同时测定婴幼儿乳粉中维生素B2、维生素B3、维生素B6的方法
利描
科技文苑
同时测定嬰幼几乳粉中维生素b2、维生素b3、维生素b6的方法
□毕晓丽宁波市食品检验检测研究院
摘要：本文建立了一种同时测定婴幼儿乳粉中维生素B2、B3*B6的高效液相色谱法。前处理中运用等电点法去除 蛋白质干扰，在流动相中添加辛烷磺酸纳离子对试剂，并对其p H进行优化，采用二极管阵列检测器（DAD),通过梯度 洗脱程序，实现了多组分的分离。结果表明，目标物在各自浓度范围内线性良好，线性相关系数均大于0.999,加标回收 率在92.48%?104.12%范围内，相对标准偏差为0.45%?2.16%。用于实际样品的检测，结果满意。
关键词：婴幼儿乳粉；维生素B2;维生素B3;维生素B6
维生素B2(核黄素）、维生素b3 (烟酸与烟酰胺）和维生素^(包括 吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺）作为B族 维生素是维持人体正常机能与代谢活 动不可或缺的水溶性维生素，它起着 推动体内代谢，把糖、脂肪、蛋白质 等转化成热量的作用，是肌体组织代 谢和修复的必需营养素，与其他物质 结合一起影响生物体氧化和能量代谢。在人体中若摄入不够或过量，都易引 起机体的相应疾病[12]。
我国标准体系中的检测方法基本都是针对相对单一的维生素进行检测 分析的[36]，目前，乳粉中维生素B2、维生素B6和烟酸、烟酰胺的测定常采 用国标法：GB5009.85—2016《食品 中维生素B2的测定》、GB5009.154- 2016《食品中维生素B6的测定》以 及GB5009.89-2016《食品中烟酸和烟酰胺的测定》，对利用高效液相 色谱法同时检测婴幼儿乳粉中维生素 B2、维生素^和烟酸、烟酰胺的方法 鲜少报道。因此本文针对婴幼儿乳粉 利用高效液相色谱法同时检测维生素 B2、维生素^和烟酸、烟酰胺的含量，在满足含量检测准确的同时，更加快 速、高效、简单。
1试验部分
1_1材料与试剂
核黄素、烟酸、烟酰胺、盐酸吡 哆醛、盐酸吡哆醇、盐酸吡哆胺标准
150食品安全导刊2018年2月品（购自德国Dr.Ehrenstorfer公司）；
盐酸（分析纯)、异丙醇（色谱纯）、
氢氧化纳（分析纯）、甲醇（色谱纯）、
高氯酸（分析纯）、辛烷磺酸钠（色
谱纯）、超纯水。
1.2仪器与设备
Agilent1260 in fin ity丨丨高效液相
色谱仪（工作站 chemstation C.01.07
SR3,配有DAD检测器）、FE28酸度计、
Mettler-ME204 电子天平、KS-300E I
超声仪。
1.3标准贮备液的配制
准确称取100.0 mg核黄素标准品，
用2 mL(1 :1, V/V)盐酸溶液溶解
后用水定容至lOOmL，在0?4°C避
光条件下保存。
分别准确称取100.0 m g烟酸、
烟酰胺、121.80 m g盐酸吡哆醛、
121.60 mg盐酸吡哆醇、143.40 mg
盐酸吡哆胺标准品，用0.1 mol/L盐
酸溶液溶解后并定容至100 mL，配成
浓度为1.0 mg/m L的标准贮备液，在
0?4°C避光条件下保存。
1.4样品的制备
称取待测样品5 g (精确到O.Olg)
于50 m L烧杯中，加入25 mL45
?50 °C的温水，涡旋混匀，超声
10 min,静置冷却至室温。然后用
2.5 mol/L盐酸调节试样溶液的pH值
至1.7±0.1,放置约l m i n后，再用
2.5 mol/L氢氧化钠溶液调节试样溶液
的p H值至4.5±0.1，转移至50mL
容量瓶中，用水定容至刻度后混匀，
经滤纸过滤，滤液过0.45 n m微孔滤
膜，上机待测。
1.5液相色谱条件
色谱柱：Agilent SB-匚18柱（250 mm
X4.6mm，5jim)〇柱温：30 °C〇
DAD检测器，进样量20 nL。流动相A:
辛烷磺酸钠1.5 g，异丙醇20 mL,甲
醇70 mL，用水溶解并定容到1L后，
用60%高氯酸调p H至2.5±0.1;流
动相B:甲醇。检测波长变化见表1,
梯度洗脱程序见表2。
2结果与讨论
2.1分析条件的选择和优化
2丄1波长的选择
经全波长扫描获得各化合物的吸
收光谱图，维生素B2的光谱在266 nm
处有强吸收，烟酸、烟酰胺的光谱在
261 n m处有强吸收，维生素^的光
谱在290 n m处有强吸收。本实验采
用261 n m作为烟酸、烟酰胺和维生
素巳2目标物的检测波长；采用290
n m作为维生素B6的检测波长。
2.2流动相的选择
通S前期试验摸索，选择流动
相A相：辛烷磺酸钠1.5 g,异丙醇
20 mL,甲醇70 mL,用水溶解并定
容到1L,用60%高氯酸调流动相
至pH2.5。B相为：甲醇，在流速为
1.0mL/m in条件下，对流动相采
食品安全导刊2018年2月下正文-20180319.indd1502018/3/19 16:14:02