细 胞 生 物 学

细胞生物学

Cell Biology

（专业代码071009）

学术学位硕士研究生培养方案

一、培养目标

研究生必须坚持社会主义方向，坚持政治思想、专业能力和综合素质的全面发展，热爱祖国。

1．政治思想要求：掌握马克思列宁主义和毛泽东思想的基本原理以及邓小平理论和“三个代表”的重要思想，树立辨证唯物主义世界观、科学发展观，坚持四项基本原则，热爱社会主义祖国、遵纪守法、团结协作、积极为中国特色社会主义建设、为生命科学事业服务。

2．业务能力要求：在细胞生物学专业具有坚实的理论基础和系统的专业知识，熟悉科学研究的基本环节，能够从事细胞生物学专业教学和科学研究，并为进一步深造打下基础。具有严谨的科学态度和敬业精神；注重知识、能力和综合素质的培养。

3．掌握一门外语，有较强的听说读写能力并能熟练地阅读本专业的外文资料。

4．计算机水平：能在科研中比较熟练地使用计算机，能独立制作多媒体课件并进行计算机图像处理。

5．身心健康。

二、学习年限和总体时间安排

学习期限一般为三年。第一学期进行有关学科及本专业的理论课学习，修满学分。后五个学期除参加教学实践外，主要从事学位论文课题的选题、开题、课题研究、论文撰写和答辩工作。

三、研究方向

1．退行性神经细胞损伤及其防治

2．槲皮素促少突胶质前体细胞分化成熟的机制

3．成年神经干细胞调控机制

4．缺血性心脏病修复基因治疗及细胞应用基础研究

四、课程设置与要求

（一）课程设置（具体课程设置见下表）

备注：大学英语六级考试未通过的研究生必须选修英语（普通班），通过的研究生可根据自身需要选修医学英语术语学和医学英文文献阅读。

自然辩证法概论和马克思主义与社会科学方法论两门课程所有研究生两选一。

补充要求1：前沿讲座2学分。

前沿讲座为硕士研究生提供一个良好的学术氛围，增强他们对科研的兴趣；能够使他们开阔眼界，活跃思维，对本学科的学术前沿和未来发展趋势有一个清晰的认识，提高他们分析和解决问题的能力。主要采用两种方式：

①参加学术讲座或学术讨论会1.0学分

参加院系或学校组织的学术讲座0.1学分/次

参加全国性及更高级别的学术会议0.2学分/次

②综述或报告1.0学分

要求硕士生在读期间做综述或课题报告4次，其中至少在学科或院系报告1次。

在本教研室做的综述或报告0.2学分/次

在基础学院等做的综述或报告0.4学分/次

补充要求2：补修课：神经生物学，人中枢神经解剖学。

跨学科或以同等学力考入的研究生必须补修本专业本科生主干课程2门，成绩记入本人档案，不计学分。研究生入学考试科目及研究生学习的学位课程中有与应补的课程科目相同，且考试成绩合格者，可以免考。

（二）学分要求

应修总学分不少于30学分，必修课≥70分计算学分，选修课≥60分计算学分。学习时间由导师根据科研工作安排确定，在申请答辩之前修完全部学分。

（三）必读著作和期刊

下列三本著作是必读的，其他需读之书由导师指定

1．Principles of neural science

2．The rat nervous system

3．Molecular biology of the cell

下列杂志是必读的，其他需读之杂志由导师指定

1．J Neuroscience

2．Nature

3．Neuron

（四）外语要求

1. 能熟练阅读本专业相关外文文献，并能做相应学术交流。必修英语课成绩≥70分并通过大学英语6级考试（CET-6）。

2. 译文≥20篇，其中部分内容安排在研究生学术例会上报告。答辩前通过专业外语考试，译文每小时≥2500印刷符号，且无重大错漏。

（五）学术活动

除按“课程设置”中的要求执行外，1. 参内外学术讲座或学术讨论会；2. 参加本科室的文献综述、开题报告、实验小结、预答辩和答辩等活动。

五、科学研究工作和学位论文

（一）选题

硕士学位论文选题都应力求是国家或卫生部或地方的攻关项目，是本学科前沿的有关重要课题，对社会发展有一定的理论意义和应用价值，起点要比较高。

（二）查阅文献与撰写综述

硕士生查阅的文献资料应在60篇以上，其中外文文献资料一般应在三分之二以上。按导师要求在适当时间完成文献综述，并经三名副高以上教师评阅通过。

（三）课题设计与开题报告

研究生在指导教师指导下，通过阅读文献资料、参加科学研究工作，提出学位论文选题报告，确定研究课题。硕士生应在入学第一学年第二学期提出论文开题报告，并经三名副高以上导师组成员评阅通过。首次选题未获通过者，可在6个月内补做。研究生选题报告评审通过后，应填写《徐州医学院研究生课题设计书》，经基础学院审核后报研究生学院备案。实践中如需对课题设计进行修改，需经导师同意；如重新开题，需经基础学院批准后报研究生学院备案。

（四）实验记录与分析

研究生在进行课题工作中，应在导师指导下，严格按课题设计要求独立完成各项实验。要做到严谨求实，即时、如实详细地做好各项实验记录，妥善保存原始记录不得缺页（申请论文答辩时上交研究生学院）。通过完成课题，培养发现问题、提出问题和解决问题的能力。分析要采用正确的统计学方法，分析结果应实事求是。要发扬团结协作、艰苦奋斗、厉行节约的精神。

（五）中期检查

在研究生入学后的第三学期末或第四学期初，由导师组对研究生的思想表现、课程学分、文献综述、开题及实验设计、论文工作进展情况、取得的阶段性成果、存在的问题、与预期目标的差距等进行检查和考核。对存在的问题要提出解决问题的措施或要求。在自查基础上基础学院进行检查。研究生学院委托督导专家组抽查。

（六）撰写学位论文

硕士研究生从事学位论文的工作时间一般不少于一年。研究生的学位论文于第五学期末或第六学期初完成，应按学校要求用中文撰写，在导师的指导下由研究生本人独立完成。硕士学位论文研究的课题应当有新见解，表明作者具有从事科学研究工作和独立担负专门技术工作的能力。论文应按学校统一格式书写，定稿后用A4纸打印装订成册。

（七）预答辩

论文完成后，研究生向教研室提出预答辩申请，由教研室负责科研的领导主持，邀请至少3～4名同行专家对研究生的论文工作进行评议，决定能否进行正式答辩。预答辩时研究生必须提供所有的实验记录，实验结果，接受核查并回答质疑。预答辩于答辩前二十天左右进行。没有预答辩，不能进行论文初审和答辩。

（八）论文初审

论文定稿后，学校组织三位同行专家（副高职称及以上）对研究生学位论文进行评阅，写出评审意见，审阅通过后方可进行答辩。三位同行专家中校外专家不少于一位，同时至少有一位具有研究生导师资格。导师或导师组成员不能给自己的研究生作学位论文评阅。

论文评阅专家不参加被审阅论文的研究生的答辩委员会。

（九）论文答辩

论文答辩在第6学期的5月份进行。

1. 申请答辩条件：研究生按培养方案修满规定学分，通过选修的课程考试，成绩合格，完成教学工作、文献综述和论文撰写，论文经同行专家评阅并通过，至少在省级学术刊物发表论文一篇，方可申请论文答辩。

2. 填写论文答辩申请表，经导师签署意见、基础学院审核，交研究生学院批准后方可进行答辩。

3. 硕士论文答辩委员会由5人组成。论文答辩会由答辩委员会主席主持。论文答辩不合格者，经答辩委员会同意，可在1年内补充修改论文后，重新答辩1次。

六、教学实践

硕士研究生应完成30学时的教学实践工作，教学实践1-3个月。硕士研究生参加教研室新教师的师资培训，要求熟悉细胞生物学主要教学环节，根据所学专业方向选择相应的教学内容，在副教授以上教师指导下，采取指导实验、辅导答疑的方式完成一定量的教学任务（面对学生时数约50-60学时）。研究生的教学实践工作应按教研室教师的培养要求进行考核。

七、培养方式与管理

（一）导师负责制

1．建立由学科或学术带头人主持下的导师小组，按照培养目标，全面实施培养计划，严格管理。

2．指导教师负责指导研究生的课题设计，组织并督促科研计划的实施和落实，掌握科研课题的研究进度，做好科研过程及终端的质量控制。

（二）学科集体培养

建立学科集体培养制度，由教研室主任总负责，导师提名后组成导师小组集体培养。导师小组由三人组成（包括导师），一般为具有副高以上职称的专家，其中可以有一名讲师。导师小组记录研究生教学实践、参加学术活动等情况，组织研究生的文献综述、开题报告、中期考核、预答辩、答辩等。

（三）考核

1．平时考核：建立包括科研、教学实践、思想工作表现等的档案备考核。

2．中期考核：按校“关于硕士研究生中期考核的实施办法”执行。

3．毕业考核：按研究生学院有关规定执行。

八、毕业与学位授予

达到培养目标的各项要求者方可毕业。凡符合《徐州医学院硕士学位授予工作实施细则》有关规定者，经学校学位评定委员会同意后，授予理学或医学硕士学位。

细胞工程试题及答案

专题2细胞工程 一、选择题 1.运用下列各种细胞工程技术培育生物新品种,操作过程中能形成愈伤组织的是( )。 ①植物组织培养②植物体细胞杂交③动物细胞培养 ④转基因植物的培育 A.①②③ B.①②④ C.①③④ D.①②③④ 2.生物技术的发展速度很快,已灭绝生物的“复生”将不再是神话。如果世界上最后一只野驴刚死亡,以下较易成功“复生”野驴的方法是( )。 A.将野驴的体细胞取出,利用组织培养技术,经脱分化、再分化,培育成新个体 B.将野驴的体细胞两两融合,再经组织培养培育成新个体 C.取出野驴的体细胞核移植到母家驴的去核卵细胞中,经孕育培育成新个体 D.将野驴的基因导入家驴的受精卵中,培育成新个体 3.下列关于细胞工程的叙述,错误的是( )。 A.电刺激可诱导植物原生质体融合或动物细胞融合 B.去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理 C.小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫小鼠的B淋巴细胞融合可制备单克隆抗体 D.某种植物甲、乙两品种的体细胞杂种与甲、乙两品种杂交后代的染色体数目相同 4.用高度分化的植物细胞、组织和器官进行组织培养可以形成愈伤组织,下列叙述错误的是( )。 A.该愈伤组织是细胞经过脱分化和分裂形成的 B.该愈伤组织的细胞没有全能性 C.该愈伤组织是由排列疏松的薄壁细胞组成的 D.该愈伤组织可以形成具有生根发芽能力的胚状结构 5.名为“我的皮肤”的生物活性绷带自从在英国诞生后,给皮肤烧伤病人带来了福音。该活性绷带的原理是先采集一些细胞样本,再让其在特殊的膜片上增殖。5~7天后,将膜片敷在患者的伤口上,膜片会将细胞逐渐“释放”到伤口,并促进新生皮肤层生长,达到加速伤口愈合的目的。下列有关叙述中,不正确的是( )。 A.“我的皮肤”的获得技术属于动物细胞工程 B.人的皮肤烧伤后会因人体第二道防线的破坏而导致免疫力下降 C.种植在膜片上的细胞样本最好选自患者本人 D.膜片能否把细胞顺利“释放”到伤口,加速患者自身皮肤愈合与细胞膜上的糖蛋白有关 6.既可用于DNA重组技术又可用于细胞融合技术的是( )。 A.病毒 B.纤维素酶 C.聚乙二醇 D.质粒 7.培育农作物新品种的过程中,常利用植物组织培养技术。下列叙述正确的是( )。 A.培育转基因的外植体得到的新个体属于基因突变个体 B.在植物组织培养过程中用理化因素诱导可获得大量有益突变体 C.单倍体育种中经减数分裂和组织培养两个过程能获得纯合二倍体 D.植物组织培养技术的理论基础是细胞的全能性 8.下列与细胞工程技术相关的表述中,不正确的是( )。 A.植物体细胞杂交技术可以克服常规的远缘杂交不亲和障碍 B.动物细胞培养与植物组织培养所用的培养基成分基本相同 C.动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同 D.植物组织培养技术的理论基础是细胞的全能性 9.经植物组织培养技术培养出来的植物一般很少有植物病毒危害,其原因在于( )。 A.在组织培养过程中经过了脱分化和再分化,进行的是快速分裂和分化

细胞融合技术的应用与前景

细胞融合技术的应用与前景 人们很早就注意到了在自然条件下发生的细胞融合现象，首先在病料组织中发现了由细胞融合产生的多核细胞，紧接着发现在脊椎动物和无脊椎动物的正常细胞中也可发生细胞融合，随后在体外组织培养中也发现了离体细胞的融合现象。自从发现活病毒可在体内介导癌细胞融合后，人们又实现了利用灭活病毒促进动物异种细胞融合，从而打破了细胞融合的种属屏障，推动细胞融合技术跃上新的 台阶。原生质体的大量制备较为困难，限制了植物细胞融合技术的发展，因此植物细胞融合的起步较动物细胞融合要迟10年左右。直到用酶法大量制备有活力的原生质体获得成功后，才使植物原生质体的融合工作迅速发展起来。由于病毒诱导细胞融合存在着病毒制备困难、操作复杂、灭活病毒的效价差异大等原因，人们又找到了比病毒简便、快速和高效且比病毒更易制备和控制，活性稳定，使用方便的化学物质PEG作为病毒的替代物诱导细胞融合，但在PEG诱导细胞融合的有效的浓度范围内(50～55)对细胞毒性很大，因此人们又找到了新的方法来替代PEG，这些新方法有电脉冲诱导细胞融合技术和激光融合技术以及空间融合技术等。纵观细胞融合技术的发展历史，该技术的不断改进首先表现在融合剂上，从致癌活病毒到灭活病毒再到化学物质，其次体现在新方法上，再者体现在融合对象的不断扩展上。现在新的细胞融合方法一般采用将化学法和物理法结合起来进行，如将磁、超声、机械等和激光、电相结合，同时添加化学剂以便进一步提高融合率，细胞融合的方法和手段始终朝操作方便、简单，便于量化研究，同时融合率又能得到不断提高的 方向发展。 1．细胞融合的意义 所谓细胞融合就是指在外力(诱导剂或促融剂)作用下，两个或两个以上的异源(种、属间)细胞或原生质体相互接触，从而发生膜融合、胞质融合和核融合并形成杂种细胞的现象称为细胞融合或细胞杂交口]。如取材为体细胞则称体细胞杂交，体细胞融合后可形成四倍体或多倍体细胞，由此形成的杂交细胞，其特性会有很大的变化。细胞融合不受种属的局限，可实现种间生物体细胞的融合，使远缘杂交成为可能，因而是改造细胞遗传物质的有力手段。它的意义在于从此打破了仅仅依赖有性杂交重组基因创造新种的界限和生殖壁垒，极大地扩大了遗传物质的重组范围；细胞融合技术避免了分离、提纯、剪切、拼接等基因操作，在技术和仪器设备上的要求不象基因工程那样复杂，投资少，有利于广泛开展研究和推广，有着重大的实践意义，正得到科学界的日益重视[2_引。经过长期反复研究和实践，细胞融合技术逐步发展和完善起来，已成为生物工程的基础技术之一。特别是近20年来，从理论和实践两个方面，有力地推动了生物科学各领域的发展。细胞融合方法得到了不断的更新，融合率也得到逐步的提高。 2．动物细胞融合技术 动物细胞融合是从细胞水平来改变动物细胞的遗传性，用于生产单克隆抗体、疫苗等特定的生物制品，改良培育动物新品种，缩短动物的育种过程。动物细胞融合的应用范围已广及生物学的各个分支学科，特别是在绘制人类基因图谱方面取得了显著成绩。虽然细胞杂交属于理论生物学范畴，但在实际应用方面也有重大突破。在基础理论研究上，动物细胞融合技术对研究细胞分化、基因定位、肿瘤发生机制等方面都有重要意义。在实际应用方面，动物细胞融合技术在药物定向释放系统、细胞治疗以及抗肿瘤免疫等方面起到重要的用。动物体细

新课标高中生物选修三2.1植物细胞工程导学案

2.1 植物细胞工程 一、知识与技能目标 1、简述植物组织培养和体细胞杂交技术，掌握它们的原理、过程及关键环节。 2、了解植物繁殖的新途径及作物新品种的培育的具体方法。 二、过程与方法目标 1、尝试进行植物组织培养，运用细胞的基础知识，分析植物细胞工程的理论基础；收集植物细胞工程的相关资料并进行整理、分析、交流。 2、以植物细胞工程的基本技术为基础，弄清楚其在生产实践中的实际应用。 三、情感与价值观目标 1、体验植物组织培养技术，讨论植物细胞工程的社会意义及细胞学基础理论与技术开发之间的关系。 2、搜集相关的实际技术应用，积极参加各种技术应用的讨论，体验现代生物科技的新进展带来的社会效益，激发学习生物学的兴趣。 四、教学过程 1、植物细胞的基本结构包括、、。 2、植物细胞主要的增殖方式是，细胞分化是指，_______________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________。原因是。 3、全能性是指，已分化的细胞表现为全能性的原因是。 4、织物组织培养就是在和条件下，将培养在上，给予条件，诱导其产生形成完整的植株。 5、植物体细胞杂交就是将细胞在一定条件下融合成，并把它培养成的技术，优点是。 6、生物体可遗传变异类型包括、、。

根据变异类型育种的方法有、、、等。 7、植物的微型繁殖技术指，_____________举例_________________________________________________________。 8、获得脱病毒的植株的方法 。 9、神奇的人工种子指。 10、生物育种技术比较 技术原理优点缺点 诱变育 种基因突变 提高生物变异的频率，使后代变异频率 较快稳定；可大幅度改良某些性状，缩 短育种进程 盲目性大，需大 量处理供试材料 杂交育 种基因重组 使位于不同个体的优良性状，集中于一 个个体 周期长，难以克 服远缘杂交的障 碍 单倍体 育种染色体变异获得个体均为纯种，明显缩短育种年限 技术复杂，须与 杂交育种配合 多倍体 育种染色体变异器官大，提高产量和营养成分 适用于植物，动 物方面难以开展 基因工 程育种分子遗传学原理 打破物种界限，定向地改造生物遗传性 状 细胞工程育种细胞生物学和分 子生物学原理 克服远缘杂交不亲和的障碍；扩大了用 于杂交的亲本组合范围；定向改变生物 遗传性状 不能按人们的需 要表现出亲代的 优良性状

细胞工程

名词解释】： 【简答题】： 1.简述细胞工程在生物技术领域中的地位。 2.目前，常用的植物细胞培养基种类有哪些？各有什么特点？ 3.配制培养基时，为什么要先配母液？如何配制母液？ 4.例举三种常用的物理灭菌方式，简述其原理和优缺点。 5.常用的灭菌方法有哪些，各有哪些优缺点？ 6.配制培养基时，加入一定量的植物生长调节物质，它们在离体培养过程中 有哪些作用？ 7.试述植物细胞全能性的含义和应用。 8.实现植物细胞全能性的条件是什么？ 9.优良愈伤组织有何生长特性？ 10.何为胚状体？胚状体和合子胚有何异同？ 11.影响胚状体发生的主要因素有哪些？ 12.如何区分离体培养条件下的不定芽和胚状体？ 13.目前研制的人工种子结构是怎样的？ 14.控制胚性细胞同步化的方法有哪些？ 15.植物离体无性繁殖主要适用于哪些植物？与常规无性繁殖相比有什么优 势？ 16.分离植物单细胞的方法有哪些？ 17.植物单细胞培养的方法有哪些？各有何特点？ 18.什么叫细胞的悬浮培养？分批培养和连续培养各有何特点？ 19.在细胞悬浮培养中，如何进行细胞生长量的计算？

20.悬浮培养细胞同步化的方法主要有哪些？ 21.在植物细胞培养中如何提高植物次生代谢产物的产量？ 22.简述细胞活力鉴定的方法。 23.简述细胞计数的方法。 24.影响原生质体分离效果的因素有哪些？试做分析。 25.制备原生质体时为何要在等渗或稍高渗溶液中进行？ 26.原生质体再生植株的基本过程。 27.简述原生质体培养的意义。 28.原生质体的培养方法有哪些？各有何优缺点？ 29.原生质体融合要经过哪些过程？ 30.PEG融合与电融合各有何特点？两种方法的原理和关键技术是什么？ 31.原生质体融合产物有哪些类型？ 32.体细胞杂交有何意义？ 33.什么是植物体细胞无性系变异？引起或影响植物体细胞无性系变异的因素 有哪些？ 34.试述植物体细胞无性系变异的遗传学基础。 35.试述农杆菌Ti质粒基因转化的原理。 36.植物基因转化的方法有哪些？各自的特点是什么？ 37.试述转基因植物在农业生产上的应用。 【问答题】： 1.离体无性繁殖一般可分为哪几个阶段？简述其操作的一般程序。 2.简述植物细胞大规模培养反应器的类型及原理。 3.简述植物细胞固定化的几种方法。 4.试述原生质体分离的方法和步骤。 5.植物体细胞无性系突变体筛选的方法有哪些？ 6.成批培养（batch culture）细胞的生长曲线包括哪几个时期？各时期有何特 点？

细胞融合操作规程1

细胞融合 一、实验材料 手术剪，镊子，离心机，蜡盘等。 二、实验所配试剂 1640基础培养液：取一包1640干粉，溶于1000 mL双蒸水中，慢慢加入2.5 g NaHCO3，0.22 μm滤膜过滤除菌，分装，4℃冰箱保存备用。 青链霉素溶液（100×）：取青霉素100万单位和链霉素1 g，无菌溶于100mL已灭菌的三蒸水中，0.22 μm滤膜过滤除菌，1 mL/管分装，-20℃冻存备用。 1640完全培养液：向1640基础培养液中加入10％的小牛血清和1%青链霉素溶液（100×）（为养成良好的操作习惯，建议不加最好），摇匀，4℃冰箱保存备用。 HT培养液：在100 mL含15%血清的1640完全培养液中加入1 mL 100×的HT溶液，摇匀，4℃冰箱保存备用。 HA T培养液：在100 mL含15%血清的1640完全培养液中加入2 mL 50×的HA T溶液（使用前HA T有部分白色沉淀应充分混匀），摇匀，4℃冰箱保存备用。 GNK溶液：准确称取KCL 0.4g ，NaCL 8g ，Na2HPO4·2H2O 1.77g(Na2HPO4·12H2O 3.56g)，NaH2PO4·H2O 0.69g(NaH2PO4·2H2O 0.78g)，酚红0.01g，葡萄糖2g，加DDW 定容至1000mL，调节pH 值至7.2，115℃高压灭菌，4℃保存备用。

三、实验步骤 1.免疫小鼠 选择6-8周龄的Balb/c雌性小鼠进行免疫，免疫剂量50μg/只，皮下注射。免疫程序如下： 首次免疫：100μL抗原+100μL弗氏完全佐剂/只 加强免疫：100μL抗原+100μL弗氏不完全佐剂/只，于首免后2周后进行。共免疫3次，每次间隔2周。第二次免疫后的第十天断尾采血（一般尾部采血4μL，溶于200μL PBS混匀备用）检测效价，如果效价很低或没有效价，建议直接放弃，不用继续再免疫。如果效价可以，在二免后的2周进行三免，最后一次免疫10天后，断尾采血，用适当的抗原进行包被，用间接ELISA检测抗体效价，效价达到1:1600以上即可进行细胞融合。 超强免疫：最后一次加强免疫后2周，细胞融合前3~5天，尾静脉或腹腔注射50μg纯抗原。 2. 饲养细胞的制备 融合前1-2 d制备饲养细胞。取昆明鼠1只致死（收集小鼠血清，以供筛选时用该血清做阴性对照），75%酒精消毒体表，无菌手术剪刀轻轻剥去小鼠的腹部皮肤，以防止剪破腹膜，暴露腹膜。然后用5mL注射器和16号针头将5mL预冷的HAT打入小鼠腹腔，轻轻压挤腹部，重新吸出注入的液体（在吸取过程中为防止污染，避免针头刺破肠管），收取小鼠腹腔巨噬细胞。用HAT稀释至40ml，100uL/孔添

细胞工程

高三生物一轮复习选修三必背知识点（二） 专题二细胞工程 细胞工程是指应用 和的原理和方法，通过 或上的操作，按照人们的意愿来改变细胞内的或获得 的一门综合科学技术。根据操作对象的不同，可分为和两大领域。 一、植物细胞工程 植物细胞工程通常采用的技术手段是：和。 （一）植物组织培养 1、理论基础（原理）：。理论上每一个活细胞都应该具 有。因为。 2、细胞全能性排序：受精卵生殖细胞体细胞。 3、为什么体内细胞没有表现出全能性，而是分化成为不同的组织、器官？ 4、植物细胞工程的过程： _________试管苗――→植物体 注意：a、操作在_________条件下进行。 b、____________不需要光照，_______________需要光照。 c、激素主要是_____________ 和___________________. d、适宜的温度和ph e、一定的营养成分 5、概念：植物组织培养就是在和条件下，将的植物， 培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生，最终 形成完整的植株。 6、用途： （1）植物繁殖的新途径 ① 从生殖方式看，植物组织培养技术通常是生殖，不仅可以保持优良品种的， 还可以快速高效地实现种苗的。人们形象地把用于快速繁殖优良品种的植物组织培养技 术，叫做植物的，也叫。 ②：通常选用植物附近（如）的组织通过组织培养技术获取达到此目的。 ③制作：以植物组织培养得到的、、和腋芽等为材料， 经过人工薄膜包装得到此类种子。 （2）作物新品种的培育 ① 原理： 方法：先通过获得单倍体幼苗，再用诱导幼苗染色体加倍后便可得到 稳定遗传的优良品种，极大地缩短了。 ② 原理：和。在植物组织培养过程中，由于培养细胞一直 处于不断地状态，因此容易受到培养条件和外界压力的影响而产生。 （3）细胞产物的工业化生产 细胞产物包括、、、、、等。 在植物组织培养的阶段即可大量生产细胞产物。 （二）植物体细胞杂交 （1）进行体细胞杂交前，必须先用和去除细胞壁，获得具有活力的。 （2）诱导融合的物理方法包括等；化学法一般是用作 为诱导剂来诱导细胞融合。 （3）植物体细胞杂交的原理：①； ②。 （4）意义：。 二、动物细胞工程 1、动物细胞工程常用的技术手段有、、 、等，其中是其他动物细胞 工程技术的基础。 （一）动物细胞培养 1、概念：从动物机体中取出相关的，将它分散成，然后放在适宜的培养 基中，让这些细胞生长和繁殖。 2、动物细胞培养的流程： 取动物组织块（动物胚胎或）→剪碎→用处理分散成单个细胞 →制成→转入培养瓶中进行培养→贴满瓶壁的细胞重新用等处理，然 后分瓶继续培养。 （1）细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为。细胞数目 不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为。 （2）原代培养和传代培养：通常将组织消化后的初次培养成为；贴满瓶壁的细胞重

生物物理学发展史

生物物理学的发展史 从16世纪末开始，人们就开展了生物物理现象的研究，直到20世纪40年代薛定谔（Schr?dinger）在都柏林大学关于“生命是什么”的讲演之前，可以 算是生物物理学发展的早期。19世纪末叶，生理学家开始用物理概念如力学、流体力学、光学、电学及热力学的知识深入到生理学领域，这样就逐渐形成一个新的分支学科，许多人认为这就是最初的生物物理学。实际上物理学与生物学的结合很早以前就已经开始。例如克尔肖（Kircher）在17世纪描述过生物发光的现象；波莱利（Borrelli）在其所著《动物的运动》一书中利用力学原理分析了血液循环和鸟的飞行问题。18世纪伽伐尼（Galvani）通过青蛙神经由于接触两种金属引起肌肉收缩，从而发现了生物电现象。19世纪，梅那（Mayer）通过热、功和生理过程关系的研究建立了能量守恒定律。 20世纪40年代，《医学物理》介绍生物物理内容时,涉及面已相当广泛，包括听觉、色觉、肌肉、神经、皮肤等的结构与功能（电镜、荧光、X射线衍射、电、光电、电位、温度调节等技术），并报道了应用电子回旋加速器研究生物对象。著名的量子物理学家薛定谔专门作了“生命是什么”的报告中提出的几个观点，如负熵与生命现象的有序性、遗传物质的分子基础，生命现象与量子论的协调性等，以后陆续都被证明是极有预见性的观点，而且均得到证实。这有力地说明了近代物理学在推动生命科学发展中的作用。 20世纪50年代，物理学在各方面取得重大成就之后，物理学实验和理论的发展为生物物理学的诞生提供了实验技术和理论方法。例如，用X射线晶体衍射技术对核酸和蛋白质空间结构的研究开创了分子生物学的新纪元，将生命科学的许多分支都推进到分子水平，同时也把这些成就逐步扩大到细胞、组织、器官等，

细胞融合技术的发展过程

细胞融合技术的发展过程 生物方法融合：1957年，冈田善雄意外发现仙台病毒（HVJ），能诱导悬液中小鼠艾氏腹细胞（EAC）融合。然后Harris、Kada等用于诱导种间细胞融合，获得成功。 化学方法融合:1972年，卡尔森首先用硝酸钠进行烟草两个种的细胞原生质体的融合，1974年K a o等，首先发现聚乙二醇（PEG）能诱导植物细胞原生质体融合产生杂交细胞。 1975年Pentecorvo发现P E G也能帮助哺乳类动物细胞的融合，1976年，Davidson更进一步证实这一结果，并且认为其具有简单快速、高效率等优点。因而，1975年之后聚乙二醇就逐渐取代了仙台病毒。 电融合法电融合法:70年代未期和80年代初期发展起来的一种新的细 胞融合方法。1970年，Senda首先应用电脉冲，通过微电极在显微镜下使植物细胞融合，奠定电融合技术基础。 激光诱导卵细胞融合:激光诱导方法是最新的细胞融合方法，该法为张闻迪等人在1988年首先应用，他们利用激光微束的单色性、高功率密度、短脉宽和极小的作用范围等特点。对泥鳅受精卵进行融合试验，获得成功，且融合后的细胞可存活发育，经卵裂期、囊胚期、原肠期、孵化期、直至幼鱼。整个过程可通过显微镜观察，还可同时由电视摄象监视器观察和进行照相记录。 典型试题解析

试题：回答下列关于细胞工程的问题。（1）如图是细胞融合的示意图， 据图回答。 ①若A、B是植物细胞，则在细胞融合之前已用处理过。用 聚乙二醇诱导融合之后，体系中会出现未融合的细胞，原因 是。 ②若A是小鼠骨髓瘤细胞，B是受到抗原刺激的B淋巴细胞，用灭活的 仙台病毒诱导融合之后，需要用特定的选择性培养基进行筛选。在该培 养基上，细胞和的细胞都会 死亡，只有融合的杂种细胞（杂交瘤细胞）能够生长。杂交瘤细胞不止 一种，原因是。 （2）植物组织培养有一项应用是培育“脱毒苗”，动物细胞培养需要 创造“无菌无毒的环境”，脱毒苗中的“毒”是指，“无菌无毒环境”中的“毒”是指。 （3）制备单克隆抗体有一项重要的应用是作为诊断试剂，例如“早早 孕诊断试剂盒”。“早早孕诊断试剂盒”通过检测被测试者尿液中人绒 毛膜促性腺激素的含量，从而判断被测试者是否怀孕，其起检测作用的 核心物质是。 （4）动物的培育过程中需要进行细胞核移植，早期的细胞 核移植操作会将供体细胞的细胞核取出，再植入去核的卵母细胞，但取 出细胞核的过程会对细胞核造成一定的损伤。后期的核移植操作是直接 将供体细胞注射到去核卵母细胞外的透明带位置，再通过电刺激的方法 诱导，从而实现供体细胞核进入去核卵母细胞。 【答案】：（1）①纤维素酶和果胶酶融合的成功率不是百分之 百②未融合的亲本融合的具有同种核小鼠脾脏中分离 的B淋巴细胞是多种 （2）病毒代谢废物 （3）抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体 （4）克隆供体细胞膜与去核卵母细胞膜融合 【解析】：植物体细胞杂交技术：就是将不同种的植物体细胞原生质体 在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成完整植物体的技术；单克隆抗体的制备过程：首先用特定抗原注射小鼠体内，使其发生免疫，小鼠体内产生具有免疫能力的B淋巴细胞，再利用动物细胞融合技术将 B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，经过两次筛选获得产生特定抗体的杂交 瘤细胞。据图分析，图示A细胞与B细胞融合，形成的C是正在融合的 细胞，D是杂种细胞。

细胞工程学教学大纲

《细胞工程学》教学大纲 课程名称：细胞工程学 课程类别：专业必修课 学时：32 学时 学分：2学分 考核方式：考试 适用专业：生物技术 开课学期：第5学期 一、课程性质、目的任务 《细胞工程》是通过对细胞及其组分的人工操作，研究生命活动规律；实现对动植物的遗传改造,用于农业、林业、园艺等生产实践；结合非生物材料等手段，生产用于治疗人类疾病或缺陷的人工器官，组织, 细胞及其代谢产物或用于深入研究的材料等为主要研究内容的一门新兴学科。 通过本课程的学习，使学生系统掌握该门学科形成与发展，理论与原理，技术与方法等基础知识，结合科研实际以及最新研究动态，使学生对本课程有一个全面的了解；以适应后基因组学时代在教学、科研和生产开发各方面对当代生命科学人才知识结构的需求。 二、课程基本要求 通过对细胞工程学的特性和内容，细胞工程的主要类型和技术操作，细胞工程学研究的基本方法等进行阐述，使学生能够掌握如何将细胞工程学知识应用于生产实践。 三、学时分配

四、教学方法与考核 1．教学方法：讲授法、案例分析法 2．课程考核方法：考试 1）平时成绩占20%，期末考试成绩占80% 2）平时成绩评分标准 平时成绩（100分），包括学生课堂出勤情况（20分）、课堂发言及积极参与情况（20分）、课后作业完成情况及质量（60分）。此项成绩需由教师提供评分依据及记录。 3）期末成绩评分标准 以评分标准为依据，所得卷面成绩为准，以考试试卷形式考查，考试形式为笔试，满分100分，试题包括基本知识概念，知识的理解和应用，综合应用等能力等教学内容的考查。全面涵盖本课程知识重点和难点，渗透学科前沿及进展，能够真实反映学生对本课程的知识和能力的学习情况。 五、大纲正文 绪论（2学时） 【目的要求】 1. 了解细胞工程的发展历史。 2. 了解生物工程学的组成内容 3. 了解细胞工程的应用。 4. 理解生物工程学与其它学科之间的学科交叉。 5. 理解细胞工程学与生物工程的其他技术之间的联系。 6. 掌握细胞工程学的主要组成。 7. 培养严谨、认真的科学观。

细胞工程原理

细胞工程原理 一、名词解释 1、生物工程：是以生命科学为基础，利用生物体系和工程原理生产生物制品和创造新物种的一门综合技术。 2、细胞工程：是指应用细胞生物学和分子生物学的方法，通过类似工程学的步骤，在细胞整体水平或细胞器水平上，有目的地利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术。 3、细胞全能性：是指分化细胞保留着全部的核基因组，具有生物个体生长、发育所需要的全部遗传信息，具有发育成完整个体的潜能。 4、细胞多能性：有些细胞能分化出多种组织的潜能，却失去了发育成完整个体的潜能。 5、植物组织培养：是指在无菌的条件下，将离体的植物器官、组织、细胞、胚胎、原生质体等培养在人工配制的培养基上，给予适当的培养条件，诱发产生愈伤、潜伏等，或者生长成新的完整植株的一种实验技术。 6、愈伤组织：脱分化后的细胞经过细胞分裂产生无组织结构、无明显极性的松散的细胞团，称之为愈伤组织。 7、继代培养：是愈伤组织在培养基上生长一段时间后，由于培养基枯竭、水分散失、并已积累了一些代谢产物，此时将组织继续转入新的培养基上培养。 8、胚状体：在培养过程中由外植体或愈伤组织产生的与正常受精卵发育的方式或类似的胚胎结构现象。 9、脱分化：已分化的细胞在一定因素作用下重新恢复分裂机能并改变原来的发展方向而沿着一条新的途径发育的过程。 10、再分化：脱分化的细胞团或组织经重新分化而变为具有未分化细胞特性的过程。 11、人工种子：又称合成种子或体细胞种子，是指将植物离体培养的胚状体或芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中的类似种子的颗粒。 12、看护培养：是指用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞，使其持续分裂和增殖的一种培养方法。 13、饲养层培养：是把处理过的（如X射线处理）无活性的或分裂很慢的细胞来饲养所需培养的细胞，使其分裂和生长的方法。 14、固定化培养：将游离的细胞包埋在多糖或多聚化合物制备成的网状支持物中，培养液呈流动状态进行无菌培养的一种技术。 15、两相培养技术：是在培养体系中加入有机溶剂或者具有吸附作用的多聚化合物。细胞在水相中生长，合成次级代谢物质，分泌出来后转移至有机相中。16、微细胞：又称为微核体，是指含有一条或n条染色体（即含有部分基因组），外有一薄层细胞质和一个完整质膜的核质体。 17、胚胎干细胞：是从着床前胚胎内细胞团或原始生殖细胞经体外分化抑制培养分离的一种全能性细胞。 18、细胞融合：两个或多个相同或不同细胞通过物理、化学、生物的方法使膜融合形成单个细胞的过程。 二、填空题 1、生物工程的六大组成：发酵工程、酶工程、蛋白质工程、基因工程、生物化学工程、细胞工程。 2、基因工程（DNA重组技术）的一般步骤：（1）目的基因的获得，（2）将目的

细胞融合技术的发展及应用

#专题综述# 细胞融合技术的发展及应用* 霍乃蕊a,韩克光b (山西农业大学a.食品科学与工程学院;b.动物科技学院,山西太谷030801) 摘要:细胞工程是四大生物工程之一,细胞融合技术作为细胞工程的一项核心基础技术已在农业、医药、环保等领域取得了开创性的研究成果,而且应用领域不断扩大。细胞融合技术的不断改进一方面表现在融合剂上,另一方面体现在新方法上,再者体现在融合对象的不断扩展上。现在新的细胞融合方法正在尝试将各种物理、化学手段综合应用,使细胞融合的方法和手段向操作更为简便,便于量化研究,同时又能使融合率得到不断提高的方向发展。本文以细胞融合技术的发展历史为主线,对上述内容做了简要综述。 关键词:细胞融合技术;发展;应用 中图分类号:Q813.2 文献标识码:A 文章编号:100727146(2006)022******* C ell Fu si on T echn iqu e:its D eve l opm en t and App lica ti on s H U O N a i2ru i a,HA N Ke2guang b (Shanxi Agr i cu lt ura lUn i ve rs it y a.College of Food Sc i ence and Eng i neering; b.College ofAn i m a l Sc ience and Technol ogy,Ta i gu030801,Shanx,i Ch i na) Ab stra ct:C ell u l a r engi neer i ng i s o ne of t he f our techniques of biote chnolo gy,and as t he core of ce ll ular engi neering, the cell fusi on technique ha s acqu ired outstand i ng ach ieve m ents i n m any fields such as agr icu lt ure,m ed icine and envi2 ron m enta l protecti on.Its app licati on i s still i ncreasi ng i n nu m ber.The i m prove m ent of t he ce ll fusi on techn i que i nvol ves the fusi on agent,new m e t hods and the cells used i n fusi on.No w new cell fusi on m ethods are re sorti ng to the co m b i ned usage of phys i ca l and chem i ca lm ethods to deve l op a s i m p le and co nven i ent,easy quantificati on and a t t he sam e ti m e can i ncrease the fusi on rate.A ll these aspects were d i scussed i n th i s pape r centered aro und the h i story of the cell f usio n te ch2 n i que. K ey word s:ce ll fus i on techn i que;deve l op m ent;app licati on 细胞工程是生物工程主要组成之一,出现于20世纪70年代末至80年代初,是在细胞水平上改变细胞的遗传特性或通过大规模细胞培养以获得人们所需物质的技术过程。细胞融合技术作为细胞工程的核心基础技术之一,已在农业、医药、环保等领域取得了开创性的研究成果,而且应用领域不断扩大。细胞融合技术不仅为核质关系、基因调控、遗传互补、细胞免疫学、肿瘤发生、基因定位、衰老控制等理论领域的研究提供了有力的手段,而且被广泛应用于免疫学、遗传学、发生生物学,特别是在单克隆抗体及动植物远缘杂交育种等方面具有十分重要的意义。随着细胞融合技术研究的不断深入,细胞融合 第15卷第2期2006年4月 激光生物学报 ACTA LAS ER BI O LOGY SI NI CA Vo.l15No.2 Ap r.2006 *收稿日期:2005203210;修回日期:2005209222 基金项目:山西省科委攻关项目(04105523);山西省自然科学基金项目(20041094) 作者简介:霍乃蕊(1972)),女,博士,现为澳大利亚纽卡斯尔大学访问学者,主要从事生物工程方面研究. (电子信箱)sxndkgh@163.co m

细胞工程学复习题

细胞工程学习题 1．诱导试管苗生根时，培养基的调整应 A．加大盐的浓度B．加活性炭 C．加大分裂素的浓度D．加大生长素的浓度 2．下列实验中可能获得三倍体植株的是 A．小麦的茎尖培养B．番茄花药培养 C．玉米胚乳培养D．玉米花粉培养 3．动物体内各种类型的细胞中，具有最高全能性的细胞是 A．体细胞B．生殖细胞C．受精卵D．干细胞 4．下列哪个是植物离体培养常用的主要糖类 A．葡萄糖B．果糖C．麦芽糖D．蔗糖 5．农杆菌介导的转化方法主要适用于 A．草本植物B．木本植物C．单子叶植物D．双子叶植物 6．原生质体纯化步骤大致有如下几步： ①将收集到的滤液离心，转速以将原生质体沉淀而碎片等仍悬浮在上清液中为准，一般以500r／min离心15min。用吸管谨慎地吸去上清液。

②将离心下来的原生质体重新悬浮在洗液中(除不含酶外，其他成分和酶液相同)，再次离心，去上清液，如此重复三次。 ③将原生质体混合液经筛孔大小为40～100um的滤网过滤，以除去未消化的细胞团块和筛管、导管等杂质，收集滤液。 ④用培养基清洗一次，最后用培养基将原生质调到一定密度进行培养。一般原生质体的培养密度为104～106／ml。 正确的操作步骤是：（） A ①②③④B②③①④C③①②④D③②①④ 7．常用的细胞融合剂是 A．刀豆球蛋白B．聚乙二醇（PEG）C．细胞松弛素B D．脂质体 8．利用细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体过程中，HAT培养基用来进行 A．细胞融合B．杂交瘤选择C．检测抗体D．动物免疫 9．下列过程中，没有发生膜融合的是 A．植物体细胞杂交B．受精过程 C．氧进入细胞中的线粒体D．单克隆抗体的产生 10．科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生 大量的单克隆抗体。与骨髓瘤细胞融合的是 A．经过免疫的B细胞B．没经过免疫的T细胞

细胞工程知识点

细胞工程知识点 1、细胞工程：以细胞为对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术。 2、细胞工程的应用： 1)动植物快速繁殖技术：植物组织培养、人工种子、试管动物、克隆动物 2)新品种的培育：细胞融合、细胞水平的重组 3)细胞工程生物制品：单克隆抗体制备、疫苗生产 4)细胞疗法与组织修复： 2细胞工程理论基础 1、细胞全能性：每个活的体细胞都具有像胚性细胞那样，经过诱导能分化发育成为一个新个体的潜在能力，并且具有母体的全部的遗传信息。 2、细胞分化：指细胞在形态、结构和功能上发生差异的过程。 3、细胞的脱分化：在一定营养和刺激因素作用下,具有特定结构与功能的植物组织的细胞被诱导而改变原来的发育途径,逐步失去原来的分化状态,细胞特性消失,转变为具有分生机能的细胞,并进行活跃的细胞分裂,这一过程称为去分化。 3细胞工程技术 1、实验室条件：组成：准备室、无菌间、操作间、培养室、分析室。 2、无菌技术、显微技术、细胞观察与分析、细胞分离、细胞保存与复苏 （1）细胞保存方法传代培养保存法低温冷冻保存法(低温、超低温保存) 液体固化的方式（形成冰晶、形成无定型的玻璃化状态） 玻璃化指液体转变为非晶态（玻璃态）的固定化过程，在此状态时，水分子没有发生重排，不产生结构和体积的变化，因此不会由于机械或溶液效应造成组织和细胞伤害，化冻后的细胞仍有活力。 冷冻方法（缓慢冷冻法、快速冷冻法预冷冻法包括逐级冷冻和两部冷冻） 细胞复苏按一定复温速度将细胞悬液由冻存状态恢复到常温的过程。 复苏细胞一般采用快速融化法。以保证细胞外结晶快速融化，以避免慢速融化水分渗入细胞内，再次形成胞内结晶损伤细胞。 细胞培养和代谢调控：

生物物理学课后习题及答案详解-袁观宇编著

第一章 1为何蛋白质的含氮量能表示蛋白质相对量？实验中又是如何依此原理计算蛋白质含量的？ 答：因为蛋白质中氮的含量一般比较恒定，平均为16%。这是蛋白质元素组成的一个特点，也是凯氏定氮测定蛋白质含量的计算基础。蛋白质的含量计算为：每克样品中含氮克数×6.25×100即为100克样品中蛋白质含量（g%）。（P1） 2.蛋白质有哪些重要的生物学功能？蛋白质元素组成有何特点？ 答：蛋白质是生命活动的物质基础，是细胞和生物体的重要组成部分。构成新陈代谢的所有化学反应，几乎都在蛋白质酶的催化下进行的，生命的运动以及生命活动所需物质的运输等都需要蛋白质来完成。蛋白质一般含有碳、氢、氧、氮、硫等元素，有些蛋白质还含有微量的磷、铁、铜、碘、锌和钼等元素。氮的含量一般比较恒定，平均为16%。这是蛋白质元素组成的一个特点。（P1） 3.组成蛋白质的氨基酸有多少种？如何分类？ 答：组成蛋白质的氨基酸有20种。根据R的结构不同，氨基酸可分为四类，即脂肪族氨基酸、芳香族氨基酸、杂环族氨基酸、杂环亚氨基酸。根据侧链R的极性不同分为非极性和极性氨基酸，极性氨基酸又可分为极性不带电荷氨基酸、极性带负电荷氨基酸、极性带正电荷氨基酸。（P5） 4.举例说明蛋白质的四级结构。 答：蛋白质的四级结构含有两条或更多的肽链，这些肽链都成折叠的α-螺旋。它们相互挤在一起，并以弱键互相连接，形成一定的构象。四级结构的蛋白质中每个球状蛋白质称为亚基。亚基通常由一条多肽链组成，有时含有两条以上的多肽链，单独存在时一般没有生物活性。以血红蛋白为例：P11-12。 5、举例说明蛋白质的变构效应。 蛋白质的变构效应：当某种小分子物质特异地与某种蛋白质结合后，能够引起该蛋白质的构象发生微妙而有规律的变化，从而使其活性发生变化，P13。 血红蛋白（Hb）就是一种最早发现的具有别构效应的蛋白质，它的功能是运输氧和二氧化碳，运输氧的作用是通过它对O2的结合与脱结合来实现。Hb有两种能够互变的天然构象，一种为紧密型T，一种为松弛型R。T型对氧气亲和力低，不易于O2结合；R型则相反，它与O2的亲和力高，易于结合O2。 T型Hb分子的第一个亚基与O2结合后，即引起其构象开始变化，将构象变化的“信息”传递至第二个亚基，使第二、第三和第四个亚基与O2的亲和力依次增高，Hb分子的构象由T型转变成R型…这就微妙的完成了运送O2的功能。书P13最后两段，P14第一段 6.常用的蛋白质分离纯化方法有哪几种？各自的原理是什么？ １、沉淀：向蛋白质水溶液中加入浓的无机盐溶液，可使蛋白质的溶解度降低，而从溶液中析出。 ２、电泳：蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的，在电场中能向电场的正极或负极移动。根据支撑物不同，有薄膜电泳、凝胶电泳等。 ３、透析：利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。 ４、层析：a.离子交换层析，利用蛋白质的两性游离性质，在某一特定pＨ时，各蛋白质的电荷量及性质不同，故可以通过离子交换层析得以分离。如阴离子交换层析，含负电量小的蛋白质首先被洗脱下来。 b.分子筛，又称凝胶过滤。小分子蛋白质进入孔内，滞留时间长，大分子蛋白质不能进入孔内而径直流出。5、超速离心：既可以用来分离纯化蛋白质，也可以用作测定蛋白质的分子量。不同蛋白质因其密度与形态各不相同而分开。 7.什么是核酸？怎样分类？各类中包括哪些类型？ 核酸是生物体内极其重要的生物大分子，是生命的最基本的物质之一。（P15第一段） 核酸分为脱氧核糖核酸DNA和核糖核酸RNA。（P15第一段）

细胞工程在细胞融合技术上的应用

摘要：细胞工程是四大生物工程之一，细胞融合技术作为细胞工程的一项 心基础技术已在农业、医药、环保等领域取得了开创性的研究成果，而且应用领域不断扩大。细胞融合技术的不断改进一方面表现在融合剂上，另一方面体现在新方法上，再者体现在融合对象的不断扩展上。现在新的细胞融合方法正在尝试将各种物理、化学手段综合应用，使细胞融合的方法和手段向操作更为简便，便于量化研究，同时又能使融合率得到不断提高的方向发展。 关键词：方法动物细胞融合植物细胞融合应用 1.细胞融合常用的技术 1.1生物法 仙台病毒HVJ诱导法 1962年日本的冈田善雄偶然发现了由日本血凝性病毒HVJ或称仙台病毒引起的艾氏腹水瘤细胞融合成多核细胞的现象+ 冈田善雄的研究为人工诱导体细胞杂交奠定了方法学基础, 细胞融合现象的发现引起细胞学界的高度重视。 1.2化学法 1.2.1盐类融合法 此法是应用最早的诱导原生质体融合的方法。盐类融合剂对原生质体的破坏小。今后研究应提高其融合率,使其对液泡化发达的原生质体能够诱发融合。1.2.2高钙和高pH值融合法 Keller首先发现高Ca2+和高pH值可以诱发融合。Melchers用此法将烟草种内2个光敏感突变体诱导融合成功并获得100余株体细胞杂种。提高该方法的使用范围是亟待解决的问题。 1.2.2聚乙二醇融合法(PEG法) 加拿大籍华人高国楠(1974)用聚乙二醇(PEG)为融合剂诱发大豆与大麦、大豆与玉米、哈加野豌豆与豌豆的融合[5]。此法比病毒更易制备和控制,活性稳定,用PEG作为病毒的替代物诱导细胞融合。在PEG诱导细胞融合的有效浓度范围内(50%～55%)对细胞的毒性应进一步减小。 1.3物理法 1.3.1电脉冲诱导细胞融合技术 电脉冲诱导细胞融合技术,产生于20世纪80年代,目前已成为细胞融合的有效手段之一。该技术融合效率高,是PEG的100倍,操作简便、快速,对细胞无毒无害,可在显微镜下观察融合全过程[6]。 1.3.2激光融合技术 1987和1989年德国海德堡理化研究所采用准分子激光器使油菜原生质体融合,从开始照射到完成融合仅需几秒钟[7]。该法可选择任意两个细胞进行融合,易于实现特异性细胞融合,作用于细胞的应力小,定时定位性强,损伤小,参数易于控制,操作方便,可利用监控器清晰地观察整个融合过程,实验重复性好,无菌无毒性,但它只能逐一处理细胞。 2细胞融合技术的最新进展

实验一：鸡血细胞融合

实验一：鸡血细胞融合 一、实验目的 1、熟悉细胞融合的理论； 2、掌握PEG诱导的细胞融合方法。 二、实验原理 1、细胞融合原理 两个以上的细胞合并成为一个双核或多核细胞称为融合细胞。在通常情况下，两个细胞接触并不发生融合现象，因为各自存在完整的细胞膜，在特殊融合诱导物的作用下，两个细胞膜发生一定的变化，就可促进两个或多个细胞聚集，相接触的细胞膜之间融合，继之细胞质融合，形成一个大的融合细胞。 利用PEG介导的动物细胞融合，其实验原理到目前为止还没有完全定论。学者们一般认为，PEG改变各类细胞的膜结构，使两细胞相互接触部位的膜脂双层中磷脂分子发生疏散、进而使其结构发生重排，再加上膜脂双层的相互亲合以及彼此间表面张力的作用，引起相临的重排质膜在修复时相互合并在一起,使两细胞的胞质沟通,从而造成相互接触的细胞之间发生融合。 细胞与组织不同，不排斥异类、异种细胞。不仅能产生同种细胞融合、种间细胞融合，而且也能诱导动植物细胞间产生融合。细胞融合(Cell fusion)，即在自然条件下或用人工方法(生物的、物理的、化学的)使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。人工诱导的细胞融合不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合。 2、细胞融合方法 诱导细胞融合的主要方法有：病毒诱导融合，化学融合剂诱导融合和电融合。 1. 病毒诱导融合：有许多种类的病毒能介导细胞融合，最常用的是灭活的仙台病毒（HVJ），为RNA病毒。病毒诱导细胞融合的过程有：首先是细胞表面吸附许多病毒粒子，接着细胞发生凝集，几分钟至几十分钟后，病毒粒子从细胞表面消失，而就在这个部位邻接的细胞的细胞膜融合，胞浆相互交流，最后形成融合细胞。 2. 化学融合剂诱导融合：化学融合剂主要有高级脂肪酸衍生物、脂质体、钙离子、水溶性高分子化合物、水溶性蛋白质和多肽，其中最常用的是聚已二醇（PEG）。PEG用于细胞融合至少有两方面的作用：①可促使细胞凝结；②破坏互相接触处的细胞膜的磷脂双分子层，从而使相互接触的细胞膜之间发生融合，进而细胞质沟通，形成一个打的双核或多核融合细胞。 3. 电融合：是指细胞在电场中极化成偶极子，并沿着电力线排列成串，然后用高强度、短时程的电脉冲击穿细胞膜而导致细胞融合。 所有的细胞融合方法都有其各自的优缺点，我们在本次实验中采用PEG诱导细胞融合的方法。 三、实验材料和用品