并减少异源性蛋白的抗原性。细胞融合: 在离体条件下，用人工方法将不同基因型的单细胞通过无性方式融合成一个杂合细胞的过程。 ES细胞： 即胚胎干细胞，将细胞团的细胞分离出来进行培养，在一定条件下这些细胞可在体外“无限期”地增值传代，同时还保留其全能性的细胞。乳腺生物反应器： 利用哺乳动物乳腺特异性表达的启动子元件构建转基因动物，指导外源基因在乳腺中表达，并从转基因动物的乳液中获得重组蛋白。 细胞全能性： 指细胞分裂分化后，仍具有形成完整有机体的潜能或特性。Ips（诱导性多能干细胞）:
利用病毒载体将四个转录因子（Oct4,Sox2,Klf4,c-Myc）的组合转入分化的体细胞中，使其重编程而得到的类似胚胎干细胞的一种细胞类型。胚胎分割: 将一枚胚胎用显微手术的方法分割为二分、四分甚至八分胚，经体内或体外培养，然后移植入受体中，以得到同卵双生或同卵多生后代的技术。核移植: 利用显微操作技术，将某一特定细胞的核转移和嵌入另一细胞中的过程。 细胞系、细胞株: 细胞系是由原代培养经初步纯化。获得的以一种细胞为主的、能在体外长期生存的不均一的细胞群体。细胞系经过进一步的克隆化，便得到由单一细胞组成的细胞株。 二、问答题 1. 如何鉴定转基因动物, 1. 分子杂交 Southern 印迹杂交技术是通过探针和已结合于硝酸纤维素膜（或尼龙膜）上的经酶切、电泳分离的变性DNA链杂交，检测样品中是否存在目的DNA序列的方 法。该法不 仅灵敏而且准确, 因而广泛用于转基因阳性鼠的筛选和鉴定。当转入基因与内源基因组 DNA有较高同源性时，仍可用此法。，此法对样品的质量和纯度要求较高，操作烦琐, 费用 也较高。 2. 斑点杂交 通过直接将变性的待测DNA样品点在尼龙膜(或硝酸纤维素膜)等固体支持物上, 然后 和探针杂交，从而检测样品中是否存在目的DNA序列。根据点样方式一和样品点的形状不同可分为斑点杂交、狭缝杂交( slot blot hybridization) 、打点杂交(spot blot
细胞工程实验报告
原理，实验步骤或实验方法，实验结果与分析，注意事项，实验感悟 实验一培养基母液的配制 一、实验目的 通过配置MS培养基母液，掌握母液的配置和保存方法 二、实验原理 配置培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配置，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配置即可。 三、实验材料、试剂和仪器设备 1.试剂 NH 4NO 3 ,KNO 3 ,KH 2 PO 4 , CaCl 2 ·2H 2 O ,MgSO 4 ·7H 2 O,FeSO 4 ·7H 2 O Na 2-EDTA,MnSO 4 ·4H 2 O,ZnSO 4 ·7H 2 O, , KI,CuSO 4 ·5H 2 O,CoCl 2 ·6H 2 O,肌醇，甘氨酸， 盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸，蒸馏水NAA,6-BA 2.仪器设备 电子天平，烧杯（50ml、100ml、500ml、1000ml）量筒（1000ml、100ml、25ml），容量瓶(1000ml、500ml、100ml)，试剂瓶，玻璃棒数支，药芍，称量纸等。 四、实验步骤 1 大量元素母液的配制 先用量筒称量适当蒸馏水放入500ml烧杯中，按照配方表中用量依次分别称取： NH 4NO 3 ,KNO 3 , KH 2 PO 4 , MgSO 4 ·7H 2 O, CaCl 2 ·2H 2 O，待第一种化合物完全溶解后再 加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液转移至500ml容量瓶中，用蒸馏水定容至500ml，然后转移至细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。 2 微量元素母液的配制 按照配方表中用量用电子天平依次称取MnSO 4·4H 2 O, ZnSO 4 ·7H 2 O H3BO3 , KI, Na 2 MoO 4 ·2H 2 O，CuSO 4 ·5H 2 O, CoCl 2 ·6H 2 O,按制备母液I的方法逐个 溶解，转移至容量瓶中，然后定容至500ml，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。 3铁盐母液的制备
细胞工程 期末考试复习题目
细胞工程期末考试复习题目 细胞工程填空：20个ⅹ分=10分选择：10个ⅹ2分=20分名词：10个ⅹ6分=30分简答：5个ⅹ6分=30分论述: 1个ⅹ10分=10分第一章绪论1、细胞工程的定义及特点？细胞工程：是指主要以细胞为对象，应用生命科学的理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞，组织产品或新型物种的一门综合性科学技术。细胞工程的特点：前沿性：现代生物技术的热点争议性：新技术给伦理道德带来的冲击综合性：多学科交叉应用性：工程类课程，重在产品与技术第二章细胞培养的设施与基本条件：1、什么是细胞及组织培养？组织工程：习惯上繁殖所有的体外培养，即器官培养，组织培养和细胞培养的总称。其本
意是指从活的机体中去取出器官、组织或细胞，模拟机体内生理条件，在体外建立无菌、室温和一定营养条件等，使之生长和生存，并维持其结构和功能能的技术称为组织培养。细胞培养：将组织块用机械方法或酶解法分离成单个细胞，做成细胞悬液，再培养于固体基质上，成单层细胞生长，活在培养液中呈悬浮转肽培养的技术称为细胞培养。2、了解细胞培养实验室的基本规划及相关注意事项？实验室规划：⑴准备室：培养用具清洗、消毒和做实验准备的场所，一般建在通风和光线充足的地方。⑵缓冲间：保护操作室的无菌环境，避免空气对流。 ⑶操作间：要求无菌。最好设在阴面，防止室温过高；天花板高度不超过2米，保证紫外线有效杀菌效应；门用拉门，避免空气流动。室内天花板、地板和四周墙壁要光滑无死角，要镶瓷砖或涂油漆，便于清洗与消毒，不易在墙角推挤灰尘。3、细胞培养的设备有
哪些？有何基本作用⑴超净工作台①最好安装在无尘室内，最好在无菌间，避免过多灰尘使滤器阻塞，降低净化效果，缩短使用寿命。②新安装的或长期未使用的工作台，工作前必须对工作台和其周围环境用真空吸尘器或不产生纤维的工具进行清洁工作，在采用药物灭菌法或紫外线灭菌法进行灭菌处理。③每次使用时，应先用75%酒精擦洗台面，并进行30~50min紫外线灭菌灯处理净化工作区内累积的微生物，在关闭紫外灯后，应启动送风机使之转运2min后在进行培养操作。④净化工作区内不应存放不必要的物品，以保持洁净气流不受干扰⑤高效过滤器3年更换一次。请专业人员操作，以保持密封良好。定期将粗过滤器中的过布拆下清洗。⑥每次使用净化台要即使清楚工作台面上的物品，并用酒精擦洗台面使之始终保持洁净。⑵CO2培养箱：①一定浓度的CO2生长，尤其是原代培养和单
细胞工程复习资料1
细胞工程知识点 第一章细胞工程 1、细胞工程：是指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，通过某种工程学手段，在细胞整体水平或细胞器水 平，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质以获得新型生物或获得细胞产品的一门综合科学技术。 操作水平：细胞整体水平或细胞器水平。目的：定向改变遗传物质或获得细胞产品。理论基础：细胞全能性发酵工程目的：定向地改造菌种,大量生产微生物菌体或代谢产物。 2、重要应用：快速繁殖；种苗脱毒；动物胚胎工程快速繁殖优良/濒危品种；利用动植物细胞培养生产活性产物/药品（动物细胞融合---单克隆抗体；植物细胞大量培养----次生代谢产物）；新型动植物品种的培育；供医学器官修复或移植的组织工程；珍稀动植物资源的保存与保护 3、生物技术包括：基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程四个方面。 动物细胞工程包括：细胞培养技术（组织培养、器官培养）；细胞融合技术；胚胎工程技术（核移植、胚胎分割等）； 克隆技术（单细胞系克隆、器官克隆、个体克隆）。 植物细胞工程：植物组织/器官培养技术；细胞培养技术；原生质体融合与培养技术；亚细胞水平的操作技术等。 4、细胞工程与基因工程相比：前者是细胞水平或细胞器水平上生物技术，后者是分子水平上的生物技术。（如克隆多莉羊技术是细胞水平上的技术，培育抗虫棉是分子水平上的技术。）细胞工程是基因工程的基础 第三章细胞工程实验室及实验基本操作 1、实验室包括：基本操作室、无菌操作室、培养室、鉴定分析室、温室等。 实验室应满足清洗、无菌操作、培养基制备、贮藏和培养鉴定等多方面工作的要求。 基本操作室包括：洗涤间、灭菌间、贮藏间、培养基配制间。无菌操作室分为：缓冲准备区、接种区。 2、消毒灭菌的方法： 物理方法：干热(烘箱)、湿热、过滤（0.25微米）、紫外灯、超声波等。 化学方法：使用灭菌剂或抗菌素，如酒精、次氯酸钠、升汞、漂白粉、高锰酸钾、双氧水、福尔马林等 （1）干热灭菌：适用于玻璃器皿和金属器械的灭菌。（3）过滤除菌法：适用于一些培养基、酶液、血清等。（2）湿热灭菌：适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、纸等。121℃ 维持20~30min （4）射线灭菌：主要是利用紫外灯进行照射，适合实验室空气、操作台等，灭菌时间20-30min。 （5）火焰灼烧灭菌：用火焰灼烧达到灭菌目的，适用于接种器皿的灭菌。 （6）消毒剂：适用外植体、实验器皿、操作表面、皮肤等。 第二章(植物)细胞工程的理论基础 **1、生命特征属性包括：新陈代谢、应激性、自我复制。离体培养细胞可展现该物种的生命特性。 2、植物组织培养的类型 按材料的类别分：愈伤组织培养（最为常见的组织培养）；细胞培养（分为悬浮细胞培养和单细胞培养）； 器官培养（胚、胚乳、珠心、子房、根、茎、叶、花和幼果的部分组织的培养）；原生质体培养 按培养方法分为：固体培养；液体培养；看护培养；微室培养；包埋培养。按培养过程分：初代培养；继代培养。 3、植物细胞全能性表现强弱： 营养生长中心> 形成层> 薄壁细胞> 厚壁细胞(木质化细胞) > 特化细胞(筛管、导管细胞)；
细胞原代培养细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告 细胞原代培养 姓名： 学号： 班级： 专业： 同组成员： 一、实验原理
细胞培养是生物学和医学研究中最常用的手段之一，可分为原代培养和传代培养两种。原代培养是直接从生物体获取组织或器官的一部分进行培养。由于培养的细胞刚刚从活体组织分离出来，故更接近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段。同时也为以后传代培养创造条件。 原代培养的方法： 1、组织块法在平皿中用弯头剪把组织尽量剪碎，每个组织块小于1mm3大小。用Hanks 液洗涤2—3次，自然沉淀。用吸管吸去上清液。将组织块贴于培养瓶进行培养。 2、酶消化法将1mm3大小的组织块放入1个三角瓶内加入10—30ml的%的胰蛋白酶。370C磁棒搅拌消化20－30分钟。然后终止消化。用几层无菌纱布过滤。取过滤液，离心800rpm 5—10分钟收集细胞。弃上清，加入带有双抗的培养基，放入培养瓶培养。 取材注意事项： 取材要注意新鲜和保鲜。取材应严格无菌。取材和原代细胞制作时，要用锋利的器械，如手术刀或剃须刀片切碎组织，尽可能减少对细胞的机械损伤。要仔细去除所取材料上的血液（血块）、脂肪、坏死组织及结缔组织，切碎组织时应避免组织干燥，可在含少量培养液的器皿中进行。取材应注意组织类型、分化程度、年龄等，一般来讲，胚胎组织较成熟个体组织容易培养，分化低的较分化高的组织容易生长，肿瘤组织较正常组织容易培养。 二、实验目的 1、理解细胞原代培养原理 2、熟悉细胞原代培养方法与过程 3、了解细胞原代培养的应用 4、独立进行细胞原代培养操作 三、实验材料 手术小直剪刀、眼科直镊子、眼科弯镊子、玻璃平皿、培养瓶、试管、移液管、巴斯德吸管、废液缸、75%酒精棉球、酒精灯。 动物：9-12日龄的鸡胚蛋 四、实验步骤
细胞工程期末试题库
一、名词解释 1.细胞工程：应用细胞生物学和分子生物学方法，借助工程学的实验方法或技术，在细胞水平上研究、改造生物遗传特性和生物学特性，获得特定的细胞、细胞产品或新生物体的有关理论和技术方法的科学。 2.动物组织工程：将干细胞与材料科学相结合，将自体或异体的干细胞经体外扩增后种植在预先构建好的聚合物骨架上，在适宜的生长条件下干细胞沿聚合物骨架迁移、铺展、生长和分化，最终发育成具有特定形态及功能的工程组织。 3.细胞全能性：一个细胞所具有的产生完整生物个体的固有能力。 4.干细胞：动物体内具有分化潜能，并能自我更新的细胞，分为胚胎干细胞和组织干细胞。 5.全能干细胞：从早期胚胎的内细胞团分离出来的一种高度未分化的细胞系，可以无限增殖，可分化成为多种细胞类型，从而可形成任何组织、器官，具有形成完整个体的潜能。 6.多能干细胞：具有分化成多种细胞组织的潜能，但失去了发育成完整个体的能力，发育潜能受到一定限制。 7.植物细胞培养：指在离体条件下，对植物的单个细胞或小的细胞团进行培养使其增值的技术。 8.植物组织培养：在无菌和人工控制的条件下，将离体的植物器官、组织、细胞培养在人工配制的培养基上，给予适宜的条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。 9./ 10.细胞脱分化：一个已分化的细胞回复到未分化的状态或分生细胞的过程。 11.细胞再分化：指在离体的培养条件下，当细胞脱分化以后形成的无序生长的细胞或愈伤组织重新进入有序生长的过程。只有再分化才能再生个体。 12.体细胞杂交（融合）：指两个离体细胞通过一定的诱导技术使质膜接触而融合在一起，随后导致两个细胞核物质融合的技术。 13.细胞核移植：利用显微操作技术将细胞核与细胞质分离，然后再将不同来源的核与质重组，形成杂种细胞。 14.接触抑制：当两个细胞由于生长而相互靠近发生接触时，细胞不再移动，在接触区域的细胞膜褶皱样活动停止，这种由细胞接触而抑制细胞运动的现象称为接触抑制。 15.密度抑制：细胞接触汇合成片后，仍能进行增值分裂，但当细胞密度进一步增大，培养液营养成分减少，代谢产物增多时，细胞因营养的枯竭和代谢物的影响，而发生密度抑制，导致细胞分裂停止的现象。 16.抗原：进入动物体内并对机体的免疫系统产生刺激作用的外源物质。 17.抗体：由抗原刺激B淋巴细胞转化为浆细胞后产生的，并能与相应的抗原特异性结合、具有免疫功能的球蛋白。 18.单克隆抗体：通过小鼠B细胞杂交瘤技术制备的高度均一、单一特异性，仅针对抗原上的某一个抗原决定簇产生的抗体。 19.多克隆抗体：用天然的抗原物质免疫动物，刺激多个B细胞克隆所获得的免疫血清，含有多种特异性抗体。 20.# 21.二倍体细胞培养法：始终维持培养细胞染色体倍数恒定为二倍体的细胞培养方法。 22.克隆培养法：又叫单细胞分离培养法，把从细胞悬液中获得的单个细胞用于培养，使之分裂增殖而产生一个细胞群的方法。 二、填空 1.广义的细胞工程包括所有的生物组织、器官培养及细胞离体操作和培养技术。
细胞工程复习重点
思考题 1．细胞工程实验室的基本组成与要求是什么？ 一、实验室组成 1．基本实验室 ①准备室/化学实验室 功能：就是进行一切与实验有关的准备工作 要求：宽敞明亮，通风条件好，地面便于 清洁并应防滑处理。 ②接种室/无菌操作室 功能：是进行接种、继代、细胞融合等无 菌操作的场所。 要求：封闭性好，干燥清洁明亮，防止空 气对流。外应设缓冲室、更衣室。 防止微生物感染。 ③培养室 功能：是对接种到培养瓶的离体材料进行控制培养的场所。 要求：是要能控制光照和温度，应保持干燥和清洁，2．辅助实验室根据具体的实验需求而定。 细胞学实验室 生化分析室 摄影室及暗室 3. 移栽设施/温室 要求：配置人工光源并且能够控制室内温度，为 试管苗的正常生长提供适宜的环境。 2．外植体消毒的基本方法是什么？
3. 无菌操作在植物离体培养中的作用是什么？ 4. 配制培养基时，加入一定量的植物生长调节物质， 它们在离体培养过程中有哪些作用? 激素调控的一般规律是什么？ 植物激素或生长调节剂（ growth regulators）包 括： 生长素类（ auxin） 细胞分裂素类(cytokinin,CTK) 赤霉素类 (GA) 乙烯（ Eth) 脱落酸(ABA) 其中前三者为正向激素，后两者则为负向激素。 常用的主要有生长素类和细胞分裂素类两大类。 ①生长素类（ auxin）：在作用或结构上 类似于吲哚乙酸的一类物质的统称。生长素 是最早发现的植物激素。 作用：诱导愈伤组织形成，促进细胞的分裂和伸长，诱导根原基的发生和根系的生成，有调运养分的效应。使用浓度0.1～10mg/L。常用的生长素有: 吲哚乙酸 (IAA)、2， 4，二氯苯氧乙酸 (2,4-D) 吲哚丁酸 (IBA) 。 奈乙酸 (NAA)、 ②细胞分裂素类(cytokinin,CTK) ：是一类促进细 胞分裂的植物激素，细胞分裂素都为腺嘌呤的衍生物 作用：促进细胞分裂和分化，诱导不定芽的形成， 促进胚状体的发育，延缓组织的衰老，打破顶端 优势，有利于芽的增殖，常用于继代和增殖培养。 使用浓度0.1～10mg/L。 常用的细胞分裂素有： 激动素 (KT) 6-苄基腺嘌呤 (6-BA/BAP) 玉米素（ ZT） 异戊烯氨基嘌呤 (2-ip) 噻重氮苯基脲（ TDZ） 5. 常用的植物细胞培养基种类有哪些？各有什么特 点? MS培养基 无机盐含量较高，微量元素种类较全，浓度也高。其养分的数量和比例较合适，离子平衡性较好，具较强的缓冲能力，培养过程中较稳定，可满足植物的营养和生理需要。其中它的硝酸盐含量较其它培养基为高。 广泛地用于植物的器官、花药、细胞和原生质体培养，效果良好。有些培养基是由它演变而来的。 Ｎ6 培养基 ＫＮＯ3和（ＮＨ4） 2ＳＯ4 含量高，VB1含量高，不含钼。目前在国内已广泛应用于小麦、水稻及其它植物的花粉和花药培养和组织培养。 Ｂ5培养基 ＫＮＯ3含量高，有机物含量较高，但含有较低的铵，这可能对不少培养物的
细胞工程复习题 (2)
《细胞工程》复习题 一、选择题： 1．在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（Ｂ）A．结果是相同的 B．杂种细胞的形成过程基本相同 C．操作过程中酶的作用相同 D．诱导融合的手段相同 2. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞 诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在 这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ C ） ①淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身融合细胞 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂交瘤细胞 A．②④ B．①③⑤ C．①②③④ D．②③ 3．动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的有（ D ）
A．诱导融合的方法完全相同B．所用的技术手段完全相同 C．所采用的原理完全相同D．都能形成杂种细胞 4.单克隆抗体是指（ C ） A．单个骨髓瘤细胞增殖产生的抗体 B．单个B淋巴细胞增殖产生的抗体 C．单个杂交瘤细胞增殖产生的抗体 D．单个抗体通过克隆化，产生大量抗体 5.将小鼠骨髓瘤细胞与一种B淋巴细胞融合，可使融合的细胞经培养产生单克隆抗体，其依据是（多选） （AC ） A．B淋巴细胞可以产生抗体，但不能无限增殖 B．B淋巴细胞只有与骨髓瘤细胞融合后才能产生抗体 C．骨髓瘤细胞可以无限增殖，但不能产生抗体 D．骨髓瘤细胞可以产生抗体，但不能无限增殖 6.要想获得大量的单克隆抗体就必须用单个的B淋巴细胞进行无性繁殖，形成细胞群。其原因是（ D ） A．在体外培养条件下B淋巴细胞可以无限增殖 B．在动物体内B淋巴细胞可产生多达百万种以上的抗体 C．每一个B淋巴细胞都参与特异性免疫反应
. D．每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 7.关于单克隆抗体，下列叙述不正确的是（D ） A、可以制成诊断盒．用于疾病的珍断 B、可以与药物结合，用于病变细胞的定向治疗 C、可以利用基因工程技术生产 D、可以在生物体内生产，不能体外生产 8. 以下不属于生长素的是(D) A IAA B NAA C 2,4- D D 6-BA 9.植物细胞有而动物细胞没有的结构是(D) A细胞质 B线粒体 C内质网 D叶绿体 10.拥有接触抑制的是(B) A原核细胞 B动物细胞 C植物细胞 D真核细胞 11.产生自胸腺的淋巴细胞是(A) A T淋巴细胞 B B淋巴细胞 C C淋 巴细胞 D G淋巴细胞
细胞工程复习题
细胞工程复习题 一、名词解释 1、细胞工程（cell engineering） 2、细胞培养（cell culture） 3、细胞核移植(nuclear transplantation) 4、染色体工程(chromosome engineering ) 5、胚胎工程(embryonic engineering) 6、干细胞（stem cell） 7、组织工程 8、植物细胞工程 9、脱分化 10、再分化 11、细胞全能性 12、外植体 13、愈伤组织 14、细胞分化 15、极性 16、决定 17、体细胞遗传与变异 18、外遗传变异（epigenetic variation） 19、生理适应（physiologic adaptation） 20、不定根 22、不定芽 23、离体无性繁殖(propagation in vitro) 24、单株无性系或单芽无性系 25、植物脱毒（virus elimination） 26、体细胞胚或胚状体 27、初代培养 29、指示植物 30、酶连免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA） 31、花药培养(anther culture) 32、花粉培养(pollen culture) 33、胚胎培养 34、胚培养 35、早熟萌发(early mature sprouting) 36、胚性发育(embryonal development) 37、植物离体受精 38、污染 39、褐变 40、玻璃化 41、细胞悬浮培养(cell suspension culture) 42、最低有效密度 43、细胞同步化 44、细胞平板培养 45、看护培养 46、微室培养
《细胞生物学与细胞工程实验》
细胞生物学与细胞工程实验 课程编号：2511240 英文名称：Cell Biology and Cell Engineering 课程负责人：王昌留 师资队伍：王昌留、黄玲、李清、曲明娟、孙振兴 适用专业：生物科学 开课学期：秋季学期 课程类型：专业基础必修课 实验课性质：独立设课/非独立设课 先修课程：植物学实验/2511110、动物学实验/2580070、生物化学实验/2501040 总学时：理论学时实践学时 36 课外学时 总学分：1 采用教材及参考书： 1. 安利国主编：《细胞生物学实验教程》，科学出版社，2004 2. 杨汉民主编：《细胞生物学实验》第二版，高等教育出版社，1997 3. 李志勇：《细胞工程》第一版，科学出版社，2003 4. 徐承水，党本元主编：《现代细胞生物学技术》，青岛海洋大学出版社，1995 5. 王金发主编：《细胞生物学实验教程》，科学出版社，2003 内容简介： 本课程是一门理论性和技术性都很强的课程，是在学生已修完生物学、生物化学、细胞遗传学、细胞生物学与细胞工程、微生物学、免疫学基础上而设立的，是生物科学专业的必修课程。 本课程既包括细胞生物学基础实验又包括细胞工程综合实验，是一门对实验仪器要求较高的课程。开设本课程的目的是使学生掌握细胞生物学与细胞工程实验设备的操作方法，具备观察和研究细胞结构、功能与生命活动的基本方法，学会发现问题和解决问题的基本技能，为毕业后从事生物学相关的科研和教学工作奠定基础。 本课程考核成绩由平时成绩（占30%）、实验报告成绩（占30%）和终期考核成绩（占40%）三部分构成。 本实验包括的实验项目包括：
细胞工程学相关考试题及答案
细胞工程学名词解释及问答题 一、名词解释 1、细胞工程（cytotechnology或cell engineering）：它是以生物细胞、组织或器官为研究对象，运用工程学原理，按照预定目标，改变生物性状，生产生物产品，为人类生产或生活服务的科学。 或应用细胞生物学和分子生物学和分子生物学的理论和方法，按照人们的设计蓝图，在细胞水平上的遗传操作及进行大规模的细胞和组织培养。通过细胞工程可以生产有用的生物产品或培养有价值的植株，并可以产生新的物种或品系。 2、看护培养（nursing culture）：用一块活跃生长的愈伤组织来促进培养细胞持续分裂增殖的方法。 3、细胞杂交（cell hybridization）：指用人工方法把不同类型的两个或两个以上细胞合并成一个细胞的技术。 4、外植体〔explant〕：从植物体上分离下来的用于离体培养的植物组织、器官等材料。 5、人工种子：是指植物离体培养中产生的胚状体或不定芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中所形成的能发芽出苗的颗粒体。 6、花药培养（anther culture）：将成熟或未成熟的花药从母体植株上取下，放在无菌的条件下，使其进一步生长、发育成单倍体细胞或植株的技术。（指离体培养花粉和花药，使小孢子改变原有的配子体发育途径，转向孢子体发育途径，形成花粉胚或花粉愈伤组织，最后形成花粉植株，并从中鉴定出单倍体植株，使之二倍化的细胞工程技术。 7、条件培养基(conditioned medium)：培养过程中，有些细胞可能会分泌活性物质到培养液中，这种培养过某种细胞以后，含有细胞分泌物的培养液称为条件培养基。 8、植物脱毒：由人工用物理、化学和生物方法将植物体组织器官病原体消除，以使这些组织器官生成完整植株。 9、原代细胞系：指从机体中取出而直接培养的细胞，从一代到十代的细胞培养是原代培养，形成的整个系统叫原代细胞系。 10、体细胞杂交：指在人工控制条件下，不经过有性过程，两种体细胞原生质体相互融合产生杂种的方法。 11、胚胎培养：是指胚或具胚器官（如子房、胚珠等）在离体无菌条件下发育成幼苗的技术。 12、互补选择：是指利用两个亲本具有不同的遗传和生理特征，在特定培养条件下，具有发生互补作用的杂种细胞才能生长的选择方法。 13、悬浮培养(suspension culture):是细胞培养的基本方法，是将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增殖的技术。 14、植板率:植板率是能长出细胞团的单细胞在接种单细胞中所占的比例。 15、玻璃化冻存：是指液体转变为非晶态（玻璃态）的固化过程。 16、接触抑制(contact inhibition)：当细胞在基质上分裂增殖，逐渐汇合成片即每个细胞与其周围的细胞相互接触时，细胞就停止增殖，即细胞密度不再增加，这一现象称之为接触抑制或密度依赖抑制现象。 17、非对称融合（aymmetric fusion）：利用物理或化学方法使某亲本的核或细胞质失活后再进行融合。 18、对称融合（symmetric fusion）：两个完整的细胞原生质体融合。 19、胞质体：不含细胞核而仅含有部分细胞质的原生质体。 20、体细胞胚：离体培养下没有经过受精过程，但经过了胚胎发育过程所形成的胚的类似物（不管培养的细胞是体细胞还是生殖细胞）。 21、永久细胞系：大多数细胞系在有限的代数内以不变的形式增殖，当超过有限世代后，在体外永久存活下来发育成永久细胞系或称连续细胞系。
细胞传代实验报告
细胞传代培养 一.实验目的 初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本操作过程，为生物技术在医学上的 应用打下基础。 二、原理 从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生 长、繁殖或传代，这一过程称为细胞培养。细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接 观察 活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可 以与 体内实验互为补充，可同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象，耗费少，比较 经济， 因此成为生物学研究的重要手段。 细胞培养可分为原代培养和传代(继代)培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养 为 原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞 分散 后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养， 传 代培养的累积次数就是细胞的代数。 细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。所有离体细胞的生长都受 温度、渗透压、ph值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的规范和要求，特别是无菌 操 作是细胞培养成败的关键。 三、材料和试剂 1、细胞：293细胞株 2、试剂：0.25％胰酶、1640培养基（含10％小牛血清） 3、仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、电动枪，培养板，吸液枪，5ml玻璃吸管、酒精 灯等 四、操作步骤 1、将长满细胞的培养板中原来的培养液吸去。 2、加入1~2ml 0.25％胰酶溶液，使板底细胞都浸入溶液中。 3、马上吸走胰酶液，再次加入2ml左右的胰酶，同样马上吸去，再加入几滴胰酶放入 培养箱中消化几分钟 4、用吸管将贴壁的细胞反复吹打成悬液，再按照观察的生长情况确定的传代比例传代 5.根据确定的比例来取需要的量（剩余的细胞拿来做细胞计数），加入4ml左右的培养液 6.前后左右的来回震荡使细胞分散均匀后，将培养板放入培养箱 7.收拾整理超净台 附：消化液配制方法： 称取2.5克胰酶蛋白酶，加入100ml10xpbs+纯水溶解到1l，滤器过滤除菌，4℃保存， 用前可在37℃下回温。 10x pbs配方：na2hpo4(14.2g) kh2po4(2.32g) nacl(80g) kcl(2.02g) (调至ph=7.4） 五、实验结果
细胞工程实验小结
细胞工程实验小结 专业：生物技术班级：0801 姓名：励丹学号： 在本次暑期短学期的细胞工程实验课上，我们做了细胞工程中基础的几个实验——饲养层细胞的制备、动物细胞的原代培养（组织块法培养小鼠肝脏细胞，消化法培养小鼠肾脏细胞）、免疫脾细胞的制备、免疫脾细胞与骨髓瘤细胞的融合、细胞的超低温冻存与复苏及活性测定（MTT法检测）、抗体IgG的检测（ELISA 法），让我受益菲浅。其中很多知识在平时的学习中都是无法学习到的，其中很多实验都开阔了我们的视野，让我们获得了许多平时课堂上得不到的知识。在细胞工程实验课即将结束的时候，我对这个短学期的学习进行总结，总结细胞工程课程试验来的收获与不足。 这次的实验分成了8个小组，因为细胞工程的实验都须在无菌室内进行，而无菌室较小，所以各小组轮流进无菌室进行实验操作，故没轮到进无菌室的小组在外面的实验室进行简单的操练，所以较为轻松。 我们中的大多数人都是第一次进无菌室，对无菌室充满了好奇。而进无菌室也需要一重重地灭菌，以确保无菌室内的安全。首先需要用新吉尔灭溶液对需要带进无菌室的物品及我们的手进行消毒灭菌，然后进入缓冲间穿戴无菌服、帽、手套及口罩。在进入无菌室后还需要用酒精棉擦拭手、超净台以及一些物品。在无菌室内的操作都需在超净台上进行，而且需要在酒精灯边上进行，不可以远离超净台，否则可能使培养的细胞或培养液等受到污染，从而造成实验失败。 我们小组在细胞培养的实验中较为成功，细胞生长状态良好，没有出现染菌现象。在进行细胞超低温冻存于复苏实验时，我们组将两只小鼠的细胞混在一起，是的细胞数增加，相对的在冻存中损伤的细胞数也增多，这个实验应该算不成功的。 通过9天的细胞工程实验，我发现实验是细胞工程学学的实践，我们学到的许多理论都会最终作用于实验，也学到了许多其他专业课上没有教到的理论。很多实验都是需要花费许多心思去学习的，也是非常复杂的。我们学习理科的同学，更加要重视实验课，因为理论与实际结合是最重要。在每次实验之后，我们都要做实验报告，通过实验讲义和自己参阅资料，得知本次实验的目的、原理、所需仪器、实验步骤、实验中的要求及注意事项等问题。实验操作当然是细胞工程
细胞工程期末复习
细胞工程期末复习（必考） 细胞工程：研究真核细胞的核—质关系以及细胞器、细胞质基因转移的技术。 组织工程：研究开发用于修复或改善人体病损组织或器官的结构、功能的生物活性替代物的一门科学。 染色体工程：是按照一定的设计，有计划的消减添加或替换同种或异种染色体从而达到定向改变遗传特性和选育新品种的一种技术。 细胞连接：使细胞间的联系结构。细胞表面的特化结构或特化区域，是细胞间建立长期组织上联系的结构基础。涉及细胞外基质蛋白、跨膜蛋白、胞质溶胶蛋白、细胞骨架蛋白等。细胞全能性：指分化细胞保留着全部的核基因组，具有生物个体成长、发育所需要的全部遗传信息，具有发育成完整个体的潜能。 细胞分化：指细胞在形态、结构和功能上发生差异的过程。包括时间和空间上的分化。 脱分化：又称去分化，指分化细胞失去特有的结构和功能变为具有未分化细胞特性的过程。即分化的细胞在适当条件下转变为胚性状态而重新获得分裂能力的过程。 再分化：是指在离体条件下，无序生长的脱分化细胞在适当条件下重新进入有序生长和分化状态的过程。 细胞培养：指从体内组织分离细胞，模拟体内环境，在无菌适当的条件使其生长繁殖的技术。人工种子：又称合成种子或体细胞种子，指将植物离体培养中产生的胚状体或芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中形成的类似种子的颗粒。 植物胚胎培养：指对植物的胚及胚器官进行人工离体无菌培养，使其发育成幼苗的技术。试管受精：指在无菌条件下离体培养未受精子房或胚珠和花粉萌发产生的花粉管进入胚珠从而完成受精过程。 细胞核移植：一种利用显微操作技术将一种动物的细胞核移入同种或异种动物的去核成熟卵细胞内的技术。 体外受精：指使哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术。 胚胎移植:指将受精卵或发育到一定阶段的胚胎移植到与供体同时发情排卵但为配种的受体母畜输卵管或子宫的技术。 人工受精：指将采集的精子注入人发情处理的母体内完成受精过程。 试管婴儿：指将卵子与精子取出在体外受精，培养发育成早期胚胎，再植回母体子宫内发育出生的婴儿，也就是采用体外受惊联合胚胎移植技术培育的婴儿。 胚胎核移植：一种利用显微操作技术将一种动物的细胞核移入同种或异种动物的去核成熟卵细胞内的技术。 愈伤组织：脱分化后的细胞经过细胞分裂，产生无组织结构、无明显极性的松散的细胞团。胚状体：由外植体或愈伤组织产生的与正常受精卵发育成的胚相类似的胚状结构。 胞质体：除去细胞核后由质膜包裹的无核细胞。 细胞融合：指使用人工的方法使2个或2个以上的细胞合并形成1个细胞的技术。 对称融合：两个完整的细胞间的融合。 异核体：来自不同基因型的融合细胞。 不对称融合：用物理或化学方法使某亲本的核或细胞质失活再与另一完整的细胞进行融合。体细胞杂交：指将不同来源的体细胞融合并使之分化再生、形成新品种的技术。 花药和花粉培养：指离体培养花药和花粉，使小孢子改变原有的配子体发育途径，转向孢子体发育途径，形成花粉胚或花粉愈伤组织，最后形成花粉植株，从中鉴定出单倍体植株并使之二倍化的技术。 植物细胞培养：在离体条件下，将分离的植物细胞继代培养增殖，获得大量细胞群体的技术。动物细胞培养：模拟体内生理环境使分离的动物细胞在体外生存、增殖的技术。 细胞悬浮培养：将细胞接种于液体培养基中并保持良好的分散状态的培养方式。 细胞固定化培养：将游离的细胞包埋在支持物内部或表面进行培养的技术。 贴壁培养：指细胞贴附在一定的固相表面进行的培养。 原代培养：接种组织块直接长出单层细胞或将组织分散成单个细胞再进行培养，在首次传代前的培养成为原代培养。 传代培养：指将原代培养的细胞继续转接培养的过程。 原代细胞：有分裂但不旺盛，且多呈二倍体核型的细胞。