蒽酮_硫酸法快速测定蔗糖的研究及应用

蒽酮法测还原糖

总糖的含量的测定（蒽酮法） 一、实验目的 掌握蒽酮比色法测定糖的原理与方法。 二、实验原理 蒽酮比色法是一个快速而简便的测定糖方法。蒽酮可以和游离的己糖或多糖中的己糖基、戊醛糖及己糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620 nm 处有最大吸收。蒽酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当样品中存有含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈红色。对于以上特定的糖类反应较稳定。 三、实验器材 1.吸管 2.试管 3.分光光度计 4.水浴锅 5.电炉 6.电子分析天平 四、实验试剂 1．蒽酮试剂：取2 g蒽酮溶于1000 ml体积分数为80 %的硫酸中，当时配制使用。 2．标准葡萄糖溶液（0.1 mg/ml）：100 mg葡萄糖溶于蒸馏水并稀释至1000 ml（可滴加几滴甲苯作防腐剂）。 3． 6 mol/l HCl溶液。

4．10 % NaOH溶液：称取10 g NaOH固体，溶于蒸馏水并稀释至100 ml。 五、实验操作 1.制作标准曲线 取干净试管7支，按下表进行操作。 表蒽酮比色法测定糖含量的标准曲线制作 2.样品的处理（见实验四） 取上述实验四的水解液，冷却后用10 % NaOH溶液中和至pH呈中性，然后用蒸馏水定容至100 ml，过滤，取滤液10 ml，用蒸馏水定容于100 ml成稀释1000倍的总糖水解液，用于糖含量的测定。 测定时取1 ml总糖水解液测定还原糖的含量（同标准曲线）。

样品中糖含量的计算： w —糖的质量分数（%）； C —从标准曲线上查出的糖质量浓度(mg/ml)； V —样品稀释后的体积（ml ）； m —样品的质量（mg ）。 ｗ＝ CV ｍ ×100%

浓硫酸与蔗糖反应的实验改进教学设计

浓硫酸与蔗糖反应的实验改进教学设计 一．教材分析 现行人教版高中化学教材化学必修一第100页,[图4-3]蔗糖与浓硫酸的反应(如图1所示) （图1） 是高中化学常见实验，这是一个非常有趣的实验。课本上对现象的描述：可以看到蔗糖逐渐变黑，体积膨胀，形成一种海绵状的炭。虽然方法简单,现象明显, 能很好地激发学生的学习兴趣。但因蔗糖与浓硫酸反应产生大量刺激性的二氧化硫等有毒气体,污染室内环境, 危害师生身心健康影响师生健康,不利于培养学生的环保意识，对激发学生的学习兴趣有一定的负面效应。为此，以绿色化学思想和优化化学实验教学为教学理念，采用密封装置，进行多次实验研究和教学实践。 二．学情分析 1.教学对象：高一学生 2.学习心理：高一学生的抽象思维能力和归纳概括能力均已初步形成，个性比较活泼，喜欢对问题进行寻根究底，敢于质疑、勇于创新。在课堂上多数厌倦教师的说教灌输，都希望老师给他们创建一个便于他们自主学习的环境，给他们发表见解和展现自己才华的机会。 3.知识的储备：学过了浓硫酸的部分特性以及本实验产生有害气体SO2的性质。 4.欠缺的能力：规范操作实验的能力 三．实验重难点 重点：浓硫酸使蔗糖碳化脱水性表现 难点：实验装置设计和实验原理分析 四．教学目标 知识与技能：1.掌握浓硫酸的脱水性与强氧化性； 2.能改进蔗糖与浓硫酸反应的实验装置； 过程与方法：1.观察蔗糖与浓硫酸的反应，提高实验观察，实验现象准确描述， 分析的能力； 2.学习用实验研究物质性质的方法，体验实验在化学学习中的作用 情感态度与价值观：1.通过观察实验，增强对化学的兴趣与求知欲望； 2.通过对实验装置的探讨，增强实验安全意识和环保意识。 五．教学方法 让学生主动探究，教师为主导，学生为主体，学生的思维为中心，使学生的学习过程更加多样化、更加高效。 教法：情景激学法、实验启发法，多媒体辅助教学法、探究 讨论法 学法：实验探究、小组观察讨论、对比归纳 辅助手段：实验，多媒体教学 六．实验设计思路和原理 1.实验设计思路：蔗糖和浓硫酸反应包括蔗糖的碳化和浓硫酸与碳的反应，为防止二氧化硫散逸在空气中，采用了密封装置，同时为检验气体产物和探究二氧化硫的性质，最终设计的实验装置如图。(如

蒽酮比色法测总糖

[1] 姚立虎,徐茜. 蒽酮比色法测食品总糖含量的简化研究[J]. 食品工业992,03:40-42. 1. 2 试剂 0. 1 mg / mL, 1 葡萄糖标准溶液:准确称取10mg 葡萄糖标准品溶于少量蒸馏水中，溶解后转移至容量瓶中，用蒸馏水定容至100 mL. 蒽酮硫酸溶液:准确称取蕙酮50 mg 于100mL 二烧杯中，加入蒸馏水25 mL, ，缓慢加入98% 质量分数）浓硫酸75 mL, ，边加边搅（于冰水浴中完成），直至蕙酮溶解，冷却至室温后使用（临用新配）。 浓盐酸、浓硫酸、NaOH ，以上试剂均为分析纯，实验用水为蒸馏水。 1. 3 方法 1. 3. 1 显色剂（蒽酮硫醇溶液）用量选择。向试管中加入0. 1 mg / mL 葡萄糖标液0. 1 mL, ，并加入蒸馏水至1m L, ，分别加入不同量的显色剂显色测定，以0. 1 mL, 蒸馏水为空 白对照。 1.3.2 显色时间选择。向10 mL 二试管中加入0. 1mg / mL 葡萄糖标液0. 1 mL 二并加入蒸馏水至1mL, ，在冰水浴中缓慢加入9 mL 显色剂摇匀，改变沸水浴时问，冷却至室温后测体系吸光度。 1.3.3 葡萄搪标准曲线的绘制。改变0. 1 mgmL 葡萄糖标准液和蒸馏水的用量，再分别加入9mL 显色剂，进行显色测定。 1.3.4 正交试验确定提取条件。采用正交试验，考查 4 个影响因素（料液比、盐酸浓度、提取时间、水解时问）对实验的影响，因素水平见表 1.

1.3.5 水溶性总搪的提取。取0. 5 g 棉花纤维于150 mL 圆底烧瓶中，加入30 mL, 蒸馏水，在沸水浴中加热60 mLn, 滤出提取液20 mL 于50 mL 烧瓶中，加 5 mol / L 盐酸 5 mL 继续在沸水浴中加热30 mLn ，冷却后，滴加一滴酚酞，用 5 mol / L, 1 的氧氧化钠中和至中性。 1. 3. 6 水溶性总搪的测定。取提取液 1 mL 于10mL 试管中，在冰水浴中缓慢加入9 mL, 蕙酮硫酸溶液摇匀，在沸水浴中加热9 mLn ，冷却后放置30min 测定吸光度。从标准曲线上查得对应的浓度并计算总糖含量。 2 结果与分析 2. 1 吸收曲线 用紫外刊一见分光光度计在500 ~700 nm 波长范围内进行光谱扫描，结果发现在625 nm 处有最大吸收，故本实验采用625 nm 为测定波长。 2. 2 显色剂用量 由图 1 可以看出，当显色剂用量为9 ml 二时吸光度最大，故实验采用显色剂用量为9 m l。

实验一、硫酸苯酚法测多糖含量

实验一 硫酸－苯酚法测多糖含量 1．目的要求 测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量 2．方法原理 糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙黄色化合物，且颜色稳定，在波长490 nm处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量呈线性关系正比，从而可以利用分光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量，本方法可用于多糖、单糖含量的测定。 3．主要实验仪器及材料 浓硫酸，苯酚，蒸馏装置，分光光度计，电子天平，坐标纸或电脑等。 ４．掌握要点 硫酸显色的安全、准确操作，单糖到多糖的转换系数。 ５．试剂配制 1）葡萄糖标准液的配制 准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg，蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液，摇匀后准确吸取10 mL该溶液，蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100 ug/mL的葡萄糖标准液。2）90%苯酚液的配制 准确移取苯酚90mL，蒸馏水定容至100 mL，即得90％苯酚液，棕色瓶中避光保存 3）6%苯酚液的配制 将90%苯酚液稀释至6%，即一体积储存液对应十四体积纯水，临用现配。 6.实验步骤表1 标准曲线的制作步骤 管号0 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 1.0 苯酚液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 浓硫酸 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 取8支干净的具塞试管按表2方法在操作，先在冰水浴中加入0.5ml的苯酚溶液，震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸，以不放热或微量放热为宜，摇匀后恒温加塞沸水放置20min,取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处（490nm）测定吸光度。以葡萄糖浓度X为横坐标（ug/mL），吸光度Y为纵坐标，从而来绘制标准曲线。用exceL软件求得回归方程 2）待测样品多糖的测定与计算 将提取得到的待测多糖用蒸馏水溶解，定容至100 mL,取溶解后的溶液，按标准曲线中的测定方法，以样液为参比液，测定溶液的吸光值，按回归方程计算待测溶液的多糖浓度，注意乘换算系数。

蒽酮-硫酸法测残糖含量

蒽酮-硫酸法测残糖含量 （1）原理 糖类与浓硫酸脱水生成糖醛或其衍生物，可与蒽酮试剂缩合产生颜色物质，反应后溶液呈蓝绿色，于620nm处有最大吸收，显色与多糖含量有线性关系。 （2）试剂 ①蒽酮试剂。溶解0.2g蒽酮于浓硫酸（A.R.95.5%）100ml中，当日配制试用。具体实验 过程中，应视样品分数多少来准备蒽酮试剂的配置量。比如实测样品有50份，为了保证结果的可靠性，安排个份样品试验重复数为3。因为每个试验点实测需要4ml蒽酮试剂，所以至少应配置的体积为4×3×50＝600ml。此时还应考虑预实验和实验差错所消耗蒽酮试剂量。 ②标准糖试剂。葡聚糖溶液（可加数滴甲苯防腐） （3）操作及其注意事项 分别取0.1g/l的葡萄糖溶液0.05，0.10，0.20,0.30,0.40,0.60,0.80ml，用蒸馏水补到1.00ml，分别加入4.00ml蒽酮试剂，迅速进入冰水浴中冷却，各管加完后一起浸入沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。自水浴重新煮沸开始计时，准确煮沸10min，冷却后进行比色。以光密度为纵坐标，糖的含量微克数为横坐标，制作标准曲线。或使用计算器进行一元回归得出计算式，以便于计算使用。 （4）样品含量测定 取糖浓度为50μg/ml左右的样品溶液1.00ml，一式3份分别置于不同试管中，对照加入1.0ml 蒸馏水，然后给各管加入蒽酮试剂，以标准曲线方法进行比色测定。根据标准曲线和样品浓度计算含量。 色氨酸含量较高的蛋白质对显色反应有一定的干扰。此外，试管在加入蒽酮试剂过程中，移液管尖端在试管中所停留的高度对于加入蒽酮试剂的速度影响较大，而且对反应产生颜色的深浅都会产生一定的影响。因此，实验操作应该注意。

植物组织中可溶性糖含量的测定(蒽酮法)

Ⅳ、植物组织中可溶性糖含量的测定（蒽酮法） 一、目的 掌握蒽酮法测定糖的原理和技术。 二、原理 糖类（包括单糖、双糖、寡糖）在浓硫酸存在下，脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，然后蒽酮与糠醛或羟甲基糠醛经脱水缩合，生成蓝绿色的糠醛衍生物，颜色深浅与糖浓度成正相关。其反应式如下： 显色反应与反应温度、加热时间、反应系统中水和硫酸比例有关。本实验通过控制反应系统中水和硫酸比例，利用硫酸与水发生水合作用释放的热能，使反应系统自行升温而达到显色效果免去外加热步骤。 蒽酮法具有很高灵敏度，适用于糖的微量测定，且试剂简单，操作简便，因而得到普遍应用。 三、材料、仪器设备及试剂 1.材料：烘干材料粉末（过筛100目）或剪碎混匀鲜样品。 2.仪器设备: 分光光度计；电子分析天平；水浴锅；100ml容量瓶；试管；漏斗；剪刀；移液管；洗耳球等。 3.试剂及配制： 蒽酮试剂：称取蒽酮200mg溶于100ml浓硫酸中。该试剂不能久贮，宜用前配制。 100μg·ml－1 蔗糖标准母液：准确称取蔗糖100mg于烧杯加少量水溶解后，洗入 100ml容量瓶中定容至刻度。 四、实验步骤 1.蔗糖标准曲线制作 1.1取6支试管，编号，按下表配制每管含量为0～100μg蔗糖标准液 加入表中试剂后，向各管沿管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml，并立即摇动使混合均匀，置试管架上室温下显色，冷却后倒入比色杯，以0号管作空白对照，在620nm波长处，以多点校准总量法，制作标准曲线。 2.样品提取 称取干样品粉末100mg或剪碎混匀的鲜样品1g,放入试管中，加入蒸馏水10ml，置于沸水浴中提取20min，冷却后过滤入100ml容量瓶中，以热水冲洗残渣2～3次，一并滤入容量瓶中，待冷至室温，定容至刻度，即为样品待测液。 3.糖含量测定 吸取待测液0.2ml（含糖量30～80μg）,加入试管中，再加蒸馏水2.3ml，摇匀。随后沿试管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml,立刻摇动混合均匀，置于试管架上显色，冷却至室温后，以空白管作对照，在620nm波长处，按多点校准定量法测定待测管中提取液糖含量。 五、结果计算

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量 一. 实验原理 糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色。该物质在620 nm处有最大吸收，在150 μg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。该法有很高的灵敏度，糖含量在30 μg左右就能进行测定。 二. 试剂器材 蒽酮试剂：精密称取0.1g蒽酮，加80%浓H2SO4100 mL使溶解，摇匀。当日配制使用； 葡萄糖标准液：将无水葡萄糖置于五氧化二磷干燥器中，12hr后精密称取100mg，用蒸馏水定容至100ml； 其他器材：分析天平、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等。 三. 操作步骤 葡萄糖标准曲线的制作 取7支具塞试管，按下表数据精密配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液，每个浓度做2-3个重复： 管号0 1 2 3 4 5 6 标准葡萄糖溶液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 蒸馏水/mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min。 在625nm波长下以第1管为空白，迅速测定其余各管吸光值。

以标准葡萄糖含量( g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。 样品的测定 将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2-3个重复。 在625nm波长下迅速测定各管吸光值。根据葡萄糖含量的标准曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量。 四. 注意事项 该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。 在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值，但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，否则会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。 不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时则可避免此种误差。

总糖和还原糖的测定——斐林氏法

总糖和还原糖测定方法较多，如3，5—二硝基水杨酸法、碱性铜试剂法、蒽酮比色法、斐林氏法等。这里只介绍斐林氏法。 一、目的 学习掌握生产实践中常用的快速定糖方法。 二、原理 还原糖在碱性溶液中能将Ag+，Hg+，Cu2+，Fe（CN）3-等金属离子还原，而糖本身则氧化成各种羟酸，利用这一特性可以对还原糖进行定量测定。本实验采用斐林试剂热滴定法，氧化剂是斐林试剂，它是由甲乙两种溶液组成，甲液中含有硫酸铜、次甲基蓝；乙液中含有氢氧化钠、酒石酸钾钠和亚铁氰化钾（黄血盐）。当甲乙两液混合时，硫酸铜和氢氧化钠作用形成氢氧化铜沉淀，由于溶液中存在酒石酸钾钠，它和氢氧化铜形成了可溶性络合物。 酒石酸络铜（Ⅱ）钾钠盐在与还原糖共热时，二价铜离子即被还原成一价的氧化亚铜红色沉淀。 此氧化亚铜与试剂中亚铁氰化钾反应生成可溶性的亚铁氰酸络铜（Ⅰ）钾盐。 Cu2O + K4Fe(CN)6 + 3 H2O →K2Cu2Fe(CN)6 + 2 KOH + 2 H2O 亚铁氰化钾亚铁氰酸络铜（Ⅰ）钾盐 斐林试剂中二价铜的还原力比次甲基蓝强，因此所滴入的标准葡萄糖溶液首先使二价铜还原，只有当二价铜被还原完毕后，才能使次甲基蓝（甲烯蓝）还原为无色，测定中以此作为滴定终点。 在测定时先做一对照管（不加样品），用标准葡萄糖滴定求知一定体积斐林试剂中二价铜和次甲基蓝的量，即测定对照管消耗的标准葡萄糖量（A）。再做样品管，样品中还原糖消耗斐林试剂中一部分二价铜，剩余的量再用标准葡萄糖来滴定，即样品消耗的标准葡萄糖量（B）。将（A）减去（B）就可求得样品中还原糖量。 三、器材及试剂： 1．器材： ①山芋粉②广范试纸pH1～12。 ③吸管5毫升（×4），10毫升（×2）④容量瓶100毫升（×3）

蒽酮法

(二)主要试剂 1.蒽酮一硫酸溶液:0.4克蒽酮试剂溶于100毫升88%硫酸(约84份体积97%浓硫酸与16份体积水混合)中.密封在磨口瓶中.溶解后置于冰箱或冰水中冷却至5℃备用.此液当天配制. 2.标准糖贮备液:精确称取250.0毫克干燥的分析纯的糖在250毫升容量瓶中配成1.00毫克/毫升浓度溶液.葡萄糖、果糖和蔗糖用75%乙醇为溶剂.可溶性淀粉溶于适量沸水后以水为溶剂.淀粉仅能贮一周，其它密封可贮1-2月. 3.标准糖工作液:用移液管吸取10.00毫升贮备液于100毫升容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀.此液含糖为100微克/毫升. (三)工作曲线的绘制 用2毫升移液管吸取标准糖工作液各一系列(葡萄糖不多于180微克、果糖不多于80微克、蔗糖不多于100微克、淀粉不多于150微克)于干洁试管(16X180毫米)中.用蒸馏水调整各支试管总体积为2.00毫升.从滴定管中加入蒽酮一硫酸溶液6.0毫升.并从蒽酮加入起计时，摇匀10秒钟后置沸水浴中加热3.5分钟，取出立即在冷水或冰水中摇动迅速冷却以停止反应.用水2.00毫升重复上述操作，作为空白溶液.在72型分光光度计上用640毫微米波长测定它们的吸光度.并绘制工作曲线如图 1.另取一系列果糖标准溶液如上述操作，在50℃水浴中显色3分钟，用以核对沸水浴中果糖显色的吸光度.力求果糖50℃与沸水浴显色吸光度完全一致.否则应校正显色条件. (四)果蔬中糖的测定 1.样品的处理:称取有代表性的新鲜果蔬样品10.00克(W)(糖含量超过10%者宜取5.00克)于研钵中，加少量75%乙醇研磨成浆.通过漏斗移入100毫升(V1)容量瓶中.用75%乙醇冲洗研钵、玻棒、漏斗.洗液一并归入容量瓶中，使其总体积在80毫升左右.置80℃水浴中提取糖份15分钟.取出冷却至室温，用75%乙醇稀释至刻度.摇匀.通过干燥滤纸过滤到一干燥试管中.此为可溶性糖样液 A. 2.蔗糖的测定:精确吸取样液A1.00毫升(V2)于一个100毫升(V3)容量瓶中，加水9毫升.从滴定管中加入2N（11.2g/100ml）的KOH 溶液2.0毫升.置沸水浴中煮沸5分钟.取出尽速冷至室温.用水稀释至刻度，摇匀.此为蔗糖测定液B.精确吸取B液1.00毫升(V4)

实验8-植物组织中可溶性糖含量的测定(蒽酮比色法)

实验方案 一、实验目的 通过实验，掌握测定萝卜品质的方法 （一）萝卜外部形态的测定 1、实验材料 取鲜样3个∕小区 直尺、蒸馏水、笔、记录本、吸水纸 2、实验方法 ．用自来水将各组萝卜洗净后，再用蒸馏水洗涤，擦干表面水分．每个小区取3个重复，用电子天平称量每株的鲜重，用直尺测量植株的茎长、茎粗、叶长，取平均值作为指标值 实验(二) 植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法） 一、实验目的 了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理；掌握分光光度计的使用二、实验原理 糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。 蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。上述特定的糖类物质，反应较稳定。该法特点：灵敏度高，测定量少，快速方便。 三、材料、仪器及试剂

1.材料：植物种子、白菜叶、柑桔 2.仪器：分光光度计；恒温水箱；20ml具塞刻度试管（3支）漏斗；100ml容量瓶；刻度试管；试管架；剪刀；研钵 3.试剂 （1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。 （2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏； （3）浓硫酸 四、实验方法 1.葡萄糖标准曲线的制作 取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml 浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标 2. 称取1克白菜叶，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。置沸水浴中加盖煮沸10分钟，冷却后过滤，滤液收集于100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀备用。 3.糖含量测定 用移液管吸收1ml提取液于20ml具塞刻度试管中，加1ml水和0.5ml蒽酮试剂。再缓慢加入5ml浓H2SO4（注意：浓硫酸遇水会产生大量的热！），盖上试管塞后，轻轻摇匀，再置沸水浴中10分钟（比色空白用2ml蒸馏水与0.5ml蒽酮试剂混合，并一同于沸水浴保温10分钟）。冷却至室温后，在波长620nm下比色，记录光密度值。查标准曲线上得知对应的葡萄糖含量（μg）。 五、结果计算 样品含糖量（g/100g鲜重）=查表所得糖含量（μg）×稀释倍数×100/样品重（g）×106 六、注意事项

蒽酮法测定可溶性糖方法

蒽酮法测定可溶性糖方法 （一) 实验原理 糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量。糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区吸收峰为630 nm，故在此波长下进行比色。 （二）材料、仪器设备及设计 1 材料 12种源砂生槐叶片，2种处理，4个重复，共96个样。 2 仪器设备 分光光度计，恒温水浴锅，20 ml刻度试管，5 ml和1 ml刻度吸管，5 ml和1 ml的移液枪，记号笔，吸水纸适量。 3 试剂 （1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50 ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，如有结晶析出，可微热溶解。 （2）100 ug/L蔗糖溶液： 1%蔗糖标准液：精确称取蔗糖1.000 g，加入少量水溶解，移入100 ml容量瓶，加0.5 ml 浓硫酸，定容至刻度线。 100 ug/L蔗糖溶液的配制：用移液枪精确吸取1%蔗糖标准液1 ml，加入到100 ml容量瓶，加蒸馏水定容。 （3）浓硫酸（比重1.84） （三）实验步骤 1．标准曲线的制作： 按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5 ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5 ml 浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1min取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。 管号 试剂 0 1，2 3,4 5,6 7,8 9,10 100μg.1-1蔗糖 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 /ml 水/ml 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1 蔗糖量/μg 0 20 40 60 80 100

实验二十一可溶性总糖的测定(蒽酮比色法)

实验二十一可溶性总糖的测定（蒽酮比色法） 一、目的 掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。 二、原理强酸可使糖类脱水生成糠醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620 nm 处有最大吸收. 在10 -100ug 范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。 这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30ug 左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。 三、仪器、试剂和材料 1 . 仪器 （1）分光光度计 （2 ）电子顶载天平 （3 ）三角瓶：50m1 X 1 （4 ）大试管：9 支 （5）试管架，试管夹 （6 ）漏斗，漏斗架 （7 ）容量瓶：50rnl X 2 （8 ）刻度吸管：1m1X3 ，2m1X1 ，5mlX1 （9 ）水浴锅 2 . 试剂 （1）葡萄糖标准液：l00ug/ml （2 ）浓硫酸 （3）蒽酮试剂:0.2g 蒽酮溶于100 ml 浓H2SO4 中当日配制使用。 3 . 材料小麦分蘖节。 四、操作步骤 1. 葡萄糖标准曲线的制作

取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液: 在每支试管中立即加入蒽酮试剂 4.0m1 ，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸lOmin 取出，用流水冷却，室温放置10min ，在620 nm波长下比色。以标准葡萄糖含量（ug）作横坐标，以吸光值作纵坐标，作岀标准曲线。 2. 植物样品中可溶性糖的提取 将小麦分蘖节剪碎至2mm以下，准确称取lg,放入50m1三角瓶中，加沸水25m1，在水浴中加盖煮沸10min，冷却后过滤，滤液收集在50m1容量瓶中，定容至刻度。吸取提取液2m1，置另一50m1容量瓶 中，以蒸馏水稀释定容，摇匀测定。 3 .测定 吸取lml已稀释的提取液于大试管中，加入 4.0ml蒽酮试剂，以下操作同标准曲线制作。比色波长 620nm，记录吸光度，在标准曲线上查出葡萄糖的含量（ug ）。 查表所得糖含量（ug ）乂稀释倍数 五、结果处理 查表所得糖含量Cug）乂稀释倍数心 植物样品含糖壘（%）=： 样品重（町xm% X10° 六、注意事项 1 .该显色反应非常灵敏，溶液中切勿混入纸屑及尘埃。 2 . H 2 SO 4 要用高纯度的。 3. 不同糖类与蒽酮的显色有差异，稳定性也不同。加热、比色时间应严格掌握。 七、思考题 1.用水提取的糖类有哪些? 2 . 制作标准曲线时应注意哪些问题？

浓硫酸与碳的反应

设计碳与浓硫酸的反应实验 鲁教版化学必修1第三章第三节《硫的转化》中，提到当硫元素处于最高化合价态时，含这种价态硫元素的物质可能具有氧化性。 浓硫酸是一种氧化剂，能够与许多物质发生氧化还原反应。例如。在加热时，浓硫酸可与木炭发生下列化学反应： C + 2H2SO4==CO2↑ + 2SO2 ↑+ 2H2O 碳与浓硫酸的反应，是在学习浓硫酸强氧化性时涉及到的一个反应，老师只涉及了一个铜与浓硫酸反应的演示实验，目的是加深学生对浓硫酸强氧化性的理解。而碳与浓硫酸的反应，只是借助蔗糖碳化的实验现象分析推测得出的一个结论，并没有实验验证其产物。为了验证反应产物，设计了实验。 实验目的：理解浓硫酸的强氧化性，掌握碳与浓硫酸反应的实质， 体验化学知识的获得过程，学会分析产生异常现象的原因药品：木炭、浓硫酸、酸性高锰酸钾溶液、品红、澄清石灰水、无水硫酸铜 用品：铁架台、试管、导管、锥形瓶、圆底烧瓶、酒精灯等 实验装置如图所示： 如图所示，A、为发生装置， B、用无水硫酸铜检验水的存在 C、用少量品红溶液检验二氧化硫的存在 D、用较多浓的高锰酸钾除去二氧化硫 E、再用少量品红溶液检验二氧化硫已经除尽 F、最后用澄清石灰水检验二氧化碳的存在 由此可见，整个实验过程，实验现象明显，思路清晰，所得产物明了可见。对浓硫酸的氧化性有进一步的认识。

实验习题： 1、 为了验证木炭可被浓硫酸氧化成二氧化碳，选用下图所示仪器 （内含物质）组装成实验装置如下： 已知：SO 2可以与酸性KMnO 4溶液迅速反应，并使之褪色。 （1） 如按气流由左向右流向，连接上述装置的正确顺序是（填各接口字母）： _____接_____,_______接_______,________接_______； （2） 仪器乙、丙应有怎样的实验现象才表明已检查出CO 2？乙中____________， 丙中__________________； （3） 丁中酸性KMnO 4溶液的作用是_____________________； （4） 写出甲中反应的化学方程式________________________。 C D E F 甲 丙 丁

粗多糖检测方法(蒽酮比色法)

粗多糖检测方法（蒽酮比色法）： 1 主要仪器 （1）离心机（ 4000r/min ）。 （2）离心瓶容量 100ml 或具盖 10ml 离心管。 （3）分光光度计。 （4）水浴锅。 2 试剂 实验用水为双蒸水；所用试剂为分析纯级。 （1）葡萄糖标准液：准确称取I.OOOOg经过98?100 C干燥至恒重的分析纯葡萄糖，加水溶解后以水稀释至 1000ml ，此溶液 1ml 含 1mg 葡萄糖，用前稀 释10倍（0.1mg/ml ），现用现配。 （2） 0.2%蒽酮硫酸溶液：称取0.2g蒽酮置于烧杯中，缓慢加入100ml浓硫酸（分析纯），溶解后呈黄色透明溶液，现用现配。 3 测定步骤 （1）样品处理：准确称取样品 1?2g 按上法用乙醇沉淀多糖，然后用热水分次溶解沉淀并稀释定容至 100?250ml （使样液含糖量在 0.02? 0.05mg/ml 间）。过滤，弃去初滤液即为待测液。 （2）标准曲线的绘制：准确吸取葡萄糖标准液（ 0.1mg/ml ） 0、0.1、0.2、 0.4、0.6、0.8、1.0ml 于 10ml 具塞比色管中，加水至 1.0ml ，加入蒽酮 试剂 5ml 充分混匀，在沸水浴中加热 10min ，取出在流水中冷却 20min 后，在 620nm 波长下，以试剂空白调零，测定各管的吸收值绘制标准曲(3) 样品测定：准确吸取样品待测液10ml (含糖20?80⑷)按标准曲线绘 制步骤于 620nm 波长下测定吸光度值并求出样品含糖量。

4 结果计算： m1 X= --------------- x F x n x 100% m x 1000 式中 X—样品中粗多糖含量(以葡萄糖计)(%)； m1 —由标准曲线查得样品液含糖质量( mg )； m —样品质量( g )； n —稀释倍数； F—换算因子。 换算因子的测定：准确称取被测物质的纯品 20mg 置 100ml 容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，吸取 0.2 ?0.4ml 于 10ml 具塞比色管中，加水至 1.0ml 按上法测定。从标准曲线中查出供试液中相当于标准葡萄糖的质量 (mg ) m F = ————— m1x n 式中 m —多糖纯品的质量( mg )； m1 —多糖纯品供试液中相当于标准葡萄糖的质量( mg )； n —供试液的稀释倍数；

蒽酮比色法快速测定葡萄糖

蒽酮比色法快速测定葡萄糖、果糖、蔗糖及淀粉含量 蒽酮试剂与碳水化合物生成一种蓝绿色物质,是糖类特有的反应。不经分离而进行系统测定葡萄糖、果糖、蔗糖及淀粉含量基于以下三点:第一在室温下葡萄糖与蒽酮试剂不显色,此温度下果糖显色5min的吸收值与果糖在100℃显色5min吸收值几乎相等。第二稀碱与糖溶液共热时,可破坏葡萄糖、果糖,而蔗糖不被破坏。第三淀粉经酸水解后与蒽酮试剂显色。 (二)试剂 (1)蒽酮试剂:称0.4g蒽酮溶于100ml88%硫酸中(约84份体积97%浓硫酸与16份体积水混合,密封在磨口瓶中)。溶解后置水中冷却备用。此液当天配制。 (2)2mol/L氢氧化钾溶液。 (3)3mol/L盐酸溶液 (5)标准糖贮备液:精确称取250mg干燥的分析纯的糖(葡萄糖、果糖、蔗糖),分另移至250ml 容量瓶中,配成1mg/ml浓度溶液。溶剂用蒸馏水和75%乙醇均可。 (6)标准糖工作液:用移液管吸取10ml标准糖贮备液于100ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度、摇匀。此液含糖为100μg/ml。 (三)测定步骤 1.工作曲线绘制用2ml吸量管按表取标准糖工作液(葡萄糖不多于160μg,果糖不多于80μg,蔗糖不多于100μg)于干洁的试管(16×180mm)中,用蒸馏水分别调整其体积为 2.0ml。从滴定管中加入蒽酮试剂6.0ml。摇匀并立即置于沸水浴中加热5min,取出立即在冷水中迅速冷却(不断摇动)。用 2.0ml蒸馏水重复上述操作,作为空白溶液。在分光光度计中,以640nm

2.样品中糖的提取谷物或植株体烘干、粉碎。精确称取烘干样品(谷物0.2g、植株体0.1g 左右)放入研钵中,加加5ml蒸馏水磨至均匀,以5ml蒸馏水将均匀物全部移入离心管中,离心(3000r/min)5min。离心液倒入干净试管中。再向盛有沉淀的离心管加5ml蒸馏水并搅拌沉淀物,离心(重复二次),合并离心液于50ml容量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度。此液用干葡萄糖、果糖及蔗糖的测定(A液)。 以10ml3mol/L盐酸将离心管中沉淀物全部转移到容量瓶中,盖上玻塞,放在沸水浴中煮沸40～45min,取出冷却至室温,加3mol/L氢氧化钠溶液10ml中和其酸性,以蒸馏水定容至50ml,从中取2ml溶液,加蒸馏水至50ml,混匀。此液用用淀粉的测定(B液)。 3.蔗糖的测定精确吸取样品液(A)10ml,加入2mol/L氢氧化钾溶液2ml,置沸水浴中煮沸10min。取出迅速冷至室温,加蒸馏水稀释至50ml,摇匀。精确吸取稀释液2ml至一干净试管中,按标准曲线绘制步骤加蒽酮试剂显色测定,得光密度值E蔗。 4.蔗糖的结果计算 从蔗糖工作曲线求得蔗糖量为S(μg),按下式计算样品中蔗糖百分含量。 式中: S──待测样品液中蔗糖量(μg) W──样品称重(g) V1──用于测定的样品稀释液的体积(ml) V2──用于分析的样品稀释液总体积(ml) V3──样品液总体积(ml) V4──用于氢氧化钾水解的样品液体积(ml) 5.葡萄糖、果糖的测定取样品液(A)10ml加蒸馏水至50ml,往两支干净试管中分别加入2ml 样品稀释液其中一支加蒽酮试剂6ml,摇匀,在沸水浴中煮沸5分钟,取出立即浸入自来水冷却至室温,在640nm下测定光密度E100。另一支试管,加蒽酮试剂6ml,摇匀,在常温下显色5min,同上述操作测定光密度E常温。由E常温查果糖工作曲线求得样品液果糖量为F(μg),按下式计算样品中果糖、葡萄糖含量。 6.果糖、葡萄糖的结果计算 由E100-E常温查葡萄糖工作曲线求得样品液中葡萄糖量为G(μg),按下式算葡萄糖百分含量。

总糖含量的测定

实验二总糖含量的测定 一、目的： 1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。 2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。 二、原理： 糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮 (C 14H 10 O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。该物质在620 nm处有最大吸 收，在150 μg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。 这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 μg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。 三、仪器、试剂和材料 1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等 2.试剂： (1)葡萄糖标准液：l00 μg/ml (2)浓硫酸 (3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H 2SO 4 中。当日配制使用。 3.材料：淀粉 四、操作步骤 1.葡萄糖标准曲线的制作 取7支试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液： 管号 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液（ml）0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 蒸馏水（ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2 葡萄糖含量（μg）0 10 20 30 40 60 80 在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0 min 取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管 吸光值。以标准葡萄糖含量（μg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。

2.植物样品中总糖的提取： 精确称取0.5g，置于50 ml三角瓶中，加水15 m1，盐酸10ml，沸水浴20min，定容至100ml，得提取液。取10ml滤液定容至100ml 3.测定 吸取1 ml已稀释的提取液于试管中，加入4.O ml蒽酮试剂，平行三份；空 平均值在标白管以等量蒸馏水取代提取液。以下操作同标准曲线制作。根据A 620 准曲线上查出葡萄糖的含量（μg）。 五、结果处理 C ×V总× D 样品含糖量（%）= ─────────────×100 W ×V测×106 其中：C——在标准曲线上查出的糖含量（μg）， V总——提取液总体积（ml）， V测——测定时取用体积（ml）， D——稀释倍数， W——样品重量（g）， 106——样品重量单位由g换算成μg的倍数 六、注意事项： 该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值，但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，否则会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时则可避免此种误差。 七、思考题： 1.在从山芋粉中提取总糖时，加入盐酸的目的是什么？ 2.简述蒽酮比色法测定植物组织中总糖含量的原理。

实验一 硫酸苯酚法测多糖含量

实验一硫酸－苯酚法测多糖含量 1．目的要求 2．测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量3．2．方法原理 4．糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙黄色化合物，且颜色稳定，在波长490 nm处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量呈线性关系正比，从而可以利用分光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量，本方法可用于多糖、单糖含量的测定。 5．3．主要实验仪器及材料 6．浓硫酸，苯酚，蒸馏装置，分光光度计，电子天平，坐标纸或电脑等。7．４．掌握要点 8．硫酸显色的安全、准确操作，单糖到多糖的转换系数。 9．５．试剂配制 10．1）葡萄糖标准液的配制

11．准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg，蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液，摇匀后准确吸取10 mL该溶液，蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100 ug/mL的葡萄糖标准液。 12．2）90%苯酚液的配制 13．准确移取苯酚90mL，蒸馏水定容至100 mL，即得90％苯酚液，棕色瓶中避光保存 3）6%苯酚液的配制 将90%苯酚液稀释至6%，即一体积储存液对应十四体积纯水，临用现配。 6.实验步骤表1 标准曲线的制作步骤 7.管号0 1 2 3 4 5 6 7 8.葡萄糖 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 1.0 9.苯酚液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 10.浓硫酸 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 11.取8支干净的具塞试管按表2方法在操作，先在冰水浴中加入0.5ml 的苯酚溶液，震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸，以不放热或微量放热为宜，摇匀后恒温加塞沸水放置20min,取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处（490nm）测定吸光度。以葡萄糖浓度X为横坐标（ug/mL），吸光度Y为纵坐标，从而来绘制标准曲线。用exceL软件求得回归方程12.2）待测样品多糖的测定与计算

蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶和性糖的含量

实验九蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶和性糖的含量 一、实验目的 掌握蒽酮法测定总糖和可溶性糖含量的原理和方法 二、实验原理 蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。酸可使糖类（如已糖基，戊醛糖及已糖醛酸）脱水生成糠醛，生成的糠醛或烃甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620nm处有最大光吸收值。在10~100ug范围内其他颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当存在含有较多色氨酸蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。而对于上述特定的糖类物质，反映较稳定。多糖和寡糖可用酸水解成单塘和蒽酮试剂反应，因此利用蒽酮法可测组织中总糖和可溶性糖。这一种方法具有很高的灵敏度，糖含量在30ug左右时就能侧进行测定，所以可作为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。 三、仪器，试剂和材料 1、仪器 （1）分光光度计； (6)漏斗，漏斗架个6个 （2）电子天平；（7）容量瓶：50ml2个； （3）三角瓶：50ml2个（8）移液管； （4）刻度具塞试管；10ml13支；（9）水浴锅。 （5）试管架，试管夹各2个； 2、试剂 （1）葡萄糖标准液：100ug/ml；（2）浓硫酸； （2）蒽酮试剂：0.2g蒽酮，溶于100ml浓流酸中，现当日配制使用。 3、材料 小麦幼苗分蕖节或其植物的幼嫩组织（红薯）。 四、操作步骤 1、葡萄糖标准曲线的制作 取7支试管，按下表配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液； 管号 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液/mL 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 蒸馏水/mL 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.7 0.8 葡萄糖含量/ug 0 10 20 30 40 50 60 在每支试管中，加入蒽酮试剂4.0ml，迅速浸入冰水浴中冷却。各加完后一起浸入沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸10min取出，用流水冷却，室温放置10min，在620nm波长下比色。以标准葡萄糖含量（ug）做横坐标，以吸光值作纵坐标，做出标准曲线。 2、植物样品中可溶性糖的提取

硫酸苯酚法测多糖含量

硫酸－苯酚法测多糖含量 1．目的要求 测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量，如1型。 2．方法原理 糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙黄色化合物，且颜色稳定，在波长490 nm处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量呈线性关系正比，从而可以利用分光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量，本方法可用于多糖、单糖含量的测定。 3．主要实验仪器及材料 浓硫酸，苯酚，蒸馏装置，分光光度计，电子天平，坐标纸或电脑等。 ４．掌握要点 硫酸显色的安全、准确操作，单糖到多糖的转换系数。 ５．试剂配制 1）葡萄糖标准液的配制 准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg，蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液，摇匀后准确吸取10 mL该溶液，用蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100 ug/mL的葡萄糖标准液。2）90%苯酚液的配制 准确移取苯酚90mL，蒸馏水定容至100 mL，即得90％苯酚液，棕色瓶中避光保存可达半年。 3）6%苯酚液的配制 将90%苯酚液稀释至6%，即一体积储存液对应十四体积纯水，临用现配。 6. 实验步骤 表1 标准曲线的制作步骤 管号0 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 1.0 苯酚液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 浓硫酸 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 取8支干净的具塞试管按表2方法在操作，先在冰水浴中加入0.5ml的苯酚溶液，震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸，以不放热或微量放热为宜，摇匀后恒温加塞沸水放置20min,取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处（490nm）测定吸光度。以葡萄糖浓度X为横坐标（ug/mL），吸光度Y为纵坐标，从而来绘制标准曲线。用exceL软件求得回归方程 2）待测样品多糖的测定与计算 将提取得到的待测多糖用蒸馏水溶解，定容至100 mL,取溶解后的溶液，按标准曲线中的测定方法，以样液为参比液，测定溶液的吸光值，按回归方程计算待测溶液的多糖浓度，注意