紫外分光光度法计算

第20章 吸光光度法

思考题

1. 什么叫单色光？复色光？哪一种光适用于朗伯－比耳定律？

答：仅具有单一波长的光叫单色光。由不同波长的光所组成光称为复合光。朗伯--比耳定律应适用于单色光。

2. 什么叫互补色？与物质的颜色有何关系？

答：如果两种适当的单色光按一定的强度比例混合后形成白光，这两种光称为互补色光。当混合光照射物质分子时，分子选择性地吸收一定波长的光，而其它波长的光则透过，物质呈现透过光的颜色，透过光与吸收光就是互补色光。

3. 何谓透光率和吸光度？ 两者有何关系？

答：透光率是指透射光强和入射光强之比，用T 表示 T =

t

I I 吸光度是吸光物质对入射光的吸收程度，用A 表示，A εbc =，其两者的关系 lg =-A T

4. 朗伯-比耳定律的物理意义是什么？ 什么叫吸收曲线？ 什么叫标准曲线？

答：朗伯--比耳定律是吸光光度法定量分析的理论依据，即吸光物质溶液对光的吸收程度与溶液浓度和液层厚度之间的定量关系。数学表达式为

lg A T εbc =-=

吸收曲线是描述某一吸光物质对不同波长光的吸收能力的曲线，即在不同波长处测得吸光度，波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图即可得到吸收曲线。

标准曲线是描述在一定波长下，某一吸光物质不同浓度的溶液的吸光能力的曲线，吸光度为纵坐标，浓度为横坐标作图即可得到。

5. 何谓摩尔吸光系数？质量吸光系数？两者有何关系？

答：吸光系数是吸光物质吸光能力的量度。摩尔吸光系数是指浓度为1.0 mol·L ，液层度为1cm 时，吸光物质的溶液在某一波长下的吸光度。用ε表示，其单位 11cm mol L --??。 质量吸光系数是吸光物质的浓度为1g 1L -?时的吸光度，用a 表示。其单位 11cm g L --?? 两者的关系为 εM a =?M 为被测物的摩尔质量。

6. 分光光度法的误差来源有哪些？

答：误差来源主要有两方面，一是所用仪器提供的单色光不纯，因为单色光不纯时，朗伯—比耳定律中吸光度和浓度之间的关系偏离线性；二是吸光物质本身的化学反应，其结果同样

引起朗伯—比耳定律的偏离。

7. 分光光度计的基本部件有哪些？

答：主要部件有：光源，色散元件（单色器），吸收池，检测器，记录仪。

8. 如何选择参比溶液？

答：选择参比溶液的原则为

（1）若只有显色反应产物有吸收，其它均无吸收时，可用纯溶剂作参比溶液。

（2）若显色剂或其它试剂有吸收，试样本身无吸收，则可用“试剂空白”作参比溶液。（3）若试样本身有吸收，而显色剂等其它试剂无吸收，可用“试样空白”作参比溶液。（4）若显色剂、试样中其它组分有吸收，则可在试液中加入掩蔽剂将被测组分掩蔽后再加显色剂，作为参比溶液。

9. 何谓示差分光光度法？此法主要适合于哪些样品的测定？它为什么能提高测定的准确度？答：示差分光光度法是指试样溶液的吸光度和标准溶液吸光度之差与试样中被测组分浓度之间的定量关系进行分析的方法。此法主要适用于高含量组分的测定。

因为高浓度的样品透光率很小，引起较大的透光率读数误差，而示差分光光度法采用比试样浓度较低的标准溶液作参比溶液，使透光率的读数标尺放大，其读数在透光率的适宜范围（10%~70%）内，可提高测定准确度。

10. 利用光度滴定法判断滴定终点的依据是什么？

答：光度滴定法确定终点的依据是滴定过程中被测组分与滴定反应产物吸光度的变化。以吸光度对滴定体积作图，所得曲线的转折点处即为滴定终点，如下图所示。

用EDTA滴定Bi3+ 和Cu2+的光度滴定曲线

11. 测定工业盐酸中铁含量时，常用盐酸羟胺还原Fe3+，用邻二氮杂菲显色。显色剂本身及

其他试剂均无色，邻二氮杂菲-Fe2+为橙色。用标准曲线法进行工业盐酸中微量铁含量分析时，应选用什么作参比溶液?

答：应选用纯溶剂作参比溶液，如蒸馏水。

习 题

1. 有两种不同浓度的有色溶液，当液层厚度相同时，对于某一波长的光，透光率T 分别为（1）65.0%，（2）41.8%，求它们的吸光度A 。若已知溶液（1）的浓度为6.51×10-4 mol·L -1，求溶液（2）的浓度。 解：透光率换算成吸光度

A 1 = -lg T 1 = -lg0.65 = 0.187 A 2 = -lg T 2 = -lg0.418 = 0.379

根据朗伯比耳定律 A 1 = εc 1b 1 A 2 = εc 2b 2

因为相同物质的吸光系数相等，两式相除后得

3121210.379 6.5110 1.3210(mol L )0.187

A c c A -

--??===??

2. 一束单色光通过厚度为1cm 的有色溶液后，透光率为70%，当它们通过5cm 厚的相同溶液后，透光率变为多少？

解：由已知条件：A 1 = ε b 1c = -lg T 1 = -lg0.70 = 0.155

可求出 ε c = 0.155/1 = 0.155

ε c 值代入改变厚度后的关系式中，得

A 2 = ε c b 2 = 0155 ? 5 = 0.775

把吸光度换算为透光率

20.775210100.167916.79%A T --====

3. 已知某一吸光物质的摩尔吸光系数为1.1×104L·mol -1·cm -1，当此物质溶液的浓度为3.00×10-5mol·L -1，液层厚度为0.5 cm 时，求A 和T 。 解：A = ε b c = 165.05.01000.3101.154=????-

0.16510100.683968.39%A T --====

4. 用1cm 的比色皿在525 nm 波长处测得浓度为1.28×10-4 mol·L -1KMnO 4溶液的透光率是

50%，试求：（1）此溶液的吸光度是多少？

（2）如果KMnO 4的浓度是原来浓度的两倍，透光率和吸光度各是多少？ （3）在1cm 比色皿中，若透光率是75％，则其浓度又是多少？ 解：（1）A = -lg T = -lg0.5 = 0.301

（2）浓度为2倍时，c = 2 ? 1.28 ? 10-4 = 2.56 ? 10-4（mol·L -1）

此时两种溶液的吸光度相比可得

4

1224

10.301 2.56100.6021.2810A c A c --??===?

透光率为20.602210100.2525.00%A T --====

（3） 透光率T = 75%时，

A = -lg T = -lg0.75 = 0.125

故浓度为

4

5131310.125 1.2810 5.3210(mol L )0.301

A c c A ---??===??

5. 浓度为25.5 μg/50 mL 的Cu 2+ 溶液，用双环己酮草酰二腙比色测定。在波长600 nm 处，用1 cm 的比色皿测得T = 70.8%，求摩尔吸光系数和质量吸光系数。 解：Cu 2+溶液的浓度：

66125.5101000

8.0310(mol L )63.550

c ---??==???

透光率换算为吸光度： A = -lg T = -lg0.708 = 0.150 根据朗伯比耳定律

4116

0.150 1.8710(L mol cm )1.08.0310

A εcb ---===????? 4112.3510294.2(L g cm )63.55

εa M --?===??

6. 0.088 mg Fe 3+，用硫氰酸盐显色后，在容量瓶中用水稀释至50 mL ，用1cm 比色皿，在波长480 nm 处测得A = 0.740。求吸光系数a 和 ε 。

解： 先计算Fe 3+溶液的浓度

33511010000.088101000 3.1510(mol L )5055.850

m c M ----???=?==???

由朗伯比耳定律A = ε b c

4115

0.740 2.3510(L mol cm )3.1510 1.0

A εcb ---===????? 4112.3510421(L g cm )55.8

εa M --?===??

7. 有一化合物的摩尔质量是125，摩尔吸光系数为2.50×104 L·mol -1·cm -1，今欲配制该化合物的溶液1L ，使其在稀释1200倍后，在1 cm 的比色皿中测得的吸光度为0.60，则应称取该化合物多少克？

解：根据朗伯－比耳定律求算该物质溶液的浓度

5140.60 2.410(mol L )1.0 2.510A c εb --===????

稀释前的浓度为1200 × 2.4×10-5 = 2.88×10-2（mol ?L -1） 要配制1L 该溶液所需称量化合物的质量为

22.8810125 3.6(g)m nM -==??=

8. 今有一台分光光度计，透光率的读数误差为0.5%。计算在下列吸光度时，测得的浓度相对误差（只考虑正误差）？从计算结果得出何结论 ？

（1）0.095 （2）0.631 （3）0.803 （4）0.942 解：已知透光率读数误差?T = 0.5%

（1）当A = 0.095时， 0.09510100.803580.35%A T --==== 由误差公式：

0.4340.4340.0050.0284 2.84%lg 0.8035lg0.8035

c T c T T ??=??===? （2）当A = 0.631时， 0.63110100.233923.39%A T --==== 由误差公式：

0.4340.4340.0050.0147 1.47%lg 0.2339lg0.2339

c T c T T ??=??===? （3）当A = 0.803 时， 0.80310100.157415.74%A T --==== 由误差公式：

0.4340.4340.0050.0172 1.72%lg 0.1574lg0.1574

c T c T T ??=??===? （4）当A = 0.942时， 0.94210100.114311.43%A T --==== 由误差公式：

0.4340.4340.0050.0202 2.02%lg 0.1143lg0.1143

c T c T T ??=??===? 结果表明吸光度过大或过小时，产生的相对误差较大。

9.某溶液浓度为c ，以纯试剂作参比溶液时，吸光度A 为0.434，设仪器读数误差为0.2%，（1）

求浓度的相对误差。（2）在相同测量条件下，浓度为3c 的溶液在测量时引起的浓度相对误差为多少？（只考虑正误差）（3）计算结果说明什么？

解：（1）吸光度换算为透光率0.43410100.3681A T --===，已知?T = 0.2% 根据浓度相对误差公式

0.4340.4340.0020.00540.54%lg 0.3681lg0.3681

c T c T T ??=??===? （2）其他条件不变，浓度变为3c 时，吸光度变为A = 3A 1 = 3 × 0.434 = 1.302 则透光率为 1.30210100.0499A T --===

0.4340.4340.002

0.0133 1.33%TlgT 0.0499lg0.0499

c T c ??=??===? （3）结果表明浓度过大时，相对误差较大。

10.在1.00cm 比色皿中测得下列数据，求A+B 混合液中A 和B 的物质的量浓度分别为多少？

溶液 浓度/ mol·L -1 吸光度（450nm ）

吸光度（700nm ）

A 5.0×10–4 0.800 0.100

B 2.0×10–4 0.100 0.600 A+ B

未知

0.600

1.000

解：根据已知条件，计算不同物质在两个波长下的摩尔吸光系数

A 物质：λ1 = 450nm 处， A = 1A,λεcb ，13A,4A 0.8

1.48105.410

λA εc b -=

==?? λ2 = 700nm 处， A = 2A,λεcb ，22

A,4

A 0.1 1.8510

5.410λA εc b -=

==?? B 物质：λ1 = 450nm 处， A = 1B,λεcb ， 12B,4B 0.1 5.0102.010

λA εc b -=

==?? λ2 = 700nm 处， A = 2B,λεcb ，23

B,4

B 1.0 5.010

2.010λA εc b -=

==?? 根据混合试样的测定数据，可以建立如下联立方程式：

450A,450B,450A,450A B,450B A A A εc b εc b =+=+ 700A,700B,700A,700A B,700B A A A εc b εc b =+=+ 32A B 0.6 1.4810 1.0 5.010 1.0c c =???+??? 23A B 1.0 1.8510 1.0 5.010 1.0c c =???+???

解上述联立方程式

41A 3.4210(mol L )c --=??

41B 1.8710(mol L )c --=??

11. 用8－羟基喹啉－氯仿萃取比色法测定Fe 3+ 和Al 3+ 时，吸收曲线有部分重叠。在相应的条

件下，用纯铝1μg 在波长390 nm 和470 nm 处分别测得A 为0.025和0.000，纯铁1μg 在波长390 nm 和470 nm 处分别测得A 为0.010和0.020。现取1mg 含铁、铝的试样， 在波长390 nm 和470 nm 处测得试液的吸光度分别为0.500和0.300。求试样中Fe 和Al 的质量分数。

解：先计算铝和铁在不同波长下的质量吸光系数，设吸收池厚度为1.0cm ，标样和试样体积均为1.0L 。因为Al 和铁标准溶液的浓度均为1μg/L ，由朗伯－比耳定律

在λ = 390 nm 处：

Al Al,390Al A a c b =411Al Al,3906Al 0.025

2.510(L g cm )1.010

A a c b ---=

==???? Fe Fe,390Fe A a c b =411

Fe Fe,3906

Fe 0.01 1.010(L g cm )1.010A a c b ---=

==???? 在λ = 470 nm 处：

Al Al,470Al 0A a c b ==Al,4700a = Fe Fe,470Fe A a c b =411

Fe Fe,4706

Fe 0.02 2.010(L g cm )1.010

A a c b ---=

==???? 利用未知溶液的浓度和吸光度建立联立方程式

390Al,390Fe,390Al,390Al Fe,390Fe A A A a c b a c b =+=+

470Al,470Fe,470Al,470Al Fe,470Fe A A A a c b a c b =+=+ 44Al Fe 0.500 2.510 1.010c c =?+? 4Fe 0.300 2.010c =?

解联立方程31Al 1.410(g L )c --=??

51Fe 1.510(g L )c --=??

质量分数分别为53

Al 1.41010100% 1.40%1

w -??=?=

53

Fe 1.51010100% 1.50%1

w -??=?=

12. 用普通的分光光度法测定0.00100 mol·L -1锌标准溶液和含锌的试样溶液，分别测得A 标 =

0.700，A 试样= 1.00。若用0.00100 mol·L -1 锌标准溶液作参比溶液，此时试样溶液的吸光度是多少？读数标尺扩大了多少倍？

解：用标准溶液作参比溶液时，可用示差法求算试样溶液的吸光度 先计算试样溶液的浓度 1.000.00100

1.430.700

A c c A ??=

=

=?试样标

试样标

3110(mol L )--?

再利用标准溶液的吸光度和浓度计算εb 值：

0.7007000.00100

A εb c =

== 根据示差法A εb c ?=?，标准溶液作参比溶液时，试样溶液的吸光度为

()4700 4.3100.301A εb c c ?==??=－试样标－

因普通分光光度法时，试样的透光率 1.010100.100010.00%A T ====－－ 而示差法时试样的透光率为 0.30110100.500050.00%A T ====－－

所以读数标尺扩大了5=10

50

倍。

13. 用硅钼蓝法测定SiO 2。用浓度为0.020 mg·mL -1 的SiO 2标准溶液作参比溶液， 测定另一

浓度为0.100 mg·mL -1的SiO 2标准溶液， 测得透光率T 为14.4%。 今有一未知溶液，在相同的条件下测得透光率T 为31.8%。求该未知溶液的SiO 2浓度。（提示：A x －A s = ab △c 。） 解：透光率换算为吸光度A = -lg T = -lg0.144 = 0.842

根据示差法原理由已知浓度的溶液的吸光度，求出质量吸光系数与液层厚度的乘积ab

A ab c ?=?， 0.84210.530.10.02

A ab c ?=

==?－ 因样品的透光率为31.8％，其吸光度 A = -lg T = -lg0.318 = 0.498 故，试样中SiO 2的浓度为

10.4980.0200.0673(mg mL )10.53

A c c ab －样标?=

+=+=?

14. 用磺基水杨酸法测定微量铁。标准溶液是由0.2160 g 的NH 4Fe(SO 4)2·12H 2O 溶于水中稀释

至500 mL 配制。根据下列数据，绘制标准曲线：

标准铁溶液体积V /mL

0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 吸光度A

0.0

0.165

0.320

0.480

0.630

0.790

某试液5.0 mL ，稀释至250 mL 。取此稀释液2.0 mL ，与绘制标准曲线相同条件下显色和测定吸光度，测得A = 0.500，求试液中铁的含量（mg /mL ）。 解：原始铁标准溶液的浓度为4110000.21601000

c 8.95910(mol L )500482.18500

m M －－标标标＝=

??=?? 所加入标准溶液的体积为横坐标，吸光度为纵坐标作图可得如下标准曲线与回归方程。

因为试样的吸光度为0.5，在标准曲线上查找对应的体积为6.2mL 若利用回归方程 y = 0.0786 x+ 0.0043，计算得相应体积为6.3mL

根据标准溶液的浓度，6.3mL 相当的铁物质的量为 mmol 10×644.5=3.6×10×959.834－－ 再根据被测试样的稀释倍数计算原来溶液的浓度

31250

5.64410 2.529(mg mL )2555.8

c －－试样=??

=???

15. 若某一元弱酸的浓度为2.0×10-4 mol·L -1时，在不同的pH 缓冲溶液中，以1.0 cm 吸收池

于520 nm 波长下测得如下吸光度数据：

pH 0.88 1.17 2.99 3.41 3.95 4.89 5.50 A 0.890 0.890 0.692 0.552 0.385 0.260 0.260 计算该一元弱酸的离解常数a K θ。

解：由酸常数的计算公式HL a

L [H ]A A K A A -

θ

+

-=-

式中A HL 为高酸度时的吸光度，本题中为A HL = 0.890；

L A -为低酸度时的吸光度，本题中为L 0.260A -=

A 为某一酸度时的吸光度，可选[H+] = 10-3.41时，A = 0.552 则可计算酸常数

3.414HL a L A 0.890.552

[H ]10 4.50100.5520.260

A K A A -θ+----=

=?=?--

16. 用摩尔比法测定镁与有机试剂的配合比，固定镁的浓度为1.0×10-3 mol·L -1，加入改变有机

试剂的浓度，分别测定吸光度，测得如下表的数据。求配合物的组成和配合物的稳定常数。

序号 c Mg / mol·L -1 c HR / mol·L -1 A 1 1.0×10-3 0.2×10-3 0.065 2 1.0×10-3 0.4×10-3 0.150 3 1.0×10-3 0.6×10-3 0.225 4 1.0×10-3 0.8×10-3 0.294 5 1.0×10-3 1.0×10-3 0.355 6 1.0×10-3 1.2×10-3 0.385 7 1.0×10-3 1.4×10-3 0.400 8

1.0×10-3

2.0×10-3

0.400

解：由表中的数据可计算出金属镁与有机试剂的摩尔比，并整理成如下表

摩尔比 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 2.0 吸光度A

0.065

0.150

0.225

0.294

0.355

0.385

0.400

0.400

以摩尔比为横坐标，吸光度为纵坐标作图可得如下关系曲线。

延长两个直线部分，相交于B 点，测得B 点对应的纵坐标1.0，说明配合物的摩尔比为1:1，即配合物的组成为 MgR 。 配合物的稳定常数可按下式计算

[][][][][]()[]()

Mg R MgR MgR Mg R MgR MgR K c c θ=

=?稳－－

Mg R /(/)(/)A ε

c A εc A ε=

－－

2

Mg /(/)A ε

c A ε=

－

式中配合物的摩尔吸光系数可利用吸光度A 0 = 0.400和金属镁离子浓度1.0×10-3 mol·L -1来计算

即 1103Mg 0.400

400(L mol cm )1.010

A εc －－－=

==??? 根据实验数据先计算不同吸光度时的稳定常数，再平均即可得到该配合物的稳定常数。 A = 0.15时：

[][][]423242

Mg

MgR /0.15/400 3.7510960Mg R (/)(1.0100.15/400) 6.2510A εK c A εθ?=====???－稳

－－－－（） 同理A = 0.294时： 41.0510K θ

=?稳

A = 0.355时： 47.0110K θ

=?稳

其平均值为 42.7210K θ

=?稳

吸光度与摩尔比的关系曲线

主成分自身对照法

用于测定杂质含量。可分为加校正因子的主成分自身对照法和不见校正因子的主成分自身对照法。

加校正因子的主成分自身对照法精密称取杂质对照品和待测成分对照品各适量，配制测定杂质校正因子的溶液，进样，记录色谱图，按公式校正因子（f）=As×Cr/Ar×Cs(As为杂质对照品的峰面积或峰高，Cr为待测成分对照品的浓度，Ar为待测成分对照品的峰面积或峰高，Cs为杂质对照品待测成分的德浓度)计算杂质的校正因子。此校正因子可直接载入各品种正文中，用于校正杂质的实测峰面积。

测定杂质含量时，按个品种项下规定的杂质限度，将供试品溶液稀释成和在中限度相当的溶液作为对照溶液，进样，调节一起灵敏度，使对照溶液的主成分峰高达满量程的10%~25%。然后取供试品溶液和对照溶液适量，分别进样，供试品溶液的记录时间除另外规定外，因为主成分色谱峰保留时间的2倍，测量供试品溶液色谱图上个杂志的峰面积，分别乘以相应的校正因子后与对照溶液主成分的峰面积比较，依法计算各杂质含量。

不见校正因子的主成分自身对照法当没有杂质对照品时，也可以采用不见校正因子的主成分自身对照法。同上述配制对照溶液并调节一起灵敏度后，取供试品溶液和对照溶液适量，分别进样，前者的记录时间除另有规定外，因为主成分色谱峰保留时间的2倍，测量供试品溶液色谱图上各杂质的峰面积，并与对照溶液主成分的峰面积比较，计算杂质含量。

液相

气相

紫外分光光度法计算

第20章 吸光光度法 思 考 题 1. 什么叫单色光复色光哪一种光适用于朗伯－比耳定律 答：仅具有单一波长的光叫单色光。由不同波长的光所组成光称为复合光。朗伯--比耳定律应适用于单色光。 2. 什么叫互补色与物质的颜色有何关系 答：如果两种适当的单色光按一定的强度比例混合后形成白光，这两种光称为互补色光。当混合光照射物质分子时，分子选择性地吸收一定波长的光，而其它波长的光则透过，物质呈现透过光的颜色，透过光与吸收光就是互补色光。 3. 何谓透光率和吸光度 两者有何关系 答：透光率是指透射光强和入射光强之比，用T 表示 T = t I I 吸光度是吸光物质对入射光的吸收程度，用A 表示，A εbc =，其两者的关系 lg =-A T 4. 朗伯-比耳定律的物理意义是什么 什么叫吸收曲线 什么叫标准曲线 答：朗伯--比耳定律是吸光光度法定量分析的理论依据，即吸光物质溶液对光的吸收程度与溶液浓度和液层厚度之间的定量关系。数学表达式为 lg A T εbc =-= 吸收曲线是描述某一吸光物质对不同波长光的吸收能力的曲线，即在不同波长处测得吸光度，波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图即可得到吸收曲线。 标准曲线是描述在一定波长下，某一吸光物质不同浓度的溶液的吸光能力的曲线，吸光度为纵坐标，浓度为横坐标作图即可得到。 5. 何谓摩尔吸光系数质量吸光系数两者有何关系 答：吸光系数是吸光物质吸光能力的量度。摩尔吸光系数是指浓度为 mol ·L ，液层度为1cm 时，吸光物质的溶液在某一波长下的吸光度。用ε表示，其单位 11cm mol L --??。 质量吸光系数是吸光物质的浓度为1g 1L -?时的吸光度，用a 表示。其单位 11cm g L --?? 两者的关系为 εM a =? M 为被测物的摩尔质量。 6. 分光光度法的误差来源有哪些 答：误差来源主要有两方面，一是所用仪器提供的单色光不纯，因为单色光不纯时，朗伯—比耳定律中吸光度和浓度之间的关系偏离线性；二是吸光物质本身的化学反应，其结果同样

紫外分光光度法测定蛋白质含量

上海百贺仪器科技有限公司提供ｗｗｗ．ｓｏｕｔｈｈｋ．ｃｎ 紫外分光光度法测定蛋白质含量 摘要： 考马斯亮兰G250与蛋白质结合，在0－1000ug/ml范围内，于波长595nm 处的吸光度与蛋白质含量成正比，可用于蛋白质含量的测定。考马斯亮兰G250 与蛋白质结合迅速，结合产物在室温下10分钟内较为稳定，是一种较好的蛋白 质定量测定方法。 1.实验部分 1.1仪器与试剂： Labtech UV POWER紫外分光光度计；玻璃比色皿一套；考马斯亮蓝G250； 牛血清蛋白；超纯水。 1.2试液的制备： 牛血清蛋白标准溶液（1000ug/ml）的制备称取100mg牛血清蛋白置100ml 容量瓶中，加入超纯水溶解并定容。 考马斯亮兰G250试剂称取100mg考马斯亮兰G250，溶于50ml95％的乙 醇后，加入120ml85％的磷酸，用水稀释至1升。 2.结果与讨论 2.1校正曲线的绘制 准确吸取1000ug/ml牛血清蛋白标准溶液0.0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml 分别加入到6只10ml试管中，然后用超纯水补充到0.1ml，各试管分别加入5ml 考马斯亮兰G250试剂，混合均匀后，即可依次在595nm处测定吸光度。以浓度 为横坐标，吸光度为纵坐标绘制校正曲线如下图，校正曲线方程为 A=0.613556C+0.001008，R=0.9994。

上海百贺仪器科技有限公司ｗｗｗ．ｓｏｕｔｈｈｋ．ｃｎ 2.2精密度 配制0.6mg/ml牛血清蛋白的考马斯亮兰溶液连续进样6次，得到吸光度的 相对标准偏差。 表1精密度测定结果 次数123456RSD% A0.26260.26220.26200.26280.26290.26260.13 2.3稳定性 取1mg/ml牛血清蛋白标准溶液每十分钟测定一次，50分钟内的吸光度变化 如下表2。 表2稳定度测定结果 时间（min）A1A2A3A平均 00.55110.55230.55160.5517 100.52040.51840.51680.5185 200.49100.49010.49030.4905 300.47650.47160.47210.4734 400.45240.44750.44400.4480 500.39820.39350.40310.3983 3.结论 该方法测定快速、简便，干扰物少，是目前灵敏度较高的蛋白质含量测定 的紫外分光光度法。

紫外分光光度法测定维生素C和维生素E含量

紫外分光光度法测定维生素C和维生素E含量 【摘要】本实验利用紫外分光光度法测定由维生素C和维生素E组成的混合物中各组分的浓度。在这两种组分组成的混合物中，彼此都不影响另一种物质的光吸收性质，根据相互间光谱的重叠的程度采用相对的方法进行定量测定。 【关键词】紫外分光光度法；维生素C；维生素E；浓度 1、引言 维生素C（抗坏血酸）和维生素E(α-生育酚)在食品中能起抗氧化剂作用，即它们在一定时间内防止油脂变性。两者结合在一起比单独使用的效果更佳，因为它们在抗氧化性能方面是“协同的”。因此，它们作为一种有用的组合试剂用于各种食品中。维生素C是水溶性的，维生素E是酯溶性的，它们都能溶于无水乙醇，因此能在同一溶液中，能够利用紫外可见分光光度法测定双组分相同的原理，在紫外光区测定它们。 2、实验原理 根据朗伯—比尔定律，用紫外—可见分光光度法很容易定量测定在此光谱区内有吸收的单一成分。由两种组分组成的混合物中，若彼此都不影响另一种物质的光吸收性质，可根据相互间光谱重叠的程度，采用相对的方法来进行定量测定。例如，当两组分吸收峰部分重叠时，选择适当的波长，仍可按测定单一组分的方法处理；但当两组分吸收峰大部分重叠时，则宜采用解联立方程组或双波长法等方法进行测定。

混合组分中在λ1处的吸收等于组分A 和组分B 分别在λ1处的吸 光度之和A λ1 A+B ，即： A λ1A+B =κλ1A bc A +κλ1B bc B 同理，混合组分在λ2处吸光度之和A λ2A+B 应为： A λ2 A+B =κλ2A bc A +κλ2B bc B 若先用A 、B 组分的标样，分别测的A 、B 两组分在λ1和λ2处的摩尔吸收系数κλ1A 、κλ2A 、κλ1B 、κλ2B ；当测的未知试样在λ1和λ 1处的吸光度A λ1A+B 和A λ2 A+B 后，解下列二元一次方程组： A λ1 A+B =κλ1A bc A +κλ1B bc B A λ2 A+B =κλ2A bc A +κλ2B bc B 即可求得A 、B 两组分各自的浓度c A 和c B 。 c A =（A λ1A+B ·κλ2B ? A λ2A+ B ·κλ1B ）/（κλ1A ·κλ2B ?κλ2A ·κλ1B ） c B =（A λ1 A+B ?κλ1A ·c A ）/κλ1B 一般来说，为了提高检测的灵敏度，λ1和λ2宜分别选择在A 、 B 两组分最大吸收峰处或其附近。 3、紫外分光光度法测定维生素C 和维生素E 含量 3.1、仪器试剂 仪器：紫外-可见分光光度计（天津港东UV-4501S ），石英吸收 池一对 试剂：维生素C （抗坏血酸），维生素E(α-生育酚)，无水乙醇 3.2、实验步骤 3.2.1、 检查仪器 开机预热20min ，并调试至正常工作状态。

紫外-可见分光光度法测定有色溶液 (2)

紫外-可见分光光度法测有色溶液最大吸收波波长 一、实验目的 1.学习紫外-可见分光光度法的原理； 2.掌握紫外-可见分光光度法测定的实验技术； 3.了解掌握U-3010型紫外-可见分光光度仪的构造及使用方法。 二、实验原理 1.紫外-可见吸收光谱法(称紫外-可见分光光度法)以溶液中物质的分子或离 子对紫外和可见光谱区辐射能的选择性吸收为基础而建立起来的一类分析法。根据最大吸收波长可做定性分析；根据朗伯-比尔定律（标准曲线法和标准加入法）可做定量分析。紫外-可见分光光度法定性分析原理：根据吸收曲线中吸收峰的数目、位置、相对强度以及吸收峰的形状进行定性分析。 2.紫外-可见分光光度法定量分析原理，根据朗伯－比耳定律：A=εbc，当入 射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。定量分析常用的方法是标准曲线法即只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。 3.仪器由五个部分组成：即光源、单色器、吸收池、检测器和信号显示记录装 置。 三、仪器与试剂 日立U-3010型紫外-可见分光光度仪；吸量管；乙醇；待测溶液；烧杯等。 四、实验步骤 1.接通电源，启动计算机，打开主机电源开关，启动工作站并初始化仪器，预 热半小时。 2.在工作接口上选择测量项目为光谱扫描，设置扫描参数（起点：650nm，终 点：250nm，速度：中，间隔：1.0nm，单次扫描） 3.将两个均装有无水乙醇的1cm石英比色皿放入测量池中，进行基线扫描。 4.基线做好后，按下面的顺序进行操作：做Baseline→换样（换上待测样品置 于Sample池）→进入Analysis Method对相关的参数进行设定→Sample命名→Ready→Measure进行测量，寻找待测溶液的最大吸收波长，再在最大吸收波长处分别测定待测溶液的吸光度。

水中油类测定分析方法的综述

水中油类测定分析方法的综述 李海州 （浙江海洋学院海洋与技术学院，浙江舟山316004） [摘要]：本文对国内外学者有关水中油类的测定方法做了比较系统的综述。对几种水中油类的常用方法，重量法、紫外分光光度法、荧光分光光度法、红外分光光度法和非分散红外光度法做了简要介绍，并对其优劣进行了评价。另外，介绍了测定水中油类含量存在的难点、发展趋势和技术改进等。 关键词：水；油类；测定分析 油类是指任何类型的（矿物油、植物油等）及其炼制品（汽油、柴油、机油、煤油等）、油泥和油渣[1]。油类主要有漂浮油、分散油、乳化油、溶解油和油类附着在固体悬浮物表面而形成油膜---固体物5种形式。全世界每年至少有500—1000吨油类通过各种途径进入水体，由于漂浮于水体表面的油将会影响空气和水体表面氧的交换，而分散于水体中以及吸附于悬浮颗粒上或以乳化状态存在于水体的油易被微生物氧化分解，并将消耗水中的溶解氧，从而使水质恶化；油膜还能附着于鱼鳃上，使鱼类窒息而死；当鱼类产卵期，在含有油类污染物质废水中孵化的鱼苗，多数为畸形，生命力低下，易于死亡；含有油类污染物的废水进入水体后，造成的危害很为严重，不仅影响水生生

物的生长，降低水体的自我净化能力，而且影响水体附近的环境，因此，油类是水体环境中的主要污染物之一，在水质监测中，也是一项重要的监测项目。要消除油类对环境的污染和危害，首先就必须能够准确的测定水中油类的含量。 然而,水中油类含量测定又是比较复杂的，因为水中的油类成分是相当复杂的，此外不同地区、不同行业水体中油类污染的成分也不同，无法有用单一的油标准进行对照，无法准确测定，所以水体中油类物质含量的测定问题是环境分析化学一个古老、重要而又困难的问题。目前水体中油类测定常用的方法有重量法、紫外分光光度法、荧光分光光度法、非分散红外光度和国家最新颁布的国家标准方法红外分光光度法等[2]，本文简要介绍以上几种方法的原理和优劣，及人们对水体中油类监测分析方法的创新和改进。 1.重量法 重量法是用有机萃取剂（石油醚或正己烷）提取酸化了的样品中的油类，将溶剂蒸发掉后，称重后计算油类含量。重量法应用范围不受油品的限制，可测定含油量较高的污水，不需要特殊的仪器和试剂，测定结果的准确度较高、重复性较好。缺点是损失了沸点低于提取剂的油类成分，方法操作复杂，灵敏度低，分析时间长，并要耗费大量的提取剂，而且方法的精密度随操作条件和熟练程度不同差异很大。因此，水体中动植物油含量较高的，采用该方法较适合，可以得到比较准确的结果；工业废水、石油开采及炼制行业中含油量较高，此方

紫外可见分光光度法含量测定word版本

紫外可见分光光度法 含量测定

精品文档 【含量测定】照紫外-可见分光光度法(附录V A)测定。 1.仪器与测定条件：室温：____℃相对湿度：____% 分析天平编号：；水浴锅编号：； 紫外可见分光光度计编号：； 2.对照品溶液的制备： 取西贝母碱对照品适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml含_______mg的溶液，即得。 3. 供试品溶液的制备： 取本品粉末(过三号筛)约______g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液3ml，浸润1小时。加三氯甲烷-甲醇(4：1)混合溶液40ml，置80℃水浴加热回流2小时，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用适量三氯甲烷-甲醇(4：1)混合溶液洗涤药渣2～3次，洗液并入同一量瓶中，加三氯甲烷-甲醇(4：1)混合溶液至刻度，摇匀,即得。 4.标准曲线的制备： 精密量取对照品溶液0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、1.0ml，置25ml具塞试管中，分别补加三氯甲烷至10.0ml，精密加水5ml、再精密加0.05％溴甲酚绿缓冲液(取溴甲酚绿0.05g，用0.2mol／L氢氧化钠溶液6ml使溶解，加磷酸二氢钾1g，加水使溶解并稀释至100ml，即得)2ml，密塞，剧烈振摇，转移至分液漏斗中，放置30分钟。取三氯甲烷液，用干燥滤纸滤过，取续滤液，以相应的试剂为空白。 5.测定法： 照紫外-可见分光光度法 (附录Ⅴ A），在nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含西贝母碱的重量，计算，即得。 6.结果与计算 6.1 标准曲线制备： 收集于网络，如有侵权请联系管理员删除

常用紫外分光光度法测定蛋白质含量

6种方法测定蛋白质含量 一、微量凯氏（kjeldahl）定氮法 样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下：nh2ch2cooh+3h2so4——2co2+3so2+4h2o+nh3 (1) 2nh3+h2so4——(nh4)2so4 (2) (nh4)2so4+2naoh——2h2o+na2so4+2nh3 (3) 反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。 为了加速消化，可以加入cuso4作催化剂，k2so4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。 计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白 氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。 二、双缩脲法（biuret法） （一）实验原理 双缩脲（nh3conhconh3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与cuso4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。 紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、tris缓冲液和某些氨基酸等。 此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。 （二）试剂与器材 1. 试剂： （1）标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（bsa）或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用bsa浓度1mg/ml的a280为0.66来校正

环境监测人员上岗考核试题(水质 石油类的测定 紫外分光光度法)

环境监测人员上岗考核试题 （水质石油类的测定紫外分光光度法HJ970） 姓名：________ 评分：________ 一、不定项选择题（每题4分，共80分） 1、《水质石油类的测定紫外分光光度法》（HJ 970-2018）适用于（）中石油类的 测定。 A、地表水 B、地下水 C、海水 D、工业废水 2、《水质石油类的测定紫外分光光度法》（HJ 970-2018），当取样体积为 500 ml，萃取液体积为 25 ml，使用 2 cm 石英比色皿时，方法检出限为（） mg/L，测定下限为（）mg/L。 A、0.01 0.04 B、0.02 0.08 C、0.04 0.01 D、0.08 0.02 3、方法原理：在 pH≤2 的条件下，样品中的油类物质被正己烷萃取，萃取液经无水硫酸 钠脱水，再经硅酸镁吸附除去动植物油类等极性物质后，于（）nm 波长处测定吸光度，石油类含量与吸光度值符合朗伯-比尔定律。 A、200 B、225 C、250 D、325 4、方法中使用的正己烷，透光率需要达到（）%以上，方可使用。 A、70 B、80 C、85 D、90 5、方法中消除干扰的方式是（）。 A、萃取液经硅酸镁吸附处理后，可消除极性物质的干扰 B、高温加热回流冷凝 C、吹扫捕集 D、循环冷却 6、无水硫酸钠（Na2SO4）的处理方式：于 550℃下灼烧（）h，冷却后装入磨口玻璃 瓶中，置于干燥器内贮存。 A、1 B、2 C、3 D、4 7、硅酸镁（MgSiO3）选用的规格为（）μm。 A、100～200 B、150～250 C、200～300 D、250～350

8、硅酸镁（MgSiO3）的处理方式：于 550℃下灼烧（） h，冷却后称取适量硅酸镁于磨口玻璃瓶中，根据硅酸镁的重量，按（）%（m/m）的比例加入适量蒸馏水，密塞并充分振摇数分钟，放置（） h，备用。 A、4 B、8 C、6 D、12 9、硅酸镁吸附柱的填充高度是（）mm。 A、10 B、100 C、500 D、1000 10、石油类标准使用液：ρ=（）mg/L。 A、60 B、70 C、80 D、100 11、石油类标准使用液是使用石油类标准贮备液配制，使用的溶剂是（）。 A、甲醇 B、辛醇 C、正己烷 D、正葵烷 12、紫外分光光度计使用的比色皿规格是（）cm。 A、1 B、2 C、3 D、4 13、以下关于样品的采集保存条件的描述，正确是（）。 A、样品采集后，加入盐酸，酸化至 pH≤2。 B、如样品不能在 24 h 内测定，应在0℃～4℃冷藏保存，3 d 内测定。 C、样品最小采样量为1000ml。 D、采样瓶用棕色硬质玻璃瓶。 14、以下关于试样的制备，正确的是（）。 A、试样在分液漏斗萃取过程中，要充分振摇 2 min，期间经常开启旋塞排气。 B、试样脱水过程中若无水硫酸钠全部结块，需补加无水硫酸钠直至不再结块。 C、试样吸附过程中，置于振荡器上，以 180 r/min～220r/min 的速度振荡 20 min，静置沉淀。 D、以实验用水代替样品，按照试样萃取、脱水、吸附的制备步骤制备空白试样。 15、本方法的参比溶液是（）。 A、甲醇 B、辛醇 C、正己烷 D、正葵烷 16、本方法的标准系列浓度是（）。 A、0.00mg/L、0.25 mg/L、0.50 mg/L、1.00mg/L、2.00mg/L、4.00 mg/L。 B、0.00mg/L、0.50 mg/L、1.00 mg/L、2.00mg/L、4.00mg/L、8.00 mg/L。 C、0.00mg/L、0.75 mg/L、1.50 mg/L、3.00mg/L、6.00mg/L、12.0 mg/L。 D、0.00mg/L、1.00 mg/L、2.00 mg/L、4.00mg/L、6.00mg/L、16.0 mg/L。

紫外可见分光光度法含量测定

【含量测定】照紫外-可见分光光度法(附录V A)测定。 1.仪器与测定条件：室温：____℃相对湿度：____% 分析天平编号：；水浴锅编号：； 紫外可见分光光度计编号：； 2.对照品溶液的制备： 取西贝母碱对照品适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml含_______mg的溶液，即得。 3. 供试品溶液的制备： 取本品粉末(过三号筛)约______g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液3ml，浸润1小时。加三氯甲烷-甲醇(4：1)混合溶液40ml，置80℃水浴加热回流2小时，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用适量三氯甲烷-甲醇(4：1)混合溶液洗涤药渣2～3次，洗液并入同一量瓶中，加三氯甲烷-甲醇(4：1)混合溶液至刻度，摇匀,即得。 4.标准曲线的制备： 精密量取对照品溶液0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、1.0ml，置25ml具塞试管中，分别补加三氯甲烷至10.0ml，精密加水5ml、再精密加0.05％溴甲酚绿缓冲液(取溴甲酚绿0.05g，用0.2mol／L氢氧化钠溶液6ml使溶解，加磷酸二氢钾1g，加水使溶解并稀释至100ml，即得)2ml，密塞，剧烈振摇，转移至分液漏斗中，放置30分钟。取三氯甲烷液，用干燥滤纸滤过，取续滤液，以相应的试剂为空白。 5.测定法： 照紫外-可见分光光度法(附录ⅤA），在nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含西贝母碱的重量，计算，即得。 6.结果与计算 6.1 标准曲线制备：

对照品批号 纯 度 S 对照品来源 干燥条件 对照品称重W 对(mg) 各浓度点稀释倍数f 对 溶液浓度C 对(ug/ml) 吸光度A 对 线性回归方程 A=( )C ＋/-（ ） r ＝（ ） 计算公式： W S C f ?= 对对对 C 对= 6.2 样品测定： 水分Q 取样量W 样（g ） 样品稀释倍数f 样 样品吸光度A 样 样品平均吸光度A 样 浓度C(ug/ml) 含量X （%） 平均含量X （%） 计算公式：() %100Q 110W f C X 6 ?-???= 样样 样 X 1= X 2= 7.本品按干燥品计算，含总生物碱以西贝母碱(C 27H 43NO 3)计，不得少于0.050％。 结果: 规定 检验人： 检验日期： 复核人： 复核日期:

水中油类的紫外分光光度法测定

天然发布时间：2008-12-04 生物网文章标签： 生物论坛研究发现恐龙家族1850种有71%未被发现（蝎铁蛋白ferritin 天然水中油类的紫外分光光度法测定 一、实验目的 加深对环境中油类污染的认识，掌握油类的分析方法和技术，学会使用紫外分光光度计。 二、实验原理 水中的油类来自较高级生物或浮游生物的分解，也有来自工业废水和生活污水的污染。漂浮于水体表面的油，影响空气－水体界面中氧的交换。分散于水中的油，部分吸附于悬浮微粒上，或以乳化状态存在于水体中，部分溶于水中。水中油可被微生物氧化分解，从而消耗水中溶解氧，使水质恶化。 重量法是常用的分析方法，它不受油的品种限制，所测定的油不能区分矿物油和动、植物油。重量法方法准确，但操作繁杂，灵敏度差，只适于测定 5mg/L以上的油品。紫外分光光度法比重量法简单。石油类含有的具有共轭体系的物质在紫外光区有特征吸收峰。带有苯环的芳香族化合物主要吸收波长微250～260nm，带有共轭双键的化合物主要吸收波长为215～230nm。一般原油的两个吸收峰波长为225及256nm，其他油品如燃料油、润滑油等的吸收峰也与原油相近。 本方法测定波长选为256nm，最低检出浓度为0.05mg/L，测定上限为 10mg/L。 三、仪器和试剂 1．紫外分光光度计（具有1cm石英比色皿）。 2．1L分液漏斗。

3．25mL容量瓶。 4．石油醚（60～90℃）或正己烷： 纯化后使用，透光率大于80％。 如不纯，可用下法纯化。 纯化： 将0.30～0.15mm（60～100目）粗孔微球硅胶和0.246～0.125mm（70～120目）中性层析氧化铝在150～160℃活化4h，趁温热装入直径2.5cm、长 75cm的玻璃柱中，使硅胶柱高60cm，上面覆盖5cm厚的氧化铝层。将石油醚通过此柱后收集于试剂瓶中。以水为参比，在256nm处透光率应大于80％。 5．油标准贮备液： 用20号重柴油、15号机油或其他认定的标准油品配制。准确称取标准油品0.1000g溶于石油醚中，移至100mL容量瓶中，并用石油醚稀释至标线，此溶液每毫升含1.00mg油，贮于冰箱备用。 6．（1+1）硫酸。 7．氯化钠。 8．无水硫酸钠（事先于马福炉300℃烘1h，冷后装瓶）。 四、实验步骤 1、标准曲线的绘制把油标准贮备液用石油醚稀释为每毫升含 0.100mg油的标准液。向8个10mL容量瓶中依次加入油标准液0.20， 0.50，1.00， 2.00， 3.00，5.00，7.00，10.00mL，用石油醚稀释至标线。其相应的浓度为2.00，

紫外分光光度法计算

第20章吸光光度法 1?什么叫单色光？复色光？哪一种光适用于朗伯一比耳定律？ 答：仅具有单一波长的光叫单色光。由不同波长的光所组成光称为复合光。朗伯--比耳定律应 适用于单色光。 2?什么叫互补色？与物质的颜色有何关系？ 答：如果两种适当的单色光按一定的强度比例混合后形成白光，这两种光称为互补色光。当 混合光照射物质分子时，分子选择性地吸收一定波长的光，而其它波长的光则透过，物质呈现透过光的颜色，透过光与吸收光就是互补色光。 3?何谓透光率和吸光度？两者有何关系？ 答：透光率是指透射光强和入射光强之比，用T表示T=X 10 吸光度是吸光物质对入射光的吸收程度，用A表示，A b e，其两者的关系 A lgT 4.朗伯-比耳定律的物理意义是什么？什么叫吸收曲线？什么叫标准曲线？ 答：朗伯--比耳定律是吸光光度法定量分析的理论依据，即吸光物质溶液对光的吸收程度与溶液浓度和液层厚度之间的定量关系。数学表达式为 A lgT be 吸收曲线是描述某一吸光物质对不同波长光的吸收能力的曲线，即在不同波长处测得吸 光度，波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图即可得到吸收曲线。 标准曲线是描述在一定波长下，某一吸光物质不同浓度的溶液的吸光能力的曲线，吸光度 为纵坐标，浓度为横坐标作图即可得到。 5?何谓摩尔吸光系数？质量吸光系数？两者有何关系？ 答：吸光系数是吸光物质吸光能力的量度。摩尔吸光系数是指浓度为1.0 mol L,液层度为1em 时，吸光物质的溶液在某一波长下的吸光度。用&表示，其单位L mol 1 cm 1。 质量吸光系数是吸光物质的浓度为1g L 1时的吸光度，用a表示。其单位L g 1 cm 1 两者的关系为 e M a M为被测物的摩尔质量。 6. 分光光度法的误差来源有哪些？ 答：误差来源主要有两方面，一是所用仪器提供的单色光不纯，因为单色光不纯时，朗伯一比耳定律中吸光度和浓度之间的关系偏离线性；二是吸光物质本身的化学反应，其结果同样

紫外分光光度法测定未知物

紫外分光光度法测定未知物 1.仪器 1.1紫外分光光度计（UV-1801型）；配石英比色皿（1cm）2个 1.2容量瓶（100mL）：10个；容量瓶（250mL）1个 1.3吸量管（10mL、5mL）：各1支 1.4移液管（20mL、25mL、50mL）：各1支 2.试剂 2.1标准溶液（1mg/mL）：维生素C、水杨酸、苯甲酸、山梨酸、邻二氮菲分别配成1mg/mL的标准溶液，作为储备液。 2.2未知液：浓度约为（40~60ug/mL）。（其必为给出的五种物质之一） 3.实验操作 3.1比色皿配套性检查 石英比色皿装蒸馏水，以一只比色皿为参比，在测定波长下调节透射比为100%，测定其余比色皿的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用。 3.2未知物的定性分析 将五种标准储备液均稀释成10ug/mL的试液（配制方法由选手自定）。以蒸馏水为参比，于波长200~350nm范围内扫描五种溶液，绘制吸收曲线，根据所得到的吸收曲线对照标准谱图，确定被测物质的名称，并依据吸收曲线确定测定波长。五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参考考考考附图附图附图附图。。。。 3.3未知物定量分析 根据未知液吸收曲线上测定波长处的吸光度，确定未知液的稀释倍数，并配制待测溶液3份，进行平行测定。 推荐方法 3.3.1维生素C含量的测定：准确吸取1mg/mL的维生素C标准储备液50.00mL，在250mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为200ug/mL）。再分别准确移取1、2、4、6、8、10mL上述溶液，在100mL容量瓶中定容（浓度分别为2、4、8、12、16、20 ug/mL）。准确移取20.00mL维生素C未知液，在100mL容量瓶中定容，于

水质石油类的测定紫外分光光度法测油仪(HJ 970 - 2018 )前景应用等

1、紫外法测油仪与红外测油仪等其他方法的比较 目前测定油类除了紫外法（紫外测油仪），还有重量法、红外法（红外测油仪）、非分散红外法（非分散红外测油仪）和荧光光度法，这些方法各有利弊，有以下特点： 1.紫外法（紫外测油仪） 优点：操作简单快捷、灵敏度高、性能稳定、萃取剂比较容易获得，后期维护费用低。 缺点：标准油品的取得比较困难，要购买紫外油标样。 2.红外法（红外测油仪） 优点：将光谱带进行扫描，能扫描出油品结构的红外光谱，对不同油品进行分析，有利于查找油类的污染源。 缺点：仪器操作复杂，制作和维护成本高，扫描速度慢，而且用四氯化碳为萃取剂，毒性大污染环境，我国从2019年起禁止使用四氯化碳为萃取剂，改换成四氯乙烯为萃取剂。 3.非分散红外法 优点：测量快，仪器制作和使用比较简单。 缺点：无法识别各种干扰，对测定结果的准确性有一定影响。 4.荧光光度法 优点：灵敏度高 缺点：当油品中芳香烃数目不同时，所产生的荧光强度差别很大。 2、紫外测油仪和红外测油仪在测量油含量方面的应用 紫外测油仪是依据《中华人民共和国国家环境保护标准HJ970-2018》水质石油类的测定紫外分光光度法，利用紫外分光光度法检测海水、地表水、工业废水及生活污水等水域的油含量的一种仪器。 紫外法石油类定义为在ph≤2的条件下，能被正己烷萃取，不被硅酸镁吸附且在225nm紫外光处有特征吸收的物质。 以前的红外测油仪使用的是四氯化碳作为萃取剂，四氯化碳在国际上已经禁止使用了，后来新的国标用四氯乙烯来代替四氯化碳，但是四氯乙烯对纯度要求比较高，目前也没有普及；紫外测油仪采用正己烷为萃取剂，正己烷对人和环境的危害低，即使达不到使用标准，也可以通过简单的提纯达到使用要求。 水中石油类在通过正己烷萃取后，经过脱水和吸附在225nm处所获得的吸光度与油的含量成正比，具有良好的线性R＞0.999。我们在研发过程中，多次利用紫外油标样[GBW（E）080913]进行测试，测试结果性能稳定，石油标样浓度为2mg/L、4mg/L、8mg/L、12mg/L、16mg/L和20mg/L的油标样每次测试误差都在5%以内。测油仪的灵敏度为0.002mg/L，低浓度的水样也能得到较准确的结果。 紫外测油仪配置大屏幕液晶背景显示器，使用中文操作，程序设计，每一步操作都会在屏幕上进行提示；自带打印机，可现场打印测量数据及历史数据，并配套数据采集分析软件，可连接电脑导出仪器的测量数据。紫外测油仪操作简单，无需连接电脑直接使用，也不需要输入复杂的参数。 相信在不久的将来，通过紫外法来测量石油含量的方法将会得到普及。 3、紫外法测油仪和红外测油仪的国家标准及其与其他方法的比较紫外法测油仪的国家标准

10紫外-可见分光光度法习题参考答案

紫外－可见分光光度法 思考题和习题 1．名词解释：吸光度、透光率、吸光系数(摩尔吸光系数、百分吸光系数)、发色团、助色团、红移、蓝移。 吸光度：指光线通过溶液或某一物质前的入射光强度与该光线通过溶液或物质后的透射光强度比值的对数，用来衡量光被吸收程度的一个物理量。吸光度用A表示。 透光率：透过透明或半透明体的光通量与其入射光通量的百分率。 吸光系数：单位浓度、单位厚度的吸光度 摩尔吸光系数：一定波长下C为1mol/L ，l为1cm时的吸光度值 百分吸光系数：一定波长下C为1%(w/v) ，l为1cm时的吸光度值 发色团：分子中能吸收紫外或可见光的结构单元，含有非键轨道和n分子轨道的电子体系，能引起π→π*跃迁和n→ π*跃迁， 助色团：一种能使生色团吸收峰向长波位移并增强其强度的官能团，如-OH、-NH3、-SH及一些卤族元素等。这些基团中都含有孤对电子，它们能与生色团中n电子相互作用，使π→π*跃迁跃迁能量降低并引起吸收峰位移。 红移和蓝移：由于化合物结构变化（共轭、引入助色团取代基）或采用不同溶剂后，吸收峰位置向长波方向的移动，叫红移（长移）；吸收峰位置向短波方向移动，叫蓝移（紫移，短移） 2．什么叫选择吸收？它与物质的分子结构有什么关系？ 物质对不同波长的光吸收程度不同，往往对某一波长(或波段)的光表现出强烈的吸收。这时称该物质对此波长(或波段)的光有选择性的吸收。 由于各种物质分子结构不同，从而对不同能量的光子有选择性吸收，吸收光子后产生的吸收光谱不同，利用物质的光谱可作为物质分析的依据。 3．电子跃迁有哪几种类型？跃迁所需的能量大小顺序如何？具有什么样结构的化合物产生紫外吸收光谱？紫外吸收光谱有何特征？ 电子跃迁类型有以下几种类型：σ→σ*跃迁，跃迁所需能量最大；n →σ*跃迁，跃迁所需能量较大，π→π*跃迁，跃迁所需能量较小；n→ π*跃迁，所需能量最低。而电荷转移跃迁吸收峰可延伸至可见光区内，配位场跃迁的吸收峰也多在可见光区内。 分子结构中能产生电子能级跃迁的化合物可以产生紫外吸收光谱。 紫外吸收光谱又称紫外吸收曲线，为分子光谱，属于连续的带状光谱，是以波长或波数为横坐标，以吸光度为纵坐标所描绘的图线。在吸收光谱上，一般都有一些特征值，如最大吸收波长(吸收峰),最小吸收波长(吸收谷)、肩峰、末端吸收等。 4．Lambert-Beer定律的物理意义是什么？为什么说Beer定律只适用于单色光？浓度C 与吸光度A线性关系发生偏离的主要因素有哪些？ 朗伯－比耳定律的物理意义：当一束平行单色光垂直通过某溶液时，溶液的吸光度A 与吸光物质的浓度c及液层厚度l成正比。 Beer定律的一个重要前提是单色光。也就是说物质对单色光吸收强弱与吸收光物质的浓度和厚度有一定的关系。物质对不同的单色光选择吸收，具有不同的吸收能力，非单色光吸收强弱与物质的浓度关系不确定，不能提供准确的定性定量信息。

紫外分光光度法测定蛋白质含量实验报告.docx

紫外分光光度法测定蛋白质含量 一、实验目的 1.学习紫外光度法测定蛋白质含量的原理； 2.掌握紫外分光光度法测蛋白质含量的实验技术。 二、实验原理 1.测蛋白质含量的方法主要有：①测参数法：折射率、相对密度、紫外吸收等；②基于化学反应:定氮法、双缩脲法、Folin―酚试剂法等。本实验采用紫外分光光度法。 2.蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基的苯环中含有共轭双键，因此，蛋白质具有吸收紫外光的性质，其最大吸收峰位于280nm附近（不同蛋白质略有不同）。在最大吸收波长处，吸光度与蛋白质溶液的浓度服从朗伯―比尔定律。 利用紫外吸收法测蛋白质含量的准确度较差，原因有二：①对于测定那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异较大的蛋白质，有一定误差，故该法适于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质；②样品中含有的嘌呤、嘧啶等吸收紫外光的物质，会出现较大干扰。 三、仪器与试剂 TU―1901紫外可见分光光度计、标准蛋白质溶液3.00mg·mL-1、0.9%NaCl 溶液、试样蛋白质溶液。 10mL比色管、1cm石英比色皿、吸量管。 四、实验步骤 1.绘制吸收曲线 用吸量管吸取2mL3.00mg·mL-1标准蛋白质溶液于10mL比色管中，用0.9%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液作参比溶液，在190~400nm间每隔5nm测一次吸光度Abs，记录数据并作图。 2.绘制标准曲线 用吸量管分别吸取1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL3.00mg·mL-1标准蛋白质溶液于10mL比色管中，用0.9%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液作参比溶液，在波长280nm处分别测其吸光度，记录数据并作图。 3.样品测定 取适量浓度试样蛋白质溶液，在波长280nm处测其吸光度，重复三次。在已经得到标准曲线的情况下，为了使测量结果准确度高，待测溶液的浓度需在标准曲线的线性范围内，所以，先测定试样蛋白质原液的吸光度（1.363），估算浓度为2.0960 mg·mL-1，再将原试液稀释至5倍（即取2mL试液，用0.9%NaCl 溶液稀释至刻度，摇匀），估算浓度为0.4192 mg·mL-1，测吸光度，重复三次五、数据处理与结果分析

用紫外-可见分光光度计测定油样中沥青质含量

用紫外-可见分光光度计测定油样中沥青质含量 摘要：介绍了一种用分光光度法测定油品中的沥青质含量的方法。通过测定样品悬浮液在750 nm、800 nm 下的吸光度而获得样品中正庚烷沥青质含量, 阐述了方法的测量原理, 讨论了取样量范围、沥青质颗粒等因素对方法的影响。结果表明, 该法可应用于各种油品(如原油、重质馏分油、渣油和沥青等)的分析, 具有简单、快速的优点, 相对标准偏差小于3%。 关键词：紫外-可见分光光度法；沥青质；正庚烷溶解物；悬浮液；石油本法具有简单、快速的优点, 相对标准偏差小于3%，减少了苯对人体的危害。本法沥青质定义与重量法相同, 故其结果与重量法间有着良好的对应关系, 可替代重量法用于测定油样中正庚烷沥青质的含量。本法适用于原油、重馏分油、渣油、沥青及催化或热裂化油等沥青质的测定。 1实验部分 1.1仪器和试剂 HITACHI-330 UV/VIS 分光光度计(日本)；甲苯, 分析纯; 正庚烷, 分析纯, 并经脱芳精制。 1.2试验步骤 精密称取0.100-1.000g 油样, 加入1. 00 mL 甲苯将样品溶解，量取100 mL 正庚烷, 加热至85o C, 加进上述甲苯溶液中, 激烈振摇，得样品的均匀悬浮液; 冷却至室温后, 以正庚烷为参比液, 用1 cm石英液槽在750 nm、800 nm 下测定悬浮液的吸光值, 计算出油样中沥青质的含量。 2结果与讨论 2.1方法的基本原理 用分光光度仪测定样品悬浮液在700-800 nm 间的吸收光谱,如图1所示, 样品、正庚烷溶解物和沥青质悬浮液的吸光度随波长的增加而单调递减。 油样悬浮液是一复杂分散体系, 它同时包含分子分散相和粗分散相。在紫外区, 庚烷溶解物的吸光度主要是由芳烃、胶质等组分的分子价电子激发跃迁引起, 而散射光相对很弱, 可不考虑;在750 nm、800 nm 下, 由于能量较低, 分子价电子的跃迁几率很少( 这可从甲苯或汽油在750 nm、800 nm 下的零吸收得到证实) ,此时溶液的吸光度主要来自大分子的胶质等引起的光散射, 根据Rayheigh 散射

紫外 可见分光光度法标准操作程序

紫外-可见分光光度法标准操作程序 1 简述 紫外-分光光度法是通过被测物质在特定波长处或一定波长长范围内的吸光度或发光强度，对该物质进行定性和定量分析的方法。本法的在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。 定量分析通常选择物质的最大吸收波长处测出吸光度，然后用对照品或百分吸收系数求算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定；对已知物质定性可用吸收峰波长或吸光度比值作为鉴别方法；若化合物本身在紫外光无吸收，而杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或杂质的吸收峰化合物无吸收，则可用本法作检查。物质对紫外辐射的吸收是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生的。因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环或发色基团，均可在近紫外区(200-400nm)或可见光区(400-850nm)产生吸收。通常使用紫外分光光度计的工作波长范围为 190-900nm，因此又称紫外-可见分光光度计。 紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。朗伯－比尔（Lambert-beer）定律为光的吸收定律，它是紫外分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为：Ａ=log1/T=ECL 式中Ａ为吸光度； Ｔ为透光率； Ｅ为吸收系数； Ｃ溶液浓度； Ｌ为光路长度。 如溶液的浓度（Ｃ）为1%（g/ml），光路长度(L)为1cm，相应的吸收系数为百分吸收系数，以E表示。如溶液的浓度(C)为摩尔浓度(mol/L)，液 层厚度为1cm时，则相应有吸收系数为摩尔吸收系数，以ε表示。 2 仪器 紫外-可见分光光度计：主要由光源、单色器，样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。 可见光区全波长范围的测定，仪器备有二种光源，即氘灯-为了满足紫外 和碘钨灯，前者用于紫外区，后者用于可见光区。 单色器通常由进光狭缝、出光狭缝、平行光装置、色散元件、聚焦透镜或反射镜等组成。色散元件有棱镜和光栅二种，棱镜多用天然石英或熔融硅石制成，对200~400nm波长光的色散能力很强，对600nm以上波长的光色散能力较差，棱镜色散所得的光谱为非匀排光谱。光栅系将反射或透光经衍射而达到色散作用，故常称为衍射光栅，光栅光谱是按波长作线性排列，故为匀排光谱，双光束仪器多用光栅为色散元件。 检测器有光电管和光电倍增管二种。 紫外-可见分光光度计依据其结构和测量操作方式的不同可分为单光束和双光束 分光光度计二类。单光束分光光度计有些仍为手工操作，即固定在某一波长，分别测量比较空白、样品或参比的透光率或吸收度，操作比较费时，用于绘制吸收

实验一 紫外分光光度法测定苯甲酸

实验一紫外分光光度法测定苯甲酸 一、实验目的 学习、了解紫外分光光度法原理 了解紫外分光光度计的结构和使用方法 二、实验原理 当辐射能（光）通过吸光物质时，物质的分子对辐射能选择性的吸收而得到的光谱称为分子吸收光谱。分子吸收光谱的产生与物质的分子结构、物质所在状态、溶剂和溶液的PH等因素有关。分子吸收光谱的强度与吸光物质的浓度有关。表示物质对光的吸收程度，通常采用“吸光度”这一概念来量度。 根据朗伯－比尔定律，在一定的条件下，吸光物质的吸光度A 与该物质的浓度C和液层厚度成正比。即A＝ LC 因此，只要选择一定的波长测定溶液的吸光度，即可求出该溶液浓度，这就是紫外－可见分光光度计的基本原理。 在碱性条件下，苯甲酸形成苯甲酸盐，对紫外光有选择性吸收，其吸收光谱的最大吸收波长为225nm。因此，采用紫外分光光度计测定苯甲酸在225nm处的吸收度就能进行定量分析。 三、仪器与主要试剂 TU-1810紫外可见分光光度计1cm石英比色皿 0.1M氢氧化钠溶液 苯甲酸(AR) 四、实验步骤 1、苯甲酸标准溶液的制备 称取苯甲酸(105℃烘干)100mg,用0.1M氢氧化钠溶液100ml溶解后,转入1000ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度.此溶液1ml含0.1mg 苯甲酸. 2、制作苯甲酸吸收曲线,选择最大吸收波长 ①移取苯甲酸标准溶液4.00ml于50ml容量瓶中,用0.01M氢氧化钠溶液定容,摇匀,此溶液1ml含苯甲酸8ug. 以氘灯为光源,用0.01M氢氧化钠溶液作为参比,改变测量波长(从210-240nm)测量8ug/ml苯甲酸的吸光度. ②以波长为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制苯甲酸的紫外吸收曲线,并找出最大的吸收波长 (是否是225nm). 3﹑样品的测定 ①取10.00ml苯甲酸样品,放入50ml容量瓶中,用0.01M氢氧化钠