微生物计数实验(附录61)USP32-中文翻译

<61>非无菌产品的微生物检查：微生物计数实验

介绍

以下描述实验适用于需氧环境下生长的嗜中温细菌和霉菌定量计数。

该实验最初设计来确定是否一个物质或者制剂符合确定的微生物质量标准。当出于此目的时，按照以下指导进行，包括取样的数量，并且按照下面所述解释结果。

本方法不适用于活性成分为可培养微生物的产品。

此外的微生物程序包括自动化方法也可以被使用，只要证明该方法与药典方法具有等效性。

总则

在设计好的条件下进行测定以避免给待测产品带来外界的微生物污染。采取避免污染的预防措施必须不对实验室将要揭露的微生物产生任何影响。

如果待测产品具有抗菌活性，在可能的范围内进行去除或者中和。如果使用了抑制剂，那么抑制剂对微生物的效力和无毒性必须进行证明。

如果使用表面活性物质制备样品，必须证明它们对微生物的无毒性和它们与抑制剂之间的兼容性。

计数方法

按照指示，使用膜过滤法或者平板计数法的一种。最可能数（MPN）法一般是微生物计数精确度最低的方法；但是，对于生物负荷很低的一组产品，它可能是最适合的方法。

方法的选择基于以下一些因素，如产品的属性和微生物需要的限度。选择的方法必须检验足够的取样面积用来判断是否符合标准。必须确立所选方法的适应性。

生长促进实验和计数方法的适应性

概论

必须确定在供试品存在的情况下该方法检测微生物的能力。

如果检验过程中发生变更或者供试品变更，且这些变更可能影响检验结果，适应性必须被确认。

检验菌株的准备

使用稳定的标准菌悬液或者按照下面所述制备。使用菌种保存技术（种子批系统），以便用于接种的可萌发微生物从最初的主种子批开始不超过5代。每种细菌和霉菌菌株的生长分别按照表一中的描述进行。

表一测试微生物的制备和使用

悬液；制备黑曲霉孢子悬浮液时，0.05%的聚山梨脂80可以被添加到缓冲液中。菌悬液应在两小时内使用，或者在2-8℃的条件下24小时内使用。也可以通过制备并稀释黑曲霉素或枯草芽胞杆菌营养细胞的新鲜悬液进行替代，制备稳定的胞子悬液，在接种测试中使用适当体积的胞子菌悬液，稳定的胞子悬液在2-8℃保存，保存期是经过验证的。

阴性对照

为了确定检测条件，用选择好的稀释液代替供试制剂来进行阴性对照。必须没有微生物的生长。

培养基的生长促进

检测每个批次的已经制备好的培养基以及通过脱水培养基或者描述的配料制备的每个批次的培养基。

在部分/盘大豆酪蛋白消化肉汤培养基以及大豆酪蛋白消化琼脂上接种少量（不

超过100CFU）微生物，按表一中所示，每一种微生物应使用单独一部分/一盘培养基。在沙氏葡萄糖琼脂上接种少量（不超过100CFU）微生物，按表一中所示，每一种微生物应使用单独的一盘培养基。按照表一中所述的条件进行接种。固体培养基的生长通过一个不大于2的系数的调节必须不能与标准接种体计算得到的数值有区别。新鲜制备的接种体，微生物的生长应与上一批通过检测的培养基的生长情形相同。如果肉眼能清晰看到的微生物的生长与上一批通过检测的培养基的生长情形相同的话，液体培养基是适合的。

供试品存在情况下计数方法的适用性

样品的制备

样品的制备方法取决于被检测供试品的特性。如果下列所述的步骤均不能得到满意的结果，必须找一种适当的替代程序。

水溶性供试品- 在pH7.0的缓冲氯化钠蛋白胨溶液，pH7.2的磷酸盐缓冲溶液或者大豆酪蛋白消化肉汤培养基中溶解或者稀释要检测的供试品（通常是一份供试品在10份稀释液中稀释备制）。如果需要的话，调节pH值到6～8。如果需要，用同样的稀释液进一步稀释。

不溶于水的脱脂供试品-将要检测的供试品在pH7.0的缓冲氯化钠蛋白胨溶液，pH7.2的磷酸盐缓冲溶液或者大豆酪蛋白消化肉汤培养基中悬浮（通常按1：10的稀释比例备制）。可加入表面活性酶如1g/L的聚山梨脂80以辅助不易湿润的物质的悬浮。如果需要，调节pH值到6～8。如果需要，用同样的稀释液进一步稀释。

油性供试品-在过滤灭菌后的肉豆蔻酸异丙酯中溶解待检品或者取需要的最少量的无菌聚山梨脂80或者其他非抑制无菌表面活性剂与待检品混合，如果需要，加热至不超过40摄氏度，特殊情况下，不超过45摄氏度。仔细混合，如果需要，在水浴中以保持温度。加入足够量的已加热的选择好的稀释剂按1：10的比例制备初液。在保持乳状液形成的需要的最短的时间的同时，仔细混合。接下来的连续的10份稀释液可以通过使用选择好的含有适当浓度的无菌聚山梨脂80稀释剂或者其他的非抑制无菌表面活性剂制备。

流体或者喷雾状固体-在无菌状态下转移供试品至膜过滤器中或者无菌的容器中以进一步取样。使用每个待检容器的全部的内含物或者规定数量的一定的剂量。

透皮贴剂- 去掉贴剂的保护层（去掉衬层）并贴在无菌玻璃或者塑料托盘上，黏贴面朝上。用适当无菌渗透物（如无菌纱布）将黏贴的表面盖上以防止贴剂粘在一起，并将贴剂转移到适量的选择好的含有如聚山梨脂80抑制剂和/或卵磷脂的稀释剂中。用力摇晃制备液至少30分钟。

接种和稀释

添加足量体积的微生物悬浮液到按照上面所述制备的样品以及对照品（不含检测物）以得到不超过100CFU的接种体。接种体悬浮液的体积不应超过过稀释的

供试品的体积的1%。

为了证明供试品中的可接受的微生物回收，已制备样品的最低的可能的稀释因子必须用于检测中。如果因为抗菌活性或者溶解性太差而不可能的话，必须开发进一步的合适的方案。如果样品的生长抑制不能另外避免，等量部分的微生物悬浮液可以在中和，稀释或者过滤后加入。

抗菌活性中和/去除

从按照“接种和稀释”描述中稀释的并在下面所述的“供试品中微生物的回收“程序中制备好的样品回收的微生物数，应该与对照备制品回收的微生物数相同。

如果生长被抑制（通过大于2的系数减少），那么为特别计数检测修改程序以确保结果的有效性。例如，修改的程序可包括下列部分：

1）增加稀释剂和培养基的用量；

2）在稀释剂中加入一种特殊的或者一般的中和剂；

3）膜过滤或者

4）综合上述措施

中和剂- 中和剂可被用于中和抗菌剂的活性（参照表2）。他们最好在灭菌前被加入到已选择的稀释剂或者培养基中。如果被使用，其功效和不存在微生物毒性必须通过不含供试品的中和剂的空白对照来证明。

于供试品的微生物活性。此信息可以解释为该供试品不易于被给定的微生物品种污染。然而，有可能是供试品只能抑制在此列出的部分的微生物，但是不能抑制测试菌株中不包括的其他的微生物，或者不能抑制测试菌株中没有代表的那些微生物。那么，用适合微生物生长以及特定接受标准的最高稀释因子进行实验。

供试品中微生物的回收

列出的每种微生物中，分别进行单独实验。只有增加的测试菌株微生物数被计算。

膜过滤- 使用标称孔尺寸不超过0.45um的膜过滤器。过滤器材质的类型的选择要保证细菌保留效率不被要调查的样品成分影响。每种列出的微生物，使用一个过滤器。

转移适量的样品（最好是1克有代表性的样品，或者如果CFU数被预计很多可以减少用量）到膜过滤器中，样品要按照“样品制备，接种和稀释，以及抗菌活性的中和/去除”中的描述进行制备，立即过滤，并用适量的稀释剂冲洗膜过滤器。

为确定总需氧细菌数（TAMC），转移膜过滤器到大豆酪蛋白消化琼脂的表面上。为确定酵母菌和霉菌总数（TYMC），转移膜到沙氏葡糖琼脂的表面。按照表一中所述培养培养基。然后计数。

平板计数方法- 每种培养基至少进行两次平板计数方法，取平均值。

倾注平板方法——在直径是9cm的Petri培养皿中加入1毫升的样品（样品按照“样品制备，接种和稀释，以及抗菌活性的中和/去除”中的描述进行备制）和15-20ml的大豆酪蛋白消化琼脂或者沙氏葡萄琼脂，两种培养基的保存不能超过45℃。如果使用更大一些的皮氏培养皿，琼脂培养基的用量也要相应增加。表一中所列出的每种微生物，至少要使用两个Petri培养皿。

按照表一中所述培养培养皿。取每种培养基数的平均值，计算首接种体的CFU 数量。

表面铺展方法——在直径是9cm的Petri培养皿中加入15-20ml的大豆酪蛋白消化琼脂或者沙氏葡萄琼脂，每个培养皿在大约45℃，并允许凝固。如果使用大一些的培养皿，琼脂的用量也要相应增加。干燥培养皿，例如，用层流橱或者在细菌培养器中。表一中列出的每种微生物，至少要使用两个Petri培养皿。将测量好的不少于0.1毫升的样品铺在培养基的表面，样品要按照“样品制备，接种和稀释，以及抗菌活性的中和/去除”中的描述进行制备，按照倾注平板方法中的描述进行培养并计数。

最可能数法(MPN)- MPN方法的准确性要低于膜过滤方法或者平板计数方法。特别是对霉菌计数的结果不太可靠。由于这些原因，MPN方法是需氧细菌总数在其他方法不可行的情况下的保留方法。如果该方法的使用有据可循，按照下面的步骤进行。

按照“样品制备，接种和稀释，以及抗菌活性的中和/去除”中的描述制备一系列至少3个连续的10倍的稀释液。三等分的1克或1毫升的每个水平的稀释液，用于接种到三个9-10ml的大豆酪蛋白消化肉汤中。如果需要，表面活性剂如聚山梨脂80或者抗菌抑制剂可以加入到培养基中。因此，如果制备了三个水平的稀释，9个试管要接种。

在30℃-35℃的条件下培养不超过3天。如果结果的读取困难或者由于待检品的性质的原因不确定，在同样的肉汤中或在大豆酪蛋白消化琼脂中在同样的温度条件下再培养1-2天，并使用其结果。从表三的数据中确定待检品的每克或者每毫升的最可能的微生物数。

结果以及解释

当确定膜过滤法以及平板计数法的适应性时，必须得到任何一种检测有机体的平均数值，该数值通过大于2的系数的调节与在没有供试品的参与下接种和稀释中规定的对照值没有区别。当确定MPN方法的适应性时，从接种体中计算得到的数值必须在对照品中得到结果的95%置信界限内。

如果上述标准不能用任一种所叙述的方法符合检测有机体中的其中一种，使用最

接近标准的方法和检测条件来检测该供试品。

供试品的检测

检测用数量

除另行规定，使用10g或者10ml供试品，使用时注意以上提到的预防措施。对于流体或者喷雾状固体，取10个容器。对于透皮贴剂，取10贴。

检测用数量可以减少，如果活性物质在处方中是以下情况：每单位剂量（如：片、胶囊、注射剂）的用量少于或者等于1mg，或者每g或ml（制剂不在剂量单位中出现）用量少于1mg。在这些情况下，待测样品数量不少于10个计量单位中的数量或者不少于10g或10ml的产品。

对于作为活性物质的物料，如果样品量有限或者批量特别小（也就是说，少于1000ml或者1000g），那么供试品数量应当是批的1%，除非规定了使用更少的量，或者证明并认为这更少的用量是正确的。

对于一批产品总数少于200的（如临床实验的样品），那么样品可以减少到2个单位，如果总数少于100那就1个单位的样品。

从散装物料或者从制剂的适合容器中随机选择样品。混合足够容器中的内容物得到要求数量的样品。

产品的检测

膜过滤

使用设计好的过滤装置，可以将过滤器转移到培养基。用一种“生长促进实验和计数方法的适应性”中描述合适的方法准备样品，分别转移适当的量到2个膜过滤器中，立即过滤。按照合适的程序清洗每个过滤器。

检测TAMC，转移其中一个膜过滤器到大豆酪蛋白消化琼脂的表面。检测TYMC，转移另一个膜过滤器到沙氏葡糖琼脂的表面。在30～35℃下接种大豆酪蛋白消化琼脂3～5天，在20～25℃下接种沙氏葡糖琼脂5～7天。计算产品中每g或ml的CFU数。

当检测透皮贴剂，分别通过两个无菌过滤膜过滤制剂（按“样品制备”中描述制备）体积的10%。转移其中一个膜过滤器到大豆酪蛋白消化琼脂用于检测TAMC，转移另一个到沙氏葡糖琼脂用于检测TYMC。

平板计数方法

倾注平板方法——用一种“生长促进实验和计数方法的适应性”中描述合适的方法准备样品。为每个培养基准备至少两个Petri培养皿用于不同水平的稀释液。在30～35℃下接种大豆酪蛋白消化琼脂3～5天，在20～25℃下接种沙氏葡糖琼脂5～7天。选择与所给稀释液相应的平板，能够展现最大数量的菌落（检测TAMC，应小于250；检测TYMC，应小于50）。取每个培养基计数的平均值，计算产品中每g或ml的CFU数。

表面铺展方法——用一种“生长促进实验和计数方法的适应性”中描述合适的方法准备样品。为每个培养基准备至少两个Petri培养皿用于不同水平的稀释液。接种和CFU数的计算按照“倾注平板方法”描述进行。

最可能数法

用一种“生长促进实验和计数方法的适应性”中描述合适的方法准备和稀释样品。在30～35℃下接种所有试管3～5天。如果需要，使用合适的程序继续接种。记录每个水平的稀释液和试管数，展示微生物生长。根据表三确定每g或ml待测品中微生物的最可能数。

结果解释

总需氧细菌数（TAMC）被认为与大豆酪蛋白消化琼脂中发现的CFU数相同；如果在培养基中发现了霉菌菌株，也应当计入TAMC的一部分。酵母菌和霉菌总数（TYMC）被认为与沙氏葡糖琼脂中发现的CFU数相同；如果在培养基中发现了细菌菌株，也应当计入TYMC的一部分。当TYMC由于细菌的生长超出了可接受标准，可能要使用含有抗生素的沙氏葡糖琼脂。如果是用MPN法计数的，计算值就是TAMC。

规定的微生物质量可接受标准，解释如下：

——101cfu：最大可接受数＝20；

——102cfu：最大可接受数＝200；

——103cfu：最大可接受数＝2000；

等等

推荐的溶液和介质在“非无菌供试品的微生物检测：指定微生物的检测”中有描述。

空气中微生物检测1

一、空气中微生物的检测 一、实验目的 1了解空气中微生物的分布状况，学习空气采样方法 2掌握空气中微生物的检测方法 二实验原理 空气是人类赖以生存的必须环境，也是微生物借以扩散的媒介。空气中存在着细菌、真菌、病毒、放线菌等多种微生物粒子，这些微生物粒子是空气污染物的重要组成部分。空气微生物主要来自于地面及实施、人和动物的蹑手呼吸道、皮肤和毛发等，它附着在空气气溶胶细小颗粒物表面，可较长时间停留在空气中。某些微生物还可以随着空气中细小颗粒穿过人体肺癌存留在肺的深处，给身体健康带来严重危害，也可以随着空气中细小颗粒物被输送到较远地区，给人体带来许多传染性的疾病和上呼吸道疾病。因此，空气微生物含量多少可以反映所在区域的空气质量，是空气环境污染的一个重要参数评价空气的清洁程度，需要测定空气中的微生物数量和空气污染微生物。测定的细菌指标有细菌总数和绿色链球菌，在必要时则测病原微生物。 空气并非微生物的繁殖场所，空气中缺乏水分和营养，紫外线的照射对微生物也有致死作用。微生物产生的孢子本身也可以飘浮到空气中，形成“气溶胶”，借风力传播。 空气中的微生物中，真菌的孢子数量最多，细菌较少。而且藻类、酵母菌、病毒都会存在于空气中。 目前，还无统一的关于空气的卫生学指标，一般以室内1m3 空气中细菌总数为50~1,000个以上作为空气污染的指标。 病原菌在空气中一般很易死亡，但结核菌、白喉杆菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、炭疽杆菌、流感病毒和脊髓灰质炎病毒等，也可以在空气中存活一段时间。 尘埃多的地方，如畜舍、公共场所、医院、城市街道的空气中，微生物数量较多。高山、海洋、森林、积雪的山脉和高纬度地带的空气中，微生物较少。 在本次实验中测量空气中微生物含量，主要是利用空气的自然沉降法，也有其它方法，如撞击法，过滤法等。 三实验器材 电炉，培养基，培养箱，无菌台 四实验步骤

欧洲药典 10.0 EP 10.0 长春西汀 中文翻译

01/2008:2139 修订：7.3 长春西汀 Vinpocetine 欧洲药典10.0 Ph.Eur. 10.0 EP 10.0 C22H26N2O2Mr 350.5 [42971-09-5] 定义 乙基(13as,13bs)13α-乙基-2, 3 ,5 ,6-13α 13b六氢-1H-吲哚3, 2, 1-d吡啶3, 2, 1-ij,l, 5-二痰杂萘-12-羧酸。（Ethyl (13aS,13bS)-13a-ethyl-2,3,5,6,13a,13b-hexahydro- 1H-indolo[3,2,1-de]pyrido[3,2,1-ij][1,5]naphthyridine-12-carboxylate.） 含量：98.5%- 101.5%（干品）。 特征 外观：白色或微黄色结晶性粉末。 溶解性：几乎不溶于水，可溶于二氯甲烷，微溶于无水乙醇。 鉴别 A.比旋度（见检测项）。 B.红外吸收光谱（2.2.24）。 对比：长春西汀CRS。

检测 比旋光度(2.2.7):+127到+134（干品）。 取0.25 g溶于二甲基甲酰胺R，并用相同的溶剂稀释至25.0 ml。 有关物质。液相色谱（2.2.29）. 供试溶液。取50.0mg供试品溶于流动相并用流动相稀释至50.0ml。 对照溶液(a).取1.0ml 供试品溶液用流动相稀释至50.0ml。 对照溶液(b).取5.0mg 长春西汀杂质B CRS，6.0mg长春西汀杂质A CRS，5.0mg 长春西汀杂质C CRS 5.0mg长春西汀杂质D CRS，溶于流动相，并用流动相稀释至50.0ml。 对照溶液(c).取1.0ml 对照溶液(a)和1.0 ml对照溶液(b)用流动相稀释至20.0ml。 色谱柱: －尺寸：l = 0.25m, ? = 4.6mm －固定相：色谱用末端封尾的十八烷基硅烷键和硅胶R(5μm)。 流动相：15.4g/l 的醋酸铵R溶液，乙腈R（45:55 V/V）。 流速：1.0ml/min。 检测器：分光光度计，280nm。 进样量：15 μl 运行时间：长春西汀保留时间的3倍。 相对保留时间，以长春西汀（保留时间=约16min）为参照：杂质A= 约0.4；杂质D=约0.68；杂质B= 约0.75；杂质C=约0.83。 系统适应性：对照品溶液(c): －分离度：杂质Ｂ和Ｄ之间的分离度不得少于为2.0。 限度： －杂质A：不得超过对照品溶液(c)色谱图中相应峰的峰面积（0.6%）； －杂质B, D：每种杂质不得超过对照品溶液(c)色谱图中相应峰的峰面积（0.5%）； －杂质C：不得超过对照品溶液(c)色谱图中相应峰的峰面积的0.6倍（0.3%）；

欧洲药典附录3.1.3.-推荐下载

3.1.3. 聚烯烃 定义 聚烯烃是通过乙烯或丙烯的聚合而成，或是通过这些不超过25%的高同系物的物质或羧酸或酯的共聚作用获得。某些材料可能是聚烯烃的混合物。 成品 添加一定数量的添加剂到聚合物中是为了优化它们的化学性质，物理性质和机械性能，为了使它们适用于预定用途。所有的这些添加剂都是选自附件列表，并指出了每一种产品中的最大允许含量。产品中最多包含有三种抗氧化剂，一种或几种润滑剂或抗粘连剂以及当材料必须提供光照保护时，还要添加二氧化钛作为遮光剂。 – 二叔丁基对甲酚（增塑剂07）：限量：0.125% –四钛季戊四醇松香酸酯[3-(3,5-二叔丁基-4-羟苯基)丙酸酯]（增塑剂09）：限量：0.3%–1,3,5-三羟甲基氨基甲烷(3,5-二叔丁基-4-邻羟苄基)- 三嗪-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮, (增塑剂 13): 限量： 0.3% – 二乙烯[3,3-二[3-(1,1-dimethylethyl)-4-羟苯基]丁酸甲酯] (增塑剂08)：限量：0.3%– 二（十八烷基）二硫化物（增塑剂15）限量：0.3% 4,4′,4″-(2,4,6-三甲基苯-1,3,5-triyltrismethylene) –三羟甲基氨基甲烷[2,6-二(1,1-dimethylethyl)苯酚]（增塑剂10）限量：0.3% 2,2′-二(octadecyloxy)-5,5′-spirobi[1,3,2-dioxaphosphinane](增塑剂 14): 限量：0.3 %; – didodecyl 3,3′-硫代二丙酸（增塑剂16): 限量： 0.3 %; – dioctadecyl3,3′-硫代二丙酸(增塑剂 17): 限量：0.3 %; – 三羟甲基氨基甲烷[2,4-二(1,1-dimethylethyl)苯基] 亚磷酸盐 (增塑剂 12): 限量：0.3 %; – 增塑剂 18: 限量： 0.1%; –琥珀酸二甲酯和 (4-hydroxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidin-1-yl)乙醇的共聚物 (增塑剂 22): 限量：0.3% 上面列出的抗氧化添加剂总含量不超过0.3%。 –铝碳酸镁：限量：0.5%； –烷基酰胺：限量：0.5%； –烯烃酰胺：限量：0.5%； –硅铝酸钠：限量：0.5%；

欧洲药典附录

第二部分、附录 附录1 溶液的澄清度 在内径15～25mm，平底，无色、透明、中性玻璃管中，加入等量的供试溶液与浊度标准液，使液位的深度都为40mm，按如下所述方法进行比较。浊度标准液制备5分钟后，以色散自然光照射浊度标准溶液和供试溶液，在黑色背景下从垂直方向观察、比较澄清度或浑浊程度。色散自然光必须较容易区分浊度标准溶液Ⅰ与水，浊度标准溶液Ⅱ与浊度标准溶液Ⅰ。 如果供试溶液的澄清、透明程度与水相同，或者与所用溶剂相同，或者其澄清度不超过Ⅰ号浊度标准溶液，那么可判定该溶液为澄清。 试剂： 硫酸肼溶液：取硫酸肼溶于水，加水稀释至，静置4～6小时。 乌洛托品（六亚甲基四胺）溶液?：在100ml容量平中，以水溶解乌洛托品。 浊度标准贮备液：在存放乌洛托品溶液的100ml容量瓶中，加的硫酸肼溶液。混合，静置24小时，贮存在无表面要求的玻璃容器中，可在2个月内使用。该浊度液不得黏附玻璃，用前必须充分摇匀。 浊度标准原液：取浊度标准贮备液15ml，加水稀释、定容至1000ml。该液临用前制备，至多保存24小时。 浊度标准液：由浊度标准原液与水按表1-1配制,即得。本液应临用前配制。 表1-1

附录2 溶液颜色检查 按本药典规定，用下面两种方法之一可以检出溶液在棕色-黄色-红色范围内的颜色。 如果溶液A的外观与水或所用溶剂相同，或者颜色浅于标准比色液B 9 ，则可判定溶液A为无色。 方法I 用外径为12mm的无色、透明中性玻璃管取2ml的供试溶液，与相同玻璃管中的2ml的水，或2ml本文所规定的标准比色液（见标准比色液表）进行比较。在散射自然光，白色的背景下，水平观察比较颜色。 方法Ⅱ 用同样平底、内径为15～25mm的无色透明中性玻璃管，液位的深度为40mm，将供试溶液与水或溶剂或本文中规定的标准比色液（见标准比色液表）对比。在散射自然光，白色的背景下，垂直地观察比较颜色。 贮备液 黄色液称取46克氯化铁，加大约900ml盐酸溶液（25ml浓盐酸和975ml 水混和）溶解，继续添加，并定容。 滴定并以上述盐酸溶液调整，使黄色液每毫升含 FeCl 3﹒6H 2 O。避光保存。 滴定在一个配有磨口塞的250ml锥形瓶内，加入黄色液，15ml 水，5ml 浓盐酸和4g碘化钾，塞上瓶塞，在暗处放置15分钟，再加100ml 水。用的硫代硫酸钠标准溶液滴定游离的碘，在滴定接近终点时加淀粉试液作指示剂。 1ml 的硫代硫酸钠标准溶液相当于 FeCl 3﹒6H 2 O。 红色液称取60克氯化钴，加大约900ml盐酸溶液（25ml浓盐酸和975ml 水混和）溶解，继续添加，并定容。 滴定并以上述盐酸溶液调整，使红色液每毫升含 CoCl 2﹒6H 2 O。 滴定在一个配有磨口塞的250ml锥形瓶内，加入红色液，5ml稀过氧化氢溶液和10ml 300g/l的氢氧化钠溶液，缓慢煮沸10分钟，冷却后，加60ml稀硫酸和2g碘化钾，塞上瓶塞，缓慢摇动锥形瓶，使沉淀溶解完全。用的硫代硫酸钠标准溶液滴定游离的碘，在滴定接近终点时加入淀粉试液作为指示剂。溶液变成粉红色时到达滴定终点。

空气中微生物的分布现状及防治措施研究

空气中微生物的分布现状及防治措 施研究 学院：环境科学与工程学院 指导教师：于皓 姓名：乔利敏 专业（班级）：环境11-2班 学号：1129010211

空气中微生物的分布现状及防治措施研究 辽宁工程技术大学环境11-2乔利敏 摘要：随着社会的发展人类的进步，对于环境的污染和控制，已成为各国科学界、公众和立法的注意焦点之一。大气微生物污染是环境污染之一，大气微生物能够导致人类及动植物疾病的传播，导致工农业产品腐烂变质，尤其近年SARA、禽流感、超级细菌等疾病的流行和暴发，特别是近年来室内污染的加剧，威胁到人类的健康及经济发展[1]。为保护和改善人类生存环境，内外不少学者对大气微生物的污染进行了综合性研究。本文就国内外大气微生物特性来源、污染分布、研究进展及防治措施等进行综述。 关键词：大气微生物；分布现状；污染特征；防治措施 Abstract：With the social development of human progress, for the control of pollution and the environment, has become one of the focus of national attention to the scientific community, the public and the legislature. Airborne microbes pollution is one of environment pollution, airborne microbes can lead to the spread of diseases in humans and animals and plants, industrial and agricultural products cause rot, especially in recent years, SARA, avian flu and other diseases prevalent superbugs and outbreaks, especially in recent years, indoor air pollution intensifies, threat to human health and economic development. T o protect and improve the human environment, both inside and outside of microbial pollution of the atmosphere, many scholars conducted a comprehensive study. In this paper, the characteristics of microbial origin abroad atmospheric pollution distribution, research progress and control measures were reviewed. Keyword: airborne microbes; distribution of the status quo; Pollution Characteristics; Prevention 0：引言

欧洲药典附录

欧洲药典附录 Prepared on 22 November 2020

第二部分、附录 附录1 溶液的澄清度 在内径15～25mm，平底，无色、透明、中性玻璃管中，加入等量的供试溶液与浊度标准液，使液位的深度都为40mm，按如下所述方法进行比较。浊度标准液制备5分钟后，以色散自然光照射浊度标准溶液和供试溶液，在黑色背景下从垂直方向观察、比较澄清度或浑浊程度。色散自然光必须较容易区分浊度标准溶液Ⅰ与水，浊度标准溶液Ⅱ与浊度标准溶液Ⅰ。 如果供试溶液的澄清、透明程度与水相同，或者与所用溶剂相同，或者其澄清度不超过Ⅰ号浊度标准溶液，那么可判定该溶液为澄清。 试剂： 硫酸肼溶液：取硫酸肼溶于水，加水稀释至，静置4～6小时。 乌洛托品（六亚甲基四胺）溶液：在100ml容量平中，以水溶解乌洛托品。 浊度标准贮备液：在存放乌洛托品溶液的100ml容量瓶中，加的硫酸肼溶液。混合，静置24小时，贮存在无表面要求的玻璃容器中，可在2个月内使用。该浊度液不得黏附玻璃，用前必须充分摇匀。 浊度标准原液：取浊度标准贮备液15ml，加水稀释、定容至1000ml。该液临用前制备，至多保存24小时。 浊度标准液：由浊度标准原液与水按表1-1配制,即得。本液应临用前配制。

附录2 溶液颜色检查 按本药典规定，用下面两种方法之一可以检出溶液在棕色-黄色-红色范围内的颜色。 如果溶液A的外观与水或所用溶剂相同，或者颜色浅于标准比色液B 9 ，则可判定溶液A为无色。 方法I 用外径为12mm的无色、透明中性玻璃管取2ml的供试溶液，与相同玻璃管中的2ml的水，或2ml本文所规定的标准比色液（见标准比色液表）进行比较。在散射自然光，白色的背景下，水平观察比较颜色。 方法Ⅱ 用同样平底、内径为15～25mm的无色透明中性玻璃管，液位的深度为40mm，将供试溶液与水或溶剂或本文中规定的标准比色液（见标准比色液表）对比。在散射自然光，白色的背景下，垂直地观察比较颜色。 贮备液 黄色液称取46克氯化铁，加大约900ml盐酸溶液（25ml浓盐酸和975ml水混和）溶解，继续添加，并定容。 滴定并以上述盐酸溶液调整，使黄色液每毫升含 FeCl 3﹒6H 2 O。避光保存。 滴定在一个配有磨口塞的250ml锥形瓶内，加入黄色液，15ml 水，5ml浓盐酸和4g碘化钾，塞上瓶塞，在暗处放置15分钟，再加100ml 水。用的硫代硫酸钠标准溶液滴定游离的碘，在滴定接近终点时加淀粉试液作指示剂。 1ml 的硫代硫酸钠标准溶液相当于 FeCl 3﹒6H 2 O。 红色液称取60克氯化钴，加大约900ml盐酸溶液（25ml浓盐酸和975ml水混和）溶解，继续添加，并定容。 滴定并以上述盐酸溶液调整，使红色液每毫升含 CoCl 2﹒6H 2 O。 滴定在一个配有磨口塞的250ml锥形瓶内，加入红色液，5ml稀过氧化氢溶液和10ml 300g/l的氢氧化钠溶液，缓慢煮沸10分钟，冷却后，加60ml稀硫酸和2g碘化钾，塞上瓶塞，缓慢摇动锥形瓶，使沉淀溶解完全。用的硫代硫酸钠标准溶液滴定游离的碘，在滴定接近终点时加入淀粉试液作为指示剂。溶液变成粉红色时到达滴定终点。 的硫代硫酸钠标准溶液相当于 CoCl 2﹒6H 2 O。 蓝色液称取63克硫酸铜加大约900ml盐酸溶液（25ml浓盐酸和975ml水混和）溶解，继续添加，并定容。 滴定并以上述盐酸溶液调整，使蓝色液每毫升含 CuSO 4﹒5H 2 O。

微生物检测标准

微生物取样方法、微生物检测标准 举例一： 一、空气采样及检验方法 1培养基：普通营养琼脂平板，按GB4789.28中3.7条配制 2采样（空气沉降法） 2.1布点：面积小于30平方米的车间，设一对角线，在线上取3点，即中心一点，两端在距墙1米处各取一点；面积大于30平方米的车间，设东、西、南、北、中5个点，其中东、西、南、北点均距墙1米。 2.2采样高度：与地面垂直高度80-150厘米。 2.3采样方法；用直径为9厘米的普通营养琼脂平板在采样点上暴露20分钟盖上送检培养。 3培养：于37℃培养24小时。 4检测频率：每周 空气质量标准： 生车间、熟车间、成品车间：低于100个 半成品库、成品库：低于10个 二、设备的采样与检验方法 根据生产过程所要求的重点卫生部位，实验室对其进行涂抹采样，进行细菌总数检验。 1采样方法 1.1涂抹法（适用于表面平坦的设备和工器具产品接触面） 取经过灭菌的铝片框（框内面积为50平方厘米）放在需检查的部位上，用无菌棉球蘸上无菌生理盐水擦拭铝片中间方框部分，擦完后立即将棉球投入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。 1.2贴纸法（适用于表面不平坦的设备和工器具接处面） 将无菌规格纸（5×5厘米，纸质要薄而软）用无菌生理盐水泡湿后，于需测部分分别贴上两张，两张纸面积共50平方厘米，然后取下放入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。 2检验方法 2.1细菌总数的检验 将上述样液充分振摇，根据卫生情况，相应地做10倍递增稀释，选择其中2-3个合适的稀释度作平皿倾注培养，培养基用普通营养琼脂，每个稀释度作2个平皿，每个平皿注入1毫升样液，于37℃培养24小时后计菌落数。 结果计算 表面细菌总数（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均数×样液稀释倍数/30×2 2.2致病菌的检验 沙门氏菌，参照GB4789.4进行 金黄色葡球菌，参照GB7918.5进行 4.检验合格标准：细菌总数10－100个∕cm2， 5.关键点：细菌总数≤10个∕cm2 一般区域：细菌总数≤100个∕cm2 三、人员手表面细菌污染情况的检验

欧洲药典附录中文版

欧洲药典附录中文版

第二部分、附录 附录1 溶液的澄清度 (3) 附录2 溶液颜色检查 (4) 附录3 旋光度 (9) 附录4 铵盐检查法 (11) 附录5 氯化物检查法 (13) 附录6 硫酸盐灰分 (14) 附录7 铁 (16) 附录8 重金属 (18) 附录9 干燥失重 (23) 附录10 硫酸盐检查法 (24) 附录11 红外吸收分光光度法 (26) 附录12 pH测定 (31) 附录13 滴定 (37) 附录14 氯化物鉴别反应 (40) 附录15 指示剂颜色与溶液pH 的关系 (41)

附录1 溶液的澄清度 在内径15～25mm，平底，无色、透明、中性玻璃管中，加入等量的供试溶液与浊度标准液，使液位的深度都为40mm，按如下所述方法进行比较。浊度标准液制备5分钟后，以色散自然光照射浊度标准溶液和供试溶液，在黑色背景下从垂直方向观察、比较澄清度或浑浊程度。色散自然光必须较容易区分浊度标准溶液Ⅰ与水，浊度标准溶液Ⅱ与浊度标准溶液Ⅰ。 如果供试溶液的澄清、透明程度与水相同，或者与所用溶剂相同，或者其澄清度不超过Ⅰ号浊度标准溶液，那么可判定该溶液为澄清。 试剂： 硫酸肼溶液：取1.0g硫酸肼溶于水，加水稀释至100.0ml，静置4～6小时。 乌洛托品（六亚甲基四胺）溶液：在100ml容量平中，以25.0ml水溶解2.5g乌洛托品。 浊度标准贮备液：在存放乌洛托品溶液的100ml容量瓶中，加25.0ml的硫酸肼溶液。混合，静置24小时，贮存在无表面要求的玻璃容器中，可在2个月内使用。该浊度液不得黏附玻璃，用前必须充分摇匀。 浊度标准原液：取浊度标准贮备液15ml，加水稀释、定容至1000ml。该液临用前制备，至多保存24小时。 浊度标准液：由浊度标准原液与水按表1-1配制,即得。本液应临用前配制。 表1-1

欧洲药典附录译文

第二部分、附录 附录1 溶液的澄清度 (2) 附录2 溶液颜色检查 (3) 附录3 旋光度 (6) 附录4 铵盐检查法 (8) 附录5 氯化物检查法 (9) 附录6 硫酸盐灰分 (10) 附录7 铁 (11) 附录8 重金属 (12) 附录9 干燥失重 (15) 附录10 硫酸盐检查法 (16) 附录11 红外吸收分光光度法 (17) 附录12 pH测定 (20) 附录13 滴定 (22) 附录14 氯化物鉴别反应 (23) 附录15 指示剂颜色与溶液pH 的关系 (24)

在内径15～25mm，平底，无色、透明、中性玻璃管中，加入等量的供试溶液与浊度标准液，使液位的深度都为40mm，按如下所述方法进行比较。浊度标准液制备5分钟后，以色散自然光照射浊度标准溶液和供试溶液，在黑色背景下从垂直方向观察、比较澄清度或浑浊程度。色散自然光必须较容易区分浊度标准溶液Ⅰ与水，浊度标准溶液Ⅱ与浊度标准溶液Ⅰ。 如果供试溶液的澄清、透明程度与水相同，或者与所用溶剂相同，或者其澄清度不超过Ⅰ号浊度标准溶液，那么可判定该溶液为澄清。 试剂： 硫酸肼溶液：取1.0g硫酸肼溶于水，加水稀释至100.0ml，静臵4～6小时。 乌洛托品（六亚甲基四胺）溶液：在100ml容量平中，以25.0ml水溶解2.5g乌洛托品。 浊度标准贮备液：在存放乌洛托品溶液的100ml容量瓶中，加25.0ml的硫酸肼溶液。混合，静臵24小时，贮存在无表面要求的玻璃容器中，可在2个月内使用。该浊度液不得黏附玻璃，用前必须充分摇匀。 浊度标准原液：取浊度标准贮备液15ml，加水稀释、定容至1000ml。该液临用前制备，至多保存24小时。 浊度标准液：由浊度标准原液与水按表1-1配制,即得。本液应临用前配制。

EN 868-5中文翻译版

EN 868-5：1999 待灭菌医疗器械包装材料和系统 第5部分：纸与塑料膜组合的热封和自封袋和卷要求和试验方法 引言 本系列欧洲标准的第1部分规定了预期用作医疗器械包装的包装材料和系统的通用要求和试验方法。这些医疗器械最终在其包装内灭菌。 1 范围 EN 868的本部分规定了用符合EN 868-3规定的纸和符合本部分第4章规定的塑料膜制造的热封和自封袋的专用要求和试验方法。 4.2至4.7中的专用要求可用以证实符合第1部分的一项或多项要求，但不是其全部要求。 本标准规定的热封和自封袋和卷适用于包装最终灭菌的医疗器械。热封和自封袋和卷用作初包装能使使用者用前方便地无菌观察内装物，这一点非常重要。 2 规范性引用文件 EN 285 灭菌蒸汽灭菌大型灭菌器 EN 867-2 灭菌器中使用的非生物学系统第2部分：过程批示物（A级） EN 868-1待灭菌医疗器械包装材料和系统第1部分：通用要求和试验方法 EN 868-3待灭菌医疗器械包装材料和系统第3部分：袋（EN868-4所规定的）袋和卷（EN868-5所规定的）生产用纸要求和试验方法 EN 1422 医用灭菌器环氧乙烷灭菌器要求和试验方法 EN 28601数据元和交换格式信息交换日期和时间表示法（ISO 8601：1988和技术修改单1：1991） GB/T 7408-1994数据元和交换格式信息交换日期和时间表示法EQV ISO 8601-88 EQV ISO 8601-88 ASTM D 882：1995 塑料膜抗张性能试验方法 3定义 EN868-1的定义适用于本部分。 4 要求 4.1 总则 EN868-1的要求适用。 注：下列专用要求和试验方法可用于证实EN868-1的一项或多项要求，但不是全部要求。 4.2 材料 4.2.1 纸 纸应符合EN 868-3的要求。 4.2.2 塑料膜 4.4.2.1 塑料膜应是由两层或多层复合而成。按附录A试验时，塑料结合层（interplybond）应不发生分离或发白。 4.4.2.2 塑料膜和粘合区，都不应有已知足以引起健康危害的有毒物质释出。 在相应的欧洲标准或国际标准发布前，可执行相关的国家法规。 4.2.2.3 按附录B试验时，塑料膜应无针孔。 4.2.2.4在发射光下（日光或良好的人工照明）用正常视力或矫正视力检验时，塑料膜应无

ICH Q4B Annex 4C (R1) 中文版

人用药品注册技术要求国际协调会 ICH三方协调指导原则 关于ICH区域内药典附录的评价及建议 —非无菌产品的微生物检查：原料药及其制剂的判定标准 Q4B 附录4C(R1) 现行第四阶段版本 2010年9月27日 该指导原则由相应的ICH专家小组制定，按照ICH进程，已递交管理部门讨论。在ICH 进程第四阶段，最终草案被推荐给欧盟、日本和美国的管理机构采纳。

Q4B 附录4C(R1) 文件历史 现行第四阶段版本

关于ICH区域内药典附录的评价及建议 —非无菌产品的微生物检查：原料药及其制剂的判定标准 ICH三方协调指导原则 2008年11月12日进入ICH进程第四阶段， 本指导原则已被推荐给ICH三方的管理当局采纳。 (2010年9月27日，对该附录进行修订-R1-增加了加拿大卫生部的可互换性声明) 目录 1. 前言 (4) 2. Q4B 成果 (4) 3. 附录的实施时间 (4) 4. 对实施附录的考虑 (4) 4.1 总体考虑 (4) 4.2 美国食品药品监督管理局（FDA）的考虑 (4) 4.3 欧盟（EU）的考虑 (4) 4.4 日本厚生劳动省（MHLW）的考虑 (5) 4.5 加拿大卫生部的考虑 (5) 5. 用于Q4B评价的参考文献 (5)

关于ICH区域内药典附录的评价及建议 —非无菌产品的微生物检查：原料药及其制剂的判定标准 1. 前言 本附录是Q4B对药典附录非无菌产品的微生物检查：原料药及其制剂的判定标准协调后的成果。 在ICH各区域内，该药典文本为非强制标准，仅提供参考。 本文件由药典协调组（PDG）提出。 2. Q4B 成果 经Q4B专家工作组（EWG）审核，ICH指导委员会建议，欧州药典附录5.1.4（非无菌原料药及其制剂的微生物特性）、日本药典一般信息12（非无菌产品的微生物特性）以及美国药典附录<1111>（非无菌产品的微生物特性）中各自规定的分析方法,在ICH区域中具有同等效力。 3. 附录的实施时间 当本附录在某一地区实施时（进入ICH第五阶段的管理进程），即可在该地区使用。各地区的实施时间可以不同。 4. 对实施附录的考虑 4.1 总体考虑 当申请者或生产企业将其现有方法变更为经Q4B审核并已实施的药典方法时（参见本附录第2节），应按照当地有关备案型变更的有关规定，处理相关的变更说明、变更和/或事先的审批程序。 4.2 美国食品药品监督管理局（FDA）的考虑 基于上述建议，并结合本附录的相关规定，可认为本附录第2节中相关药典文本具有同等效力。但是，不论该方法源自何处，FDA都可能会要求企业证明其所选方法的合理性并适用于某一特定的物料或产品的质量控制。 4.3 欧盟（EU）的考虑 在欧盟，欧洲药典是强制执行的药品质量标准。基于上述互认声明，当符合本附录规定的条件时，在上市许可申请、再注册或变更申请中，欧盟药品管理当局允许申请者采用附录第2

实验二 沉降法检测空气中微生物数量

环境科学与工程学院 生物工程10（1）班 叶智源 3110007848 实验二 沉降法检测空气中微生物数量 （一） 实验目的 1．学习并掌握用沉降法检测空气中的微生物 2．了解空气中微生物的分布状况 （二）实验原理 在我们周围的环境中存在着种类繁多、数量庞大的微生物。空气中也不例外。虽然空气不是微生物栖息的良好环境。但由于气流、灰尘和水沫的流动，人和动物的活动等原因，仍有相当数量的微生物存在。当空气中个体微小的微生物落到适合于它们生长繁殖的固体培养基的表面时，在适温下培养一段时间后，每一个分散的菌体或孢子就会形成一个个肉眼可见的细胞群体即菌落。观察大小、形态各异的菌落，就可大致鉴别空气个存在的微生物的种类。（三)实验器材 1． 试剂 牛肉蛋白胨培养基配方： 牛肉膏 5.0g, 蛋白胨 10.0g ，NaCl 5g, 水1000ml ，pH 7.2~7.4 马铃薯培养基配方： 马铃薯 200g, 蔗糖 20g, 水1000ml ， pH 7.2 高氏一号培养基配方： 淀粉 20g, 硝酸钾 1.0g, 磷酸氢二钾 0.5g, 硫酸镁0.5g, 氯化钠0.5g, 硫酸亚铁0.01g, 水1000ml, pH 7.2~7.4 2. 仪器及其他用品 高压灭菌锅，操作工作台，三角瓶，培养皿，酒精灯，培养箱等 （四）实验方法 1．倒平板：按常法配置上述培养基，分装于三角瓶中，高压灭菌备用。临用前将培养基熔化，冷却至50℃左右，各倒16个平板备用。 2．暴露取样 在指定的地点草地，一层楼，三层楼，七层楼各放4皿，将平板皿盖打开，在空气中暴露5min 和10min,时间一到，立即合上皿盖。 3． 培养观察： 细菌置于37℃培养，放线菌培养基平板和真菌培养基平板置于28℃培养。细菌培养48h ，真菌和放线菌培养4-6天。计数平板上的菌落，观察各种菌落的形态、大小、颜色等特征。 4.计算1m 3空气中微生物的数目 奥梅染斯基（Омелянский）曾建议：如面积为100㎝2的平板培养基，暴露在空气中5分钟，置于37℃培养24小时后所生长的菌落数，相当于10L 空气中的细菌数。 X= X ：每m 3空气中的细菌数 N ：平板暴露5分钟，置37℃培养24小时后生长的菌落数 r ：平皿底半径（㎝） N ×100×100 πｒ2

空气微生物污染检验方法

空气、物表、器械、医务人员手微生物检测参考标准 一、空气微生物污染检验方法 采用平板暴露法操作 结果计算：按平均每皿的菌落数报告：CFU/(皿·暴露时间)。 结果判断： Ⅱ环境： 手术室、供应室、计生手术室、产房、眼科治疗室 、婴儿室、 ≤4.0cfu/皿（15min ） Ⅲ环境 各科治疗室、处置室、ICU 、胃肠镜室、儿科病房、妇科检查室、急救室、 化验室血库、口腔科。 ≤4.0cfu/皿（5min ） 二、物体表面微生物污染检查方法 检测方法： 把采样管充分震荡后，取不同稀释倍数的洗脱液1.0ml ，接种平皿，将冷至40℃~45℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15~20ml,36℃±1℃恒温培养箱48h ，计数菌落数，必要时分离致病性微生物。（采样面积都为100cm 2） 结果计算： 物体表面菌落总数（CFU/cm 2）= 结果判断： Ⅱ环境： 手术室、供应室、计生手术室、产房、眼科治疗室 、婴儿室。 ≤5.0cfu/cm 2 平均每皿菌落数×采样液稀释倍数 采样面积（cm 2)

Ⅲ环境各科治疗室、处置室、ICU、胃肠镜室、儿科病房、妇科检查室、急救室、化验室血库、口腔科。≤10.0cfu/cm2 三、消毒医疗器材的检验方法 检验方法： 把采样管充分震荡后，取不同稀释倍数的洗脱液1.0ml，接种平皿，将冷至40℃~45℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15~20ml,36℃±1℃恒温培养箱48h，计数菌落数，必要时分离致病性微生物。 检验标准 1、高度危险性医疗器材应无菌 2、中度危险性医疗器材的菌落数应≤20 CFU/件（CFU/g或CFU/100cm2）,不得检 出致病性微生物。 3、低度危险性医疗器材的菌落数应≤200 CFU/件（CFU/g或CFU/100cm2）,不得 检出致病性微生物。 （1）、高度危险性物品： 手术器械、穿刺针、腹腔镜、活检钳、心脏导管、植入物等。 （2）、中度危险性物品： 胃肠道内镜、气管镜、喉镜、肛表、口表、呼吸机管、麻醉机管道、压舌板、肛门压力测量导管、直肠压力测量导管等。 （3）、低度危险性物品： 听诊器、血压计、袖带、病床围栏、床面以及床头柜、被褥、墙面、地面、痰盂（杯）和便器等。 四：医务人员手卫生

空气中微生物检测

空气中微生物检测 空气中微生物的检测 1。实验目的 本实验中使用的灭菌培养皿在空气中取样并培养一段时间以测定空气中的微生物。其实验意义在于: (1)了解空气中微生物的分布 (2)比较了普通实验室和无菌室空气中存在的微生物的数量和类型 (3)验证微生物实验中无菌操作的重要性二。实验原理 空气是人类维持正常活动的物质条件，与人类健康有着非常密切的关系。随着社会进入信息时代，空气微生物的采样和检测也得到了迅速发展。已经开发了各种快速、灵敏、特异和高度自动化的仪器。为了保持高质量的空气环境，应该使用正确和先进的空气监测方法。在我们周围环境中有大量的微生物空气也不例外。尽管空气不是微生物的良好栖息地然而，由于气流、灰尘和水滴的流动、人类和动物活动等原因，仍然存在相当数量的微生物。 中空气微生物的采集方法很多，主要采用空气微生物采样器采样监测，自然沉降采样法采样。本文介绍了各种采样方法的性能，以便正确选择各种采样方法。空气微生物采样主要涉及四个方面:采样器、采样介质、采样方法和检测程度。空气微生物采样器主要包括:冲击采样器、过滤空气采样器、离心空气采样器、旋风采样器、静电沉降采样器等 当空气中的单个微生物落在适合其生长和繁殖的固体培养基表面

时，在适当温度下培养一段时间后，每个分散的菌体或孢子将形成一个肉眼可见的细胞群体或菌落。通过观察不同大小和形状的菌落，可以大致识别空气中存在的微生物类型。本实验通过检测普通实验室和无菌间空气中存在的微生物，来判断无菌间的消毒效果，了解空气中常见的微生物群。三。实验装置和仪器 1。实验仪器 (1)无菌板，组数(2)酒精灯，恒温箱数×1 (3)，数量×2 (4)高压釜(5)干热灭菌器(6)冰箱 (7)板(直径9厘米)(8)量筒(9)烧瓶(10)酸度计2。实验所需试剂 (1)蛋白胨，量10g (2)牛肉膏，量3g (3)氯化钠5g (4)琼脂15-20g (5)蒸馏水1000毫升 4，实验步骤 1。琼脂培养基制备方法:将蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、琼脂和蒸馏水混合，加热溶解 ，调至7.4，过滤分装，高压灭菌121℃和20min，用自然沉降法测定时，将约15mL倒入灭菌板中，制成营养琼脂板2.倒置板:培养基按常规方法制备，分成三角瓶，高压灭菌备用使用 前，将培养基融化，冷却至50℃左右，倒入几个盘子备用。 3。检测:首先打开无菌室内的紫外线灯，照射15分钟后关闭。打开上面浓缩了 的无菌平板的皿盖，将皿盖暴露在无菌室空间和普通实验室空间中，分别不移动5min和30min后盖上皿盖每个培养基的平板要求在每个

空气食品接触面微生物检验方法检验标准

空气、食品接触面微生物检验方法、检验标准 1、目的： 检测生产车间空气、操作人员手部、与食品有直接接触面的机械设备的微生物指标，生产区域环境当中病原微生物的监控，达到规定标准，以控制食品成品的质量。 2、参照标准： 中华人民国国家标准《一次性使用卫生用品卫生标准》GB15979－1995、《HACCP原理与实施》、中华人民国国家标准《公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定》GB/T 18204.1－2000、中华人民国进出口商品检验行业标准SN 0169-92/SN 0172-92/ SN 0170-92、出入境检验检疫局二000四年《出入食品微生物检验培训教材》中《出入食品生产厂卫生细菌检验方法》、日本东京冷冻食品检验方法。 3、采样与检测方法： 3.1空气的采样与测试方法 3.1.1样品采集： (1)取样频率： a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行采样，以便了解车间卫生清扫消毒情况。 b)全厂统一放长假后，车间生产前，进行采样。 c)产品检验结果超控标准时，应及时对车间进行采样，如有检验不合格点，整改后再进行采样检验。 d)实验性新产品，按客户规定频率采样检验。 e)正常生产状态的采样，每周一次。 （2）采样方法 在动态下进行，室面积不超过30 m2，在对角线上设里、中、外三点，里、外点位置距墙1 m；室面积超过30 m2，设东、西、南、北、中五点，周围4点距墙1 m。采样时，将含平板计数琼脂培养基的平板(直径9 cm)

置采样点(约桌面高度)，并避开空调、门窗等空气流通处，打开平皿盖，使平板在空气中暴露5 min。采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过6h，若样品保存于0～4℃条件时，送检时间不得超过24h。 3.1.2菌落培养： （1）在采样前将准备好的平板计数琼脂培养基平板置37℃±1℃培养24 h，取出检查有无污染，将污染培养基剔除。 （2）将已采集样品的培养基在6 h送实验室，细菌总数于37℃±1℃培养48h观察结果，计数平板上细菌菌落数。 （3）菌落计算： a) 记录平均菌落数，用“个/皿”来报告结果。用肉眼直接计数，标记或 在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，不可遗漏。 b) 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2 个或2个 以上菌落计数。 3.2工作台（机械器具）表面与工人手表面采样与测试方法： 3.2.1样品采集： (1)取样频率： a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行擦拭检验，以便了解车 间卫生清扫消毒情况。 b)全厂统一放长假后，车间生产前，进行全面擦拭检验。 c)产品检验结果超控标准时，应及时对车间可疑处进行擦拭，如有检验不 合格点，整改后再进行擦拭检验。 d)实验新产品，按客户规定擦拭频率擦拭检验。 e)对工作表面消毒产生怀疑时，进行擦拭检验。 f)正常生产状态的擦拭，每周一次。 （2）采样方法： a) 工作台（机械器具）：用浸有灭菌生理盐水的棉签在被检物体表面（取 与食品直接接触或有一定影响的表面）取25cm2的面积，在其涂抹10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采

ICH残留溶剂指南(中文翻译)

5．4残留溶剂在活性物质、赋形剂和药品中残留溶剂的级别限度 International Conference on Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use (ICH)已采用了关于残留溶剂的杂质指南，它规定了生产后允许残留在活性物质、赋形剂和药品中溶剂的含量限度。本指南（文本复制见下文）不包括已上市的产品。然而欧洲药典应用了存在的活性物质、赋形剂和药品指南中同样的原理，无论它们是否药典专论主题。所有物质和产品都需要测定可能存在于物质或产品中的残留溶剂的含量。 如果异类溶剂的使用已被证明其合理性也已授权，那么它会在各个专论的测试部分受限定。 通常，药典专论不包括单一二类溶剂的测试限度，因为该类溶剂随生产商的不同变化很大。因而生产工艺中使用该类溶剂时应通知主管当局。这个通知也应随用于证明欧洲药典的实用型的档案一同提交，并在证明中提及。 当生产工艺中只使用了三类溶剂，可应用干燥失重测试，该测试应在单一专论中叙述。如果三类溶剂的限度大于0.5%，并已经证明合理性和授权，那么还要求有该溶剂的指定的检测方法。在这种情况下，限度在单一专论中给出，因为定义指的是无水和无溶剂的物质。在所有情况下，应巴使用的溶剂通知主管当局。至于二类溶剂，该通知已在适用性证明中提及。 当使用了一类残留溶剂或二类残留溶剂（或三类残留溶剂超过0.5%），应尽可能使用在一般方法（2.4.24）中叙述的方法学。否则应使用经适当验证的方法。 _______________________

杂质：残留溶剂指南 （CPMP/ICH/283/95） 1.引言 2.指南的范围 3.一般原则 3.1.危险评估对溶剂的分类 3.2.规定暴露限度的方法 3.3.二类溶剂的限度叙述的选择 3.4.分析规程 3.5.残留溶剂的报告水平 4.残留溶剂的限度 4.1.避免使用的溶剂 4.2.规定限度的溶剂 4.3.低毒性潜能的溶剂 4.4.未发现充分毒性数据的溶剂 词汇表 附录1. 溶剂列表包括指南 附录2. 附加背景资料 附录2.1: 有机挥发性溶剂的环境规程 附录2.2: 药物中的残留溶剂 附录3. 规定暴露限度的方法 _______________________

氯化钾《欧洲药典》9.0中英对照

氯化钾欧洲药典9.0中英对照 Potassium chloride 氯化钾（KCl） KCl, 74.5 SPECIFICATIONS标准

Appearance 外观 White or almost white, crystalline powder or colourless crystals. 白色或进白色晶体粉末或无色晶体 IDENTIFICATION 鉴别 A.It gives the reactions of chlorides (2.3.1). 和氯化物反应 B.Solution S (see Tests) gives the reactions of potassium. 溶液和钾反应 TESTS检测 Solution S. Dissolve 10.0g in carbon dioxide-free water R prepared from water R and dilute to 100 ml with the same solvent. 溶液S. 将10.0g 溶于脱二氧化碳水并稀释至100ml。 Appearance of solution. Solution S is clear (2.2.1) and colourless (2.2.2, Method Ⅱ). 溶液外观：溶液呈无色澄清 Acidity or alkalinity.To 50 ml of solution S add 0.1 ml of bromothymol blue solution R1. Not more than 0.5 ml of 0.01 M hydrochloric acid or 0.01 M sodium hydroxide is required to change the colour of the indicator. 酸碱性：取50ml溶液S加入0.1ml酚蓝溶液，不超过0.5ml 0.01M盐酸或0.01M氢氧化钠使指示剂变色。 Bromides: maximum 0.1 percent. Dilute 1.0 ml of solution S to 50 ml with water R. To 5.0 ml of the solution add 2.0 ml of phenol red solution R2 and 1.0 ml of chloramine solution R1 and mix immediately. After exactly 2 min add 0.15 ml of 0.1 M sodium thiosulphate, mix and dilute to 10.0 ml with water R. The absorbance (2.2.25) of the solution measured at 590 nm, using water R as the compensation liquid, is not greater than that of a standard prepared at the same time and in the same manner using 5 ml of a 3.0 mg/l solution of potassium bromide R. 溴化物：取1.0ml溶液S用水稀释至50ml，取5.0ml该溶液加入2.0ml酚红溶液和1.0ml氯胺溶液并立即混合。2min后加入0.15ml 0.1M硫代硫酸钠混合并用水稀释至10.0ml。溶液在