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电泳条件及不同胶浓度配制

试剂配制：

（1）30%聚丙烯酰胺贮液：将聚丙烯酰胺（电泳级）150g，N,N′—甲叉双丙烯酰胺（电泳级）4g溶剂于400ml双蒸水中，补充双蒸水至500ml，滤纸过滤后，于棕色瓶中4℃避光保存。

（2）1.5mol/l Tris碱（pH8.8）：将90.75Tris碱溶解于400ml双蒸水中，用1mol/l HCl调至pH8.8，补充双蒸水定容至500ml，4℃冰箱保存。

（3）1.0mol/l Tris碱（pH6.8）：将12.1Tris碱溶解于80ml双蒸水中，用1mol/l HCl调至pH6.8，补充双蒸水定容至100ml，4℃冰箱保存。

（4）10%SDS：将10gSDS溶剂于100ml双蒸水中，混匀后，室温保存。

（5）10%过硫酸铵：将0.1过硫酸铵（电泳级）溶解于1ml双蒸水中（用时加水溶解），4℃冰箱保存。

（6）10倍电泳缓冲液（25mmolTris,192mmol甘氨酸，0.1%SDS，pH8.3）：在10L大玻璃管中加8L双蒸水，303gTris碱，1442g甘氨酸，100gSDS溶解后调pH8.3补水至10L，混匀后，室温保存。

（7）样品缓冲液：将1.6ml10%SDS，0.8ml甘油，1.0ml1.0mol/l Tris（pH6.8），加入到4.0ml 双蒸水中，加0.01%溴酚蓝，0.4ml巯基乙醇。

（8）染色液配制

0.25%考马斯亮蓝（CCB）染色液：考马斯亮蓝R-250甲醇-醋酸混合液。取1.25g考马斯亮蓝R-250，溶于227ml蒸馏水中，加甲醇227ml，再加入冰乙酸46ml（近似5:5:1）搅拌使其充分溶解，室温保存备用。

（9）脱色液配制：甲醇：水：醋酸=5:5:1混合备用。或用20%乙醇水溶液。

实验步骤

1待测蛋白样品制备

（1）根据每种方法提取的蛋白，用含SDS的样品缓冲溶液溶解，充分溶解后沸水加入3-5min，1600r/min离心5min，取3上清液进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。

（2）用不含SDS的样品缓冲液溶解蛋白，充分溶解后沸水加入3-5min，1600r/min离心5min，取上清液进行无SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。

垂直板状SDS聚丙烯酰胺凝胶的灌制

1 安装：根据电泳仪说明书安装在灌胶架上。

2根据下表配制分离胶溶液

加入1过硫酸铵，立即摇匀，将其迅速、联系地灌注在两块玻璃板的间隙中，高度据玻璃上边2cm。之后，用带有针头的注射器小心的在丙烯酰胺溶液的上部覆盖上一层去离子水（不要冲击胶面），在室温下垂直放置30min左右，使其完全聚合凝固。

吸出覆盖层溶液，用去离子水洗涤顶部1-2次，弃去多余的溶液。将配置好的浓缩胶溶

液，加入过硫酸铵后立即混合均匀，迅速灌在已聚合的分离胶的上部。随即插入干净的有机玻璃梳子（不能有气泡），梳齿前沿与分离胶间距离约为0.5cm。在室温下使其完全凝固（约10-15min）。

加样

小心将灌好胶的胶板从灌胶架上取下，安电泳说明书所示放入电泳槽中，加入稀释过的电极缓冲液（Tris-Gly，pH8.3）至高出内侧玻璃板上边约0.4cm。小心取下梳子。用微量加样器吸已经处理好的标准蛋白和待测蛋白样品液5-10ul，按预定顺序，通过缓冲液小心地把样品加入每个小槽底部。因样品比重大，可在凝胶的顶部形成致密的一层。

电泳盖好电泳槽盖，下槽为正极，上槽为负极。接通电泳仪电源，电流调至5A，样品开始进入上层胶中，逐渐被浓缩。当染料前沿进入分离胶时，调至15A，继续电泳，直至溴酚蓝接近分离胶底部，停止电泳。

拨胶卸下电泳板，将胶片直接装入盛有染色液的大培养皿中，在摇摆仪上染色两小时，然后用蒸馏水漂洗3次，然后加入脱色液，根据情况更换次数，是凝胶蓝色背景退去，显现出清晰地蛋白条带。

利用S DS2 PAGE鉴定水稻品种(组合)的真实性和纯度

电泳样品的准备:取 30μl蛋白提取液 ,根据 Bradford法测定的浓度 ,加样品缓冲液 (0.1 mol /L Tris2 HCl,含 1%SDS, 0.01 mol /L 2-巯基乙醇 , 0.1 g/L溴酚蓝,150 g/L蔗糖 , 5 mol /L脲 pH 8.0)将蛋白提取液均稀释至蛋白浓度 1μg/μl。点样前涡旋混匀。

电泳贮液的配制: (1) 丙烯酰胺单体贮液: 29.10 g丙烯酰胺 + 0.90 g N、N′ 2 甲叉双丙烯酰胺加水定容至100 ml,用棕色瓶 4℃保存。 (2)浓缩胶缓冲贮液 ( 1.0 mol /L Tris2 HCl, pH 6.80):12.10 g Tris溶于80 ml水 , 用4 N HCl 调 pH至 6.80,定容至 100 ml, 4℃保存。 (3) 分离胶缓冲贮液 (1.5 mol / L Tris2HCl, pH 8.80) : 18.15 gTris溶于 80 ml水 ,用 4 N HCl调 pH 至 8.80,定容至 100 ml, 4℃保存。 (4) 10% SDS:10 g S DS加水定容至 100ml。

(5) 10%过硫酸铵 (AP):0.1 g过硫酸铵加 1.0 ml水。 (6) 10% TEMED: 0.1 ml TEMED加 0.9 ml水。

分离胶配制:本实验采用 12%的分离胶: 12 ml 30%的丙烯酰胺单体贮液 , 7.

5 ml分离胶贮液 , 300μlSDS, 10.2 ml纯水,300μl AP, 120μl TEMED

浓缩胶的配制:本实验采用 5%的浓缩胶: 2 ml 30%的丙烯酰胺单体贮液 , 3 ml浓缩胶贮液 , 120μl SDS,6.8μl 纯水，50μl AP，50μl TEMED。

电泳:采用不连续垂直板状凝胶电，点样量 6μl,恒流电泳 ,样品在浓缩胶时电流 40 mA，进入分离胶后电流 80mA。

染色与脱色:凝胶用 0.225%的考马斯亮蓝 R2 250 (纯水:无水乙醇:冰醋酸= 50:43:7)染色 30 min,然后在脱色液 (纯水:无水乙醇:冰醋酸 = 17: 2:1)中脱色。

琼脂糖凝胶的制备上课讲义

琼脂糖凝胶的制备

琼脂糖凝胶的制备一、琼脂糖凝胶的特点天然琼脂（agar）是一种多聚糖，主要由琼脂糖（agarose，约占80％）及琼脂胶（agaropectin）组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷，而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖，由于这些基团带有电荷，在电场作用下能产生较强的电渗现象，加之硫酸根可与某些蛋白质作用而影响电泳速度及分离效果。因此，目前多用琼脂糖为电泳支持物进行平板电泳，其优点如下。 1. 琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，样品不需事先处理就可以进行电泳。 2. 琼脂糖凝胶结构均匀，含水量大（约占98％~99％），近似自由电泳，样品扩散较自由电流，对样品吸附极微，因此电泳图谱清晰，分辨率高，重复性好。 3. 琼脂糖透明无紫外吸收，电泳过程和结果可直接用紫外光灯检测及定量测定。 4. 电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定。制成干膜可长期保存。目前，常用琼脂糖作为电泳支持物，分离蛋白质和同工酶。将琼脂糖电泳与免疫化学相结合，发展成免疫电泳技术，能鉴别其他方法不能鉴别的复杂体系，由于建立了超微量技术，0.1ug蛋白质就可检出。琼脂糖凝胶电泳也常用于分离、鉴定核酸，如DNA鉴定，DNA限制性内切核酸酶图谱制作等。由于这种方法操作方便，设备简单，需样品量少，分辨能力高，已成为基因工程研究中常用实验方法之一。二、DNA的琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳对核酸的分离作用主要是依据它们的相对分子量质量及分子构型，同时与凝胶的浓度也有密切关系。 1、核酸分子大小与琼脂糖浓度的关系 ① DNA分子的大小在凝胶中，DNA片段迁移距离（迁移率）与碱基对的对数成反比，因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离时行比较，便可测出未知片段的大小。但是当DNA分子大小超过20kb时，普通琼脂糖凝胶就很难将它们分开。此时电泳的迁移率不再依赖于分子大小，因此，就用琼脂糖凝胶电泳分离DNA时，分子大小不宜超过此值。 ②琼脂脂糖的浓度如下表所示，不同大小的DNA需要用不同浓度的琼脂糖凝胶进行电泳分离。表琼脂糖浓度与DNA分离范围

SDS-PAGE电泳标准操作流程

SDS-PAG电泳标准操作规程（网上） 3. 程序: 端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。 3.1.2分离胶的配置 3.122 灌胶混匀后用移液枪将凝胶溶液沿玻棒小心注入到长、短玻璃板间的狭缝内（胶高度距样品模板梳齿下缘约1cm）。 3.1 . 2.3液封在凝胶表面沿短玻板边缘轻轻加一层水以隔绝空气，使胶面平整。静置约30min观察胶面变化，当看到水与凝固的胶面有折射率不同的界限时，表明胶已完全凝固，倒掉上层水，并用滤纸吸干残留的水液。 3.1.3浓缩胶的配置混匀后用移液枪将凝胶溶液注入到长、短玻璃板间的狭缝内（分离胶上方），轻轻加入样品模板梳，小心避免气泡的出现。约30分钟，聚合完全。 3.2.1安装电泳槽将制备好的凝胶板取下，小心拔下梳子。两块10%勺凝胶板分别插到U形橡胶框的两边凹形槽中，可往上提起使凝胶板紧贴橡胶。将装好玻璃板的胶模框平放在仰放的贮槽框上，其下缘与贮槽框下缘对齐，放入电泳槽内。倒入1X tris-gly 电泳缓冲液。 3.2.2 样品处理对于蛋白样品直接取80 pl的样品，依次加上20Q 5x buffer （加了B-巯基乙醇），混匀。对于菌体或组织等固体样品，取少量样品加100ul 2x buffer （加了B-巯基乙醇）煮沸10分钟。 3.2.3 加样用移液枪取处理过的样品溶液10 p l，小心地依次加入到各凝胶凹形样品槽内，marker加入到其中一个槽内，为区别两块板，marker可加在不同的孔槽中。 3.2.4电泳将电泳槽放置电泳仪上，接通电源，正负极对好。电压调至约150v保持恒压。待溴酚蓝标记移动到凝胶底部时，关电源，把电泳缓冲液倒回瓶中。 3.2.5剥离胶把电泳槽取出，两块板拿下来，用刮片从长短玻片中间翘起，再把浓缩胶刮掉，取下。 3.3. 染色放于加有R250染色液的染色皿中，染液漫过胶即可，置于摇床上，转速约为45r/min，时间约1小时, 完成后染液倒掉并用水洗掉染液。 3.4. 脱色取出染色过的胶放于加有脱色液的染缸里，脱色液漫过胶即可，置于摇床上，转速约为45r/min，时间约1小时，本底色脱净，条带清晰可见即可，完成后倒掉脱色液。 3.5. 拍照将脱色后的胶置于透明文件夹中，把胶上面的气泡赶出（用前也可用酒精棉球擦干净文件夹），放到扫描仪上，拍照。 4. 注意事项 4.1 根据目的蛋白的大小选择合适的胶片浓度。一般为100KD-50KD选用10%交；50KD-30KD选用12%胶； 30KD-10KD选用15%交。4.2 要根据样品浓度来加样品溶解液。每加一个样品后换一支吸头或清洗吸头后再点另一个样品。4.3 制备聚丙烯酰胺凝胶时，倒胶后常漏出胶液，那是因为二块玻璃板与塑料条之间没封紧，留有空隙，所以这步要特别留心操作.4.4 电泳完毕撬板取凝胶时要小心细致不能把胶弄破。 4.5 电泳缓冲液可重复利用，如果胶上出现不正常痕迹，就要及时更换新液。 4.6 分离胶高度控制得当，确保有大约1cm左右的浓缩胶空间。过长或过短均不能得到理想的电泳结果。 4.7 电泳染色液注意进行回收再利用，一般可重复使用2-3次。4.8 AP和TEMED是催化剂，加入的量要合适，过少则凝胶聚合很慢甚至不聚合，过多则聚合过

琼脂糖凝胶的制备(知识资料)

琼脂糖凝胶的制备一、琼脂糖凝胶的特点天然琼脂（agar）是一种多聚糖，主要由琼脂糖（agarose，约占80％）及琼脂胶（agaropectin）组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷，而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖，由于这些基团带有电荷，在电场作用下能产生较强的电渗现象，加之硫酸根可与某些蛋白质作用而影响电泳速度及分离效果。因此，目前多用琼脂糖为电泳支持物进行平板电泳，其优点如下。 1. 琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，样品不需事先处理就可以进行电泳。 2. 琼脂糖凝胶结构均匀，含水量大（约占98％~99％），近似自由电泳，样品扩散较自由电流，对样品吸附极微，因此电泳图谱清晰，分辨率高，重复性好。 3. 琼脂糖透明无紫外吸收，电泳过程和结果可直接用紫外光灯检测及定量测定。 4. 电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定。制成干膜可长期保存。目前，常用琼脂糖作为电泳支持物，分离蛋白质和同工酶。将琼脂糖电泳与免疫化学相结合，发展成免疫电泳技术，能鉴别其他方法不能鉴别的复杂体系，由于建立了超微量技术，0.1ug 蛋白质就可检出。琼脂糖凝胶电泳也常用于分离、鉴定核酸，如DNA鉴定，DNA限制性内切核酸酶图谱制作等。由于这种方法操作方便，设备简单，需样品量少，分辨能力高，已成为基因工程研究中常用实验方法之一。二、DNA的琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳对核酸的分离作用主要是依据它们的相对分子量质量及分子构型，同时与凝胶的浓度也有密切关系。 1、核酸分子大小与琼脂糖浓度的关系 ① DNA分子的大小在凝胶中，DNA片段迁移距离（迁移率）与碱基对的对数成反比，因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离时行比较，便可测出未知片段的大小。但是当DNA分子大小超过20kb时，普通琼脂糖凝胶就很难将它们分开。此时电泳的迁移率不再依赖于分子大小，因此，就用琼脂糖凝胶电泳分离DNA时，分子大小不宜超过此值。 ②琼脂脂糖的浓度如下表所示，不同大小的DNA需要用不同浓度的琼脂糖凝胶进行电泳分离。表琼脂糖浓度与DNA分离范围琼脂糖浓度 0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 2.0 /％

Underfill胶存储与使用规范

****有限公司工作指令文件修改记录表编号：SF008 0次修改保存期限：新版发行后1个月

题目：Underfill胶存储与使用规范第0 次修改 3.3使用 3.3.1 Underfill胶的使用品牌：除非生产和工艺的特殊需求，生产线上使用的Underfill胶的品牌和型号必须经过认证部门的认证。目前认证合格的Underfill胶品牌及其基本性能如下：类型厂家及型号产地比重（g/cm3） CSP Underfill 胶不可返修型Loctite 3593 美国 1.18 可返修型Loctite 3513 爱尔兰 1.18 不可返修型 Emerson&Cuming E1216 美国 1.45 可返修型 Emerson&Cuming XE1217 美国 1.1 FC Underfill 胶用于板级FC UnderfilL Loctite FP4531 美国 1.7 用于模块、封装级FC Underfill Loctite FP4547FC 美国 1.68 3.3.2 Underfill胶使用期限：应遵循“先使用距失效日期近的胶”的原则，不允许使用过期的Underfill胶。使用区域温度应控制在25℃±3℃，相对湿度是40%-80％。 3.3.3 Underfill胶的回温：使用前应先从冷藏室中取出，针头朝下放置在阴凉处（不要放在冰箱顶部）回温。回温操作时需严格遵循正确的取胶方法，不允许手心直接握针管中心位置，也不允许采用加热方法来加快解冻，防止产生解冻气泡。胶水回温后出现气泡是不能使用的，特别对于FC Underfill用胶水。下图为几种正确和错误操作Underfill胶的对比示意图。正确的回温操作方式不正确的回温操作方式

SDSPAGE电泳试剂配制

SDS-PAGE电泳试剂 1) 30%储备胶溶液：丙烯酰胺（Acr）29.0g，亚甲基双丙烯酰（Bis）1.0g，混匀后加ddH 2 O， 37O C溶解,定容至100 mL,棕色瓶存于4O C； 2) 1.5M Tris-HCl(pH 8.8)：Tris 18.17g加ddH 2 O溶解,浓盐酸调pH至8.0,定容至100mL； 3) 1M Tris-HCl(pH 6.8)：Tris 12.11g加ddH 2 O溶解,浓盐酸调pH至6.8,定容至100 mL； 4) 4?分离胶缓冲液： 0.4gSDS溶于1.5M Tris-HCl(pH 8.8)，定容至100mL； 5) 4?浓缩胶缓冲液： 0.4gSDS溶于1M Tris-HCl(pH 6.8)，定容至100mL； 6) 10?电泳缓冲液(pH 8.3)： Tris 3.029g，甘氨酸14.415g，SDS 1g加ddH 2 O溶解,定容至100mL； 7) 10%过硫酸铵（Aps,现配）：1g AP加ddH 2 O至10mL； 8) 2?SDS电泳上样缓冲液：1M Tris-HCl(pH 6.8)2.5mL，?-巯基乙醇1.0mL，SDS 0.6g，甘油2.0 mL，0.1%溴酚兰 1.0 mL，ddH 2 O 3.5mL； 9) 考马斯亮兰染色液：考马斯亮兰R 2501.25g，甲醇225 mL，冰醋酸50 mL，ddH 2 O 225mL； 10) 脱色液: 甲醇、冰醋酸、ddH 2 O以2∶1∶7配制而成； 11) 分离胶(12.5%): ddH 2 O 4mL，30%储备胶5 mL， 4?分离胶缓冲液3mL, 10% Aps 0.1mL(现配)，TEMED(N,N,N’,N’-四甲基乙二胺)10μL； 12) 浓缩胶（5％）：ddH 2 O 2.65mL，30%储备胶0.85mL，4?浓缩胶缓冲液1.25mL， 10%Aps 50μL，TEMED 5μL。 Tricine（三羟甲基氨基甘氨酸）- SDS - PAGE蛋白质电泳 1 Tricine - SDS - PAGE蛋白质电泳溶液准备

皮肤消毒酒精浓度

关于皮肤消毒所用酒精的浓度在我们的临床工作中，最常应用的皮肤清毒的酒精浓度是多少？在随机提问中，大家的回答几乎是一致的75%。除此之外没有太多的其它概念。而且所接触的酒精消毒缸的标签都是“75%酒精”。就是在成品乙醇（浓度≥95%）的使用说明书上也同样标注“常配成75%酒精溶液用于皮肤消毒”。75%的酒精概念深入人心。大家都知道不管是多大浓度的酒精，一般都是由浓度≥95%的医用酒精按一定比例和无菌蒸馏水配制而成。可是75%的酒精浓度是皮肤消毒的最佳浓度吗？带着这个问题，我们查阅了一下人民卫生出版社出版的裘法祖主编的第四版《外科学》，在〈无菌术〉一章中“作皮肤切口，术前消毒皮肤用70%酒精”没有“75%酒精”概念的出现，同样在以后出版的第五版《外科学》第六版《外科学》，术区皮肤消毒，常用皮肤消毒都是70%酒精，没有提及75%酒精。在《全国临床执业医师考试指南》中〈手术区消毒〉一节中切口消毒常用消毒液其中之一是70%酒精，而不是75%酒精，但在〈清洁伤口换药〉一节中却是“用75%酒精或铬合碘来消毒伤口”。另外在湖南科学技术出版社出版的《医学临床三基训练》中<无菌技术>一节中,洗手消毒用的酒精浓度为70%-75%，把70%-75%都包括了。以上几种出版物都具有一定的权威性，但最具权威性的还是全国统一教材《外科学》“用70%酒精消毒术区皮肤”。可75%的酒精是不是就没有效呢，也不是，让我们再看一下金盾出版社出版的《临床药

物手册》中关于它的描述。 “乙醇的60%-95%溶液对细菌及大多数微生物均有杀灭作用，但对芽胞无效。70%水溶液杀菌力最强，浓度过高可使菌体表层蛋白质凝固而使乙醇不易向内透入，妨碍其杀菌效力，主要用于皮肤及器械消毒。40%-50%酒精可使血管扩张，增加血液循环，用于久卧病人以防褥疮。20%-30%乙醇擦洗用于高热病人物理退热，在应用中基本无毒，个别病人对乙醇敏感，接触后可引起皮疹、红斑。说到这里，我们能肯定70%酒精溶液是最强的，但是75%酒精是什么概念呢？在《基础护理学》中，是这样解释的“常用皮肤消毒酒精”70%，70%是重量比。这种重量比在温度为10℃时的体积比是75%。注意，这里有一个比较苛刻的条件就是在温度为10℃时，所以说我们日常应用的酒精是75%是不太准确的。药用酒精（乙醇）是医疗单位和家庭药箱的必备药品，是最常用的外用制剂之一。值得注意的是,不同用途的酒精要求不同的浓度。 ■95%的酒精用做燃料医疗单位常需使用酒精灯、酒精炉，点燃后用于配制化验试剂或药品制剂的加热，也可用其火焰临时消毒小型医疗器械。 ■70%-75%的酒精用于灭菌消毒用于包括皮肤消毒、医疗器械消毒、碘酒的脱碘等。有人以为，酒精浓度越高，消毒效果越好，这是错误的。酒精消毒的作用是凝固细菌体内的蛋白质，从而杀死细菌。但95%的酒精能将细菌表面包膜的蛋白质迅速凝固，并形成一层保护膜，阻止酒精进入细菌体内，因而不能将细菌彻底

琼脂糖凝胶的配制和DNA回收

配1%的琼脂糖凝胶称量琼脂糖0.3g，倒入锥形瓶中，再用量筒量取30ml TAE，混到一起，放入微波炉中煮沸两次，直到看不到颗粒为止（每次大约三分钟），取出后冷却至60℃左右后加入Gold view（万分之一），同时将有机玻璃内槽置于一水平位置模具上，安好挡板，放好梳子。吸取少量琼脂糖溶液封固胶膜边缘，任其凝固，在距离底板0.5～1.0mm的位置上放置梳子，以便加入琼脂糖后可以形成完好的加样孔，将剩余的温热琼脂糖溶液倒入胶膜中，使胶液缓慢地展开，直到在整个有机玻璃板表面形成均匀的胶层。凝胶的厚度在3～5mm之间，检查一下梳子的齿下或齿间是否有气泡。冷却好后拔梳子（30min左右），将板放入电泳槽里，倒入TAE溶液（1X），在冰箱中拿Loading buffer和两个maker（1kb和 D100），将Loading buffer吸到PE手套上（吸取量随意用枪点一下即可）和样品混匀，向凝胶中加样，两侧的孔里加Maker，通电120V跑胶，红为正，黑为负（DNA带负电，所以往红色正极处跑），放到紫外盒上看结果，同时将亮带部分切下来放入1.5ml的已经称完重量的EP管中（若忘了称重量，按照0.9计算），再次称重计算胶的重量，接下来按照DNA回收试剂盒操作步骤回收DNA，测浓度。普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。 1. 柱平衡步骤：向吸附柱CA2中（吸附柱放入收集管中）加入500 μl平衡液BL，12,000 rpm(~13,400×g )离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子） 2. 将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分）放入干净的离心管中，称取重量。 3. 向胶块中加入等倍体积溶液PN（如果凝胶重为0.1 g，其体积可视为100 μl，则加入100 μlPN溶液），50℃水浴放置，其间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解。如果还有未溶的胶块，可继续放置几分钟或再补加一些溶胶液，直至胶块完全溶解（若胶块的体积过大，可事先将胶块切成碎块）。注意：对于回收<300 bp的小片段可在加入PN完全溶胶后再加入1/2胶块体积的异丙醇以提高回收率；胶块完全溶解后最好将溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在室温时结合DNA的能力较强。 4. 将上一步所得溶液加入一个吸附柱CA2中（吸附柱放入收集管中），室温放置2 min，12,000 rpm (~13,400×g )离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CA2放入收集管中。注意：吸附柱容积为800 μl，若样品体积大于800 μl可分批加入。 5. 向吸附柱CA2中加入600 μl漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙

SDS-PAGE凝胶配制试剂盒

SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒简介：聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis ， SDS-PAGE)，其原理在于聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应。它有两种形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶及SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)；非变性聚丙烯酰胺凝胶，在电泳的过程中，蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开，主要用于分离蛋白质和寡核苷酸。 SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒不仅可用于配制SDS-PAGE 凝胶，也可配制非变性(native)PAGE 凝胶，具体配制的量应根据器具大小决定。组成：操作步骤(仅供参考)： 1、配制10%过硫酸铵：直接在Ammonium Persulfate 中加入蒸馏水，充分溶解，分装成小份储存于-20℃或4℃。注意：一般用1.5mlEP 管分装成0.5-1ml 每支，-20℃保存，每支使用2-3次即弃用。短期使用时，可保存于4℃，1周有效。 2、根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度，按照下表配制分离胶(下层胶)：不同浓度的SDS-PAGE 分离胶的最佳分离范围： SDS-PAGE 分离胶浓度最佳分离范围 6%胶 50-150kD 8%胶 30-90kD 10%胶 20-80kD 12%胶 12-60kD 15%胶 10-40kD 成分配制不同体积SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积(ml) 编号名称 PE0018 30T Storage 试剂(A): 30% Acr-Bis(29:1) 100ml 4℃ 避光试剂(B): 1.5M Tris-HCl(pH8.8) 100ml RT 试剂(C): 10% SDS 5ml RT 试剂(D): Ammonium Persulfate 0.5g RT 试剂(E): TEMED 2×1ml 4℃ 避光使用说明书 1份

药用酒精浓度不同用途各异

龙源期刊网 https://www.wendangku.net/doc/4711969652.html, 药用酒精浓度不同用途各异作者：王和平来源：《保健与生活》2012年第06期药用酒精(乙醇)是医疗单位和家庭药箱的必备药品，是最常用的外用制剂之一。值得注意的是，不同用途的酒精要求不同的浓度。 95％的酒精用做燃料医疗单位常需使用酒精灯、酒精炉，点燃后用于配制化验试剂或药品制剂的加热，也可用其火焰临时消毒小型医疗器械。 70％～75％的酒精用于灭菌消毒 70％～75％的酒精用于包括皮肤消毒、医疗器械消毒、碘酒的脱碘等。有人以为，酒精浓度越高，消毒效果越好，这是错误的。酒精消毒的作用是凝固细菌体内的蛋白质，从而杀死细菌。但95％的酒精能将细菌表面包膜的蛋白质迅速凝固，并形成一层保护膜，阻止酒精进入细菌体内，因而不能将细菌彻底杀死。如果酒精浓度低于70％，虽可进入细菌体内，但不能将其体内的蛋白质凝固，同样也不能将细菌彻底杀死。只有70％～75％的酒精既能顺利地进入细菌体内，又能有效地将细菌体内的蛋白质凝固，因而可彻底杀死细菌。用70％～75％的酒精消毒医疗器械应当用浸泡的方法，时间不得少于30分钟；浸泡消毒后应用无菌生理盐水冲洗，避免器械上的残余酒精刺激机体组织。因为酒精只能杀死细菌，不能杀死芽孢和病毒，所以，医疗注射或手术前的皮肤消毒常使用效果更好的碘酒。为了减少碘对皮肤的刺激，一般在用碘酒消毒后，用75％的酒精脱去碘。由于酒精具有一定的刺激性，75％的酒精可用于皮肤消毒，但不可用于黏膜和大创面的消毒。 40％～50％的酒精用于预防褥疮长期卧床患者的背、腰、臀部因长期受压可引发褥疮，而且褥疮一旦形成很难愈合，其预防的方法就是要勤翻身、勤擦洗、勤按摩。按摩时，护理人员会将少量40％-50％的酒精倒人手中，均匀地按摩患者受压部位，以达到促进局部血液循环、防止褥疮形成的目的。

underfill 底部填充胶空洞的原因、检测及分析

underfill 底部填充胶小课堂底部填充技术上世纪七十年代发源于IBM公司，目前已经成为电子制造产业重要的组成部分。起初该技术的应用范围只限于陶瓷基板，直到工业界从陶瓷基板过渡到有机（叠层）基板，底部填充技术才得到大规模应用，并且将有机底部填充材料的使用作为工业标准确定下来。底部填充胶的定义底部填充胶（Underfill）对SMT（电子电路表面组装技术）元件（如：BGA、CSP芯片等）装配的长期可靠性是必须的。选择合适的底部填充胶对芯片的跌落和热冲击的可靠性都起到了很大的保护作用。在芯片锡球阵列中，底部填充胶能有效的阻止焊锡点本身（即结构内的最薄弱点）因为应力而发生应力失效。此外，底部填充胶的第二个作用是防止潮湿和其他形式的污染。常见问题底部填充胶在使用过程中，出现空洞和气隙是很常见的问题，出现空洞的原因与其封装设计和使用模式息息相关，典型的空洞会导致可靠性的下降。了解空洞行成的不同起因及其特性，将有助于解决底部填充胶的空洞问题。空洞的特性了解空洞的特性有助于将空洞与它们的产生原因相联系，其中包括： ◥形状——空洞是圆形的还是其他形状？ ◥尺寸——通常描述成空洞在芯片平面的覆盖面积。 ◥产生频率——是每10个容器中出现一个空洞，还是每个器件出现10个空洞？空洞是在特定的时期产生，还是一直产生，或者是任意时间产生？ ◥定位——空洞出现芯片的某个确定位置还是任意位置？空洞出现是否与互连凸点有关？空洞与施胶方式又有什么关系？空洞的检测方法 underfill底部填充胶空洞检测的方法，主要有以下三种: ◥利用玻璃芯片或基板直观检测，提供即时反馈，缺点在于玻璃器件上底部填充胶（underfill）的流动和空洞的形成与实际的器件相比，可能有细微的偏差。 ◥超声成像和制作芯片剖面超声声学成像是一种强有力的工具，它的空洞尺寸的检测限制取决于封装的形式和所使用的仪器。 ◥将芯片剥离的破坏性试验采用截面锯断，或将芯片或封装从下underfill底部填充胶上剥离的方法，有助于更好地了解空洞的三维形状和位置，缺点在于它不适用于还未固化的器件。

SDS-PAGE试剂配方

SDS-PAGE电泳所用溶液： 30 %聚丙烯酰胺溶液(100 mL) 丙烯酰胺(Arc) 29 g N,N’-亚甲双丙烯酰胺(Bis) 1 g 用双蒸水定容至100mL，过滤备用，4℃存放丙稀酰胺29.2g，N-N-甲叉双丙稀酰胺0.8g，加入去离子水定容至100mL，pH值不能超过7.0，过滤于棕色玻璃瓶中4℃贮存。 5×Tris-甘氨酸缓冲液(1 L) Tris碱15.1 g 甘氨酸(电泳级) 94 g 10 %SDS 50 mL 使用时稀释5倍使用 2×SDS凝胶加样缓冲液(10mL) 0.5 mol/L Tris-Cl (pH 6.8) 2 mL 10％(W/V)SDS 4 mL 甘油 2 mL β-巯基乙醇 1.0 mL (DTT（二硫苏糖醇）0.31g) 溴酚兰0.02g 双蒸水0.5 mL 室温存放备用考马斯亮蓝染色液考马斯亮蓝R-250 （G-250） 1.0 g 甲醇450 mL 冰醋酸100 mL ddH2O 450 mL 0.2g考马斯亮蓝R250+84mL 95％乙醇+20mL冰醋酸，定容至200mL，过滤备用考马斯亮蓝脱色液（甲醇脱色液效果好，但有毒性）甲醇100 mL 冰醋酸100 mL ddH2O 800 mL 医用酒精：冰醋酸：水=4.5：0.5：5(V：V：V)

SDS-PAGE所需溶液: A液——30％丙稀酰胺（W/V）：丙稀酰胺29.2g，N-N-甲叉双丙稀酰胺0.8g，加入去离子水定容至100mL，pH值不能超过7.0，过滤于棕色玻璃瓶中4℃贮存。 B液——1.5mol/L Tris·HCl，pH8.8：18.17g（9.09g）Tirs碱，溶于80mL（40mL）去离子水中，加入约 3mL(1.5mL)以上的浓盐酸调节pH值至8.8，定容至100mL（50mL）。 C液——1.5mol/L Tris·HCl，pH6.8：12.1g（6.05g）Tirs碱，溶于80mL（40mL）去离子水中，加入约7mL(3.5mL)以上的浓盐酸调节pH值至6.8，定容至100mL（50mL）。 D液——10％SDS：10g (2g)SDS溶于去离子水中，定容至100mL(20mL)，加热至68℃助溶。 E液——10％过硫酸铵：5g(0.5g)过硫酸铵，溶于50mL(5mL)去离子水中；现配现用或分装至0.5mL离心管中冷冻备用。 F液——TEMED(N-N-N`-N`－四甲基乙二胺)原液，室温保存。

为什么消毒用75%的酒精

为什么消毒用75%的酒精，而不是其他浓度的酒精呢？酒精能够吸收细菌蛋白的水分，使其脱水变性凝固，从而达到杀灭细菌的目的。此外，还能抑制细菌的脱氢酶和氧化酶等活性，阻碍了正常代谢抑制细菌生长繁殖。如果使用高浓度酒精，对细菌蛋白脱水过于迅速，使细菌表面蛋白质首先变性凝固，形成了一层坚固的包膜，酒精反而不能很好地渗入细菌内部，以致影响其杀菌能力。 75%的酒精与细菌的渗透压相近，可以在细菌表面蛋白未变性前逐渐不断地向菌体内部渗入，使细菌所有蛋白脱水、变性凝固，最终杀死细菌. 酒精浓度低于75%时，由于渗透性降低，也会影响杀菌能力。也就是说,酒精杀菌消毒能力的强弱与其浓度大小有直接的关系，过高或过低都不行，效果最好的是75%。用75%的酒精消毒多久能起到灭菌效果呢？酒精消毒不是立即就能起作用的，常规消毒，要保留在手上至少30秒，双手来回擦（跟洗手一样）杀灭细菌一般需要30s~2min 灭活病毒一般需要3～10min 杀灭真菌孢子需要较长作用时间，一般30～60min。消毒一次能持续多久呢？严格的话，一般是一小时消毒一次，时间长了酒精挥发，就起不到消毒的作用了。不同浓度的酒精都有什么用途呢？ 95％的酒精用于擦拭紫外线灯。这种酒精在医院常用，而在家庭中则只会将其用于相机镜头的清洁。 70%—75%的酒精用于消毒。这是因为，过高浓度的酒精会在细菌表面形成一层保护膜，阻止其进入细菌体内，难以将细菌彻底杀死。若酒精浓度过低，则虽可进入细菌，但不能将其体内的蛋白质凝固，同样也不能将细菌彻底杀死。 40%—50%的酒精可预防褥疮。长期卧床患者的背、腰、臀部因长期受压可引发褥疮，如按摩时将少许40%—50%的酒精倒入手中，均匀地按摩患者受压部位，就能达到促进局部血液循环，防止褥疮形成的目的。 25%—50%的酒精可用于物理退热。高烧患者可用其擦身，达到降温的目的。因为用酒精擦拭皮肤，能使患者的皮肤血管扩张，增加皮肤的散热能力，其挥发性还能吸收并带走大量的热量，使症状缓解。但酒精浓度不可过高，否则可能会刺激皮肤，并吸收表皮大量的水分。具体方法是：将纱布或小毛巾用酒精蘸湿，拧至半干擦拭颈部、胸部、腋下、四肢和手脚心。

Q-琼脂糖凝胶说明书

Q-琼脂糖凝胶 FF 产品说明书 Q-琼脂糖凝胶 FF 是将三甲胺基烷基季铵基团键合在高流速琼脂糖微球上形成的一种强阴离子交换介质。广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。 1. 外观本品呈白色，球状、无嗅、无味。 2. 理化指标项目指标离子交换基团 -CH 2N +(CH 3)3 离子交换类型强阴离子，可交换离子Cl -基质 6% 交联琼脂糖** 蛋白质吸附容量 120mgHSA/ml 介质总离子交换量 0.18-0.25mmol/ml 介质形状球形粒径 45~165μm 流速 400~700 cm/h* 最大流速750 cm/h 工作温度 4~40 ℃ 耐热 pH7水中120℃30min 耐压 0.3MPa pH 值稳定性 1~14 (短时间，在位清洗)；2~12(长时间) pH 工作范围 2~12 化学稳定性在以下液体中稳定：所有常用的水相缓冲液；1mol/L 氢氧化钠；8mol/L 尿素；6mol/L 盐酸胍；70% 乙醇 *检测条件：层析柱10mm×300mm *柱床高15cm,25℃, 流动相为0.1mol/LNaCl 3. pH 滴定曲线： 4．包装产品以聚胺酯瓶密封包装，外贴标签，注明“品名、体积、颗粒大小” 等内容。

5．运输运输中应避免日晒、雨淋、重压，严禁与有毒、有害物品混运。 6．贮存产品应密封贮存在4℃~25℃（保存溶液为20% 乙醇），通风、干燥、清洁的地方。不能冷冻。用过的柱子贮存在4℃（20% 乙醇）。 7.注意事项本产品避免与氧化剂接触；避免在pH值< 4时长时间暴露(一周,20℃)。 8.保质期：暂定5年。 9.应用本产品具有高化学稳定性、高流速、高载量、好的机械性能、可在位清洗、多次重复使用等特点，非特异性吸附低，回收率高，适用于工业规模生产，适用于在pH工作范围内可形成负离子的生物大分子的分离纯化，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。下面简要介绍介质的使用过程。 9.1 装柱 ⑴让所有的材料和试剂达到室温。配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。 ⑵根据柱子大小取所需量的凝胶，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。匀浆作脱气处理。 ⑶将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。 ⑷用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。 ⑸打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。用2~3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。 9.2平衡让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。平衡液是低浓度的缓冲溶液，如Tris 、PBS等。 9.3上样 ⑴样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。盐浓度太大的样品处理后再配。 ⑵一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产

SDSPE电泳试剂配制

S D S P E电泳试剂配制集团文件发布号：（9816-UATWW-MWUB-WUNN-INNUL-DQQTY-

SDS-PAGE电泳试剂 1) 30%储备胶溶液：丙烯酰胺（Acr）29.0g，亚甲基双丙烯酰（Bis）1.0g，混匀 O，37O C溶解,定容至100 mL,棕色瓶存于4O C；后加ddH 2 O溶解,浓盐酸调pH至,定容至 2) 1.5M Tris-HCl(pH ：Tris 18.17g加ddH 2 100mL； O溶解,浓盐酸调pH至,定容至100 3) 1M Tris-HCl(pH ：Tris 12.11g加ddH 2 mL； 4) 4分离胶缓冲液：溶于1.5M Tris-HCl(pH ，定容至100mL； 5) 4浓缩胶缓冲液：溶于1M Tris-HCl(pH ，定容至100mL； O溶解, 6) 10电泳缓冲液(pH ： Tris 3.029g，甘氨酸14.415g，SDS 1g加ddH 2 定容至100mL； O至10mL； 7) 10%过硫酸铵（Aps,现配）：1g AP加ddH 2 8) 2SDS电泳上样缓冲液：1M Tris-HCl(pH ，-巯基乙醇，SDS 0.6g，甘油mL，%溴酚兰 mL，ddH O ； 2 1.25g，甲醇225 mL，冰醋酸50 mL，9) 考马斯亮兰染色液：考马斯亮兰R 250 ddH O 225mL； 2 O以2∶1∶7配制而成； 10) 脱色液: 甲醇、冰醋酸、ddH 2 11) 分离胶%): ddH O 4mL，30%储备胶5 mL， 4分离胶缓冲液3mL, 10% Aps 2 (现配)，TEMED(N,N,N’,N’-四甲基乙二胺)10μL； O ，30%储备胶，4浓缩胶缓冲液， 10%Aps 50μL，12) 浓缩胶（5％）：ddH 2 TEMED 5μL。 Tricine（三羟甲基氨基甘氨酸）- SDS - PAGE蛋白质电泳 1 Tricine - SDS - PAGE蛋白质电泳溶液准备

SDS-PAGE电泳实验步骤

垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质一、实验目的学习SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS—PAGE)测定蛋白质的分子量的原理和基本操作技术。二、实验原理蛋白质是两性电解质，在一定的pH条件下解离而带电荷。当溶液的pH大于蛋白质的等电点(pI)时，蛋白质本身带负电，在电场中将向正极移动；当溶液的pH小于蛋白质的等电点时，蛋白质带正电，在电场中将向负极移动；蛋白质在特定电场中移动的速度取决于其本身所带的净电荷的多少、蛋白质颗粒的大小和分子形状、电场强度等。聚丙烯酰胺凝胶是由一定量的丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合而成的三维网状孔结构。本实验采用不连续凝胶系统，调整双丙烯酰胺用量的多少，可制成不同孔径的两层凝胶；这样，当含有不同分子量的蛋白质溶液通过这两层凝胶时，受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率。由于上层胶的孔径较大，不同大小的蛋白质分子在通过大孔胶时，受到的阻滞基本相同，因此以相同的速率移动；当进入小孔胶时，分子量大的蛋白质移动速度减慢，因而在两层凝胶的界面处，样品被压缩成很窄的区带。这就是常说的浓缩效应和分子筛效应。同时，在制备上层胶(浓缩胶)和下层胶(分离胶)时，采用两种缓冲体系；上层胶pH=6.7—6.8，下层胶pH＝8.9；Tris —HCI缓冲液中的Tris用于维持溶液的电中性及pH，是缓冲配对离子；CI-是前导离子。在pH6.8时，缓冲液中的Gly-为尾随离子，而在pH＝8.9时，Gly的解离度增加；这样浓缩胶和分离胶之间pH的不连续性，控制了慢离子的解离度，进而达到控制其有效迁移率之目的。不同蛋白质具有不同的等电点，在进入分离胶后，各种蛋白质由于所带的静电荷不同，而有不同的迁移率。由于在聚丙烯酰胺凝胶电泳中存在的浓缩效应，分子筛效应及电荷效应，使不同的蛋白质在同一电场中达到有效的分离。如果在聚丙烯酰胺凝胶中加入一定浓度的十二烷基硫酸钠(SDS)，由于SDS带有大量的负电荷，且这种阴离子表面活性剂能使蛋白质变性，特别是在强还原剂如巯基乙醇存在下，蛋白质分子内的二硫键被还原，肽链完全伸展，使蛋白质分子与SDS充分结合，形成带负电性的蛋白质—SDS复合物；此时，蛋白质分子上所带的负电荷量远远超过蛋白质分子原有的电荷量，掩盖了不同蛋白质间所带电荷上的差异。蛋白质分子量愈小，在电场中移动得愈快；反之，愈慢。蛋白质的分子量与电泳迁移率之间的关系是： M r =K(10-b·m) logM r =LogK—b·R m ，式中M r ——蛋白质的分子量； logK——截距； b——斜率； R m ——相对迁移率。实验证明，蛋白质分子量在15,000—200,000的范围内，电泳迁移率与分子量

医用酒精浓度

医用酒精的主要成分是乙醇，并且它是混合物。医用酒精是用淀粉类植物经糖化再发酵经蒸馏制成，相当于制酒的过程，但蒸馏温度比酒低，蒸馏次数比酒多，酒精度高，制成品出量高，含酒精以外的工业酒精和医用酒精的区别 1、纯度医用酒精是指医学上使用的酒精，医用酒精的纯度有多种，常见的为95%和75%。工业酒精是指工业上使用的酒精，工业酒精的纯度一般为95%和99% 2、毒性医用酒精由于浓度低，可以用于人体的消毒。工业酒精不能用于人体的消毒，因为甲醇会导致中毒，用于皮肤消毒也会有部分被皮肤吸收，中毒后严重的可导致失明甚至死亡。 3、用途医用酒精主要用于消毒、杀菌。工业酒精可用于印刷、电子、五金、香料、化工合成、医药合成等方面。可用作清洗剂、溶剂。消毒机理要使蛋白质变性，就要让蜷曲、螺旋的蛋白质分子长链舒展、松弛，其中关键是破坏形成蜷曲和螺旋的各种力。酒精分子有两个

末端，一端是憎水的(一C2H5)，可以破坏蛋白质内部憎水基团之间的吸引力；一端是亲水的(一OH)，但它难以破坏蛋白质外部的亲水基团之间的吸引力。另一方面。水分子虽然可以松弛蛋白质亲水基团之间的吸引力，但它即使钻进细菌内部，也无法破坏其蛋白质中憎水基团之间的吸引力。所以，纯酒精或水都不足以使细菌内的蛋白质变性，只有酒精和水共同存在，同时使保持蛋白质几何形状的各种吸引力松弛，蛋白质才会失去生理活性。因此，只有一定浓度的酒精溶液，才能达到良好的消毒杀菌目的。不同浓度的酒精不同浓度酒精的作用（以下的浓度均是指体积分数） 95%的酒精常用于擦拭紫外线灯。这种酒精在医院常用，而在家庭中则只会将其用于相机镜头的清洁。 75%的酒精用于消毒。这是因为，过高浓度的酒精会在细菌表面形成一层保护膜，阻止其进入细菌体内，难以将细菌彻底杀死。若酒精浓度过低，虽可进入细菌，但不能将其体内的蛋白质凝固，同样也不能将细菌彻底杀死。 40%～50%的酒精可预防褥疮。长期卧床患者的背、腰、臀部因长期受压可引发褥疮，如按摩时将少许40%～50%的酒精倒入手中，均匀地按摩患者受压部位，就能达到促进局部血液循环，防止褥疮形成的目的。

琼脂糖凝胶电泳配方与步骤

?RNA琼脂糖凝胶电泳：配制： 1.0.5M EDTA（pH=8.0）： 100ml：称取18.61g Na2EDTA·2H2O（分子量372.24），加80ml ddH2O剧烈搅拌，用NaOH调节PH值至8.0（约需2g NaOH）.高压灭菌，室温保存。 2.50×TAE loading buffer:（Tris acetate-EDTA buffer）电泳缓冲液组分：2M Tris-乙酸；100mM EDTA（pH=8.0） 500mL:称121.1g Trisbase（分子量121.14），加800ml ddH2O溶解，加57.1ml 乙酸和50ml0.5M EDTA溶液（pH=8.0），搅拌，ddH2O定容至500mL.室温保存。 3.1×TAE loading buffer: 取20ml50×TAE，ddH2O定容至1L.室温保存。 4.100×Sybergreen： 500ul：取495ul1×TAE于1.5ml离心管，加入5ul Sybergreen原液混匀，4℃锡纸避光保存。注意：Sybergreen原液需稀释10000倍； 6×DNA loading buffer上样缓冲液需稀释六倍，最终稀释倍数应不小于1×。步骤： 1.制备1%琼脂糖凝胶(大胶用70ml,小胶用50ml，我们用30ml): 称0.3g琼脂糖置于100ml锥形瓶中，加入30ml1×TAE，瓶口倒扣小烧杯。微波炉加热煮沸3次，至琼脂糖全部融化，摇匀，即成1.0%琼脂糖凝胶液。 2.胶板制备: 取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干,放入制胶玻璃板.取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好,形成模子.将内槽置于水平位置,并放好梳子. 将冷却到65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢展开,直到整个玻璃板表面形成均匀胶层.室温下静置直至凝胶完全凝固,垂直轻拔梳子,取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中.添加1×TAE电泳缓冲液至没过胶板为止. 3.加样: 样品制备：（10ul体系/样品槽）于0.25ml离心管中样品RNA（最后加）:2ul/3ul/5ul 6×DNA loading buffer:10/6=1.7ul 100×Sybergreen：0.1ul DEPC水：至10ul (注意:加样前要先记下加样的顺序).分别将样品加入胶板的样品小槽内,每加完一个样品,应更换一个枪头,以防污染,加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面. 4.电泳: 加样后的凝胶板立即通电进行电泳,电压60-100V,样品由负极(黑色)向正极(红色)方向移动.电压升高,琼脂糖凝胶的有效分离范围降低.当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约1cm处时,停止电泳. 5.电泳完毕后,取出凝胶,利用科212凝胶成像系统,在紫外灯（trans UV）下观察拍照保存.DNA存在则显示出红色荧光条带.RNA完美提出应该是三条带：28，18,5.8。 28和18比较亮,而且28是18亮度的2倍,5.8基本很模糊，可有可无