温度、PH、激活剂和抑制剂对酶活性的影响

（一）、温度、PH对酶活性的影响

一、实验目的

了解温度对酶活性的影响。了解酶活性的最适PH及掌握一种检测最适PH 的方法。

二、实验原理

三、实验步骤

1、温度对酶活性的影响

取3支试管，编号后按下表加入试剂

试剂

0.2%淀粉溶液

稀释唾液/ml

煮沸过的稀释唾液/ml试管编号

123

1.

51."5

1."5

11无

无无1

摇匀后，将

1、"3号两试管放入37摄氏度恒温水浴中，2号试管放入冰水中。10min后取出，将2号试管内的液体分为两半，用碘化钾-碘溶液来检验

1、"

2、3号试管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。将2号试管剩下的一半溶液放入37摄氏度水浴中继续保温10min后，再用碘液检验，结果如何？记录并解释结果。

注意事项：

1、唾液制备时，先用蒸馏水漱口，以清除食物残渣，再含一小口蒸馏水，

0."5~1min后，使其流入量筒，并稀释到50ml。

2、PH对酶活性的影响

取4个标有号码的20ml试管。用吸管按下表添加

0."2mol/L磷酸氢二钠溶液和

0.1mol/L柠檬酸溶液以制备PH=

5."0~

8."0的4种缓冲液。

试剂

0.2mol/L磷酸氢二钠/ml

0.1mol/L柠檬酸/ml

PH1

5.15

4.85

5试管编号

23

6.

3.

952."28

5.

86."84

9.72

0.288从4个试管中各取缓冲液3ml，分别注入到4支带有号码的试管中，随后于每个试管中添加

0."5%淀粉溶液2ml和稀释唾液2ml。向各试管中加入稀释唾液的时间间隔分别为1min。

将各试管内容物混匀，并依次置于37摄氏度恒温水浴中保温。

第四管加入唾液2min后，每隔1min由第二管取出一滴混合液，置于白瓷板上，加1滴碘化钾-碘溶液，检验淀粉的水解程度。待混合液变为棕黄色时，向所有试管中依次添加1或2滴碘化钾-碘溶液。添加碘化钾-碘溶液的时间间隔从第一管起，均为1min。

观察各试管内容物呈现的颜色，分析PH对唾液淀粉酶活性的影响。

注意事项：

1、从第三管中取混合液，是因为它的PH接近唾液淀粉酶的最适PH。

2、间隔1min，是为了有足够的时间去加稀释唾液和足够时间观察颜色，保证各试管反应时间相同。

四、实验结果

1、温度1浅蓝2

一半暗

蓝深蓝3

2、PH1深蓝浅蓝2

浅紫3

深紫4

分析：

酶的催化作用受温度的影响，在最适温度下，酶的反应速度最高。唾液淀粉酶的最适温度为37摄氏度。低温抑制酶的活性，高温使酶失活。淀粉遇碘显蓝色，按其分解程度由低到高会依次出现蓝色、紫色、暗褐色、无色。所以可用碘来检验其水解程度。

PH也能影响酶的活性，在最适PH下，酶的活性最大，偏酸、偏碱都降低酶的活性，唾液淀粉酶的最适PH为

6."8。

（二）、激活剂和抑制剂对酶活性的影响

一、实验目的

了解激活剂和抑制剂对酶活性的影响。

二、实验原理

三、实验步骤

取4支试管按下表加入试剂，观察现象并记录。

试管编号

1234

0.1%淀粉溶液/ml

1."5

1."5

1."5

1."5

1%CuSO4溶液/ml

0."5无无无

1%Nacl溶液/ml无

0."5无无

1%Na2SO4溶液/ml无无0."5无

蒸馏水/ml无无无

0."5

稀释唾液/ml

0."5

0."5

0."5

0."5

37摄氏度恒温水浴5min

碘化钾-碘溶液/滴22

试剂

四、实验结果1深蓝浅蓝2

中蓝3

中蓝4

分析：

酶的活性受激活剂或抑制剂的影响。氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子为其抑制剂。激活剂使酶的活性升高，抑制剂使酶活性降低。

加入Na2SO4是为了消除Na+和SO42-对酶活性的影响。

第三章 酶

第三章酶 一、填空题 1、根据酶对底物选择的严格程度不同，可将酶的专一性分为、、和三大类。 2、影响酶促反应速度的因素有、、、、 和。 3、米氏常数（Km）为反应速度达到一半时的，其单位为。 4、某些调节酶（寡聚酶）ひ对[S]作图时形成型曲线，这是底物与酶分子上专一性结合部位结合后产生的一种效应而引起的。 5、维生素B5构成的两种辅酶为和，这两种辅酶的作用是。 6、酶的动力学曲线为型；但变构酶的动力学曲线呈型。 7、酶的调节分为与调节。 8、缺乏维生素A和维生素D引起的疾病分别是、。 9、硫胺素在体内形成的辅酶和功能分别是_____________和____________ 。缺乏维生素C 引起的疾病是_____________。 二、选择题 1、酶作为一种生物催化剂，能加快化学反应速度的原因是酶能够（） A、升高反应的活化能 B、降低活化能 C、降低反应物的能量水平 D、降低反应的自由能 2、根据中间产物学说推导了能够表示整合酶促反应中底物浓度和反应速度关系公式的两位科学家是（） A、Michaelis和Menten B、Meselson和Stahl C、Hatch和Slack D、Miescher和Hoppe 3、酶活性中心是（） A、在一级结构水平上形成 B、在二级结构水平上形成 C、在三级结构水平上形成 D、在核酸指导下形成 4、酶促反应中决定酶专一性的部分是（） A、酶蛋白 B、底物 C、辅酶或辅基 D、催化基团 5、某酶今有4种底物(S)，其Km值如下，该酶的最适底物为（） A、S1：Km＝5×10-5M B、S2：Km＝1×10-5M C、S3：Km＝10×10-5M D、S4：Km＝0.1×10-5M 6、酶的非竞争性抑制剂对酶促反应的影响是（） A、Vmax不变，Km增大 B、Vmax不变，Km减小 C、Vmax增大，Km不变 D、Vmax减小，Km不变 7、有机磷农药是酶的（）

温度PH激活剂和抑制剂对酶活性的影响

（一）、温度、PH对酶活性的影响 一、实验目的 了解温度对酶活性的影响。了解酶活性的最适PH及掌握一种检测最适PH的方法。 二、实验原理 三、实验步骤 1、温度对酶活性的影响 取3支试管，编号后按下表加入试剂 试管编号 试剂 1 2 3 0.2%淀粉溶液 1.5 1.5 1.5 无 稀释唾液/ml 1 1 煮沸过的稀释唾液/ml 无无 1 摇匀后，将1、3号两试管放入37摄氏度恒温水浴中，2号试管放入冰水中。10min后取出，将2号试管内的液体分为两半，用碘化钾-碘溶液来检验1、2、3号试管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。将2号试管剩下的一半溶液放入37摄氏度水浴中继续保温10min后，再用碘液检验，结果如何？记录并解释结果。 注意事项： 1、唾液制备时，先用蒸馏水漱口，以清除食物残渣，再含一小口蒸馏水，0.5~1min 后，使其流入量筒，并稀释到50ml。 2、PH对酶活性的影响 取4个标有号码的20ml试管。用吸管按下表添加0.2mol/L磷酸氢二钠溶液和 0.1mol/L柠檬酸溶液以制备PH=5.0~8.0的4种缓冲液。 试管编号 试剂 1 2 3 4 0.2mol/L磷酸氢二钠/ml 5.15 6.05 7.72 9.72 0.1mol/L柠檬酸/ml 4.85 3.95 2.28 0.28 PH 5 5.8 6.8 8 从4个试管中各取缓冲液3ml，分别注入到4支带有号码的试管中，随后于每个试管中添加0.5%淀粉溶液2ml和稀释唾液2ml。向各试管中加入稀释唾液的时间间隔分别为1min。将各试管内容物混匀，并依次置于37摄氏度恒温水浴中保温。 第四管加入唾液2min后，每隔1min由第二管取出一滴混合液，置于白瓷板上，加1滴碘化钾-碘溶液，检验淀粉的水解程度。待混合液变为棕黄色时，向所有试管中依次添加1或2滴碘化钾-碘溶液。添加碘化钾-碘溶液的时间间隔从第一管起，均为1min。 观察各试管内容物呈现的颜色，分析PH对唾液淀粉酶活性的影响。 注意事项： 1、从第三管中取混合液，是因为它的PH接近唾液淀粉酶的最适PH。

酶 练习题及参考答案

－－第三章酶测试题－－ 一、单项选择题（在备选答案中只有一个是正确的） 1．关于酶的叙述哪项是正确的？ A．所有的酶都含有辅基或辅酶B．只能在体内起催化作用C．大多数酶的化学本质是蛋白质 D．能改变化学反应的平衡点加速反应的进行E．都具有立体异构专一性（特异性） 2．酶原所以没有活性是因为： A．酶蛋白肽链合成不完全B．活性中心未形成或未暴露C．酶原是普通的蛋白质 D．缺乏辅酶或辅基E．是已经变性的蛋白质 3．磺胺类药物的类似物是： A．四氢叶酸B．二氢叶酸C．对氨基苯甲酸D．叶酸E．嘧啶 4．关于酶活性中心的叙述，哪项不正确？ A．酶与底物接触只限于酶分子上与酶活性密切有关的较小区域B．必需基团可位于活性中心之内，也可位于活性中心之外C．一般来说，总是多肽链的一级结构上相邻的几个氨基酸的残基相对集中，形成酶的活性中心D．酶原激活实际上就是完整的活性中心形成的过程E．当底物分子与酶分子相接触时，可引起酶活性中心的构象改变 5．辅酶NADP+分子中含有哪种B族维生素？ A．磷酸吡哆醛B．核黄素C．叶酸D．尼克酰胺E．硫胺素

6．下列关于酶蛋白和辅助因子的叙述，哪一点不正确？ A．酶蛋白或辅助因子单独存在时均无催化作用B．一种酶蛋白只与一种辅助因子结合成一种全酶C．一种辅助因子只能与一种酶蛋白结合成一种全酶D．酶蛋白决定结合酶蛋白反应的专一性E．辅助因子直接参加反应 7．如果有一酶促反应其〔8〕=1/2Km，则v值应等于多少Vmax？ A．0．25 B．0．33 C．0．50 D．0．67 E．0．75 8．有机磷杀虫剂对胆碱酯酶的抑制作用属于： A．可逆性抑制作用B．竞争性抑制作用C．非竞争性抑制作用D．反竞争性抑制作用E．不可逆性抑制作用 9．关于pH对酶活性的影响，以下哪项不对？ A．影响必需基团解离状态B．也能影响底物的解离状态C．酶在一定的pH范围内发挥最高活性D．破坏酶蛋白的一级结构E．pH改变能影响酶的Km值10．丙二酸对于琥珀酸脱氢酶的影响属于： A．反馈抑制B．底物抑制C．竞争性抑制D．非竞争性抑制E．变构调节二、多项选择题（在备选答案中有二个或二个以上是正确的，错选或未选全的均不给分） 1．关于酶的竞争性抑制作用的说法哪些是正确的？ A．抑制剂结构一般与底物结构相似B．Vm不变C．增加底物浓度可减弱抑制剂的影响D．使Km值增大 2．关于酶的非竞争性抑制作用的说法哪些是正确的？ A．增加底物浓度能减少抑制剂的影响B．Vm降低C．抑制剂结构与底物无相似之处D．Km值不变

实验六淀粉酶的专一性和温度pH激动剂抑制剂对酶活性的影响

实验六淀粉酶的专一性和温度、pH、激活剂 及抑制剂对酶活性的影响 实验类型：验证型 目的和要求 1.通过本实验观察、验证酶的专一性和温度、pH、激动剂及抑制剂对酶活性的影响。 2.熟悉淀粉及其酶解产物的特殊显色方法；电热恒温水浴的使用。 3.了解唾液淀粉酶的收集与预处理。 原理 酶具有高度专一性，一种酶只能催化一种或一类底物发生反应，如淀粉酶只能水解淀 粉，不能水解蔗糖。当淀粉被淀粉酶彻底水解为还原性麦芽糖和葡萄糖时，能使班氏试剂 的Cu2+还原成Cu1+，生成砖红色Cu2O沉淀。淀粉酶的活性受温度、pH、激动剂及抑制剂、 酶浓度以及作用时间等多种因素影响，因而水解淀粉生成一系列分子大小不同的糊精。不 同程度的水解糊精可与碘反应生成紫色、棕色或红色络合物。通过上述特征性反应，并以 蔗糖等作对照，便可观察、验证淀粉酶是否具有专一性以及它的催化活性是否受到影响。 操作方法 一、唾液淀粉酶的收集与处理 1.制备唾液 实验者先将痰咳尽，用自来水漱口，以清除口腔内食物残渣，再在口腔内含蒸馏水约15ml，并作咀嚼咕漱运动，3分钟后吐入垫有两层经润湿处理的脱脂纱布的漏斗内，过滤于小烧杯 中备用，为与下面稀释唾液相区别，此称制备唾液。 2.煮沸唾液 取上述唾液约2ml，盛入1中号试管中,置沸水浴煮沸5分钟备用。 3.稀释唾液 调整唾液淀粉酶活性，使之在pH6.8、37℃和既无激动剂又无抑制剂条件下，作用5min，水解淀粉至红色糊精为宜。具体做法是取12凹白瓷反应板一块，按下列步骤操作： ①第1排每凹各加1滴制备唾液，12、13、14凹分别加生理盐水1、2、3滴，用滴管采用抽吸法，由稀到浓（14→１2）小心混匀各凹，勿使溅入相邻凹中。每混匀一凹便取其1滴放入同列的2排凹中，剩余稀释唾液应全部放回原凹中。 ②在盛有不同稀释度唾液的第2排各凹中，均加入4滴缓冲液（pH6.8），2滴1%的淀粉液和2滴蒸馏水，用①混匀法充分混匀，置37℃下5min。 ③在第2排各凹中加I液一滴，混匀，观察比较各凹颜色，以浅棕-红色对应的稀释倍数， 用生理盐水稀释3ml制备唾液备用。 二、唾液淀粉酶的专一性以及温度、pH、激活剂和抑制剂对唾液淀粉酶活性影响的观察

03 生物化学习题与解析--酶

酶 一、选择题 （一） A 型题 ? 酶的活性中心是指 A ．结合抑制剂使酶活性降低或丧失的部位 B ．结合底物并催化其转变成产物的部位 C ．结合别构剂并调节酶活性的部位 D ．结合激活剂使酶活性增高的部位 E ．酶的活性中心由催化基团和辅酶组成 ? 酶促反应中，决定反应特异性的是 A ．酶蛋白 B ．辅酶 C ．别构剂 D ．金属离子 E ．辅基 ? 关于酶的叙述正确的是 A ．酶是生物催化剂，它的化学本质是蛋白质和核酸 B ．体内的生物催化剂都是蛋白质 C ．酶是活细胞合成的具有催化作用的蛋白质 D ．酶改变反应的平衡点，所以能加速反应的进程 E ．酶的底物都是有机化合物 ? 酶蛋白变性后活性丧失原因是 A ．酶蛋白被完全降解为氨基酸 B ．酶蛋白的一级结构受到破坏 C ．酶蛋白的空间结构受到破坏 D ．酶蛋白不再溶于水 E ．失去了激活剂 ? 含有维生素 B 1 的辅酶是 A ． NAD + B ． FAD C ． TPP D ． CoA E ． FMN ? 解释酶的专一性较合理的学说是 A ．锁 - 钥学说 B ．化学渗透学说 C ．诱导契合学说 D ．化学偶联学说 E ．中间产物学说 ? 酶的竞争性抑制剂的特点是 A ．当底物浓度增加时，抑制剂作用不减 B ．抑制剂和酶活性中心的结合部位相结合 C ．抑制剂的结构与底物不相似 D ．当抑制剂的浓度增加时，酶变性失活 E ．抑制剂与酶的结合是不可逆的 8 ．磺胺类药物能抑菌，是因为细菌利用对氨基苯甲酸合成二氢叶酸时，磺胺是二氢叶酸合成酶的 A ．竞争性抑制剂 B ．不可逆抑制剂 C ．非竞争性抑制剂 D ．反竞争性抑制剂 E ．别构抑制剂 9 ．关于酶的共价修饰，正确的是 A ．活性中心的催化基团经修饰后，改变酶的催化活性 B ．通过打断某些肽键，使酶的活性中心形成而改变酶的活性 C ．只涉及酶的一级结构的改变而不涉及高级结构的改变 D ．有级联放大效应 E ．只包括磷酸化修饰和甲基化修饰

实验二_温度、PH、激活剂和抑制剂对酶活性的影响_预习

实验二温度、pH、激活剂和抑制剂对酶活性的影响 温度、p H对酶活性的影响 一、实验目的 了解温度对酶活性的影响。了解酶活性的最适pH及掌握一种检测最适pH的方法。 二、实验原理（请同学们自已补充） 三、实验步骤 1、温度对酶活性的影响 取3支试管，编号后按下表加入试剂 试管编号 试剂 1 2 3 0.2%淀粉溶液（d） 1.5 1.5 1.5 稀释唾液/ml 1 1 无 煮沸过的稀释唾液/ml 无无 1 摇匀后，将1、3号两试管放入37摄氏度恒温水浴中，2号试管放入冰水中。10min后取出，将2号试管内的液体分为两半，用碘化钾-碘溶液来检验1、2、3

号试管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。将2号试管剩下的一半溶液放入37摄氏度水浴中继续保温10min后，再用碘液检验，结果如何？记录并解释结果。 注意事项： 唾液制备时，先用蒸馏水漱口，以清除食物残渣，再含一小口蒸馏水，0.5~1min后，使其流入量筒，并稀释到50ml。 2、pH对酶活性的影响 取4个标有号码的20ml试管。用吸管按下表添加0.2mol/L磷酸氢二钠溶液和0.1mol/L柠檬酸溶液以制备pH=5.0~8.0的4种缓冲液。 试剂 试管编号 1 2 3 4 0.2mol/L磷酸氢二钠/ml 5.1 5 6.0 5 7.7 2 9.7 2 0.1mol/L柠檬酸/ml 4.8 5 3.9 5 2.2 8 0.2 8 pH 5 5.8 6.8 8 从4个试管中各取缓冲液3ml，分别注入到4支带有号码的试管中，随后于每个试管中添加0.5%淀粉溶液2ml和稀释唾液2ml。向各试管中加入稀释唾液的时间间隔分别为1min。将各试管内容物混匀，并依次置于37摄氏度恒温水浴中保温。 第4管加入唾液2min后，每隔1min由第2管取出一滴混合液，置于白瓷板上，加1滴碘化钾-碘溶液，检验淀粉的水解程度。待混合液变为棕黄色时，向所有试管中依次添加1或2滴碘化钾-碘溶液。添加碘化钾-碘溶液的时间间隔从第1管起，均为1min。 观察各试管内容物呈现的颜色，分析pH对唾液淀粉酶活性的影响。 注意事项：

酶练习题

一.单项选择题 1. 竞争性抑制剂对酶促反应的影响是： A. Km增大，Vm减小 B. Km不变，Vm增大 C. Km减小，Vm减小 D. Km增大，Vm不变 2. 泛酸是下列哪种辅酶的组成成分 A. CoA-SH B. TPP C. FAD D. FMN 3. Km值与底物亲和力大小的关系是 A. Km值越小，亲和力越大 B. Km值越大，亲和力越大 C. Km值的大小与亲和力无关 D. Km值越小，亲和力越小 4. 磺胺类药物的类似物是： A. 四氢叶酸 B. 二氢叶酸 C. 对氨基苯甲酸 D. 叶酸 5. 酶能加速化学反应的进行是由于 A. 向反应体系提供能量 B. 降低反应的活化能 C. 降低反应底物的能量水平 D. 提高反应底物的能量水平 6. NADPH分子中含有哪种维生素 A. 磷酸吡哆醛 B. 核黄素 C. 叶酸 D. 尼克酰胺 7.维生素B2是下列哪种辅酶的组成 成分？ A. FH4 B. NADP+ C. TPP D. FAD 8. 当酶促反应[S]=0.5Km，则V值是 A. 0.25Vm B. 0.33Vm C. 0.50Vm D. 0.65Vm 9. 有机磷杀虫剂对胆碱酯酶的抑制作用是： A. 可逆性抑制作用 B. 竞争性抑制作用 C. 非竞争性抑制作用 D. 不可逆性抑制作用 10. 关于pH值对酶活性的影响，下列哪项不对？ A. 影响必需基团的解离状态 B. 影响底物的解离状态

C. 破坏酶蛋白的一级结构 D. 影响酶与底物结合 11. 维生素D3的主要活性形式是： A. 25-(OH)-D3 B. 1-(OH)-D3 C. 1,25-(OH)2-D3 D. 1,24-(OH)2-D3 12. 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的影响属 于： A. 变构调节 B. 底物抑制 C. 竞争性抑制 D. 非竞争性抑制 13. 乳酸脱氢酶有几种同工酶 A. 2 B. 3 C. 4 D. 5 14. 有关同工酶的概念正确的是： A. 催化相同的化学反应，酶蛋白的分子结构、理化性质不同，电泳行为不 同 B. 催化不同的化学反应 C. 催化不同的化学反应，酶蛋白的分子结构、理化性质相同，电泳行为相 同 D. 催化相似的化学反应 15. 关于Km值的叙述正确的是： A. 与酶和底物的浓度有关 B. 是达到Vm 时的底物浓度 C. 与酶和底物的亲和力无关 D. 是V达到1/2Vm 时的底物浓度 16. 酶在催化反应中决定酶专一性的 部分是： A. 辅酶 B. 辅基 C. 金属离子 D. 酶蛋白 17. 非竞争性抑制剂对酶促反应的影 响是： A. Km减小，Vm增大 B. Km不变，Vm减小 C. Km增大，Vm减小 D. Km增大，Vm不变 18. 反竞争性抑制剂对酶促反应的影响符合下列哪项特征？ A. Km减小，Vm减小 B. Km不变，Vm增大 C. Km增大，Vm减小 D. Km增大，Vm不变

酶(作业)

第五章酶学 一、选择题 （D）1、酶促反应的初速度不受哪一因素的影响？ A [S]； B [E]； C [PH]； D 时间； E 温度。 （D）3、关于米氏常数Km的说法，哪个是正确的？ A 饱和底物浓度时的速度； B 在一定酶浓度下最大速度的一半； C 饱和底物浓度的一半； D 速度达到最大反应速度一半时的底物浓度； E 降低一半速度时的抑制剂浓度。 （B）4、如果要求酶促反应μ=Vmax×90%，则[S]应为Km的倍数是 A 4.5； B 9； C 8； D 5； E 90。 （B）5、作为催化剂的酶分子，具有下列哪一种能量效应？ A 增高反应的活化能； B 降低活化能； C 增高产物能量水平； D 降低产物能量水平； E 降低反应自由能。 （A）8、下列关于酶的描述，哪一项是错误的？ A 所有的蛋白质都是酶； B 酶是生物催化剂； C 酶是在细胞内合成的，但也可以在细胞外发挥催化功能； D 酶具有专一性； E 酶在酸性或碱性条件下均会失活。 （E）11、下列哪一项不是辅酶的功能？ A 转移基团； B 传递氢； C 传递电子； D 某些物质代谢时的载体； E 决定酶的专一性。 （D）13、下列关于酶活性部位的描述，哪一项是错误的？ A 活性部位是酶分子中直接与底物结合并发挥催化功能的部位； B 活性部位的基团按功能可分为两类，一类是结合基团，一类是催化基团； C 活性部位的基团可以是同一条肽链但在一级结构上相距很远的基团； D 不同肽链上的有关基团不能构成该酶的活性部位； E 酶的活性部位决定酶的专一性。 （A）14、下列哪一项不是酶具有高催化效率的因素？ A 加热； B 酸碱催化； C 张力和变形； D 共价催化； E 邻近定位效应。（D）15、当[S]=4Km时，μ=？

温度、pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响

温度、pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响 （间接碘量法） （effects of temperature pH activitor and inhibitor to activity of enzyme） 一、目的 1.了解温度、pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响 2.学习酶活性的判定 二、原理 酶活性大小可以用反应速度来表示，即在单位时间内，酶所催化底物的消耗量或产物的生成量来衡量。酶活性大，反应速度就快。反之则慢。酶促反应速度受多种因素的影响。如温度、pH、激活剂、抑制剂等。 本实验是观察在不同温度，pH，以及缺乏激活剂或有抑制剂的条件下唾液淀粉酶的活性大小。借以验证各种因素对酶活性的影响。 唾液中含有唾液淀粉酶，此酶可以使淀粉逐步水解，最后生成麦芽糖。麦芽糖具有还原性。根据淀粉被唾液淀粉酶水解后产物的生成量（即还原性麦芽糖的多少）判定酶活性的大小。用碘的反滴定法测定还原物的量，还原物多，酶活性大。 具体反应如下： 1、试剂成分（S、H、S试剂）：CuSO 4、Na 2 CO 3 、NaHCO 3 、KI、KIO 3 、酒石 酸钾钠、草酸钾。 2、判定酶活性大小的化学反应过程： Na 2CO 3 ＋2H 2 O —→2NaOH ＋ H 2 CO 3 CuSO 4＋2NaOH —→Cu(OH) 2 ↓＋ Na 2 SO 4 5KI ＋KIO 3 ＋ 3H 2 SO 4 —→3I2＋3K2SO4 ＋3H2O 酶 淀粉———→麦芽糖麦芽糖＋Cu++—→麦芽糖氧化产物＋Cu+ Cu+＋ I 2 —→Cu++ ＋ 2I- COO- 草酸钾COO- Cu++＋|—————→| >Cu COO- 防止逆反应COO- 剩余I 2 ＋ Na 2 S 2 O 3 —→2I- ＋ Na2S4O6 （与淀粉呈兰色) （与淀粉无色) 3、判定酶活性大小的标志 酶活性大→麦芽糖多→Cu+ 生成量多→I 2 消耗量多→ 剩余I 2少→Na 2 S 2 O 3 消耗量少 酶活性越大，Na 2S 2 O 3 消耗量越少。空白实验无酶活性，因此Na 2 S 2 O 3 消耗量最 多。与空白实验进行对比，差值越大，说明此条件下酶活性越大。

生物化学实验四：酶的激活和抑制作用

生物化学实验四：酶的激活和抑制作用 指导教师：张继红 一、目的和要求： ①让学生初步认识酶的性质，了解酶促反应的激活剂与抑制剂； ②学习检定激活剂和抑制影响酶反应的方法和原理； 二、实验原理： 酶是具有高效专一催化活性的蛋白质，其活性常受温度PH及些物质的影响。某些物质可以增加其活性，称为激活剂；某些物质能降低其活性，称为抑制剂。很少量的激活剂或抑制剂就会影响酶的活性，而且这种作用常常具有特异性。但要注意的是激活剂和抑制不是绝对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂时却为另一种酶的抑制剂，而在高浓度时则为该酶的激活剂（如NaCl）。 三、实验材料及用具 1、1%淀粉溶液 2、1%氯化钠溶液 3、碘化钾-碘溶液：将碘化钾20g和碘10g溶解在100ml水中，使用前稀释10倍。 4、稀释100倍~200倍的新鲜唾液 5、0.1%硫酸铜溶液 6、0.1%Na2SO4溶液 四、主要步骤： 激活剂和抑制的认识：取4支试管，按下表加试剂： 管号 1 2 3 4 0.1%淀粉（ml） 1.5 1.5 1.5 1.5 1%CuSO4（ml）0.5 / / / 1%NaCl（ml）/ 0.5 / / 1%Na2SO4（ml）/ / 0.5 / 水/ / / 0.5 稀淀粉酶（ml）0.5 0.5 0.5 0.5 保温（37℃）10分钟后 KI-I22-3d 2-3d 2-3d 2-3d 现象 五、注意事项： 1、激活剂抑制剂实验中淀粉酶要最后加（为什么？）

2、加入淀粉时要小心，不要沾到试管壁；另外，摇匀时也不宜用力过猛， 使淀粉溶液或淀粉粒过多地沾在试管壁上，这样会影响结果的观察，误差较大。 六、作业： 1、试说明本实验第3号管的意义，并推出Cl-和Cu2+各是唾液酶的激活剂还是抑制剂？举例说明抑制与变性剂有何异同？ 2、为什么温度对酶的活性具有双重影响？