金耳液体培养过程中几种胞外酶活性的变化规律
食用菌学报λ2007.14(3):29～32
收稿日期:2007207226原稿;2007208220修改稿
作者简介:回晶(1977-),女,2003年毕业于辽宁师范大学生命科学学院,硕士,讲师,主要从事天然产物的研究,
发表主笔论文6篇。
文章编号:1005-9873(2007)03-0029-04
金耳液体培养过程中几种胞外酶活性的变化规律
回 晶1,赵文静2,邹志远1,张 月1
(1辽宁大学生命科学学院,沈阳110036;2沈阳华润雪花啤酒有限公司检验科,沈阳110021)
摘 要:测定了金耳液体培养过程中,培养基中的淀粉酶、羧甲基纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、邻苯二酚氧化酶、愈创木酚氧化酶和漆酶的活性变化规律。结果表明,在整个培养期内,7种酶均有活性,但活性差异较大,产酶高峰也不尽相同。
关键词:金耳;液体培养;胞外酶活性;高峰期中图分类号:S 567.350.1 文献标识码:A
金耳(T remell a auranti alba )又名橙黄银
耳、黄金银耳、脑耳,是异担子菌纲(Heterobasi 2diomycetes ),银耳目(Tremellales ),银耳科(Tremellaceae )的名贵食药用真菌[1],具有止咳
化痰、补气养心、平肝健胃等功效,主要分布于我国云贵高原地区。我国从上个世纪八十年代开始进行金耳野生资源调查及驯化栽培研究[2],现已实现了段木和代料栽培及液体发酵培养[325]。本文重点探讨了金耳液体培养过程中,培养基中胞外酶活性的变化规律,旨在为其营养生理研究提供一定的科学依据。
1 材料与方法
1.1材料1.1.1供试菌株
金耳(T remell a auranti alba )菌株购至东北
食(药)真菌研究所,由辽宁大学生命科学学院微生物实验室保存。1.1.2半纤维素制备[6]
用4%NaO H 、90℃浸泡小麦秸粉2h ,过滤得滤液,用浓盐酸调p H 值至4.5后,加入等体积的乙醇,离心得沉淀,用无水乙醇洗涤沉淀两次,沉淀于80℃下烘干,即得浅黄色、粉末状的半纤维素。1.1.3果胶制备[7]
称干燥粉碎(过100目)的桔皮40g ,用盐酸
调p H 值至3,放于水浴锅中,80℃下搅拌(每5min 1次),90min 后过滤除去残渣,滤液浓缩
至300mL 后加等体积的95%乙醇,搅拌(5min ),静置2h 使果胶沉淀析出,滤液于24℃、3000r/min
(750×g )离心15min ,除去上清液,回收乙醇,沉淀放入干燥箱中干燥,得粗果胶。1.2培养基
麦麸斜面培养基:麦麸10%,马铃薯20%,蛋白胨0.5%,琼脂2%,p H 自然。
液体发酵培养基:马铃薯20%,葡萄糖2%,硫酸镁0.1%,磷酸二氢钾0.1%,p H 自然。1.3培养方法和样品制备1.3.1接种母液培养
取培养6d 的供试菌株斜面,轻轻刮下幼嫩菌丝片段,接入液体培养基中(150mL 三角瓶中装80mL 培养液),28℃、110r/min 恒温振荡培养5d 得母液。1.3.2菌丝培养
装有80mL 液体培养基的150mL 三角瓶中接入母液,接种量为2%,28℃、110r/min 恒温振荡培养16d 。1.3.3样品制备
每2d 定时取1次发酵液样品,4℃、3500r/min (1000×g )离心10min ,上清液即为粗酶液。1.4酶活性测定1.4.1淀粉酶活性测定
试管中加入0.5%的可溶性淀粉(国产AR )溶液(用p H 5.8、0.1M 乙酸盐缓冲液配制)1.5mL ,加稀释10倍的粗酶液0.5mL 混匀,38℃水浴准
食 用 菌 学 报第14卷
确保温30min ,取出后立即加入按文献[8]的方法
配制的DNS 试剂1.5mL ,煮沸5min ,取出,冷却后加入蒸馏水21.5mL ,混匀,722型紫外可见分光光度计(中国上海)测520nm 处的OD 值;以煮沸15min 灭活的酶液作对照,每组3个重复;酶活性
以样品与底物反应30min 后光密度的改变值表示。
1.4.2羧甲基纤维素酶活性测定
试管中加入0.5%的羧甲基纤维素钠(国产AR )溶液(用p H 4.6、0.1M 柠檬酸盐缓冲液配制)1.5mL ,加稀释10倍的粗酶液0.5mL ,50℃水浴准确保温30min ,其后操作同淀粉酶活性测定。1.4.3半纤维素酶活性测定
试管中加入0.5%的小麦秸半纤维素溶液(用p H 4.6、0.1M 乙酸盐缓冲液配制)1.5mL ,加稀释10倍的粗酶液0.5mL ,50℃水浴准确保温30min ,其后操作同淀粉酶活性测定。1.4.4果胶酶活性测定
试管中加人1%的果胶溶液(用p H 4.5、0.1
M 乙酸盐缓冲液配制)1.5mL ,加稀释10倍的粗酶液0.5mL ,于50℃反应30min ,其后操作同淀粉酶活性测定。1.4.5漆酶活性测定
试管中加入3.36mM 的邻联甲苯胺(国产A R )溶液0.5mL ,0.1mol/L 醋酸盐缓冲液(p H 4.6) 3.4mL 和稀释10倍的粗酶液0.1mL ,反应液28℃保温30min 后,立即用722型紫外分光光度计于600nm 处测光密度值。酶活单位以反应前后OD 值的变化表示。
1.4.6邻苯二酚氧化酶活性测定
试管中加入0.1mM 的邻苯二酚(国产A R )溶液2.0mL ,0.05mol/L 磷酸盐缓冲液(p H 6.0) 2.0mL 和稀释10倍的粗酶液0.1mL ,反应液28℃保温30min 后,立即用722型紫外分光光度计于400nm 处测光密度值。酶活单位以反应前后OD 值的变化表示。1.4.7愈创木酚氧化酶活性测定
试管中加入80mM 的愈创木酚(国产A R )溶液0.5mL ,0.1mol/L 醋酸盐缓冲液(p H 4.6) 3.0mL 和稀释10倍的粗酶液0.5mL ,反应液28℃保温30min 后,立即用722型紫外分光光度计于490nm 处测光密度值。酶活单位以反应前后OD 值的变化表示。
2 结果与分析
2.1淀粉酶、CMC 酶、半纤维素酶和果胶酶的活性
金耳液体发酵培养过程(16d )中,发酵液中的淀粉酶、CMC 酶、半纤维素酶和果胶酶的活性变化见图1。
由图1可以看出,在整个发酵试验期内,淀粉酶、CMC 酶、半纤维素酶和果胶酶均有活性。其中半纤维素酶活性高峰出现最早,在发酵培养的第2天,淀粉酶、CMC 酶和果胶酶活性高峰出现在发酵培养的第4天。淀粉酶的活性最高,表明金耳菌丝在发酵培养过程中利用率较高的是淀粉类物质,这可能与培养基中含有大量的淀粉酶诱导物有关。CMC 酶和果胶酶活性较淀粉酶和半纤维素酶低
。
图1 金耳液体培养过程中淀粉酶、CMC 酶、半纤维素酶和果胶酶活性的变化
Fig.1 Changes in amylase ,carboxymethyl cellulase ,hemicellulase and pectinase levels during submerged
culture of Tremella aurantialba
2.2愈创木酚氧化酶、邻苯二酚氧化酶和漆酶的活性
金耳液体发酵培养过程(16d )中,发酵液中
的愈创木酚氧化酶、邻苯二酚氧化酶和漆酶的活
性变化见图2。
03
第3期回 晶,等:
金耳液体培养过程中几种胞外酶活性的变化规律图2 金耳液体培养过程中愈创木酚氧化酶、邻苯二酚氧化酶和漆酶活性的变化
Fig.2 Ch anges in gu aiacol oxid ase ,catechol oxid ase and laccase levels during submerged
culture of Tremella aurantialba
由图2可以看出,在整个发酵试验期内,愈创木酚氧化酶、邻苯二酚氧化酶和漆酶均有活性。愈创木酚氧化酶和漆酶的活性高峰均出现在发酵培养的第8天,愈创木酚氧化酶活性在发酵培养的第14天又出现了一个小高峰,而漆酶在第一个活性高峰后先下降,之后又开始攀升,至发酵培养第16天最后一次取样时,它的活性仍在上升。邻苯二酚氧化酶的活性高峰出现的最晚,在发酵培养的第14天。
3 讨论
本试验结果发现,愈创木酚氧化酶、邻苯二
酚氧化酶和漆酶的活性高峰均是在淀粉酶、CMC 酶、半纤维素酶和果胶酶活性降到很低时才出现的,这说明金耳是先利用非木质纤维素类物质后利用木质纤维素类物质,这与文献中报道的漆酶、过氧化物酶和多酚氧化酶均参与木质纤维素的分解[9212]的结论一致。
金耳出现两次漆酶和愈创木酚氧化酶的活性高峰,推测金耳在生长过程中分泌的胞外漆酶和愈创木酚氧化酚中可能含有同工酶(这两种酶的产酶曲线极其相似),而两者对于分解木质纤维素是否有某种协同作用,这有待进一步的研究。
本研究发现,金耳的酶活性与金针菇和平菇的酶活性[13215]有类似之处,即在菌丝生长过程中对于木质纤维素的利用要比非木质纤维素类物质晚。在金耳菌丝生长发育的前期,对淀粉类非木质纤维素的利用能力较强,以致消耗过多,到后期几乎没有被利用,从而进一步说明,金耳菌丝生长的前期主要利用淀粉作碳源。
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12214.
[本文编辑] 宋凤菊
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3
23
食 用 菌 学 报第14卷Cha nges i n Ext racellula r Enzyme Activities D uri ng Subme rge d Cult ure of Tremella a ura ntialba
HU I J i ng,Z HAO We nji ng,ZO U Zhiyua n,Z HA N G Yue
(1College of L if e Scie nces,L iaoning U niversity,Shenyang,L iaoning110036,China;
2Dep art ment of Insp ection,L iaoning Resources B reweries Co.,L t d,Shenya ng,L iaoning110021,China) Abstract:Cha nges in t he ext racellular levels of amylase,carboxymet hyl cellulase,he micellulase,pectinase, guaiacol oxidase,catechol oxidase and laccase activities during submerged culture of Tremella a ura ntialba were deter mined.All t he enzymes were p rese nt at detectable levels t hroughout t he culture period but reached pea k levels at diff ere nt times.
K ey w ords:Tremella a ura ntialba;Submerged culture;Ext racellular e nzyme activity;Pea k stage
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纱支单位间的换算方法
这只是一些纱支单位间的换算方法： NM代表公支； NE代表英支； TEX是特克斯 DTEX是分特（克斯） NEB代表棉纱线以及棉型化纤的英支数 NEL代表亚麻纱的英支数 NEK代表精梳毛纱的英支数 DEN代表旦数 纱线基础知识 时间：2007-09-01 07:00 文字选择：大中小 一、纱线纱支计算方法 1.单位 ⑴、定长制： A. 特克斯：1000米长度的纱在公定回潮率时的质量克数称为特数。 公式：Ntex =（G/L）×1000 式中：G为纱的重量（克），L为纱的长度（米） B. 旦尼尔：9000米长的丝在公定回潮率时的质量克数称为旦数。
公式： Nden=（G/L）×9000 式中：G为丝的重量（克），L为丝的长度（米） ⑵、定重制： A. 公支数（公支）：1克纱（丝）所具有的长度米数。 公式：Nm=L/G 式中：1为纱（丝）的长度（米），G为纱（丝）的重量（克） B. 英支数（英支）：1磅纱线所具有的840码长度的个数。 公式：Ne=（L/G）×840 式中：L为纱（丝）的长度（码），G为纱（丝）的重量（磅）。 2、单位换算 A．特数Ntex与英制支数Ne Ne=C/ Ntex（C为常数，化纤为590.5、棉纤为583，如果为混纺纱可根据混比进行计算，如：T/JC（65/35）45S纱线 C=590.5*65%+583*35%=588，然后按公式计算便可） B．英制支数Ne与公制支数Nm
纯化纤：Ne=0.5905Nm 纯棉：Ne=0.583Nm 混纺纱线：如T/JC（65/35）45S Ne= （0.5905*65%+0.583*35%）Nm 3、特数Ntex 与公制Nm Ntex ×Nm=1000 4、特数Ntex 与旦数Nden Nden=9*Ntex 4 紗的粗度與表示方法 紗依使用的目的而被紡製成各種粗細、大小。當有人問及『紗的 粗細大小大概是什麼程度』時，不知如何表達是好，可真傷腦筋。 紗是由一束束的纖維集合而成的，其間的密合度與集合狀態很複 雜，且纖維的側面及橫面的形態也各式各樣，因此若以普通的方法測 試其直徑是很牽強。 由於紗的全部構造還處於柔軟且易變形的形態，因此不能以鐵絲大小 的粗來測。 此處我們將設定一表達紗之粗度的方法，即設定一基準單位，以此基 準單位的倍數來表示。 4-1 紗支粗細的表示
体积容积单位之间的换算练习题86595
体积容积单位之间的换算练习题 0.2立方分米＝( )立方厘米 35立方厘米＝( )立方分米 5.05立方米＝( )立方分米 3002立方分米＝( )立方米 50立方厘米＝( )立方分米 2.8立方米＝( )立方米( )立方分米 4.05升＝( )升( )毫升 3立方米20立方分米＝( )立方米 12立方分米5立方厘米＝( )立方分米 7立方米8立方分米＝( )立方分米 8升50毫升＝( )毫升 6000毫升=( )升=( )立方分米 7.5升=( )升( )毫升=( )毫升 1000000立方厘米=( )立方分米=( )升 56000升=( )立方分米45000毫升=( )升=( )立方米 720立方分米=( )立方米=( )立方厘米 3350立方厘米=( )立方分米=( )升 16升=( )立方分米=( )立方厘米 1.3立方米=( )立方分米=( )升 810000立方厘米=( )升 1立方分米=( )立方米=( )升 7.7升=( )升=( )毫升 550毫升=( )升=( )立方厘米 1.25升=( )毫升=( )立方米 2立方分米=( )升=( )毫升 1立方米10立方分米=( )升 220立方分米=( )升=( )毫升 60000毫升=( )升=( )立方米 3.5升=( )立方分米=( )立方厘米5200毫升=( )升 520平方厘米=( )平方分米 8立方米=( )立方分米 7900平方厘米=( )平方分米 8900立方分米=()立方米 8立方米=( )立方厘米 40升=( )毫升 4.8立方米=( )立方分米 4.04立方分米=( )升=( )毫升 16500毫升=( )升( )毫升 10.6立方米=( )立方分米=( )立方厘米 4000立方分米=( )立方米 7.06立方米=( )立方分米 8506立方分米=( )立方米 8.58立方分米=( )立方厘米 5430立方厘米=( )立方分米 5.06立方米=( )立方分米 3.08立方分米=( )立方厘米 8.29方=( )立方米=( )立方分米 5897立方厘米=( )升 3.05升=( )毫升 5.36升=( )立方厘米 7890毫升=( )立方分米 3650毫升=( )立方分米 7.65立方分米=( )毫升 4.68升=( )立方厘米
培养基适用性检查记录
培养基适用性检查记录 质量部
培养基名称：沙氏葡萄糖琼脂培养基来源：批号： 对照培养基：来源：批号： 检验依据：检验人：检验日期： 一、实验菌种： 白色念珠菌[CMCC(F)98 001]第代 黑曲霉[CMCC(F)98 003]第代 二、菌液制备 将白色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养5～7天；取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10-5～10-7,制成50～100cfu/ml的菌悬液。将黑曲霉接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养5～7天。加入3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10-5～10-7,制成50～100cfu/ml的菌悬液。 三、培养基适用性检查 取5个无菌平皿，分别接种白色念珠菌、黑曲霉各2皿，每皿接种1ml菌液（含 菌适宜浓度），另一皿接种1ml PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液作为空白对照，倾注对照沙 氏葡萄糖琼脂培养基，混匀。凝固后倒置培养，20-25℃培养5天计数。被检培养基同 法操作。 四、结果判断 五、结论 本品按《中国药典》2015年版“非无菌产品微生物检查：微生物计数法”及培养基适用性检验操作规程检验，结果：□符合规定□不符合规定。
培养基名称：胰酪大豆胨琼脂培养基来源：批号： 对照培养基：来源：批号： 检验依据：检验人：检验日期： 一、实验菌种： 金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003]第代 铜绿假单胞菌[CMCC(B)10 104]第代 枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501]第代 白色念珠菌[CMCC(F)98 001]第代 黑曲霉[CMCC(F)98 003]第代 二、菌液制备 将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌分别接种于胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24 小时；取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10-5～10-7,制成50～100cfu/ml的菌悬液。将白色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养5～7天；取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10-5～10-7,制成50～100cfu/ml的菌悬液。将黑曲霉接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养5～7天。加入3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成稀释至10-5～10-7,制成50～100cfu/ml 的菌悬液。 三、培养基适用性检查 取11个无菌平皿，分别接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2皿，每皿接种1ml菌液（含菌适宜浓度），另一皿接种1ml PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液作为空白对照，倾注对照胰酪大豆胨琼脂培养基，混匀。凝固后倒置培养，金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌皿30-35℃培养3天计数；白色念珠菌、黑曲霉20-25℃培养5天计数。被检培养基同法操作。 四、结果判断
微生物胞外多糖及其生物合成途径研究现状
Advances in Microbiology 微生物前沿, 2017, 6(2), 27-34 Published Online June 2017 in Hans. https://www.wendangku.net/doc/9011713943.html,/journal/amb https://https://www.wendangku.net/doc/9011713943.html,/10.12677/amb.2017.62004 Research Status of Microbial Exopolysaccharide and Its Metabolic Pathway Ning Pang1,2, Jiaqi Zhang1, Jin Qi3, Binhui Jiang1* 1School of Resources and Civil Engineering, Northeastern University, Shenyang Liaoning 2Beijing Yingherui Environmental Technology Co. Ltd., Beijing 3Fushun Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Fushun Liaoning Received: May 22rd, 2017; accepted: Jun. 9th, 2017; published: Jun. 12th, 2017 Abstract Due to their unique physical and chemical properties, rheological properties and biological safety, microbial polysaccharides have been widely used in many fields, such as industrial production and life. But due to high production costs and less production limit its wide application. The screening, isolating and culturing of microbial strains of extracellular polysaccharides were in-troduced in this paper, and the optimization of production of flocculant conditions and the sepa-ration and purification of extracellular polysaccharides were also discussed. Furthermore, the re-search status of the microbial exopolysaccharide metabolic pathway was focused. The method of improving the production of extracellular polysaccharides can be found by the study of metabolic pathways of microbial exopolysaccharides, which lays the foundation for the industrial applica-tion of microbial extracellular polysaccharide. Keywords Microbial Flocculant, Glycobacter, Biosynthetic Pathway 微生物胞外多糖及其生物合成途径研究现状 庞宁1,2，张佳琪1，齐进3，姜彬慧1* 1东北大学，资源与土木工程学院，辽宁沈阳 2北京盈和瑞环境科技股份有限公司，北京 3抚顺出入境检验检疫局，辽宁抚顺 *通讯作者。 文章引用: 庞宁, 张佳琪, 齐进, 姜彬慧. 微生物胞外多糖及其生物合成途径研究现状[J]. 微生物前沿,2017, 6(2):
体积与容积单位换算
体积与容积单位换算 1立方米=1000升=1000立方分米=1000毫升=1000立方厘米1升=1立方分米=1000毫升=1000立方厘米 xx单位换算 1千米=1000米1米=10分米 1分米=10厘米1米=100厘米1厘米=10毫米 面积单位换算 1平方千米=100公顷1公顷=100平方米 1平方米=100平方分米1平方分米=100平方厘米 1平方厘米=100平方毫米 体(容)积单位换算 1立方米=1000立方分米=1000立方厘米 1立方米=1000立方分米1立方分米=1000立方厘米 1立方分米=1升1立方厘米=1毫升1立方米=1000升重量单位换算 1吨=1000千克1千克=1000克1千克=1公斤 人民币单位换算 1元=10角1角=10分1元=100分 时间单位换算 1世纪=100年1年=12月 大月(31天)有:1\3\5\7\8\10\12月小月(30天)的有:4\6\9\11月
平年2月28天,闰年2月29天平年全年365天,闰年全年366天1日=24小时1时=60分1分=60秒1时=3600秒 小学数学常用图形计算公式: 1,正方形 C周长S面积a边长 周长=边长×4面积=边长×边长 C=4aS=a×a S=a2 2,正方体 V体积a棱长 表面积=棱长×棱长×6体积=棱长×棱长×棱长 S表=a×a×6S表=6a2 V=a×a×a V= a3 3,长方形 C周长S面积a边长 xxxx=(xx+宽)×2面积=xx×宽 C=2(a+b)S=ab 4,长方体 V体积S面积axxb宽h高 (1)表面积=(长×宽+长×高+宽×高)×2 (2)体积=长×宽×高 S=2(ab+ah+bh)V=abh
几种常见培养基作用
1.中国蓝平板：含有牛肉粉、蛋白胨、乳糖、琼脂、氯化钠、中国蓝、玫瑰红等成份。是一种弱选择性（亦有学者称为无抑制性）选择培养基。成份中的中国蓝为指示剂，玫瑰红为弱抑制剂，仅能抑制革兰阳性菌生长，而对大肠杆菌没有抑制作用，发酵性革兰阴性杆菌因分解乳糖能力不同，在此平板上的菌落颜色不同，便于鉴别菌种。根据菌落形态，可做出相应的处理或报告。例如：大肠埃希菌菌落呈蓝色；痢疾志贺菌呈淡红色；鼠伤寒沙门菌呈淡红色。 2.巧克力平板：普通营养琼脂成份添加进氯化血红素，万古霉素，辅酶A。用途：除可以分离奈瑟菌，嗜血杆菌外，由于加入了万古霉素，可抑制绝大多数的革兰阳性菌的生长，在分离培养上具有重要意义，不能用血平板来替代。巧克力平板含有嗜血杆菌生长需要的营养因子X因子和V因子。其原理为：绵羊血中的V因子通常处于被抑制状态，加热到80～90℃12Min即可破坏红细胞膜上的不耐热抑制物，可使V因子释放，故嗜血杆菌在加热的血琼脂培养基即巧克力琼脂培养基上生长较佳。 3. TCBS：含酵母膏粉蛋白胨氯化钠柠檬酸钠硫代硫酸钠胆酸钠牛胆粉蔗糖柠檬酸铁溴麝香草酚兰麝香草酚兰琼脂；其中：氯化钠可刺激弧菌的生长；蔗糖是可发酵的糖类；胆酸钠、牛胆粉、硫代硫酸钠和柠檬酸钠及较高的pH（8.6）可抑制革兰氏阳性菌和大肠菌群；霍乱弧菌对酸性环境比较敏感，因此该pH值可增强其生长；硫代硫酸钠与柠檬酸铁反应作为检测硫化氢产生的指示剂；溴麝香草酚兰和麝香草酚兰是pH指示剂。利用指示剂来区分是否发酵蔗糖：副溶血性弧菌不发酵蔗糖，菌落呈蓝绿色。霍乱弧菌发酵蔗糖产酸，菌落呈黄色。TCBS常用于致病性弧菌的选择性分离，是GB2008、SN标准指定培养基。 4.MAC平板：即麦康凯琼脂培养基，用于大肠杆菌和大肠菌群的分离培养(05药典)，主要成分：蛋白胨脙胨猪胆盐(或牛、羊胆盐) 氯化钠琼脂乳糖1%结晶紫水溶液0.5%中性红水溶液。麦康凯平板的原理：利用胆盐来抑制革兰阳性细菌的生长，而对伤寒等沙门菌有促进生长的作用．利用乳糖发酵，中性红的颜色可把分解乳糖和不分解乳糖的细菌区别开．沙门菌及志贺菌呈无色菌落，大肠埃希菌呈桃红色菌落． SS培养基 2.原理 培养基中牛肉膏、蛋白胨等为营养物;煌绿、胆盐、硫代硫酸钠、枸橼酸钠等抑制非病原菌生长,而胆盐能促进某些病原菌生长。因大肠埃希菌等能迅速分解乳糖产酸并与胆盐结合成胆酸,故形成中心混浊的粉红色菌落;病原菌不能分解乳糖。菌落呈透明无色,枸橼酸铁能指示硫化氢的产生,使菌落中心呈黑色。硫代硫酸钠有缓和胆盐对志贺菌及沙门菌的有害作用并中和煌绿和中性红染料的毒性作用,且能使大肠埃希菌的红色菌落颜色鲜明。 3.用途 用于分离肠道致病菌。 SS琼脂培养基是分离沙门菌及志贺菌属的强选择性培养基,它对大肠埃希菌有较强的抑制 作用,而对肠道病原菌则无明显抑制作用。因此,可以增加粪便等标本的接种量,从而提高病原菌的检出率,是目前公认比较满意的培养基。 附注:大肠埃希菌属细菌在此培养基虽不易生长,但亦不被杀灭,故挑选病原菌菌落时,应仅挑取菌落的中心部分,否则易将其四周的杂菌一并挑入,影响结果。
纱线粗细换算
1、特克斯（TEX）：在公定回潮率下，长度为1000米纱线的重量克数。特克斯越大，纱线越粗。书写方法: 数字(加单位)X股数如: 21texX2 2、公制支数（N）：在公定回潮率下，每一克重纤维或纱线的长度米数。公制支数越大纱线越细。书写方法：数字/股数如：32/3 3、英制支数（S）：在公定回潮率下，每一磅（0.4536kg）重的纤维或纱线长度为840码为一英支。英支越大，纱线越细。书写方法：数字S/股数如32S/3 4、旦尼尔：（Denier）：在公定回潮率下，9000米长的纤维的重量克数。旦尼尔简称旦（D），如9000米的纤维重1克为1旦，当纤维的密度一定时，旦数越大，纤维越粗。 单位之间的计算公式： 特克斯×10= 分特----------------（tex ×10= dtex ） 旦尼尔×0.111= 特克斯---------------- ( D×0.111=tex ) 旦尼尔×1.111=分特---------------- ( D×1.111=dtex ) 旦尼尔×英支=5315---------------- ( D×S=5315 ) 旦尼尔×公支=9000 ---------------- ( D×N=9000 ) 举例：150 旦尼尔=166.65分特(150D=166.65dtex) 16英支=332.2 旦尼尔(16S=332.2D) 120公支=75 旦尼尔=70.87英支(120N=75D=70.87） 纱线的粗细及表示方法 一、纱线粗细程度的定义 纱线的粗细程度是纱线最重要的指标。由于纱线的粗细程度难以用工具直接测量
出来，因此专业上将纱线的粗细程度用两种间接指标来表示，即定长制和定重制。 1、定长制的定义 以纱线在公定回潮率时的单位长度的重量来表示。定长制又分特克斯（tex）制和旦尼尔（Denier）制两种。 （1）特克斯制：1000米长的纱线，在公定回潮率时的重量（克），称为该纱线的特数（特数也俗称号数），用Nt表示 1000×Gk Nt= —————— L 例如：有一种纯棉纱线，取1000米称重为18.2克，假设公定回潮率刚好为8.5%，则该纱称为18.2tex(或俗称18.2号)。 （2）旦尼尔制：9000米长的长丝在公定回潮率时的重量（克），称为该长丝的旦数（旦数也俗称D数），用ND表示 9000×Gk ND= —————— L 例如：有一种长丝，取9000米称重为150克，假设不考虑公定回潮率因素，则该纱称为150D。 2、定重制的定义 以纱线在公定回潮率时的单位重量的长度来表示，在定重制中，有英制支数和公制支数二种，目前经常使用的是英制支数（本教材对公制支数不作介绍）。 英制支数的定义：一磅重的纱线在公定回潮率时，有多少个840码即为多少支，用Ne表示 L
培养基适用性验证
- 培养基适用性 验证 方案起草人： 方案审核人： 方案批准人： XXXXX药业股份
目录 1. 验证目的 (2) 2. 参照标准 (2) 3. 验证项目 (2) 4. 验证小组人员及职责 (3) 5. 验证可接受的标准 (3) 6. 验证步骤 (3) 7. 菌液制备 (6) 8. 适用性检查 (6) 9. 控制菌检查 (7) 10. 操作方法 (8) 11.结论 (11)
1. 验证目的： 需氧菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基及控制菌培养基应进行培养基的适用性检查。本次验证的目的是确认胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基适合需氧菌、霉菌及酵母菌总数及测定和控制菌适用性检查。 2. 参照标准：2015版中国药典微生物限度检查法。 3. 验证项目：营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查和控制菌适用性检查。 4.验证小组人员及职责： 4.1 4.2验证人员职责及要求 4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。 4.2.2认真观察并做好验证原始记录。 4.2.3对实施验证的结果负责。 4.3验证中各部门的职责 4.3.1验证领导组职责 4.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。 4.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。 4.3.1.3负责验证方案的批准工作。 4.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。 4.3.1.5负责验证报告的批准工作。 4.3.2验证工作小组职责 4.3.2.1负责验证方案的起草工作。
4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。 4.3.2.3负责验证方案的实施。 4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。 4.3.2.5参与验证结果的评价工作。 4.3.3质量部职责 4.3.3.1负责验证方案的审核工作。 4.3.3.2负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。 4.3.3.3负责验证中各项检测工作，提供验证的检验记录、检验报告，对验证过程中的各项检验工作负责。 4.3.3.4负责验证资料和报告的审核工作。 4.3.3.5负责验证文件回收、归档管理工作。 5. 合格标准：被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。 6. 试验材料： 6.1. 被验证产品：溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、三糖铁琼脂培养基、肠道菌增菌液培养基、RV沙门菌增菌液培养基、麦康凯琼脂培养基、木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基、甘露醇氯化钠琼脂培养基、麦康凯液体培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基 6.2. 仪器设备： 6.2.1. LXD型压力蒸汽灭菌器 6.2.4.JMP-250霉菌培养箱(20～25℃) 6.2.5. SHP-250生化培养箱(30～35℃) 6.2.7 101-1电热鼓风干燥箱 6.3. 验证用培养基
高产胞外多糖的乳酸菌菌种的筛选
2008年第1期常州工程职业技术学院学报V ol.1 2008总第五十五期JOURNAL OF CHANGZHOU INSTITUTE OF ENGINEERING TECHNOLOGY April No.55高产胞外多糖的乳酸菌菌种的筛选 吴玲何颖 （常州工程职业技术学院应用化学技术系，江苏常州 213164） 摘要：本文首先从高产EPS混合乳酸菌中分离纯化了12种乳酸菌，测定不同菌种在40℃下液体培养12h后菌液的OD值、活菌数；然后将12种菌在适宜条件下分别制成酸奶并测定其pH值、粘度和产胞外多糖量，从中筛选出了两株产多糖量最高的乳酸菌种；最后利用API细菌鉴定系统对这两种乳酸菌进行鉴定，分别为乳酸乳球菌乳亚种1和片球菌属。 关键词：胞外多糖；乳酸菌；右旋糖酐 乳酸菌是一类能利用可发酵性糖为原料，并能产生大量乳酸的细菌的通称。按伯杰氏系统细菌学手册中的生化及形态分类法，乳酸菌分为18个属。而在食品、医药等领域应用较多的乳酸菌主要有7个属，分别为乳杆菌属、链球菌属、肠球菌属、乳球菌属、片球菌属、明串珠菌属和双歧杆菌属［1］。 多糖是指由20个以上单糖组成的糖类化合物，根据来源不同，可分为植物、动物和微生物多糖。自20世纪40年代成功开发出由肠明串珠菌发酵产生右旋糖酐以来，新的微生物胞外多糖的研究与开发在世界范围内已成为研究的热点［2］，其中又以乳杆菌属、链球菌属、明串珠菌属、乳球菌属等乳酸菌的胞外多糖研究较多。 乳酸菌胞外多糖是由乳酸菌发酵产生的，分泌在细胞外的，常渗入到培养基中的糖类化合物。根据其所在的位置，可分为荚膜多糖和粘液多糖。乳酸菌胞外多糖的生物合成因菌种的不同而发生在不同的条件下，按合成位点和合成模式不同，其胞外多糖的合成可分为2类，即细胞壁外的同源多糖的合成与细胞膜上的异源多糖的合成［3］。Wigandi等［4］认为乳酸菌合成EPS可能有3种方式：(1)加速扩散；(2)活性传递；(3)基因转移。 许多乳酸菌是历史悠久的工业生产菌，乳酸菌胞外多糖不仅对乳制品的结构和风味具有重要影响，而且有可能成为食品级多糖的一个极好的来源而广泛应用于各种食品的增稠、稳定、乳化、胶凝及保湿［5］；而且，近十多年来的研究发现［6］，活性多糖除了具有抗病毒、抗衰老、降血糖、刺激造血等作用外，还有抗肿瘤、抗溃疡、免疫调节、调节胃肠功能、降低胆固醇等生物学功效。其中，来源于乳酸菌的胞外多糖由于对机体无毒副作用，来源安全可靠等优点，逐渐被人们所关注。因此，将乳酸菌胞外多糖作为功能性食品的成分进行开发和研究具有很大潜力。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 菌种 瑞士乳杆菌（1004和15019）、德氏乳杆 收稿日期：2007-12-21 作者简介：吴玲（1981-），女，江苏常州人，常州工程职业技术学院教师，微生物学硕士；何颖（1981— ），女，江苏南通人，常州工程职业技术学院教师，遗传学硕士。
(完整版)体积容积单位换算
一、把下列单位间的进率背熟，你一定能做到！ 长度单位：1千米=1000米1米=10分米1分米=10厘米1厘米=10毫米1米=100厘米1km=1000m 1m=10dm 1dm= 10cm 1cm=10mm 1m=100cm 面积单位：1平方千米=100公顷1公顷=10000平方米 1平方米=100平方分米1平方分米=100平方厘米 1m2 =100 dm21dm2 =100 cm2 体积单位：1立方米=1000立方分米1立方厘米=1000立方毫米 1m3 =1000 dm31dm3 =1000 cm3 容积单位与体积单位之间的关系： 1升=1立方分米1毫升=1立方厘米 1L=1 dm3 1 m L=1 cm3 1升=1000毫升1立方米=1000立方分米=1000升 1L= 1000 m L 1m3 =1000 dm3 =1000L 二、把正方体与长方体的相关知识记熟！ 长方体的总棱长=（长+宽+高）×4 正方体的总棱长=棱长×12 长方体的表面积=（长×宽+长×高+宽×高）×2 正方体的表面积=棱长×棱长×6 长方体的体积=长×宽×高正方体的体积=棱长×棱长×棱长V=abh=Sh V=a3 知识运用练习题 一、1米=（）分米1分米=（）厘米 1平方米=（）平方分米1平方分米=（）平方厘米 8平方分米=（）平方厘米5平方米=（）平方分米 300平方厘米=（）平方分米 我发现了：每相邻的两个常用长度单位间的进率是（）， 每相邻的两个常用面积单位间的进率是（）。 （1）5立方分米=( )立方米=( )立方厘米（2）（）cm3 =0.3 m3 =（）dm3（3）340立方米=（）立方厘米=（）立方分米（4）4800 cm3 =（）m3 =( ) dm3（5）56立方分米=( )立方厘米=( )立方米（6）8.88 dm3 =( ) m3 =( ) cm3 （7）( )立方厘米=3.4立方分米=( )立方米（8）0.35 m3 =（）cm3 =（）dm3 （9）45立方分米=( )立方米=( )立方厘米（10）（）cm3 =1.3 m3 =（）dm3（11）（）立方厘米=100立方米=（）立方分米（12）12.12 dm3 =( ) m3 =( ) cm3（13）0.58立方厘米=（）立方米=( )立方分米（14）30.03 dm3 =( ) m3 =( ) cm3（15）0.4立方分米=( )立方厘米=( )立方米（16）( )dm3 =（）m3 =0.58 cm3（17）3.2立方分米=( )立方米=( )立方厘米（18）( ) cm3 =4.33L=( ) m3 （19）( ）cm3=（）m L=8.2 L （20）42.6 m L =（）L =( ) dm3（21）( ) dm3=（）L=3.8 m3 （22）( ) m L=0.777 L=( ) dm3 （23）45.7立方分米=( )升=( )立方厘米（24）( ) m3=( )L=254 dm3 （25）( )立方厘米=( )立方米=300立方分米（26）5 dm3=( ) L=( ) cm3 （27）25立方厘米=（）立方分米=( )升（28）（）m L=0.02 dm3=（）cm3
麦康凯琼脂培养基
编号：022142 中文名称：麦康凯琼脂培养基（药典） 英文名称：MacConkey Agar 用途： 供分离发酵乳糖的革兰氏阴性肠道杆菌。（《中华人民共和国药典》2010年版）原理： 胨提供碳氮源、维生素和生长因子;牛胆盐可抑制革兰氏阳性菌的生长; 氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂；乳糖为可发酵的糖类；中性红是pH指示剂，细菌发酵乳糖产酸时菌落呈粉红色并在菌落周围出现胆盐沉淀的浑浊圈。 微生物图鉴： 配方（每升）： 胨20.0g 牛胆盐5.0g 氯化钠5.0g 琼脂14.0g 乳糖10.0g 中性红0.03g 最终pH 7.2 ± 0.2
使用方法： 1、称取本品54.0g，加入蒸馏水或去离子水1 L,搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121T高压灭菌15mi n。 2、待培养基冷至50?55°C倾注灭菌平皿，待凝固后，备用。 3、取待检样品划线接种于麦康凯平板。 4、将平板置培养箱于30?35 C培养18?24h。 5、观察结果。在做致泻大肠埃希氏菌微生物检验时，观察结果不但要注意乳糖发酵的菌落，同时也要注意不发酵和迟缓发酵的菌落。 质量控制： 下列菌株经30?35C培养18?24h，生长情况如下表： 菌名菌号生长状况菌落特征 大肠埃希氏菌CMCC(B)44102 良好粉红或红，周围有混浊胆盐沉淀圈 弗氏柠檬酸杆菌ATCC43864 良好粉红或红，周围有混浊胆盐沉淀圈 鼠伤寒沙门氏菌CMCC(B)50115 良好无色半透明 金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003 不长或差 贮存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年
规格：250g
麦康凯琼脂对照培养基使用说明
麦康凯琼脂对照培养基 麦康凯琼脂对照培养基用途： 培养基适用性实验 麦康凯琼脂对照培养基外观： 本品为肉粉色均一粉末，加入水中混悬均匀，灭菌后融化状态为半透明棕红色液体 麦康凯琼脂对照培养基酸度： 本品灭菌后pH7.4，符合2010版中国药典灭菌后pH7.2±0.2的规定。 麦康凯琼脂对照培养基注意事项： 1.检查平板内是否干裂或染菌，如长菌请勿使用； 2.请在洁净的环境下操作，避免杂菌干扰； 3.在冰箱储存很久的培养基容易出现一些冷凝水，请在洁净的环境下将水倒出， 然后在培养箱放置10-30Min，待其表面干燥后再接种；或在使用前，提前一到两周放置室温即可； 4.弃物处理：使用后应高压灭菌或焚烧后按一般垃圾处理，也可按专业技术人 员指示方法处理。 保存：避光保存，放于阴凉干燥处。 麦康凯琼脂对照培养基其他相关对照培养基： 硫乙醇酸盐流体对照培养基 改良马丁对照培养基 营养琼脂对照培养基 营养肉汤对照培养基 玫瑰红钠琼脂对照培养基 胆盐乳糖对照培养基 甘露醇氯化钠琼脂对照培养基 沙氏葡萄糖肉汤对照培养基 麦康凯琼脂对照培养基 沙门、志贺菌属琼脂对照培养基 4-甲基伞形酮葡萄苷酸（MUG)对照培养基 沙氏葡萄糖琼脂对照培养基 念珠菌显色对照培养基
绿脓菌素测定用对照培养基基础 梭菌增菌对照培养基 哥伦比亚琼脂对照培养基 溴化十六烷基三甲铵琼脂对照培养基基础 四硫磺酸钠亮绿对照培养基基础 乳糖发酵对照培养基 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂（YPD）对照培养基胰酪大豆胨琼脂对照培养基 胰酪大豆胨肉汤对照培养基 R2A琼脂对照培养基 三糖铁琼脂对照培养基 麦康凯液体对照培养基 紫红胆盐葡萄糖琼脂对照培养基 肠道菌增菌液体对照培养基 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐对照培养基
胞外多糖
胞外多糖(EPS extracellular polysaccharide) 早在50年代人们就认为胞外多糖可能是青枯菌的致病因子，随后围绕青枯菌胞外多糖的病理学意义进行了大量研究。H u sain和Kelman比较了青枯菌自发无毒突变株和野生型菌株的特点，发现自发无毒突变株不产生胞外多糖，致病力丧失，因此认为胞外多糖在致病过程中可能具有重要作用l 5l。青枯菌的胞外多糖是由多种化学物质组成的复合物，其中主要的组成成分是氮乙酞半乳糖醛酰胺。研究发现，不同青枯菌小种的胞外多糖的组分有所不同，同一小种也存在不同类型的胞外多糖。一些研究显示，一个称为EPS I的胞外多糖，可能与Ralstonia solanacearum的致病性最为相关I6J EPS I合成的特异突变研究显示，即使直接注入大量的突变菌细胞进入植物茎组织，与非突变菌比较，其植株的萎蔫和死亡程度也很低。通过土壤接种试验也显示，尽管突变菌在维管组织中繁殖，但植株的发病很轻。 近年来的研究发现，胞外多糖的合成受l6 kI1的eps操纵子调控，涉及l0个调控基因产物和3个不同的调控信号，这种严谨的调控也从另一个角度说明EPS I对病原菌本身的重要性以及在病原菌对植物的致病性中的重要作用『青枯假单胞菌(pseudomonassolanacearu‘)或称青枯菌引起许多重要经济作物如烟草、花生、番茄等植物的萎焉病。主要通过土壤传染病害，它的寄主范围很广泛，有 33科100多个种，危害茄科植物为最多“。青枯菌毒力株能产生胞外多糖，用特殊固体 培养基培养时形成两种菌落形态即易变的和固定的，前者产生胞外多糖有毒力，后者很少产生这种多糖。为此，日本科学工作者研究了这种胞外多糖的组成以及它与致病性的关系。发现这种多糖是一种混合物一主要由N一乙酸半乳糖胺(2一氨基2半乳糖)和少 量鼠李糖、葡萄糖以及某些简单肤所组成。事实上，这是同型一N一乙酞半乳糖胺葡聚糖的一个例证。其化学性质还不清楚，但认为这种胞外多糖与毒力有关系‘，这是因为 它阻滞寄主植物维管束组织，导致水分输导的困难。另一些科学工作者研究了青枯菌致病性的分子遗传学，发现这类菌中一些菌株存在着大质体“)、“，并认为青枯菌的致病性可能与质体有关4)，也就是说，致病基因在质体上，但在培养过程中致病性(如番 茄青枯菌)容易丧失;另外，分离这种质体也是不容易的，一则它本身在细胞内的数量 太少，二则由于质体太大，难以与染色体分开4)。最近，中国农业科学院分子生物研究室除了从寄主青枯菌获得大质体(Mw为60一120x10“d。)外，还获得小质体(Mw为 5x10“d。)5’，他们检测了中国的14种寄主植物的51个野生型青枯菌内生质体，并对其中20个野生型(毒力株)和20个突变型(非毒力株)进行了比较研究，发现①其中14株 野生型和10株突变型菌株均含分子量大小相同的有1一2个质粒;②其中有些菌株(野 生型或突变型)不存在质粒;③其中一些野生型毒力株不含质粒，而其衍生突变型无毒 力株则出现质粒。第①和第②种情况表明，致病性与质粒没有必然联系，但第③种情况，致病性的丧失伴随着大质粒的出现，看来，质粒的形成与致病性无关系，这种现象不排除致病基因是从染色体上跃跳的结果。 用作食品添加剂。 2.1 结冷胶的结构与特性 结冷胶是在有氧条件下由伊乐假单胞菌产生 的,后确认为少动鞘脂单胞菌。结冷胶是组成与结 构类似的8种微生物多糖中的一种。这8种微生物 多糖为:结冷胶、沃仑胶、鼠李胶、S657、S88、S198、 NW11、PSP4,它们具有相同的主链结构,所不同的 是它们的侧链基团的数目和位置以及含有或不含有 乙酰基。天然结冷胶含有46%葡萄糖、30%鼠李
念珠菌显色对照培养基使用说明
念珠菌显色对照培养基 念珠菌显色对照培养基用途： 培养基适用性实验 念珠菌显色对照培养基外观： 本品为淡黄色均一粉末，加入水中混悬均匀，灭菌后融化状态时为黄色透明液体。 念珠菌显色对照培养基酸度： 灭菌后pH6.0. 念珠菌显色对照培养基注意事项： 1.检查平板内是否干裂或染菌，如长菌请勿使用； 2.请在洁净的环境下操作，避免杂菌干扰； 3.在冰箱储存很久的培养基容易出现一些冷凝水，请在洁净的环境下将水倒出， 然后在培养箱放置10-30Min，待其表面干燥后再接种；或在使用前，提前一到两周放置室温即可； 4.弃物处理：使用后应高压灭菌或焚烧后按一般垃圾处理，也可按专业技术人 员指示方法处理。 保存：避光保存，放于阴凉干燥处。 念珠菌显色对照培养基他相关对照培养基： 硫乙醇酸盐流体对照培养基 改良马丁对照培养基 营养琼脂对照培养基 营养肉汤对照培养基 玫瑰红钠琼脂对照培养基 胆盐乳糖对照培养基 甘露醇氯化钠琼脂对照培养基 沙氏葡萄糖肉汤对照培养基 麦康凯琼脂对照培养基 沙门、志贺菌属琼脂对照培养基 4-甲基伞形酮葡萄苷酸（MUG)对照培养基 沙氏葡萄糖琼脂对照培养基 念珠菌显色对照培养基 绿脓菌素测定用对照培养基基础 梭菌增菌对照培养基
哥伦比亚琼脂对照培养基 溴化十六烷基三甲铵琼脂对照培养基基础 四硫磺酸钠亮绿对照培养基基础 乳糖发酵对照培养基 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂（YPD）对照培养基胰酪大豆胨琼脂对照培养基 胰酪大豆胨肉汤对照培养基 R2A琼脂对照培养基 三糖铁琼脂对照培养基 麦康凯液体对照培养基 紫红胆盐葡萄糖琼脂对照培养基 肠道菌增菌液体对照培养基 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐对照培养基
产胞外多糖(EPS)乳酸菌菌株的分离、筛选
产胞外多糖(EPS)乳酸菌菌株的分离、筛选 1.目的要求 (1)熟悉产胞外多糖乳酸菌菌株的筛选方法 (2)了解乳酸菌产胞外多糖的基本原理 2.基本原理 微生物胞外多糖(exopolysaccharides, EPS)是一些特殊微生物在生长代谢过程中分泌到细胞壁外、易与菌体分离的荚膜多糖或黏液多糖，属于微生物的次级代谢产物。 微生物EPS是一种长链、高分子质量的聚合物，甚独特的物理学和流变学特性以及使用安全性使它在食品和非食品工业备受青睐，尤其是它在医药领域所具有的巨大应用潜能正日愈引起人们的广泛关注。 自然界中能产生多糖的微生物种类很多，涉及细菌、酵母和丝状真菌。长久以来，乳酸菌用于发酵乳的生产，通常认为乳酸菌EPS安全性更为可靠，而且乳酸菌作为生理功能调节剂，利用益生菌制成活菌制剂，省去常规发酵、提取等繁琐工艺。因此，开发乳酸菌EPS较其他微生物EPS来说，更具有理论意义与实际价值。 多糖难溶于乙醇，因此如果乙醇溶液中有絮状沉淀出现，通常可认为样品中含有多糖。本实验就是利用多糖的这种性质来沉淀分离微生物EPS以供下一步的多糖检测。 目前用于多糖检测的方法较多，主要有干燥称重法、硫酸一蒽酮法、DNS(3, 5一二硝基水杨酸）法、苯酚一硫酸法、相对黏度法和Imshenetskii等报道的浊度法等。由于苯酚一硫酸法具有简单方便、显色稳定、灵敏度高、重现性好、不受蛋白质干扰等优点而深受欢迎。其原理是根据苯酚一硫酸试剂与游离的寡糖和多糖中的己糖、糖醛酸（或甲苯衍生物）发生的显色反应。己糖在490nm处（戊糖及糖醛酸在480nm处）有最大吸收，吸收值与糖含量呈线性关系。具体操作见实验步骤。本实验利用多糖难溶于乙醇的性质来沉淀分离微生物EPS。 本实验以乳制品和肉制品为初始原料，分离产EPS的乳酸菌菌株并筛选高产EPS的优良菌株。 3实验材料 3.1原料从市场上购买的乳制品、肉制品。 3.2培养基MRS液体培养基、固体培养基（1.5％琼脂）。 3.3主要试剂6％苯酚，（临用前用80％苯酚配制）、浓硫酸。 3.4器材普通光学显微镜、电热恒温培养箱、超净工作台、高压蒸汽消毒器、高速离心机、分光光度计 4实验方法与步骤 4.1菌种的分离各样品分别称量25 g，粉碎，溶解于225 ml无菌生理盐水中，振荡均匀，得到10-1的菌悬液。取1 ml此菌悬液，逐级稀释，直到10-8，并将不同稀释度的菌液各1 ml倒入平板，加入约15 ml含有CaCO3的MRS培养基中，轻轻水平转动混匀，待凝固后37℃恒温培养。(周一) 4.2初筛24 h培养后取出观察，观察产生乳酸溶解圈的菌落，那些表面黏稠或者周围有扩散现象的单菌落，菌落呈圆形，用接种环挑取时可见明显的黏性，疑为胞外多糖。革兰氏染色并进行显微观察，筛选出形态较好的菌株。(周二) 4.3复筛将已经挑选出的菌株接种于MRS液体管内，37℃活化培养，苯酚一硫酸法检测其24 h 的发酵液内所产EPS的量并进行比较，筛选出产EPS相对较多的乳酸菌。检测具体方法如下列步骤。 4.4标准曲线的制作准确称取标准葡萄糖20 mg于500 ml容量瓶中，加水至刻度。各种试剂按照表所示的量加入试管中后，静置10 min，摇匀，室温放置20 min以后于490nm波长下检测光密度，以2.0 ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。(周一)
小学五年级数学《体积单位的换算》教案模板四篇
小学五年级数学《体积单位的换算》教案模板四篇《体积单位的换算》是义务教育课程北师大版教材第十册第四单元第50-51页内容。 下面就是小编给大家带来的小学五年级数学《体积单位的换算》教案模板，欢迎大家阅读! 教学目标： 1.知识与技能：使学生能运用长方体和正方体的知识解决求表面积和体积的实际问题。 2.过程与方法：激发学生学数学、用数学的兴趣，提高综合解决问题的能力。 3.情感、态度与价值观：培养同伴之间进行合作交流，乐于用学过的知识解决生活中 的相关的实际问题。 教学重点： 观察、操作中进一步巩固体积、容积单位之间的换算。 教学难点： 培养学生根据具体情况，利用所学知识解决实际问题的综合能力。 教学准备： 每组准备6个同样大小的长方体或正方体小盒，投影。 教学过程： 一、导入新课 同学们上节课我们学习了体积单位之间的换算，这一节我们对第四单元的内容进行练习。 二、复习 1.师：什么是物体的表面积? 抽生回答。 2.师：在实际生活中，有时不一定要求出长方体和正方体6个面的面积和。要结合具 体情况分析，才能正确解决问题。 (1)做一个长方体(正方体)的油桶，需要多少材料，是求这个长方体(正方体)的几个面 的面积和?
(2)求做长方体排气管道，需要多少材料，是求长方体的几个面的面积和? 3.师：什么是物体的体积?什么是物体的容积?体积和容积有什么区别和联系? (1)求长方体菜窖挖出多少土，是求这个长方体的什么? (2)挖出的这些土能垫多长、多宽、多高的领操台，是求这个领操台的什么? 4.如果求火车的一节车厢能装多少吨煤，必须知道什么条件? 5.动手实践 (1)以小组为单位，拿出准备好的6个同样的小盒子，设计一个包装盒。 设计的包装盒要美观、大方、实用。 尽可能地节省材料。 列式计算出你设计的包装盒用多少纸板。 列式计算出你设计的包装盒的容积是多少。 (2)汇报交流。 三、巩固练习 1.练习四第1题：求图形的体积可以让学生独立计算。交流时教师要关注学生出现的一些问题。 2.练习四第3题：让学生应用体积单位的进率、单位换算等知识来判断。 3.练习四第4题，填上适当的体积单位。 让学生根据自己的判断填上适当的单位，进一步感受体积单位的实际意义，发展学生的空间观念。交流时，教师可以让学生比画一下。 4.练习四第5题：通过计算可以让学生说说计算方法，体会虽然结果相同，但表面积和体积是两个不同的概念，并可以结合实物指一指、说一说。 5.练习四第7题：使学生理解两个图形所占的空间就是这两个图形的体积。 6.练习四第8题：注意要把4厘米化为0.04米。 答案：45×28×0.04=50.4(立方米) 50.4÷1.5 = 33.6(车) 考虑实际情况，需要34车。