石蜡切片的制作
石蜡切片的制作
染色液和固定液的配制
①Carnoy’S固定液：
无水酒精60mL，氯仿30mL，冰醋酸10mL。
②Harris苏木精染色法：
10％苏木精(950或无水酒精)溶液10mL
10％钾矾水溶液200mL
先将钾矾水溶液加热溶解，然后将溶的苏木精酒精溶液倒入，继续加热煮沸lmin，停火后缓慢加氧化汞0.5g，再加热煮沸lmin，速将三角瓶放入冷水内冷却。同时加入冰醋酸6～10mL。
⑨奥新兰一沙黄染液配制：奥新兰0.3g，沙黄0.03g，铁铵矾0.4g，醋酸一盐酸缓冲液（PH=1.42）100mL，上液临用时混合。④阿利新兰醋酸液：
阿利新兰(Alcian．blue，简称AB) lg，
3％醋酸水溶液100mL。
⑤1％高碘酸液：
1g高碘酸溶解在100mL蒸馏水中。
⑥Shifr试剂的配制方法：
煮沸蒸馏水200mL，停火后加入碱性品红1g，不停搅拌使溶解。待溶液冷至50℃，加入1N HCl20mL冷至室温(25℃)加偏重亚硫酸钠1g摇荡，置暗处过夜。又加活性碳2g充分摇荡数分钟，过滤。滤液应呈无色或淡黄色，盛入有色瓶内，于冰箱（4℃）保存。
1 %冰醋酸水溶液：冰醋酸1ml , 蒸馏水100 ml 。
HE染色显示肠道黏膜上皮淋巴细胞
奥新兰—沙黄染色显示肠道内肥大细胞AB/SO染色法
阿利新兰醋酸染色显示肠道内杯状细胞AB-PAS染色法
3.3.3 肠道的石蜡切片的制作
（1）取材：用锋利的刀切取罗非鱼的一小段前肠（据胃5cm左右位置的前肠），组织块的规格为 3～5mm×3～5mm×10～15mm。
（2）固定：采用Bouin氏固定液装瓶固定，固定液用量一般为组织块体积的10～20倍。
（3）冲洗：固定12～24h后，将材料自固定液中取出后，在70%酒精中换洗几次，可在酒精中加几滴氨水至洗去黄色为止。
（4）脱水：70%酒精（1h）→80%酒精（1h）→90%酒精（1h）→95%酒精（1h）→无水乙醇Ⅰ（1h）→无水乙醇Ⅱ（1h）
（5）透明：无水乙醇与二甲苯溶液（1:1）（1h）→二甲苯Ⅰ（1h）→二甲苯Ⅱ（1h）
（6）浸蜡：浸蜡的全过程应在恒温设备中进行，将恒温箱调至58℃。
二甲苯与石蜡混合液（1:1）（1h）→石蜡Ⅰ（1h）→石蜡Ⅱ（1h）
浸蜡必须彻底，否则组织内残留透明剂会造成切片过程的困难和影响切片的质量。
（7）包埋：在小纸盒内注入溶化的石蜡，将已浸蜡的组织块置入其内，使蜡块
迅速冷却硬固，组织块在蜡块中可长期保存。
（8）切片：包埋后的组织块经修整后，用切片机切成5~7μm的石蜡带。（9）粘片：将组织石蜡带在50摄氏度的温水中展片，然后用经1%HCl溶液处理干净的载玻片捞片，组织带即可粘在载玻片上。
（10）烤片：将粘好的载玻片置于35℃左右的温箱中烤干，待2~3小时后，即可取下编号。
（11）苏木精—伊红染色：将烤干的片进行染色。
①脱蜡：将烤干的切片放入二甲苯(I)10min→二甲苯(Ⅱ)10rain。
②复水：将脱蜡后的切片移入100％酒精5min→95％酒精5min→85％酒精5min→70％酒精5min→蒸馏水5min
③HE染色显示肠道黏膜上皮内淋巴细胞：将蒸馏水洗涤后的切片移入Harris苏木精液中，10min，使细胞核着色；用自来水洗去切片上残余染液；用1％的盐酸酒精分色3秒；用自来水浸洗3h，显微镜下观察，直到胞核蓝化为止；然后切片入曙红溶液中染色5min，使细胞质着色。经95％酒精与100％酒精脱水，二甲苯透明后，中性树胶封片。
④奥新兰一沙黄染色显示肠道内肥大细胞：切片常规脱蜡下行至蒸馏水→奥新兰一沙黄液染色15～20min→蒸馏水速洗，镜检→95％和100％酒精分色脱水1—2min→二甲苯透明→中性树胶封片。
⑤阿利新兰醋酸染色显示肠道内杯状细胞：切片经脱蜡下行入蒸馏水→阿利新兰醋酸染色10min→蒸馏水洗→1％高碘酸水液氧化5min→蒸馏水略洗一Schiff试剂染色（37℃恒温箱）30min→普通水洗3次→蒸馏水2min→Ehrlich苏木精染色5min→95％酒精和100％酒精脱水→二甲苯透明，中性树胶封片。
切片经脱蜡下行入水：二甲苯(30 min)一二甲苯(10 min)一无水乙醇(5 min)一无水乙醇(5 min)一95％乙醇(5 min)一85％乙醇(5 min)一70％乙醇(5 min)一流水冲洗(20 min)。人Ehrlich苏木精染色12 min，蒸馏水速洗。盐酸酒精分色，镜检控制时间。入伊红染色2 min，蒸馏水略洗。盐酸酒精分色，镜检控制时间。经95％酒精与无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
阿利新兰—番红复合染色液的方法称Scaba法
阿利新兰—番红分别染色的方法称Spicer法
罗非鱼肠道的石蜡切片
1．4．1 取材
按常规方法解剖，迅速取出罗非鱼前、中和后肠3段，长度6～10 cm，浸入pH 7．2的PBS缓冲液中，洗掉内容物。
1．4．2 固定
用Carnoy’s固定液固定12 h。
1．4．3 脱水与透明
95％酒精(1 h)一95％酒精(1 h)一100％酒精(1 h)一100％酒精(1 h)一100％酒精+苯(1：1，1 h)一苯(1 h)一苯(1 h)。
1．4．4 浸蜡，包埋
将透明的组织块分别放入石蜡I、Ⅱ和Ⅲ中，组织块在每道石蜡中浸泡15 min，然后用54～56℃
石蜡包埋。
1．4．5 切片
制作横断面切片，厚6μm，每隔3张取1片，展片后在40℃温箱中烘干超过24 h。常温保存，以待染色，并做好标记。
1．4．6 染色方法
1．4．6．1 AB—PAS染色
切片经脱蜡下行入水：二甲苯(30 min)一二甲苯(10 min)一无水乙醇(5 min)一无水乙醇(5 min)一95％乙醇(5 min)一85％乙醇(5 min)一70％乙醇(5 min)一流水冲洗(20 min)。入阿利新兰醋酸液染色10min。蒸馏水速洗。入1％高碘液氧化5 min。蒸馏水略洗，入Schif试剂染色30 rain。普通水洗3 次，蒸馏水2 min。切片以Ehrlich苏木精染色5 min。经95％酒精与无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
1．4．6．2 HE染色法
切片经脱蜡下行入水：二甲苯(30 min)一二甲苯(10 min)一无水乙醇(5 min)一无水乙醇(5 min)一95％乙醇(5 min)一85％乙醇(5 min)一70％乙醇(5 min)一流水冲洗(20 min)。人Ehrlich苏木精染
色12 min，蒸馏水速洗。盐酸酒精分色，镜检控制时间。入伊红染色2 min，蒸馏水略洗。盐酸酒精分色，镜检控制时间。经95％酒精与无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
肉犊牛小肠石蜡切片
1．2 组织切片的制作和染色
1．2．1 HE染色常规制备石蜡切片，HE染色。
l_2．2 糖原及多糖高碘酸一Schiff氏剂(PAS)染色
切片脱蜡下行人蒸馏水，人0．5% ～1% 高碘酸溶液氧化5 min，蒸馏水速洗1次，Schiff氏剂37℃
温箱中染色3O～60 min，再以亚硫酸溶液洗2～3次，每次0．5～1 min，蒸馏水速洗2次，苏木精复染
胞核，经0．5 %盐酸酒精溶液分色(5～1O s)，以镜检为准，用自来水蓝化，经95% 乙醇及无水乙醇脱水(各1～2 min)，二甲苯透明，中性树胶封片。糖原颗粒紫红色，糖蛋白粉红色，黏蛋白和黏多糖呈红色，显示杯状细胞。对照染色用经乙酸酐与吡啶混合液(乙酸酐13．5mL+吡啶20mL)处理3～5 min替代0．5% ～l% 高碘酸溶液。
1．2．3 改良甲苯胺蓝(MTB)染色法按文献[5]方法染色。
泌乳周期中外源物质对大鼠乳腺内肥大细胞数量的影响及乳腺组织内组胺含量的研究
①脱蜡：将烤干的切片放入二甲苯(I)10min→二甲苯(Ⅱ)10rain。
②复水：将脱蜡后的切片移入100％酒精5min→95％酒精5min→85％酒精5min→70％酒精5min→蒸馏水5min
③切片经脱蜡下行入水：二甲苯(30 min)→二甲苯(10 min)→无水乙醇(5 min)→无水乙醇(5 min)→95％乙醇(5 min)→85％乙醇(5 min)→70％乙醇(5 min)→流水冲洗(20 min)。人Ehrlich苏木精染色12 min，蒸馏水速洗。1%盐酸酒精分色30s，镜检控制时间。入伊红染色2 min，蒸馏水略洗。盐酸酒精分色，镜检控制时间。经95％酒精与无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
④奥新兰一沙黄染色显示肠道内肥大细胞：切片常规脱蜡下行至蒸馏水→奥新兰一沙黄液染色15～20min→蒸馏水速洗，镜检→95％和100％酒精分色脱水1—2min→二甲苯透明→中性树胶封片。
⑤阿利新兰醋酸染色显示肠道内杯状细胞：切片经脱蜡下行入蒸馏水→阿利新兰醋酸染色10min→蒸馏水洗→1％高碘酸水液氧化5min→蒸馏水略洗一Schiff试剂染色（37℃恒温箱）30min→普通水洗3次→蒸馏水2min→Ehrlich苏木精染色5min→95％酒精和100％酒精脱水→二甲苯透明，中性树胶封片。
①70%酒精：
②85%酒精：
③伊红染液：以往常用0.5%~1%的伊红染液。此浓度脱色时间长，可以采用95%乙醇450ml+1%复制伊红乙醇溶液50ml的稀释液染色
④1 %盐酸酒精液：盐酸1ml , 蒸馏水100ml 。
⑤奥新兰一沙黄染液配制：奥新兰0.3g，沙黄0.03g，铁铵矾0.4g，醋酸一盐酸缓冲液（PH=1.42）100mL，上液临用时混合。
⑥阿利新兰醋酸液：
阿利新兰(Alcian．blue，简称AB) lg，
3％醋酸水溶液100mL。
⑦1％高碘酸液：
1g高碘酸溶解在100mL蒸馏水中。
⑧Shifr试剂的配制方法：
煮沸蒸馏水200mL，停火后加入碱性品红1g，不停搅拌使溶解。待溶液冷至50℃，加入1N HCl20mL冷至室温(25℃)加偏重亚硫酸钠1g摇荡，置暗处过夜。又加活性碳2g充分摇荡数分钟，过滤。滤液应呈无色或淡黄色，盛入有色瓶内，于冰箱（4℃）保存。
⑨爱利希氏（Ehrlich’s）铝苏木精：苏木精 1克，95%酒精 50ml，冰醋酸 5ml，甘油 50ml，钾矾（硫酸铝钾）约5g（饱和量），蒸馏水 50ml
配方：将苏木精放入酒精中溶解后，再加蒸馏水、甘油、钾矾和冰醋酸并搅拌均匀，倒入瓶中。把瓶口用一层纱布包着小块棉花塞上，置于暗处通风的地方并经常摇动，促进成熟，直到液体颜色变为深红色为止。成熟时间约2~4周，若加入0.2克碘酸钠课加快成熟。此液适合切片寄整体染色。
(1) 取1000ml容量的广口瓶一个，倒入少量95% 乙醇，再加入苏木精，然后加入冰醋酸，搅拌使苏木精溶解。(2) 加入甘油和其余的95% 乙醇。(3) 在研钵中将钾矾研碎，倒入盛有蒸馏水的烧怀中，加温使钾矾完全溶解。(4) 将温热的钾矾溶液一滴一滴加入盛有苏木精染液的广口瓶中，并不断搅动。(5) 用双层纱布蒙住瓶口，再用橡皮筋绑扎，使纱布固定。(6) 将染液瓶置暗处，经常摇动促进成熟，直到颜色由浅褐变成深红为止。
此染液最好在7～8月间配制，约3～4周即可使用。如急用，可加入1g碘酸钠促其成熟。
https://www.wendangku.net/doc/7310229947.html,/view/8b2c9ceff8c75fbfc77db237.html
石蜡切片制作流程表及相关注意事项
豆丁
In
lts compared with berberine sulphate