MDCK细胞介绍

MDCK细胞介绍（MDCK Cells introduction）

MDCK细胞系(MDCK Cell Lines)由Madin和Darby于1958年从美国Cocker Spaniel母曲架犬的肾脏组织分离培育建立，通常是以贴壁方式生长的上皮样细胞。犬肾上皮连续细胞系MDCK (Madin-Daby canine kidney cells) 细胞株购买信息：ATCC MDCK cell lines。目前，MDCK细胞系(MDCK Cell Lines)广泛用于多种病毒的扩增和纯化，如：呼肠孤病毒)、腺病毒、犬细小病毒、猫粒细胞缺乏症病毒)及禽流感病毒等。由于其病毒感染效率高、增殖快，且不易变异，MDCK细胞系(MDCK Cell Lines)被公认为最适于甲、乙型流感病毒疫苗生产的3种细胞系之一。传统的MDCK细胞培养大多采用有血清贴壁培养方式。血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种复杂混合物，其含有细胞生长所需的生长因子、激素、载体蛋白、贴壁因子、微量元素以及其他营养物质，可以有效地促进细胞生长和产物表达。然而，血清的应用也存在许多问题：易受病毒、支原体或其他病原体的污染；批间差异造成产品批次间的质量难以严格控制；大量血清蛋白的存在增加了下游分离纯化的难度，部分蛋白难以通过分离纯化手段彻底去除，影响了产品的最终质量；此外，血清来源困难、价格昂贵，大规模动物细胞培养过程中使用血清将会大大增加生产成本。

犬肾细胞MDCK无血清培养基 UltraMDCK Serum-free Medium 产品介绍

MDCK无血清培养基是一种在经过优化的基础培养基中只添加了重组人胰岛素蛋白和牛转铁蛋白的低蛋白含量的成分配制而成的SFM培养基。与在含有血清生长环境中相比，在MDCK 无血清培养基中生长的MDCK细胞较小并紧密成团。在不更换培养基的条件下，MDCK细胞可以持续旺盛生长至少2周时间。经过MDCK细胞的持续生长，从单层细胞形成球形结构，通常我们称这种球形结构为“漂浮物”。通过离心我们可以收获这些球状结构的“漂浮物”，也可以加入新鲜MDCK无血清培养基让MDCK细胞贴壁继续生长成新的单层细胞。在添加了血清成分的环境中培养出来的MDCK单层细胞很难被胰酶消化，但是在MDCK无血清培养基中生长的 MDCK单层细胞就很容易被胰酶消化。

UltraMDCK Medium is an optimized basal medium supplemented with only two proteins –recombinant human insulin and bovine transferrin, yielding a very low protein formulation. MDCK cells grown in UltraMDCK Medium are smaller and more densely packed than cells grown in the presence of serum. Cultures can stay confluent for at least two weeks without medium change. Cells will continue to grow from the monolayer forming spherical structures called “floaters”. “Floaters” can be harvested, pelleted by centrifugation and plated into fresh medium. They will reattach and grow into a new monolayer.

A monolayer of MDCK cells is difficult to trypsinize especially when grown in a serum-supplemented medium. However, when grown in UltraMDCK Medium, trypsinization becomes less difficult.

共培养体系-①直接共培养体系,即将2种或2种以上的细胞同时或分别接种于同一孔中

共培养体系-①直接共培养体系，即将2种或2种以上的细胞同时或分别接种于同一孔中，不同种类的细胞之间直接接触 共培养体系-①直接共培养体系，即将2种或2种以上的细胞同时或分别接种于同一孔中，不同种类的细胞之间直接接触。②间接共培养体系，即将2种或2种以上的细胞分别接种于不同的载体上，然后将这两种载体置于同一培养环境之中，使不同种类的细胞共用同一种培养体系而不直接接触。 学术术语来源—— 不同培养条件下脂肪干细胞与成骨细胞的共培养 文章亮点： 1 共培养体系主要用于诱导细胞向另一种细胞分化，诱导细胞自身分化，维持细胞功能和活力，对细胞增殖进行调控，促进早期胚胎的发育和提高代谢产物的产量。 2 实验的创新性在于将第3代脂肪干细胞和第2代成骨细胞在不同胎牛血清条件下共培养，证实两种方法均能使脂肪干细胞向成骨细胞分化。 关键词： 干细胞；脂肪干细胞；成骨分化；共培养；细胞培养；胎牛血清 主题词： 脂细胞；成骨细胞；细胞分化；细胞培养技术 摘要 背景：成骨细胞与骨髓干细胞共培养后可以诱导骨髓干细胞向成骨细胞分化，成骨细胞与脂肪干细胞共培养是否也能诱导向成骨细胞分化呢？ 目的：观察脂肪干细胞与成骨细胞共培养后能否向成骨细胞分化。 方法：分离新西兰大白兔脂肪干细胞和成骨细胞，待脂肪干细胞生长至3代，成骨细胞生长至2代时，进行共培养。根据培养时血清浓度不同分为10%胎牛血清共培养组和5%胎牛血清共培养组，共培养14 d。

结果与结论：共培养7 d后，2组脂肪干细胞均出现部分变圆。14 d后，脂肪干细胞高度分化与成熟成骨细胞相似，碱性磷酸酶染色阳性、茜素红染色阳性，其Ⅰ型胶原和骨钙素mRNA表达均增高，以10%胎牛血清培养组更为明显。提示脂肪干细胞与成骨细胞经过共培养后可以向成骨细胞分化，高浓度血清培养可以促进诱导作用。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程 全文链接：

CHO细胞表达体系及其特

CHO细胞表达体系及其特点 诞生于70年代末的基因工程药物因其具有其他药物无法比拟的优点，已迅速成为制药工业中一个引人瞩目的领域。1995年美国基因工程药物销售额约为48亿美元，1997年超过60亿美元，年增长率达20％以上。各国政府将其视为新的经济增长热点而给予了大力支持。基因工程药物研究与开发的主要环节包括：①基因的克隆和基因工程菌的构造；②重组细胞的培养；③目的产物的分离纯化等。 针对这些主要环节，研究人员正致力于高效表达、培养工艺及下游分离纯化等方面的研究。随着基因工程技术的不断发展，目前已有多种表达系统可用于生产具有医疗价值的人或动物来源的蛋白质(表1)。大肠杆菌(E.coli)是使用最早的表达系统，其显著优点是易于操作，产量高，成本低，但由于用E.coli生产的蛋白质药物因缺乏糖基化而在人体内易被降解，因此它的药放大大降低。此外，它还存在易产生内毒素和包涵体的问题。真核细胞中CHO 细胞是目前重组糖基蛋白生产的首选体系；因为与其他表达系统相比，它具有许多优点：①具有准确的转录后修饰功能，表达的糖基化药物蛋白在分子结构、理化特性和生物学功能方面最接近于天然蛋白分子； ②具有产物胞外分越功能，便于下游产物分离纯化； ③具有重组基因的高效扩增和表达能力； ④具有贴壁生长特性，且有较高的耐受剪切力和渗透压能力，可以进行悬浮培养，表达水平较高； ⑤CHO细胞属于成纤维细胞(fibroblast)，很少分泌自身的内源蛋白，利于外源蛋白的启分离。但CHO细胞培养成本高，条件难掌握，易污染，在一定程度上影响了它的广泛应用。目前已有越来越多的药用蛋白在CHO细胞中获得了高效表达(表2)，其中部分药物已投放市场，倒如EPO、GCSF等。 CHO 细胞属于成纤维细胞，既可以贴壁生长。也可以悬浮生长。目前常用的CHO细胞包括原始CHO和二氢叶酸还原酶双倍体基因缺失型(DHFR-)突变株CHO。近年来，为降低生产成本和减少血制品带来的潜在危害性，动物细胞生产开始使用无血清培养基(SFM)，但SFM往往导致细胞活力差，贴壁性差，分泌外源蛋白的能力差等缺点。另有研究者尝试将类胰岛素生长因子IGF基因和转铁蛋白基因转入CHO细胞获得能自身分泌必需蛋白的“超级CHO”，无需在培养基中转铁蛋白和胰岛素，细胞可在SFM 中生长良好。与其他表达系统相比，CHO表达系统具有以下的优点： (1)具有准确的转录后修饰功能，表达的蛋白在分子结构、理化特性和生物学功能方面最接近于天然蛋白分子； (2)既可贴壁生长，又可以悬浮培养，且有较高的耐受剪切力和渗透压能力； (3)具有重组基因的高效扩增和表达能力，外源蛋白的整合稳定； (4)具有产物胞外分泌功能，并且很少分泌自身的内源蛋白，便于下游产物分离纯化； (5)能以悬浮培养方式或在无血清培养基中达到高密度培养。且培养体积能达到1000L以上，可以大规模生产。

CHO细胞表达体系特点及CHO细胞表达疫苗

CHO细胞表达体系特点及CHO细胞表达疫苗 来源：易生物实验浏览次数：533 网友评论0 条 CHO细胞表达体系特点及CHO细胞表达疫苗 关键词：细胞疫苗CHO细胞表达体系CHO细胞表达 分子生物学、分子免疫学等学科的发展使基因工程疫苗具有越来越重要的地位。在基因工程疫苗研究的动物细胞表达系统中，最具代表性的就是中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary，CHO)。它是用来表达外源蛋白最多也最成功的一类细胞。本文就CHO细胞表达系统在疫苗研制中的应用做一综述。 1、CHO细胞表达体系及其特点 CHO细胞属于成纤维细胞，既可以贴壁生长。也可以悬浮生长。目前常用的CHO细胞包括原始CHO和二氢叶酸还原酶双倍体基因缺失型(DHFR-) 突变株CHO。近年来，为降低生产成本和减少血制品带来的潜在危害性，动物细胞生产开始使用无血清培养基(SFM)，但SFM往往导致细胞活力差，贴壁性差，分泌外源蛋白的能力差等缺点。另有研究者尝试将类胰岛素生长因子IGF基因和转铁蛋白基因转入CHO细胞获得能自身分泌必需蛋白的“超级CHO”，无需在培养基中转铁蛋白和胰岛素，细胞可在sFM 中生长良好。 与其他表达系统相比，CHO表达系统具有以下的优点： (1)具有准确的转录后修饰功能，表达的蛋白在分子结构、理化特性和生物学功能方面最接近于天然蛋白分子； (2)既可贴壁生长，又可以悬浮培养，且有较高的耐受剪切力和渗透压能力； (3)具有重组基因的高效扩增和表达能力，外源蛋白的整合稳定； (4)具有产物胞外分泌功能，并且很少分泌自身的内源蛋白，便于下游产物分离纯化； (5)能以悬浮培养方式或在无血清培养基中达到高密度培养。且培养体积能达到1000L以上，可以大规模生产。 2、CHO细胞表达疫苗 （1）乙肝疫苗 CHO细胞表达疫苗的种类不多，多数处于研究阶段。目前只有CHO表达乙肝疫苗已投入生产，这是除酵母表达乙肝疫苗以外，唯一已用于人类使用的基因工程亚单位疫苗。使用酵母表达乙肝疫苗虽然获得了很大成功，但是酵母系统还存在着许多缺陷，最重要的一点，酵母不能模拟蛋白在人体肝细胞中的翻译后修饰、蛋白折叠、大分子组装以及糖基化。这些特点正是抗原在动物细胞中引起免疫反应所必须的。而CHO细胞表达的蛋白更接近人体来源的乙肝表面抗原。1991年中国预防医学科学院病毒学研究所联合长春生物制品研究所等单位研制成功了由CHO细胞表达的基因工程乙肝疫苗，并于1992年批量上市。该疫苗是以S 蛋白为靶抗原的乙肝疫苗，与酵母表达的乙肝表面抗原同属于第2代乙肝疫苗。

CHO细胞表达体系及其特点

CHO细胞表达体系及其特点 来源：易生物实验浏览次数：250 网友评论0 条 CHO细胞表达体系 关键词：细胞特点体系CHO细胞表达 子生物学、分子免疫学等学科的发展使基因工程疫苗具有越来越重要的地位。在基因工程疫苗研究的动物细胞表达系统中，最具代表性的就是中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary，CHO)。它是用来表达外源蛋白最多也最成功的一类细胞。本文就CHO细胞表达系统在疫苗研制中的应用做一综述。 CHO细胞表达体系及其特点 诞生于70年代末的基因工程药物因其具有其他药物无法比拟的优点，已迅速成为制药工业中一个引人瞩目的领域。1995年美国基因工程药物销售额约为48亿美元，1997年超过60亿美元，年增长率达20％以上。各国政府将其视为新的经济增长热点而给予了大力支持。 基因工程药物研究与开发的主要环节包括：①基因的克隆和基因工程菌的构造；②重组细胞的培养；③目的产物的分离纯化等。 针对这些主要环节，研究人员正致力于高效表达、培养工艺及下游分离纯化等方面的研究。随着基因工程技术的不断发展，目前已有多种表达系统可用于生产具有医疗价值的人或动物来源的蛋白质(表1)。大肠杆菌(E.coli)是使用最早的表达系统，其显著优点是易于操作，产量高，成本低，但由于用E.coli生产的蛋白质药物因缺乏糖基化而在人体内易被降解，因此它的药放大大降低。此外，它还存在易产生内毒素和包涵体的问题。真核细胞中CHO细胞是目前重组糖基蛋白生产的首选体系；因为与其他表达系统相比，它具有许多优点： ①具有准确的转录后修饰功能，表达的糖基化药物蛋白在分子结构、理化特性和生物学功能方面最接近于天然蛋白分子； ②具有产物胞外分越功能，便于下游产物分离纯化； ③具有重组基因的高效扩增和表达能力； ④具有贴壁生长特性，且有较高的耐受剪切力和渗透压能力，可以进行悬浮培养，表达水平较高； ⑤CHO细胞属于成纤维细胞(fibroblast)，很少分泌自身的内源蛋白，利于外源蛋白的启分离。 但CHO细胞培养成本高，条件难掌握，易污染，在一定程度上影响了它的广泛应用。目前已有越来越多的药用蛋白在CHO细胞中获得了高效表达(表2)，其中部分药物已投放市场，倒如EPO、GCSF等。 CHO细胞属于成纤维细胞，既可以贴壁生长。也可以悬浮生长。目前常用的CHO细胞包括原始CHO和二氢叶酸还原酶双倍体基因缺失型(DHFR-) 突变株CHO。近年来，为降低生产成本和减少血制品带来的潜在危害性，动物细胞生产开始使用无血清培养基(SFM)，但SFM往

细胞生物学知识点(最终版)

细胞生物学知识点 绪论 一、细胞生物学研究的内容和现状 1、细胞生物学是现代生命科学的重要基础学科 什么是细胞生物学？ 细胞生物学是研究细胞基本生命活动规律的科学，它是在不同层次（显微、亚显微与分子水平）上以研究细胞结构与功能、细胞增殖、分化、衰老与凋亡、细胞信号传递、真核细胞基因表达与调控、细胞起源与进化等为主要内容。核心问题是将遗传与发育在细胞水平上结合起来。 二、细胞生物学的主要研究内容 1、细胞核、染色体以及基因表达的研究 2、生物膜与细胞器的研究 3、细胞骨架体系的研究 4、细胞增殖及其调控 5、细胞分化及其调控 6、细胞的衰老与凋亡 7、细胞的起源与进化 8、细胞工程 三、细胞生物学的发展趋势 从分子水平→细胞水平，相互渗透交融 从细胞结构功能研究为主→细胞重大生命活动为主 分析→综合 功能基因组学研究是细胞生物学研究的基础与归宿 (应用)由基因治疗→细胞治疗 四、当前细胞生物学研究的重点领域 染色体DNA与蛋白质相互作用关系 细胞增殖、分化、衰老及凋亡的调控及其相互关系 细胞信号转导 五、最近几年诺贝尔奖与细胞生物学（2000-2010） 2000：神经系统中的信号传递 2001：控制细胞周期的关键物质 2002: 细胞凋亡调节机制 2003：细胞膜水通道及离子通道结构和机理 2004：泛素调节的蛋白质降解系统 2005：幽门螺旋杆菌 2006：RNAi 2007：基因敲除小鼠 2008：绿色荧光蛋白 2009：端粒和端粒酶保护染色体的机理 2010：试管受精技术 2001年，美国人Leland Hartwell、英国人Paul Nurse、Timothy Hunt因对细胞周期调控机理的研究而获诺贝尔生理医学奖。 2002年，英国人悉尼·布雷诺尔、美国人罗伯特·霍维茨和英国人约翰·苏尔斯顿，因在器官发育的遗传调控和细胞程序性死亡方面的研究获诺贝尔诺贝尔生理学或医学奖。

360多细胞体系

360多细胞生物免疫体系 ——从中国“多细胞治疗”热，论多细胞来源和发展问题 美国生物学家戴利说：如果说20世纪是药物治疗的时代，那么21世纪将是细胞治疗的时代，并发表《Behind the Vogue for "Multi cell therapy": Origin and development issues in Clinical of Multi cell therapy in China》一书，详细讨论多细胞治疗的发源。以下一部分内容为书本英译。 360生物细胞免疫疗法的来源 在研究中科学家发现，将某一种细胞复制粘贴式的大面积繁衍时，自身存在的病灶细胞看起来非常像健康细胞，这一细胞后来被命名为“DC细胞”，所以，“360生物细胞免疫体系”最初的设想是提取患者自身免疫因子，然后诱导分化成新免疫调节因子，并输入患者体内，从而激活自身免疫系统，产生免疫应答。 然而不断深入发现后，这一细胞能分裂和分化为身体内不同类型的细胞，这意味着它“多能”且能变成身体内任何细胞类型，人类自体修复细胞不止这一种，这些类似于人类胚胎干细胞的细胞仅分化为同样由外胚层形成的细胞。 多细胞意在打破免疫耐受，使患者的免疫系统像正常人感染病毒后一样，对病毒进行特异性、靶向性、主动式攻击，该疗法绕开病毒耐药，从自身免疫入手，从机制上解决了乙肝治疗的难题。 360生物细胞免疫疗法的发展 1973年，DC细胞在美国南加州大学克可医学院被研究发现，研究显示该细胞可自体修复受损病灶； 1988年，科学家通过抑制被致癌基因蛋白的表达，成功地将DC细胞提纯； 1992年，科学家研究发现，人类自体修复细胞不止DC细胞一种，它能分裂和分化为身体内不同类型的细胞，就此“多细胞理论”诞生； 2002年，多细胞传递抗原信息启动免疫反应成功； 2008年，多国学者开展“获取乙肝抗原激活机体免疫反应”的研究； 2009年，生物细胞免疫疗法治疗肝病率先在美国纽约好撒玛利亚医院医学中心进入临床，美国肝病研究学会开始研发多细胞疗法； 2011年，诺贝尔生理/医学奖授予了三位免疫学家ules A. Hoffmann、Bruce A. Beutler和Ralph M. Steinman，获奖理由是“是发现免疫系统中的树突状细胞（DC细胞）及其在适应性免疫反应、