治疗性克隆面临的机遇与挑战

治疗性克隆面临的机遇与挑战

论文摘要：随着现代医学及遗传学的发展，克隆技术日益受到关注，而其中的治疗性克隆技术更是成为了许多国家研究的重点。本文主要介绍了近年来国际上以人

核移植胚胎干和人兔异种间核移植胚胎干细胞为代表的处于前沿领域的一

些治疗性克隆技术的最新成果，介绍了其对临床治疗性克隆的重大意义。同

时本文也罗列了治疗性克隆仍存在的问题等。

论文关键词：治疗性克隆；细胞核; 移植；胚胎干细胞

还记得胡老师曾在课堂上给我们讲述了克隆的相关知识，向我们介绍了生殖性克隆和治疗性克隆各自的内容和区别。而其中治疗性克隆对于再生医学的巨大帮助，给我留下了很深的印象，治疗性克隆产生的组织所具有的无免疫排斥性给一大批患者带来了希望。因此，在查阅了一些资料后，我想在此篇论文中着重讲述介绍一下目前国际上较为领先的一些治疗性克隆技术以及其仍然面临的一些困境。

所谓治疗性克隆，就是指在实验室制造人类胚胎以提取胚胎干细胞，再将其培养、诱导分化成所需的组织或者器官用于治疗疾病的过程。可以说，治疗性克隆是体细胞核移植技术和最新的人胚胎干细胞技术结合的产物。与目前在全球范围禁止实验的生殖性克隆相比，技术层面上两者并无多大区别，即是把体细胞的细胞核放在卵子中，然后通过这样的克隆囊胚方式来进行克隆研究；但是两者在应用目的上却截然不同：生殖性克隆是将其发育成胎儿或婴儿；而治疗性克隆是应用患者的体细胞，如皮肤细胞、骨髓间充质干细胞，作为核供体，移植入去核的人卵母细胞，获得克隆胚胎；然后从克隆胚胎分离建立胚胎干细胞系；并将这些胚胎干细胞在一定条件下，诱导分化成所需要的各种类型的细胞，用于治疗目的。这就使得治疗性克隆避免了人类尊严及法律方面的问题。1国际治疗性克隆成果

治疗性克隆是体细胞核移植技术和最新的人胚胎干细胞技术结合的产物，现代医学将其称为人类医疗历史上革命性的技术。该技术首先应用患者体细胞，如皮肤细胞、骨髓间充质干细胞，作为核供体，移植入去核的人卵母细胞，获得克隆胚胎；然后从克隆胚胎分离建立胚胎干细胞系；并将这些胚胎干细胞在一定条件下，诱导分化成所需要的各种类型的细胞用于治疗目的［1］。纵观全球，目前在各大杂志报纸及网络上均有

诸多关于治疗性克隆的相关报道。其中近两年来较为突出的研究成果有：将产生多巴胺的神经元细胞用于治疗帕金森症，将产生胰岛素的胰岛细胞治疗糖尿病患者。从理论上来说由于使用的是患者自身的细胞生产出来的治疗用细胞，移植这些细胞到患者体内将不会产生免疫排斥反应。另一方面，每年都有数以百万计的患者需要细胞、组织的修复或者器官移植，由于胚胎干细胞可以无限传代，在数量上可以保证治疗的需要，从而解决可供移植的细胞、组织和器官来源严重不足的瓶颈问题［2］，为人类健康和长寿提供了新的希望。

近年来，有关于利用核移植技术和胚胎干细胞技术相继建立的人核移植胚胎干（简称ntES）细胞系和人兔异种间ntES细胞取得了突破性进展。可以说，这2项阶段性研究成果的取得，标志着治疗性克隆研究的巨大进步。最近，上海第二医科大学盛惠珍研究小组在国际上首次构建了人兔核移植重构胚. 分别将5，42，52和60岁4个年龄组的人皮肤成纤维细胞核移入去核兔卵母细胞内，获得ntES细胞，通过原位杂交、免疫组化、核型和同源基因分析等证实ntES细胞具有人源性，并且保持干细胞的未分化特性，能形成类胚体，在一定诱导条件下可以分化为神经、肌肉等3个胚层的细胞群。同时，汉城国立大学的研究者以患者的皮肤细胞为供体，以志愿者捐赠的卵母细胞为受体，利用体细胞核移植技术成功建立11株人核移植胚胎干细胞，这些细胞具有多能性，染色体正常，与供核患者的DNA一致、组织相容性抗原一致［3］。应该说，这些治疗性克隆的研究突破使得治疗性克隆早日在临床的大规模实施也更加接近了一步。

2治疗性克隆的应用前景

我们知道，当前治疗性克隆还处于萌芽阶段，个性化的治疗难度非常大，对于临床的运用还有一段距离，可以说，其中主要原因是我们现在并不知道一个胚胎干细胞在什么情况下会分化一个胰岛细胞或其他器官细胞。这涉及到基因的程序编制问题。人一生中有两次最关键的基因表达的程序编制，一次是在生殖细胞的形成过程中，生殖细胞的成熟需要重新编制基因表达程序；一次是在精子与卵子结合后形成受精卵并发育成早期胚胎，也需要重新为胚胎编程。对于这个问题，ES细胞开始了对其理论及实验上的突破，可以说目前在一定程度上保持干细胞的未分化特性。因此，ES细胞对于遗传学，临床医学及克隆分化上有着重要意义，并使得治疗性克隆的拥有良好应用前景。

在临床疾病的治疗上，ntES细胞与普通的细胞移植治疗相比，具有革命性的进步。它以患者的体细胞为核供体，通过核移植技术获得的ntES细胞，与患者的遗传物质相同，可以消除受体对供体的免疫排斥反应，为目前多种退形性疾病，如心脏病、脊髓损

伤、帕金森病等的治疗带来了新的希望。特别是一些目前还没有找出致病基因的遗传病，如脊髓侧索硬化症，ntES细胞移植是最有希望的治疗方法。目前已经应用ntES细胞在体内外分化成多种细胞，包括神经细胞和生殖细胞等，能使ntES细胞向中枢神经系统细胞特定分化，能产生高效率的神经胶质细胞、寡突细胞、神经元细胞，包括多巴胺能神经元、γ氨基丁酸能神经元等，将分化的多巴胺能神经元移植到Parkinson病模型后，能改善其症状。而目前的细胞治疗的途径有两种：其一，ntES细胞定向分化后移植. 细胞扩增后，体外定向分化，对分化细胞进行纯化，将获得的目的细胞移植到病变部位，替代丧失功能的部分细胞；其二，ntES细胞原位移植.。然而，与定向分化后相比，ntES细胞原位移植有以下缺点：①没有经过纯化，可能将污染的异源饲养层细胞带进移植部位；②ntES细胞没有转入经选择基因，无法控制植入细胞的命运，可能发生癌变；③ntES细胞分化成分复杂，目的细胞分化成分少，可能出现大量非必须细胞的分化。［4］不过，同时细胞生物学专家通过研究发现ntES细胞的体外分化特性，可以识别某些靶基因，因而对人类新基因的发现，功能基因的研究，以及基因治疗的研究均有重要意义.。通过探讨细胞体外增殖和分化的机制，了解各种生长和分化因子的作用，为组织再生和修复的研究提供了新的工具；通过诱导细胞癌变，可分析肿瘤细胞发生的分子机制.。ntES细胞作为一种得天独厚的研究材料，对于阐明细胞增殖、分化、凋亡、迁徙、恶变等机制有着重要意义。可以说，ES细胞的独特性及识别一些基因的功能，使得人类在治疗性克隆的研究道路上看到了曙光。

3治疗性克隆面临的问题

尽管治疗性克隆技术目前有了很大的进步，全球治疗性克隆研究也得到了一定发展，不过同时，我们也应看到，发展治疗性克隆仍然存在着许多问题，真正应用于临床也至少还需要10到15年左右。而大致概括起来，目前科学研究者遇到的难题主要有以下几个方面：①伦理问题：可以说这一直是制约治疗性克隆的主要原因之一。胚胎生物技术涉及使用早期未着床的胚胎，特别是治疗性克隆技术还将无法避免的使用通过体细胞克隆获得的人的早期克隆胚胎. 世界各国尤其是西方国家对此争论很大。绝大多数国家都禁止生殖性克隆人，因为克隆出来的人类与被克隆的母体之间的人伦、法律和道义上的相互关系难以确认，这些问题还关涉人的尊严和伦理底线问题，因而各国普遍反对生殖性克隆人。而受此影响迫于社会公众与宗教的压力，大多数西方国家对治疗性克隆技术应用于人类，持反对态度，不允许国家科研经费支持治疗性克隆的研究.②卵母细胞来源问题。据现在的实验初步统计来看，用于人治疗性克隆，卵母细胞的需求量是非

常大的，目前尽管已有许多措施来改进核移植技术，但仍没有明显提高。如果ntES细胞系用于人类疾病的治疗，这样的代价是非常大的，那么即使该技术成功，也无法大规模展开临床试验，无法进行治疗性克隆的使用，这与治疗性克隆的研发初衷就背道而驰了。

随着干细胞技术和体细胞核移植技术的研究发展，我国学者在治疗性克隆的技术研究方面也处于世界前列。可以说当前对于我国研究和发展治疗性克隆技术，建立我国知识产权的治疗性克隆的细胞产品，创建细胞治疗产业，是一个很好的机遇，这是因为我国在治疗性克隆研究领域拥有众多优势，如目前我国在哺乳动物克隆技术的研究方面处于国际先进水平，相继成功克隆出了牛、羊等动物；同时我国国内拥有宽松的人文环境。中国公众有着不同于西方的伦理观念，对于动物权利和早期胚胎的担心没有西方国家严重，也基本没有因为宗教信仰而反对胚胎生物技术的问题，这就为克隆技术发展奠定了良好的外部环境。因此，在了解了当今世界治疗性克隆的发展状况后，我们希望我国研究者能借鉴国外的思路，与基础细胞生物学家联手合作，发展建立中国人的细胞培养技术，为我国自己的治疗性克隆的临床应用奠定基础。我们希望，中国能在不久的将来在治疗性克隆的领域有所突破，让治疗性克隆为人类造福！

【参考文献】

［1］《肝病细胞治疗》人民卫生出版社，2007-3

［2］英国《自然医学》杂志网络版2008-03-25

［3］［4］中国第四大学学医军报

关于生殖性克隆的哲学思考

关于生殖性克隆的哲学思考 摘要：随着科技的发展，相关伦理问题也随之突出。其中，由生殖性克隆引发的伦理争议最为剧烈。然而，伦理问题并不会成为终止科技发展的因素。因此，虽然现在国际上普遍禁止生殖性克隆，笔者仍认为克隆人终将出现，所出现的伦理矛盾也会得到解决。我们应正确引导克隆技术朝着有利于人类的方向发展, 尽可能减少克隆技术产生的伦理负效应,并为其制定相应的伦理规则以约束其可能造成的危害。 关键词: 克隆技术；生殖性克隆；科技伦理；哲学思考 一、关于克隆技术 1996年7月5日，克隆绵羊多利的诞生，标志着真正的人工诱导的无性繁殖的实现，随后动物克隆技术的研究与开发进入一个高潮。然而，“多利”的诞生引起的反响不仅限于此，更重要的是引发了一场由克隆人所衍生的道德问题的讨论。 克隆是指由单个祖先个体经过无性繁殖而产生的其他个体。一般来说，克隆人类胚胎可以分为三种情况：第一，治疗性克隆，以治疗人类疾病为目的，主要是用胚胎多能干细胞来克隆特定细胞、组织乃至器官以修复病人的组织或器官。第二，研究性克隆，以研究人类胚胎发育及其中的基因调控过程为目的。第三，生殖性克隆，以复制人为目的，是对人类个体的复制，把克隆出的人类胚胎植入母体, 生产出克隆人。这三种人类胚胎的克隆都使用同一种核转移技术，只是目的不同而已。目前，许多科学家、科学组织以及一些国家的政府都发表声明支持治疗性克隆的研究与开发，但是，另一方面，由于生殖性克隆对伦理道德的冲击，几乎所有国家对生殖性克隆持坚决反对态度，许多国家还制定一系列的政策法规来控制克隆人。 二、生殖性克隆及其引发的伦理争议 克隆技术的发展使克隆人的出现成为了可能。诺贝尔奖获得者乔舒亚·雷德贝格博士认为, “在人类中完成这项工作绝不会有特殊困难”。然而，就目前而言，国际社会的主流观点一般都对克隆人持坚决反对态。反对原因主要涉及以下技术问题及伦理问题： 1. 目前生殖性克隆技术尚未成熟 目前克隆动物技术的不成熟（成功率很低、克隆繁殖时异常比例超过了40%）很可能会产生出许多畸形的、具有严重缺陷的克隆人。首先，动物克隆的成功率处于极低的水平。多利羊是在第276次失败上才取得的成功，成功率仅为1/277。其次，即便经过千辛万难，克隆动物得以诞生，它们在出生后发生肥胖、早衰、早夭及其他问题的概率也远远高于自然生殖的发生率。正值壮年的多利死于肺部感染，而这是一种老年绵羊的常见疾病。而若利用[3][2][1]

休克分类与家兔休克模型建立方法

休克分类与家兔休克模型建立方法 休克是由于微循环有效灌流量不足而引起的动物各组织器官缺血、缺氧、代谢紊乱、细胞损伤以致严重危及生命活动的过程。临床的主要表现为患病动物体温突然降低，血压下降，心跳加快，脉搏细弱，皮肤湿冷，可视粘膜苍白或发绀，耳鼻及四肢末端发凉，静脉萎缩，尿量减少或无尿，精神高度沉郁，甚至昏迷和死亡。 人类对休克的理解经历了不同的时期。休克最初被意识到是机体遭受强烈刺激而产生的危机状态，只限于对休克临床症状的描述和识别。随着实验生理学的发展和研究，发现休克时血液循环严重障碍，动脉血压降低是其发生发展的关键，认为休克的症状是由血压降低所致，判断休克的标准为血压下降，治疗休克的主要措施是使用升压药。但是使用升压药并不能挽救休克患者，有些病畜经过升压后，情况不但不能改善，甚至病情反而恶化。后来由于微循环研究的发展，经研究和大量实验发现休克时有明显的微循环障碍，组织器官的机能、代谢障碍与微循环动脉血液灌流量有关，而且微循环障碍往往发生在血压降低之前，休克初期因小动脉收缩，血压降低一般不明显或不降低，但微循环已经出现明显出血。所以任何原因引起的休克都是由于微循环有效灌流量的急剧减少，以致重要的动物器官组织因缺氧而发生的机能和代谢障碍，这是各种休克共同的发病环节。 休克按照病因一般分为失血性休克、创伤性休克、烧伤性休克、感染性休克、心源性休克、过敏性休克及神经性休克等，一目了然的指明导致休克的原因。根据病因分类休克虽然更便于理解，但是分类过多无法反映各类休克类型的共同特点，不利于临床兽医实际掌握应用。近年来，国内外趋于一致的新认识，将按休克发生的始动环节，将其分为低血容量性、心源性和血管源性休克三类。 本文以休克发生的始动环节为依据，分别建立几种以家兔为实验动物的常见休克模型。

猪嵴病毒全长cDNA感染性克隆的构建及拯救

密级：论文编号： 中国农业科学院 学位论文 猪嵴病毒全长cDNA感染性克隆的构建及拯救Construction and rescue of Porcine Kobuvirus full-length cDNA infectious clone 硕士研究生：李长龙 指导教师：冯力研究员 申请学位类别：农学硕士 专业：预防兽医学 研究方向：兽医微生物及分子生物学 培养单位：哈尔滨兽医研究所 中国农业科学院研究生院 2014年5月

Secrecy:No. Chinese Academy of Agricultural Sciences Master Dissertation Construction and rescue of Porcine Kobuvirus full-length cDNA infectious clone Ms. Candidate：Li Changlong Advisor：Prof. Feng Li Major：Preventive Veterinary Medicine Specialty：Molecular Biology and Veterinary Microbiology May 2014

独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 研究生签名：时间：年月日 关于论文使用授权的声明 本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。 (保密的学位论文在解密后应遵守此协议) 论文作者签名：时间：年月日 导师签名：时间：年月日

脓毒症与感染性休克第三版国际共识定义

脓毒症与感染性休克第三版国际共识定义 脓毒症与感染性休克第三版国际共识定义重症行者翻译组作品重要性：脓毒症与感染性休克的定义最后一次修订是在2001年。 考虑到脓毒症病理学（器官功能、形态学、细胞生物学、生物化学、免疫学以及循环的变化）、管理以及流行病方面已经取得的进展，因此需要对该定义进行复审。 目的：根据需要对脓毒症与感染性休克的定义进行更新和评估过程：危重病医学学会与欧洲重症监护医学学会召集19名脓毒症病理学、临床试验以及流行病学方面的专家组成工作组。脓毒症及感染性休克的定义与临床诊断标准通过会议、Delphi程序、电子健康记录数据库分析、以及投票产生，然后送至国际专业协会，要求（在致谢中列出的31个协会）同行进行评审与认可。来自综合证据分析的关键发现：以前的定义的局限性包括过度关注炎症反应、认为脓毒症遵循一个从严重脓毒症发展至休克的连续性误导模式、全身炎症反应综合征（SIRS）诊断标准的特异性与敏感性不足。 目前已有多个术语用于脓毒症、感染性休克以及器官功能障碍的定义，导致在报告发生率与观察死亡率时出现差异。工作组得出结论：“严重脓毒症”这个术语是多余的。 建议：脓毒症应该定义为感染引起的宿主反应失调所导致的致命性器官功能障碍。为了便于临床操作，器官功能障碍可以用序贯[全身感染相关]器官功能衰竭评分（SOFA）的增加大于等于2分来表

示，其相关的住院死亡率大于10%。感染性休克应该被定义为脓毒症的一个类型，与单独的脓毒症相比，特别是在严重循环、分子、代谢异常方面与高死亡风险密切相关。 在临床上感染性休克患者可通过下列情况加以识别：在排除低血容量的情况下，需应用升压药以维持平均动脉≥65mmHg，以及血清乳酸＞2mmol/L(>18mg/dL)。 感染性休克的患者在临床上可以通过下情况被识别：需要应用血管加压素保持平均动脉大于等于65mmHg，以及在没有低血容量情况下血乳酸大于2mmol/L(>18mg/dL)。根据这一联合标准，感染性休克的住院死亡率＞40%。 这个联合标准诊断的感染性休克患者相关的住院死亡率大于40%。在院外、急诊科或医院普通病房可疑感染的成人患者若符合至少2项临床标准[这一标准构成一新的床旁指标即快速SOFA （qSOFA）：呼吸频率≥22次/分、意识状态改变、收缩压 ≤100mmHg]，即可快速识别那些可能出现典型脓毒症不良预后的可疑感染的非ICU患者。在院外、急诊科以及医院普通病房，怀疑存在感染的成年患者，如果下面的临床诊断标准存在至少2条（这些诊断标准构成一个新的临床评分称作quickSOFA[qSOFA]：呼吸频率大于等于22次/min，意识改变，收缩压小于等于100mmHg），则作为更可能存在预后不良的典型脓毒症患者而被快速识别。 结论和临床意义：这些更新的定义和临床诊断标准应该取代之

克隆

克隆，科学发展的必然产物 1997年克隆羊“多利”的问世证明了单性繁殖的可能性，这是生物学界的重大事件.“克隆”作为一项新生的科学技术手段，它标志着人类科学技术新的发展阶段的到来，它为人类探索生命的奥秘，研究生命的发生、发展的规律提供了一项重要的技术手段，它与人们业已掌握的其他科技手段一样，应予以充分的肯定。换句话说，克隆是科学发展到一定阶段的必然产物。 Sence the first successful experiment in cloning ，this technique has caught attentions of people all over the world，尤其在是否应该克隆人的问题上。因为它同时也带来了许多法律、道德、伦理上的问题。我的回答是肯定的，因为克隆不仅是一项技术，更重要的是它的使用价值。“克隆”是一种科学技术，人类既然能掌握它，就一定有办法控制它，而不会任由其危害人类社会。 在农业科学方面，可快速培育和扩繁抗病力强、生产性能高的优良动物；可以研究动物的发病机理，寻求新的有效治疗药物。人们利用“克隆”技术培育出大量具有抗旱、抗倒伏、抗病虫害的优质高产品种，大大提高了粮食产量。克隆技术对保护物种特别是珍稀、濒危物种来讲是一个福音，具有很大的应用前景。从生物学的角度看，这也是克隆技术最有价值的地方之一。 在当代，医生几乎能在所有人类器官和组织上施行移植手术。但就科学技术而言，器官移植中的排斥反应仍是最为头痛的事。排斥反应的原因是组织不配型导致相容性差。如果把“克隆人”的器官提供给

“原版人”，作器官移植之用，则绝对没有排斥反应之虑，因为二者基因相配，组织也相配。 这对于不孕不育家庭，单亲家庭和同性家庭来说也是个不错的选择。 克隆技术还可用来大量繁殖有价值的基因，例如，在医学方面，人们正是通过“克隆”技术生产出治疗糖尿病的胰岛素、使侏儒症患者重新长高的生长激素和能抗多种病毒感染的干挠素，等名贵药物。 Cloning,the inevitable product of scientific development The arrival of cloning Dolly in February 1997 proved the possibility of parthenogenesis, which was a major event in the biological sciences. As a new techniques, cloning marks the arrival of a new stage of development of human science and technology. And it is also an important technique to explore the mysteries of life for humans, study the law of the occurrence and development of life. Like other technological means mastered by people, cloning should be fully affirmed. In other words, cloning is the inevitable outcome of the scientific development to a certain stage. Sence the first successful experiments in cloning, this technique has caught attentions of people all over the world, Especially in the problem of whether we should clone human beings. Because it also gives rise to a lot of problems in law, morality, ethics and so on. My answer is

治疗性克隆的伦理学限制

治疗性克隆的伦理学限制 2005年11月24日,有韩国“克隆之父”之称的黄禹锡教授在韩国汉城举行新闻发布会,向全世界宣称辞去首尔国际干细胞研究中心主席一职,以及其在韩国政府和社会组织担任的所有职务,并为自己有意向公众隐瞒实验用卵子的来源而恳切道歉。该事件再一次在全世界范围内激起人们对胚胎干细胞研究的伦理学争论。 英国经济和社会研究委员会基因组学经济与社会研究中心的Whittaker撰文(Toxicol Appl Pharmacol 2005, 207: 689-691)分析了目前关于治疗性克隆存在的主要伦理学争论,并建议了一些可能可以避开违背伦理学的干细胞研究方法,其主要观点概括如下,希望能对国内开展干细胞研究带来一些启示。 干细胞与治疗性克隆 关于用干细胞疗法治疗退行性疾病和损伤的可能作用引起了广泛的讨论(He et al., 2003, Kerr et al., 2003, Kim et al., 2002, Rippon and Bishop, 2004 a nd Sylvester and Longaker, 2004)。这些疾病和损伤包括:帕金森病、阿尔茨海默病、心脏病、白血病、糖尿病以及各种自身免疫性疾病和脊髓损伤。 干细胞是一种能够分裂成与自身一致的细胞或几种特殊分化的细胞型的细胞。动物体内干细胞的正常作用是在发育的过程中可提供不同的细胞型,以生长成不同的组织和器官。它们也提供替代细胞以修复身体不同部分的损伤。干细胞疗法就是利用已特殊分化的干细胞,通过特殊的途径提供细胞去替代那些在退行性过程和损伤中失去的细胞。使用未分化干细胞也存在畸胎瘤和其他肿瘤形成的风险(Martin, 1980)。 干细胞可以根据其分化潜能进行分类。就人类干细胞而言,可以分为: ①多能干细胞,可以分化成为人体任何细胞; ②专能干细胞,可以分化成几种类型人体细胞,但不是全部类型人体细胞; ③单能干细胞,只能分化成一种人体细胞。 目前人干细胞的主要来源或者潜在来源如下: ①胚泡,可以提供多能干细胞; ②胎儿组织,可以提供多能或者专能干细胞; ③脐带血,可以提供专能干细胞; ④成人组织,可以提供专能干细胞或者单能干细胞。 干细胞疗法的一个潜在问题是机体对移植干细胞的免疫排斥。有建议说利用现今的治

家兔感染性休克及其抢救

家兔感染性休克及其抢救 设计者：临床医学本科陈国军 指导老师：罗红梅 1. 实验目的 用大肠杆菌建立家兔感染性休克模型并进行抢救。 2.设计依据： 休克（shock）是机体有效循环血量减少，组织灌注不足，组织缺血缺氧，细胞代谢紊乱和功能受损的病理过程，是一个由多种病因引起的综合征,氧供给不足需求增加是其本质。产生炎症介质是其特征。现代观点将休克视为一个序贯性事件，是一个从亚临床阶段的组织灌注不足向多器官功能障碍或衰竭发展的连续过程休克的本质。因此，恢复对组织细胞的供氧，促进其有效的利用，重新建立氧的供需平衡和保持正常的细胞功能是治疗休克的关键环节。 根据其病因不同休克可分为：低血容量性休克，感染性休克，心源性休克，神经性休克。其中临床上以低容量休克及感染性休克最为常见。 感染性休克：是一种继发于以释放内毒素的革兰氏阴性菌感染的休克，是由病原微生物及其毒素在人体引起的一种微循环障碍状态,致组织缺氧代谢紊乱、细胞损伤甚至多功能器官衰竭的状态，因此又称内毒性休克。 感染性休克其微循环改变的特点可分为三期： 1休克早期。由于毒素对心肌的作用，心肌收缩开始即有减弱，但由于外周血管扩张，心输出量减少而血管阻力降低，故呈现为高动型休克，即暖休克。 2休克中期。随着细胞、血管内皮在各种细胞因子、活性物质作用下，血管通透性明显增加，血液渗出，血液浓缩，毛细血管外漏，血管在血小板等释放的5－羟色胺等血管活性物质作用下收缩，外周阻力增加。同时心肌抑制因子释放，心肌收缩进一步减弱，心排出量减少，形成低动力型休克，即冷休克。 3休克晚期。损伤因素继续存在，逐步进入DIC或多器官功衰竭期。 根据感染性休克的病理特点可得出其抢救的基本原则：休克纠正之前以抗休克为主，同时抗感染，休克纠正之后主要是抗感染。 3.材料与方法 3.1实验材料 家兔；兔手术台；手术器械；生物信号采集系统；三通管；压力感受器；输液装置；2ml 5ml 10ml 30ml 1％盐酸普鲁卡因；1％肝素生理盐水；平衡盐溶液（由1.25%碳酸氢钠和等渗盐水1：2配成）；5％抗革兰氏阴性菌抗生素替莫西林；注入5％NaHco3 1％山莨菪碱抢救；皮质激素。 3.2实验步骤 3.2.1制备家兔感染性休克的病理模型 制备方法： (1)用接种环把大肠杆菌接种在37摄氏度的SS琼脂培养基中培养24h; (2)实验前四小时，用接种环把培养基中细菌全部取下并取下加入20ml 0.9%Nacl溶液中，从家兔耳缘静脉注射入血。 3.2.2 (1)按表1进行Medlab实验参数的设置

基因克隆的四大要素(Four Elements for Gene Cloning)

将外源基因通过体外重组后导入受体细胞，使该基因能在受体细胞内复制、转录、翻译和表达，整个操作称为基因重组技术。要实施该技术必须具备四大要素：工具酶、载体、基因和受体（宿主）细胞。 22楼 一、工具酶： 基因工程的基本技术是人工进行基因的剪切、拼接、组合。基因是一段具有一定功能的DNA分子，要把不同基因的DNA 线形分子片段准确地切出来，需要各种限制性核酸内切酶（restriction endonuclease）；要把不同片段连接起来，需要DNA 连接酶（DNA ligase）；要合成基因或其中的一个片段，需要DNA 聚合酶（DNA polymerase）等。因此，酶是DNA 重组技术中必不可少的工具，基因工程中所用的酶统称为工具酶。 工具酶就其用途而言可分为三大类：限制性内切酶、连接酶和修饰酶，其中限制性内切酶为一大类酶（达上千种）。基因重组正是利用了这些工具酶对DNA 分子进行一系列的酶催化反应，才得以在体外实现DNA 分子的切割和连接。因此，工具酶的发现为基因操作提供了十分重要的技术基础。首先重点介绍限制性内切酶（restriction endonucleases＝restriction enzyme），其他酶在相关内容中再一一介绍。 从分子生物学发展历史看，核酸限制性内切酶的发现和应用对该学科发展所起的作用是难以估量的。首先使外源基因在大肠杆菌中克隆的实验是在1973 年完成的，Stanley Cohen，Herbert Boyer（见补充资料2.1）正是利用了限制性内切酶这一分子手术刀才得以实现。 核酸限制性内切酶是原核生物中的一类能识别双链DNA 中特定碱基顺序的核酸水解酶。原核生物的限制和修饰系统犹如高等动物的免疫系统，依靠一对识别相同序列的核酸限制性内切酶和甲基化酶活性来对抗外来DNA 的入侵：当自身的基因组在复制完成下轮DNA 复制尚未开始前就被甲基化酶修饰(使某特定序列 甲基化), 避免了被对应的限制性内切酶的识别和水解，而入侵的噬菌体由于未来得及修饰而被破坏，从而保护细菌不受噬菌体的感染。各种细菌都能合成一种或几种顺序专一的核酸内切酶。这些酶的功能就是通过特异性序列的识别后进行DNA 的切割，来限制外源性DNA 侵入自身的细胞内，所以称这种核酸内切酶为限制酶。 根据酶的识别切割序列的特性、催化条件以及是否具有修饰酶的活性而分成三类：I、II、III类： 第I 类限制性内切酶是双功能酶，具有修饰活性（甲基化）和内切酶活性，作用时需要消耗ATP，能识别专一的核苷酸顺序，并在距离识别点大约1000 个核苷酸对处切割DNA 分子中的双链，但是切割的核苷酸顺序没有专一性，是随机的。 第II 类限制性内切酶只具有核酸内切酶活性，能识别专一的具有回文结构的核苷酸顺序，并在该顺序内的固定位置上切割双链，作用时不需要水解ATP 提供能量。 第III 类限制性内切酶也同时具有修饰活性和内切酶活性，具有专一的识别顺序，但不是对称的回文顺序。它在识别顺序旁边24-26 个核苷酸对的固定位置上切割双链，但这几个核苷酸对则是任意的。

克隆的好处_总结(精华版)

《克隆的好处》 阅读精选（1）： 克隆的好处 克隆很大程度上促进了人类科技文化的发展。克隆能为人类作出很大的贡献，它不但能有效地繁殖高附加值的牲畜，挽救珍稀动物，还对研究癌生物学，研究免疫学，研究人的寿命有不可低估的作用。1．克隆技术与遗传育种 在农业方面，人们利用克隆技术培育出超多具有抗旱、抗倒伏、抗病虫害的优质高产品种，大大提高了粮食产量。在这方面中国已迈入世界最先进的前列。 2．克隆技术与濒危生物保护 克隆技术对保护物种个性是珍稀、濒危物种来讲是一个福音，具有很大的应用前景。从生物学的角度看，这也是克隆技术最有价值的地方之一。 3．克隆技术与医学 在当代，医生几乎能在所有人类器官和组织上施行移植手术。但就科学技术而言，器官移植中的排斥反应仍是最为头痛的事。排斥反应的原因是组织不配型导致相容性差。如果把克隆人的器官带给给原版人，作器官移植之用，则绝对没有排斥反应之虑，因为二者基因相配，组织也相配。问题是，利用克隆人作为器官供体合不合乎人道？是否合法？经济是否合算？ 克隆技术还可用来超多繁殖有价值的基因，例如，在医学方面，人们正是透过克隆技术生产出治疗糖尿病的胰岛素、使侏儒症患者重新长高的生长激素和能抗多种病毒感染的干扰素，等等。 4．生长周期短，遗传性状稳定 5克隆技术可解除那些不能成为母亲的女性的痛苦。 6克隆实验的实施促进了遗传学的发展，为制造能移植于人体的动物器官开辟了前景。 7克隆技术也可用于检测胎儿的遗传缺陷。将受精卵克隆用于检测各种遗传疾病，克隆的 胚胎与子宫中发育的胎儿遗传特征完全相同。 8克隆技术可用于治疗神经系统的损伤。成年人的神经组织没有再生潜力，但干细胞能够 修复神经系统损伤。 9在体外受精手术中，医生常常需要将多个受精卵植入子宫，以从中筛选一个进入妊娠阶段。但许多女性只能带给一个卵细胞用于受精。透过克隆能够很好地解决这一问题。这个卵细胞能够克隆成为多个用于受精，从而大大提高妊娠成功率。克隆技术取得突破，给人类带来极大的好处，最大的好处是培养超多品质优良的家畜，丰富人们的物质生活，使畜牧业的成本降低，效率提高，还可带给某些药物原料以提高人类免疫功能等。一是利用克隆等生物技术，改变农作物的基因型，产生超多抗病、抗虫、抗盐碱等的新品种，从而大大提高农作物的产量。二是培育超多品种优良的家畜，如培养一些肉质好的牛、羊和猪等，也能够培养一些产奶量高，且富含人体所需营养元素的奶牛。三是对医疗保健工作产生重大影响，如依靠分子克隆技术，

脓毒症与感染性休克第三版国际共识定义(中文翻译版)

脓毒症与感染性休克第三版国际共识定义（中文翻译版） 重要性：脓毒症与感染性休克的定义最后一次修订是在2001年。考虑到脓毒 症病理学（器官功能、形态学、细胞生物学、生物化学、免疫学以及循环的变化）、管理以及流行病方面已经取得的进展，因此需要对该定义进行复审。 目的：根据需要对脓毒症与感染性休克的定义进行更新和评估。 过程：危重病医学学会与欧洲重症监护医学学会召集19名脓毒症病理学、临床 试验以及流行病学方面的专家组成工作组。脓毒症及感染性休克的定义与临床诊断标准通过会议、Delphi程序、电子健康记录数据库分析、以及投票产生，然后送至国际专业协会，要求（在致谢中列出的31个协会）同行进行评审与认可。 来自综合证据分析的关键发现：以前的定义的局限性包括过度关注炎症反 应、认为脓毒症遵循一个从严重脓毒症发展至休克的连续性误导模式、全身炎症反应综合征（SIRS）诊断标准的特异性与敏感性不足。目前已有多个术语用于脓毒症、感染性休克以及器官功能障碍的定义，导致在报告发生率与观察死亡率时出现差异。工作组得出结论：“严重脓毒症”这个术语是多余的。 建议：脓毒症应该定义为感染引起的宿主反应失调所导致的致命性器官功能障 碍。为了便于临床操作，器官功能障碍可以用序贯[全身感染相关]器官功能衰竭评分（SOFA）的增加大于等于2分来表示，其相关的住院死亡率大于10%。感染性休克应该被定义为脓毒症的一个类型，与单独的脓毒症相比，特别是在严重循环、分子、代谢异常方面与高死亡风险密切相关。在临床上感染性休克患者可通过下列情况加以识别：在排除低血容量的情况下，需应用升压药以维持平均动脉≥65mmHg，以及血清乳酸＞2mmol/L(>18mg/dL)。感染性休克的患者在临床上可以通过下情况被识别：需要应用血管加压素保持平均动脉大于等于65mmHg，以及在没有低血容量情况下血乳酸大于2mmol/L(>18mg/dL)。根据这一联合标准，感染性休克的住院死亡率＞40%。这个联合标准诊断的感染性休克患者相关的住院死亡率大于40%。在院外、急诊科或医院普通病房可疑感染的成人患者若符合至少2项临床标准[这一标准构成一新的床旁指标即快速SOFA（qSOFA）：呼吸频率≥22次/分、意识状态改变、收缩压≤100mmHg]，即可快速识别那些可能出现典型脓毒症不良预后的可疑感染的非ICU患者。在院外、急诊科以及医院普通病房，怀疑存在感染的成年患者，如果下面的临床诊断标准存在至少2条（这些诊断标准构成一个新的临床评分称作quickSOFA[qSOFA]：呼吸频率大于等于22次/min，意识改变，收缩压小于等于100mmHg），则作为更可能存在预后不良的典型脓毒症患者而被快速识别。

关于细胞克隆的简述

关于细胞克隆的简述 姓名：付中凯班级：计本1102 学号：20113708 摘要：克隆技术即无性繁殖技术。通常的有性生殖是由雌雄交配，精子和卵子结合发育成胚胎，经妊娠后产出新的个体。克隆技术不需要雌雄交配，不需要精子和卵子的结合，只需从动物身上提取一个单细胞，用人工的方法将其培养成胚胎，再将胚胎植入雌性动物体内，就可孕育出新的个体。这种以单细胞培养出来的克隆动物，具有与单细胞供体完全相同的特征，是单细胞供体的“复制品”。关键词：无性繁殖两面性生物技术 引言：克隆是无性生殖所以它并不是根据基因重组、基因突变、染色体变异等原理。克隆动物就是将已有的动物，以人工无性繁殖的形式通过现代生物技术而创造的“生命”。早在20世纪50年代，人们就已经开始克隆动物研究了。1997年，克隆羊“多莉”的诞生标志着这一技术的重大发展。英国英格兰科学家和美国俄勒冈科学家先后培养出了“克隆羊”多利和“克隆猴”。克隆技术的成功，被人们称为“历史性的事件，科学的创举”。有人甚至认为，克隆技术可以同当年原子弹的问世相提并论。 克隆技术又称为“生物放大技术”，它经历了三个发展时期：第一个时期是微生物克隆时期，即用一个细菌可以很快复制出成千上万个和它一模一样的细菌，从而变成一个细菌群；第二个时期是生物技术克隆时期，比如用遗传基因一DNA进行克隆；第三个时期是动物克隆时期，即由一个细胞克隆成一个动物。克隆绵羊“多利”就是由一头母羊的体细胞克隆而来，使用的便是动物克隆技术。“自然界的许多动物，在正常情况下都是依靠父方产生的雄性细胞(精子)与母方产生的雌性细胞(卵子)融合(受精)成受精卵(合子)，再由受精卵经过一系列细胞分裂长成胚胎，最终形成新的个体。这种依靠父母双方提供性细胞、并经两性细胞融合产生后代的繁殖方法就叫有性繁殖。但是，如果我们用外科手术将一个胚胎分割成两块、四块、八块……最后通过特殊的方法使一个胚胎长成两个、四个、八个……生物体，这些生物体就是克隆个体。而这两个、四个、八个……个体就叫做无性繁殖系(也叫克隆)。” 1.细胞克隆-无性生殖的神奇 1.1利用供体细胞核与去核卵母细胞的融合形成胚胎，导入动物子宫使其怀孕最终产下幼体。 先将含有遗传物质的供体细胞的核移植到去除了细胞核的卵细胞中，利用微电流刺激等使两者融合为一体，然后促使这一新细胞分裂繁殖发育成胚胎，当胚胎发育到一定程度后，再被植入动物子宫中使动物怀孕，便可产下与提供细胞者基因相同的动物。 1.2提取两个或多个人的基因细胞进行组合形成胚胎,植入受体子宫，最终产出幼体。

生物的生殖和发育

生物的生殖和发育 Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT

生物的生殖和发育 第一节、生物的生殖 一、生殖的类型 名词：1、生物的生殖：每种生物都能够产生自己的后代，这就是~。 2、无性生殖：是指不经过生殖细胞的结合，由母体直接产生出新个体的生殖方式。易保持亲代的性状。 3、有性生殖：是指经过两性生殖细胞(也叫配子)的结合，产生合子，由合子发育成新个体的生殖方式。这是生物界中普遍存在的生殖方式，具有双亲的遗传性，有更强的生活力和变异性。 4、分裂生殖(单细胞生物特有)：是生物体由一个母体分裂成两个子体的生殖方式。如变形虫、细菌、草履虫。 5、出芽生殖：母体→芽体→新个体，如水螅、酵母菌。 6、孢子生殖：母体→孢子→新个体，如青霉、曲霉。 7、营养生殖：植物的营养器官(根、茎、叶)发育为新个体，如马铃薯块茎、草莓的匍匐茎，秋海棠等。

8、嫁接：一种用植物体上的芽或枝，接到另一种有根系的植物体上，使接在一起的两部分长成一个完整的新植物体的方法。 9、植物组织培养技术：外植体(离体组织或器官)→消毒→接种→愈伤组织(组织没有发生分化，只是一团薄壁细胞)→组织器官→完整植株。 10、配子生殖：由亲体产生的有性生殖细胞——配子，两两相配成对，互相结合，成为合子，再由合子发育成新个体的生殖方式，叫做～。 11、卵式生殖：卵细胞与精子结合的生殖方式叫做～。凡是种子植物用种子进行繁殖时，都属予卵式生殖。 12、受精作用：精子与卵细胞结合成为合子的过程，叫做～。 13、花粉管：是萌发的花粉粒内壁突出，从萌发孔伸出而形成的管状结构。主要作用是将其携带的精子和其他内容物运至卵器或卵细胞内，以利于受精作用。 14、双受精：一个精子与卵细胞结合成为合子，又叫受精卵(染色体为2N);另一个精子与两个极核结合成为受精极核(染色体为3N)，这种被子植物特有的受精现象叫做双受精。

病毒感染细胞实验整体流程及原理

病毒感染细胞实验整体流程及原理 目的基因不能直接整合到大多数真核细胞，常用的手段是将目的基因包装成病毒来感染细胞，从而得到表达满足实验需求。 1、病毒的种类 病毒有很多种，常见的有慢病毒和腺病毒 1.1慢病毒 1.1.1原理 慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种。构建的siRNA / miRNA慢病毒载体，与化学合成的siRNA 和基于瞬时表达载体构建的普通siRNA 载体相比，一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用，另一方面，Lentivirus-siRNA 克隆经过慢病毒包装系统包装后，可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞，并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组，进行长时间的稳定表达。 1.1.2特点 1）直接包装成为假病毒颗粒，对分裂和非分裂细胞均有感染作用，适合RNAi 研究和体内实验中难于转染的细胞(比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞)。 2）可以通过简单方式，在短时间内获得稳定表达特定基因的多种细胞株。 3）可用于基因敲除、基因治疗和转基因动物研究。 4）无需任何转染试剂，操作简便。 5）可以根据客户需要制备多种标记。 1.1.3慢病毒包装简要流程： 1）含有目的基因的慢病毒RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化提取。 2）慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。 3）培养48hrs - 72hrs 左右，收集含有病毒的上清培养液。 4）病毒的纯化和浓缩。 5）分装、- 80 ℃保存。 6）滴度测定目的基因检定，并出具检测报告。 1.2、腺病毒 1.2.1原理 腺病毒(Adenovirus，Ad)是一种无包膜的线状双链DNA病毒，其复制不依赖于宿主细胞的分裂。有近50个血清型，大多数Ad载体都是基于血清型2和5，通过转基因的方式取代E1和E3基因，降低病毒的复制能力。这些重组病毒仅在高水平表达E1和E3基因的细胞中复制，因此是一种适用于治疗的高效控制系统。 1.2.2特点 1）几乎可以感染所有类型的细胞 2）可以获得复制缺陷型(E1 和E3 缺失) 的腺病毒 3）病毒滴度高，产生病毒经过浓缩后可以达到1012 PFU/mL，能有效的进行增殖。4）腺病毒载体感染宿主的范围比较广，制备容易，操作简单.

治疗性克隆面临的机遇与挑战(一)

治疗性克隆面临的机遇与挑战(一) 【关键词】治疗性克隆 【关键词】治疗性克隆；细胞核;移植；胚胎干细胞 1治疗性克隆概述 治疗性克隆（therapeuticcloning）是体细胞核移植技术和最新的人胚胎干细胞技术结合的产物，将成为人类医疗历史上革命性的技术.该技术首先应用患者体细胞，如皮肤细胞、骨髓间充质干细胞，作为核供体，移植入去核的人卵母细胞，获得克隆胚胎；然后从克隆胚胎分离建立胚胎干细胞系；并将这些胚胎干细胞在一定条件下，诱导分化成所需要的各种类型的细胞用于治疗目的〔1,2〕.目前已报道，将产生多巴胺的神经元细胞用于治疗帕金森症〔3〕，将产生胰岛素的胰岛细胞治疗糖尿病患者〔4〕.从理论上来说由于使用的是患者自身的细胞生产出来的治疗用细胞，移植这些细胞到患者体内将不会产生免疫排斥反应.另一方面，每年都有数以百万计的患者需要细胞、组织的修复或者器官移植，由于胚胎干细胞可以无限传代，在数量上可以保证治疗的需要，从而解决可供移植的细胞、组织和器官来源严重不足的瓶颈问题〔5〕，为人类健康和长寿提供了新的希望. 近年来，利用核移植技术和胚胎干细胞技术相继建立了人核移植胚胎干（nucleartransferembryonicstemcell，ntES）细胞系和人兔异种间ntES细胞.这2项阶段性研究成果的取得，标志着治疗性克隆研究的巨大进步.韩国科学家Hwang等〔6〕通过核移植技术获得了人人ntES细胞.他们以健康女性志愿者的体细胞为核供体，以其自身卵母细胞为受体.在30枚核移植囊胚中，得到20个内细胞团（ICMs），建成1株人ntES细胞系，可传代培养70代以上.上海第二医科大学盛惠珍研究小组〔7〕在国际上首次构建了人兔核移植重构胚.分别将5，42，52和60岁4个年龄组的人皮肤成纤维细胞核移入去核兔卵母细胞内，获得ntES细胞，通过原位杂交、免疫组化、核型和同源基因分析等证实ntES细胞具有人源性，并且保持干细胞的未分化特性，能形成类胚体，在一定诱导条件下可以分化为神经、肌肉等3个胚层的细胞群.200506，汉城国立大学的研究者〔8〕以患者的皮肤细胞为供体，以志愿者捐赠的卵母细胞为受体，利用体细胞核移植技术成功建立11株人核移植胚胎干细胞，这些细胞具有多能性，染色体正常，与供核患者的DNA一致、组织相容性抗原一致. 2治疗性克隆的应用前景 ES细胞在生物医学的各个领域均有广阔的应用前景，ntES细胞也有着同样广阔的前景，为临床治疗学、细胞生物学、生物发育学、比较动物学等研究提供研究材料和方法. 2.1临床疾病的治疗ntES细胞与普通的细胞移植治疗相比，具有革命性的进步.它以患者的体细胞为核供体，通过核移植技术获得的ntES细胞，与患者的遗传物质相同，可以消除受体对供体的免疫排斥反应，为目前多种退形性疾病，如心脏病、脊髓损伤、帕金森病、1型糖尿病等的治疗带来了新的希望.特别是一些目前还没有找出致病基因的遗传病，如脊髓侧索硬化症，ntES细胞移植是最有希望的治疗方法.目前已经应用ntES细胞在体内外分化成多种细胞，包括神经细胞和生殖细胞〔9,10〕.尤其Barberi等〔9〕建立了一套方法，能使ntES 细胞向中枢神经系统细胞特定分化，能产生高效率的神经胶质细胞、寡突细胞、神经元细胞，包括多巴胺能神经元、γ氨基丁酸能神经元等，将分化的多巴胺能神经元移植到Parkinson 病模型后，能改善其症状.细胞治疗的途径有两种：其一，ntES细胞定向分化后移植.细胞扩增后，体外定向分化，对分化细胞进行纯化，将获得的目的细胞移植到病变部位，替代丧失功能的部分细胞；其二，ntES细胞原位移植.与定向分化后相比，ntES细胞原位移植有以下缺点：①没有经过纯化，可能将污染的异源饲养层细胞带进移植部位；②ntES细胞没有转入经选择基因，无法控制植入细胞的命运，可能发生癌变；③ntES细胞分化成分复杂，目的细胞分化成分少，可能出现大量非必须细胞的分化. 2.2细胞生物学通过研究ntES细胞的体外分化特性，可以识别某些靶基因，对人类新基因的

克隆载体与表达载体

克隆载体：大多是高拷贝的载体，一般是原核细菌，将需要克隆的基因与克隆载体的质粒相连接，再导入原核细菌内，质粒会在原核细菌内大量复制，形成大量的基因克隆，被克隆的基因不一定会表达，但一定被大量复制。克隆载体只是为了保存基因片段，这样细胞内不会有很多表达的蛋白质而影响别的工作。 克隆载体(Cloning vector )：携带插入外源片段的质粒或噬菌体，从而产生更多物质或蛋白质产物。(这是为“携带”感兴趣的外源DNA、实现外源DNA的无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子。) 其中，为使插入的外源DNA序列可转录、进而翻译成多肽链而设计的克隆载体又称表达载体。 是否含有表达系统元件，即启动子--核糖体结合位点--克隆位点--转录终止信号，这是用来区别克隆载体和表达载体的标志。 表达载体：有的是高拷贝的，有的是低拷贝的，各有各的用处，是一些用于工程生产的细菌，被导入的目标基因会在此类细菌中得到表达，生产出我们需要的产物，导入的基因是由克隆载体产出的。表达载体具有较高的蛋白质表达效率，一般因为具有强的启动子。 表达载体（Expression vectors）就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件（如启动子、RBS、终止子等），是目的基因能够表达的载体。如表达载体pKK223-3是一个具有典型表达结构的大肠杆菌表 达载体。其基本骨架为来自pBR322和pUC的质粒复制起点和氨苄青霉素抗性基因。在表达元件中，有一 个杂合tac强启动子和终止子，在启动子下游有RBS位点（如果利用这个位点，要求与ATG之间间隔5-13bp），其后的多克隆位点可装载要表达的目标基因。 （RBS位点：1974年Shine和Dalgarno首先发现，原核生物，在mRNA上有核糖体的结合位点，它们 是起始密码子AUG和一段位于AUG上游3～10 bp处的由 3—9bp组成的序列。这段序列富含嘌呤核苷酸，刚好与16S rRNA 3，末端的富含嘧啶的序列互补，是核糖体RNA的识别与结合位点。根据发现者的名字，命名为Shine-Dalgarno序列，简称S-D序列。 由于它正好与30S小亚基中的16s rRNA3’端一部分序列互补，因此S-D序列也叫做核糖体结合序列。 真核生物存在于真核生物mRNA的一段序列，其在翻译的起始中有重要作用。加Kozark sequence(GCCACC), Kozak sequence是用来增强真核基因的翻译效率的。是最优化的ATG环境，避免ribosome出现leaky scan） 克隆载体目的在于复制足够多的目标质粒，所以常带有较强的自我复制元件，如复制起始位点等，往往 在菌体内存在多拷贝，所以抽质粒会抽出一大堆。但不具备表达元件。而表达质粒有复杂的构成，为的是控制目标蛋白的表达，如各种启动子（T7），调节子（LacZ）等，而且以pET为代表的表达载体在菌体内都是低拷贝的，防止渗漏表达。 克隆载体只是把你要的基因片段拿到就可以了，不管读码框什么的，但是表达载体是不但要你的目的基因连在上面，而且要表达蛋白，所以就要求你的读码框不能乱了，否则就不能得到你想到的表达产物。 1.载体即要把一个有用的基因（目的基因——研究或应用基因）通过基因工程手段送到生物细胞（受体细胞），需要运载工具（交通工具）携带外源基因进入受体细胞，这种运载工具就叫做载体（vector）。 2. 载体的分类 按功能分成：（1）克隆载体: 都有一个松弛的复制子，能带动外源基因，在宿主细胞中复制扩增。它是 用来克隆和扩增DNA片段（基因）的载体。（2）表达载体 :具有克隆载体的基本元件（ori,Ampr,Mcs等）还具有转录/翻译所必需的DNA顺序的载体。 按进入受体细胞类型分：（1）原核载体（2）真核载体（3）穿梭载体（sbuttle vector）指在两种宿主生物体内复制的载体分子，因而可以运载目的基因（穿梭往返两种生物之间）. 克隆载体顾名思义就是质粒拷贝数比较高,在做上游克隆时比较方便, 其重点在于质粒的复制.

大连附一李素玮感染性休克中动脉弹性失偶联对心室-动脉偶联关系的影响

感染性休克中动脉弹性失偶联对心室-动脉偶联关系的影响 李素玮，万献尧 大连医科大学附属一院重症医学科 目的：研究感染性休克中动脉弹性失偶联情况及其对心室-动脉偶联关系的影响。 方法：通过静脉注射内毒素建立感染性休克兔模型10只，术后稳定30分钟，设为0h点，1h点静脉注射内毒素，分别于2h点（注射内毒素后1h）和4h点（注射内毒素后3h）行去甲肾上腺素（NE）刺激试验（应用NE 升高血压至0h点水平），监测并记录0h点、2h点（刺激实验前后）及4h （刺激实验前后）血流动力学指标变化。 结果：2h点及4h点外周血管阻力（SVR）较0h点明显降低，2h点与4h 点差异不显著，NE刺激后SVR有增高，但较0h仍明显降低；2h点及4h 主-股动脉脉搏传导速度（PWV）较0h点明显增高，2h点与4h点差异不显著，NE刺激后PWV变化不明显；0h点、2h点及4h点主动脉压增加指数（AAIX）呈逐渐降低趋势，各时点差异均有统计学意义，NE刺激后AAIX 均显著增加，均高于0h点；0h点、2h点及4h点左心室收缩末弹性（Ees）呈逐渐降低趋势，各时点差异均有统计学意义，NE刺激后均显著增加，2h 点较0点无显著差异，4h点仍明显低于0h点；0h点、2h点及4h点有效动脉弹性（Ea）呈逐渐降低趋势，各时点间差异均有统计学意义，NE刺激后均显著增加，均较0h无显著差异；2h点Ea/Ees较0h点无显著差异，4h点Ea/Ees较0h点显著增高，NE刺激后均显著增加，且显著高于0h点。

结论：（1）感染性休克中存在动脉弹性失偶联，（2）动脉弹性失偶联可能加重心室-动脉失偶联，（3）NE应用后，AAIX的显著增加可能加重心室-动脉失偶联。 关键词：感染性休克，动脉弹性失偶联，左心室-动脉偶联