蓖麻毒素的分离、提取及活性研究
蓖麻毒素的分离、提取及活性研究
本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文作了明确的说明并表示谢意。本学位论文成果是本人在四川Ｉ大学读书期间在侯太平教授指导下取得的，论文成果归四川Ｉ大学所有，特此声明。警２００７＠ｚ衙４户ｊ／杉四川大学硕｝。学位论文蓖麻毒素的分离、提取及活性研究农药学专业研究生：高杉指导教师：侯太平本研究以蓖麻毒素灭鼠为目的，以小白鼠活性实验为筛选指标，研究了从蓖麻种子中分离蓖麻毒蛋白的方法，实现了对蓖麻毒素的最优提取，并利用得到的蓖麻籽粗提物对小白鼠进行灭鼠试验，来模拟高原鼠兔的灭鼠效果评价。最终在野外大面积应用实验中，取得了比较满意的效果。以蓖麻籽为原料，通过选用不同物质做浸提剂，单独研究了各种浸提剂对蓖麻毒素的最佳提取方法，在综合对各浸提剂在其最佳提取条件下的提取蓖麻毒素的效果后，最终确定，０．２ｍｏｌ／Ｌ的磷酸缓冲液在对去皮蓖麻籽的质量体积比为ｌ：３（ｇ／ｍ１）时，浸提２４小时后，所得混合物４０００ｒｐｍ离心３０ｍｉｎ，小心除去油
脂，以及离心所剩的渣滓，保留清液，在清液中加入（ＮＨ４）ｚＳ０４盐析剂到８０％饱和度，盐析２４小时，１００００ｒｐｍ离心３０ｍｉｎ，再经透析，真空干燥后所得蓖麻毒素（粗毒）产率最高，同时该提取方法还兼顾到蛋白的稳定性及整个提取流程的经济性，正是要寻找的最佳工艺路线。应用提取出的蓖麻毒素（粗毒）对小白鼠做活性实验，’结果表明，蓖麻毒素对小鼠腹腔注射的ＬＤ∞为７．９７１ｕｇ／ｋｇ，其主要药效成分为蓖麻毒素。蓖麻毒素使小白鼠中毒后无明显异常反应，不容易造成拒食现象，能够提高灭鼠效率。而小白鼠从腹腔注射后３０ｈ开始出现死亡，直到９６ｈ后均有死亡，说明本毒饵是高效、慢性灭鼠刻。针对ＪｌＩ西北高原的主要害鼠一高原鼠兔，应用蓖麻毒素灭鼠剂进行了野外四川ｒ大学硕上学位论文防治实验，在大面积实验中，该粗毒以１％浓度配制毒饵对高原鼠兔的校正灭效为８５％以上。小区实验的灭效在９０％左右。通过连续半个月的观察，未发现鹰等天敌出现二次中毒现象，对受试绵羊也无明显影响，禁牧期后，未发现对牲畜造成危害。这些都充分说明，蓖麻毒素灭鼠剂在应用中是具有安全保障的。，上述研究结果说明，蓖麻毒素灭鼠剂作为一种新型的灭鼠剂，无二次中毒，对牛、羊等对非靶标生物未见明显危害，比较安全、无残毒，不造成环境污染。不失为一种优良的安全无公害灭鼠剂。关键词：蓖麻毒素；提
取分离；ＬＤｓｏ；高原鼠兔；灭洞率四ＪＩ『人学硕｝。学位论立ＥｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄＲｅｓｅａｒｃｈｏｎＢｉｏａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＲａｗＴｏｘｉｎｏｆＲｉｃｉｏｕｓＭａｊｏｒ：ＰｅｓｔｉｃｉｄｅＳｃｉｅｎｃｅＧｒａｄｕａｔｅ：ＧＡＯＳｈａｎＴｕｔｏｒ：ＨＯＵＴａｉ—ｐｉｎｇＴｈｅｐａｐｅｒｍａｉｎｌｙｓｔｕｄｙｔｈｅｄｅｒａｔｉｚａ
ｔｉｏｎｂｙｒｉｅｉｎ．Ｉｔｔａｋｅｓｔｈｅｗｈｉｔｅｍｏｕｓｅ’ｓａｃｔｉｖｅｎｅｓｓｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｓｔｈｅｉｎｄｉｃａｔｏｒ，ｓｔｕｄｙｍｅｔｈｏｄｓａｎｄｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｒｉｃｉｎｆｒｏｍｔｈ
ｅｃａｓｔｅｒｂｅａｎ．Ｆｉｎａｌｌｙ，ｆｉｎｄｏｕｔｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｗａｙｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ．ａｎｄｕｓｉｎｇｔｈｅｃｒｕｄｅｅｘｔｒａｃｔｏｆｒｉｃｉｎ，Ｉｓｔｕｄｙｔｈｅｋｉｌｌｉｎｇｅｆｆｉｃａｃｙｔｏｔｈｅｗｈｉｔｅ
ｍｏｕｓｅ，ｓｉｍｕｌａｔｅｄｔｈｅｐｌａｔｅａｕｒｏｄｅｎｔｓｔｏｄｅｒａｔｉｚａｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔａｐｐｒａｉｓａｌ．Ａｔｌａｓｔ，ｉｎｔｈｅｂｉｇａｒｅａａｐｐｌｌｅｄｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ｔｈｉｓｒｏｄｅｎｔｉｃｉｄｅｈａｓｏｂｔａ
ｉｎｅｄｔｈｅｑｕｉｔｅｓａｔｉｓｆａｃｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔ．Ｃｈｏｏｓｅｃａｓｔｅｒｂｅａｎａｓｔｈｅｒａｗｍａｔｅｒｉａｌ。ｔｈｒｏｕｇｈｓｅｌｅｃｔｓｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｅｘｔｒａｃ
ｔｉｎｇａｇｅｎｔｓｔｏｓｏａｋ，ａｆｔｅｒｓｔｕｄｙｔｈｅｂｓｅｔｍｅｔｈｏｄｏｆｗｉｔｈｄｒａｗｉｎｇｒｉｃｉｎｂｙｅａｃｈｋｉｎｄｓｏ
ｆｔｅｘｔｒａｃｔｉｎｇａｇｅｎｔｓ，ａｎｄｃｏｎｔｒａｓｔｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｅｆｆｉｃａｃｙ
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ｍｅｔｈｏｄｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｉｓ：ｅｘｔｒａｃｔｅｄｗｉｔｈ０．２ｍｏｌ／ＬＰＢＳ（ｃａｓｔｅｒｂｅａｎ：ＰＢＳ，ｑｕａｌｉｔｙｖｏｌｕｍｅｒａｔｉｏｉｓＩ：３（ｇ／ｍ１）），Ａｆｔｅｒｓｏａｋｆｏｒ２４ｈｏｕｒｓ，ｏｂｔａｉｎｅｄｍｉｘｔｕｒｅ４０００ｒｐｍｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｅｄ３０ｍｉｎ，ｄｅｇｒｅａｓｅｃａｒｅｆｕｌｌｙ，ｒｅｍｏｖｅｔｈｅｓｅｄｉｍｅｎｔ油ｉｃｈｔｈｅｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌｒｅｍａｉｎｓ，ｋｅｅｐｔｈｅｃｌｅａｒ１ｉｑｕｉｄ，ａｎｄｕｓｅ（ＮＨ４）２Ｓ幽ｓａｌｔｅｄｏｕｔｉｎｔｈｅ１ｉｑｕｉｄ
ｔｏ８０％ｄｅｇｒｅｅｏｆｓａｔｕｒａｔｉｏｎ，Ａｆｔｅｒｓａｌｔｉｎｇ—ｏｕｔ３四川大学硕｝：学位论文２４ｈｏｕｒｓ，ｉ００００ｒｐｍｃｅｎｔｒｉｆｕｇａａｔｅ３０ｍｉａ，ｄｉａｌｙｓｉｓａｎｄｖａｃｕｕｍｄｒｙｉｎｇ．ｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｒｉｃｉｎ（ｃｒｕｄｅｅｘｔｒａｃｔ）ｉＳｈｉｇｈｅｓｔ，ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙｔｈｉＳｗｉｔｈｄｒａｗｍｅｔｈｏｄａｌＳＯｇｉｖｅｄｕａｌａｔｔｅｎｔｉｏｎｔｏｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙａｎｄｅｃｏｎｏｍｉｃａｌｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ．ＳｏｉｔｐｒｅｃｉｓｅｌｙｉＳｔｈｅｂｅｓｔｃｒａｆｔｒｏｕｔｅｗｈｉｃｈｗｅｓｅｅｋｅｄ．Ｕｓｉｎｇｔｈｅｒｉｃｉｎ（ｃｒｕｄｅｅｘｔｒａｃｔ）ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｗｈｉｔｅｍｏｕｓｅａｃｔｉｖｅｎｅｓｓｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ｆｉｎａｌｌｙｉｎｄｉｃａｔｅｄ，ｔｈｅＬＤ５０ｏｆｒｉｃｉｎｗｈｉｃｈｉｎｊｅｃｔｓｔｏｔｈｅｍｏｕｓｅａｂｄｏｍｉｎａｌｃａｖｉｔｙｉｓ７．９７１ｕｇ／ｋｇ，ｔｈｅｍａｉｎｃｏｍｐｏｎｅｎｔｏｆｒｏｄｅｎｔｉｃｉｄｅｉｓｒｉｃｉｎ．Ａｆｔｅｒｔｈｅｒｉｃｉｎｃａｕｓｅｓｔｈｅ
ｗｈｉｔｅｍｏｕｓｅｔｏｂｅｐｏｉｓｏｎｅｄ．ｔｈｅｒ＝ｅｉｓｎｏｔｏｂｖｉｏｕｓｌｙａｂｎｏｒｍｉｔｙｒｅｓｐｏｎｄｅｄ，ｔｈａｔｉｓｎｏｔｅａｓｙｔｏｃｒｅａｔｅｔｈｅａｎｔｉｆｅｅｄａｎｔｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎ，ｔｈａｔｃａｎｅｎｈａｎｃｅｔｈｅｋｉｌｌｉｎｇｍｏｕｓｅｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｓｔｈａｔｒａｃｉｎｉＳａｓｌｏｗｌｙａｎｄｈｉｇｈｌｙｅｆｆｅｃｔｉｖｅｔｏｘｉｎｓｉｎｃｅｔｈｏｓｅｔｒｅａｔｅｄｗｈｉｔｅｍｏｕｓｅｇｅｎｅｒａｌｌｙｄｉｅｄｂｅｔｗｅｅｎ３０ｈａｎｄ９６ｈ．Ｉｎｖｉｅｗｏｆｔｈｅｈｏｓｔｃｒｉｔｉｃａｌｍｏｕｓｅ…Ｏｃｈｏｔｏｎａｃｕｒｚｏｎｉａｅｉｎｔｈｅｗｅｓｔｅｒｎ—ｎｏｒｔｈＳｉｃｈｕａｎｐｌａｔｅａｕ。ａｐｐｌｉｃａｔｅｄｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｉｎｔｈｅｂｉｇａｒｅａｗａｓｔａｋｅｄ，ｕｓｉｎｇｒａｃｉｎａｓｔｈｅｍａｉｎｃｏｍｐｏｎｅｔ．ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｔｈｅａｖｅｒａｇｅｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇｒａｔｅｓａｒｅｏｖｅｒ８５％．ＴｈｅｋｉｌｌｉｎｇｒａｔｅｆｏｒＯｃｈｏｔｏｎａｃｕｒｚｏｎｉａｅｉＳａｂｏｕｔ９０％ｉｎｔｈｅｐｌｏｔｅｘｐｅｒ
ｉｍｅｎｔ．Ｔｈｒｏｕｇｈｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｌｙｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｉｎｈａｌｆｍｏｎｔｈ—ｌｏｎｇ，ｗｅｈａｄｎｏｔｄｉｓｃｏｖｅｒｅｄｓｅｃｏｎｄａｒｙｐｏｉｓｏｎｉｎｇｏｎｎａｔｕｒａｌｅｎｅｍｙｌｉｋｅｈａｗｋ．ＴｈｅｔｒｅａｔｅｄｓｈｅｅｐａｌＳＯｎｏｔｏｂｖｉｏｕｓｌｙｔｏｂｅａｆｆｅｃｔｅｄ，ａｆｔｅｒｐｒｏｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｇｒａｚｉｎｇｐｅｒｉｏｄ，ｗｅｈａｓｎｏｔｄｉｓｃｏｖｅｒｔｈｅｈａｒｍｔｏｔｈｅｄｏｍｅｓｔｉｃａｎｉｍａｌ．Ｔｈｅｓｅａｌｌｆｕｌｌｙｅｘｐｌａｉｎｅｄｔｈａｔ，ｔｈｅｒｉｃｉｎｒｏｄｅｎｔｉｃｉｄｅｈａｓｔｈｅｓａｆｅｔｙｃｏｎｔｒｏｌｉｎｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．Ｔｈｅａｂｏｖｅｆｉｎｄｉｎｇｓｓｈｏｗｓｔｈａｔ，ａｓｏｎｅｋｉｎｄｏｆｎｅｗｒｏｄｅｎｔｉｃｉｄｅ，ｔｈｅｒｉｃｉｎｒｏｄｅｎｔｉｃｉｄｅｈａｓｎｏｔｓｅｃｏｎｄａｒｙｐｏｉｓｏｎｉｎｇ，ｓａｆｅａｎｄｈｉｇｈｅｆｆｉｃａｃｙ．Ｓｏ．ｉｔ’ＳａｐｒｏｍｉＳｉｎｇｒｏｄｅｎｔｉｃｉｄｅｔｏａｐｐｌｙｔｏｗｉｄｅａｒｅａｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｒｉｃｉｎ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｓｅｐａｒａｔｉｏｎ，ＬＤｓ０，Ｏｃｈｏｔｏｎ
ａｃｕｒｚｏｎｉａｅ，ｔｈｅｋｉｌｌｉｎｇｒａｔｅｆｏｒＯｃｈｏｔｏｎａｃｕｒｚｏｎｉａｅ４【『ｑ川人学硕Ｉ：学位论文前言蓖麻（ＲｉｃｉｎｕｓｃｏｍｍｕｎＹｓＬ．）属大戟科蓖麻属，是十大油料作物之一。我国蓖麻种植面积约４７万公顷，蓖麻籽年产量３０万吨，居世界第２位。蓖麻籽榨油后的饼粕富含多种氨基酸、矿物质，可作为牲畜的优良饲料，但蓖麻籽中含有的蓖麻碱、毒蛋白、变应原和血球凝集素等毒素对牲畜有较强的毒性，不能直接被利用。因此，寻找有效提取蓖麻籽中的毒素的方法将会极大地提高蓖麻资源的综合利用程度，产生更大的经济和生态效应。蓖麻毒蛋白（Ｒｉｃｉｎ）是蓖麻种子中的一种毒蛋白，含量占籽重的１％－５％。在１８８７年，Ｄｉｘｓｏｎ首次证明了蓖麻籽的毒性是由一种蛋白引起的：１９世纪后叶，Ｓｔｉｌｉｍａｒｋ详细地研究了这种毒素蛋白，并建议命名为“Ｒｉｃｉｎ”。此后，蓖麻毒蛋白的理化性质和生物学特性引起了许多生化学家的兴趣和关注。研究表明，蓖麻毒蛋白对所有哺乳动物的有核细胞都有毒害作用，它通过抑制蛋白质合成来杀死癌细胞，这使它在医学上成为用于杀伤肿瘤细胞的候选毒素之一。Ｒｉｃｉｎ是迄今为止天然药中最毒的蛋白之一，几乎对所有真核细胞都有毒性。它以往主要用于治疗肿瘤的研究，在作为灭鼠剂应用上尚未见报道。有资料显示，川西北高寒草场
鼠害分布面积达２７０万公顷，占可利用面积的２０．１％。而高原鼠兔是川西北高原的主要害鼠之一，它们群栖穴居，具有强烈的挖掘活动和以植物为食的生态特征，使其作用集中表现在对植被和土壤的影响上。尤其是由于它们营群居生活，在一定范围内大量集中，生物量特大，危害极为严重，是草原上的主要害鼠。鼠兔大量存在，导致草场的退化，不但给当地畜牧业带来很大经济损失，更严重的是加速了草原的退化，引起土壤沙化，水土流失严重，草原生态系统收到严重的破坏。若尔盖草原湿地是长江与黄河的分水岭，它是世界上最大的“固体高原水库”。因为湿地受到破坏，若尔盖沙化严重。有专家忧虑，如沙化问题不加治理，不到２０年，整个若尔盖草原将成为高原沙漠，引发的沙尘暴将“光顾”成都平原。多年来有关鼠害防治，国内外普遍采取化学防治策略。人们曾长期使用天列Ｊ１１人学硕士学位论文然物质如红海葱、马钱子碱等灭鼠，以后逐渐使用一些新单质和化合物如黄磷、氰化物、氟乙酸钠、氟乙酰胺等急性杀鼠剂。在上世纪４０年代末，人们开始使用抗凝血剂（Ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｎｔｒｏｄｅｎｔｉｃｉｄｅｓ）用于灭鼠。目前广泛使用第二代抗凝血剂有鼠德克、澳敌隆、大隆、杀它仗和硫敌隆等。化学灭鼠剂在当前鼠害防治中被广泛制成毒饵，用于防治家栖和野栖鼠类，具有高效、省工、方便等优点，在目前的鼠害防治工作中，占有重要的地位，
尤其是当大面积发生鼠害时，化学防治是解决问题的主要手段。但是剧毒化合物除可因误食引起中毒死亡，对人们社会生活造成危害外，还由于使用后污染到水源或长期残留于土壤中，对环境造成的污染将是长期的和极其严重的，将对人类的生存、健康带来巨大的危害。很多剧毒急性灭鼠药是植物内吸性的，被其毒死的鼠和牲畜腐败后可被植物内吸，在植物体内能滞留数月乃至数年之久。４２４可长达４年，氟乙酞胺能滞留５０天，其滞留期与植物的种类、部位和生长期有关。目前，许多有机化合物灭鼠剂由于其药物残留性和剧毒性已被禁止生产傻用。抗凝血灭鼠剂虽然效果好，但长期使用会产生抗药性。而且，现在国内外研制的第二代抗凝血杀鼠剂普遍成本高，价格昂贵，给大量应用造成一定困难。此外，合成化学灭鼠剂将消耗化工原料，使得可利用资源减少，不符合可持续发展战略要求。近年来，随着有害生物综合治理（ＩＰＭ）理论的实施、可持续发展战略的发展和人们环境保护意识的逐渐加强以及各类急性化学灭鼠剂的
禁止使用，人们对灭鼠剂的要求也相应提高，研制新型的灭鼠药物以避免上述化学灭鼠剂的缺点成为当务之急。植物源药物具有天然来源、与环境相容性好；药源丰富、经济简便成本低廉；活性物质易代谢残留量小、对环境无污染和靶动物不易产生抗性等优点，因而成为人们关注的重点和新型农药发展的趋势。作为草原病虫害防治专业实验室，川西北
高原的鼠害是我们一直关注的。为有效控制鼠害，本实验室尝试从有毒植物中筛选灭鼠的有效成分。国内已有直接用蓖麻籽和它的根、茎、叶制成植物杀虫剂，应用于实践中取得了很好的效果。而蓖麻毒蛋白对所有哺乳动物的有核细胞都有毒害作用，这使它在医学上成为用于杀伤肿瘤细胞的候选毒素之一。它以往主要用于治疗肿瘤的研究，在作为灭鼠剂应用上尚未见报道。基于国内外对灭鼠荆的研究和人们对理想灭６四川大学顾Ｌ学位论文鼠剂的要求，本实验室从高原鼠兔的生物生态学习性和植物学、农药学、环境保护学等诸方面研究入手，提出了从蓖麻籽中提取分离蓖麻毒素，研制安全无公害灭鼠剂这一研究方向。本研究以蓖麻毒素灭鼠为目的，以小白鼠活性实验为筛选指标，实现对蓖麻毒素的最优提取，并利用得到的蓖麻粗毒对小自鼠进行灭鼠试验，来模拟高原鼠兔的灭鼠效果评价。最终在野外大面积应用实验中，取得了比较满意的效果，现将研究结果报告于后。７删川人学硕卜≠位论文第一章．蓖麻毒素的提取与分离蓖麻毒素（Ｒｉｃｉｎ）系指蓖麻毒蛋白、蓖麻碱、蓖麻变应原和血球凝集素四种毒性物质，其中蓖麻毒蛋白的毒性最大。在药物研究中，蓖麻毒蛋白又称蓖麻毒素。在英语中蓖麻毒素和蓖麻毒蛋白是同一词一“Ｒｉｃｉｎ”。蓖麻毒素对入和哺乳动物有剧毒，几乎对所有真核细胞都有毒性。一个毒素分子进入细胞内，就足以使整个细胞的蛋白质合成完
全停止而死亡。蓖麻毒蛋白为白色粉末状或结晶形固体，无味。不溶于乙醇、乙醚、三氯甲烷、甲苯等有机溶剂，溶于酸性稀释液或盐类水溶液，在饱和硫酸铵溶液中，能沉淀析出。与一般蛋白质相比，蓖麻毒蛋白对热、酸、碱比较稳定，湿热条件下很容易凝固变性，在水中煮沸或加压蒸汽处理即凝固变性，失去毒性，但干热条件下则失活很难，在半乳糖溶液中可保存数月而不失活。为获得提取蓖麻毒蛋白的最佳方法，本实验参考Ｎｉｃｏｌｓｏｎ等的方法，采用逐一改变实验条件的方法，在不同浸提剂的种类，剂量，抽提时间，不同盐析剂的种类，盐析浓度等情况下，对蓖麻毒蛋白的粗提条件进行了研究与比较分析。从而优选出具有最高杀鼠效果的蓖麻毒蛋白提取方法。１．材料与方法１．１实验材料供试蓖麻籽为市售。蓖麻籽去壳后储存于４。Ｃ冰箱中备用。供试用小白鼠为昆明种，由四川大学华西啮齿类动物ＳＰＦ养殖中心提供。１．２主要仪器与药品Ａ－８８型组织粉碎匀浆机：江苏省金坛市医疗仪器厂Ｊ－２５Ｉ高速冷冻离心机：美国贝克曼公司１００００ｒｐｍＪ－６Ｂ高速冷冻离心机：美国贝克曼公司４０００ｒｐｍＰＵ一１８００型紫外可见分光光度计：北京普析通用仪器公司四ＪＩＩ大学硕ｊ擘位论文ＤＺＦ－１Ｂ真空干燥箱：北京金紫光科技发展有限公司生产电子计数天平：常熟市金阳天平仪器有限公司生产ＢＰ３１０Ｐ电子
分析天平：德国赛多利斯公司生产Ｒ２０５Ｂ旋转蒸发器：上海申胜生物技术有限公司生产ＤＳＸ－２８０Ｄ手提式高压灭菌锅：上海申安医疗器械厂生产３Ｊ一１精密增力搅拌器：金坛市富华仪器有限公司生产（ＮＨ４）２Ｓ０４、Ｎａ２Ｓ０４、ＭｇＳ０４等试剂均为国产分析纯，透析袋，蒸馏水，均购于四川Ｉ大学设备处。１．３实验方法在前期研究工作基础上，参考Ｎｉｃｏｌｓｏｎ等的方法，，对提取条件进一步研究，以小白鼠的死亡率为指示，寻找提取蓖麻粗毒的最优途径。具体方法如下：Ａ．蓖麻粗毒的提取：称取５０９脱壳蓖麻籽，加一定量的某种浸提剂浸泡，用匀浆机粉碎后匀浆置于低温环境下（４℃）搅拌若干小时，然后用４层纱布滤去残渣，取上清液离心（４０００ｒｐｍ／３０ｍｉｎ）。弃去沉淀和上层蓖麻油，保留中间清液，在中间清液中加入某种盐析剂到一定浓度，使其充分溶解后，４℃环境下静置２４ｈ，然后以１００００ｒｐｍ／３０ｍｉｎ离心，收集沉淀，将沉淀溶解于蒸馏水中，透析２４ｈ，将透析所得于４０℃减压蒸馏，最后真空干燥可得蓖麻粗毒。Ｂ．小鼠活性实验设计：１）对浸提后的混合物４０００ｒｐｍ离心３０ｍｉｎ，小心除去油脂，保留清液，提取离心所剩的渣滓，每种渣滓再用对应的浸提液浸泡２４小时后。分别进行４０００ｒｐｍ离心３０ｍｉｎ，小心取出油脂，保留清液，得到对应的粗毒溶液Ａ、Ｂ、
Ｃ…。２）对盐析后的混合物１００００ｒｐｍ离心３０ｍｉｎ，保留沉淀，取上清液ａ、ｂ、ｃ…。以Ａ、Ｂ、Ｃ…和ａ、ｂ、ｃ…溶液做原药，分别取ｌｍｌ稀释１００、１０００、１００００倍…对小鼠进行腹腔注射（剂量为每鼠０．５ｍ１），每组每浓度用５只小鼠，并取１只小鼠做空白对照。最终小鼠死亡率最低的那组即是粗毒提取效果最佳的。９四川大学硕１ｊ学位论文１．３．１第一部分实验浸提剂的选择及浸提条件的摸索１．３．１．１不同浸提剂的选择分别称取５０９脱壳蓖麻籽，依次用１００Ｍ的水，１００Ｍ０．２ｍｏｌ／Ｌ的磷酸缓冲液（ＰＨ７．２）和１００ｍｌ５％的乙酸溶液进行匀浆，再静置于４”Ｃ环境中浸提２４小时。对浸提后的混合物４０００ｒｐｍ离心３０ｍｉｎ，小心除去油脂，保留清液，提取离心所剩的渣滓，每种渣滓再用对应的浸提液浸泡２４小时后。分别进行４０００ｒｐｍ离心３０ｍｉｎ，小心取出油脂，保留清液，得到对应的粗毒溶液Ａ、Ｂ、Ｃ…。按上述方法Ｂ作小鼠活性实验。每组实验重复３次。１．３．１．２浸提剂的最佳抽提时间的选择分别称取５０９脱壳蓖麻籽，用上述三种的浸提剂１００ｍｌ匀浆，于４”Ｃ浸提１２、２４、３６、４８小时。对浸提后的混合物４０００ｒｐｍ离心３０ｍｉｎ，小心除去油脂，保留清液，提取离心所剩的渣滓，每种渣滓再用对应的浸提液浸泡２４小时后。分别进行４０
００ｒｐｍ离心３０ｍｉｎ，小心取出油脂，保留清液，得到对应的粗毒溶液ｈ、Ｂ、Ｃ…。按上述方法Ｂ作小鼠活性实验。每组实验重复３次。１．３．１．３浸提剂的最佳抽提体积的选择分别称取５０９脱壳蓖麻籽，加入１００Ｍ、１５０ｍｌ、２００ｍｌ的上述三种的浸提剂匀浆。于４”Ｃ浸提至各种浸提剂对应具有最佳蓖麻粗毒浸提效果的时间。对浸提后的混合物４０００ｒｐｍ离心３０ｍｉｎ，小心除去油脂，保留清液，提取离心所剩的渣滓，每种渣滓再用对应的浸提液浸泡２４小时后。分别进行４０００ｒｐｍ离心３０ｍｉｎ，小心取出油脂，保留清液，得到对应的粗毒溶液Ａ、Ｂ、Ｃ…。按上述方法Ｂ作小鼠活性实验。每组实验重复３次。１．３．２第二部分实验盐析剂的选择及最佳盐析条件的摸索分别称取５０９脱壳蓖麻籽，加入适量的浸提剂匀浆，４℃浸提若干小时ａ所得混合物４０００ｒｐｍ离心３０ｍｉｎ，小心除去油脂，以及离心所剩的渣滓，保留清液，在清液中分别加入不同的盐析剂，每种盐析剂分别逐渐加到５０％、６０％０、７０％、１０四川大学硕Ｉ：学位论文８０％饱和度，盐析２４小时后，１００００ｒｐｍ离心３０ｍｉｎ，观察现象，收集沉淀，然后对所得的每种上清液取ｌｍｌ，稀释１０００倍，做小鼠活性实验，最终小鼠未死亡或死亡最少的那组即是盐析效果最佳的。１．３．３第三部分实验最佳浸提条件下各浸提剂的蓖麻粗
毒产率分别称取５０９脱壳蓖麻籽，各自加入适量的浸提剂匀浆，４”Ｃ浸提适宜时间。所得混合物４０００ｒｐｍ离心３０ｍｉｎ，小心除去油脂，以及离心所剩的渣滓，保留清液，在清液中分别加入的盐析剂到最适宜浓度，盐析一定小时后，１００００ｒｐｍ离心３０ｍｉｎ，观察现象，收集沉淀，沉淀溶解于蒸馏水中，透析２４ｈ，将透析所得４０℃减压蒸馏，最后真空干燥可得蓖麻粗毒。从而可计算各自的产率。２．结果与分析２．１．不同浸提剂灭鼠效果垂！：！篓签墼丕旦里堡型星握担旦堕旦盟丕匦垫墨浸提剂小鼠死亡时间（ｈ）２０２４３６４８７２９６总死亡率％稀１／１００１／５２／５３／５５／５１００水释１／１０００１／５２／５３／５６０
倍１／１００００２／５３／５６０数１／１０００００１／５２／５４０稀１／１００１／５３／５６００．２ｍｏｌ／Ｌ释１／１０００２／５３／５６０的磷酸缓，。１首１／１００００１／５２／５４０冲液数１／１０００００２／５４０稀１／１００１／５２／５４／５５／５１００５％乙酸释１／１０００１／５２／５３／５４／５８０倍１／１００００１／５２／５３／５６０数１／１０００００１／５２／５３／５６０四川人学硕｝：学位论文注：本实验设３个重复，取平均值上述结果表明，相
同条件下，５％乙酸做浸提剂时，小白鼠死亡率最高，说明它对蓖麻毒素的浸出效率最低，导致渣滓里的蓖麻毒素含量相对较多，再次浸提出来才出现杀鼠率较高的现象。水做浸提剂时，小白鼠最先出现死亡，同样说明其浸提效果不好，相比较而言，０．２ｍｏｌ／Ｌ的磷酸缓冲液的浸提效果是最好的。２．２最佳浸提时间的选择由于选择三种不同的浸提剂，故按照浸提剂分组，组内进行实验最后综合对比得出结果。同时最终只选择３个浓度梯度的药物做活性实验。表１．２水做浸提剂浸提不同时间的灭鼠效果浸提时间小鼠死亡时间３０３６４２４８６０７２９６总步Ｅ亡率（ｈ）（ｈ）％稀１／１００１／５３／５４／５５／５１００１２释１／１０００１／５２／５３／５４／５５／５１００盔１／１００００１／５２／５３／５５／５１００稀１／１００１／５２／５３／５６０２４释１／１０００１／５
２／５３／５６０室１／１００００１／５２／５４０稀１／１００１／５２／５３／５６０３６
释１／１０００１／５２／５４０室１／１００００１／５２／５４０稀１／１００１／５２／５
３／５６０４８释１／１０００１／５２／５３／５６０室１／１００００１／５２／５４０注：本实验设３个重复，取平均值显然。水做浸提剂时浸提３６小
时的杀鼠效果最低。说明此时水已经把绝大１２婴型盔兰堡！：兰竺堡兰多数的蓖麻毒素浸提出来，导致渣滓里的蓖麻毒素含量很低，所以再次浸提后的杀鼠效果最低，从而说明３６小时是水的最佳浸提时间。表１．３５％乙酸浸提剂浸提不同时间的灭鼠效果浸提时间小鼠死亡时间３０３６４２４８６０７２９６总死亡率（ｈ）（ｈ）％ .
有毒植物的种类及毒性分析
有毒植物的种类及毒性分析 有毒植物 植物广泛分布在自然界，是自然不可缺少的一部分，提供给人类食物，同时是重要的工业原料。它们与人们的生活息息相关。但是植物自身的化学成分复杂，其中有很多是有毒的物质，不慎接触到，可能会引起很多疾病甚至死亡。在小说中也经常能看到植物的身影，这里我想按照植物中主要致毒成分来进行分类对有毒的植物进行一个比较详细的概括。其中有很多是大家非常熟悉的，此前可能也没有了解到它们的毒性。 有毒植物的种类 一、含甙类的植物 1、夹竹桃：常绿灌木，开桃红色或白色花，分布广泛，其叶、花及树皮均有毒。（我 亲见过，小时候喜欢采它的花玩，现在学习的地方有好多夹竹桃，只能欣赏再不敢动手了） 2、洋地黄：亦称紫花毛地黄，草本植物，各地均有栽培。全柱覆盖短毛，叶卵形，初夏开花，朝向一侧，其叶有毒。 3、铃兰：草本植物，东北及北部山林中野生，花为钟状，白色有香气，全草有毒。 4、毒毛旋花：亦称箭毒羊角拗，灌木，我国云南、广东有栽培，花为黄色，有紫色斑点，白色乳汁，全株有毒。 5、毒箭木：亦称“见血封喉”，落叶乔木，分布于广西、海南等地，高20~25米，叶卵状椭圆形，果实肉质呈紫红色，其液汁有毒。 6、其他：高粱苗、木薯、杏桃李梅的仁、远志、桔梗、皂荚等。 二、含生物碱类的植物 1、曼陀罗：草本植物，高1～2米，茎直立，叶卵圆形，夏季开花，花筒状，花冠漏斗 状，白色，全株有毒，种子毒性最强。 2、颠茄：多年生草本植物，叶子互生，一大一小，夏季开花，钟状，淡紫色，果实为浆果球形，成熟时黑紫色，其叶和根有毒。
3、天仙子：草本植物，我国东北、河北、甘肃等地有野生，全株有毛，味臭，夏季开花，漏斗状呈黄色，全株有毒。 4、乌头：草本植物，分布于我国中部及东部山地丘陵，茎直立，秋季开花，其根有毒。 5、毒芹：草本植物，分布于东北、华北、西北及内蒙一带，根状茎肥大有香气和甜味，秋季茎中空，花为白色，全草有毒。 6、钩吻：亦称断肠草，常绿灌木，夏季开花，我国云南、广东、广西、福建有分布，其根、茎、叶均有毒，民间用来杀虫。 7、藏红花：多年生草本，花期11月上旬至中旬，毒素为秋水仙碱，中毒症状为恶心、呕吐及腹泻，大量使用可致命。 8、荷包牡丹：罂粟科多年生草本，株高30～60cm，具肉质根状茎。全株有毒，能引起抽搐等神经症状。（包括所有罂粟花都有毒性） 9、贝母：多年生草本植物，常作室内植物，全株有毒，含有贝母碱，会引起喉部过敏，大量摄入可引起喉咙肿胀窒息。 10、蓖麻：大戟科蓖麻属一年生或多年生草本，全株有毒，含有蓖麻碱和蓖麻毒素，可灼伤口喉，引起抽搐并可致死。 11、水仙：石蒜科多年生草本，为中国著名花卉之一，但却有毒，误食后有呕吐、腹痛、脉搏频微、出冷汗、下痢、呼吸不规律、体温上升、昏睡、虚脱等，严重者发生痉挛、麻痹而死。 12、夺命草：高约30～60厘米,茎基部着生长条形叶.花茎顶端稀疏着生绿白色六瓣花.分布于北美草地及多岩多林地区.，误食可引起消化系统障碍，中毒症状与百合相似，严重时可致死。 13、飞燕草：毛莨科一、二年生草本植物，株高50-90厘米，全草有毒，其中以种子的毒性最大，主要含有生物碱，误食后会引起神经系统中毒，中毒后呼吸困难，血液循环障碍，肌肉、神经麻痹或产生痉挛现象。 14、风信子：风信子科多年生草本植物，球茎有毒性，如果误食，会引起头晕、胃痉挛、拉肚子等症状，严重时可导致瘫痪并可致命。
芦丁的提取分离及鉴定A4
2011届本科生毕业论文 题目芦丁的提取分离及鉴定作者单位陇东学院化学化工学院指导老师胡浩斌 作者姓名张娜娜 专业班级2007级化学本科(2)班提交时间二〇一一年四月
2011届本科生毕业论文 芦丁的提取分离及鉴定 张娜娜，胡浩斌 （陇东学院化学化工学院，甘肃庆阳745000）摘要：目的以芦丁为例学习黄酮类化合物的提取方法，掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮甙，甙元和糖的部分鉴定方法。方法采用水提法、碱水(石灰水) 提取法、有机溶剂(乙醇) 回流法对芦丁进行提取分离，并对其进行定性分析及色谱鉴定。结果水提法、碱水(石灰水) 提取法、有机溶剂(乙醇) 回流法，三种方法均可制的芦丁，且质量合格。结论从提高芦丁产率和纯度的角度出发，乙醇回流是较理想的提取方法。制得芦丁产率高，且测定方法简单、迅速、灵敏度高。 关键词：槐花米；芦丁；槲皮素；提取；分离；鉴定 Extraction, Seperation and Identification of Rutin Zhang Nana, Hu Haobin (College of Chemistry and Chemical Engineering, Longdong University, Qingyang 745000, Gansu) Abstraction: Objection Rutin as an example to learn the extraction of flavonoids square. Grasp the main properties and flavonoids ingredients flavonoids glucoside. Method W ith the water extraction method, buck (limewater) extraction,organic solvent (alcohol) extraction to extraction and separation of rutin and chromatographic identification. Result With water formulation,Buck (limewater) extraction,organic solvent (alcohol) method of extraction rutin backflow separation,three methods are made rutin and obtaining rutin quality qualified. Conclusion From improve yield and purity of rutin angle, ethanol refluxing was ideal extraction method. Preparation of rutin of high yield,high sensitivity. determination method is simple to rutin rapid. Key word: Sophora japonica; rutin; quercetin; extraction; separation; identification 引言 随着人们生活水平及质量的不断提高，心脑血管病的发病率也呈上升趋势，而且死亡率居各种疾病之首，因此，对治疗和预防心脑血管病的药品与保健品的开发研究就显得尤为重要， 1
槐花米中芦丁的提取、分离与鉴定
槐花米中芦丁的提取与鉴定 背景知识 芦丁（Rutin）又称芸香苷，广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为植物Sophora japonica L 的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高(含量可达12-16%)，可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由斛皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）〔葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖〕脱水形成的苷。 芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有3分子的结晶水，熔点为174~178℃，无水物188~190℃。溶解度：冷水中为1:10 000；沸水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。 芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液，酸化后又可析出，因此，本实验采用碱提取酸沉淀法提取芦丁。 芦丁具有维生素P样作用。能维持血管的正常通透性，减低血管的脆性，缩短流血时间，可作为高血压病的辅助治疗剂。亦可用于防治因缺乏芦丁所致的其他出血症。
一、实验目的 通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作；熟悉芦丁、槲皮素的结构性质和检识方法。 二、实验要求 独立完成实验，从槐花米中提取出芦丁并进行鉴定。 三、实验原理 芦丁属黄酮类化合物，分子中有较多酚羟基，具弱酸性，易溶于热碱中，酸化后又析出，因此可以用碱溶酸沉的方法提取芦丁，又利用芦丁在冷水和热水中溶解度相差较大的特性进行重结晶精制。 四、实验材料和器皿 【器皿】 烧杯（500ml）2个，试管2个，布氏漏斗1个，玻璃棒1根，抽滤瓶1个，滴管，移液管（10ml）1根，洗耳球1个，滤纸，pH试纸，电热炉，真空抽滤机。 【材料】 槐米花30 g，饱和石灰水，0.4%硼砂水溶液，镁粉，pH试纸，浓盐酸，95%乙醇，10% α萘酚乙醇溶液，浓硫酸，蒸馏水。 五、实验内容 操作步骤： 称取30g槐花米于研钵中研成粉状物，置于500mL烧杯中，加入饱和石灰水，加热至沸，并不断搅拌，煮沸30分钟后，趁热抽滤。然后用浓盐酸调节pH值为4~5。放置1-2h，使沉淀完全，抽滤，沉淀用水洗涤2~3次，得到芦丁的粗产物。 流程图：
(整理)常见的有毒植物
1.名字：红花石蒜(彼岸花，忽地笑，蟑螂花、龙爪花) 学名：Lycoris radiata 科目：石蒜科 地点:湖南郴州 作者:桐壶更衣 鳞茎可制酒精,可提取石蒜碱,也可做农药。 其毒性为全株有毒,鳞茎毒性较大。食后有流涎、呕吐、下泻、舌硬直、惊厥、四肢发冷、休克,以至呼吸麻痹而死 2.名字：海芒果（别名: 牛心荔、黄金茄）
学名: Cerbera manghas 科: 夹竹桃科 拍摄时间:2008.05 地点:深圳 作者:桐壶更衣 生长在印度西南部地区,含有一种被称作“海芒果毒素”的剧毒物质,其分子结构与异羟洋地黄毒苷(一种强心剂)非常相似。海芒果毒素会阻断钙离子在心肌中的传输通道,一般在食用后的3~6小时内便会毒性发作,致人死亡。 3.名字：羊角拗（别名: 羊角扭、断肠草、打破碗花） 学名: Semen Strophanthi Divaricati
科: 夹竹桃科 原产非洲热带。我国云南、广东有栽培。 含毒苷类植物中毒目前因毒苷引起中毒的有三类:强心苷类、氰苷类、皂苷类。全株植物剧毒，尤其以种子毒性最强，误食能致死。
4.名字：曼陀罗（醉心花、狗核桃、洋金花） 学名：Dature Stramonium 科目：茄科 原产热带及亚热带,我国各省均有分布。喜温暖、向阳及排水良好的砂质壤土。 全草有毒,以果实特别是种子毒性最大,嫩叶次之。干叶的毒性比鲜叶小。有毒成分:主要含东莨菪碱、莨菪碱,其次有阿托品、阿朴阿托品、降阿托品、曼陀罗素. 在临床上可被用作催吐剂、催泻剂、麻醉剂和致幻剂. 临床应用: 治疗破伤风，治疗癌症，慢性支气管炎，消化性溃疡，帕金森症，精神分裂症，麻醉，风湿性关节炎，强直性脊柱炎，银屑病. 不良反应：出现于服后30分钟到一小时，早期可见口干，咽喉灼热，吞咽困难，皮肤潮红，结膜充血，偶有斑疹，头晕头痛，视力模糊，瞳孔散大，心动过速，狂躁，幻觉，胡话，体温上升，大小便失禁，严重者24小时候昏迷，血压下降，最后因呼吸中枢麻痹，缺氧而死. 救治措施： 1.先用碘酒10-30滴，加温开水口服，使生物碱沉淀，然后用高锰酸钾洗胃，继二给硫酸镁导泻，或用生理盐水高位灌肠. 2.运用毛果云香碱，麽次1-3MG，皮下注射，15分钟一次. 3.对症处理，对烦躁不安，抽搐者用镇静剂，但禁止用吗啡和杜冷丁，高热者物理降温，酌情补液，吸氧. 4.绿豆120G，银花60G,连翘30G，甘草15G.水煎服用，或者用茶叶30G,煎浓汁调豆腐250G,1次服下. 5.名字：大茶药（胡蔓藤、钩吻、山砒霜、烂肠草，断肠草） 学名：Gelsemium elegans Benth 科目：马钱科葫蔓藤属 深圳各地灌丛中或次森林常见。常绿木质藤本，花多而芳香，花瓣黄色，艳丽夺目。 全草有剧毒，误吃很少也能致命。尤其根、叶毒性最大。这种学名“钩吻”的断肠草是剧毒草药,在中医学里只限外用,不可内服,千万小心。 已发生多起误当成金银花吃用的中毒事件。
芦丁的提取分离和鉴定
综合化学实验: 芦丁的提取分离和鉴定 芦丁简介: 芦丁（Rutin）又名芸香苷化学式: C27H30O16·3H2O，是一种浅黄色针状结晶有机化合物，广泛存在于自然界植物中，是一种被人们广泛使用的有机天然产物。目前已发现含有芦丁的植物至少在70种以上，常见的如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均有不同含量。尤其以中药槐米（豆科、槐属，槐树Sophorajaponica的花蕾）和荞麦中含量最高，因此槐米可作为大量提取芦丁的天然植物原料。 中药槐米（炒碳）味苦性凉、具清热凉血、止血之功。常用于治疗多种出血症：肠风便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。西医研究其主要有效成分为有机化合物“芦丁”而中药槐米中芦丁的含量可高达12~16%，是主要的芦丁天然来源。槐米中还含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。研究文献证明芦丁具有VitP（维生素P）样作用（VitP具有生物类黄酮的功能，可防止维生素C被氧化而受到破坏，增强维生素功效；增加毛细血管壁强度，防止瘀伤。有助于牙龈出血的预防和治疗，有助于因内耳疾病引起的浮肿或头晕的治疗等）。而芦丁具有类似作用如可降低毛细血管脆性和调节通透性等，在医学临床上常将其用作毛细血管脆性引起的出血症以及防治高血压病等的辅助治疗药物。 芦丁是由槲皮素（quercetin）3位上的羟基与芸香糖（rutinose，一种由葡萄糖glucose与鼠李糖rhamnose组成的双糖）脱水合成的苷，是一种浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178℃，无结晶水时188~190℃。溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。 补充知识:
蛋白质毒素
蛋白质毒素 在自然界中，许多动物、植物、细菌和真菌都能产生大分子的蛋白毒素。蛋白质毒素是指生物体所生产出来的毒物，这些物质通常是一些会干扰生物体中其他大分子作用的蛋白质，由生物体产生的、极少量即可引起动物中毒的物质。包括植物毒素、细菌毒素、动物毒素和真菌毒素四类微量毒素，侵入机体后即可引起生物机能破坏，致使人畜中毒或死亡。在生物进化的漫长旅程中，毒蛋白的存在赋予了这些生物品系的独特的选择优势:一方面毒蛋白可防御外界病原体对生物的侵害，同时又可抵御物种之间的同化。 一、蛋白毒素种类 毒素的分类方法很多，根据其来源可分为动物、植物、细菌和真菌等毒素；根据其化学结构，可分为小分子有机化合物、肽类和蛋白类毒素等；目前一般将上述两种方法结合进行分类，以缩小范围。天然蛋白类毒素主要包括植物蛋白毒素、细菌蛋白毒素和真菌蛋白毒素等家族。 1 植物蛋白毒素 包括植物毒素和植物单链核糖体失活蛋白（简称RIP)。典型的植物毒素有蓖麻毒素(ricin)、相思子毒素(abrin)、蒴莲毒素(volkensin)、欧寄生毒素(viscumin)和药莲毒素(modeccin)等。这些毒素均为糖蛋白,分子量在60～65kD之间,其分子由A、B两链组成,通过二硫键连接。典型的RIP家族成员包括丝瓜子蛋白(luffin)、天花粉蛋白(trichosanthin)、美洲商陆抗病毒蛋白(简称PAP)、皂草蛋白(saporin)、康乃馨蛋白(dianthin)和多花白树素(gelonin)等。 1.1 相思子毒素 相思子毒素是从豆科藤本植物相思子(Abrus precatorius)的种子中提取的一种剧毒性高分子蛋白毒素，其含量约占种子2.8%～3.0%。相对分子质量介于60000-65000之间，分子由A 、B两条多肽链通过1个二硫键连接而成。完整毒素在SDS- PAGE分析时呈一条蛋白带，经二巯基乙醇处理后，A、B两条链分离开，其中A链呈酸性，分子质量约为30000，与蓖麻毒素A 链存在102个相同的氨基酸残基；B链呈中性，分子质量约35000。有关试验表明，相思子毒素两条链经二巯基乙醇还原分离开后，其活性并不丧失。相思子毒素所含的糖基主要存在于B链上，糖的类型为甘露糖和N-乙酰葡萄糖胺，毒素经糖基修饰后，可以增加其自身结构的稳定性，防止降解，增强对极端条件的适应性。 纯化后的相思子毒素为微黄白色无定形粉末，无味，易溶于水、氯化钠和甘油溶液，不耐热。60 ℃经30分钟部分失活，80 ℃经30分钟则大部分失活，100 ℃经30分钟毒性及抗肿瘤活性完全消失。印度安达曼岛上居民将相思子种子煮熟后作为食物食用。完整的相思子毒素经反复冰冻和融化对其毒性影响很小。在0.1 mol/L半乳糖溶液中，毒素可在冰箱中储存数月而不会失活。分离开的链要比完整毒素更不稳定。 1.2 蓖麻毒素 蓖麻毒素是一种具有两条肽链的高毒性的植物蛋白。它主要存在于蓖麻籽中。蓖麻毒素的一、二级结构已清楚，由A、B两条链组成。A链比B链稍短，两链之间以一个二硫键相连接。它含有共价键结合的糖分子，糖的主要组成是甘露糖、葡萄糖和半乳糖。分子量为66000。毒素为白色粉末状或结晶形固体，无味。不溶于乙醇、乙醚、三氯甲烷、甲苯等有机溶剂，溶于酸性稀释液或盐类水溶液，在饱和硫酸铁溶液中，能沉淀析出。在0.1克分子半乳糖溶液中，毒素可在冰箱中贮存数月而不失活性，但煮沸易失去活性。 蓖麻毒素是一种细胞毒。当毒素进入体内，A、B链分开。A链通过渗透经细胞膜进入细胞浆，主要使真核细胞的核糖体抑制失活，从而抑制蛋白质的合成。B链与细胞表面结合，
大豆活性肽的分离纯化和生理活性
大豆活性肽的分离纯化和生理活性 大豆蛋白肽是利用酶法或微生物发酵法将大豆蛋白降解成多肽、短肽和氨基酸的混合物。大豆蛋白肽是一种重要的肽来源。大豆蛋白肽与蛋白质相比较，多肽具有如下特点：在较宽的pH 范围内溶解度高，容易在体内消化和吸收；渗透压低，能够避免高渗透压导致的腹泻；不容易导致过敏。Rerat 等研究表明，短肽的特点是吸收速度快、消耗能量低、载体不易饱和，不同肽之间运转没有竞争和抑制。 随着生物技术与生命科学的不断进步与发展，大豆多肽的功能越来越多的被人们所发掘，而某些活性肽的结构与生理功能也逐渐被人们所认识和了解，这对活性肽的研究起到了推动作用，更有利于人类对大豆活性肽进行研究与开发。 迄今为止，从大豆蛋白中已分离出降血压肽、免疫调节肽、抗氧化肽、降胆固醇肽、抗血栓形成、促进钙磷及微量元素的吸收等多种纯化的大豆蛋白生物活性肽，对这些大豆活性肽的研究情况进行了综述，以期为大豆活性肽的应用提供参考。 1 大豆蛋白活性肽的分离和纯化目前，生产大豆活性肽的方法主要三种有：酶解法、微生物发酵法和化学法，最为先进的是微生物发酵法，它不仅能修饰肽的苦味。还能将原料中的KTI 和BBI 等影响消化和口味的抗营养因子降解。 大豆蛋白肽的活性易受到外界条件的影响，在过强的酸碱、较
高的温度与剧烈震荡等条件下都有可能失活。初始的肽液成分相对较复杂，目标产物的浓度也比较低，一般低于5%，含有大 量杂质，某些杂质的理化性质和目标产物有相似之处，这就提高了大豆肽的分离纯化的难度。传统多肽分离工艺，如吸附沉淀、溶媒、萃取和离子交换法等步骤繁多，耗时，原料消耗量大，耗能高，得到的产品较少。生物技术的发展与人们对大豆肽结构和功能研究的不断深入，大豆肽分离检测技术也获得了突飞猛进的发展，出现了反相高效液相色谱法、凝胶过滤色谱法、毛细管电泳法、膜分离法、各种技术手段的联用等许多高效的分离纯化技术和手段。 1.1反相高效液相色谱（RP—HPLC法 反相高效液相色谱是一种色谱洗脱法，它以非极性的反相介质为固定相，流动相是水溶液或甲醇、乙腈等极性有机溶剂。根据流动相中被分离溶质疏水性的不同，与固定相发生的作用大小的差异，使被分离物质在固定相和流动相中具有不同的分配系数，从而进行分离纯化。 如果大豆多肽是疏水性较弱的分子，它和固定相之间的作用比较小，能够较快流出；反之，如果大豆多肽分子疏水性比较大，流出会比较靠后。反相高效液相色谱法分离纯化大豆活性肽时采用三氟乙酸- 乙氰这种挥发性冲剂作为流动相，其纯化产品不需脱盐，这样就简化了操作步骤，对于分子量在lOOODa以下的小分子大豆肽类物质的分离和纯化尤为重要。 反相高效液相色谱分离和纯化大豆活性肽时多采用增加流动相
芦丁的提取及鉴定
实验二芦丁的提取及鉴定 （一）概述 芦丁（Rutin）广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为植物Sophora japonica 的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由斛皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）〔为葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖〕脱水合成的苷。 芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178℃，无水物188~190℃。溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。 芦丁具有维生素P样作用。有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性，主要用作防治高血压病的辅助治疗剂，亦可用于防治因缺乏芦丁所致的其他出血症。实验目的和要求 实验目的 ①通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 ②通过芦丁结构的检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法。 ③了解UV及NMR在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。 要求 ①要拿到以下三个化合物：芦丁、槲皮素、芦丁的全乙酰化合物。 ②能够拿根据化学试验及UV、NMR数据初步推断出芦丁的结构。并对黄酮类化合物的结构测定有一般性的了解。 试验方法 芦丁的提取与分离（见下图） 芦丁的鉴定 ①芦丁的定性反应 取芦丁3~4mg，加乙醇5~6ml使其溶解，分成三份作下述试验： A. 取上述溶液1~2ml，加2滴浓盐酸，在酌加少许镁粉，注意观察颜色变化情况。 B. 取上述溶液1~2ml，然后滴加2%柠檬酸的甲醇溶液，注意观察颜色变化情况，在继续向试管中加入2%ZrOCl2的甲醇溶液，并详细记录颜色变化情况。 C. 取上述溶液1~2ml，然后再加入10%α-等体积的萘酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸，注意观察两液面产生的颜色变化。 ②芦丁的紫外光谱解析 取芦丁溶于色谱纯甲醇中，加入规定的试剂，测定其UV光谱，试解析光谱并初步判断其结构。
有毒植物大全 资料共享
有毒植物大全资料共享 1. 名字：红花石蒜(彼岸花，忽地笑，蟑螂花、龙爪花) 学名：Lycoris radiata 科目：石蒜科 地点:湖南郴州 作者:桐壶更衣 鳞茎可制酒精,可提取石蒜碱,也可做农药。 其毒性为全株有毒,鳞茎毒性较大。食后有流涎、呕吐、下泻、舌硬直、惊厥、四肢发冷、休克,以至呼吸麻痹而死 660)this.width=660;" border=0> 2. 名字：海芒果（别名: 牛心荔、黄金茄） 学名: Cerbera manghas 科: 夹竹桃科 拍摄时间:2008.05 地点:深圳 作者:桐壶更衣 生长在印度西南部地区,含有一种被称作“海芒果毒素”的剧毒物质,其分子结构与异羟洋地黄毒苷(一种强心剂)非常相似。海芒果毒素会阻断钙离子在心肌中的传输通道,一般在食用后的3~6小时内便会毒性发作,致人死亡。 660)this.width=660;" border=0>
3. 名字：羊角拗（别名: 羊角扭、断肠草、打破碗花） 学名: Semen Strophanthi Divaricati 科: 夹竹桃科 原产非洲热带。我国云南、广东有栽培。 含毒苷类植物中毒目前因毒苷引起中毒的有三类:强心苷类、氰苷类、皂苷类。 全株植物剧毒，尤其以种子毒性最强，误食能致死。 660)this.width=660;" border=0>4. 名字：曼陀罗（醉心花、狗核桃、洋金花） 学名：Dature Stramonium 科目：茄科 原产热带及亚热带,我国各省均有分布。喜温暖、向阳及排水良好的砂质壤土。 全草有毒,以果实特别是种子毒性最大,嫩叶次之。干叶的毒 性比鲜叶小。有毒成分:主要含东莨菪碱、莨菪碱,其次有阿托品、阿朴阿托品、降阿托品、曼陀罗素. 在临床上可被用作催吐剂、催泻剂、麻醉剂和致幻剂. 临床应用: 治疗破伤风，治疗癌症，慢性支气管炎，消化性溃疡，帕金森症，精神分裂症，麻醉，风湿性关节炎，强直性脊柱炎，银屑病. 不良反应：出现于服后30分钟到一小时，早期可见口干，咽喉灼热，吞咽困难，皮肤潮红，结膜充血，偶有斑疹，头
实验四槐米中芸香苷的提取分离与鉴定
实验四槐米中芸香苷的提取分离与鉴定 芦丁(Rutin)亦称芸香甙(Rutisude)，广泛存在于植物界中。现已发现含芦丁的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、荞麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。尤以槐花米和荞麦叶中含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。 槐花米为豆科植物槐(Sophora japonica L。)的花蕾，所含主要成分为芦丁，含量可达12%~16%，其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素等。芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性。临床上用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作高血压症的辅助治疗药。 槐花米中主要化学成分的结构及性质： 1.芦丁(Rutin) 淡黄色细小针状结晶，℃~178℃(含三分子结晶)，188℃(无水物)。 溶解度： 水：1:100(冷)，1:200(热) 甲醇：1:100(冷)，1:9(热) 乙醇：1:650(冷)，1:60(热) 吡啶：1:(冷)，易溶(热) 不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。 2. 槲皮素(Quercetin) 即芸香甙甙元，为黄色结晶，mp.313℃~314℃(含2分子结晶水)，316℃(无水物)。溶解度： 乙醇：1:290(无水乙醇)，1:23(热) 可溶于甲醇、乙酸乙酯、丙酮、吡啶、冰醋酸。不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚等。 3. 皂甙 粗品为白色粉末，mp.210℃~220℃(分解)。易溶于水、吡啶，能溶于200倍的甲醇中。酸水解后得白桦脂醇、槐二醇二种皂甙元及葡萄糖，葡萄糖醛酸及葡萄糖醛酸内酯。 (1) 白桦脂醇(Betulin) 无色针晶，℃~252℃。能溶于醋酸、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、氯仿、
园林景观设计师必知常见的有毒植物54种
园林景观设计师必知常见的有毒植物54种 1.名字：红花石蒜(彼岸花，忽地笑，蟑螂花、龙爪花) 学名：Lycoris radiata 科目：石蒜科 地点:湖南郴州 作者:桐壶更衣 鳞茎可制酒精,可提取石蒜碱,也可做农药。 其毒性为全株有毒,鳞茎毒性较大。食后有流涎、呕吐、下泻、舌硬直、惊厥、四肢发冷、休克,以至呼吸麻痹而死
2.名字：海芒果（别名: 牛心荔、黄金茄） 学名: Cerbera manghas 科: 夹竹桃科 拍摄时间:2008.05 地点:深圳 作者:桐壶更衣 生长在印度西南部地区,含有一种被称作“海芒果毒素”的剧毒物质,其分子结构与异羟洋地黄毒苷(一种强心剂)非常相似。海芒果毒素会阻断钙离子在心肌中的传输通道,一般在食用后的3~6小时内便会毒性发作,致人死亡。
3.名字：羊角拗（别名: 羊角扭、断肠草、打破碗花） 学名: Semen Strophanthi Divaricati 科: 夹竹桃科 原产非洲热带。我国云南、广东有栽培。 含毒苷类植物中毒目前因毒苷引起中毒的有三类:强心苷类、氰苷类、皂苷类。全株植物剧毒，尤其以种子毒性最强，误食能致死。
4.名字：曼陀罗（醉心花、狗核桃、洋金花） 学名：Dature Stramonium 科目：茄科 原产热带及亚热带,我国各省均有分布。喜温暖、向阳及排水良好的砂质壤土。 全草有毒,以果实特别是种子毒性最大,嫩叶次之。干叶的毒性比鲜叶小。有毒成分:主要含东莨菪碱、莨菪碱,其次有阿托品、阿朴阿托品、降阿托品、曼陀罗素. 在临床上可被用作催吐剂、催泻剂、麻醉剂和致幻剂. 临床应用: 治疗破伤风，治疗癌症，慢性支气管炎，消化性溃疡，帕金森症，精神分裂症，麻醉，风湿性关节炎，强直性脊柱炎，银屑病. 不良反应：出现于服后30分钟到一小时，早期可见口干，咽喉灼热，吞咽困难，皮肤潮红，结膜充血，偶有斑疹，头晕头痛，视力模糊，瞳孔散大，心动过速，狂躁，幻觉，胡话，体温上升，大小便失禁，严重者24小时候昏迷，血压下降，最后因呼吸中枢麻痹，缺氧而死. 救治措施： 1.先用碘酒10-30滴，加温开水口服，使生物碱沉淀，然后用高锰酸钾洗胃，继二给硫酸镁导泻，或用生理盐水高位灌肠. 2.运用毛果云香碱，麽次1-3MG，皮下注射，15分钟一次. 3.对症处理，对烦躁不安，抽搐者用镇静剂，但禁止用吗啡和杜冷丁，高热者物理降温，酌情补液，吸氧. 4.绿豆120G，银花60G,连翘30G，甘草15G.水煎服用，或者用茶叶30G,煎浓汁调豆腐250G,1次服下. 5.名字：大茶药（胡蔓藤、钩吻、山砒霜、烂肠草，断肠草） 学名：Gelsemium elegans Benth 科目：马钱科葫蔓藤属 深圳各地灌丛中或次森林常见。常绿木质藤本，花多而芳香，花瓣黄色，艳丽夺目。 全草有剧毒，误吃很少也能致命。尤其根、叶毒性最大。这种学名“钩吻”的断肠草是剧毒草药,在中医学里
生物技术方法制备天然活性成分的概况和发展趋势
生物技术方法制备天然活性成分的概况和发展趋势 11级生物制药一班 第一组成员：徐玉秋，李诗赞，黄飞华，祁博，黄星星，蔡东东，杨孝刚摘要：综述近年来天然产物中活性成分提取的生物技术方法研究的进展情况，重点讨论超临界流体萃取等技术的原理、特点以及在该领域的应用的情况，并对天然产物中活性成分提取的生物技术的发展方向做出展望。 关键词：活性成分，生物技术，天然产物 近年来，随着人们对天然药物的药用的营养价值认识的逐步深入，世界范围内掀起了天然产物中活性成分研究的热潮，国家自然科学基金资助项目中就有多项是关于此课题的研究。然而天然产物的成分十分复杂且有些物质含量甚微，提取时又要求活性成分不能被破坏，溶剂萃取等传统提取方法已经远远不能满足对天然药物进行深入研究的需要。如何快速、有效地将活性成分提取出来以及对提取物的进一步分离纯化已成为天然产物研究的“瓶颈”，特别是近年来人们环保意识的迅速提高和国家可持续发展战略的实施，更使得开发的天然产物提取技术成为大势所趋。 1.传统方法 对天然产物中活性成分进行提取，最常用的是溶剂萃取法。所用溶剂包括水和有机溶剂，水能够溶出的成分较多，导致后处理困难；有机溶剂分亲水性和亲脂性两种，选择性好，但挥发性大且一般有毒。提取方法主要有浸渍、渗漉、煎煮、回流和连续提取：浸渍和渗漉简单易行，一般在常温或温热条件下操作，适用于热不稳定成分的提取，但溶剂消耗量大，费时长，提取效果差；水煎煮法是我国最早使用的传统方法，大部分成分可被不同程度的煎出，但具有挥发性以及遇热易破坏的成分不宜用此法；用易挥发的有机溶剂加热提取，则需采用回流法；为了弥补回流提取中溶剂消耗量大，操作麻烦的不足，可采用连续提取(又称索氏提取)法，这是溶剂萃取中最常使用的方法，提取效率较高，但提取液受热时间长，热不稳定成分易分解。近来发展的自动索氏提取，将高温渗漉与常规索氏提取相结合，溶剂用量比常规索氏提取少一半，且所需时间大幅度缩短。 水蒸气蒸馏也是一种常用的提取方法。被提取的成分应具备以下条件：具有挥发性，沸腾期间与水长时间共存而不发生化学变化，难溶或不溶于水。 显而易见，上述传统方法具有许多缺点：(1)大量使用有机溶剂，产生的废液废渣严重污染环境，且不可避免的溶剂残留会影响产物的质量和稳定性。(2)提取效率低、步骤多、选择性差，较难实现自动化或联用。(3)提取温度高，时间长，使得能耗大且易造成热敏性成分分解和挥发性成分损失。因此，发展快速、高效、尽量不用或少用有害试剂、将环境污染减到最低限度的绿色样品处理技术已成为该领域科学工作者追求的目标。 2.新兴提取技术 2.1 超临界流体萃取分离过程的原理是超临界流体对脂肪酸、植物碱、醚类、酮类、甘油酯等具有特殊溶解作用，利用超临界流体的溶解能力与其密度的关系，即利用压力和温度对超临界流体溶解能力的影响而进行的。在超临界状态下，将超临界流体与待分离的物质接触，使其有选择性地把极性大小、沸点高低和分子量大小的成分依次萃取出来。当然，对应各压力范围所得到的萃取物不可能是单一的，但可以控制条件得到最佳比例的混合成分，然后借助减压、升温的方法使
芦丁的提取
实验从槐花米中提取芦丁P.198 【实验目的】 通过从槐花米中提取芦丁的实验,掌握用酸碱调节提取中药活性成分的方法. 【实验原理】 槐花米又名槐米,是槐花的花蕾.性凉,味苦,功能凉血,止血,主治肠风,痔血,便血等症.槐花米的主要活性成分是芦丁. 芦丁又名芸香苷,不仅存在于槐花米中(含量达10-20%),在荞麦叶等中,也有存在.结构式如下: 从结构式中不难看出,芦丁实际上是由黄酮与糖(葡萄糖和鼠李糖)形成的苷.由于含有黄酮结构,所以,呈黄色.黄酮部分连有许多酚-OH,故易溶于碱液,酸化复析出,这是本实验采用酸-碱调节法来提取芦丁的依据. 纯芦丁为淡黄色针状结晶,不溶于乙醇,氯仿等有机溶剂,熔点为188℃(理论值),带三个结晶水的熔点为174-178℃. 芦丁能增强毛细管的韧性,适用于毛细管脆弱的患者. 【实验步骤】 称取15g槐花米,用粉碎机研成粉状.置于250ml烧杯中,加入150ml饱和石灰水[1],于石棉网上加热至沸,并不断搅拌,煮沸15分钟后,抽滤[2].滤渣再用100ml饱和石灰水煮沸10分钟,抽滤. 合并两次滤液,用5%盐酸调节至pH3-4[3].放置1-2小时,使沉淀完全,抽滤,并用水洗涤2-3次,即得芦丁粗品. 将粗品置于250ml的烧杯中,加水150ml,在石棉网上加热至沸,不断搅拌,并慢慢加入约50ml 饱和石灰水,调节溶液pH值为8-9,待沉淀溶解后,趁热过滤.滤液置于250ml的烧杯中,用5%盐酸调节至pH4-5,静置30分钟.芦丁即以浅黄色结晶析出,抽滤,并用水洗涤1-2次,烘干,称重[4],测熔点. 【注解】 [1] 加入饱和石灰水既可达到用碱液提取芦丁的目的,同时,还可除去槐花米中的多糖粘液质. [2] 抽滤时,宜先小心倾出上层清液,再慢慢倒出带结晶的溶液,以防结晶过早堵住滤纸孔.后面的抽滤均需如此. [3] 注意小心滴加,约需7-8ml稀盐酸.如果滴加过多,pH值过低,芦丁(苷类)则易水解. [4] 产量约为1.5g. 【实验结果】 产品的外观性状 产量 【问题与讨论】 1 本实验中,开始用饱和石灰水提取,再用酸调节到pH3-4,这段pH值范围较宽;后来又用饱和石灰水调节到pH3-4,再用酸调节到pH4-5,这段pH值范围较窄.为什么要这样做如果反过来(先调窄后调宽)行不行 2 在一开始用酸调节pH值时,某生不小心,加入的稀盐酸过量,pH值小于3-4,请问对实验会产生什么后果为什么 3 根据这个实验,请总结出用酸碱调节法提取中药活性成分的适用条件及一般原理.
蓖麻毒素的分离、提取及活性研究
蓖麻毒素的分离、提取及活性研究 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文作了明确的说明并表示谢意。本学位论文成果是本人在四川Ｉ大学读书期间在侯太平教授指导下取得的，论文成果归四川Ｉ大学所有，特此声明。警２００７＠ｚ衙４户ｊ／杉四川大学硕｝。学位论文蓖麻毒素的分离、提取及活性研究农药学专业研究生：高杉指导教师：侯太平本研究以蓖麻毒素灭鼠为目的，以小白鼠活性实验为筛选指标，研究了从蓖麻种子中分离蓖麻毒蛋白的方法，实现了对蓖麻毒素的最优提取，并利用得到的蓖麻籽粗提物对小白鼠进行灭鼠试验，来模拟高原鼠兔的灭鼠效果评价。最终在野外大面积应用实验中，取得了比较满意的效果。以蓖麻籽为原料，通过选用不同物质做浸提剂，单独研究了各种浸提剂对蓖麻毒素的最佳提取方法，在综合对各浸提剂在其最佳提取条件下的提取蓖麻毒素的效果后，最终确定，０．２ｍｏｌ／Ｌ的磷酸缓冲液在对去皮蓖麻籽的质量体积比为ｌ：３（ｇ／ｍ１）时，浸提２４小时后，所得混合物４０００ｒｐｍ离心３０ｍｉｎ，小心除去油
脂，以及离心所剩的渣滓，保留清液，在清液中加入（ＮＨ４）ｚＳ０４盐析剂到８０％饱和度，盐析２４小时，１００００ｒｐｍ离心３０ｍｉｎ，再经透析，真空干燥后所得蓖麻毒素（粗毒）产率最高，同时该提取方法还兼顾到蛋白的稳定性及整个提取流程的经济性，正是要寻找的最佳工艺路线。应用提取出的蓖麻毒素（粗毒）对小白鼠做活性实验，’结果表明，蓖麻毒素对小鼠腹腔注射的ＬＤ∞为７．９７１ｕｇ／ｋｇ，其主要药效成分为蓖麻毒素。蓖麻毒素使小白鼠中毒后无明显异常反应，不容易造成拒食现象，能够提高灭鼠效率。而小白鼠从腹腔注射后３０ｈ开始出现死亡，直到９６ｈ后均有死亡，说明本毒饵是高效、慢性灭鼠刻。针对ＪｌＩ西北高原的主要害鼠一高原鼠兔，应用蓖麻毒素灭鼠剂进行了野外四川ｒ大学硕上学位论文防治实验，在大面积实验中，该粗毒以１％浓度配制毒饵对高原鼠兔的校正灭效为８５％以上。小区实验的灭效在９０％左右。通过连续半个月的观察，未发现鹰等天敌出现二次中毒现象，对受试绵羊也无明显影响，禁牧期后，未发现对牲畜造成危害。这些都充分说明，蓖麻毒素灭鼠剂在应用中是具有安全保障的。，上述研究结果说明，蓖麻毒素灭鼠剂作为一种新型的灭鼠剂，无二次中毒，对牛、羊等对非靶标生物未见明显危害，比较安全、无残毒，不造成环境污染。不失为一种优良的安全无公害灭鼠剂。关键词：蓖麻毒素；提
实验槐米中芦丁的提取分离和鉴定
实验一槐米中芦丁的提取、分离和鉴定 一、概述 槐米系豆科植物槐树（Sophora japonica L.）的花蕾（槐米）。具有清热、凉血、止血的功效，用于治疗便血、痔血，尿血、血淋，崩漏，赤血痢下，风热目赤，痛疽疮毒，还可用于预防中风。近年来被用作治疗高血压的辅助药物。 药理实验证明，槐花米具有调节毛细血管的渗透作用，抗炎作用，解痉、抗渍疡作用，影响脂质代谢，抗菌等多种生物活性。槐花米中主要含有黄酮苷，皂苷、甾醇和鞣质等成分，其中芦丁(Rutin)含量最高，达12～20%。 主要化学成分的结构及理化性质： 芦丁（rutin）：C 27H 30 O 16 ·3H 2 O，浅黄色针状结晶，mp174～178℃（含三分子 水）；188℃（无水物）。难溶于冷水（1：8000～10000），可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。 槲皮素（quercetin）：C 15H 10 O 7 ·2H 2 O，黄色结晶，mp313～314℃（2分子结 晶水），316℃（无水物）。能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。 二、实验部分 （一）实验目的 1、通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物提取分离的原理和操作。 2、掌握酸水解将芦丁生成槲皮素的方法。 3、掌握芦丁与槲皮素的鉴别方法，聚酰胺薄膜的操作方法，电子天平的使用方法。 （二）实验原理 1、芦丁的提取原理：芦丁中含有多个酚羟基，具有酸性，故用碱提酸沉法。 2、芦丁的分离原理：芦丁在沸水中溶解，在冷水中析出。 3、芦丁的鉴定原理：芦丁与槲皮素分别为黄酮类化合物的苷与苷元，用Molish反应可以进行鉴别，也可以利用聚酰胺的氢键吸附性质进行定性分析，Rf值也应不同。 （三）实验药材、仪器与试剂 1、药材：槐米50g(每组)。
抗蓖麻毒素药物的筛选与评价
抗蓖麻毒素药物的筛选与评价 蓖麻毒素（ricin）是从蓖麻籽中提取的一种植物糖蛋白,属于RIPs家族,由两条通过二硫键连接的多糖肽链RTA与RTB构成。Ricin具有毒性强、化学性质稳定、易获取等特点,严重威胁公众生命安全。 Ricin可以快速抑制蛋白质合成,在数小时内即可造成细胞和组织损伤,却 无明显的中毒症状,而目前缺乏特异性对抗药物,因此其中毒救治非常困难。目前,对于ricin中毒患者临床上多采用催吐、透析等对症支持疗法,但对大剂量中毒或未及时送医患者疗效不佳。 研究目的:Ricin抗毒药物筛选及抗毒活性评价。研究内容:⑴在细胞及动物水平筛选和评价单克隆抗体、Rivax疫苗等大分子抗ricin药物的抗毒效果;⑵在细胞及动物水平筛选和评价小分子抗ricin药物的抗毒效果,并采用联合用药的方式评价抗ricin药物的抗毒效果。 研究方法:⑴杂交瘤技术制备单克隆抗体,ELISA法检测抗体亚类以及抗体 与ricin结合特点,无细胞系蛋白合成抑制实验评价抗体对ricin抑制蛋白合成作用的影响,通过细胞实验与动物实验评价抗体的抗毒活性;⑵采用动物实验评价Rivax配伍铝佐剂和多糖佐剂免疫小鼠后对高剂量ricin中毒的抗毒效果;⑶CCK-8法评价小分子抑制剂与ricin处理后MDCK细胞的存活率,对小分子抑制剂的抗毒活性进行体外评价;研究小分子抑制剂和ricin处理后的小鼠存活率,对小分子抑制剂抗毒活性进行体内评价。研究结果:⑴成功制备了五株单克隆抗体（13-4,13-2-4,8-1-1-8,AB6与S11）。 除13-4外,其他单克隆抗体均通过识别ricin不同表位与其结合,其中 8-1-1-8与13-2-4识别RTB链,S11识别RTA;无细胞系蛋白合成实验表明单克隆
蓖麻毒素最简单的提取
蓖麻毒素： 蓖麻毒素为具有两条肽链的高毒性的植物蛋白。它主要存在于蓖麻籽中。该毒素易损伤肝、肾等实质器官，发生出血、变性、坏死病变。并能凝集和溶解红细胞，抑制麻痹心血管和呼吸中枢，是致死的主要原因之一。 小鼠静脉注射LD50值为2.7μg/kg，腹腔注射为7~10μg/kg；对狗LD50值为0.6μg/kg；人致死量约为7mg。 蓖麻毒素除染毒水源和食物经消化道中毒外，还可作为国际间谍情报人员和恐怖分子进行暗害和破坏活动的毒素战剂武器。1978年在伦敦的国际间谍人员曾用装有蓖麻毒素的伞尖在公开场所行刺，一名被刺人员中毒身亡。同时在法国巴黎也有类似事件和发生。 结构特点： 蓖麻毒素(约占蓖麻蛋白的5%，分子量约为66 kD)是一种Ⅱ型异二聚体核糖体失活蛋白，由核糖体失活酶(蓖麻毒素A 链)及与半乳糖/N－乙酰半乳糖胺特异结合的凝集素(蓖麻毒素B 链)组成，二者之间连接一个二硫键。对蓖麻毒素的一级结构进行分析发现，A 链含有267 个氨基酸残基，分子量约为32 kD，具有催化活性，是蓖麻毒素蛋白的效应链。A 链中N 端第4 位及C 端附近分别含有1 个赖氨酸(Lys)残基，是蓖麻毒素A 链毒性作用的关键中心。B链具有2 个结构域，这2 个结构域具有同源性，由基因复制产生。结构域1 中含有氨基末端，而结构域2 中含有羧基末端。蓖麻毒
素B 链由267 个氨基酸残基组成，具有结合活性，是蓖麻毒素的结合链。 理化性质： 蓖麻毒素的一、二级结构已清楚，由A、B两条链组成。A链比B链稍短，两链之间以一个二硫键相连接。它含有共价键结合的糖分子，糖的主要组成是甘露糖、葡萄糖和半乳糖。分子量为66,000。在0.1克分子半乳糖溶液中，毒素可在冰箱中贮存数月而不失活性，但煮沸易失去活性。 蓖麻毒素是从蓖麻籽中提取的植物糖蛋白，分子量64000。毒素由A和B两条多肽链组成，两链间由一个二硫键连接。目前，A 链和B链的氨基酸序列以及二级结构已基本清楚。毒素B链上含有两个半乳糖或半乳糖残基结合位点，可和细胞表面的含半乳糖残基的受体结合，通过内陷作用进入细胞质，发挥毒性作用。蓖麻毒素A、B链上还分别含有1和2个糖支链，链末端均为甘露糖残基，可以和网状内皮细胞特别是巨噬细胞结合。后者细胞表面富含甘露糖受体，可优先摄取蓖麻毒素，这对于毒素发挥生物功能有重要的作用。