法国梅里埃 微生物鉴定及药敏分析

梅里埃 ATB系列微生物鉴定及药敏分析系统

产品简介

1)融合细菌鉴定的全球金标准---API系统

2) 符合NCCLS要求的药敏实验结果（专家系统）

3) 仪器获得SFDA等权威认可，

4) 唯一取得全部的上机试剂SFDA批文的厂家

提供您权威的检测结果，使您高枕无忧

全面

1) 具备快速检测功能（4小时）

2) 唯一保持着不断升级的专家系统，对初步结果进行分析，修订，并确认

3) 全中文操作软件

满足流行病学，耐药监测，及社会公共卫生体制的多重新需要

经济

1) 仪器故障率低

2) 试剂成本低廉

3) 自动化的流程

4) 可扩展的

微生物全面解决方案：标本运送过程(Copan)=>培养系统(PPM,BacT/ALERT 3D)=>鉴定能力(API/A TB)=>药敏能力(ATB)

实验室全面解决方案：微生物系统(ATB+BacT/ALERT 3D)=>免疫系统(miniVIDAS)=>质控系统(QC)=>分子生物学(easyMAG)......

使得您日常轻松地使用及管理

售后服务体系

1) 近70%的庞大市场占有率，见证了用户的信赖

2) 20年来建立的售后服务网络

3) 专有的培训中心，及完善的用户培训体系

大肠杆菌分离鉴定及药敏实验方案

鸡致病性大肠杆菌的分离培养及药敏实验 实验基本步骤：样品→肝、脾触片革兰氏染色镜检→普通琼脂平板、麦康凯琼脂平板分离培养→革兰氏染色镜检、生化实验鉴定→普通肉汤培养基增殖培养→药敏实验。 1 病料采集 1.1 准备材料：试管、载玻片、手术刀、手术剪、结扎绳、记号笔、冰块、泡沫箱、口罩、手套（该灭菌的都进行高压蒸汽灭菌）、冰箱。 1.2 取材部位：血液、肝脏、脾脏、肠内容物，若有鸡胚感染则去鸡胚及卵黄物。 1.3 操作方法：将病死鸡浸泡在消毒剂溶液中，打开腹腔，无菌采集肝脏、脾脏放于事先准备好的灭菌试管内，将带有肠内容物的肠管两端结扎放于灭菌是试管内。将有明显病变的脏器入肝、脾进行触片，做好标记。都贴上标签，标示采集样品，来源地，采集时间，采集人。将装有病料的试管放在放有冰袋的泡沫箱中，及时返回实验室，置于4℃冰箱待检。 2 菌的分离培养及鉴定 2.1 准备材料：光学显微镜、革兰氏染色液、载玻片、手术刀、接种环、平皿、恒温箱、高压锅、摇床、酒精灯、葡萄糖、甘露醇、乳糖、蔗糖等微量生化发酵管，蛋白胨水（蛋白胨(或胰蛋白胨)20g、氯化钠5g、蒸馏水1000mL pH7.4），葡萄糖蛋白胨水溶液（每100 mL蛋白胨水中加入葡萄糖1g）、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、VP指示剂、超净台。 培养基： A. 普通琼脂培养基（牛肉粉 3g、蛋白胨 10g、氯化钠 5g、琼脂 20g、蒸馏水1000ml，ph7.3±0.1）， B. 麦康凯琼脂培养基（蛋白胨20g、牛胆盐5g、氯化钠5g、琼脂15g，乳糖10g、结晶紫0.001g、中性红0.025g，ph7.2±0.2。）， C. 营养肉汤培养基（牛肉粉 3g、蛋白胨 10g、氯化钠 5g、蒸馏水1000ml，ph7.2±0.2）。 2．2 样品触片镜检 涂片镜检：取触片,进行革兰氏染色镜检。 2.2.1在玻片上滴加草酸铵结晶紫染色液，作用1min，水洗。 2.2.2 加革兰氏碘液于玻片上媒染，作用1min，水洗。

微生物鉴定与药敏试验流程

微生物鉴定与药敏试验流程 1、实验原理 （1）微生物鉴定原理 微生物鉴定卡中含有几十种生化反应培养基，当微生物在培养基中代谢基质时导致pH值的改变而使指示剂发生变化；同时微生物生长产生各种酶，可与相应的荧光标记底物发生反应，使荧光强度发生改变。仪器通过检测这些变化得到待检微生物的生化特征，自动与数据库内几千种菌株的生化参数进行比对分析，并自动计算得出鉴定结果。 （2）药敏分析系统工作原理 药敏分析系统使用药敏测试板（卡）进行测试。将抗生素微量稀释在条孔或条板中，加入菌悬液孵育后放入仪器或在仪器中直接孵育，仪器每隔一定时间自动测定细菌生长的浊度，或测定培养基中荧光指示剂的强度或荧光原性物质的水解，观察细菌的生长情况。得出待检菌在各药物浓度的生长斜率，经回归分析得到最低抑菌浓度MIC值。 2、实验步骤 （1）取洁净菌液管，加3mL 0.45%的无菌盐水，将纯培养的待检菌配制成浓度为0.5~0.63麦氏单位的菌悬液，将菌液管放入带芯片的专用试管架，在紧挨待检菌液管的位置放入一空的菌液管（供药敏试验用）。 （2）打开检验信息录入工作站电源，仪器自检完毕后按F2键，仪器进入操作程序。将试管架放入工作站，芯片中的数据自动清零。 （3）手工输入待检菌样品编号，扫描输入鉴定卡和药敏卡的ID号，将鉴定卡和药敏卡放入相应的槽位，进样管插入相应的菌液管中。取下试管架，关闭工作站电源。 （4）打开鉴定仪，仪器自检完毕后自动进入检测程序，按要求设定好参数。（5）进样指示灯为绿色长亮时，打开进样盖，将试管架放到传送船上，关好进样盖。仪器自动检测并读取样品信息，自动完成稀释、进样、封口程序，并将卡片送入孵育监测单元。传送船回到进样口，指示灯闪烁时，取出试管架。 （6）由计算机控制的读数器定时对卡片进行扫描并读数，动态记录反应变化。一旦卡内的终点指示孔达到临界值，则表示整个实验已完成。 （7）微生物鉴定及药敏分析完成后，检测数据自动传入数据管理系统进行计算分析，结果经人工确认后即可打印报告。 1

全自动微生物鉴定及药敏分析系统VITEK 2操作规程

全自动微生物鉴定及药敏分析系统VITEK 2操作规程 1、目的 规范操作程序，正确使用仪器，保证检测工作顺利进行，更好地维护保养仪器。 2、适用范围 适用于全自动微生物鉴定及药敏分析系统VITEK 2的使用操作。 3、程序 3.1开机： 1 先开稳压电源，然后开UPS、打印机、终端、读数器，最后开电脑。 2 等待屏幕出现，输入用户名及密码，双击VITEK 2-compact软件进入主菜单。 3 点击Enter图标，进入试卡编辑菜单。 4 点击试卡图标，选中BAR CORD。 5 扫描试卡；载卡架信息：可以用条码扫描器输入，也可自下拉菜单选择。 6 输入实验号和菌株号保存。 3.2测试标本 1 标本的稀释：选取经纯培养18～24小时后，大小为3mm左右的待测菌落2～3个，置于装有3 mL 0.45 %生理盐水的试管中进行稀释，用标准比浊计测菌液浓度（如浊度高加生理盐水，浊度低加菌落）。最后的菌液浓度必须达到测试卡所要求相应标准度。将试管放到样品架上。 2 卡片标记：从冰箱中取出测试卡，放置2～3分钟，使温度与室温相同。 3 卡片充样：将测试卡放在载卡架上，输样管浸入装有待测菌液的标准管中。将载卡架放入仪器的填充仓，按START FILL触点开关，约70秒左右，填充完毕。 4 填充完毕后，待蓝色指示灯闪烁，将载卡架取出，在十分钟之内取出并放入

装载仓。 5 仪器自动扫描条码，审核所有输入的卡片信息是否正确，确认无误后自动进行封口和上卡。操作完成后，待蓝色指示灯闪烁时才能打开装载仓门取出卡架。 3.3关机程序： 1 先将读数器状态窗口关闭，待系统接受，退出主菜单。 2 按下仪器上功能键，选择Maintainance键。 3 点击Shutdown键，关仪器。 4 依次关闭仪器电源、UPS、稳压电源。 5关机次序：先关电脑，再其他附件。

临床微生物学检验之药敏

临床微生物学检验 一、纸片扩散法 又称Kirby-Bauer(K-B)法，由于其在抗菌药物的选择上具有灵活性，且花费低廉，被WHO 推荐为定性药敏试验的基本方法，已在临床广泛使用。 （一）实验原理 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关。 （二）培养基和抗菌药物纸片 1、抗菌药物纸片选择直径为6.35mm，吸水量为20μl的专用药敏纸片，用逐片加样或 侵泡方法使每片含药量达规定所示。含药纸片密封贮存2~8℃或-20℃无霜冷冻箱内保存，β-内酰胺类药敏纸片应冷冻贮存，且不超过一周。使用前将贮存容器移至室温平衡1~2小时，避免开启贮存容器时产生冷凝水。 2、培养基水解酪蛋白（Mueller-Hinton,M-H）培养基是CLSI采用的兼性厌氧菌和需氧 菌药敏试验标准培养基，pH为7.2~7.4，对那些营养要求高的细菌如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌、链球菌等需加入补充物质。琼脂厚度为4mm。配置琼脂平板当天使用或置塑料密封袋中4℃保存，使用前应将平板置35℃温箱孵育15分钟，使其表面干燥。（三）实验方法 实验菌株和标准菌株接种采用直接菌落法或细菌液体生长法、用0.5麦氏比浊管标准的菌液浓度，校正浓度后的菌液应在15分钟内接种完毕。操作步骤如下： 1、接种用无菌棉拭子蘸取菌液，在管内壁将多余菌液旋转挤去后，在琼脂表面均匀涂抹 接种3次，每次旋转平板60度，最后沿平板內缘涂抹一周。 2、贴抗菌药物纸片平板置室温下干燥3~5分钟，用纸片分配器或无菌镊子将含药纸片紧 贴于琼脂表面，各纸片中心相距》24mm，纸片距平板內缘》15mm，纸片贴上后不可再移动，因为抗菌药物会自动扩散到培养基内。 3、孵育置35℃孵育箱16~18小时后阅读结果，对苯唑西林和万古霉素敏感等应孵育24 小时。 （四）结果判断和报告 用游标卡尺或直尺量取抑菌圈直径（抑菌圈的边缘应是无明显细菌生长的区域），先量取质控菌株的抑菌环直径，以判断质控是否合格；然后量取试验菌株的抑菌环直径。根据CLSI 标准，对量取的抑菌圈直径作出“敏感”、“耐药”、“中介”的判断。 （五）质量控制 对于肠杆菌科细菌，M-H琼脂，生长法或直接菌落悬液法，相当于0.5麦氏标准的细菌浓度，35℃+-2℃，空气，16~18小时观察结果，质控菌株推荐为大肠埃希菌A TCC25922，大肠埃希菌A TCC35218（为监控β-内酰胺酶/β-内酰胺抑制剂纸片用）；对于铜绿假单胞菌A TCC35218；对于葡萄球菌属细菌，16~18小时观察结果，测苯唑西林、甲氧西林、萘夫西林和万古霉素需24小时，试验温度超过35℃不能检测甲氧西林耐药葡萄球菌，推荐质控菌株为金黄色葡萄球菌A TCC25923，大肠埃希菌A TCC35218，纸片扩散法检测葡萄球菌对万古霉素的敏感性不可靠；对于肠球菌属细菌，16~18小时观察结果，测万古霉素需24小时，推荐质控菌株为粪肠球菌A TCC29212;对于流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌，推荐质控菌株为流感嗜血杆菌A TCC49247，流感嗜血杆菌A TCC49766，大肠埃希菌A TCC35218（测试阿莫西林/克拉维酸时）；对于肺炎链球菌和肺炎链球菌之外其他链球菌，培养基为M-H琼脂+5%羊血，35℃+-2℃，5%CO2,20~24小时观察结果，推荐质控菌株为肺炎链球菌A TCC49619.

梅里埃微生物药敏鉴定分析仪操作规程

梅里埃ATB微生物药敏鉴定分析仪操作规程1 主要技术指标 梅里埃ATB微生物鉴定／药敏分析系统融合了自动化、电脑化及微 生物微量生化反应测试方法，可同时进行微生物分析鉴定（ID）与 药敏（MIC）检测，使细菌鉴定／药敏分析规范化、标准化、现代化。 1.1完善的分析系统： 微生物鉴定分析系统，微生物药敏分析系统 统计分析／院内感染监测专家系统 联网功能 1.2药物种类： 呋喃类，磺胺类，喹诺酮类，青霉素类 大环内酯类，氨基糖甙类，头孢菌素类 1.2鉴定范围： 肠杆菌科，非发酵菌，葡萄球菌属，真菌， 微球菌属，链球菌属，肠球菌属，弧菌属 1.3院内感染检测 环境空气，物体表面，医疗用品， 消毒剂及保存液，血液透析 2 适用范围 梅里埃ATB微生物分析系统(包括微生物鉴定和药敏分析两大功能)；是对己分离培养出来的细菌、真菌等微生物进行种、属鉴定，并同时测定该菌对各种抗菌药物敏感/耐药程度的专用设备。

3 工作原理 自1880年郭霍(Koch)发明固体培养基，对细菌的研究技术有了重大的 突破之后，一个多世纪以来，人类对细菌的研究和认识已经得到了极大 的成就，对细菌分类的理论根据和方法已趋成熟，命名已经统一，对繁 浩的各种细菌众多的生物学、物理学特性己基本明确，从20世纪初 开始，形成了利用各种细菌之间生物学、物理学特性的差异或不同，来 区别和鉴定细菌种类的方法，不断丰富发展，沿用至今，成为细菌鉴定 的常规方法。 但由于细菌种类繁多，生物学性状错综复杂，实验操作繁琐、费时，不仅初学者不易掌握，有经验者也常感困惑。20世纪70年代，由于 电子计算机的发展，有人首先利用信息编码来签定细菌，将复杂的各种细菌的生物学性状建立数据库，被检菌的各种生物性状测出后，输入电脑与贮存信息相比较即刻可判断未知菌的种属。八十年代初己设计出各种多项生物学试验的套装组合，与电脑贮存的项目内容相对应，即细菌的编码鉴定法，很快在全球得到了重视，迅速推广应用。随后，在上述编码鉴定的基础上，又开发研究了各种类型的半自动和全自动的细菌鉴定药敏分析仪器。 梅里埃ATB微生物鉴定 /药敏分析系统，与国际上的其他同类仪器一样，都是按照上述的原则和技术基础而设计和投产的，设计时，细菌的分类、命名、各种细菌的生物学特性和鉴定依据，各项鉴定试验，特别是“关键性试验”的方法和标准，抗生素药物与浓度的选择和敏感度判断标准等，全部按卫生部印发的《全国临床检验操作规程第二版》、《NCCLS药敏试验法规 (2001)》等权威性文献执行，这些文献己与国际接轨，因此，它和国外同类产品的性质和功能基本上是一致的。 4 操作步骤与功能特点 梅里埃ATB微生物自动鉴定／药敏分析系统分为“半自动”和 “自动”两种，半自动系统由电脑软件和测试板两部分组成：自动系统 是在半自动的基础上再加自动判断装置。使用半自动系统时，先将被测

细菌鉴定及药敏分析系统产品技术要求珠海迪尔生物

2. 性能指标 2.1 外观与结构 a）外观应端正、清洁，表面涂、镀层应无明显剥落、擦伤、露底及污垢； b）铭牌及标志应清晰、准确、牢固，所有紧固件不得松动；控制器件操作应灵活、可靠。 2.2 功能要求 2.2.1 系统功能要求 a) 细菌鉴定及药敏分析系统（以下称：“系统”）可以自动读取试剂板细菌生化鉴定和抗菌药物MIC半定量测定的阴、阳性结果； b) 应用程序经分析应可得出被鉴定菌株的名称和抗菌药物MIC结果； c) 应能生成检验报告单； d) 应能打印检验报告单。 2.2.2 软件临床功能纲要 2.2.2.1 检测功能 2.2.2.1.1标本资料录入 提供输入或选择的方式录入标本的姓名、类型及来源等资料。 2.2.2.1.2 出具细菌检测报告 在软件的指引下，用户可选择出具无菌报告或者有菌报告，出具有菌报告时，软件支持自动对试剂板进行检测并生成相应的判读结果，也支持手工录入细菌检测结果，用户可根据实际情况选择。 2.2.2.2 查询功能 根据不同的查询条件，用户可对历史报告单及其相关信息进行查询。 2.2.2.3 设置功能 软件提供各种类型的参数设置，用户可根据实际情况进行预设。 2.2.2.4 统计功能 根据不同的统计条件，用户可对历史数据进行统计分析。 2.2.2.5 WHONET功能 根据不同的WHONET数据要求，用户可将历史数据按要求导出。 2.3细菌鉴定及药敏分析系统性能要求

2.3.1准确性 2.3.1.1 细菌鉴定及药敏分析系统对质控菌株鉴定准确性的符合率应≥95%；2.3.1.2 细菌鉴定及药敏分析系统对质控菌株抗菌药物MIC半定量测定准确性 的符合性应≥95%。 2.3.2重复性 2.3.2.1 细菌鉴定及药敏分析系统对质控菌株鉴定重复性的符合率应≥95%；2.3.2.2 细菌鉴定及药敏分析系统对质控菌株抗菌药物MIC半定量测定重复性 的符合率应≥95%。 2.4 温育系统性能要求（适用96A，不适用于D2Mini/D2Plus） 温度准确度及波动 a) 细菌鉴定及药敏分析系统温度稳定后，准确度偏差应不超过±1.5℃； b) 细菌鉴定及药敏分析系统温度波动应不超过3.0℃。 2.5 环境试验要求 细菌鉴定及药敏分析系统应符合GB/T14710-2009中气候环境试验I组，机械环境试验I组及表2的要求。系统的运输试验、电源电压适应能力试验应分别符合GB/T14710-2009中第4章、第5章的要求。 2.6 安全要求 应符合GB4793.1-2007、GB4793.9-2013和YY 0648-2008的要求。 2.7电磁兼容性要求 应符合GB/T 18268.1-2010和GB/T 18268.26-2010的要求 2.8网络安全要求 2.8.1数据接口：应有通用的标准有线网络接口，使用标准TCP/IP协议； 2.8.2用户访问控制：用户应输入与用户名相匹配的密码才能登录使用系统； 用户类型：分为管理员，普通用户两种； 用户身份鉴别方法及权限：系统根据登录的用户名匹配权限； 管理员有检验操作、数据查询、系统管理权限； 普通用户有检验操作、数据查询权限。

临床微生物检验报告单的解读

首先，准确鉴定病原菌、报告药敏试验结果，给临床选择用药提供科学的参考依据，是我们微生物实验室不可推卸的责任，但在药物的选择和实际应用过程中多了解一些微生物及药理方面的知识，可能会对临床治疗起到事半功倍的效果。特别是在痰及咽拭子的培养鉴定中，由于多种条件致病菌的存在，是否引起感染、是否需要抗菌治疗，都需要临床医生综合分析后判断，以下几点是临床工作中可能会遇到的问题： 1、有些临床常用药物药敏试验中没有 例：头孢哌酮/舒巴坦为广谱抗菌药物，主要用于治疗革兰氏阴性杆菌，如大肠埃希菌等。CLSI 规定其对肠杆菌科细菌的判定折点为≤15 耐药，≥21 敏感，所以我们将其加入到肠杆菌科细菌药敏谱中，但由于头孢哌酮/舒巴坦对葡萄球菌等革兰氏阳性球菌CLSI 没有判定折点，所以无法判定其对于葡萄球菌敏感或是耐药，也不应该加入葡萄球菌药敏试验中。 2、有些新药没有列入药敏谱 首先，新药由于刚刚推广，还没有列入CLSI 的监测范畴，没有依据加以判断。其次，药敏谱中各类各代抗生素都具有一定代表性，不能面面俱到，如喹诺酮类二代抗菌药物环丙沙星在药敏试验中敏感，那么对于三代超光谱抗生素左氧氟沙星、司帕沙星等临床医生可根据需要加以选择。 3、细菌的天然耐药有些菌属或菌种对某些抗菌药物天然耐药或固有耐药，该耐药性具有种属特异性。 ⑴肠球菌：对除青霉素、氨苄西林以外的所有青霉素类、头孢菌素类抗生素天然耐药。 ⑵嗜麦芽窄食单胞菌：对亚胺培南（泰能）、美罗培南天然耐药。 ⑶肺炎链球菌：对氨基糖苷类抗生素天然耐药。 ⑷产气肠杆菌和阴沟肠杆菌：对头孢西丁天然耐药。 ⑸克柔念珠菌：对氟康唑天然耐药。 ⑹肺炎克雷伯菌：对氨苄西林天然耐药。 ⑺铜绿假单胞菌：对氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林/棒酸、复方新诺明、头孢 1 代、头孢2 代天然耐药。 更为特殊的是，铜绿假单胞菌对三代的头孢噻肟和头孢曲松即使药敏试验敏感，在实际临床治疗中也需要超大剂量才会取得疗效，但人体对超大剂量的三代头孢不具有长时间的耐药性。铜绿假单胞菌有对很多药物的诱导耐药性，在初期可能没有表现出来，一旦接触某种抗生素，沉睡的基因被激活，耐药性表现出来，这种特性在β-内酰胺类抗生素中尤为明显，可能在体外试验敏感，在实际治疗中却无效，所以采用头孢噻肟和头孢曲松进行治疗时就要冒险，这在临床上是首先要规避的。 充分了解抗菌药物体内疗效与体外药敏试验的差异和药敏试验的局限性，意在找到一定的原因和规律性，在使用广谱抗菌药物之前，应先采集标本送检，再根据药敏试验结果和临床疗效调整给药方案，使临床应用抗菌药物趋向合理，减少用药的盲目性和随意性，提高疑难危重病人的救治成功率。 合理使用抗菌药物需要综合考虑多方面因素，绝不是一份药敏试验报告所能完全概括的，其中的临床思维和临床操作都十分复杂，要想使我们的抗生素应用更加科学、合理、有效，这需要微生物实验室和临床科室的共同努力，我们也将不断学习、更新微生物检测、试验及药理方面的知识，力争为临床科室提供更有价值的参考依据。

微生物检验实验室药物敏感性试验标准操作规程

微生物检验实验室药物敏感性试验标准操作规程1．目的 规范药物敏感性试验标准操作规程，确保药敏结果准确。 2．原理 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种待检菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后会不断的向纸片周围区域扩散，形成递减的浓度梯度，在纸片周围抑菌浓度范围内待检菌的生长被抑制，从而产生透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映检测菌对测定药物的敏感程度，并与该待检菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。 3．试剂 M-H培养基、无菌生理盐水、药敏纸片、无菌棉签、35℃孵育箱、标准比浊管或比浊仪。 4．质控 4.1 常用细菌药敏质控标准菌株参见CLSI规定。 4.2 质控菌株每日随临床标本一起进行药敏试验，测定质 控菌株的抑菌环。质控菌株的抑菌环在允许范围之内，说明结果可信。 4.3 质控的频率由于纸片法药敏试验是很稳定的，在不 失控的时候，可以每周作1～2次质控菌株的测定。如果发现有失控的情况，就必须每日做1次，寻找失控的原因

并予以纠正。如果连续30日失控<3次的，可以恢复每周1次。 5.操作步骤 5.1 挑取4～5个纯培养菌落，接种于3～5ml M-H肉汤（0.5麦氏单位）中，经35℃培养6～8h。 5.2 用无菌生理盐水或M-H肉汤校正菌液浊度，使其与标准比浊管的浓度相同。 5.3 用无菌棉拭蘸取校正过的菌液，在试管壁上挤压几次，压去多余的菌液，涂布整个M-H平板表面，再重复两次，每次旋转平板60°，使整个平板涂布均匀，最后用棉拭涂布平板四周缘一圈。 5.4 涂布菌液的平板于室温中干燥3～5分钟后，用纸片分配器或无菌镊子取药敏纸片，贴于平板表面，并用镊尖轻压一下纸片，使其贴平。每张纸片的间距不小于24mm，纸片的中心距平板的边缘不小于15mm，直径90mm的平板宜贴6张药敏纸片。 5.5 将贴好纸片的平板置35℃孵育18～24小时后，用卡尺量取抑菌圈直径。个别菌孵育温度，时间及条件应按照CLSI规定。 6.结果判断 7.根据CLSI M100最新标准将所测抑菌圈的大小，报告为敏感（S）、中介/中敏（I）或耐药（R）。

细菌自动鉴定及药敏系统的研究进展

细菌自动鉴定及药敏系统的研究进展(2) 录入时间:2011-2-23 9:13:34 来源：中华检验医学网 （四）Vitek Ⅱ： 在第一代Vitek的基础上发展而成。有4个架子，每个架子能容纳15片试验卡。司同时容纳60片试验卡，每片试验卡包含64个反应孔，采用快速荧光法测定细菌，2小时提供鉴定报告，鉴定敏感度高，分辨能力强。可在鉴定的同时进行药敏试验，结果可分级报告(先完成的药敏结果先报告)。该仪器具有高级专家系统，可根据药敏试验的表则结果提示有何种耐药机制的存在，对耐药机制推断准确性大于90％，MIC 平均药敏检测所需时间9.74小时，比传统方法缩短1天检测时间，能对药敏试验的结果进行“解释性”判读。该专家系统还能自动复核检验结果，如发现鉴定与药敏不符合的现象，即发出提示，要求进行复查。 （五）SENSITITRE MICROBIOLOGY SYSTEMS ARIS英国先德荧光快速微生物鉴定/药敏系统工作原理 1.概述： SENSITITRE MICROBIOLOGY SYSTEMS ARIS由英国Accu Med公司于20世纪70年代开始研制生产。1996年12月美国惠好公司正式成为SENSITITRE在中国的总代理。分为全自动SENSITITRE Aris和半自动Auto-Reader两种组合。可鉴定细菌180种。数据库含500种细菌资料。可对200种抗生素进行分析，在全世界有800家用户。1996年12月进入中国。国内5家用户。 2．原理： (1)鉴定原理： 通过检测荧光的增加间接地测定MIC值。SENSITITRE系统采用传统生化反应，8进位数码鉴定及荧光分析项结合。荧光分析是用荧光标记细菌表面特异酶的底物，经细菌水解底物产生荧光来判断结果。不同

微生物培养及药敏结果解读内容

微生物培养及药敏结果解 读内容 This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020

微生物培养、药敏试验的流程及意义 一、微生物培养及药敏试验的总述 微生物培养就是使用体外试验的方法检测可能导致感染的病原菌，并给以药敏结果，为临床医生针对某一特定的临床感染提供依据。而药敏试验则是承接微生物培养的一项工作，即对于培养得到的病原菌进行体外试验检测细菌对于抗菌药物的耐药性，来预测抗菌药物的临床治疗效果，从而为临床医生提供选用抗菌药物的依据来治疗感染。 对于检测到的可能的致病菌进行药敏试验时选择的药物是参照美国的CLSI推荐的标准制定的。尤其，使用全自动微生物分析仪进行药敏试验时有固定的药敏组合，不是人为可以随意添加或减少的。 （一）微生物的培养和药敏试验的流程基本为： ①将标本进行处理（不是所有的标本都需要处理）； ②将标本接种于不同的培养皿中在不同条件的培养箱中进行培养（不同的标本所含菌的种类不同，不同菌的生长条件不同，因此需要接种于不同的培养皿中）； ③24h后观察培养皿中细菌的生长情况： a.此时若无细菌培养，继续放回培养箱中培养24h，若仍然无细菌生长则判定为阴性结果，因此阴性结果出具的时间为48h以后。 b.若有细菌生长，要根据形态和气味等对细菌进行初步的判定，若能判定出细菌的种类，则进行相应的药敏试验。贴有药敏片的培养皿在培养箱中培养24h后进行药敏结果的解读，然后报告结果，这种微生物培养及药敏结果报告出具的时间就是48h以后。

由于不同的细菌的生长的速度不同，有些细菌在培养24h后不能完全判定结果甚者24h培养后无法观察到明显的细菌生长的则需要继续培养24h，即连续培养48h后同样根据菌落的形态、气味等来观察判定细菌的种类然后进行药敏试验。这种微生物培养和药敏试验结果出具需要72h以后。 而血液、骨髓等标本则是利用不同于上述培养方式的方法进行培养。它有专门的培养瓶和仪器。这种仪器会自动监测培养瓶中的变化来判定有无细菌生长，若有细菌生长仪器会发出警报。在培养5天内任何时间发出警报的培养瓶都要抽取瓶中的物质在培养皿中进行接种培养，同样在菌种鉴定后进行药敏试验；若在培养5天内不发出警报的培养瓶则视为阴性结果。因此血培养出具结果的时间为5～7天。 菌落的鉴定需要有雄厚的工作经验和熟练的相关基础知识。常规鉴定的方法有形态特征和理化特性。形态特征包括显微形态和培养特征；理化特性包括营养类型、碳氮源利用能力、各种代谢反应、酶反应和血清学反应。在微生物室学习时发现，很多时候在不太确定细菌的种类时，检验人员也会结合理化特性来判定细菌种类。 （二）革兰氏染色、应用及意义 由于微生物的生长有时间限定，因此微生物培养和药敏试验没有急查的说法。最快的结果也只能是通过涂片来判定有无细菌生长和细菌染色后的颜色和形态，来给临床医生的用药提供依据。 革兰氏阳性菌和阴性菌因为细胞壁的结构不同，在革兰氏染色时染成不同的颜色。革兰氏阳性菌显示紫色、革兰氏阴性菌显红色或粉色。由于细胞壁的结构不同，导致这两类细菌在染色性、抗原性、毒性、对某些药物的敏感性等方面均有较大差异。一般情况下，大多数化脓性球菌都属于革兰氏阳性菌，它们能产生外毒素使人致病，而大多数肠道菌多属于革兰氏阴性菌，它们差生内毒素，靠内毒素使人致病。

微生物自动鉴定及药敏系统的研究进展

微生物自动鉴定及药敏系统的研究进展 一、细菌自动鉴定及药敏系统的发展史 细菌的鉴定是细菌分类的实验过程，长期以来，临床微生物实验室一直沿用100多年前由Gram、Pasteur、Koch、Petri等创造的传统的微生物学鉴定方法。这些传统的鉴定方法不仅过程烦琐，费时费力，且在方法学和结果的判定、解释等方面易发生主观片面而引起的错误，难以进行质量控制。 20世纪60年代以后，微生物学家和工程技术人员密切合作，对微生物的研究采用了物理的、化学的分析方法，发明了许多自动化仪器，并根据细菌不同的生物学性状和代谢产物的差异，逐步发展了微量快速培养基和微量生化反应系统，使原来缓慢、烦琐的手工操作变得快速、简单，并实现了自动化和机械化。微生物鉴定自动化方法，包括(1)临床微生物鉴定系统；(2)气液色谙分析；鉴定厌氧菌和分枝杆菌多用于研究；(3)核酸杂交；多用于研究； (4)化学发光技术；可鉴定一些细菌少数分枝杆菌属和一些真菌。80到90年代发展迅速，并广泛用于临床。1985年第一台自动化细菌分析仪器Vitek-AMS进入中国并成功使用。1999年底法国梅里埃公司推出VITEK2系统，从接种物稀释、密度计比较及卡冲填和封卡等步骤均实现了全自动化。目前已有多种微生物自动鉴定及药敏测试系统问世，如 VITEK-AutoMicrobicSystem(AMS)、PHOENIXTM、MicroScan、Sensititre、ABBott(MS-2 System)、AUTOBACIDXSys-tern等。这地自动化系统具有先进的微机系统，广泛的鉴定功能，适用于临床微生物实验室、卫生防疫和商检系统，主要功能包括细菌鉴定、细菌药物敏感性试验及最低抑菌浓度(MIC)的测定等。其准确性和可靠性均已大大提高。 二、细菌自动鉴定及药敏系统原理及性能比较 1.原理： 临床微生物鉴定系统使细菌鉴定过程规范化和程序化，将细菌对底物的生化类型与已建立数据库类型相比较。测试原理主要是利用物质产生PH值变化，能释放色源或荧光源复合物的酶学反应，四氮唑标记碳水化合物代谢活性的产生，挥发或非挥发酸产生，或可见生长。鉴定系统反应原理 非发酵菌，革兰阳性球菌，革兰阴性球菌，厌氧菌和酵母

大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验

河南农业大学 本科生毕业论文(设计) 题目鸡大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验学院牧医工程学院 专业班级2011届动物医学专升本3班学生姓名王张凡 指导教师许兰菊(教授) 撰写日期：2011年5月10 日

鸡大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验 王张凡 （2011届动物医学专升本3班） 摘要：为了对巩义某鸡场疑似鸡大肠杆菌病的鸡群进行确诊，并为有效防治提供依据，本研究利用细菌学检验方法对采集的典型病料进行细菌分离鉴定和细菌药敏试验。通过细菌分离培养、形态学观察、生化试验、动物试验和血清学试验。结果表明：该鸡群中分离到的病原菌为鸡大肠杆菌。动物攻毒试验结果表明：分离的鸡大肠杆菌具有明显的致病作用，雏鸡发病率为100%(5/5)，死亡率达60%(3/5)。血清学鉴定结果显示，该分离菌血清型为O1。药敏试验结果表明：该细菌对头孢曲松、头孢唑林、阿米卡星、复方新诺明（磺胺甲恶唑）、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、氨苄西林、米诺环素和庆大霉素均敏感，对阿莫西林和阿奇霉素为中度敏感;但对罗红霉素和四环素耐药。本研究结果对准确诊断和有效防治该病提供了依据和条件。 关键词：鸡；大肠杆菌；分离鉴定；药敏试验 Isolation, Identification and Antibiotic Sensitivity Test of Chicken Escherichia Coli wang zhangfan (Class 3 of Veterinary Medicine, Graduated in 2011) Abstract:In order to make a definite diagnosis for the suspend Chicken Escherichia Coli about chicken house from Gongyi and provide a reference for effective prevention and treatment. The bacteria was isolated and identified from typical samples and antibiotic sensitivity test was also adopted. By bacterial separate cultures, morphological observation, biochemical tests, animal experiment and serological tests, the pathogen of this chickens is pathogenic E.coli bacteria. The result of animal experiment showed: this Escherichia coli had obviously pathogenic; the morbidity of chicklings was 100%(5/5) and the mortality was 60%(3/5).Serological testing results indicated: the serotype of this strain was O1. The antibiotic sensitivity test results illuminated: the sensitivity of the strain to ceftriaxone、cefazolin and other 8 kinds of drug were sensitive; and the drug sensitivity to amoxicillin and azithromycin are intermediate;but the strain were drug resistant to roxithromycin and acheomycin. This research provided a scientific basis and qualification for exact diagnosis and effective prevention and treatment to Escherichia coli. Key word:Chicken,Escherichia Coli, Isolation and Identification, Antibiotic Sensitivity Test 鸡大肠杆菌病是由禽致病性大肠杆菌(avian pathgenicity E．coli，APEC)引起的急性或慢性细菌性传染病，各种日龄的鸡均可发病，但雏鸡和产蛋鸡更易发病，其常与其他疾病混合

微生物培养及药敏结果解读内容

微生物培养、药敏试验的流程及意义 一、微生物培养及药敏试验的总述 微生物培养就是使用体外试验的方法检测可能导致感染的病原菌，并给以药敏结果，为临床医生针对某一特定的临床感染提供依据。而药敏试验则是承接微生物培养的一项工作，即对于培养得到的病原菌进行体外试验检测细菌对于抗菌药物的耐药性，来预测抗菌药物的临床治疗效果，从而为临床医生提供选用抗菌药物的依据来治疗感染。 对于检测到的可能的致病菌进行药敏试验时选择的药物是参照美国的CLSI推荐的标准制定的。尤其，使用全自动微生物分析仪进行药敏试验时有固定的药敏组合，不是人为可以随意添加或减少的。 （一）微生物的培养和药敏试验的流程基本为： ①将标本进行处理（不是所有的标本都需要处理）； ②将标本接种于不同的培养皿中在不同条件的培养箱中进行培养（不同的标本所含菌的种类不同，不同菌的生长条件不同，因此需要接种于不同的培养皿中）； ③24h后观察培养皿中细菌的生长情况： a.此时若无细菌培养，继续放回培养箱中培养24h，若仍然无细菌生长则判定为阴性结果，因此阴性结果出具的时间为48h以后。 b.若有细菌生长，要根据形态和气味等对细菌进行初步的判定，若能判定出细菌的种类，则进行相应的药敏试验。贴有药敏片的培养皿在培养箱中培养24h后进行药敏结果的解读，然后报告结果，这种微生物培养及药敏结果报告出具的时间就是48h以后。 由于不同的细菌的生长的速度不同，有些细菌在培养24h后不能完全判定结果甚者24h 培养后无法观察到明显的细菌生长的则需要继续培养24h，即连续培养48h后同样根据菌落的形态、气味等来观察判定细菌的种类然后进行药敏试验。这种微生物培养和药敏试验结果出具需要72h以后。 而血液、骨髓等标本则是利用不同于上述培养方式的方法进行培养。它有专门的培养瓶和仪器。这种仪器会自动监测培养瓶中的变化来判定有无细菌生长，若有细菌生长仪器会发出警报。在培养5天内任何时间发出警报的培养瓶都要抽取瓶中的物质在培养皿中进行接种培养，同样在菌种鉴定后进行药敏试验；若在培养5天内不发出警报的培养瓶则视为阴性结果。因此血培养出具结果的时间为5～7天。 菌落的鉴定需要有雄厚的工作经验和熟练的相关基础知识。常规鉴定的方法有形态特征和理化特性。形态特征包括显微形态和培养特征；理化特性包括营养类型、碳氮源利用能力、各种代谢反应、酶反应和血清学反应。在微生物室学习时发现，很多时候在不太确定细菌的种类时，检验人员也会结合理化特性来判定细菌种类。 （二）革兰氏染色、应用及意义 由于微生物的生长有时间限定，因此微生物培养和药敏试验没有急查的说法。最快的结果也只能是通过涂片来判定有无细菌生长和细菌染色后的颜色和形态，来给临床医生的用药提供依据。 革兰氏阳性菌和阴性菌因为细胞壁的结构不同，在革兰氏染色时染成不同的颜色。革兰氏阳性菌显示紫色、革兰氏阴性菌显红色或粉色。由于细胞壁的结构不同，导致这两类细菌在染色性、抗原性、毒性、对某些药物的敏感性等方面均有较大差异。一般情况下，大多数化脓性球菌都属于革兰氏阳性菌，它们能产生外毒素使人致病，而大多数肠道菌多属于革兰氏阴性菌，它们差生内毒素，靠内毒素使人致病。 在治疗上，大多数革兰氏阳性菌对青霉素敏感（结核杆菌对青霉素不敏感），革兰氏阴性菌对青霉素不敏感（但奈瑟氏菌中德流行性脑膜炎双球菌和淋病双球菌对青霉素敏感），

进修实习生细菌鉴定药敏仪小讲座1

细菌纯分及上机（vitek2 compact系统） 一、细菌鉴定和药敏检测流程： 初鉴→纯分→选卡→菌悬液配制及稀释→上卡→纯化→结果处理 1、初鉴： 血液：单瓶报阳（草绿色链球菌、微球菌和阳性杆菌考虑是否为污染菌）多瓶报阳，考虑为致病菌。 无菌体液：主要为胸腹水，脑脊液，关节腔积液有细菌都要处理。 宫颈分泌物: B群链球菌，无乳链球菌CAMP（+） 耳鼻喉科分泌物：有正常菌群，流感嗜血杆菌，金葡菌，肺炎链球菌需处理；而奈瑟氏菌，α溶血链球菌等不处理 伤口分泌物：骨科和皮肤科采集时，有可能没有进行表皮消毒，培养出凝固酶阴性的葡萄球菌时，需商榷，不一定全部处理。 咽拭子：A群β溶血链球菌，化脓链球菌 痰：（+）金葡，β溶血链球菌，肺炎链球菌，纹带棒状杆菌 （-）全部阴性杆菌3+，卡他阴性双球菌 大量真菌3+ 2、细菌纯分： 目标菌株作鉴定和药敏测试前需传代纯分培养18-24h后（新鲜菌）取单个菌落上机。 3、vitek2 compact系统 3.1、工作原理 该系统主要由以下几部分组成：样本处理工作站（SCS）、一体化自动装置（最大处理容量为60个试验卡）、精密电子数码比浊仪。仪器采用单一扫描微量生化鉴定比色法，15分钟连续扫描，与内存曲线斜率比较判断结果。药敏测定以定量MIC为基础，以MIC分布指纹图谱为分析依据，具有强大的专家软件系统，包括2000多种耐药表型、20000多个MIC分布柱状图和完善的统计分析功能，以及篇参考文献的支持。 3.2、卡片的选择： 鉴定卡：

GN 革兰阴性杆菌鉴定卡 GP 革兰阳性球及部分革兰氏阳性杆菌鉴定卡 YST 酵母菌鉴定卡 NH 革兰阴性杆菌鉴定卡 ANC 革兰阳性杆菌鉴定卡 药敏卡： AST-GN13/GN09 革兰阴性杆菌药敏卡/非发酵革兰阴性杆菌药敏卡 AST-GP67 革兰阳性球菌药敏卡 4、菌悬液配制及稀释:悬浮液为0.45% NaCL液，PH 5.5-7.2 菌悬液浓度： 鉴定卡GN 0.5 - 0.63MCF GP 0.5 - 0.63 MCF NH 2.7 - 3.3 MCF ANC 2.7-3.3 MCF YST 1.8 - 2.2 MCF 药敏卡AST-GN 3.0ml 盐水+ 145μl菌悬液 AST-GP 3.0ml 盐水+ 280μl菌悬液注意：所有悬浮液开封后有效期为一个月，为避免污染，盐水分装器夜间必须置于冰箱（2℃ - 8℃）。并每月高温高压消毒一次。盐水无菌实验检 查。 5、上卡：使用前将卡片和盐水瓶从冰箱取出，放室温15-20分钟，充分复温， 将卡片按顺序放在载卡架上，输样管插入到菌液管中。药敏卡应放在 配对鉴定卡的后面。 6、纯度实验：用上机后的鉴定卡或者药敏卡的输液管直接在血平板上接种划线， 第二天观察所长出的细菌是否为纯菌。 7、结果处理： 1）鉴定结果：鉴定卡的结果一般仅给出单一结果，无需进行补充试验，电脑

微生物药敏报告里面玄机多

一、药敏报告审核注意事项 1、核对标本类型与病原菌，是否为有意义的病原菌； 2、常见耐表型报告是否准确； 3、少见耐药表型是否核对过； 4、矛盾耐药表型是否核对过； 5、核对标本类型与病原菌，是否为有意义的病原菌。 二、咽拭子有意义的病原菌 1、咽炎：A、C、G群β溶血链球菌，溶血隐秘杆菌，脑膜炎奈瑟菌，淋病奈瑟菌； 2、白喉：白喉棒状杆菌；Lemierre综合征：坏死梭杆菌； 3、会厌炎：流感嗜血杆菌；百日咳：百日咳博德特菌。 三、痰有意义的病原菌 1、CAP：流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌、肺炎链球菌； 2、HAP：金黄色葡萄球菌、肠杆菌科细菌、非发酵革兰阴性杆菌、丝状真菌； 3、同时一定要结合痰涂片，评价痰是否合格，关注白细胞吞噬和伴行的细菌做鉴定和药敏。 四、粪便有意义的病原菌 1、胃肠炎：沙门菌、志贺菌、致病性大肠埃希菌、小肠结肠炎耶尔森菌、霍乱弧菌、空肠弯曲菌、气单胞菌、念珠菌、轮状病毒； 2、食物中毒：副溶血弧菌、金黄色葡萄球菌、类志贺邻单胞菌、芽孢杆菌； 3、抗生素相关性腹泻：难辨梭菌。 五、阴道分泌物细菌分布 1、阴道正常菌群包括：乳杆菌，链球菌，肠球菌，凝固酶阴性葡萄球菌。 2、阴道条件致病菌：拟杆菌，厌氧球菌，阴道加特纳菌，酵母菌，大肠埃希菌。 3、生殖道病原菌包括：女性外阴拭子：A群β-溶血链球菌，酵母菌，淋病奈瑟菌，杜克雷

嗜血杆菌，流感嗜血杆菌（<10岁）； 4、阴道拭子：A、B、C、G群β溶血链球菌，金葡菌，酵母菌，阴道毛滴虫，人型支原体。 六、葡萄球菌属药敏的审核要点 1、少见耐药表型：如果出现对万古霉素、**拉宁、利奈唑胺、替加环素中介或耐药的葡萄球菌，需要用E-test条复核；万古霉素药敏不能用纸片扩散法，需要用MIC方法； 2、青霉素敏感时需检测β-内酰胺酶；是否准确报告MRS，头孢西丁为预测药物，不报告R 或S，只报告“+”或“-”； 3、对于β-内酰胺类仅需报告青霉素和苯唑西林药敏即可； 4、红霉素耐药、克林霉素敏感时，是否检测了红霉素诱导克林； 5、霉素耐药试验，需根据其结果修正克林霉素药敏结果； 6、氟喹诺酮类敏感性大多数情况一致；呋喃妥因仅在尿路标本中报告。 七、肠球菌属药敏的审核要点 1、少见耐药表型：如果出现对万古霉素、**拉宁、利奈唑胺、替加环素中介或耐药的肠球菌，需要用E-test条复核； 2、肠球菌属对氨基糖苷类（除高浓度）、头孢菌素类、克林霉素和复方磺胺体外敏感，但是临床无效，因此不能报告敏感。 八、肺炎链球菌药敏的审核要点 1、青霉素无纸片法折点，需用OXA纸片预测或MIC检测； 2、对左氧氟沙星敏感的肺炎链球菌分离株可预报其对莫西沙星也敏感，反之不行； 3、对脑脊液中肺炎链球菌，青霉素需MIC预测、头孢噻肟或头孢曲松或美罗培南需MIC 预测

ATB NEW微生物鉴定和药敏分析仪 (SOP)V1.0.0

ATB NEW微生物鉴定和药敏分析仪标准化操作流程(SOP) （版本2.2.0） V 1.0.0 2016年11月 梅里诊断产品（上海）有限公司 客户服务部

目录 一．系统概述 (3) 二．系统正常工作条件 (3) 安装环境 (3) 电气特征 (3) 三．开机关机程序 (4) 开机： (4) 关机： (5) 四. 鉴定/药敏试条及耗材 (6) 五．试条种类及培养要求 (7) 六．标准操作流程 (9) （一）菌悬液的制备、加样和孵育 (9) （二）试条的检测 (10) （三）结果处理 (13) 七．仪器的维护和保养 (20) 八．质量控制 (21) 重要提示 (23) 附录 (24)

一．系统概述 ATB NEW是集微生物鉴定、药敏分析于一体的半自动微生物系统。其优势在于：?全中文操作界面，易于理解 ?鉴定范围很广 ?独立包装的ATB试条+干燥剂，有效减少交叉污染 ?专家系统对结果进行分析，临床结果更为可靠 二．系统正常工作条件 安装环境 ●室内使用 ●避免日光直射 ●安装于平整，稳定的台面 ●预留足够的空间，确保读数仪的前面板打开后可以放置于平整的台面上 ●电脑主机后部离墙至少20cm，确保主机通风散气 ●运行温度：≤30℃ ●运输和储存温度：-10℃至+50℃ ●相对湿度：10%-70%，无冷凝水 ●安装的最高海拔高度：2000 m ●安装类别：II（符合IEC 61010.1标准） ●污染程度：2（符合IEC 61010.1标准） 电气特征 电压：100 ~240 V交流电，频率50~60 Hz 最大的输入电流：1.2 A I类设备

三．开机关机程序 开机： 1．打开电脑 2．双击桌面图标ATB NEW 3．输入用户名和密码，点击登录，进入ATB NEW 软件 默认操作者：100 密码：100 4．打开读数仪后面板上的开关（ON） 5．放下读数仪的前面板 6．打开打印机