肽聚糖

参照Park等人[6，7]的方法，略加改进。将乳链球菌5BgOO接种于MRS培养基上37℃

培养12h(O热2。侧0.8)，离心收集菌体，生理盐水洗三次。将菌体悬浮在10%的TCA溶液中，(其1:10稀释液的O只2。之1.0)，沸水浴20而n，冷却，50009离心10而n，蒸馏水洗三次。沉淀溶于Try声i二phosphate缓冲液(1mg/mltrypsin，0.lmo一/LPBs，pH7.9)中，37oC水浴振荡3h(OD62。基本不再下降)，10009离心30而n，弃去沉淀，上清液经300009离心10而n，沉淀用蒸馏水洗两次，加人无水乙醇、乙醚脱水干燥，保存。

参考孟凡伦等[2]改进的Park方法。取实验室常规厌氧培养并离心收集的双歧杆菌(Bifidobacterium thermophilum)湿菌20 g,悬浮于200 mL 10%三氯乙酸(TCA)溶液中,沸水浴20min,冷却后,以7 500 r·min-1转速离心10 min,弃上清液,蒸馏水洗沉淀3次。沉淀溶于trypsin-phosphate缓冲液(1 mg·mL-1,Trypsin;0.1 mo1·L-1PBS;pH 8.0)中,37℃水浴振荡3 h ,以4 000 r·min-1转速离心30 min,弃去沉淀。上清液以22 000 r·min-1转速离心10 min,沉淀用蒸馏水洗两次,加入无水乙醇以10 000 r·min-1转速离心30 min,取上清。上清液加入乙醚去脂,以10 000 r·min-1转速离心30 min,低温干燥脱水后得淡褐色胶质肽聚糖粗制物。

1.3 细胞壁WPG的分离

1.3.1 收集细菌将双歧双歧杆菌接种于BL肉汤,扩大培养,4000×g30min离心收集细菌沉淀,0.9%Nacl反复洗涤细菌直至白色,收集细菌置-20℃冰箱保存。

1.3.2 加热杀死细菌收集的细菌置于65℃水浴箱内孵育40min。

1.3.3 分离肽聚糖将15g热处理过的细菌加入到50ml 0.5% Trilon x-100溶液中,80-85℃水浴1h,同时不断连续搅拌溶液。然后,使溶液立即冷却,并用重蒸水彻底洗涤。再用甲醇:水(2∶1 V/V),甲醇,丙酮连续洗涤,去除不可溶残渣中的去垢剂。在残渣中加入40ml内含10mmol Mgcl2,胰酶(1mg/ml),DNase(100μg/ml),RNase(150μg/ml),pH7.2 Tris Hcl缓冲液,37℃孵育14h,2000×g 4℃离心40min分离不可溶残渣,并用含胰蛋白酶(0.5mg/ml),α-糜蛋白酶(0.5mg/ml),Tris Hcl缓冲液40ml,37℃消化14h。残渣用胃蛋白酶(1mg/ml)0.01N Hcl 20ml处理,然后用含蛋白酶E(1mg/ml)pH7.4 TrisHcl缓冲液20ml 37℃消化14h。蛋白酶消化过的残渣经甲醇、甲醇:氯仿(1∶1V/V)及氯仿40ml洗涤脱脂。脱脂的提取物用含蛋白酶E(1mg/ml),pH7.4Tris Hcl缓冲液20ml 37℃14h消化3次,然后用蒸馏水连续透析3天。最后, 不可溶的提取物经0.01N H2SO410ml85-95℃处理5min,立即冷却15000×g 4℃离心30min。沉渣用水透析7天,冻干保存。

总糖含量的测定配制40 mg·mL的肽聚糖,超声波破碎后,酚硫酸法测定样品总糖含量(%)。

脂肪酸含量测定将100 mg肽聚糖于甲醇∶苯(1∶1 V/V)的2.5%KOH溶液中皂化6 h,冷却后用10%HCl酸化,用乙醚抽提3次后混合乙醚提取物,蒸馏水洗涤3次,用无水Na2SO4干燥蒸发除去乙醚冷冻干燥,之后的重量级为脂肪酸含量(%)。

蛋白质含量的测定以牛血清白蛋白为标准蛋白,考马斯亮蓝G250为染液,Bradford法测定肽聚糖粗制物的蛋白质含量(%)。

氨基酸组分分析

氨基酸的测定方法采用国家标准GB/T14965-1994。使用仪器为:日立835-50。分析条件分别为:分离柱,2.6 mm×150mm;树脂,No. 2619;温度, 53℃;压力, 85 kg·cm-2;流速,0.22 mL·min-1。

蛋白质含量的测定:lmg样品加人0.5ml卜IaO域2mol/L)溶液，37℃水解30而n，离心取上清液用B.心fo记法测定蛋白质含量l8]。

N—乙酰葡糖胺(卜acetylglucosanllne，缩写为NAG)的测定:采用本室改进的Reissig等人[9，’0]的方法。

N—乙酰胞壁酸(怜acetylm~cacid，缩写为NAM)的测定:按照Barker和sUInmerson法[，’，‘，]进行。

氨基酸分析:样品经6mof/LHCI105℃水解24h后，用日立835型高速氨基酸分

析仪测定。

l)收集细菌:取发酵完成的菌液，8000r/min4oC离心巧min，收集沉淀用

.

9%生理盐水洗涤至细菌为白色。

2)细菌灭活:将收集的细菌于65oC水浴，衡温4Omin。

3)裂解:159细菌加入50ml0.5%TritonX一100r卜80oC~85oC水浴一h，同

时不断连续搅拌，然后立即冷却，并用重蒸水彻底洗涤，再用甲醇:水(2:

IV/V)，甲醇，丙酮连续洗涤，去除不可溶残渣中的去垢剂。

4)消化:在残渣中加入40ml内含1ommolMgCI:的胰酶(1mg/ml)，

DNase(1ooug/ml)，RNase(150ug/ml)，pH7.2Tris·HCI缓冲液，37”C孵育14h，

20o0r八n4oC离心40:nin，分离不可溶残渣，并有用含)JA蛋白酶(0.5:ng/ml)，

。一糜蛋白酶(0.5n飞g/ml)，Tris·HCI缓冲液40ml，37OC消化14h，残渣用胃

蛋白酶(lmg/ml)0.olNHC120ml处理，然后用含蛋白酶E(lmg/nll)pH7.4

Tris·圣一ICI缓冲液37OC消14h。

5)脱脂:上述蛋白酶消化过的残渣经甲醇、甲醇:氯仿(1:IV/v)及氯仿

40，nl洗涤)jR脂，IJR脂的提取物用含蛋白的酶E(lmg/ml)pH7.4Tris·HCI缓

冲液20ml37oC14h消化3次，然后用蒸馏水连续透析3天。

6)细胞壁获得:不可溶提取物经loml0.olNHZSO4，85一95oC处理snli，，，立

即冷却，15000:/mi，:4oC离心30min，沉渣用水透析7天，冻干保存。

1.3双歧杆菌细胞壁肽聚糖的扫描电镜观察

上述方法制备的肽聚糖用含2.5%戊二醛的

0.2 mol磷酸缓冲液(pH7.2)室温固定2 h,磷酸缓

冲液充分洗涤,25%、50%、70%及100%乙醇系列

脱水,铂钯镀膜,扫描电镜观察[1]。

肽聚糖的处理将制备的肽聚糖干燥物分

别用对虾生理缓冲液[8]和0.85%的生理盐水配成

0.1%和1%两个浓度,超声波破碎制成均匀悬

液,高温高压灭菌20 min后备用。

1.4.2实验方法

实验分组选取暂养1周健康日本对虾9

尾,分为3组,每组3尾。每组日本对虾第二腹节

分别注射对虾生理盐水(对照组)、0.1%PG、1%G,每尾注射0.2 mL。选取暂养2周健康牙鲆24

尾,分为3组,每组8尾;每组牙鲆腹腔分别注射

0.85%生理盐水(对照组)、0.1%PG、1%PG,每尾

注射0.1 mL。

血清的获得于注射后3、24、48、72、96 h,

用1 mL一次性注射器自对虾第五步足基部血窦

处采血,置1.5 mL无菌Eppendorf管中,血样随即

放入冰盒并于4℃冰箱放置过夜,分离血清用于

免疫指标的测定。于注射后24、48、72、96 h分

别从每组牙鲆中随机捞取两尾,使用1 mL一次性

注射器自尾静脉取血,置于1.5 mL Eppendorf管

中。血样随即放入冰盒并于4℃冰箱放置过夜,

分离血清用于免疫指标的测定。

1

.

1

.

1实，}众J!I:I一l木对」‘l;(pe，7aeZ，‘、.jol，o，7ic，，s)J几2000年11月711从市场购得(经

核酸探针点杂交检测，不带自斑病毒wSSv)，虾体长10.9士o.6cm，折养于各实

验池内，日投喂2次，连续充气，控温在18士0.soC，娜天换水一次，换水量约

占l/3，稳定一周后用于实验。

桔小实蝇肽聚糖识别蛋白基因鉴定与功能分析

目录 中文摘要......................................................................................................................................................... I Abstract ........................................................................................................................................................ III 第一章文献综述 (1) 1 柑桔产业以及主要虫害的发生状况 (1) 2 昆虫免疫系统 (1) 2.1 Toll信号通路 (2) 2.2 Imd信号通路 (3) 2.3 肽聚糖识别蛋白PGRP (3) 3 本学位论文研究的立题依据及研究内容 (5) 第二章桔小实蝇PGRPs的鉴定与可变剪切子分析 (7) 1 材料与方法 (7) 1.1 目的基因的筛选与序列分析 (7) 1.2 供试昆虫 (7) 1.3 主要试剂和试剂 (8) 1.4 主要仪器设备 (8) 1.5 总RNA提取及cDNA合成 (9) 1.6 基因组DNA提取 (10) 1.7 引物设计与合成 (10) 1.8 目的片段克隆 (10) 2 结果与分析 (12) 3 讨论 (21) 4 小结 (22) 第三章桔小实蝇PGRPs在不同发育阶段的表达模式分析 (23) 1 材料与方法 (23) 1.1 供试昆虫 (23) 1.2 主要试剂盒和试剂 (23) 1.3 主要仪器 (23) 1.4 总RNA提取及cDNA合成 (23) 1.5 引物设计 (24) 1.6 定量检测 (24) 1.7 统计分析 (25) 2 结果与分析 (25) 3 讨论 (30) 4 小结 (31) 第四章桔小实蝇PGRPs在病原因子诱导后表达模式分析 (32) i

昆虫免疫

昆虫免疫与信号传导 摘要 对于无脊椎动物抵御外来物质和病原体来说，先天免疫是迅速和唯一的免疫反应。昆虫依靠体液和细胞通过识别受体和激活免疫通路发挥免疫效应。脂肪体和血细胞产生以及分泌抗菌因子，但是在昆虫里血细胞才参与细胞免疫。近年来，研究集中在微生物识别机理以及对抗外来物质时细胞内信号分子的激活。这篇综述总结了昆虫先天免疫的机理，结合信号通路和它们的交叉反应涉及到了细胞免疫与体液免疫的潜在关联。 关键字：昆虫先天免疫信号通路 Abstract The innate immunity is the immediate and sole response of invertebrates for the protection against foreign substances and pathogens. In insects, it relies on both humoral and cellular responses that are mediated via certain recognizing receptors and activation of several signalling pathways. Fat body and hemocytes are the origins for the production and secretion of antimicrobial agents and activators/regulators of cellular response, while cell mediated immunity in insects is performed by hemocytes. In the last years, research has focused on the mechanisms of microbial recognition and activation of intracellular signalling molecules in response to invaders. In this review, I summarize the mechanisms of the innate immunity in insects and refer to potential interactions between humoral and cellular responses, combined with the involving signalling pathways and their cross talk. Key Words: insects innate immunity signalling pathways

肽键肽聚糖分子结构图片互动百科

肽键肽聚糖分子结构词条:肽键肽键,是指一个氨基酸的羧基与另一氨基酸的氨基发生缩合反应脱水成肽时,羧基和氨基形成的酰胺键。具有类似双键的特性,除了稳定的反式... 2008-11-04 - ? >肽键肽聚糖分子结构 ? o o ? ??→1 2 ?→1 ?→2 ?→3 4 ?→34 ?→5 6

?→56?→7 8 ?→78 ?→9 10 ?→910?→11 12 ?→1112

?→13 14 ?→1314 ?→1516 肽键肽聚糖分子结构 肽键，是指一个氨基酸的羧基与另一氨基酸的氨基发生缩合反应脱水成肽时，羧基和氨基形成的酰胺键。具有类似双键的特性，除了稳定的反式肽键外，还可能出现不太稳定的顺式肽键。 1上传者：上传时间：2008-11-04 肽聚糖骨架是由N-乙酰葡萄糖胺(N-acetylglucosamine简写G)和N-乙酰胞壁酸(N-acetylmuramic acid简写M)通过β-1，4糖苷键交替相联而组成的线状聚糖链。M是在N - - - - - 肽聚糖 肽聚糖存在于真细菌中的革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的细胞壁中。是由乙酰、乙酰与四到五个氨基酸短肽聚合而成的多层网状大分子结构。。从每个N-乙酰胞壁酸引出一条寡肽链，与相邻多糖链上的N-乙酰胞壁酸相连（如图2），使两条平行的糖链横向相连构成网络，这样构成了整个细菌表面的细胞壁。 中文名肽聚糖

外文名peptidoglycan 存在于原核生物的糖肽化合物 又称粘肽（mucopeptide） 目录 1 2 3 4 5 6 1简介 粘质复合物（mucocomplex)，又称粘质复合物（mucocomplex)、胞壁质（murein)。它是由双糖单位，还有肽桥聚合而成得多层网状大分子结构 肽聚糖合成 N-乙酰葡萄糖胺（NAG）和（NAMA）交替连接的与不同组成的肽交叉连接形成的大分子。肽聚糖是许多细菌细胞壁的主要成分。如革兰氏阳性细菌(G+)胞壁所含的肽聚糖占干重的50-80%由N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酸通过β-1,4糖苷键连接而成，糖链间由肽链交联，构成稳定的网状结构，肽链长短视细菌种类不同而异，革兰氏阴性细菌(G-)胞壁所含的肽聚糖占干重的5-20%其双糖单位跟革兰氏阳性菌一样但是四肽尾的第三个不是L-Lys而是内消旋二氨基庚二酸。[1] 2组成及结构特点 1. G-M 双糖单位； 2. 四肽尾 组成：革兰氏阳性菌（如）为L-Ala + D-Glu + L-Lys + D-Ala ，革兰氏阴性菌（如大肠埃希菌）为L-Ala + D-Glu + m-DAP + D-Ala ； 连接方式：四肽中N端的L-Ala上α-NH2与M中乳酸的羧基连接；

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肽键肽聚糖分子结构_图片_互动百科 肽键肽聚糖分子结构词条:肽键肽键,是指一个氨基酸的羧基与另一氨基酸的氨基发生缩合反应脱水成肽时,羧基和氨基形成的酰胺键。具有类似双键的特性,除了稳定的反式... https://www.wendangku.net/doc/823880287.html,/a3_47... 2008-11-04 - 百度快照 ?互动百科 IN词图片分类专题百科图表有奖任务积分换礼 返回"肽键"正文页>肽键肽聚糖分子结构 ?分享到... o新浪微博 o腾讯微博 ?查看原图 ?自动播放?→1 2 ?→1 ?→2 ?→3 4 ?→34 ?→5 6

?→56?→7 8 ?→78 ?→9 10 ?→910?→11 12 ?→1112

?→13 14 ?→1314 ?→1516 肽键肽聚糖分子结构 词条：肽键 肽键，是指一个氨基酸的羧基与另一氨基酸的氨基发生缩合反应脱水成肽时，羧基和氨基形成的酰胺键。具有类似双键的特性，除了稳定的反式肽键外，还可能出现不太稳定的顺式肽键。[查看词条] 1上传者：小脚丫冰冰凉上传时间：2008-11-04 肽聚糖分子结构_百度百科 肽聚糖骨架是由N-乙酰葡萄糖胺(N-acetylglucosamine简写G)和N-乙酰胞壁酸(N-acetylmuramic acid简写M)通过β-1，4糖苷键交替相联而组成的线状聚糖链。M是在N 简介-组成及结构... -分子结构-结构特点-与疾病的关系-查看全部>> 肽聚糖编辑 肽聚糖存在于真细菌中的革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的细胞壁中。是由乙酰氨基葡萄糖、乙酰胞壁酸与四到五个氨基酸短肽聚合而成的多层网状大分子结构。。从每个N-乙酰胞壁酸引出一条寡肽链，与相邻多糖链上的N-乙酰胞壁酸相连（如图2），使两条平行的糖链横向相连构成网络，这样构成了整个细菌表面的细胞壁。 中文名肽聚糖

家蚕分子免疫研究进展

家蚕分子免疫研究进展 高贵田1,陈克平13,姚勤1,王永杰1,2　 (1.江苏大学生命科学研究院,江苏镇江212013;2.安徽省农业科学院水产研究所,安徽合肥230031) 摘要　家蚕是继果蝇、按蚊之后第3个完成全基因组测序的模式昆虫,其分子免疫研究进展很快。综述了家蚕先天免疫模式识别受体、家蚕抗微生物多肽等方面的研究进展。 关键词　家蚕;分子免疫;研究进展 中图分类号　S881.2 文献标识码　A 文章编号　0517-6611(2006)03-0508-02 家蚕是鳞翅目昆虫,有其独特的免疫系统和免疫机制。可分为先天免疫和后天免疫、细胞免疫和体液免疫。细胞免疫是巨噬细胞吞噬、消化外来异物,与高等动物基本相同,而体液免疫则不同于高等动物,主要区别在于昆虫无T和B淋巴细胞,无免疫球蛋白及完整的补体系统,缺乏特异的抗原—抗体反应,而是以抗菌肽、抗病毒因子、凝集素、溶菌酶及蛋白酶抑剂等多种活性因子,配合多种功能的血细胞以建立一个开放的完整的防御体系[1]。家蚕体内有两类特殊体液免疫因子(hum oral immunity factors)以杀灭或抑制外来异物。一类是正常虫内本身存在的先天性因子,如凝集素(lectin)、原酚氧化酶(proph oloxidase)等;另一类是经人工或自然诱导后产生的后天性免疫因子,如抗微生物多肽(antim i2 crobial peptide)。家蚕是继果蝇、按蚊之后第3个完成全基因组测序的模式昆虫,其分子免疫研究进展很快。笔者主要对家蚕先天免疫模式识别受体、家蚕抗微生物多肽及基因克隆的研究进展进行了综述。 1　家蚕先天免疫模式识别受体 家蚕遭受微生物感染后可引起多种细胞和体液免疫反应的激活,从微生物侵袭到最终清除病原一般要经过4个步骤:首先是识别外来异物,称为感染的非己识别;随后,引发了激活丝氨酸蛋白酶和解除丝氨酸蛋白酶抑制剂的细胞外级联反应,从而将受到感染的信号放大为更强的“危险”信号或解除错误警报,这个过程称为信号的调整和放大;然后引发信号转导途径而导致目的基因的转录活性[2],产生免疫应答。感染的非己识别对于缺少适应性免疫的无脊椎动物更为重要。现在已证实这种“非己”识别是因为存在某些特异性的、可溶的或与细胞膜结合的模式识别受体(PRR S),也称为模式识别蛋白(PRP S)或模式识别分子(PR M S),可以识别或结合那些微生物表面保守的、而在宿主中又不存在的病原相关分子模式,如G-细菌的脂多糖(LPS)、G+细菌的肽聚糖(PG N)、脂磷壁酸(T LA)以及真菌的甘露聚糖(manana)。天然免疫识别这些受体后,通过激活存在于血淋巴的蛋白酶和利用免疫反应组织的细胞内信号转导途径而引起免疫反应[3]。PRR S还可以作为促进吞噬的调理素,也可以是凝集、黑化或其他蛋白质修饰级联反应等免疫过程的起始因子。 基金项目　国家自然科学基金项目(30370773);江苏大学高级人才基金项目(1291180009)。 作者简介　高贵田(1964-),男,陕西岚皋人,在读博士,高级农艺师,从事分子遗传与育种研究。3通讯作者,博士生导师,研究员, E2m ail:kpchen@https://www.wendangku.net/doc/823880287.html,。 收稿日期　2005209228Christophides等[4]将在果蝇和按蚊中发现的PRR S分为6种类型:肽聚糖识别蛋白,含硫酯键蛋白,革兰阴性菌结合蛋白,清除受体,C2型凝集素和硫依赖型凝集素。而Hultmark[5]将T oll受体也归为PRR S。 1.1　家蚕肽聚糖识别蛋白(PG RP S)　1996年,Y oshida等在家蚕的血淋巴中发现了第1个肽聚糖识别蛋白,具有PG RP 结构域,在激活免疫反应中起着重要的和多样性的作用,包括黑化级联反应、吞噬作用和产生抗革兰氏阳性菌和阴性菌物质的信号转导途径[6]。在果蝇、按蚊、家蚕和人类中,短型肽聚糖识别蛋白基因都很相似,PG RP结构域紧接在典型的信号肽之后,成熟蛋白只有1个PG RP结构域。 1.2　家蚕革兰氏阴性菌结合蛋白(G N BP S)　G N BP与脂多糖(LPS)和β21,3葡聚糖有很高的亲和性,但对肽聚糖和β21, 4葡聚糖和几丁质没有亲和性。2000年,K im Y S等在经细菌诱导的家蚕中发现了家蚕的革兰氏阴性菌结合蛋白。果蝇的G N BP21具有可溶的和细胞膜糖基磷脂酰肌糖锚定的2种形式,在对细菌LPS反应的先天免疫信号转导中起重要作用[7]。蚕蛾和按蚊的G N BP基因在免疫诱导中为上调,而果蝇的基因在特定的发育阶段是组成性表达。 2　家蚕抗微生物多肽 研究表明,昆虫的免疫应答主要体现在3个方面,即体液免疫产生抗微生物蛋白、细胞免疫吞噬或包埋外源微生物,以及酚氧化酶反应在伤口或外源物周围堆集黑色素[8]。体液免疫产生抗微生物多肽是目前研究的热点之一。昆虫抗微生物多肽是指当其受到外界微生物等异物刺激时,诱发血淋巴(脂肪体)快速合成的一类小分子肽,是其分子免疫的效应物。具有热稳定性强、强碱性、抗菌谱广的特点,既可以抗革兰氏阳性菌,也可以抗革兰氏阴性菌,尤其对耐药性菌株有明显抑杀作用,对病毒、原虫及癌细胞也有作用[9]。近10年间,陆续新发现鉴定了10多种主要对丝状真菌和酵母具有抗性的昆虫多肽,同时由原已发现的一些昆虫抗菌肽中,最近又不断鉴定到它们有的还兼有抗真菌的活性。迄今为止,已报道的昆虫抗微生物肽有200多种,涉及鳞翅目、双翅目、鞘翅目、半翅目、等翅目和膜翅目共6个目的昆虫[10]。根据结构及功能的不同,可分为4类:第1类是天蚕素类(ce2 cropins),由鳞翅目和双翅目昆虫产生;第2类是昆虫防御素(insectdefensins),主要杀死革兰氏阳性菌,但不伤害红细胞;第3类是富含脯氨酸(Pro)的抗菌肽(proline richantibacteri alpeptides),已在双翅目、膜翅目、半翅目、鞘翅目计8种昆虫中分离获得,但尚未在鳞翅目中发现,主要抑制革兰氏阴性 安徽农业科学,Journal of Anhui Agri.Sci.2006,34(3):508-509,521 责任编辑　金琼琼　责任校对　金琼琼

代谢 生物氧化途径 生物固氮 肽聚糖合成

微生物的新陈代谢 代谢--生命体进行的一切化学反应。 代谢分为分解代谢和合成代谢。 分解代谢：复杂营养物分解为简单化合物（异化作用）。 合成代谢：简单小分子合成为复杂大分子（同化作用） 微生物对能量利用： 有机物化能异养菌 日光光能营养菌→通用能源A TP 还原态无机物化能自养菌 只有A TP和酰基辅酶A起偶联作用，其他高能化合物只作为?P供体。 生物氧化的形式包括：某物质与氧结合、脱氢、失去电子三种。 生物氧化过程分为：脱氢、递氢、受氢三个阶段。 生物氧化功能：产能（A TP）、产还原力[H]、产小分子中间代谢物。 生物氧化类型：呼吸、无氧呼吸和发酵。 底物（基质）脱氢的四条主要途径 以葡萄糖作为典型底物 1、EMP途径（糖酵解途径） 有氧时，与TCA连接，将丙酮酸彻底氧化成二氧化碳和水。 无氧时，丙酮酸进一步代谢成有关产物。 EMP途径总反应为： C6H12O6+2NAD++2Pi+2ADP→2CH3COCOOH（丙酮酸）+2NADH+2H+2ATP+2H2O。EMP终产物的去向： 1）有氧条件：2NADH+H+经呼吸链的氧化磷酸化反应产生6A TP； 2）无氧条件： ①丙酮酸还原成乳酸； ②酵母菌（酿酒酵母）的酒精发酵：丙酮酸脱羧为乙醛，乙醛还原为乙醇。 （3）EMP途径生理功能 ①供应A TP形式的能量和还原力（NADH2）； ②是连接其他几个重要代谢的桥梁（TCA、HMP、ED途径） ③为生物合成提供多种中间代谢物； ④通过逆向反应可进行多糖合成。 （4）生产实践意义 与乙醇、乳酸、甘油、丙酮、丁醇等的发酵产生关系密切。 2、HMP途径（己糖-磷酸途径） 产生大量NADPH2和多种重要中间代谢物。 HMP途径的总反应 6葡萄糖-6-磷酸+12NAD P++6H2O →5葡萄糖-6-磷酸+12NADPH+12H++6CO2+Pi HMP途径的三个阶段 1）葡萄糖分子经过三步反应产生核酮糖-5-磷酸和CO2； 2）核酮糖-5-磷酸同分异构化或表异构化为核糖-5-磷酸和木糖-5-磷酸； 3）无氧参与条件下，几种戊糖发生碳架重排，产生己糖磷酸和丙糖磷酸。 HMP途径在微生物生命活动中的重要意义 ①供应合成原料提供戊糖-P、赤藓糖-P； ②产还原力：产生12NADPH2；

肽聚糖识别蛋白PGRP-SC在家蝇肠道免疫中的功能分析

目录 目 录 摘要................................................................................................................................................. I ABSTRACT ................................................................................................................................... III 第一章文献综述 (1) 1.1昆虫先天免疫概况 (1) 1.2肽聚糖识别蛋白 (3) 1.2.1肽聚糖识别蛋白概况 (3) 1.2.2 肽聚糖识别蛋白在免疫激活中的功能 (3) 1.2.3 肽聚糖识别蛋白在免疫调控中的功能 (4) 1.2.4 肽聚糖识别蛋白在活性氧合成中的作用 (6) 1.2.5 家蝇肽聚糖识别蛋白研究进展 (7) 1.3RNA干扰 (8) 1.3.1 RNAi概况 (8) 1.3.2 RNAi原理 (8) 1.3.3 RNAi在昆虫学中的应用 (8) 1.4昆虫与共生微生物 (10) 1.4.1 微生物组 (10) 1.4.2 昆虫与微生物之间的相互作用 (10) 1.5家蝇 (12) 第二章家蝇PGRP-SC基因的功能鉴定 (13) 2.1实验材料 (13) 2.1.1 家蝇饲养 (13) 2.1.2 实验试剂及仪器 (13) 2.1.3 载体和菌种 (14) 2.2实验方法 (14) 2.2.1 家蝇总RNA的提取和cDNA的合成 (14) 2.2.2构建L4440干扰载体 (14) 2.2.3 dsRNA的体外转录及显微注射 (15) 2.2.4 dsRNA诱导表达及投喂干扰 (16) 2.2.5干扰效果检测 (16) 2.2.6摄入微生物在干扰后试虫肠道内的存活情况 (16) 2.2.7干扰后幼虫肠道内H2O2含量检测 (17) 2.2.8干扰后幼虫肠道内抗菌肽表达检测 (17) 2.2.9数据统计与分析 (17) 2.3实验结果 (17) 2.3.1注射法干扰PGRP-SC基因表达的有效性检测 (17) 2.3.2 dsRNA诱导表达结果检测 (18) 2.3.3投喂法干扰PGRP-SC基因表达的有效性检测 (19) 2.3.4干扰后对家蝇幼虫肠道内pGFP-ECO的荧光检测 (20) 2.3.5 干扰后家蝇肠道内过氧化氢(H2O2)含量检测结果 (21) 2.3.6 干扰后家蝇肠道内抗菌肽基因表达检测结果 (22) V 万方数据

肽聚糖型细胞壁合成中的调节作用

肽聚糖型细胞壁合成中的调节作用 摘要：肽聚糖对于细菌的细胞壁是非常重要的，本文对细菌中细胞壁的合成过程进行了阐述，分析了肽聚糖合成细胞壁过程中具有调节作用的酶和化学物质，并对细菌抗药性做了简单分析，对指导细菌的杀灭与疾病的防止有一定的意义。 关键词：细胞壁肽聚糖合成调节抗药性 简介 肽聚糖是存在于革兰氏阳性和阴性细菌细胞壁中的一种复合糖类是构成细胞壁的主要成分之一[5]。主链是β-1,4-糖苷键连接的N-乙酰氨基葡糖和N-乙酰胞壁酸交替的杂多糖。在N-乙酰胞壁酸上接有肽链，不同糖链上的肽链交联后形成稳定的水不溶产物。在肽聚糖合成中，烯醇式丙酮酸转移酶(EPI)是调节肽聚糖合成初始阶段的关键酶[6]，抑制这个酶可以有效抑制细胞壁的合成。此外，青霉素等抗生素也存在其他的机制来抑制细胞壁的合成，溶菌酶可以特异性的识别并水解肽聚糖。 1. 肽聚糖的化学组成 肽聚糖是由若干肽聚糖单体所组成的网目状大分子，而肽聚糖单体又是由N-乙酰葡萄糖胺(G)，N一乙酰胞壁酸(M)和四肽链组成[4,5]。G和M交替排列，通过β-1，4糖苷键联接成聚糖链骨架。四肽链则是通过一个酰胺键与M相连。四肽链与M之间的连接不是一个真正的肽键，而是一个酰胺键。连接的双方，一是氨基糖，一是氨基酸。 肽聚糖具有多样性，但结构大体类似，区别在于单体的氨基酸序列以及交联方式有一定的差异，其合成所需的酶的种类基本上是差不多的。 2.肽聚糖的合成 肽聚糖在细胞周期中合成，受周期性相关蛋白及酶的调控，其生物合成可分五个阶段[4,5]。 1)UDP-GlcNAc的合成 葡萄糖经过6-磷酸葡萄糖转化为6-磷酸果糖，并由L-谷氨酰胺提供氨基形成6-磷酸葡萄糖胺．最后在UTP存在时，经焦磷酸化酶催化，生成UDP-GlcNAc 2)UDP-NAMA(N-乙酰胞壁酸)的合成 UDP-GlcNAc和磷酸烯醇丙酮醢在转移酶催化下，合成UDP-NAG-丙酮酸醚，再经还原生成UDP-NAMA。 3)UDP-NAMA五肽的合成：