2011_2013年屎肠球菌和粪肠球菌的检出特点和药物敏感性分析_邹自英
条件治病菌之粪肠球菌研究报告观察
仅限学习使用个人资料整理 条件致病菌肠球菌）。对于肠球摘要：肠球菌不像大多数的乳酸菌一样，它不被认为是“安全可靠” 肠球菌检测 致病性检测耐药性检测肠球菌鉴定 1.07肠球菌为革兰阳性（G+）球菌，广泛分布于自然环境及人和动物消化道内。20世纪80年代以来，肠球菌严重感染的发生率和病死率明显升高，并且由于肠球菌的固有耐药和获得性耐药，使许多常用抗菌药物在治疗肠球菌感染时失败。因此，从分子水平对肠球菌致病因子、肠球菌引起的感染机制与治疗的研究显得尤为重要。 细菌分类学上，肠球菌属早期并不存在，现今的一些菌种本归属于链球菌属,1989年，依据Facklam和Collins的分类，肠球菌属内包括十二个种及一个变异株，它们是：粪肠球菌（E.faecalis）屎肠球菌（E.faecium) 鸟肠球菌(E.avium)酪黄肠球菌(E.casseliflavus) 坚忍肠球菌(E.durans)鸡肠球菌E.galinarum) 芒地肠球菌(E.mundii)恶臭肠球菌(E.maladoratum) 希拉肠球菌(E.hirae)孤立肠球菌（E.solitarius） 棉子糖肠球菌(E.raffinosus)假鸟肠球菌(E.pseudoavium) 粪肠球变异株(E.faecalis var)。 肠球菌属包括粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌、类鸟肠球菌、棉子糖肠球菌等21个种。 鉴定 形态与染色革兰阳性球菌，单个、成双或短链排列。 培养特性在血琼脂平板上35℃培养18～24小时，形成较小、灰白色，有溶血或溶血环的菌落。在康凯琼脂平板上形成较小、干燥、粉红色菌落。 生化反应触酶试验阴性，分解甘露醇，胆汁七叶苷试验阳性，在含6.5%NaCl肉汤中生长，多数菌株PYR试验阳性，对杆菌肽耐药。 操作步骤 涂片、染色观察菌落特征，挑取可疑菌落，涂片染色镜检。 触酶试验参见《触酶试验标准操作规程》。 鉴定从血琼脂平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。 科标生物检测中心从事饲料、土壤肥料、微生物及生物制剂、化妆品及日化用品、木材及木制品、其他生物材料等生物相关产品的性能测试、成分分析以及配方研发等工作。09 《饲料添加剂粪肠球菌》 河南省地方标准编制说明 一、编制的目的和意义 《饲料添加剂品种目录（2013）》(中华人民共和国农业部公告第2045号)将粪肠球菌规定为可以添加到饲料中的菌种，其在动物肠道内可形成生物薄膜附着于动物肠道粘膜上，并且发育、生长和繁殖。粪肠球菌广泛分布在畜、禽养殖场所和畜、禽产品生产加工的环境中，存在于人和动物上呼吸道、消化道、生殖道内。 粪肠球菌（Enterococcus faecalis）是革兰氏阳性，过氧化氢阴性球菌，是人和动物肠道内主要菌群之一，其能产生天然抗生素，有利于机体健康；同时还能产生细菌素等抑菌物质，抑制大肠杆菌和沙门氏菌等病原菌的生长，改善肠道微环境；还能抑制肠道内产尿素酶细菌和腐败菌的繁殖，减少肠道尿素酶和内毒素的含量，使血液中氨和内毒素的含量下降。粪肠球菌（E. faecalis）作为一种益生菌，在医学和食品工程领域得到广泛应用。另外，肠球菌为消化道内正常存在的一类微生物，在肠黏膜具有较强的耐受和定植能力，并且是一种兼性厌氧的乳酸菌，与厌氧、培养保存条件苛刻的双歧杆菌相比，更适合于生产和应用。 粪肠球菌饲用微生物中的作用：①粪肠球菌制备成微生物制剂可直接投喂养殖动物，有利于改善肠道内微生态平衡，防治动物肠道菌丛区系紊乱。②分解蛋白质为小肽、合成B族维生素等功效。③粪肠球菌也能增强巨嗜细胞的活性，促进动物的免疫反应，提高抗体水平。④粪肠球菌在动物肠道内可形成生物薄膜附着于动物肠道粘膜上，并且发育、生长和繁殖，可形成乳酸菌屏障，抵御外来病菌病毒及霉菌毒素等的副影响，而芽孢杆菌和酵母菌等都是过路菌，没有这个功能。⑤粪肠球菌能把部分蛋白质分解成酰胺和氨基酸，把大部分的碳水化合物的无氮浸出物转化为L型乳酸，可以对钙质合成L-乳酸钙，促进养殖动物对钙质的吸收。⑥粪肠球菌还能够将饲料中的纤维变软，提高饲料的转化率。⑦粪肠球菌粪肠球菌能够产生多种抗菌物质，这些抗菌物质对动物体内常见的致病菌具有良好的抑制作用。 有学者研究发现，粪肠球菌能够将饲料中的纤维变软，提高饲料的转化率。在玉米秸秆青贮饲料中添加粪肠球菌和纤维素酶，能使青贮饲料的色泽、气味和质地等发生明显的改善，干物质消失率提高8%，氨态氮与总氮质量比降低33%，丁酸质量分数降低82%，同时使中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维含量分别降低10%和7%，明显提高了饲料品质。粪肠球菌能够产生多种抗菌物质，这些抗菌物质对沙门氏菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌等致病菌具有良好的抑制作用。研究表明，粪肠球菌能够产生伏尔加霉素， 第三节肠球菌属 广泛分布在自然界，常栖居人、动物得肠道与女性生殖道，就是引起医院内感染得重要病原菌。 一、分类： 链球菌科，具有D群链球菌得D抗原，过去就是属于链球菌属得D 群，但种系分类法用DNA杂交研究发现，证实粪肠球菌与屎肠球菌不同于链球菌属细菌，与链球菌同源程度低，所以现将其从链球菌属中划分出来，命名为肠球菌属。由16SrRNA序列分析与核酸杂交等，证实有19种肠球菌，分成5群，临床标本分离得多属于群2。 二、临床意义： 最多见于尿路感染，多与尿路器械操作、留置导尿、尿路结构异常有关，就是重要得医院感染病原菌。腹腔与盆腔创伤时肠球菌也就是常见细菌。肠球菌引起得菌血症常发生于有严重基础疾病得老年人、长期住院接受抗生素治疗得免疫功能低下得患者。近年来不断上升得肠球菌感染率与广泛使用抗生素出现得耐药性有关。 三、微生物特性： G+球菌，单个、成双或短链状排列，琼脂平板上生长得细菌呈球杆状，液体培养基中呈卵圆形、链状排列。无芽胞与荚膜，个别菌种有稀疏鞭毛。 兼性厌氧菌，最适温度35℃，大多数菌株在10℃与45℃均能生长。所有菌株在含6、5%NaCl肉汤中能生长，在40%胆汁培养基中能分解七叶苷。 多数菌种具有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-β-萘基酰胺（PYR），氧化酶（-），触酶（-）但某些菌株触酶可出现弱（+）。当粪肠球菌培养于含血得培养基中，可合成细胞色素氧化酶或触酶或两者皆有。 含D群链球菌D抗原。 与链球菌得显著区别： 能在高盐（6、5%NaCl）、高碱（pH9、6）、高胆汁（40%）培养基、10℃与45℃均能生长、对许多抗菌药物表现天然耐药 四、微生物检查： （一）检验程序：图6-3 （二）标本采集： 血、尿、创伤标本等，标本1h内接种完毕。 （三）标本直接检查： G染色镜检 （四）分离培养与鉴定： BAP 若标本中含G-杆菌，可用选择鉴别培养基： ①叠氮胆汁七叶苷琼脂——可抑制G-菌生长，肠球菌分解七叶苷为黑色菌落； ②哥伦比亚多黏菌素-萘啶酸琼脂（CAN）与苯乙基乙醇琼脂（PEA）。35℃、24h形成灰白色、不透明、表面光滑、直径0、5~1mm大小得圆形菌落，羊血平板上为α溶血或不溶血，粪肠球菌得某些菌株在马 粪肠球菌的应用与安全风险分析 佟建明 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 2014-09-22 提纲 一、粪肠球菌简介 二、粪肠球菌在蛋鸡上的饲喂效果 三、粪肠球菌的毒力因子 四、粪肠球菌主要毒力因子检测 五、粪肠球菌的安全风险分析 一、粪肠球菌简介 也称粪链球菌（Enterococcus faecalis）。卵圆形细胞，可顺链的方向延长，直径0.5～1.0微米，大多数成对或成短链，通常不运动。一种兼性厌氧菌，革兰氏阳性细菌，肠道中的优势菌群。 容易培养，在肠道中具有较强的耐受性和定植能力，能分泌细菌素，被用作益生菌。其安全风险被不断研究和讨论，并日趋深入。 表2.1 试验分组 90 10 1.0×1012 1.0×1010 Ⅳ（试验组） 90101.0×10101.0×108Ⅳ（试验组）90101.0×1081.0×106Ⅲ（试验组）90101.0×1061.0×104Ⅱ（试验组）901000Ⅰ（对照组）鸡数（只）菌液添加量（ml/kg） 菌液浓度（cfu/ml） 粪肠球菌添加水平 （cfu/g） 处理二、粪肠球菌在蛋鸡上的饲喂效果 表2.2 粪肠球菌对产蛋期蛋鸡体重及产蛋率的影响 86.896 81.796 86.728 88.915 86.694 141-168天 88.71985.39789.73188.21289.939113-140天86.66682.73886.00186.59187.80985-112天93.11289.24691.58790.27892.48957-84天92.76389.20692.57991.74693.01629-56天79.32078.09576.19079.80281.2651-28天产蛋率 (%)1757.20 1735.25 1724.77 1759.77 1741.25 168天1575.661575.491575.571575.571574.600天体重 (g) 1.0×1010 1.0×108 1.0×106 1.0×104 粪肠球菌添加水平 (CFU/g) 项目二、粪肠球菌在蛋鸡上的饲喂效果 粪肠球菌所致尿路感染治疗方法是什么? 粪肠球菌感染是属于比较常见的一种人体疾病，患有粪肠球菌尿路感染会容易影响到身体的健康，同时还会容易导致人体盆腔内感染等，而治疗粪肠球菌的尿路感染方法有很多种，可以先通过注射药物的方式进行治疗，可以注射抗炎类药物，或者是服用抗炎类药物进行治疗。 ★病因 肠球菌属中对人类致病者主要为粪肠球菌，少数为屎肠球菌、坚忍肠球菌等。肠球菌属为人类肠道正常菌群，在外界环境中亦存在。该类菌可致院内，也可致院外感染，广谱抗菌药，尤其是头孢菌素类等的应用，留置导尿，血液及腹膜透析等均为导致肠球菌院内感染的危险因素。 1、尿路感染粪肠球菌所致感染中最为常见，院内尿路感染 多发生于留置导尿管或其他器械应用的患者，多表现为下、上尿路感染，少数为前列腺炎和肾周脓肿，在院外单纯性尿路感染中肠球菌所致者相对少见。 2、败血症和心内膜炎尿路、腹腔、盆腔感染、烧伤后伤口感染等均可成为败血症的入侵病灶，肠球菌约可占感染性心内膜炎病原菌的5%～15%，主要为粪肠球菌，少数为屎肠球菌、鸟肠球菌(E.avium)、坚忍肠球菌等。 3、腹腔、盆腔感染较大肠杆菌和厌氧脆弱类杆菌引起者为少见，常系与上述细菌的混合感染。 4、其他少见情况下肠球菌可致伤口感染、蜂窝织炎、脑膜炎，极少致呼吸道感染。由粪肠球菌、屎肠球菌引起的早产儿败血症和脑膜炎有少数病例报道。 ★治疗 肠球菌感染的抗菌治疗肠球菌对多种抗生素或抗菌药耐药，仅对青霉素、氨苄西林呈中度敏感，哌拉西林等亦可对其具中等抗菌活性，因此可选用上述药物，严重感染败血症、心内膜炎、脑膜炎时需与氨基糖甙类抗生素联合应用。万古霉素对肠球菌有良好杀菌作用，因此根据病情，也可选用青霉素类与万古霉素的联合应用，青霉素类的剂量宜大。心内膜炎等的疗程宜长，以避免复发。 屎肠球菌 开放分类：健康生活细菌 屎肠球菌属肠球菌属，是人及动物肠道中正常菌群的一部分，肠球菌为圆形或椭圆形、呈链状排列的革兰阳性球菌，无芽胞，无鞭毛，为需氧或兼性厌氧菌。 摘要 目录 1简介 2耐药特征 3耐药性分析 4溶血素形成过程 5生物学特性 6对抗生素耐药性分析 7应用研究 8潜在危害性 屎肠球菌- 简介 屎肠球菌图册 屎肠球菌是动物肠道正常菌群中的菌类，因其能产生乳酸，所以归属于乳酸菌类。屎肠球菌是一种益生菌，对维持动物肠道菌群生态平衡起到重要作用，特别是在幼龄动物的肠道保健和疾病的防疫和治疗上有突出的表现。许多企业将其制成微生态饲料添加剂，但是屎肠球菌的抗逆性较差，在生产加工中不能有效的保持其活性，对屎肠球菌的利用产生了很大的问题。 屎肠球菌，革兰氏阳性，椭圆形或球杆状，无芽孢，无鞭毛。生长温度为30℃～40℃，适宜pH为5.0～7.5。最适生长温度为35～38℃。屎肠球菌是兼性厌氧的乳酸菌，和大多数的乳酸菌一样，其耐酸性耐高温性等抗逆性能差，但是相对于严格厌氧、培养和保存条件都苛刻的双歧杆菌、乳杆菌来说，屎肠球菌更是便于生产和使用的首选菌种。常规的乳酸菌必须在动物肠道的特定部位才能产生功效，天然乳酸菌不耐饲料制粒时的高温、胃酸及胆盐的侵蚀。 经饲料制粒后大多数乳酸菌会死亡，在胃里大约30min后也会死亡殆尽，安全到达肠道发挥作用的活菌数非常低，也无法吸附在肠粘膜的适当位置，随着粪便排出体外。屎肠球菌代谢可以产生有机酸、过氧化氢细菌素等物质，这些物质具有抑制病原菌和腐败菌，提高免疫力、改善畜产品品质等生理功效。 其中代谢产生的细菌素可有效治疗养殖场中常见的顽固疾病，如对葡萄球菌、梭状芽孢杆菌、沙门氏菌和志贺氏菌有拮抗作用，并且不留有药残。代谢产生大量乳酸，可以显著降低动物肠道pH，保持肠道的酸性环境，抑制病原菌的生长，对致病菌痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、弯曲杆菌、葡萄球菌等致病菌有拮抗作用。过氧化氢能抑制和杀死革兰氏阴性菌和过氧化氢阳性菌如假单胞菌属、大肠杆菌类、沙门氏菌属。 屎肠球菌- 耐药特征 了解粪肠球菌和屎肠球菌在临床标本中的分布及对常用抗菌药物的耐药性，比较不同标本中两种肠球菌的耐药性，为临床治疗提供参考。方法常规法进行菌种鉴定，纸片扩散法进行药物敏感试验。结果420株肠球菌属，来源于尿液、脓液分泌物、痰液，分别占43％、20％、14％位居各类标本中的前3位，粪肠球菌对青霉素、氨苄西林和哌拉西林／他唑巴坦的耐药率分别为23．0％、17．6％和21．2％，明显低于屎肠球菌对这3种抗菌药物的耐药率（90．0％、87．0％和87．7％），而屎肠球菌对氯霉素和四环素的耐药率分别为7．9％和24．6％，明显低于粪肠球菌对这两种抗菌药物的耐药率（43．8％和74．4％），两种肠球菌中，未发现万古霉素耐药株；尿液标本中粪肠球菌对呋喃妥因的耐药率明显低于屎肠球菌。结论临床标本中，肠球菌属在尿液中的分布最高；粪肠球菌和屎肠球菌的耐药谱明显不同，在治疗时，应根据不同的菌种选择用药，由于肠球菌属对万古霉素的耐药率极低，在重症感染时，可选用万古霉素进行治疗。 屎肠球菌- 耐药性分析 屎肠球菌图册 一、材料和方法 1、标本来源 2004年1月至2007年12月本院住院患者的临床标本中分离出的144株粪肠球菌和121株屎肠球菌(多次分离的重复株以第一次计算)，其中尿80株、痰75株、分泌物27株、血25株、引流液17株、胆汁14株、脓液10株、导管9株、腹水8株。 2、医院感染的诊断标准按照卫生部医政司医院感染监控小组制定的医院感染的诊断标准。 3、细菌培养鉴定和药敏试验按常规的方法对住院患者的各种临床标本进行细菌的培养分离，用VITEK2全自动微生物鉴定仪及配套试剂进行细菌的鉴定及药敏试验；鉴定卡GP、药敏卡AST-353。 FEED ADDITIVE 饲料添加剂 47 2018·7 摘 要 粪肠球菌是一种革兰氏阳性兼性厌氧菌，能耐受较低的pH，对胃液、肠液、胆盐耐受性较高，是较具应用潜力的益生菌之一；在水产养殖中粪肠球菌具有维持消化道微生态平衡，促进营养物质吸收，提高机体免疫力和净化养殖水环境的作用。科学使用粪肠球菌，可促进水产养殖业健康发展。 水产养殖对产量的过高追求往往导致养殖密度过高，超出了水体的承载能力，从而导致养殖环境恶化、水产动物免疫力降低，疾病防治难度增加，而抗生素、杀虫剂等药物的不合理使用又会出现病原生物抗药性增强和药物残留超标等问题。以上问题将阻碍水产养殖业的可持续发展甚至威胁到人类的健康。随着人们生活水平的提高和食品安全意识的增强，对水产品品质提出了更高的要求，这将促使水产养殖业向着健康、生态养殖方向发展。 微生态制剂因具有安全高效无残留的特点，符合水产养殖业的发展趋势，受到人们的普遍关注并逐渐在水产养殖中得到推广和应用，在确保我国水产养殖业的健康持续发展，减少化学试剂及药物的使用量，降低养殖水产品中的药物残留，提高养殖水产品的质量安全水平等方面发挥重要的作用。目前，光合细菌、芽孢杆菌、乳酸菌等微生物产品已经在水产养殖中得到较广泛的应用。 粪肠球菌（Enterococcus faecalis）属乳酸菌的肠球菌科，肠球菌属，是人和动物肠道内主要菌群之一，可把部分糖类的无氮浸出物转化为乳酸供机体使用，分泌的L 型乳酸可完全被机体吸收利用。《饲料添加剂品种目录（2013）》将粪肠球菌规定为可以添加到饲料中的菌种，与厌氧、 粪肠球菌在水产养殖中的应用研究进展 徐亚飞1 曾新福1 乐 敏2 李 慧1 刘金松1 （1.浙江惠嘉生物科技股份有限公司；2.浙江大学动物科学学院） 培养保存条件苛刻的双歧杆菌相比，更适合于生产和应用。粪肠球菌作为微生态制剂在水产养殖业中具有广阔的应用前景。1 粪肠球菌的生物学特性 粪肠球菌为革兰氏阳性兼性厌氧菌，菌体为圆形或椭圆形，直径约0.5～1.0 μm，在液体培养基中呈长链状延伸生长，固体培养基中呈较短的双链或单短链状排列，菌体周围无鞭毛和芽孢，无运动性。其营养要求低，在普通琼脂培养基上可生长，在含有血清的培养基上生长良好，菌落大且光滑，扁平隆起，不透明，灰白色，边缘完整，直径1～2 mm，表现为α 或β 性溶血。能在10℃或45℃ 条件下生长，并能耐65℃温度30分钟，可在pH 9.6和含6.5%NaCl肉汤培养基中生长。它可利用精氨酸为能源，发酵葡萄糖产酸不产气，不发酵阿拉伯糖。在简单的培养基上生长不需要叶酸。过氧化氢酶试验、硝酸盐还原试验、接触酶试验均为阴性。2粪肠球菌在水产养殖中的主要功效2.1维持消化道微生态平衡 粪肠球菌能耐受较低的pH，对胃液、肠液、胆盐耐受性较高，能够顺利通过胃到达肠道定植，为发挥益生菌作用提供先决条件。粪肠球菌进入肠道定植后可大量增殖，抑制有害微生物的生长，调节肠道微生态平衡，减少肠道疾病的发生。粪肠球菌在生长繁殖过程中产生的乳酸、乙酸和异丁酸等有机酸可调节肠道pH值，从而抑制有害微生物的生长。此外，粪肠球菌可产生抑菌代谢产物，如细菌素。细菌素可与敏感细胞表面受体特异性结合，形成离子通道引起离子渗漏，影响ATP的合成和特定物质的运输，最终抑制蛋 Open Journal of Natural Science 自然科学, 2020, 8(5), 387-391 Published Online September 2020 in Hans. https://www.wendangku.net/doc/615721507.html,/journal/ojns https://https://www.wendangku.net/doc/615721507.html,/10.12677/ojns.2020.85047 肠球菌：潜在的益生菌 黄云飞 四川大学生命科学学院，四川成都 收稿日期：2020年8月4日；录用日期：2020年8月17日；发布日期：2020年8月24日 摘要 肠球菌是一种广泛存在于自然环境中的乳酸菌(LAB)，同时也可寄居于人和动物的肠道内。肠球菌因其在健康促进方面的作用和食品工业中的技术优势等特性，它被广泛应用在发酵生产和药物中。肠球菌可作发酵剂、发酵附加物及益生菌。益生菌用于治疗腹泻、抗生素相关腹泻或肠易激综合征，降低胆固醇水平或提高宿主免疫力。本文就肠球菌的有益性进行综述。 关键词 肠球菌，益生菌 Enterococcus: Potential Probiotics Yunfei Huang Life Sciences College, Sichuan University, Chengdu Sichuan Received: Aug. 4th, 2020; accepted: Aug. 17th, 2020; published: Aug. 24th, 2020 Abstract Enterococci are ubiquitous lactic acid bacteria (LAB) that exist widely in food and the natural en-vironment, and they can also reside in the gastrointestinal tract of humans and animals. Entero-cocci are widely used in fermentation production and medicine due to their role in health promo-tion and technical advantages in the food industry. For example, Enterococci can be used as start-ers, fermentation additives and probiotics. Probiotics are used to treat various kinds of diarrhea, including antibiotic-related diarrhea and irritable bowel syndrome. Moreover, Enterococci are able to lower cholesterol levels and improve hosts’ immunity. This review summarizes the bene-fits of Enterococci. 条件致病菌肠球菌 摘要：肠球菌不像大多数的乳酸菌一样，它不被认为是“安全可靠”（GRAS）。对于肠球菌的安全评价仍存有争议。虽然肠球菌被认为是“积极“或在奶酪技术中有用，但它的隔离种群已经作为对人类的条件致病菌出现。因此，这些细菌对发酵乳制品是否有益处于似是而非的地位，以为它存在有潜在的危险。本篇综述是概述了肠球菌的积极的和消极的两种特性，并举例说明这个菌的具有争议的特性。根据食品安全评价准则，我们提出对于每个潜在的技术应变逐个进行评估，并且建议肠球菌在发酵食品中使用前进行个别研究。 1.简介 肠球菌最初列为D群链球菌，这种分类可以追溯到由兰斯菲尔德建立的计划。1984年，肠球菌给予了新的位置被列为肠球菌属，在经过DNA-DNA和DNA-RNA杂交的研究后证明它与链球菌属有较远的关系(Schleifer and Kilpper-Balz, 1984)。到目前为止32种已被提议列入肠球菌属（2005年10月26号)。肠球菌种适宜在6.5％氯化钠，40％胆汁盐且pH值在9.6，并可以在60°C的环境下生存30分钟。大多数品种也可以在10℃至45℃之间生长(Moellering,1992;Flahautet al.,1996)。粪肠球菌和屎肠球菌都是人类消化道微生物自然存在的菌种，在胃肠道中因为个体差异其含量差异变化很大（在每克消化系统内容物中含有102和108）。肠球菌通常从食品、植物、水和土壤中分离，可能由于它的来源是粪便使得他们的天性在恶劣环境中比较耐受(Giraffa,2002)。在牛奶和奶酪制品中通常会找到粪肠球菌、屎肠球菌和少量的坚忍肠球菌，偶然也会发现小肠肠球菌和铅黄肠球菌。不同于其他乳酸菌，肠球菌不能被认为是“一般认为安全”（GRAS），并且它在水中检测是作为粪便污染物的指标的(Godfree et al.,1997)。一般认为对于肠球菌的安全评价程序是一个模棱两可的状况。一方面，肠球菌在作为奶酪技术中作为发酵培养物被认为是由积极作用的(Giraffa,2003)；另一方面，它们被认为是新兴的人类病原体(Moellering,1992)。这篇综述主要是根据现有知识总结了肠球菌的积极和消极的性状，来强调这种菌属的争议性。食品安全准则着重强调了对抗生素耐药性和毒力的因素，这样使我们建议在发酵食品中使用肠球菌前应对这几项进行研究。 2．分类和鉴定 由于肠球菌的表型多样性，这使得肠球菌种的生理测试鉴定一直存在问题(Devriese et al.,1993;Park et al.,1999)。此外，物种鉴定的常规实验往往需要很长的培养时间(Facklam et al.,2002)。使用16S和23S rDNA基因的基因型鉴定方法更加的准确，虽然它们还不能区分所有肠球菌的物种（例如鹑鸡肠球菌和铅黄肠球菌有99.8%的16S rDNA的同源性）。这种方法已经成功的在应用：1）rRNA基因间隔区的特异PCR扩增技术(Naimi et al.,1997)，ddl和van基因(Satake et al.,1997;Kariyama et al.,2000)，ace 基因(Duh et al.,2001)，sodA 基因(Jackson et al.,2004)，2）转录调控基因Ef0027的扩增(Liu et al.,2005)，3）ddl 基因(Ozawa et al.,2000)，cpn60 基因(Goh et al.,2000)和atpA 基因(Naser et al.,2005)的测序，和4）利用5‘端引物（GTG）的细菌基因组重复序列PCR技术(Svec et al.,2005)。 有许多人试图区分从人分离的菌株和从食物分离的菌株,大部分主要关注的DNA指纹图谱。这些研究使用了多种分子分型方法，如扩增rDNA限制性分析（ARDRA）(Ulrich and Muller,1998)，脉冲场凝胶电泳（PFGE）的DNA宏观限制模式(Deschee-maeker et al.,1997;Gambarotto et al.,2001;Vancanneyt et al.,2002)，随机扩增多态性DNA（RAPD）- PCR检测(Cocconcelli et al.,1995;Descheemaeker et al.,1997;Andrighetto et al.,2001;Cosentino et al.,2004;Martin et al.,2005)和扩增片段长度多态性（AFLP）技术(Antonishyn et al.,2000;Willems et al.,2000;Vancanneyt et al.,2002)。脉冲场凝胶电泳（PFGE）已成功地用于表现临床和食品株之间的差异，以及从家禽和住院患者分离的菌株 破裂使血小板活性增强,血栓形成。 近来研究认为,血小板胞浆内α2颗粒上的膜糖蛋白(CD62p)及溶酶体膜糖蛋白(CD63)均为活化血小板膜糖蛋白,成为血小板活化的标志[5],CD62p是目前最具有特征性的血小板活化的分子标志物,CD63被认为是一种较CD62p 更为敏感的血小板活化标志物[6]。全血流式细胞术是血小板膜糖蛋白检测中非常准确的方法,检测表达有活化分子标志物的血小板数量能直接、敏感、特异地反映体内血小板的活化程度和功能状态[7],对探讨与血小板活化相关的疾病有重要意义。本研究对采样标本立即染色,采用全血流式细胞术,减少体外人为的血小板激活和血小板亚群的丢失,检测活化血小板表面的特异性膜糖蛋白水平,了解体内血小板的活化状态。 本研究结果显示,国产替罗非班用于急性冠状动脉综合征,3天后受试组疗效与对照组相差不大,10天后受试组疗效明显优于对照组(P<0.05);患者血小板活化度(CD63、CD62p的指标)明显下降(P<0.05或P<0.01)。与国外多数报道一致。国产替罗非班作为我国新一代抗血小板黏附和聚集的药物,对急性冠状动脉综合征是安全有效的,但限于本研究的样本数量有限,需进一步大规模临床观察证实。 参考文献: [1] 沈杰,沈卫峰.替罗非班在急性冠脉综合征介入治疗中的应用 [J].国际心血管病杂志,2006,33(3):1562159. [2] 洪云飞,李易,李建美,等.冠状动脉内注射替罗非班治疗无再 流现象28例临床观察[J].临床荟萃,2006,21(21):155821559. [3] Atwater BD,Roe M T,Mahaffey KW,et al.Platelet glycoprotein Ⅱb/Ⅲa receptor antagonist s in non2ST segment elevation acute coronary syndromes:a review and guide to patient selection[J]. Drugs,2005,65(3):3132324. [4] K im J H,Jeong M H,Rhew J Y,et al.Long2term clinical outcomes of platelet glycoproteinⅡb/Ⅲa in hibitor combined wit h low molecular weight heparin in patient s wit h acute coronary syndrome[J].Circ J,2005,69(2):1592164. [5] 朱礼炜,李晓强,贾伟,等.兔后腔静脉血栓形成后血小板膜糖蛋 白CD62p、CD63的表达变化[J].解剖与临床,2005,10(4):2752 277. [6] Chen Y,Davis2G orman G,Wat son RR,et al.Platelet CD62p expression and microparticle in murine acquired immune deficiency syndrome and et hanol consumption[J].Alcohol, 2003,38(1):25230. [7] 李雄,叶汉兰,方晓江,等.冠心病患者循环活化血小板的改变及 阿司匹林抵抗的处理[J].心脑血管病防治,2003,3(6):15. 收稿日期:2008203225 修回日期:2008204228 编辑:李玉丁 肠球菌感染及其药敏分析 王旭明,赖燕燕 (海南省人民医院检验科,海南海口570102) 关键词:肠球菌;感染;微生物敏感性试验 中图分类号:R378.1;R978.1 文献标识码:B 文章编号:10042583X(2008)1220895202 近年来,由于广谱抗生素和免疫抑制剂的广泛应用,以及侵入性治疗的增加,使原来认为致病力较弱的肠球菌,在临床感染中逐渐多起来,成为医院感染的主要病原菌之一,因此应重视由肠球菌引起的感染。我们总结本院肠球菌在临床感染中分布及药敏特点,现报告如下。 1 资料与方法 1.1 菌株来源 2004～2005年间我院住院患者或门诊患者临床标本中所分离的4328株细菌,检测结果全部内存vitek2 32CC4电脑中,其中肠球菌296株,66株为门诊患者泌尿生殖道分泌物,住院患者230株,主要来源的标本有尿液107株,外科切口分泌物51株,胸腔、腹腔引流液30株,痰21株,血液8株,脓液6株。 1.2 菌株鉴定 所有实验菌株均采用vitek232全自动微生物分析仪鉴定。 1.3 药敏检测 采用vitek GPS2101或GPS2107卡(生物梅里埃公司的产品),主要检测的药敏有氨苄西林、环丙沙星、庆大霉素500、链霉素2000、呋喃妥因、四环素、万古霉素、青霉素G等8种临床常用于治疗肠球菌的抗生素,庆大霉素高耐株为庆大霉素500耐药,链霉素高耐株为链霉素2000耐药。实验操做按说明书进行。 1.4 药敏质控菌株 粪肠球菌A TCC33186(对氨基糖苷类和万古霉素敏感)和粪肠球菌A TCC51299(对氨基糖甙类和万古霉素耐药),金黄色葡萄球菌A TCC25923,所有药敏质控结果均符合NCCL S最新颁布的药敏质控范围。 1.5 数据处理 生物梅里埃vitek2CC4电脑软件统计。 2 结 果 2.1 分离细菌结果 2年共检出临床各种细菌4328株,从多到少排在前4位的细菌依次为铜绿假单胞816株(18.9%),大肠埃希菌521株(12.0%),金黄色葡萄球菌364株(8.4%),肠球菌296株(6.9%),因此肠球菌在临床感染中占第4位,仅次于金黄色葡萄球菌。 2.2 肠球菌的构成比 共检出296株肠球菌,其中主要有粪肠球菌196株(66.2%),屎肠球菌59株(19.9%),见表1。 表1 296株肠球菌的分布 菌种名称菌株数构成比(%) 粪肠球菌 19666.2 屎肠球菌 5919.9 鹑鸡肠球菌19 6.4 铅黄肠球菌10 3.4 鸟肠球菌 7 2.4 海氏肠球菌 3 1.0 耐久肠球菌 2 0.7 合计296100.0 肠球菌 摘要：肠球菌不像大多数的乳酸菌一样，它不被认为是“安全可靠”（GRAS）。对于肠球菌的安全评价仍存有争议。虽然肠球菌被认为是“积极“或在奶酪技术中有用，但它的隔离种群已经作为对人类的条件致病菌出现。因此，这些细菌对发酵乳制品是否有益处于似是而非的地位，以为它存在有潜在的危险。本篇综述是概述了肠球菌的积极的和消极的两种特性，并举例说明这个菌的具有争议的特性。根据食品安全评价准则，我们提出对于每个潜在的技术应变逐个进行评估，并且建议肠球菌在发酵食品中使用前进行个别研究。 1.简介 肠球菌最初列为D群链球菌，这种分类可以追溯到由兰斯菲尔德建立的计划。1984年，肠球菌给予了新的位置被列为肠球菌属，在经过DNA-DNA和DNA-RNA杂交的研究后证明它与链球菌属有较远的关系(Schleifer and Kilpper-Balz, 1984)。到目前为止32种已被提议列入肠球菌属(http://www.bacterio.cict.fr/bacdico/ee/Enterococcus.html,2005年10月26号)。肠球菌种适宜在6.5％氯化钠，40％胆汁盐且pH值在9.6，并可以在60°C的环境下生存30分钟。大多数品种也可以在10℃至45℃之间生长(Moellering,1992;Flahautet al.,1996)。粪肠球菌和屎肠球菌都是人类消化道微生物自然存在的菌种，在胃肠道中因为个体差异其含量差异变化很大（在每克消化系统内容物中含有102和108）。肠球菌通常从食品、植物、水和土壤中分离，可能由于它的来源是粪便使得他们的天性在恶劣环境中比较耐受(Giraffa,2002)。在牛奶和奶酪制品中通常会找到粪肠球菌、屎肠球菌和少量的坚忍肠球菌，偶然也会发现小肠肠球菌和铅黄肠球菌。不同于其他乳酸菌，肠球菌不能被认为是“一般认为安全”（GRAS），并且它在水中检测是作为粪便污染物的指标的(Godfree et al.,1997)。一般认为对于肠球菌的安全评价程序是一个模棱两可的状况。一方面，肠球菌在作为奶酪技术中作为发酵培养物被认为是由积极作用的(Giraffa,2003)；另一方面，它们被认为是新兴的人类病原体(Moellering,1992)。这篇综述主要是根据现有知识总结了肠球菌的积极和消极的性状，来强调这种菌属的争议性。食品安全准则着重强调了对抗生素耐药性和毒力的因素，这样使我们建议在发酵食品中使用肠球菌前应对这几项进行研究。 2．分类和鉴定 由于肠球菌的表型多样性，这使得肠球菌种的生理测试鉴定一直存在问题(Devriese et al.,1993;Park et al.,1999)。此外，物种鉴定的常规实验往往需要很长的培养时间(Facklam et al.,2002)。使用16S和23S rDNA基因的基因型鉴定方法更加的准确，虽然它们还不能区分所有肠球菌的物种（例如鹑鸡肠球菌和铅黄肠球菌有99.8%的16S rDNA的同源性）。这种方法已经成功的在应用：1）rRNA基因间隔区的特异PCR扩增技术(Naimi et al.,1997)，ddl和van基因(Satake et al.,1997;Kariyama et al.,2000)，ace 基因(Duh et al.,2001)，sodA 基因(Jackson et al.,2004)，2）转录调控基因Ef0027的扩增(Liu et al.,2005)，3）ddl 基因(Ozawa et al.,2000)，cpn60 基因(Goh et al.,2000)和atpA 基因(Naser et al.,2005)的测序，和4）利用5‘端引物（GTG）的细菌基因组重复序列PCR技术(Svec et al.,2005)。 有许多人试图区分从人分离的菌株和从食物分离的菌株,大部分主要关注的DNA指纹图谱。这些研究使用了多种分子分型方法，如扩增rDNA限制性分析（ARDRA）(Ulrich and Muller,1998)，脉冲场凝胶电泳（PFGE）的DNA宏观限制模式(Deschee-maeker et al.,1997;Gambarotto et al.,2001;Vancanneyt et al.,2002)，随机扩增多态性DNA（RAPD）- PCR检测(Cocconcelli et al.,1995;Descheemaeker et al.,1997;Andrighetto et al.,2001;Cosentino et al.,2004;Martin et al.,2005)和扩增片段长度多态性（AFLP）技术(Antonishyn et al.,2000;Willems et al.,2000;Vancanneyt et al.,2002)。脉冲场凝胶电泳（PFGE）已成功地用于表现临床和食品株之间的差异，以及从家禽和住院患者分离的菌株的差异(van den Braak et al.,1998;Lemcke and Bulte,2000)。虽然电泳是区分肠球菌属菌株的黄 文件页码：1/2 1．概述 肠球菌属包括粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌、类鸟肠球菌、棉子糖肠球菌等21个种。 2. 标本类型 血液、尿液、痰、穿刺液、脓液等标本。 3. 鉴定 3.1 形态与染色革兰阳性球菌，单个、成双或短链排列。 3.2 培养特性在血琼脂平板上35℃培养18～24小时，形成较小、灰白色，有α溶血或γ溶血环的菌落。在康凯琼脂平板上形成较小、干燥、粉红色菌落。 3.3 生化反应触酶试验阴性，分解甘露醇，胆汁七叶苷试验阳性，在含6.5%NaCl肉汤中生长，多数菌株PYR试验阳性，对杆菌肽耐药。 3.4 鉴别要点 3.4.1 本菌属特征革兰阳性球菌，触酶阴性，在含6.5%NaCl肉汤中生长，胆汁七叶苷和耐盐试验阳性，45℃生长。 3.4.2与链球菌属和乳球菌属的鉴别肠球菌属能在pH9.6肉汤和45℃生长，胆汁七叶甘和耐盐试验阳性，而链球菌属和乳球菌属则相反。 3.4.3 粪肠球菌与屎肠球菌、鸟肠球菌的鉴别粪肠球菌不分解L-阿拉伯糖，分解山梨醇。屎肠球菌能分解L-阿拉伯糖，不分解山梨醇。鸟肠球菌分解L-阿拉伯糖和山梨醇。 3.5 操作步骤 3.5.1 涂片、染色观察菌落特征，挑取可疑菌落，涂片染色镜检。 3.5.2 触酶试验参见《触酶试验标准操作规程》。 3.5.3 鉴定从血琼脂平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。 4. 药敏 参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100-S19最新版本文件。 5. 质量控制 参见《质量管理程序》。 6. 检验结果解释与分析 在β-内酰胺酶阴性肠球菌中，氨苄西林药敏试验结果可预测阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林和哌拉西林-他唑巴坦等敏感性。青霉素药敏试验可预测氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林和哌拉西林-他唑巴坦等药敏结果。粪肠球菌中氨苄西林药敏结果可以预测亚胺培南的药敏结果。对于血培养和脑脊液培养分离出的肠球菌需做β-内酰胺酶检测，若β-内酰胺酶阳性，则对氨基青霉素、羧基青霉素和脲基青霉素均耐药。为耐万古霉素肠球菌（VRE）加做氯霉素、红霉素、四环素和利福平药敏试验，根据结果进行治疗。氨基糖苷类高水平耐药株HLAR可用庆大霉素120μg/ml纸片筛选，无抑菌环为耐药，抑菌环≥10mm为非HLAR，对于抑菌环在7-9mm之间的菌株需用稀释法确认。对于肠球菌属，头孢菌素类、氨基糖苷类（仅筛选高水平耐药性）、磺胺甲恶唑、甲氧苄啶和克林霉素在体外可能有活性（敏感），但在临床上耐药，所以不能报告肠球菌对这些药物敏感。 7. 临床意义 粪肠球菌和屎肠球菌主要引起医院感染，最常见为尿道感染（大部分与尿道器械操作、导尿等有关），其次为腹部和盆腔等部位的创伤和外科术后感染。近年来，肠球菌属氨苄西肠球菌检测
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