与水稻黑条矮缩病毒 p5b 互作的水稻基因片段筛选
与水稻黑条矮缩病毒p5b互作的水稻基因片段筛选
陆颖1,2 羊健2 张恒木2 陈剑平2，*
（1 南京农业大学 植物保护学院，江苏 南京 210095；2 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所、浙江省植物有害生物防控国家重点实验室培养基地/农业部植保生物技术重点开放实验室，浙江 杭州 310021；* 通讯联系人，E-mail：jpchen2001@https://www.wendangku.net/doc/6c13583289.html,）
Screening of rice gene fragments interacted with p5b of rice black-streaked dwarf virus LU Ying1,2, YANG Jian2, ZHANG Heng-mu2, CHEN Jian-ping2,*
（1 College of Plant Protection, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China; 2 State Key Laboratory Breeding Base for Zhejiang Sustainable Pest and Disease Control /Key Laboratory of Plant Protection and Biotechnology, Ministry of Agriculture / Zhejiang Provincial Key Laboratory of Plant Virology /Institute of Virology and Biotechnology, Zhejiang Academy of Agricultural Sciences, Hangzhou 310021, China; * Corresponding author, E-mail: jpchen2001@https://www.wendangku.net/doc/6c13583289.html,)
Abstract: The second open reading frame on the genome segment 5 (S5) of Rice black-streaked dwarf virus (RBSDV) encodes a viral nonstructural protein (p5b) with unknown function. To reveal the function of p5b, its gene was ligated into bait plasmid pGBKT7 and an expression library containing rice cDNAs was constructed using plasmid pGADT7 of yeast two-hybrid. The bait protein p5b was detected in yeast by western blot and the result of an auto-activation test showed that p5b could not autonomously activate the expression of reporter genes in yeast. Then the bait protein p5b was used for screening the expression cDNA library of rice plant. Gene fragments of some pivotal enzymes, involved in photosynthesis, respiration, and other important metabolism processes, were identified to interact with p5b in yeast, suggesting that these interactions may play roles in symptom development of infected plants.
Key word：Rice black-streaked dwarf virus (RBSDV); Interaction protein; Yeast two-hybrid (Y2H)
摘要：由水稻黑条矮缩病毒基因组S5片段第2个开放阅读框（ORF）编码的p5b是一个功能未知的病毒非结构蛋白。本研究构建了酵母双杂交体系的含水稻cDNA表达文库的pGADT7载体，同时将p5b基因构建到诱饵质粒pGBKT7上（pGBK-p5b），Western Blot和自激活实验结果显示p5b可在酵母中正确表达且无自激活活性。进一步利用p5b蛋白作为诱饵用酵母双杂交筛选水稻cDNA表达文库，鉴定出一些参与光合作用、呼吸作用等重要代谢过程的关键酶基因片段，这些酶可能与p5b蛋白之间存在相互作用，推测这些互作在病株症状发展过程中起作用。
关键词：水稻黑条矮缩病毒；互作蛋白；酵母双杂交
水稻黑条矮缩病是我国粮食生产上的严重病害之一，在日本、韩国、朝鲜等东亚国家也广泛存在。该病害在我国江浙一带的水稻上曾数次流行并造成严重危害，其病原水稻黑条矮缩病毒（Rice black streak dwarf virus ，RBSDV），还侵染玉米、小麦、高梁等作物，曾在山东和河北侵染玉米造成减产甚至绝收【1-3】。该病毒由灰飞虱传播，既可以在宿主植物中增殖，影响植物生长发育，使染病植株表现出植株矮缩、分蘖增加等明显的症状，也可在昆虫介体内增殖，但介体昆虫不表现明显的症状【4】。
在分类上，RBSDV属于呼肠孤病毒科（family Reoviridae）斐济病毒属（genus Fijivirus）第二组的成员【4】。其基因组由10条dsRNA组成（按电泳迁移率从慢到快的顺序依次命名为S1-S10），总长约30kb【5】，可编码13个蛋白，其中基因组第5片段含有2个部分重叠但阅读框架不同的开放阅读框（open reading frame，ORF），编码的2个蛋白分别称为p5a和p5b。其中p5b是一个功能未知的病毒非结构蛋白，大小约27kDa，比较分析推测该蛋白可能与病毒在植物中的增殖过程有关【6】。为了进一步探索分析p5b的功能，本研究以p5b为诱饵蛋白，通过酵母双杂交技术来筛选与其互作的水稻基因。
1.材料与方法
1.1材料
本研究所用的载体质粒pGBKT7、pGADT7、pGBKT7-53、pGBKT7-Lam，酵母菌株GOLD、Y187，各种酵母培养基YPDA、SD/-Trp、SD/-Leu、SD/- Trp/-Leu、SD/-Ade/-His/- Trp/-Leu，Yeastmaker TM Yeast Transformation System-2、Easy Yeast Plasmid Kit、X-α-Gal均购自于Clontech公司。CloneMiner II cDNA Library Construction Kit 购置Invitrogen公司，其它分子生物学试剂Ex Taq聚合酶，T4 DNA连接酶，限制性内切酶Nde I、BamH I等购自Takara公司。
1.2 方法
1.2.1 p5b基因的RT-PCR和诱饵载体构建
根据本实验室测定报道的RBSDV S5序列（AJ409147）设计 p5b基因引物：p5bf （5’- CAT ATG ATG CGA AGA ATT CCA TAT CAC CCA-3’，划线部分为Nde I位点)和p5br（5’- GGA TCC GGA GGT GAG GCA TGA CTC CTA GCG T-3’，划线部分为BamH I位点),病毒基因组提取及p5b基因的RT-PCR扩增参照Zhang et al【3】方法，扩增产物经切胶纯化连接到pGEM-T EASY 载体（Promega）上,转化大肠杆菌DH5ɑ，再挑取单克隆通过PCR和测序鉴定出正确克隆并命名为pGEM-p5b。利用Nde I 、BamH I双酶切从重组质粒pGEM-p5b获得完整的p5b基因，经切胶纯化后连接到相同酶双酶切的载体质粒pGBKT7上，并转化大肠杆菌 DH5ɑ，再通过PCR、双酶切、和序列测定筛选获得正确克隆，命名为pGBK-p5b。
1.2.2 p5b在酵母中的表达和自激活特性检测
参照Yeastmaker TM Yeast Transformation System 2试剂盒（Clontech）将重组诱饵质粒pGBK-p5b转入GOLD酵母菌株中，用尿素/SDS法提取含有pGBK-p5b重组质粒的GOLD酵母菌株总蛋白，参照《分子克隆实验手册》上的方法进行SDS-PAGE和Western blot【7】检测p5b融合蛋白的表达，一抗为本实验室制备的p5b特异性抗体。同时将含有pGBK-p5b 质粒酵母划线于SD/-Trp/ X-ɑ-Gal平板上，30℃恒温培养3-5天，观察记录酵母生长情况。
1.2.3 水稻文库构建及鉴定
参照商家说明书用Trizol法（Invitrogen）从水稻植株叶片中提取总RNA，并利用FastTrack? 2.0 试剂盒（Invitrogen）分离纯化mRNA,利用CloneMiner试剂盒（Invitrogen）在Y187酵母菌株中构建水稻cDNA表达文库。然后通过平板上菌落计数、PCR、随机测序分析文库质量。
1.2.6 筛选与p5b蛋白互作的水稻寄主因子
参照 Clonetech 公司操作手册，利用含pGBK-p5b质粒的GOLD酵母菌株和含水稻cDNA文库的Y187酵母菌株通过mating法进行文库筛选，筛选获得的单菌落通过显色鉴定后，提取质粒进行自激活检测以剔除假阳性，测定阳性克隆的插入序列并对测序结果进行比对分析。
2.结果与分析
2.1 诱饵载体的构建
为了构建p5b基因的酵母诱饵载体，首先利用所设计的引物对p5bf和p5br，以纯化的RBSDV基因组为模板进行RT-PCR 扩增，电泳结果显示可以特异性地扩增到约700bp的DNA片段（图1），这与p5b基因的预期大小一致。该产物经过切胶纯化回收后，连接至pGEM-T EASY载体上，获得了含完整p5b基因的克隆，命名为pGEM-p5b。利用引物上所带有的Nde I和BamH I位点从pGEM-p5b质粒上切下p5b基因，再连接到诱饵载体pGBKT7质粒载体上，通过PCR、双酶切（图1）、测序鉴定获得含有完整p5b基因的诱饵载体，命名为pGBK-p5b。
图1. p5b基因扩增及重组质粒pGBK-p5b双酶切鉴定
M：DL2000 DNA marker；第1泳道：p5b基因扩增产物；第2泳道：pGBK-p5b质粒的双酶切鉴定
Fig1.Double restriction enzyme identification of recombinant plasmid pGBK-p5b
M，DL2000 DNA marker；Lane 1，amplification product of p5b gene by RT-PCR；Lane 2, Restriction digestion of plasmid pGBK-p5b with Nde I and BamH I.
2.2 诱饵载体融合蛋白表达检测
为了分析p5b基因在酵母中的表达情况，将空载体质粒pGBKT7和含有p5b基因的pGBK-p5b质粒分别导入GOLD酵母菌株，并提取相应的酵母总蛋白，利用本实验室制备的p5b特异抗体作为一抗，进行Western blot分析，结果显示在pGBK-p5b 质粒的GOLD酵母菌株中可特异性地检测到一条约46kDa大小的条带(图2),这与由诱饵载体质粒pGBK-p5b上表达的融合蛋
白大小一致（p5b蛋白大小约27kDa，而融合蛋白的大小约19kDa）；而在仅含空载体质粒pGBKT7的GOLD酵母总蛋白中未检测到任何信号，表明诱饵载体pGBK-p5b质粒上的p5b 基因可在GOLD酵母菌株中与酵母GAL4的DNA结合结构域（binding domain）有效地进行融合表达。
图2 Western blot检测p5b融合蛋白在酵母中的表达
M表示蛋白分子量marker；第1泳道为转入空载体pGBKT7后提取的酵母总蛋白；第2泳道为转入pGBK-p5b后提取的酵母总蛋白。
Fig 2 Detection of the p5b expression in yeast GOLD strain by western blot.
M， Protein molecular weight marker；Lane 1, Proteins extracted from yeast transformed with plasmid pGBKT7; Lane 2, Proteins extracted from yeast transformed with plasmid pGBK-p5b.
2.3 诱饵蛋白自激活检测
为了分析p5b 基因是否适合作为诱饵蛋白，我们进一步观察分析p5b融合蛋白对酵母菌株生长是否有影响以及p5b蛋白是否具有自激活活性。将表达p5b蛋白的GOLD酵母菌株置于SD/-Trp/X-ɑ-Gal培养基上生长，结果显示含表达p5b蛋白的GOLD酵母菌株生长状况与2个对照相比无明显差异（图3）,表明p5b蛋白对GOLD酵母菌无毒性；与表达自激活蛋白的对照酵母菌株不同，表达p5b的GOLD酵母菌与表达无自激活活性蛋白的对照酵母菌株一样在SD/-Trp/X-ɑ-Gal培养基上不显蓝，表明p5b单独不能激活报告基因的表达，即p5b不具有自激活活性，可以充当诱饵蛋白用来筛选与宿主互作基因的筛选。
图3 在SD/-Trp /X-ɑ-Gal培养基平板上含诱饵质粒pGBK-p5b的酵母菌株的生长
A:表达具有自激活活性诱饵蛋白的酵母作为阳性对照；B:表达p5b的酵母；C：表达无自激活活性诱饵蛋白的酵母对照作为阴性对照。 Fig.3 The growth of Yeast expressing p5b protein on plate with SD/-Trp/X-ɑ-Gal medium
A: Yeast expressing an auto-activated activity protein as a positive control; B: Yeast expressing p5b protein；C: Yeast expressing a no auto-activated activity protein as a negative control.
2.4 水稻文库质量鉴定
为了检测所构建文库的质粒，我们从4 ml水稻cDNA表达文库的菌液中取10 μl稀释1000倍后，再取50μl涂布于SD/-Leu 酵母培养基平板上，第二天计数共长出137个克隆。按照‘文库滴度( cfu /mL) = 平板克隆数×稀释因子/涂板体积( mL)2
1M
55KDa
35KD a
25KDa 15KDa
47KDa
A B
C
和文库的总容量( Total cfu ) = 平均文库滴度( cfu /mL) ×该文库总体积 ( mL)’的公式计算文库滴度为2.74×106 cfu/ml,文库的总容量为1.096×107 cfu。随机挑选72单克隆分别用通用引物进行PCR分析（部分PCR结果见图4），结果显示72个克隆均含有重组片段，插入片断的大小平均约1 kb；再随机挑选48个单克隆进行测序分析，结果表明48个克隆中含有37个不同的基因，长度在750-1200 bp之间，这些分析表明该文库可以用于酵母双杂交的后续筛选。
图4 酵母cDNA 文库PCR 分析
MW 表示基因marker 1Kb Plus DNA Ladder；泳道1-8为部分文库cDNA 扩增产物
Fig.5 Assay of cDNA library by PCR
M，1Kb Plus DNA Ladder ；Lane 1-8，amplification products of PCR
2.5 寄主因子的筛选及鉴定
以p5b 蛋白作诱饵，采用Mating 法筛选水稻cDNA 表达文库，在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp 上筛选获得了166个克隆，接着将其转至SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp /X-ɑ-Gal 平板上，生长状况良好且显示蓝色的克隆共有118个阳性，再分别提取质粒，转化大肠杆菌DH5α扩繁载体质粒后进行测序分析，结果显示表明与p5b 可能互作的寄主因子有8个：甘氨酸脱羧化酶（NM001050581）、磷酸丙酮酸双激酶(NM001062042)、核酮糖二磷酸羧化酶活化酶(NM001075087)、过氧化氢酶(NM001065170)、抗坏血酸过氧化物酶(NM001072837)、核糖核酸酶(NM001070328)、半胱氨酸蛋白酶(NM001069824 )和苯甲酰辅酶A(NM001059760)。其中所获得的核糖核酸酶基因片断覆盖了该基因的完整编码区，其余7个基因片断长度在722-1028bp 且均为相应基因的近3’-端部分。将所筛选到的寄主因子分别回转至GOLD 酵母菌并在SD/-Leu/X-α-Gal 培养基平板上分析其自激活活性（图5a），结果显示它们均与阴性对照一样无，表明这8个寄主因子均无自激活活性；进一步将它们分别与诱饵载体质粒质粒pGBK-p5b 共转至GOLD 酵母菌并在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp /X-α-Gal 平板上培养（图5b），结果显示它们与p5b 之间和阳性对照一样呈亮蓝色，进一步表明这些寄主因子与p5b 之间存在相互作用。
（a） (b)
图5 8个寄主因子自激活（a）及其与p5b 相互作用（b）分析。
‘+’为阳性对照，‘-’为阴性对照，1-8分别为含水稻甘氨酸脱羧化酶、半胱氨酸蛋白酶、核糖核酸酶、过氧化氢酶、磷酸丙酮酸双激酶、抗坏血酸过氧化物酶、苯甲酰辅酶A、核酮糖二磷酸羧化酶活化酶基因片断的酵母（a）或与pGBK-p5b 共转化的酵母（b）。
Fig 5 Analysis for self-activating ability (a) of 8 candidate preys and their interactions (b) with p5b
+, positive control; -, negative control； 1-8, yeasts harbouring the gene fregments of Glycine decarboxylase, Cysteine protease, Ribonuclease, Catalase, Pyruvate orthophosphate dikinase, Ascorbate peroxidase, Anthranilate N-benzoyltransferase protein, and RuBisCO activase with or without pGBK-p5b, respectively.
M 8
67 534121000bp
2000bp 6 5 _
2 8
7 + 1 3 4+12 4 8 7 65_ 3
3、讨论
RBSDV侵染水稻后使水稻发生一系列复杂多样的生理生化反应，表现出一系列发育畸形，如叶色浓绿，植株矮缩，分蘖增多，结实率降低或不结实等，这些表现可能由RBSDV蛋白与水稻蛋白间的相互作用所致。酵母双杂交技术是用来研究蛋白质互作的经典方法之一，已在水稻普通矮缩病毒（Rice dwarf virus, RDV）与宿主植物的互作研究中有所应用并筛选获得了可能与病毒致病性相关的互作因子【21, 22】。p5b和p7b是侵染植物的斐济病毒属成员所特有的病毒蛋白，且在植物体内有效表达，暗示p5b和p7b与寄主基因在蛋白质水平上的相互作用可能与斐济病毒属成员在植物体内的增殖和致病性相关【23】（张恒木等，未发表）。本研究首次以p5b为诱饵蛋白，从水稻cDNA表达文库中筛选出8个寄主因子基因片段，这些寄主因子基本上可以分为二类，一类主要参与植物光合作用和呼吸作用等基本的代谢过程，包括甘氨酸脱羧化酶、磷酸丙酮酸双激酶和核酮糖二磷酸羧化酶活化酶（RuBisCO activase，RCA），其中丙酮酸磷酸双激酶（PPDK）为植物光合作用的关键酶之一【8】，还参与水稻种子物质代谢【9】、抵抗干旱、低氧等逆境【10】；甘氨酸脱羧酶（glycine decarboxylase）主要分布在植物叶肉细胞、维管束鞘细胞线粒体中，是线粒体多酶复合体的重要组分，它直接参与了植物光呼吸中催化甘氨酸转化为丝氨酸并释放NH3、CO2的过程【11】；RCA是调控Rubisco(核酮糖-1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶)催化效率的关键因素之一【12】,其含量及活性与植物的光和效率密切相关并会影响到作物的产量【13】。因此，推测RBSDV可通过p5b与这些因子的互作影响病株的光合作用和呼吸作用等代谢过程，从而引发病株植物在叶色、株高和结实率方面的变化。另一类互作因子主要是核酸、蛋白、过氧化物等代谢过程中的酶类，包括过氧化氢酶、抗坏血酸过氧化物酶、核糖核酸酶、半胱氨酸蛋白酶和苯甲酰辅酶A。其中核糖核酸酶（Ribonuclease，RNase）是普遍存在于植物细胞内的核酸水解酶,它参与RNA的降解过程，促进RNA中磷元素的释放和再利用，有利于植物抵抗生境胁迫，防御病原物入侵【14】，还与植物的自交不亲和，雄性不育等生理现象有密切关联【15】；半胱氨酸蛋白酶(cysteine protease)、抗坏血酸过氧化物酶(ascorbate peroxidase, APX)、过氧化氢酶(catalase, CAT)、苯甲酰辅酶A(Benzoyl—CoA)也都与植物的抗病以及抗逆特性相关【16-20】。因此，推测RBSDV可通过p5b与这些酶的互作干扰植物的抗病性，产生有利于自身增殖的细胞内微环境，但RBSDV p5b与上述因子的互作对其生物学功能所影响的程度尚有待进一步研究分析。
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病害部分
1、何为植物病害?如何理解植物病害的含义? 植物病害： 当植物遇到病原生物的侵染或不良环境胁迫时，导致细胞核组织 的功能失调，正常的生理过程和生长发育受到干扰，表现出组织和形态的变化，导致植物产品产量降低，品质变劣。 包含了两个方面的含义： 首先，植物病害的发生发展有一定的病理程序，植物发病后，首先表现为新陈代谢作用的改变，即其生理的和生化的变化，随后进而发展到细胞和组织结构的变化，最后在植物的外部和内部表现出不正常的状态。其次，认识病害，必须从经济观点和生产观点加以考虑，有些植物由于人为或外界因素的作用，可以发生某些变态或畸形。植物的这些变化给人们的生活和经济带来了好处，不称为病害或不作为病害来对待。 总之，病害一定要给农业带来损失，并且有一系列的病理变化过程。 2、什么是病害三角？病害三角在病害研究中的意义？ 植物病害形成的过程涉及植物、病原物、环境三方面，呈一种三角关系，即病害三角。病三角在植物病理学中占有十分重要的位置，在分析病因、侵染过程、流行以及制定防治对策时都离不开对病三角的分析。 3、如何理解病害的病状及病征？病状及病症的类型分别有几种？ 病状： 寄主植物本身的不正常表现， 病征： 病原物在植物病部的特征性表现。 病状类型：
变色、坏死、腐烂、萎蔫、畸形。 病征类型： 霉状物、粉状物、点状物、颗粒状物、脓状物。 4、什么是侵染性病害、非侵染性病害以及他们的特点？ 非侵染性病害： 由非生物因素，即由于不适宜的环境条件而引起的植物病害。 特点： 病株发病较均匀，大片发病，无中心病株，无传染迹象，无病征，症状有变色、枯死、畸形、萎蔫等 侵染性病害： 由生物因素引起的植物病害。 特点： 植物表面或内部存在病原物，多有病征，有中心病株 5、什么是真菌？广义的真菌包括哪些生物类群？ 真菌： 是一类营养体通常为丝状体，具细胞壁，异养型，以吸收的方式从外界获取营养，通过产生孢子来进行繁殖的真核生物。 类群： 壶菌门、接合菌门、子囊菌门、担子菌门 6、真菌的无性繁殖和有性繁殖有什么特点?它们产生的孢子类型有哪些？无性繁殖： 是指真菌不经过性细胞或性器官的结合而从营养体上直接产生孢
水稻黑条矮缩病的危害特点及防控措施
水稻黑条矮缩病的危害特点及防控措施 郭樱花，谢启先，饶春芬 （梅州市农业科学研究所，广东梅州514071） 摘要：2010年水稻矮缩病在广东范围内发病出现较严重现象。经过调查分析，该病是以稻飞虱为传播介体的水稻黑条矮缩病。经分析，是由于气候条件的不断恶化及种植制度的变化等因素引起，据此提出了防控措施。 关键词：水稻病害；黑条矮缩病；稻飞虱；防控措施 中图分类号：S435.111.4+9文献标识码：B文章编号：1004-874X(2011)04-0074-02 2010年国际粮价由于市场产需关系呈先稳后升趋势，而国内夏粮6年来首次减产。粮食丰产稳产是稳定国内粮价的定心丸。然而，受大范围洪涝灾害影响，中晚稻病虫害发生呈严重态势。近年来，南方水稻黑条矮缩病在我国南方稻区发生面积迅速扩大，危害程度明显加重，导致部分稻田失收，成为威胁水稻生产的重大病害之一。自2001年在广东省阳西县被首次发现此病以来，该病已迅速扩散至越南北部及我国南部广大稻区。2009年，越南北部19个省1.5万hm2以及我国南部9个省（区）约33.3万hm2中稻受害，造成严重损失[1]。2010年广东省植保总站农作物病虫测报站发布的预警报告显示，由于矮缩病毒源面积和分布不断扩大、媒介害虫发生重，在外因条件作用下，预计未来广东省该病将局部偏重发生，发生面积扩大。 1症状 水稻各生育期均受该病毒侵染，秧苗期及本田初期受侵染植株症状表现明显。秧苗期感病的稻株，严重矮缩（不及正常株高的1/3），不能拔节，重病株干枯而死；本田初期感病的稻株，明显矮缩（约为正常株高的1/2），不抽穗或者仅抽包颈穗；分蘖期和拔节期感病稻株，矮缩不明显，能抽穗，但穗小，不实粒多，粒重轻。发病稻株叶色深绿，上部叶面可见凹凸不平的皱褶，皱褶多发生于叶片近基部；拔节期的病株，地上数节节部有气生须根及高位分枝。病株茎秆表面有乳白色大小约1～2mm的瘤状突起（手摸有明显粗糙感），瘤突呈蜡点状纵向排列成一短条形，早期乳白色后期褐黑色。病瘤产生的节位，因感病时期不同而易，早期感病稻株，病瘤产生在下位节间，感病时期越晚，病瘤产生的部位越高。感病植株根系不发达，须根少而短，严重时根系呈黄褐色[1]。 2病原 病原物为稻黑条矮缩病毒（Rice black streaked dwarf virus，简称RBSDV），属植物呼肠弧病毒组病毒。病毒粒子为等径对称的球状多面体，大小75～80nm。病毒粒子有衣壳内外两层。细胞质中病毒粒子以如下3种形式存在：一是分散或不规则聚集，二是有规则的晶状排列，三是病毒粒子排列成串，外包一层膜呈豆荚状、鞘状或管状构造。病毒钝化温度50～60℃，病叶汁液稀释限点10000倍，病叶汁液体外保毒期5～6d。 该病毒只靠灰飞虱、白背飞虱、白带飞虱等传染。其中主要以灰飞虱传毒为主。灰飞虱最短获毒时间30min，1～2d即可充分获毒，病毒在灰飞虱体内循回期为8～35d。接毒时间仅1min。稻株接毒后潜伏期13～34d。介体一经染毒，终身带毒，但不经卵传毒。 黑条矮缩病毒危害禾本科的水稻、大麦、小麦、玉米、高粱、粟、稗草、看麦娘和狗尾草等20多种寄主。 3病害循环 黑条矮缩病主要在大麦、小麦病株上越冬，有部分也在灰飞虱若虫体内越冬，成为翌年发病的初侵染源。长江中下游稻区，灰飞虱1年发生5～6代。一般以四龄若虫在杂草、小麦、大麦和紫云英等植株上越冬，翌年羽化为成虫，在杂草或麦株上产卵繁殖[2]。第1代灰飞虱在病麦上接毒后传到秧田危害，再到早稻后期、单季稻、晚稻危害。稻田中繁殖的2、3代灰飞虱，在水稻病株上吸毒后迁入晚稻和秋玉米传毒，晚稻上繁殖的灰飞虱成虫和越冬代若虫又进行传毒，传给大麦、小麦、绿肥田及田边杂草。由于灰飞虱不能在玉米上繁殖，故玉米对该病毒再侵染作用不大。田间病毒通过麦-早稻-晚稻的途径完成侵染循环。 4发病因素 4.1稻飞虱发生量及带毒率 水稻南方黑条矮缩病的发生、流行与稻飞虱的发生量及带毒率高低密切相关[2]。田块间发病轻重取决于带毒飞虱迁入量。根据稻飞虱的发生规律，主要有两个关键时期，即第1代成虫从麦田和杂草向早稻秧田及早栽本田的迁飞初期，第3、4代成虫从早稻本田向晚稻秧田和早栽本田的迁飞初期。由于水稻南方黑条矮缩病不经卵传，稻飞虱必需在毒源植株上取食一定时间后才能带毒，在染病植株上孵化取食的飞虱带毒率很高（60%~70%），而健康植株上的飞虱不带毒。因此，虫量大，带毒率高，则发病严重。水稻生长早期稻飞虱种群总体带毒率不高，中晚稻发病重于早稻。 4.2气候条件 稻飞虱生长发育的适宜温度24～28℃，相对湿度80%以上。早春气温高，稻飞虱发育快，成虫迁入秧田危害时间 收稿日期：2010-11-03 作者简介：郭樱花（1979-），女，助理农艺师，E-mail：mzhyhguo 2008@https://www.wendangku.net/doc/6c13583289.html, 广东农业科学2011年第4期 74
973 2012 主要粮食作物重大病害控制的基础研究
项目名称：主要粮食作物重大病害控制的基础研究首席科学家：彭友良中国农业大学 起止年限：2012.1-2016.8 依托部门：教育部
一、关键科学问题及研究内容 本项目将结合我国作物病害控制的重大需求与国际植物病理学科前沿发展的趋势，探讨下列主要科学问题：1）“基因对基因”病害中病菌致病型变异的时空分布规律及其与抗病新品种选育和布局的关系。已知病原物无毒基因的变异或缺失产生新的致病型，从而克服相应抗病基因的有效性、导致作物品种抗病性的丧失。虽然目前已从真菌和细菌中分离了不少无毒基因，但缺少有关致病型时空动态规律的研究，有关无毒基因的分子功能及其变异的遗传机制的认识也不很深入，因而没有建立有效选育和选用抗病品种的理论。本项目将围绕粮食作物的“基因对基因”病害，广泛研究病菌致病型的时空分布规律，深入解析无毒基因的分子功能及其变异的遗传机制，探讨“基因对基因”病害抗性品种培育和布局的理论。2）植物病原真菌和细菌的何种类型特异致病关键基因可以作为设计新型杀菌剂用靶标。有关植物病原物致病性机制的研究报道很多，但是什么是病原物的关键致病基因、选择什么类型的致病基因为靶标设计杀菌剂才是环保高效的？对此，尚没有深入、准确和完整的认识。本项目将分别通过系统鉴定粮食作物的主要病原真菌和细菌的致病性和致病力基因，发现其中的关键致病基因，深入解析其作用机理，并有选择地开展致病蛋白的晶体结构研究，探讨环保高效杀菌剂设计用靶标选定的理论。3）持久抗病作物的分子育种途径。虽然通过遗传杂交途径培育了大量的抗病作物品种，但是广谱、持久的抗病作物品种还很少。其中一个尚未解决的重要科学问题是由于缺少对抗病资源的系统发掘和分子评价，尚未确定何种类型的基因可以用于持久抗病作物的培育和分子设计。对此，本项目将广泛鉴定在植物抗病性中具有重要作用的QTL和具有相对广谱抗病性的主效基因，评价其在抗病作物的培育和分子设计中的利用价值，探讨持久抗病作物的分子育种策略。4）植物病毒基因沉默抑制子作用机制及其在抗病毒作物的分子育种中的利用价值。由于抗病毒的植物资源很少，抗病毒作物培育的理论将主要依靠对植物与病毒相互作用机制的深入认识。病毒基因沉默抑制子是植物病毒广泛存在的通用致病机制之一，但对植物病毒基因抑制子抑制基因沉默的机制了解甚少，对其作用机制的深入研究将为设计抗病毒作物提供理论基础。本项目将通过鉴定与病毒基因沉默抑制子相互作用的寄主蛋白，解析病毒致病及逃避寄主植物防御的分子机理，探讨抗病毒作物的分子育种策略与途径。5）调控植物抗病性的全局性因子。植物抗病性是多个基因共同表达的结果，并涉及许多次生代谢途径的变化。但我们目前对植物抗病性在分子水平上的认识是基于分子遗传学、分子生物学和生物化学研究，有局限性。理想的植物病害安全控制途径是充分发挥植物自身的抗病机制，但需要我们对植物抗病机制有整体性的和准确的
水稻病害图谱
一、真菌性病害 1、稻瘟病 叶瘟大田症状，稻瘟病为害造成的白穗 苗叶瘟褐点型
苗叶瘟慢性型 叶枕瘟 苗叶瘟病斑连片
枝梗瘟 穗颈瘟 稻瘟病又称稻热病，是水稻上为害最重的病害之一，以日照少、雾露持续时间长的山区和气候温和的沿江、沿海地区为重。病菌以菌丝体和分生孢子在稻草和稻谷上越冬，根据发病部位不同可分为苗叶瘟、叶瘟、节瘟、叶枕瘟、穗颈瘟、枝梗瘟、谷粒瘟。以4叶期至分蘖盛期和抽穗期最易感病。 防治方法： 1、采取“狠抓两头，巧治中间”的防治措施。即狠抓苗叶瘟和穗瘟，巧治叶瘟。选用抗病品种是防治稻瘟病的最有效的方法。水稻生长前期实行浅水勤灌，适时适度烤田，后期干湿 交替，促进稻叶老健；2、孕穗破口期（即有5%左右穗出现时，一般2—3天）是药剂防治
的关键时期。当苗期或分蘖期，稻叶出现急性型病斑或有发病中心的稻田，或周围田块已发生叶瘟的感病品种田和生长嫩绿的稻田，或在孕穗末期叶病率在2%以上、剑叶发病率的1%以上的田块应及时进行喷药。常发区应在秧苗3—4叶期或移栽前5天喷药预防苗瘟。穗颈瘟的防治适期在破口期和齐穗期；3、药剂可选用75%三环唑。叶瘟掌握在初发病期用药，防治穗颈瘟，一定要在破口初期施用。 2、纹枯病 纹枯病枯孕穗 纹枯病包鞘
叶鞘上不规则病斑 纹枯病严重为害状 纹枯病前期菌核
纹枯病后期蜂窝状菌核 纹枯病是水稻常发且为害重的病害，具有发生面广，大发生率高，为害重，损失大的特点。病菌主要以菌核在稻田里越冬，菌核是最主要的初次侵染源。早稻中后期和晚稻中前期是纹枯病发生发展的盛期，尤以水稻抽穗前后最烈，以分蘖期和孕穗期最易感病。纹枯病是高温高湿的病害，也是多肥茂盛嫩绿型病害。水稻施肥多，生长茂盛嫩绿，天气多雨时，往往发生严重。长期灌深水，偏施迟施氮肥，造成水稻嫩绿徒长，田间郁闭、湿度增高，都有利于纹枯病的发展蔓延。 防治方法：1、采取“在插秧前消灭菌源，插秧后加强肥水管理，并结合发病初期防治，确保水稻倒三叶完好”的防治策略；2、每季耙田后要打捞漂浮在水面上的菌核，带出田外深埋或烧毁。施足基肥，早施追肥，不偏施氮肥，增施磷、钾肥，采用配方施肥技术，施水稻前期不披叶、中期不徒长、后期不贪青。灌水要掌握“前浅、中晒、后湿润”的原则，做到浅水分蘖，足苗露田，晒田促根，肥田重晒，瘦田轻晒，长穗湿润，不早断水，防止早衰。 3、化学防治：纹枯病的防治适期为分蘖末期至抽穗期，以孕穗至始穗期防治最好。一般当水稻分蘖末期到圆秆拔节期丛发病率10%—15%、孕穗期丛发病率15%—20%时，应用药防治。高温高湿天气要连续防治2—3次，间隔期10—15天，药剂防治有：苯甲丙环唑，噻呋酰胺。 3、胡麻叶斑病
南方水稻黑条矮缩病流行因子及防控措施
南方水稻黑条矮缩病流行因子及防控措施 发表时间：2019-08-28T13:12:34.780Z 来源：《建筑学研究前沿》2019年11期作者：李龙惠 [导读] 流行因子以及影响水稻发病因素的研究，提出对南方水稻黑条矮缩病的防控措施。 茂名市茂南区农业技术推广中心广东茂名 525000 摘要：自2001年南方水稻黑条矮缩病在广东省发现以来，我国南方的大部分区域对该病的防治策略一直在不断优化，收益也大相径庭。本文所述即为通过对该病的发生的发病症状、发病特点、流行因子以及影响水稻发病因素的研究，提出对南方水稻黑条矮缩病的防控措施。 关键词：黑条矮缩病；南方水稻；流行因子；防控措施 南方水稻黑条矮缩病（Southern rice black-streaked dwarf virus，SRBSDV）是在2001 年首次被发现于广东省阳江市，是近几年我国南方稻区危害性较大的一类新型病毒。南方水稻黑条矮缩病在2009年，发生在我国广东、湖南、海南、江西、广西、浙江以及福建、等水稻主产省区，严重影响着我国水稻主产区的健康发展，该类病毒覆盖面积较大，大约 33.33万 hm2的水稻区都被荼毒，而水稻区基本失收面积为 6 666.67 hm2［1-2］。根据相关人员调查、实验，该病毒的传毒介体主要依靠白背飞虱，而这种白背飞虱在获得毒性后，便会终生携带该毒性，虽然该虫类无法经过排卵传播毒性，但该虫类的幼虫、成虫都可传播毒性。白背飞虱分布较为广泛，几乎覆盖我国全部水稻区，白背飞虱每年都会进行往返迁飞［5］，因其迁飞特点，南方黑条矮缩病扩散较快、并且种植人员很难进行监测防控，因此，南方黑条矮缩病对我国水稻产区造成的危害以及损失非常严重。 1.南方水稻黑条矮缩病发作症状 分蘖变多，分叶宽阔、短小，叶子变为深绿色是南方水稻黑条矮缩病的主要症状，并且叶子的叶脉及静杆上有呈现出蜡白色，之后变为褐色瘤状呈短条状凸起，抽穗小或根本不抽穗，结实率低，感染后症状在不同生长阶段也有不同。苗期发病后，心叶生长缓慢，叶短而宽，叶硬而密，叶绿而硬，叶脉呈蜡白色且有不规则凸起，瘤状，后变为黑色、褐色，短根，短株，无头，常早逝。分蘖期出现过多分蘖，主茎和早期分蘖仍能抽出较小稻穗，但稻穗常藏于叶鞘内部。若在拔节期发做，其穗颈缩短，其叶变短变宽，且结实率较低。在叶和茎的背面有短条状结节。水稻病害后的典型症状是植株短，叶片呈现出深绿色，叶柄背面呈乳白色或蜡白色条状，茎节处有小的深褐色突起，分蘖较多，不抽穗或抽穗不良，结实率低。在剑叶或叶顶可见凹凸褶皱。在一蔸中约有1到4根水稻植株比健康植株短约1/3，半全穗。典型症状：病株叶色深绿，上叶表面凹凸不平（多在叶基部）。病株地上神经节有倒立的须根和高节的分枝；病变干细胞表面有大小约1-2 mm的乳白色结节（明显手粗糙感），结节纵向排列成蜡状斑点，早期呈乳白色，其后发育为褐黑色；病变结节的位置随易感期的不同而不同，感病期越晚，结节位置越高。 苗期症状：稻苗呈深绿色，心叶生长缓慢，叶短、硬、密，叶脉呈不规则蜡白色结节性突起，后期呈黑色、褐色。枕叶距离缩短，下叶鞘包裹叶鞘。植株较短（不到正常植株的1/3），后期结实率低，且经常提早死亡。 分蘖期症状：病株多分蘖较多且上部分出的叶片与叶枕重叠，心叶被出下叶叶鞘或从下叶的枕口呈螺旋状生出，叶子短而硬，顶端扭曲。主茎和早分蘖的病株仍可抽穗，但穗难以结实，或包穗，或小穗，如矮秆病。 抽穗期症状：主要表现为萎缩簇生，病株或可抽穗，但抽穗小、实粒少、结出的实粒轻，稻粒被半包在叶鞘中，旗叶变短、变硬；叶片基部、上叶以及中叶可见垂直褶皱；而茎秆下部节间、节上会有蜡白色、黑褐色结节[2]。 2.南方水稻黑条矮缩病发作特点 1）从近三年内的发生情况来看，单季晚稻对该病的抵抗力最弱且最易发生，连作晚稻次之，早稻的抵抗力最强，这主要与水稻生长时节和白背飞虱的习性有关。一般本季晚稻在5月下旬播种，6月中旬移栽，而6月上、中旬是携带毒性的白背飞虱初期迁入的第一个高峰期，而此时单季晚稻正处于秧田中、后期和移栽期，稻田中白背飞虱密度较高，稻株易受感染，而此时处于拔节期的早稻即使受到病毒感染，也不会有特别明显的症状，而连作晚稻正处于播种和秧田初期，受虫密度小，因此受影响较小[3]。 2）同一区域的单季晚稻在不同的播种时间内受到的影响也不同，有早播田块受影响较重，晚播田较轻的特点。经2010到2012年3年调查的结果显示，出现较重病情的田块一般是5月5～15 期间播种、管理粗放的单季晚稻田，调查显示2012年兰溪柏社乡在5月10日播种0.13 hm2水稻，由于播种前期监管较弱，因此并未对稻田进行任何防治措施，病情指数高达48.5%，水稻产量约为64%；而2010年婺城区沙畈乡于5月份播种0.10 hm2水稻，发病的稻株占70%，基本绝收[3]。 3）从水稻发生黑条矮缩病发生在时间和地域的跨度上几乎没有规律可循，这也是该病毒难以防治的原因之一。该病首次发现时间为2001年，发现于广东阳西县。后来，在2008年海南、广西、江西、安徽以及湖南、等地均发现该病。之后该病经鉴定其病原属于南方水稻黑条矮缩病毒新种类。2009年该病在我国南部多个省区发做，覆盖面积为180多万亩，造成1.2亿斤产量损失；而该病毒多发作于晚稻，在2010年云南富宁县就曾发生，经调查文山州广南县、硕山县、富宁县、红河州蒙自县、建水县，玉溪市元江县等地于8月份均发现黑条矮缩病毒[4]。 3.影响南方水稻黑条矮缩病流行的主要因子 经浙江省金华市2010至2012年6月份白背飞虱迁入量以及带毒率的调查显示，白背飞虱迁入量变高，发病稻株面积就会越大，而南方水稻黑条矮缩病发作率约在90%以上，一般发作在单季晚稻秧田中，并且稻株发病率与白背飞虱所带毒率为正相关，意味着该飞虱数量相同时，其带毒率越高，稻株发病率同样会升高。不仅如此，水稻发病率与梅雨季降水量有关，经调查显示，水的含量影响白背飞虱的繁殖与活性，而6月正是南方梅雨时节降水量最高的时期，因此，梅雨时节降雨量越高，白背飞虱的数量越少[5]。 综上，水稻的易感期主要在秧苗期以及本田初期，把节后不易感染，而随着病毒的分布范围的扩大，发生会逐年加重，且中晚稻以及连作晚稻病情重于早稻，发病的轻重主要与白背飞虱的迁徙习性以及梅雨时节的降水量有关。 4.对南方水稻黑条矮缩的防治、防控措施 结合南方水稻黑条矮缩病发作特点、携带因子，应采取治虫防病、治秧田保大田、切断传毒链等防控策略。以秧苗期、本田初期为关
水稻病毒病及其防治技术的研究与应用
［11］ 马克平，刘玉明.生物群落多样性的测度方法I ：α多样性的测度方法（下）［J ］.生物多样性，1994，2（4）： 231～239. ［12］MAGURRAN A E .Ecological Diversity and Its Mea -surement ［M ］.London ：Chapman and Hall ，1988.［13］ HAMMER 覬，HARPER D A T ，RYAN P D . PAST -PAlaeontological STatistics ，ver .1.88.Published at ：http ：//folk .uio .no/ohammer/past/，2009. ［14］王智.越冬橘园蜘蛛群落多样性研究［J ］.果树学报， 2002，19（6）：433～435. ［15］ 宋大祥，朱明生，陈军.河北动物志：蜘蛛卷［M ］.石家庄：河北科学技术出版社，2001. ...................................................... .... .... .... .... 专题综述 近几十年以来，水稻病毒病在我国的发生率总体呈上升趋势，在个别年份，部分稻区还有大面积暴发的情况发生，造成水稻严重减产甚至绝收，给农业生产造成巨大损失。针对水稻病毒病的为害，我国政府部门、植保部门和高校、科研院所等单位高度重视水稻病毒病的防控，并针对水稻普通矮缩病、水稻黄 矮病、水稻条纹叶枯病、水稻黑条矮缩病和南方水稻黑条矮缩病等形成了有效的“治虫防病”的干预和防控措施，挽回了大量的经济损失。特别是在2009年，全国农业技术推广服务中心病虫害防治处组织南方稻区的植保部门、高校农科院所等单位成立防控南方水稻黑条矮缩病的协作组，进行了比较系统的防 水稻病毒病及其防治技术的研究与应用 陈 卓1，2 ，宋宝安1，2 ，郭 荣3 ，杨 松 1，2 （1.贵州大学绿色农药与农业生物工程省部共建国家重点实验室培育基地，贵州贵阳550025； 2.贵州大学教育部绿色农药与农业生物工程教育部重点实验室，贵州贵阳 550025；3.全国农业 技术推广服务中心，北京 100125） 摘要：水稻病毒病成灾重、发生面积大、防治困难、造成的经济损失重。目前对水稻病毒病的防治措施还局限在“治虫防病”上，对已经大面积暴发的水稻病毒病没有成功的防治经验和有效的防治措施。笔者就水稻病毒病及其防治技术的研究与应用进展进行综述，并从水稻和病毒互作的生理生化机制的角度探讨水稻病毒病防治策略，从防治角度探讨水稻病毒病防治药剂的创制与田间应用技术。关键词：水稻病毒病；防治策略；探讨中图分类号：S435.111.4+9 文献标识码：B 文章编号：1672-6820（2010）12-0013-06 Study on rice virus disease and controlling techniques and its application CHEN Zhuo 1,2，SONG Bao -an 1,2，GUO Rong 3，YANG Song 1,2 (1.State Key Laboratory Breeding Base of Green Pesticide and Agricultural Bioengineering Guiyang Guizhou 550025,China;2.Key Laboratory of Green Pesticide and Agricultural bioengineering of Ministry of Education Guiyang Guizhou 550025,China;3.National Agro-technical Extension and Service Center,Beijing 100125,China) Abstract:Rice virus diseases brought about serious economic losses by its outbreak,largely occurred area and less effi -cient control measures.Control measures of rice virus disease were still limited to the prevention,and there were no suc -cessful experience and efficient control measures for its outbreak.Controlling techniques of rice virus disease and progress of its application were reviewed,control strategy from the aspect of interaction between rice and virus on the physiological and biochemical mechanisms,and development of the pesticide against the disease and its application were discussed in this paper. Key words:rice virus disease;control strategies;discussion 13··
水稻主要病害识别与防治(附图)
水稻主要病害识别与防治(附图) 一、真菌性病害 1、稻瘟病 叶瘟大田症状，稻瘟病为害造成的白穗
苗叶瘟褐点型苗叶瘟慢性型叶枕瘟
苗叶瘟病斑连片枝梗瘟穗颈瘟 稻瘟病又称稻热病，是水稻上为害最重的病害之一，以日照少、雾露持续时间长的山区和气候温和的沿江、沿海地区为重。病菌以菌丝体和分生孢子在稻草和稻谷上越冬，根据发病部位不同可分为苗叶瘟、叶瘟、节瘟、叶枕瘟、穗颈瘟、枝梗瘟、谷粒瘟。以4叶期至分蘖盛期和抽穗期最易感病。 防治方法：
1、采取“狠抓两头，巧治中间”的防治措施。即狠抓苗叶瘟和穗瘟，巧治叶瘟。选用抗病品种是防治稻瘟病的最有效的方法。水稻生长前期实行浅水勤灌，适时适度烤田，后期干湿交替，促进稻叶老健； 2、孕穗破口期（即有5%左右穗出现时，一般2—3天）是药剂防治的关键时期。当苗期或分蘖期，稻叶出现急性型病斑或有发病中心的稻田，或周围田块已发生叶瘟的感病品种田和生长嫩绿的稻田，或在孕穗末期叶病率在2%以上、剑叶发病率的1%以上的田块应及时进行喷药。常发区应在秧苗3—4叶期或移栽前5天喷药预防苗瘟。穗颈瘟的防治适期在破口期和齐穗期； 3、药剂可选用75%三环唑。叶瘟掌握在初发病期用药，防治穗颈瘟，一定要在破口初期施用。 2、纹枯病 纹枯病枯孕穗纹枯病包鞘叶鞘上不规则病斑
纹枯病严重为害状纹枯病后期蜂窝状菌核 纹枯病是水稻常发且为害重的病害，具有发生面广，大发生率高，为害重，损失大的特点。病菌主要以菌核在稻田里越冬，菌核是最主要的初次侵染源。早稻中后期和晚稻中前期是纹枯病发生发展的盛期，尤以水稻抽穗前后最烈，以分蘖期和孕穗期最易感病。纹枯病是高温高湿的病害，也是多肥茂盛嫩绿型病害。水稻施肥多，生长茂盛嫩绿，天气多雨时，往往发生严重。长期灌深水，偏施迟施氮肥，造成水稻嫩绿徒长，田间郁闭、湿度增高，都有利于纹枯病的发展蔓延。 防治方法： 1、采取“在插秧前消灭菌源，插秧后加强肥水管理，并结合发病初期防治，确保水稻倒三叶完好”的防治策略； 2、每季耙田后要打捞漂浮在水面上的菌核，带出田外深埋或烧毁。施足基肥，早施追肥，不偏施氮肥，增施磷、钾肥，采用配方施肥技术，施水稻前期不披叶、中期不徒长、后期不贪青。灌水要掌握“前浅、中晒、后湿润”的原则，做到浅水分蘖，足苗露田，晒田促根，肥田重晒，瘦田轻晒，长穗湿润，不早断水，防止早衰。
植物病理课后习题及答案
普通植物病理学第一章习题题解 1．植物病害的定义是什么？ 植物在自然界里的生长与发育会遇到各种各样的挑战与威胁。任何影响植物健康地生长发育的因素都有可能影响它的产量与质量，从而影响人类对它的利用价值。不适宜的土壤结构、养分状况、水分供应、微生物区系等，不良的大气物理环境和化学环境，各种有害生物的侵袭与破坏等等，都可能导致植物不能正常的生长与发育，严重时可导致死亡。植物因受到不良条件或有害生物的影响超过它的忍耐限度而不能保持平衡时，植物的局部或整体的生理活动或生长发育就出现异常状态，这种表现异常的植物我们称之为植物病害。起植物发生病害的这些因素，统称为病原。 2．植物病害的症状分哪些类型？ 症状是植物受病原生物或不良环境因素的侵扰后，内部的生理活动和外观的生长发育所显示的某种异常状态。常见的病害症状有很多种，变化很多归纳起来只有5类，即变色、坏死、萎蔫、腐烂和畸形。 1)变色(discoluration) 病植物的色泽发生改变。大多出现在病害症状的初期，尤其是病毒病中最为常见。整个叶片或者叶片的一部分均匀地变色，主要表现为褪绿和黄化(yellowing)。褪绿是由于叶绿素的减少而使叶片表现为浅绿色。当叶绿素的量减少到一定程度就表现为黄化。另一种形式是叶片不是均匀地变色，如常见的花叶(mosaic)是由于形状不规则的深绿、浅绿、黄绿或黄色部分相间而形成不规则的杂色，不同变色部分的轮廓是很清楚的。有时变色部分的轮廓不很清楚，这种症状就称作斑驳(mottle)。斑驳症状在果实上也是常见的。此外，田间还偶尔发现叶片不形成叶绿素的白化苗，这多半是遗传性的。 2)坏死(necrosis) 坏死是细胞和组织的死亡，因受害部位不同而表现各种症状。坏死在叶片上常表现为叶斑和叶枯。植物根茎可以发生各种形状的坏死斑。幼苗近土面茎组织的坏死，有时引起所谓猝倒(damping off)和立估。果树和树木的枝干上有一种溃疡症状(canker)，坏死的主要是木质部，病部稍微凹陷，周围的寄主细胞有时木栓化，限制病斑进一步的扩展。
水稻病毒病的防治
龙源期刊网 https://www.wendangku.net/doc/6c13583289.html, 水稻病毒病的防治 作者：张振英冯慧梅 来源：《农村实用科技信息》2008年第12期 水稻病毒病是水稻上一类重要病害，主要发生于南方稻区，东北稻区一般只有普通矮缩病?条纹叶枯病等。 1?症状识别 1.1普通矮缩病病株矮缩，分蘖增多，叶片变短?僵硬，呈浓绿色，新叶的叶片?叶鞘上可出现与叶脉平行的黄白色虚线状条点。孕穗以后发病的仅在剑叶或其叶鞘上出现黄白色条点。发病早（苗期至分蘖期）的分蘖少，不能抽穗，发病迟的虽可抽穗，但抽出的穗往往呈包茎穗或半包茎穗，结实程度差，穗小，秕谷多。 发病特点该病是由病毒引起的，病原体为水稻矮缩病毒（Rice dwarfvirus简称RDV）占该病毒可由黑尾叶蝉;二条黑尾叶蝉和电光叶蝉传播。在苗期当气温22.6℃时，潜育期为11~24天;当28℃时，潜育期为6~13天。苗期至分蘖期感病的潜育期短，以后随龄期增长而延长。水稻在苗期至分蘖期感病和孕穗期均能发病。水稻在分蘖期前较易感病。冬春暖?伏秋旱利于发病。稻苗嫩?虫源多发病重。 1.2条纹叶枯病病株心叶沿叶脉呈现断续的黄绿色或黄白色短条斑，后常合并成不规则的黄白色条斑，使叶片一半或大半变成黄白色，但在其边缘部分仍呈上述褪绿条斑。病株矮化不明显，但一般分蘖减少。 发病特点该病是由病毒引起的，病原体为水稻条纹叶枯病毒（RSV）。条纹叶枯病毒只能通过昆虫传播，已知灰飞虱为主要媒介，白背飞虱也能传染。病毒在带毒灰飞虱体内越冬，成为主要初侵染源。媒介昆虫在麦田越冬，后迁飞至早稻秧田或本田传毒并繁殖，早稻收获后，再迁飞至晚稻上危害。水稻在苗期到分蘖期易感病。叶龄长潜育期也较长，随植株生长抗性逐渐增强。春季气温偏高，降雨少，虫口多发病重。稻?麦两熟区发病重。 高秆品种发病后心叶细长柔软，并卷曲成纸捻状，弯曲下垂，以致枯死成″假枯心″。矮秆品种发病后心叶展开仍较正常，发病早的植株枯死，发病迟的只在剑叶或其他叶鞘上有褐色斑，但抽穗不良或畸形不实，呈″假白穗″状。 条纹叶枯病的初侵染源主要为获毒的越冬灰飞虱若虫，来年春天羽化为成虫，从越冬场所迁飞到稻田引起发病，一年可传播多次。