实验一 巨噬细胞吞噬功能实验
实验一巨噬细胞吞噬功能实验
1、【实验原理】
(1)巨噬细胞作为单核吞噬细胞系统的主要细胞，具有活跃的吞噬功能。能清除体内抗原物质及变性的细胞，在特异性及非特异性免疫中均起重要作用。MΦ受抗原刺激后活化，可使其吞噬功能明显增强。
(2)此实验采用体内法，即：在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠腹腔注射鸡红细胞30min后处死小鼠，取出腹腔液，以冷美蓝染色，油镜下计数吞噬鸡红细胞的百分数，及观察巨噬细胞中内因被杀死而染为蓝色的鸡红细胞的形态、数目，以判断巨噬细胞中的杀伤能力，由此间接地测定机体的非特异免疫水平。
2、【实验步骤】
（1）试验前3d，小白鼠腹腔注射6％无菌淀粉液1ml，诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。
（2）实验时，每只小鼠腹腔注射鸡红细胞液1ml，轻揉腹部，使红细胞在腹腔中分布均匀，利于吞噬
（3）30min后，将小鼠拉颈处死，固定，打开腹腔暴露肠管，用吸管取出腹腔液，均匀涂布于载玻片上，然后再滴一小滴0.03％冷美蓝溶液，盖上盖玻片。（4）低倍镜下找到观察区域后，换高倍镜下进行观察，计数
3、【实验结果】
4、【结果分析】
（1）如图所示，在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠注射鸡红细胞后镜检腹腔液，可观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，并且可以看到部分鸡红细胞聚集到吞噬细胞附近。
（2）镜下可见吞噬细胞核呈蓝色，被吞噬的鸡红细胞呈椭圆形，其胞浆呈红色而核被染成蓝色。
(3)由于未将腹腔液和冷美蓝溶液充分混合均匀，使得视野中出现大片深染区域。总体实验结果较好，视野中央可见清晰的吞噬了鸡红细胞的巨噬细胞。
5、【注意事项】
（1）涂片的薄厚要适当，否则影响计数。
（2）小鼠腹腔注射时不要刺伤内脏。
（3）如小鼠腹腔液过少，可注入适量生理盐水。
（4）剪开小鼠腹腔时应避免出血，否则将影响试验结果。
（5）被吞噬的鸡红细胞时间过长可被消化，时间过短未被吞噬，必须掌握好吞噬作用时间。
实验二双向琼脂扩散实验
1、【实验原理】
（1）可溶性抗原与相应抗体特异性结合，两者比例适当并有电解质存在及一定的温度条件下，经一定的时间，可形成肉眼可见的沉淀线/环的现象，称为沉淀反应。
（2）琼脂扩散是指为可溶性抗原与抗体在琼脂凝胶中所呈现的一种沉淀反应。当对应的抗原、抗体在半固体琼脂终相遇，且二者比例适当时，便出现可见的白色沉淀线，这组沉淀线是一组抗原、抗体的特异性复合物。当琼脂中有多组不同的抗原、抗体存在时，便各自依其扩散速度的差异，再适当的部位形成独立的沉淀线。因此，琼脂扩散不仅用于疾病的诊断，更广泛地用于抗原成分的分析。（3）双向琼脂扩散试验是定性实验。将可溶性抗原与相应抗体分别加人琼脂板上的孔内，两者均可扩散，在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。如果不是相应的抗原与抗体，就不出现沉淀线。本试验常用于分析抗原抗体的纯度及相互关系。
2、【实验步骤】
（1）制板：将熔化的1%琼脂加在玻片上，3ml/板。
（2）打孔：待琼脂凝固后，在板上打孔。
（3）加样：在空中加入相应抗原、抗体。
（4）结果观察将琼脂板放入湿盒内置 37c 温箱中 24 小时后取出观察结果。
3、【实验结果】
4、【结果分析】
（1）如图所示，在中央孔与添加抗原1的孔之间出现沉淀线，有抗原抗体反应，为阳性反应，说明抗原1与抗体相对应。中央孔与添加抗原2的孔之间没有沉淀线，说明抗原2与抗体之间不相对应。
（2）抗体与抗原发生扩散时，随扩散距离的增大浓度降低，在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。当有沉淀线出现时，说明有抗原抗体反应。
5、【注意事项】
（1）加样时不要将琼脂划破，以免影响沉淀线的形成。
（2）反应时间要适宜，时间过长，沉淀线可解离而导致假阴性、不出现或不清楚。
（3）加样时不同浓度抗体和抗原不要混淆，影响试验结果。
（4）试验前应做预试验，确定抗体的稀释度。
实验一 巨噬细胞吞噬功能实验
实验一巨噬细胞吞噬功能实验 1、【实验原理】 (1)巨噬细胞作为单核吞噬细胞系统的主要细胞，具有活跃的吞噬功能。能清除体内抗原物质及变性的细胞，在特异性及非特异性免疫中均起重要作用。MΦ受抗原刺激后活化，可使其吞噬功能明显增强。 (2)此实验采用体内法，即： 在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠腹腔注射鸡红细胞30min 后处死小鼠，取出腹腔液，以冷美蓝染色，油镜下计数吞噬鸡红细胞的百分数，及观察巨噬细胞中内因被杀死而染为蓝色的鸡红细胞的形态、数目，以判断巨噬细胞中的杀伤能力，由此间接地测定机体的非特异免疫水平。 2、【实验步骤】 （1）试验前3d，小白鼠腹腔注射6％无菌淀粉液1ml，诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。 （2）实验时，每只小鼠腹腔注射鸡红细胞液1ml，轻揉腹部，使红细胞在腹腔中分布均匀，利于吞噬 （3）30min后，将小鼠拉颈处死，固定，打开腹腔暴露肠管，用吸管取出腹腔液，均匀涂布于载玻片上，然后再滴一小滴 0.03％xx溶液，盖上盖玻片。 （4）低倍镜下找到观察区域后，换高倍镜下进行观察，计数 3、【实验结果】 4、【结果分析】 （1）如图所示，在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠注射鸡红细胞后镜检腹腔液，可观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，并且可以看到部分鸡红细胞聚集到吞噬细胞附近。
（2）镜下可见吞噬细胞核呈蓝色，被吞噬的鸡红细胞呈椭圆形，其胞浆呈红色而核被染成蓝色。 (3)由于未将腹腔液和冷美蓝溶液充分混合均匀，使得视野中出现大片深染区域。 总体实验结果较好，视野中央可见清晰的吞噬了鸡红细胞的巨噬细胞。 5、【注意事项】 （1）涂片的薄厚要适当，否则影响计数。 （2）小鼠腹腔注射时不要刺伤内脏。 （3）如小鼠腹腔液过少，可注入适量生理盐水。 （4）剪开小鼠腹腔时应避免出血，否则将影响试验结果。 （5）被吞噬的鸡红细胞时间过长可被消化，时间过短未被吞噬，必须掌握好吞噬作用时间。实验二双向琼脂扩散实验 1、【实验原理】 （1）可溶性抗原与相应抗体特异性结合，两者比例适当并有电解质存在及一定的温度条件下，经一定的时间，可形成肉眼可见的沉淀线/环的现象，称为沉淀反应。 （2）琼脂扩散是指为可溶性抗原与抗体在琼脂凝胶中所呈现的一种沉淀反应。 当对应的抗原、抗体在半固体琼脂终相遇，且二者比例适当时，便出现可见的白色沉淀线，这组沉淀线是一组抗原、抗体的特异性复合物。当琼脂中有多组不同的抗原、抗体存在时，便各自依其扩散速度的差异，再适当的部位形成独立的沉淀线。因此，琼脂扩散不仅用于疾病的诊断，更广泛地用于抗原成分的分析。 （3）双向琼脂扩散试验是定性实验。将可溶性抗原与相应抗体分别加人琼脂板上的孔内，两者均可扩散，在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。如
巨噬细胞
巨噬细胞 一般为圆形或椭圆形，功能活跃时，可呈多突形。细胞核圆形或椭圆形，染色较 深。细胞质较丰富，功能活跃时内含有许多颗粒或空泡。具有变形运动和吞噬能力。 组织细胞或巨噬细胞：有吞噬能力，细胞形状不一，亦为多突起的星形细 胞，注意与成纤维细胞的区别在于：细胞质中含有吞噬的台盼蓝颗粒。细胞质染 色较深，细胞轮廓较明显。细胞核较小，圆形或卵圆形，染色较深，核内的结构 看不清。 单核-巨噬细胞包括骨髓中的前单核细胞、外周血中的单核细胞、以及组织内 的巨噬细胞(Mφ)。Mφ来源于血液中的单核细胞，而单核细胞又来源于骨髓中的 前体细胞。单核-巨噬细胞是自体重要的免疫细胞，具有抗感染、抗肿瘤和免疫调 节等重要作用。 由游出血管的单核细胞衍变而成的细胞。体积较大，形状不规则，常伸出短而钝 的突起，作变形运动，能吞噬死亡的细胞和侵入体内的细菌，形成吞噬体，在免疫反 应中起重要作用。 在疏松结缔组织内固定的巨噬细胞又称组织细胞，常沿胶原纤维散在分布。形态多样可变，常有伪足；核小深染，较圆，偏心位，核仁不明显；胞质丰富，嗜酸 性，含空泡和异物颗粒。表面有皱褶、小泡、微绒毛；胞质有初、次级溶酶体、 吞噬体、吞饮小泡和残余体；膜附近有许多微管微丝。 功能： （1）趋化性定向运动：沿着某些化学物质的浓度梯度进行定向移动，聚集 到释放这些物质的病变部位。 （2）吞噬作用：伸出伪足包围细菌、衰老细胞等，进而摄入胞质内形成吞 噬体或吞饮小泡。与初级溶酶体融合，形成次级溶酶体后被溶酶体酶消化分解。 侵入人体的细菌、病霉或异物，及人体产生的衰老、损伤细胞和坏死组织等，均 需经吞噬细胞吞噬、消化，予以清除。所以，吞噬细胞又被誉为“人体健康的卫士”。 吞噬细胞从形态上可分为大吞噬细胞和小吞噬细胞两类。大吞噬细胞包括单核细 胞和巨噬细胞。单核细胞占自细胞总数的3～8％，是血液中最大的细胞，直径为14～20微米左右，圆形或卵圆形。细胞内有许多细小的嗜天青颗粒，此即溶酶体，内含 过氧化物酶、酸性磷酸酶、非特异性酯酶和溶菌酶等。寿命可长达75天左右。
白细胞
白细胞如何穿越血管内皮 文摘 要点?介绍?白细胞与血管壁的交互?白细胞迁移?非正统的溢出机制?结束语??确认?作者信息术语表的引用 免疫反应的能力取决于白细胞从流通到组织中。这是通过机制,指导白细胞向右退出网站,允许他们穿过血管壁的屏障。这个过程是由内皮细胞和白细胞之间的协调一致的行动,即内皮细胞激活白细胞,直接溢出网站,和白细胞反过来指导内皮细胞为轮回打开一个路径。本文重点是最近描述机制,控制和为白细胞通过内皮屏障打开出口路线。 主题: ?感染细胞粘附 ?细胞迁移? 炎症 1 Figure 1 2 Figure 2
3 Figure 3 炎症反应引起的传染性病原体或组织损伤引发的释放其分子模式(pamp)微生物或有关的分子模式(抑制)受伤的组织细胞。这些危险的信号刺激居民先天免疫系统的细胞,如肥大细胞、巨噬细胞和树突细胞,导致细胞因子的分泌和附近其他促炎症介质激活内皮细胞的微脉管系统。因此,一连串的事件被触发,使循环白细胞识别中的血管内皮炎症组织和与血管壁通过一系列步骤称为捕获,滚动,白细胞逮捕、爬行网站的退出,并通过内皮细胞的屏障,轮回的周和基底膜(图1)。 图1:白细胞外渗的多步级联
|一系列细胞粘附内皮细胞受体面板的底部(如图所示)介导的捕获、滚动、逮捕和爬行的白细胞腔的内皮细胞表面。这是实际的前奏轮回通过内皮屏障——血球渗出的过程。白细胞血球渗出通常但也可以发生在少数的情况下通过transcellular路线。而轮回通过内皮屏障大约需要2 - 3分钟,白细胞需要15 - 20分钟克服基底膜,导致瞬态积累内
皮细胞和基底膜之间的白细胞。的粘附受体参与paracellular血球渗出也有关transcellular血球渗出。血管内皮钙粘蛋白(VE-cadherin)是专门参与paracellular路线,轮回的功能作为一个障碍。细胞表面蛋白的唯一候选人可能只参与transcellular血球渗出是原生质膜囊泡蛋白1(pv),这是一个重要的组成部分,如窗的气孔膜片。由于空间限制,内皮细胞粘附受体所示的列表不是详尽的,而是代表了最充分的研究。b |血球渗出过程需要许多功能由白细胞和内皮细胞:停止管腔内的爬行在合适的退出网站;放松内皮细胞接触,防止血浆泄漏,延长膜表面积在内皮细胞连接通过动员外侧边界回收舱(LBRC);积极通过交界裂白细胞游走,密封后结的血球渗出。最后,从内皮细胞白细胞分离之后,轮回穿过基底膜。CD99L2,CD99 antigen-like蛋白2;西法,内皮cell-selective粘附分子;ICAM,细胞间粘附分子;果酱,联接的粘附分子;LFA1,淋巴细胞抗原1;关联PECAM1,血小板内皮细胞粘附分子1;VCAM1、血管细胞粘附分子1。?下内皮selectins E-selectin和P-selectin表面诱导内皮细胞在炎症组织。 Selectins调解捕获的白细胞快速流动blood1,2。这短暂的互动,结合血液流动,结 果白细胞滚动的顶端内皮细胞表面,导致拉的长膜束缚后方的白细胞。这些束缚 环绕白细胞由于滚动运动,从而表现为“灾难”前面的白细胞,它支持process3放缓。趋化因子和其他化学引诱物,如C5a,某些白细胞三烯和激肽释放酶-内皮细胞 产生的或来自炎症细胞并通过或沉积在transcytosed提出了内皮细胞,内皮细胞 表面并触发滚动leukocytes4的激活。这导致白细胞整合蛋白的激活,结合免疫球 蛋白超家族的成员,如细胞间粘附分子1(ICAM1)和血管细胞粘附分子1(VCAM1) 诱导内皮细胞上的表达炎性cytokines5。这样的交互协调公司的白细胞粘附和传 播内皮细胞表面,这使白细胞在血管支架表面爬行,直到他们移居通过内皮屏障在 适当退出网站。退出网站通常是暂时性的打开的内皮细胞连接内皮信号机制引发 的白细胞。另外,白细胞可以偶尔直接穿过身体的内皮细胞。第一个概念启动迁 移的机制,通过这些不同的路线。几个内皮细胞粘附分子和受体参与这血球渗出 的过程,如血小板内皮细胞粘附分子1(PECAM1)6,联接的粘附分子(堵塞)7、内皮cell-selective粘附分子(翻)8日CD99(Ref。9),脊髓灰质炎病毒受体(PVR)10和其 他人。所有这些都是通过paracellular参与轮回路线,和一些似乎也参与
细胞生物学 课后习题
第三章细胞生物学研究方法 1.细胞形态结构的观察方法：光学显微镜技术、电子显微镜技术、扫描隧道显微镜 2.细胞组分的分析方法： ○1离心分离技术○2细胞内核酸、蛋白质、酶、糖与脂类等的显示方法 ○3特异蛋白抗原的定位与定性○4细胞内特异核酸的定位于定性 ○5反射自显影技术○6定量细胞化学分析技术 第四章细胞质膜（重点：1、3题，2题可不看） 1、膜脂有哪几种基本类型？它们各自的功能？ （1）基本类型：甘油磷脂、糖脂、胆固醇 （2）功能： 甘油磷脂不仅是生物膜的基本成分，其中的某些成分如PI等在细胞信号转导中起重要作用鞘脂：其分子结构与甘油磷脂非常相似，可以与甘油磷脂共同组成生物膜。 胆固醇：除了作为生物膜的主要结构成分外，还是很多重要的生物活性分子的前体化合物，它还可以与发育调控的重要信号分子Hedgehog共价结合。 3、细胞表面有哪几种常见的特化结构？细胞红细胞膜骨架的基本结构与功能是什么？ 细胞表面特化结构主要包括：膜骨架、鞭毛、纤毛、变形足和微绒毛，都是细胞膜与膜内的细胞骨架纤维形成的复合结构，分别于维持细胞的形态、细胞的运动、细胞与环境的物质交换等功能有关。 第五章物质的跨膜运输 1、比较载体蛋白与通道蛋白的特点。 载体蛋白相当于结合在细胞质膜上的酶，有特异性结合位点，可同特异性底物结合，一种特异性载体只转运一种类型的分子或离子；转运过程类似于酶酶与底物作用的饱和动力学特征；既可被底物类似物竞争性地抑制，又可被某种抑制剂非竞争性抑制以及对pH有依赖性等，因此有人将载体蛋白称为通透酶。与酶不同的是，载体蛋白对转运的溶质不进行任何共价修饰。 通道蛋白所介导的被动运输不需与溶质分子结合，允许大小和带电荷适宜的离子通过。绝大多数的通道蛋白形成有离子选择性的、门控的跨膜通道。因为这些通道蛋白几乎都与离子的转运有关，所以又称离子通道。与载体蛋白相比，三个显著特征：具有极高的转运速率，离子通道没有饱和值，离子通道是门控的。 2、试述胞吞作用的类型和功能。 （1）吞噬作用：是原生生物摄取食物的一种方式，其作用不仅是摄取营养物，主要是清除侵染机体的病原体以及衰老或凋亡的细胞，如人的巨噬细胞每天通过吞噬作用清 除10的11次方个衰老的血红细胞。 （2）胞饮作用：是细胞内吞作用从外界获取物质及液体的的一种类型，是细胞外的微粒通过细胞膜的内陷包裹形成小囊泡（胞饮囊泡），并最终和溶酶体相结合并将囊泡内部的物质水解或者分解的过程。 3、比较胞饮作用和吞噬作用的异同。 1）胞吞泡的大小不同，胞饮泡直径一般小于150nm，而吞噬泡直径往往大于250nm。 2）胞饮作用是一个连续发生的过程，所有真核细胞都能通过胞饮作用连续摄入溶质和分子；吞噬作用首先需要被吞噬物与细胞表面结合并激活细胞表面受体，是一个信号触发过程。 3）胞饮泡的形成需要网格蛋白、结合素蛋白和结合蛋白等的帮助；吞噬泡的形成则需要微丝及其结合蛋白的帮助，在多细胞动物体内，只有某些特化细胞具有吞噬功能。
临床医学检验基础知识讲解：巨噬细胞功能的检测
人巨噬细胞可从外周血或经斑蝥激发的皮疱液中获取，也可从肺灌洗液或患者腹膜透析液中分离，但操作繁锁，得量不多。许多实验室在进行基础或配合临床研究巨噬细胞功能及其与疾病的关系、或筛检免疫增强药物和探讨其作用机制时，常选用小鼠腹腔巨噬细胞为研究对象，常用的检测方法如下。 (一)炭粒廓清试验 正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除90%炭粒，脾巨噬细胞约吞噬清除10%炭粒，据此给小鼠定量静脉注射印度墨汁(炭粒悬液)，间隔一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒的浓度，根据血流中炭粒被廓清的速度，判断巨噬细胞的功能。 (二)吞噬功能的检测 巨噬细胞具有较强的吞噬功能，实验室常用比细菌大的细胞性抗原作为被吞噬颗粒，如鸡红细胞。其检测原理是将受检细胞与适量的颗粒抗原混合后，置37℃保温0.5～1h，其间时加振摇，最后离心取测定细胞制成涂片，染色镜检，分别计数出吞噬百分比和吞噬指数。各实验室应根据自己的条件建立正常参考值。 (三)巨噬细胞溶酶体酶的测定 巨噬细胞富含溶酶体酶，如酸性磷酸酶、非特异性酯酶、溶菌酶等，测定这些酶的活性也是衡量巨噬细胞功能的实用指标之一。 1.酸磷酸酶的测定 (1)硝酸铅法：本法优点是用普通试剂，价格便宜，一般实验室均有条件做，封片后可较长时间保存，并可用电子显微镜研究观察细胞的超微结构。缺点是细胞必需固定，而且固定条件要求严格，如处理不当酶活性易消失，反应步骤也较多。 该法基本原理是在适当的酶性条件下，巨噬细胞内的酸性磷酸酶能使β甘油磷酸钠水解成磷酸盐后，后者与硝酸铅反应产生磷酸铅，而磷酸铅再与硫酸铵反应则形成黑色硫化铅，沉积在胞浆内酸所在处，显示棕黑色颗粒。酶活性强弱可根据颗粒的数量和粗细不同而分级判断，颗粒数量少则细的为+，颗粒多而粗的为++，颗粒很多且很粗的为+++。 (2)偶氮法：本法操作简便，反应液中的底物α-萘磷酸钠被酸性磷酸酶分解后，形成萘酚和磷酸盐，而萘酚结构中的羟基(-OH)邻近的活泼碳原子，立即与偶氮染料起反应，而产生鲜艳的棕色沉积在酶所在处，缺点是封片后保存时间短。 2.非特异性酶的测定该酶比较稳定，酶活性丧失较慢，细胞经涂片干燥，置室温至少可保存半天至一天，因此特别有利于临床检验室采用。 常用α-萘醋酸法，该酶可将-萘醋酸分解成萘酚和醋酸，萘酚迅速与偶染料结合，形成有色反应物而沉积。 (四)巨噬细胞促凝血活性测定 激活巨噬细胞可产生一种与膜结合的凝血活性因子，加速正常血浆的凝固，为此取已经37℃预温的正常兔血浆和CaC12混合液，加入经粘附单层巨噬细胞的试管中，移置37℃，即时记录血浆凝固时间。实验证明当巨噬细胞与LPS、肿瘤相关抗原或HbsAg等温育后，可见血浆凝固时间明显缩短。本法稳定方便，也是检测不同疾病患者巨噬细胞功能的指标之一。 1 2 下页
细胞膜的渗透性及巨噬细胞的吞噬作用
华南师范大学实验报告 学生姓名何茂辉学号20062501302 专业生物科学年级、班级06科三 课程名称细胞生物学实验实验项目 实验类型□验证□设计□综合实验时间09 年 5 月19 日 实验指导老师尤蓉、周仁超实验评分 细胞膜的渗透性及巨噬细胞的吞噬作用 实验目的： 1.通过红细胞的溶血过程的观察,了解细胞膜的渗透性及各种物质进入细胞膜 的速度。 2.通过小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程，了解巨噬细胞对大分子或颗粒物质 的内吞作用。 实验原理： 1.红细胞在低渗液中，细胞很快吸水而胀裂，称为溶血。在等渗液中，由于 有些溶质会进入红细胞内、引起细胞渗透压升高，细胞也会吸水胀裂，由于各种物质透入细胞的速度不同，溶血的时间不同。 2.高等动物具有大小两类吞噬细胞(即巨噬细胞和嗜中性粒细胞)，专司吞噬 作用，为非持异免疫功能的重要组成部分。 3.小鼠腹腔注射淀粉肉汤液，可诱导巨噬细胞大量产生,增强巨噬细胞吞噬活 性。 实验步骤： 细胞膜的渗透性(兔红细胞) 1.取1mL兔的抗凝全血于50mL小烧杯中，再加入10mL0.17 mol/L氯化钠，稀 释兔血制成兔的红细胞悬液，观察它的特点为一种不透明的红色浑浊液体。 2.取1支试管加入10ml蒸馏水，再加入1ml红细胞悬液，摇动2次混匀，可 见溶液由不透明的红色迅速变成红色澄清液 3.取6支试管贴上标签，依次加入下列等渗溶液10ml：①0.32M甲醇、②0.32M 乙醇、③0.32M丙醇、④0.32M乙二醇、⑤0.32M甘油、⑥0.32M葡萄
糖 4.向每支试管加入1ml红细胞悬液，摇动2次混匀，观察是否有溶血现象发生， 记下溶血时间并给予分析 小鼠巨噬细胞的吞噬作用观察 1.实验前一天向小白鼠腹腔注射6％淀粉肉汤液(含台盼蓝)1ml 2.鸡红细胞悬液制备：取抗凝全血1mL，移入10mL离心管,加入4mL生理盐水 混匀, 1500rpm离心5 min。洗涤2次,最后按压积红细胞体积加生理盐水配成1%鸡红细胞悬液 3.小鼠腹腔注射1％的鸡红细胞悬液1ml，轻揉腹部使鸡红细胞分散 4.20～30min后,颈椎脱臼法处死小鼠 5.将小鼠置于解剖盘中，剪开腹腔，把内脏推向一侧，加适量生理盐水与腹 腔液混匀,用吸管吸取腹腔液于试管或小烧杯中备用 6.吸取腹腔液1～2滴，制作临时装片 7.镜检 结果与分析： 1、 2、
巨噬细胞吞噬细胞功能实验
实验一巨噬细胞吞噬细胞功能实验 原理：巨噬细胞具有活跃的吞噬功能，能清除体内抗原物质及变性的细胞，在特异性及非特异性免疫中均起重要作用。巨噬细胞受抗原刺激后活化，可使其吞噬功能明显增强。此次实验我们用体内法来介绍巨噬细胞的吞噬功能。 体内法：在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠腹腔注射鸡红细胞，30min后处死小鼠，取出腹腔液，以冷美兰染色，显微镜下计数吞噬鸡红细胞的百分数，及观察巨噬细胞内被杀死而染为紫色的鸡红细胞的形态、数目，以判断巨噬细胞的杀伤能力，由此间接地测定机体的非特异性免疫水平。 方法：（1）试验前3天，小白鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml，诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。（2）实验时，每只小鼠腹腔注射鸡红细胞1ml，轻柔腹部，使鸡红细胞在腹腔中分布均匀，利于吞噬。 （3）30min后，将小鼠拉颈处死，固定，打开腹腔暴露肠管，用滴管取出腹腔液，均匀涂布于载玻片上，然后再滴一小滴0.06%冷美兰溶液，盖上盖玻片 （4）高倍镜下进行观察，计数。 实验结果：100个巨噬细胞中已吞噬了鸡红细胞的 巨噬细胞的数目 吞噬百分率 = ———————————————————×100% 100个巨噬细胞 100个已吞噬鸡红细胞的巨噬细胞中 鸡红细胞的数目 吞噬指数 = ———————————————————×100% 100个已经吞噬了鸡红细胞的巨噬细胞 结果分析：正常值 吞噬百分率：62.77±1.38 吞噬指数：1.058±0.049 我们的实验结果偏低，原因可能是腹腔注射时没有完全注射到腹腔内，部分残留在腹腔壁上。 实验二沉淀反应（双向琼脂扩散实验） 原理：双向琼脂扩散试验是定性实验。将可溶性抗原与相应抗体与相应抗体分别加入琼脂板上的孔内，两者均可扩散，在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。如果不是相应的抗原与抗体，就不出现沉淀线。本试验常用于分析抗原抗体的纯度及相互关系。 方法：（1）将熔化的1%琼脂加在玻片上，3ml/板。 （2）待琼脂凝固后，在板上打孔。 （3）中央孔加抗体，上下孔加抗原1，左右孔加抗原2，每孔10μl。 （4）将琼脂板置于湿盒内，37℃ 24h后观察结果。 结果：在中央孔与周围孔之间，如出现沉淀线，则为阳性反应，提示有相应抗体与抗原反应。结果分析：（1）琼脂铺板应一次铺成，均匀平滑。 （2）打孔时要垂直打孔，防止孔壁破裂。 （3）加样时避免样品量过多溢出，影响沉淀线的生成。
吞噬细胞吞噬功能的检测
吞噬细胞吞噬功能的检测 一、小吞噬细胞的吞噬作用 (一) 体内法 [材料] (1) 动物: 豚鼠。 (2) 菌种: 金黄色葡萄球菌菌液。 (3) 无菌注射器及针头、无菌肉汤、玻片、瑞氏染液。 [方法] (1) 第1天注射无菌肉汤10 ml 于豚鼠腹腔，隔24 h 同法注射肉汤5 ml。20 min 后，再注射金黄色葡萄球菌菌液Iml 于上述部位。 (2) 注射完毕，每隔20 min 用注射器抽取腹腔液，并做推片，待其自千后，用瑞氏染色法染色，镜检时见金黄色葡萄球菌被小吞噬细胞吞入胞浆时为宜。 (3) 瑞氏染色方法如下: 将瑞氏染液滴加数滴于涂片上。加入等量的蒸馏水，轻轻混匀，染5 -10 min。用蒸馏水(或自来水) 冲洗。待干或轻轻用吸水纸将涂片吸干，油镜检查。 [结果] 染色后，可见小吞噬细胞的核及被吞噬的细菌呈深紫蓝色，而小吞噬细胞的胞浆为紫色。 (二) 体外法 [目的] 1.熟悉检测白细胞吞噬作用的原理与实验方法。 2.通过吞噬细胞的吞噬功能检测了解机体的非特异性免疫功能。 3.掌握显微镜、油浸镜的使用与保护方法。 [原理] 中性粒细胞具有在噬杀菌功能，当与颗粒物质(如金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌等)混合后，孵育一定时间，颗粒物质被中性粒细胞吞噬。根据吞噬率和吞噬指数可反映该细胞的吞噬功能，但不能反映其杀伤功能。 [材料] (1) 3.8% 枸橼酸钠。 (2) 碘伏、无菌注射器及针头、吸管、试管、载玻片、温箱等。 (3)瑞氏染液 (4) 葡萄球菌悬液: 取白色葡萄球菌在琼脂斜面上生长24 h的培养物，用无菌生理盐水刮洗下菌苔，用PBS洗涤2次，最后用比浊法将菌液调整至5 x10 7ml悬液，100℃加热15min，置4℃冰箱备用。 [方法]
人体八种白细胞类型
白细胞亦称白血球，它的功能是使机体免受病原体（细菌和病毒）、癌细胞、异物侵入，是人体的守卫者。白细胞来源于骨髓中的造血干细胞，在骨髓中发育后进入血液和淋巴液循环，也存在于血管和淋巴管外的组织中。 人体中白细胞有八种类型，具体细胞类型如下。 1 巨噬细胞 巨噬细胞是个头最大的白细胞。 巨噬细胞由单核细胞分化发育而来，单核细胞几乎存在于所有组织中。巨噬细胞对细胞残体和病原体进行吞噬和消化，这一过程称为吞噬作用。巨噬细胞内的溶酶体会释放溶菌酶破坏病原体。吞噬细胞还是参与适应性免疫的专职抗原提呈细胞。除了免疫功能外，吞噬细胞还扮演者促进生殖 细胞发育、性激素、骨组织的再吸收以及血络的形成。巨噬细胞如下图所示： 2 树突状细胞 类似于吞噬细胞，树突状细胞也是一种单核细胞。树突状细胞成熟时会伸出许多树突样或伪足样突起，与神经元的树突相似。树突状细胞通常存在于跟外界接触的皮膜(黏膜)部位，比如皮肤、内层的鼻子、肺、胃与肠的内层。树突状细胞通过摄取、加工处理和递呈抗原到淋巴结和淋巴器官 中的淋巴细胞帮助机体识别病原体，启动特异性免疫应答。树突状细胞如下图所示： 3 B淋巴细胞 B细胞是淋巴细胞的成分之一。B细胞受抗原刺激后，会增合成和分泌一种特殊的蛋白质——抗体对抗病原体，抗体与抗原结合帮助机体识别病原体，并使之成为靶细胞被其他免疫细胞清除。被称为记忆细胞的B细胞可以保持对病原菌生物分子标记物的记忆，使得同一种抗原再次进入机体 时免受感染。这使得机体保持针对特定病原体的长期免疫力。B淋巴细胞如下图所示： 4 T淋巴细胞 类似于B细胞，T细胞也是淋巴细胞之一。T淋巴细胞来源于骨髓，迁移到胸腺内分化成熟。T 细胞通过直接杀伤靶细胞和释放淋巴因子参与免疫反应。T细胞包括细胞毒性T细胞、辅助性T细胞、抑制性T细胞、自然杀伤T细胞和记忆T细胞。细胞毒性T细胞直接杀伤靶细胞，辅助性T细胞协助B细胞产生抗体，抑制性T细胞抑制B细胞和其他T细胞对抗原的免疫应答。 NKT细胞具有T细胞和NK细胞两重性质，但是NKT细胞不是NK细胞而是T细胞。T淋巴细胞 如下图所示： 5 自然杀伤细胞 自然杀伤细胞是分布于血液循环的淋巴细胞，它能识别被感染细胞和衰老细胞。NK细胞含有化学颗粒，NK细胞能够识别肿瘤或病毒感染的细胞，通过释放化学颗粒吞噬破坏病变细胞。这些化学颗粒能溶解病变细胞的细胞膜，促使细胞凋亡,最终杀伤靶细胞。 同时应该区分NK细胞和某些T细胞，比如NKT细胞，不要相互混淆。自然杀伤细胞如下图所 示： 6 嗜中性粒细胞
小鼠巨噬细胞功能的检测
小鼠巨噬细胞功能的检测 伍国强 （兰州大学草业学院兰州730020） 摘要：本实验用CFA免疫小鼠后，检测小鼠腹腔巨噬细胞的数目以及用中性红检测巨噬细胞的吞噬能力。结果表明，免疫小鼠的腹腔巨噬细胞的数目和吞噬能力均有所提高。 关键词：巨噬细胞；功能；检测 1 前言 巨噬细胞是一种多功能免疫细胞,在机体的特异性和非特异性免疫反应中发挥重要功能。主要作用有：（1）吞噬杀伤作用：直接吞噬、调理吞噬作用。（2）抗原提呈作用：即外来的抗原性异物通过巨噬细胞的捕获、加工和处理后，与胞内合成的MHC-1/II类分子形成抗原肽－MHC分子复合物，并被呈递到细胞膜表面，被TCR 识别的作用。具有此作用的细胞叫抗原呈递细胞（antigen presenting cell,APC)。此外，巨噬细胞表面还表达多种共刺激分子，如B7、ICAM-1、LFA-1,3等分别与T细胞上的CD28、LFA -1(CD11)、LFA-2(CD2)等相互作用，为T细胞的活化提供第二信号。（3）抗肿瘤作用：Mφ被某些细胞因子如IFN-γ激活后能有效杀伤肿瘤等靶细胞，其吞噬杀菌能力也显著提高。（4）分泌生物活性介质，产生免疫应答和其它免疫效应：如 IL-1,12、IFN、TNF、PGE等;以及某些补体成份和凝血因子、组织修复因子等。为了检测巨噬细胞的吞噬功能，我们用CFA免疫的小白鼠作为实验材料检测其腹腔巨噬细胞吞噬中性红的作用。 2 材料与方法 2．1 材料 2．1．1 药品：生理盐水、0.6%环磷酰胺、Hank’s溶液、1640培养基、细胞裂解液、中性红等。 2．1．2 仪器：血球计数板、细胞培养箱、分光光度计等。 2．1．3 动物：小白鼠2只，由兰大医学院动物实验中心提供。 2.2、方法 2．2．1 小鼠腹腔巨噬细胞制备取小白鼠2只，分为对照组和实验组，对照组注射0.1ml生理盐水，试验组注射0.1mlcFA。48小时后，小鼠眼眶放血，断颈处死。腹腔注射3ml预冷的生理盐水。吸取腹腔渗出液5ml离心管（冰浴）。1600rpm离心10 分钟，弃上清，4℃生理盐水定容至5ml。血球计数板镜下巨噬细胞计数。用生理盐水调mΦ浓度为1×106，取4ml 1600rpm 离心10分钟，弃上清加4ml 1640定悬。将mΦ加入24孔板，每组4孔，每孔1ml。37℃，5%CO2细胞培养箱贴壁培养纯化2小时。2．2．2 巨噬细胞吞噬中性红试验将贴壁纯化好的mΦ弃1640培养液，对照孔加0.5ml生理盐水，其余每孔加0.5ml0.075%中性红,继续培养1小时。倾去上清液,用温PBS 洗细胞3 次,每孔加入细胞溶解液(为体积分数50 %的乙酸和体积分数50 %的无水乙醇) 2ml ,室温下放置30分钟,待细胞溶解后,即用分光光度计测定OD值。以OD 值表示巨噬细胞功能的强弱。 3 结果与讨论表：mΦ的浓度及吸光值 mΦ细胞个数mΦ浓度 （个/ml) 0D值 对照组256 6.4×105 0.252 试验组2176 5.44×106 0.283 3．1 免疫小鼠腹腔巨噬细胞浓度从上表可以看出，用cFA免疫的小鼠腹腔巨噬
白细胞和吞噬细胞的区别是什么
白细胞和吞噬细胞的区别是什么？ 白细胞包括淋巴细胞、中性粒细胞、单核细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞。吞噬细胞：包括大吞噬细胞和小吞噬细胞，大吞噬细胞即单核-巨噬细胞，包括末梢血液中的单核细胞和淋巴结、脾、肝、肺以及浆膜腔内的巨噬细胞、神经系统内的小胶质细胞等。细胞小吞噬细胞即中性粒细胞。 所以，三者关系是：白细胞包括了淋巴细胞和吞噬细胞，吞噬细胞与淋巴细胞为白细胞里面的两种不同细胞。
有没有顺浓度梯度的主动运输？ 逆浓度梯度运输才需要能量。如果是顺浓度梯度运输则不需要消耗能量，消耗的是因为浓度梯度的存有而产生的势能。就好比水往低处流，不需要任何外力，但因为高处的水有较高的势能，利用这个势能推动，水总是往低处流。生命在进化过程中，形成了一套不但精巧而且经济的生活方式，它不会无谓地浪费珍贵的能源。 线粒体、叶绿体、中心体 1.线粒体与叶绿体都是半自主性细 胞器 线粒体和叶绿体都分别有自身的遗 传物质DNA，编码一小部分必需的RNA 和蛋白质。这些蛋白质通过线粒体和 叶绿体专用的酶和核糖体系统实行 翻译。 线粒体和叶绿体基因组编码的蛋白 质在线粒体和叶绿体的生命活动中是重要和不可缺少的，但这些蛋白质还远远不足以支撑线粒体和叶绿体的基本功能。更多的蛋白质来自核基因组的编码，于细胞质中合成后被运往线粒体和叶绿体的功能位点。 即线粒体和叶绿体的生命活动受到细胞核以及它们自身基因组的双重调控。所以线粒体与叶绿体都是半自主性细胞器。 右图来自江苏高考题，题目底部。 2.中心体复制是不依赖于DNA的自主复制 所谓的中心能自主复制，指的是中心体的复制是在不依赖于DNA的条件下复制自身。 至于为什么能这样复制，曾是Science 2005年提出的125个科学前沿问题的第63个问题：是什么机制赋予细胞成分在不依赖于DNA的条件下复制自身的水平?其中中心体就属于这类细胞成分。这种独立性仍难以解释。 北师大的梁前进教授与2019-05-10发表在《科学通报》文章：《细胞器不依赖于DNA的复制——中心体自主复制解读》，协助成对染色体分离的中心体(以及其他细胞器) 可在自身合适的时间复制, 并且不依赖于DNA的自主复制机理。至少能够从4个方面来解释这种“独立性”： (ⅰ) 中心体的“独立”复制建立在其与DNA复制-遗传物质稳定控制上游的总揽性统一基础之上，因而“独立”却不“孤立”或无本；(ⅱ) 多功能的激酶Plk1等核心调控因子及相关分子复合结构, 协调了中心体周期和染色体/DNA周期；(ⅲ) 类似“感应开关”效应的结构形成和转变起止模式, 精密地控制了不同细胞结构的产生过程；(ⅳ) 结构复制及其周期调控在有共同基础的框架内分化、适合, 以多环节、多途径过程产生特异功能体。 溶酶体在哪？ 溶酶体几乎存有于所有动物细胞中，植物细胞内也有与溶酶体功能类似的细胞器——圆球体、糊粉粒及植物中央大液泡。
河北省衡水中学2017届高三下学期第1周周测理科综合生物试题 Word版含解析
河北省衡水中学2017届高三下学期第1周周测理科综合生物试题 1.下列关于细胞知识的描述正确的是（） ①硝化细菌、霉菌、水绵的细胞都含有核糖体、DNA和RNA ②能进行有氧呼吸的细胞一定含有线粒体，含线粒体的细胞每时每刻都在进行有氧呼吸 ③细胞分化使各种细胞的遗传物质有所差异，导致细胞的形态和功能各不相同 ④红细胞、人脑细胞、洋葱根尖分生区细胞并不都有细胞周期，但这些细胞内的化学成分都在不断更新 ⑤抑制细胞膜上载体活性或影响线粒体功能的毒素都会阻碍根细胞吸收矿质离子 ⑥人体几乎所有的细胞中都有与癌变有关的基因 ⑦高度分化的细胞有可能永远失去增殖能力 A．有三个选项正确 B．有四个选项正确 C．有五个选项正确D．有六个选项正确 2.烧伤后的伤口容易化脓的主要原因是受绿脓杆菌的感染，头孢菌素是临床中经常使用的一种抗生素．用药前一般会对病人做过敏实验和细菌耐药实验．结合所学知识分析，下列说法正确的是（） A．B淋巴细胞接受绿脓杆菌刺激后形成的浆细胞会使绿脓杆菌裂解死亡 B．吞噬细胞接受绿脓杆菌刺激后会将相关信息呈递给其他免疫细胞 C．用药前做耐药实验的原因是抗生素滥用诱导细菌发生耐药突变 D．对头孢菌素过敏的患者使用头孢菌素后机体不再发生免疫反应 3．加拿大一枝黄花具有超强的繁殖能力和极强的环境适应能力．如图为某地5年内主要植物种类及数量变化曲线，下列叙述正确的是（）
A．因加拿大一枝黄花具有超强的繁殖能力，故其在此地将持续呈“J”型增长B．此地5年内狗牙根的数量不断减少与其和加拿大一只黄花的竞争有关 C．此地5年内群落进行次生演替且植物丰富度呈不断增大趋势 D．因巢菜数量不断减少，调查其种群密度时应在植株密集处多取样方 4. PrP c蛋白是人或动物染色体上的PrP基因编码的一种蛋白，该蛋白无致病性，当PrP c蛋白转变成PrP sc蛋白(即朊病毒)并在神经细胞内积累时，能导致疯牛病。如图是PrP sc蛋白的形成过程。下列分析正确的是（） A.朊病毒和噬茵体都是在各自的宿主细胞内以装配方式进行增殖的 B.图中a、b过程分别需要逆转录酶和RNA聚合酶的参与 C.朊病毒的遗传信息来源于它的宿主细胞。 D.如果应用基因操作方法去除动物的PrP基因，即使导入朊病毒该动物也会患病. 5.如图表示人体中细胞甲分泌化学物质a与细胞乙结合的过程，下列说法错误的是（） A．若a为TRH，则乙代表垂体，当碘元素摄入不足时，TRH的含量较高 B．若a为淋巴因子，则乙可以代表B细胞，且淋巴因子可促进B细胞的增殖分
巨噬细胞功能检测讲解学习
巨噬细胞功能检测
单核－巨噬细胞吞噬功能测定 单核－巨噬细胞在机体免疫反应中起着重要作用，因此，检测单核－巨噬细胞功能对于了解机体的免疫功能状态具有重要意义。 小鼠巨噬细胞吞噬功能试验（体外法） 1、原理 巨噬细胞具有吞噬异物的功能，将巨噬细胞与被吞噬物(鸡红细胞、白色念珠菌、白色葡萄球菌等)共同温育，染色，在油镜下计数吞噬异物的巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数，以此判断巨噬细胞的吞噬功能，从而评价机体的免疫状态。 2、方法 (1)．小鼠巨噬细胞制备实验前三天每只小鼠腹腔注射1％可溶性淀粉1 ml。实验时眼球放血、断椎处死小鼠，碘酒、洒精消毒皮肤，剪开腹部皮肤，暴露腹膜，用镊子夹起腹膜剪开一小口(注意避开血管)用生理盐水(或1640)灌注腹腔，收集腹腔液于试管中(约4 ml)，1500 r/min，离心10 min，去上清，沉积细胞用生理盐水(或1640)洗二次，离心转速、时间同上。最后沉积细胞用含10％小牛血清1640配成适当浓度备用(1~2×106／ml)。
(2)被吞噬物的制备 1）．鸡红细胞制备从鸡翼下抽取静脉血，加入5倍量Alsever液(2.05 g葡萄糖，0.42 g NaCl，0.8 g枸橼酸钠 5H2O、0.55 g枸椽酸，加双蒸水到100 ml，加热溶解后过滤分装，8磅高压灭菌，4℃保存)，置4℃可以保存1个月。用前取适量鸡红细胞悬液，用PBS洗涤二次后配成1％的浓度备用。 2）．白色念珠菌制备将白色念珠菌接种于沙氏平皿培养基中，培养48小时，收集菌，用适量生理盐水配成悬液，100℃，煮沸30 min灭活，离心去掉上清，再用1％美兰染色30 min，用生理盐水洗涤二次，用生理盐水配成1×108／ml菌悬液，4℃冰箱保存备用。 3、操作 取巨噬细胞0.5 ml加1％鸡红细胞或l×l08／ml白色念珠菌悬液0.5ml，置37℃温育30min。取2滴混合液置玻片上加盖玻片，在高倍镜下观察计数，或离心1000r／ min,10min，取细胞沉淀混悬液制成涂片，甲醇固定，姬姆萨染色、油镜观察计数。 吞噬率％=(吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/100个巨噬细胞)×100％ 吞噬指数％=100个巨噬细胞中吞噬鸡红细胞总数/100个巨噬细胞 **(吞噬指数式中巨噬细胞为阳性吞噬细胞)
吞噬细胞吞噬功能检测实验
Everlab云端实验室-----吞噬细胞吞噬功能检测实验 实验概要 本文介绍了吞噬细胞吞噬功能检测（Assay of the Phagocytic Function of Phagocyte）实验的基本原理、操作步骤及注意事项等。 实验原理 吞噬细胞具有对异物(细菌、绵羊红细胞、鸡红细胞等)吞噬和消化的功能，在机体非特异性免疫中发挥重要作用。 小鼠腹腔内注射硫代乙醇酸钠，可刺激巨噬细胞的聚集。四日后小鼠腹腔内注入羊红细胞悬液，一小时后解剖收集腹腔吞嗜细胞，染色、镜检可观察对羊红细胞的吞嗜现象。通过计算吞嗜百分比或吞噬指数可测定吞噬细胞的吞嗜功能。 主要试剂 1. PBS 缓冲液 2. 3％硫代乙醇酸钠 3. 1％羊红细胞悬液 4. 瑞氏染液 5. 甲醇 主要设备 1. 解剖器材 2. 注射器 3. 尖吸管 4. 橡皮吸头 5. 小试管 6. 载玻片 实验材料
ICR 小鼠 实验步骤 1. 实验准备：用无菌注射器吸取3％硫代乙醇酸钠3ml，注射于小鼠腹腔内。 2. 四日后，注射1％羊红细胞悬液1ml 于小鼠腹腔内。 3. 注射1 小时后，将小鼠用颈椎脱臼法处死，解剖暴露腹腔，于腹腔靠上部位，用镊子轻轻夹起腹膜，将腹膜剪一小口，用尖吸管注入5ml 预温的PBS，同时用手反复揉搓腹腔约1—2 分钟，以便尽可能多地冲洗出小鼠腹腔的吞噬细胞。 4. 用尖吸管吸取腹腔液，置一洁净试管内。 5. 用尖吸管将腹腔液吹打均匀(尽量避免产生气泡)，吸取一滴滴于载玻片上，加盖玻片镜检。 6. 观察结果，也可以将腹腔液涂片，平放于湿盘内，37℃，孵育30 分钟。取出涂片，用预温的PBS 冲洗3 次，然后用甲醇固定1 分钟，以瑞氏染液1 份加pH6.4 的PBS 2 份混匀后，滴于涂片上染色5-10 分钟，以蒸馏水冲洗（切勿先将染液倾去）后，待干，镜检。 7. 实验结果 观察小鼠腹腔巨噬细胞和中性粒细胞对羊红细胞的吞噬现象，计算吞噬百分比，即每100 个吞噬细胞中吞噬有羊红细胞的细胞数。也可用吞噬指数表示，即将100 个吞噬细胞中所吞噬羊红细胞的总数除以100，即为吞噬指数。吞噬百分比和吞噬指数一般是平行的。 注意事项
巨噬细胞吞噬功能检测
巨噬细胞吞噬功能测定 【实验原理】 巨噬细胞对颗粒性异物具有很强的吞噬功能。当鸡红细胞被注入小鼠腹腔时，会被腹腔中的巨噬细胞吞噬。取小鼠腹腔液涂片、染色，在显微镜下可见到鸡红细胞被吞噬的现象。计算吞噬百分率和吞噬指数，可判断吞噬细胞的吞噬功能。 【试剂和器材】 1. 动物体重20-25g的健康小鼠。 2. 1%鸡红细胞（CRBC）悬液自鸡液静脉或心脏采血，放Alsever液中保存（鸡血与Alsever 液1：5混合），置4℃可有效保存1个月，临用前用生理盐水将CRBC洗3次，按红细胞压积配成1%CRBC悬液。 3. 6%可溶性淀粉肉汤培养基肉汤培养基100ml加入可溶性淀粉6g，混匀，置100℃水浴煮沸消毒。 4. 其他试剂瑞氏（Wright）染液、生理盐水等。 5. 器材无菌注射器及针头、剪刀、镊子、解剖盘、载玻片、显微镜等。 【步骤和方法】 1.试验前3天，于小鼠腹腔注射6%可溶性淀粉肉汤培养基1ml。 2.于试验当天，小鼠腹腔注入1%CRBC悬液0.5ml，并轻轻揉腹。 3.30min后小鼠颈椎脱臼处死，取腹腔液涂片，自然干燥后瑞氏染色，用油镜观察。 【结果判定】 镜下可见吞噬细胞核呈蓝色，被吞噬的鸡红细胞呈椭圆形，其胞浆呈红色而核被染成蓝色。呈油镜下随机观察100个巨噬细胞，计数吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数和吞噬的鸡红细胞总数。 吞噬百分率= (吞噬CRBC的巨噬细胞数/100)*100% 吞噬指数= 吞噬细胞吞噬的CRBC总数/100 【注意事项】 1.涂片的薄厚要适当，否则影响计数。 2.小鼠腹腔注射时不要刺伤内脏。 3.如小鼠腹腔液过少，可注入适量生理盐水。 4.剪开小鼠腹腔时应避免出血，否则将影响试验结果。 5.被吞噬的鸡红细胞时间过长可被消化，时间过短未被吞噬，必须掌握好吞噬作用时间。 阿氏液配方：葡萄糖2.05克柠檬酸钠0.8克柠檬酸0.055克氯化钠 0.42克加蒸馏水至100毫升，加热溶解后将pH值调到6.1，经过69千帕，15分 钟的高压灭菌，放置在4℃的环境内，保存备用。
吞噬细胞和巨噬细胞的区别
吞噬细胞和巨噬细胞的区别 侵入人体的细菌、病霉或异物，及人体产生的衰老、损伤细胞和坏死组织等，均需经吞噬细胞吞噬、消化，予以清除。所以，吞噬细胞又被誉为“人体健康的卫士”。 吞噬细胞从形态上可分为大吞噬细胞和小吞噬细胞两类。大吞噬细胞包括单核细胞和巨噬细胞。单核细胞占自细胞总数的3～8％，是血液中最大的细胞，直径为14～20微米左右，圆形或卵圆形。细胞内有许多细小的嗜天青颗粒，此即溶酶体，内含过氧化物酶、酸性磷酸酶、非特异性酯酶和溶菌酶等。寿命可长达75天左右。 单核细胞渗出血管，进入组织和器官后，可进一步分化发育成巨噬细胞，成为机体内吞噬能力最强的细胞。巨噬细胞可以是固定不动的，也可以用变形虫样运动的方式移动。固定和游走的巨噬细胞是同一细胞的不同阶段，两者可以互变，其形态也随功能状态和所在的位置而变化。巨噬细胞在不同组织中的名称不同：在肺里称“肺巨噬细胞”；在神经系统里称为“小神经胶质细胞”；在骨里则称为“破骨细胞”。 单核细胞和巨噬细胞都能消灭侵入机体的细菌、吞噬异物颗粒、消除体内衰老、损伤的细胞和变性的细胞间质、杀伤肿瘤细胞，并参与免疫反应。 小吞噬细胞由中性粒细胞和嗜酸性粒细胞组成，以中性粒细胞为主。 中性粒细胞占白细胞的50～70％，细胞呈圆形，直径10～12微米。细胞质中含有大量的细小颗粒，可分为嗜天青颗粒和特异性颗粒两种。前者约占颗粒总数的20％，直径0.4微米左右。它们也是溶酶体，内含酸性水解酶和过氧化物酶等。特异性颗粒约占颗粒总数的80％，直径为0.3微米，内含碱性磷酸酶、溶菌酶等。 中性粒细胞具有很强的变形运动能力，能吞噬、消化细菌及机体本身的坏死组织和衰老的红细胞，故有防御病菌和清除坏死组织的作用。它是机体发生急性炎症时的主要反应细胞。细菌毒素和坏死组织的产物能引起炎症反应，这些物质可使中性粒细胞发生超化性，能以变形运动穿出毛细血管，集聚到细菌侵犯的部位，大量吞噬细胞，在胞质内形成吞噬体。吞噬体先后与特异性颗粒和溶酶体融合，细菌即被各种水解酶、过氧化物酶、溶菌酶及其它具有杀菌作用的蛋白质、多肽等成分杀死并分解消化。中性粒细胞吞噬细菌后本身也死亡，形成脓球。中性粒细胞还能在无氧环境中生活并发挥作用。这具有重要意义，使它可在坏死组织中能够杀菌和清除组织碎屑。 嗜酸性粒细胞较中性粒细胞略大，直径约10～15微米，占血中白细胞的1～4％。细胞圆形，内中充满较大的嗜酸性颗粒，它们是一种特殊的溶酶体，含过氧化物酶、酸性磷酸酶等。嗜酸性粒细胞能进行变形运动，吞噬物体能力弱但有选择性，对细菌和异物的吞噬不积极主动，却能迅速吞噬抗原一抗体复合物，并通过溶酶体酶的消化降解作用减轻其对组织的有害作用。嗜酸性粒细胞对组织胺和5―羟色胺有解毒作用，具有减轻诸如荨麻疹、哮喘等某些过敏反应的功能。
白细胞
白细胞 白细胞亦称白血球，它的功能是使机体免受病原体（细菌和病毒）、癌细胞、异物侵入，是人体的守卫者。白细胞来源于骨髓中的造血干细胞，在骨髓中发育后进入血液和淋巴液循环，也存在于血管和淋巴管外的组织中。 巨噬细胞 巨噬细胞是个头最大的白细胞。 巨噬细胞由单核细胞分化发育而来，单核细胞几乎存在于所有组织中。巨噬细胞对细胞残体和病原体进行吞噬和消化，这一过程称为吞噬作用。巨噬细胞内的溶酶体会释放溶菌酶破坏病原体。吞噬细胞还是参与适应性免疫的专职抗原提呈细胞。除了免疫功能外，吞噬细胞还扮演者促进生殖细胞发育、性激素、骨组织的再吸收以及血络的形成。 树突状细胞 类似于吞噬细胞，树突状细胞也是一种单核细胞。树突状细胞成熟时会伸出许多树突样或伪足样突起，与神经元的树突相似。树突状细胞通常存在于跟外界接触的皮膜(黏膜)部位，比如皮肤、内层的鼻子、肺、胃与肠的内层。树突状细胞通过摄取、加工处理和递呈抗原到淋巴结和淋巴器官中的淋巴细胞帮助机体识别病原体，启动特异性免疫应答。 B淋巴细胞 B细胞是淋巴细胞的成分之一。B细胞受抗原刺激后，会增合成和分泌一种特殊的蛋白质——抗体对抗病原体，抗体与抗原结合帮助机体识别病原体，并使之成为靶细胞被其他免疫细胞清除。被称为记忆细胞的B细胞可以保持对病原菌生物分子标记物的记忆，使得同一种抗原再次进入机体时免受感染。 这使得机体保持针对特定病原体的长期免疫力。 T淋巴细胞 类似于B细胞，T细胞也是淋巴细胞之一。T淋巴细胞来源于骨髓，迁移到胸腺内分化成熟。T细胞通过直接杀伤靶细胞和释放淋巴因子参与免疫反应。T细胞包括细胞毒性T细胞、辅助性T细胞、抑制性T细胞、自然杀伤T细胞和记忆T细胞。细胞毒性T细胞直接杀伤靶细胞，辅助性T细胞协助B细胞产生抗体，抑制性T细胞抑制B细胞和其他T细胞对抗原的免疫应答。 NKT细胞具有T细胞和NK细胞细胞两重性质，但是NKT细胞不是NK细胞而是T细胞。 自然杀伤细胞 自然杀伤细胞是分布于血液循环的淋巴细胞，它能识别被感染细胞和衰老细胞。NK细胞含有化学颗粒，NK细胞能够识别肿瘤或病毒感染的细胞，通过释放化学颗粒吞噬破坏病变细胞。这些化学颗粒能溶解病变细胞的细胞膜，促使细胞凋亡,最终杀伤靶细胞。 同时应该区分NK细胞和某些T细胞，比如NKT细胞，不要相互混淆。 嗜中性粒细胞 嗜中性粒细胞属于有粒白细胞，具有吞噬作用，吞噬过程中释放化学颗粒破坏病原体。细胞核呈分叶状。嗜中性粒细胞是血液循环中数量最多的粒细胞，机体遭遇病原体入侵时能迅速出现在感染和损伤的部位。 嗜酸性粒细胞 嗜酸性粒细胞是具有吞噬作用的白细胞，当过敏反应和寄生虫感染时嗜酸性粒细胞会明显增多。嗜酸性粒细胞具有粗大的嗜酸性颗粒，可释放化学物质消灭病原体。嗜酸性粒细胞常存在于胃肠道的结缔组织中，细胞核呈双叶状，血液涂片上常呈U形分布。 嗜碱性粒细胞 嗜碱性粒细胞是颗粒内含有组胺和肝素等物质的粒细胞（有粒白细胞），肝素能稀释血