酶联免疫试验研究与应用
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1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者Van Weerman 和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法,即酶联免疫吸附测定法(E n z y m e -L i n k e d ImmunoSorbent Assay,ELISA)[1]. 由于ELISA免疫技术具有特异性高、灵敏度强、操作简便以及技术可靠,已成为目前分析化学领域中的前沿课题并在临床医学、生物制药、食品科学、农牧渔业等领域应用越来越多。本文则对ELISA法的原理及在各领域的应用进行综述,希望对ELISA法的发展应用起到一定的作用。
1 ELISA 法的基本原理
由某种固相载体吸附抗原或抗体,并保持其免疫活性。将抗原或抗体再与某种酶连接成酶标抗原或抗体。在测定时,把受检标本(测定的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,最后结合在固相载体上的酶的量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应底物后,底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型,出现颜色反应。可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应来进行定性分析,而颜色反应的深浅又与标本中相应抗体或抗原的量呈正
比。
[2]2 ELISA 法应用
2.1 临床医学
慢性乙型肝炎为世界性医学难题之一,具有起病缓慢,感染率高的特点,我国为HBV感染的主要流行病区,对于此病目前尚无治疗特效药。HBsAg血清中HBsAg阳性是HBV感染的标志,但由于HBsAg常与HBV同时存在,通常认为是传染性标志之一。HBV标志物检测是临床诊断乙肝感染的重要依据。目前检测HBV抗体较为简便、快速的检测方法就是酶联免疫吸附试验。通过使用ELISA法来定性判断阴性或者阳性。
2.2 生物制药
狂犬病病毒抗原含量是狂犬病疫苗的主要质量指标之一。国内学者在人用狂犬病疫苗方面也进行了ELISA探索。王亚军等采用多克隆抗体建立了加薪ELISA法检测狂犬病疫苗效价,作者列出7批疫苗纯化后原液的NIH和ELISA两种方法检测值具有高度一致性,认为可作为狂犬病疫苗效价的初步检测手段,但尚无针对成品的检测数据。朱蓉等则通过用单克隆抗体制备双抗体夹心ELISA法快速检测狂犬病疫苗中狂犬病毒糖蛋白(G)含量,将狂犬病疫苗的检定时间由28天缩短至2个工作日,希望为此缩短疫苗库存待检时间,提高疫苗的生产和销售效率,并最终替代NIH动物法。
2.3 食品科学
Bonwick 等[3]在2003年用ELISA法完成了金黄色葡萄球菌菌体细胞中蛋白A的检测,整个过程在18h内完成,完全缩短了检测时
间;Yu 等应用ELISA间接法测定了VBNC大肠杆菌O157:H7,同时揭示了ELISA 在病原微生物检测中的应用前景。2008 年,印度Kumar等[4]提出了用浓缩-ELISA 法检测食品和液态样物质中的伤寒沙门氏菌。结果显示,相比竞争性ELISA 法的检测限104～105CFU/ml,浓缩-ELISA 法可以检测到102CFU/ml的伤寒沙门氏菌[5]。
2.4 农牧渔业
对于畜牧业养殖者来说,所养动物的健康直接关系着他们财产的多少,尤其是对于一些动物的传染性疾病,例如最为常见的动物感染性口蹄疫疾病,而非结构蛋白(NSP)3ABC 抗体被认为是检测已接种动物感染口蹄疫疾病的最可靠指标,于是Lu等研发出纯化的组氨酸标记的3ABC 融合蛋白作为抗原,检测不同动物的口蹄疫(NSP)3ABC 抗体;最近,许多ELISA应用在检验猪非结构蛋白(NSP)的抗体,其都具有高度的敏感性和特异性,也报道过可适合用于大规模根除口蹄疫的项目[6]。
3 总结
目前,虽然EL ISA被广泛的应用于各个领域,可因其存在一定的局限性,而不能完全取代传统检测方法。但随着EL ISA 分析技术自身优势和在方法上的不断完善 ,尤其是随着亲和力强、特异性高的标准化抗体生产技术的突破和免疫传感器技术的日臻完善 ,EL ISA检测技术将会以其有效快速的检测特点应用于各个领域。参考文献
[1]ENGVALLE,PERLMANN P.Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) quantitative assay of immuno-globulin G[J].Immunochemistry,1971,8(9): 871-874.
[2]李华林.酶联免疫吸附试验的原理、操作方法及注意事项[J].卫生防疫,2011,6(3):182-183.
[3]BONWICK G,SMITH C,WALLIAMS J.Immunossays for food safetyand quality assurance[J].Food Science and Technology, 2003,17(1):32-34.
[4]KUMAR S, BALAKRISHNA K, BATRA H V. Enrichment-ELISA fordetection of salmonella typhi from food and water samples [J]. Biomedicaland Environmental Sciences,2008,21(2):137-143.[5]王守法.酶联免疫吸附试验在食品检测中的应用[J].食品科学,2009,30(23):489-492.
[6]ChenSP,EllisTM,LeeMC,https://www.wendangku.net/doc/8211876730.html,parisonofsensitivityandspecifi cityinthreecommercialfoot-and-mouthdiseasevirusnon-structur alproteinELISAkitswithswineserainTaiwan[J].VeterinaryMicrobiol ogy,2007,119(2-4):164-172.
酶联免疫试验研究与应用
郗洪莲
(1.四川大学生物治疗国家重点实验室 四川成都 610041;2.成都康华生物制品有限公司 四川成都 610100)
摘要:本文介绍了ELISA法的基本原理及ELISA法在临床医学、生物制药、食品科学、农牧渔业等方面的应用,并对该检测技术的发展趋势及应用前景进行了展望。
关键词:酶联免疫试验应用
中图分类号:B84文献标识码:A 文章编号:1674-2060(2015)08-0228-01