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初级检验技师临床免疫学和免疫检验(2017年讲义)第十一章生物素-亲和素放大技术

第十一章生物素-亲和素放大技术

生物素、亲和素是一对具有高度亲和力的物质，它们的结合迅速、专一、稳定并具有多级放大效应。生物素-亲和素系统（BAS）是一种以生物素和亲和素具有的多级放大结合特性为基础的实验技术，它既能偶联抗原抗体等大分子生物活性物质，又可被荧光素、酶、放射性核素等材料标记。

第一节生物素的理化性质与标记

生物素（biotin，B）广泛分布于动、植物组织中，常从含量较高的卵黄和肝组织中提取，分子量244.31kD。

一、活化生物素

利用生物素的羧基加以化学修饰可制成各种活性基团的衍生物，称为活化生物素。

（一）标记蛋白质氨基的活化生物素

（二）标记蛋白质醛基的活化生物素有两种：生物素酰肼（BHZ）和肼化生物胞素（BGHZ）。

（三）标记蛋白质巯基的活化生物素：3-（N-马来酰亚胺-丙酰）-生物胞素（MPB）。

（四）标记核酸的活化生物素：生物素戊酸侧链通过酰胺键与核酸分子相连，构成生物素标记的核酸探针。

1.光敏生物素：用于DNA或RNA的标记。

2.生物素脱氧核苷三磷酸：将生物素与某种脱氧核苷酸连接成活化生物素。用缺口移位法掺入到双链DNA中。

3.BNHS和BHZ：与核酸胞嘧啶分子中的N-4氨基交联，使核酸分子生物素化。

二、生物素标记蛋白质

（一）生物素化蛋白质衍生物的特性

生物素化蛋白质衍生物有两类，一种是生物素化的大分子活性物质（如抗原、抗体），另一种是标记材料（如酶）结合生物素后制成的标记物。

（二）标记方法

1.标记抗体、抗原：由于一个抗体分子可连接多个生物素分子，因此一个生物素化的抗体分子在反应时可与多个亲和素分子结合。通常选用第二抗体进行生物素标记，制备的标记物具有通用性。

2.标记酶：如生物素标记辣根过氧化物酶（HRP）。

（三）标记注意事项

1.应根据抗原或抗体分子结构中所带可标记基团的种类（氨基、醛基或巯基）以及分子的理化性质（酸性、中性或碱性），选择相应的活化生物素和反应条件。

2.标记反应时，活化生物素与待标记抗原或抗体应有适当的比例，使每个蛋白质分子上标记的生物素分子数量控制在一定范围，以免影响标记物的活性。

3.为减少生物素标记蛋白质后，大分子物质造成的空间位阻影响，有利于生物素与亲和素的结合，可在生物素与被标记物间加入交联臂样结构。

4.生物素与抗原、抗体等蛋白质结合后，不影响后者的免疫活性；标记酶时则结果有不同。

第二节亲和素、链霉亲和素的理化性质与标记

亲和素和链霉亲和素是大分子蛋白，几乎可以和任何用于标记的物质结合。

一、亲和素及其活性

亲和素（AV）耐热并耐受多种蛋白水解酶的作用，尤其是与生物素结合后，稳定性更好。每个亲和素能结合4个分子的生物素，二者之间的亲和力极强。

二、链霉亲和素及其活性

链霉亲和素（SA）是由链霉菌streptomyces avidinii分泌的一种蛋白质，分子量为65kD。

链霉亲和素（SA）分子中每条肽链都能结合一个生物素，因此一个链霉亲和素分子也能结合4个生物素分子。

三、亲和素（或链霉亲和素）的标记

用于标记亲和素或链霉亲和素的小分子示踪物有125I、胶体金、荧光素和化学发光物，大分子物质如酶、抗原或抗体、铁蛋白和荧光蛋白等，其中最常用的是酶、异硫氰酸荧光素（FITC）和胶体金。

亲和素或链霉亲和素与酶的标记结合物的制备可用普通酶直接标记，还可以通过与生物素化酶复合物中的生物素结合，间接地与酶形成结合物。

几种制备亲和素（或链霉亲和素）与常用酶形成标记结合物的方法：

（一）亲和素的标记

1.HRP-亲和素结合物的制备

（1）改良过碘酸钠法

（2）戊二醛法

2.亲和素-生物素化HRP复合物的制备

3.亲和素-生物素化碱性磷酸酶（ABAP）复合物的制备

（二）链霉亲和素的标记链霉亲和素（SA）因表面所带正电荷少，且不含糖基，在实验中的非特异性结合远低于亲和素，因此目前以链霉亲和素标记的酶结合物更为常用。

1.HRP-SA结合物的制备采用过碘酸钠法直接标记。

2.SA-生物素化HRP复合物的制备。

3.AP-SA结合物的制备采用戊二醛二步法。

第三节生物素-亲和素系统的特点

生物素、亲和素结合的多级放大作用，以及BAS既可偶联生物大分子，又可连接标记材料的特性，使BAS不仅用于微量抗原、抗体及受体的定量、定性检测及定位观察研究，亦可制成亲和介质用于上述各类反应体系中反应物的分离、纯化。BAS的优越性：

一、灵敏度：每个亲和素分子有四个生物素结合部位，因此，BAS具有多级放大作用，使其在应用时可极大地提高检测方法的灵敏度。

二、特异性：亲和素与生物素间的结合具有极高的亲和力，其反应呈高度专一性。而且，BAS结合特性不会因反应试剂的高度稀释而受影响，使其在实际应用中可最大限度地降低反应试剂的非特异作用。

三、稳定性：亲和素与生物素间的亲和常数极高，结合形成的复合物的解离常数很小，呈不可逆反应性；而且酸、碱、变性剂等均不影响其结合。

四、适用性：生物素和亲和素可与酶、荧光素和放射性核素等各类标记技术结合，用于检测体液、组织或细胞中的抗原-抗体、激素-受体和核酸系统以及其他多种生物学反应体系；而且也可制成亲和介质，

用于分离提纯上述各反应体系中的反应物。

五、其他：BAS可依据具体实验方法要求制成多种通用性试剂（如生物素化第二抗体等），适用于不同的反应体系；而且都可高度稀释，用量很少，实验成本低；尤其是BAS与成本高昂的抗原特异性第一抗体偶联使用，可使后者的用量大幅度减少，节约实验费用。此外，由于生物素与亲和素的结合具高速、高效的特性，尽管BAS的反应层次较多，但所需的温育时间不长，实验往往只需数小时即可完成。

第四节生物素-亲和素系统的应用

一、生物素-亲和素系统基本类型及原理

（一）以游离亲和素为中间物，分别连接包含生物素化大分子的待检反应体系和标记生物素，称为BAB 法；后又发展了亲和素-生物素化酶复合物技术（ABC）。

（二）直接用标记亲和素连接生物素化大分子反应体系进行检测的BA法，或称标记亲和素-生物素法（LAB）。

BAB法 BAB法也称为桥联亲和素-标记生物素法（BRAB），是以游离的亲和素（或链霉亲和素）作为桥联剂，利用亲和素的多价性，将检测反应体系中抗原-生物素化抗体复合物与标记生物素（如酶标生物素）连接起来，达到检测反应分子的目的。

ABC法 ABC法是在BAB法基础上的改良，其原理是预先按一定比例将亲和素（或链霉亲和素）与酶标生物素结合，形成可溶性的亲和素（或链霉亲和素）-生物素-过氧化物酶复合物（ABC或SABC）。当其与检测反应体系中的生物素化抗体（直接法）或生物素化第二抗体（间接法）相遇时，ABC（或SABC）中未饱和的亲和素（或链霉亲和素）结合部位即可与抗体上的生物素结合，使抗原-抗体反应体系与ABC（或SABC）标记体系连成一体进行检测。

BA法 BA（或LAB）法是以标记亲和素（或链霉亲和素）直接与免疫复合物中的生物素化抗体连接进行检测。

二、生物素-亲和素系统在酶免疫测定中的应用

（一）将BAS与ELISA偶联可提高ELISA的灵敏度：每个亲和素可结合4个生物素，可使反应明显放大；亲和素与生物素间极高的亲和力，使反应结合更牢固稳定，而且特异性高；用小分子生物素代替酶标记抗体，可减少反应中的空间位阻。

（二）生物素-亲和素系统可作为均相酶免疫测定中高效的酶活性调变系统。

三、生物素-亲和素系统在荧光免疫技术中的应用

通常采用BA法，即用荧光素直接标记亲和素（或链霉亲和素）；也可采用游离亲和素（或链霉亲和素）搭桥，两端分别连接生物素化抗体和荧光素标记的生物素（BAB法）或荧光标记的抗亲和素（或链霉亲和素）抗体的夹心法。

酶放大时间分辨荧光免疫分析（EATRFIA）则是在抗原与固相McAb和生物素化McAb反应形成夹心复合物后，加入碱性磷酸酶（ALP）标记的SA（ALP-SA）继续反应，经生物素和SA的高亲和力结合，形成复合物：固相McAb-Ag-（McAb-生物素化）-（SA-ALP）。ALP再作用底物生成产物5-氟水杨酸，后者在碱性条件下，可与Tb3+-EDTA形成荧光寿命长且产额高的三元复合物用于检测。

四、生物素-亲和素系统在放射免疫测定中的应用

BAS主要与免疫放射分析（IRMA）检测体系偶联，用于对终反应的放大（BA法）。

此外，BAS也可用于IRMA反应后B，F成分的分离。该法的优点是克服了其他IRMA法需多次离心的麻

烦，待测复合物与固相结合更牢固，操作更简便。

五、生物素-亲和素系统在分子生物学中的应用

BAS在分子生物学领域中的应用主要集中在：

1.以生物素标记核酸探针进行的定位检测

2.用BAS制备的亲和吸附剂进行基因的分离纯化

3.将免疫测定技术与PCR结合建立免疫-PCR用于抗原的检测

【习题】

ABC法免疫组化检测技术中的桥是指

A.生物素

B.亲和素

C.生物素化的抗体

D.酶标生物素

E.第一抗体

『正确答案』B

『答案解析』ABC法免疫组化检测技术中的桥是指亲和素。

免疫学及免疫学检验学题库答案

一、名词解释第1章概论 1.免疫学： 2.免疫分子： 3.补体： 4.临床免疫学：第2章抗原抗体反应 5.抗原抗体反应： 6.抗原抗体反应特异性 7.可逆性 8.比例性 9.抗原抗体反应的等价带（zoneofequivalence） 10.最适比（optimalratio）带现象（11.zonephenomenon）第3章免疫原和抗血清的制备 12.免疫原(immunogen) 半抗原 13.免疫佐剂14. 多克隆抗体15.(polyclonal antibody, pcAb) 凝集反应章5第 16.凝集反应直接凝集反应 17.间接凝集反应18. 明胶凝集试验19.

第6章沉淀反应 20.沉淀反应絮状沉淀试验 21. 免疫浊度测定 22.凝胶内沉淀试验23. 单项扩散试验24. 双向扩散试验 25. 免疫电泳技术26. 对流免疫电泳 27. 火箭免疫电泳28. 免疫电泳29. 免疫固定电泳30.第19章补体检测及应用31.补体免疫溶血法32. 33.补体结合试验第22章感染性疾病与感染免疫检测 34.感染第23章超敏反应性疾病及其免疫检测35.超敏反应 Ⅰ型超敏反应 36. Ⅱ型超敏反应 37.Ⅲ型超敏反应38. Ⅳ型超敏反应 39. 第24章自身免疫性疾病及其免疫检测

40.自身耐受自身免疫 41. 自身免疫病42. 自身抗体43. 抗核抗体44. 第25章免疫增殖性疾病及其免疫检测 45.免疫增殖性疾病免疫球蛋白增殖病46. 47.本周蛋白血清区带电泳 48.免疫电泳49. 免疫固定电泳 50.第26章免疫缺陷性疾病及其免疫检验51.免疫缺陷病获得性免疫缺陷综合征 52. 第27章肿瘤免疫与免疫学检验 53.肿瘤免疫学肿瘤抗原 54.肿瘤标志物55. 第28章移植免疫及其免疫检测 56.移植主要组织相容性复合体 57.移植排斥反应58. 移植物抗宿主反应59.(GVHR) 血清学分型法60. 二、填空题。．

(完整版)临床免疫学检验知识点.doc

临床免疫学检验 1、免疫：是机体识别和排斥抗原性异物的一种生理功能 2、免疫防御（对外）；免疫自稳（防自身免疫病）；免疫监视（防肿瘤）。 3、中枢免疫器官：骨髓、胸腺；外周免疫器官：淋巴结、脾脏（最大）、黏膜相关淋巴组织 4、 B 细胞：通过识别膜免疫球蛋白来结合抗原，介导体液免疫；B细胞受体=BCR=mIg 表面标志：膜免疫球蛋白（SmIg）、 Fc 受体、补体受体、EB 病毒受体和小鼠红细胞受体。成熟 B 细胞： CD19、CD20、 CD21、 CD22 （成熟 B 细胞的 mIg 主要为 mIgM和 mIgD）同时检测 CD5分子，可分为 B1 细胞和 B2 细胞。 B 细胞功能检测方法：溶血空斑形成试验（体液免疫功能）。 5、T 细胞：介导细胞免疫。共同表面标志是 CD3（多链糖蛋白）；辅助 T 细胞的标志是 CD4；杀伤 T 细胞的标志是 CD8； T 细胞受体 =TCR。 T 细胞和 NK细胞的共同表面标志是CD2（绵羊红细胞受体）； CD3＋ CD4＋CD8－ =辅助性T细胞（Th） CD3＋ CD4－CD8＋ =细胞毒性T 细胞（ Tc 或 CTL）（ T 细胞介导的细胞毒试验） CD4＋ CD25＋ =调节性T细胞（Tr或Treg） T 细胞功能检测：植物血凝素（ PHA）刀豆素（ CONA）刺激 T 细胞增殖。增殖试验有：形态法、核素法。 T 细胞亚群的分离：亲和板结合分离法，磁性微球分离法，荧光激活细胞分离仪分离法 *E 花环试验是通过检测SRBC受体而对T 细胞进行计数的一种试验； 6、 NK细胞：具有细胞介导的细胞毒作用。直接杀伤靶细胞（肿瘤细胞和病毒感染的细胞）表面标志： CD16（ ADCC）、 CD56。测定人 NK细胞活性的靶细胞多用K562 细胞株，而测定小鼠胞株。NK细胞活性则常采用 YAC-1 细 7、吞噬细胞包括：单核 - 吞噬细胞系统（MPS，表面标志外周血中的单核细胞和组织内的巨噬细胞）和中性粒细胞。CD14，包括骨髓内的前单核细胞、（表达 MHCⅡ类分子） 8、人成熟树突状细胞（DC）（专职抗原呈递功能）：表面标志为CD1a、CD11c和CD83。 9、免疫球蛋白可分为分泌型（ sIg ，主要存在于体液中，具有抗体功能）及膜型（ mIg，作为抗原受体表达于 B 细胞表面，称为膜表面免疫球蛋白） 10、免疫球蛋白按含量多少排序：IgG＞IgA＞IgM＞IgD＞IgE五类（按重链恒定区抗原性（CH）排序）免疫球蛋白含量测定：单向环状免疫扩散法、免疫比浊法。 11、免疫球蛋白的同种型抗原决定簇位于恒定区（CH、CL） 12、抗体由浆细胞产生。抗体分子上VH和 VL（高变区）是抗原结合部位。

临床免疫学检验名词解释&重要知识点 (上)

抗原抗体反应：是指抗原与相应抗体在体内或体外发生的特异性结合反应。抗原抗体间的结合力涉及静电引力、范德华力、氢键和疏水作用力，其中疏水作用力最强，它是在水溶液中两个疏水基团相互接触，由于对水分子的排斥而趋向聚集的力。亲和性（affinity）：是指抗体分子上一个抗原结合点与一个相应抗原表位（AD）之间的结合强度，取决于两者空间结构的互补程度。亲合力（avidity）：是指一个完整抗体分子的抗原结合部位与若干相应抗原表位之间的结合强度，它与亲和性、抗体的结合价、抗原的有效AD数目有关。抗原抗体反应的特点：特异性、可逆性、比例性、阶段性。带现象（zone phenomenon）：一种抗原-抗体反应的现象。在凝集反应或沉淀反应中，由于抗体过剩或抗原过剩，抗原与抗体结合但不能形成大的复合物，从而不出现肉眼可见的反应现象。抗体过量称为前带，抗原过量称为后带。免疫原（immunogen）：是指能诱导机体免疫系统产生特异性抗体或致敏淋巴细胞的抗原。免疫佐剂（immuno adjustvant）：简称佐剂，是指某些预先或与抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的物质。半抗原（hapten）：又称不完全抗原，是指仅具有与抗体结合的能力(抗原性)，而单独不能诱导抗体产生（无免疫原性）的物质。当半抗原与蛋白质载体结合后即可成为完全抗原。载体（carrier）：结合后能给予半抗原以免疫原性的物质。载体效应：初次免疫与再次免疫时，只有使半抗原结合在同一载体上，才能使机体产生对半抗原的免疫应答，该现象称为~。单克隆抗体（McAB）：将单个B细胞分离出来，加以增殖形成一个克隆群落，该B细胞克隆产生的针对单一表位、结构相同、功能均一的抗体，即~。多克隆抗体（PcAb）：天然抗原分子中常含多种不同抗原特异性的抗原表位，以该抗原物质刺激机体免疫系统，体内多个B细胞克隆被激活，产生含有针对不同抗原表位的免疫球蛋白，即~ 基因工程抗体（GEAb）：是利用DNA重组及蛋白工程技术，从基因水平对编码抗体的基因进行改造和装配，经导入适当的受体细胞后重新表达的抗体。杂交瘤技术【原理】以聚乙二醇（PEG）为细胞融合剂，使免疫后能产生抗体的小鼠脾细胞与能在体外长期繁殖的小鼠骨髓瘤细胞融合产生杂交瘤细胞，通过次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸腺嘧啶核苷（HAT）选择性培养基的作用，只让融合成功的杂交瘤细胞生长，经反复的免疫学检测筛选和单个细胞培养（克隆化），最终获得机能产生所需单克隆抗体又能长期体外繁殖的杂交瘤细胞系。将这种细胞扩大培养，接种于小鼠腹腔，可从小鼠腹水中得到高效价的单克隆抗体。（一）小鼠骨髓瘤细胞理想骨髓瘤细胞的条件：①细胞株稳定，易于传代培养；②细胞株本身不产生免疫球蛋白或细胞因子；③该细胞是HGPRT或TK的缺陷株；④能与B细胞融合成稳定的杂交瘤细胞； ⑤融合率高。目前最常用的是NS-1和SP2/O细胞株（二）免疫脾细胞

免疫学检验课程大纲

《免疫学与免疫学检验》课程教学大纲一、课程的性质和任务《免疫学与免疫学检验》课程是高等职业院校医学检验技术专业的专业核心主干课程是从事医学实验室工作专业技术人员的一门必修的专业课程。随着免疫学和免疫学技术的发展免疫学检验技术成为医学检验中的一个重要组成部分。免疫学检验技术以其特异性强、灵敏度高、结果稳定、方便快捷和成本低廉的特点应用范围廷伸至医学检验专业的各个领域尤其是床旁检验POCT产品的应用当中发展成为一种微量化学定性或定量分析方法。对疾病的病因、发病机制、诊断、治疗和特异性预防起着重要的作用。二、课程教学目标 1. 使学生掌握抗原、免疫球蛋白、抗原和抗体反应、补体和免疫应答等免疫学基础知识和理论，熟悉免疫系统和免疫分子概念和知识。 2. 使学生能够熟悉免疫学检验的基本原理和设计方法，使学生掌握抗体制备技术、免疫比浊分析、酶免疫分析术和荧光免疫技术等基本检验方法。 3. 使学生掌握免疫学常规仪器的操作和维护，使学生熟悉免疫学实验室的一般管理方法。三、教学内容与要求第一章绪论【教学目的】通过本章学习，了解免疫学的主要成就及与医学的关系，理解免疫学研究的基本内容，掌握免疫学的基本概念【教学重点与难点】本章重点是免疫学基本概念，难点是免疫系统。

【教学内容】第一节免疫学和免疫学检验概况一、免疫应答的类型和特征二、免疫学发展简史三、免疫学检验第二节免疫系统一、免疫器官 1、中枢免疫器官 2、外周免疫器官二、免疫细胞 1、淋巴细胞 2、免疫辅佐细胞三、免疫分子【教学建议】课堂讲授第二章免疫化学【教学目的】通过本章学习，了解补体激活的三条途径，理解抗原抗体反应的基本原理、特点和影响因素，掌握抗原的基本性质、免疫球蛋白的结构和功能【教学重点与难点】本章重点是掌握抗原的基本性质、免疫球蛋白的结构和功能，难点是抗原抗体反应的基本原理、特点和影响因素。【教学内容】第一节抗原一、抗原的性质 1、异物性 2、理化特性 3、其他因素二、抗原的特异性 1、抗原决定簇 2、共同抗原和交叉反应

临床免疫学与检验

《临床免疫学与检验》第一章免疫学概论一、选择题： 1．机体免疫稳定功能低下，可导致（）A．免疫缺陷病B．免疫增殖病 C．自身免疫病D．恶性肿瘤2．免疫监视功能异常可导致（） A．超敏反应B．自身免疫病 C．肿瘤D．免疫缺陷病3．在现代免疫学中，免疫的概念是指机体免疫系统具有（） A．发现并排除有毒因子的能力 B．识别和排除抗原性异物的能力 C．抵抗并清除传染性因子的能力 D．发现和消除恶变细胞的能力 4．免疫防御、免疫稳定和免疫监视是A．免疫学的三大内容 B．免疫细胞的三大功能 C．免疫器官的三大功能 D．免疫系统的三大功能 5．最早用人痘接种预防天花的国家是（）A．中国B．美国 C．英国D．俄罗斯 6．免疫自稳功能是指： A．抑制病原微生物在体内繁殖和扩散 B．防止自身免疫病的发生 C．清除体内病原微生物，防止感染 D．清除体内突变细胞，防止肿瘤发生 E．防止病毒的持续感染 7．人体内最大的免疫器官是： A．胸腺B．骨髓C．脾 D．淋巴结E．法氏囊 8．人类B细胞分化发育成熟的器官是：A．骨髓B．脾C．淋巴结 D．胸腺E．腔上囊 9．免疫应答反应的过程是： A．识别阶段B．活化阶段 C．活化和效应阶段 D．识别和效应阶段 E．识别、活化和效应阶段 10．CD4+T 细胞与CD8+T 细胞数的正常比是： A．2～2.5 B．1.5～2 C．＞2.5 D．＜0.5 E．0.5～1 11．可非特异直接杀伤靶细胞的是：A．NK 细胞B．TH 细胞 C．Ts 细胞D．Tc 细胞 E．TCRαβ＋细胞 12．与抗体包被的红细胞相结合形成EAC 玫瑰花环的物质是： A．CD32 B．CD35 C．CD21 D．CD40 E．CD80 13．T 淋巴细胞与绵羊红细胞结合形成E 花环的分子是： A．CD8 B．CD2 C．CD28 D．CD3 E．CD4 14．新生儿从初乳中获得的Ig主要是：A．IgE B．IgD C．IgG D．SIgA E．IgM 15．具有调理作用的主要Ig是： A．IgA B．IgM C．IgG D．IgD E．IgE 16．Ig 的生物学功能是： A．调理作用B．呈递作用 C．合成分泌细胞因子 D．细胞毒作用 E．参与T淋巴细胞在胸腺内的分化17．介导ADCC 的主要细胞是： A．T 淋巴细胞B．B 淋巴细胞 C．NK 细胞D．中性粒细胞 E ．嗜酸性粒细胞

免疫学检验试题(附答案)

免疫学检验试题（一） 1. 免疫监视功能低下时易发生（）。 A．自身免疫病 B．超敏反应 C．肿瘤 D．免疫缺陷病 E．移植排斥反应答案C 解析免疫系统的功能之一是对自身偶尔产生的有癌变倾向的细胞进行清除，此即免疫监视功能，免疫监视功能低下时易发生肿瘤。 2. 免疫自稳功能异常可发生（）。 A．病毒持续感染 B．肿瘤 C．超敏反应 D．自身免疫病 E．免疫缺陷病答案D 解析免疫系统的功能之一是对自身衰老的组织细胞进行清除，此即免疫自稳功能，免疫自稳功能异常可发生自身免疫病。

3. 既具有抗原加工提呈作用又具有杀菌作用的细胞是（）。A．树突状细胞 B．巨噬细胞 C．中性粒细胞 D． B细胞 E． T细胞答案B 解析树突状细胞、巨噬细胞和B细胞都有抗原加工提呈作用，但只有巨噬细胞兼有吞噬杀菌作用。 4. 免疫应答过程不包括（）。 A． T细胞在胸腺内分化成熟 B． B细胞对抗原的特异性识别 C．巨噬细胞对抗原的处理和提呈 D． T细胞和B细胞的活化、增殖和分化 E．效应细胞和效应分子的产生和作用答案A 解析免疫应答过程指免疫系统针对抗原的反应过程，不包括免疫细胞的发育过程。 5. 关于外周免疫器官的叙述，不正确的是（）。 A．包括淋巴结、脾和黏膜相关淋巴组织

B．发生发育的时间晚于中枢免疫器官 C．是免疫应答发生的场所 D．是免疫细胞发生和成熟的场所 E．是所有淋巴细胞定居的场所答案D 解析免疫细胞发生和成熟的场所在中枢免疫器官，故D项不正确。 5. 在正常血清中，含量最高的补体成分是（）。 A． C1 B． C3 C． C4 D． C5 E． C4Bp 答案B 解析在正常血清中含量最高的补体成分是C3。 7. 细胞因子不包括（）。 A．单核因子 B．淋巴因子 C．生长因子 D．抗体

(整理)常用免疫学检查参考值

常用免疫学检查参考值血清免疫球蛋白分类Ig通常是指具有抗体活性和（或）抗体样结构的球蛋白。应用免疫电泳与超速离心分析可将Ig分5类：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。 IgG：含量最多或最主要的Ig（75%），唯一能够通过胎盘的Ig。主要由脾脏和淋巴结中的浆细胞合成与分泌。 IgA：约占10%，SIgA在局部免疫中起重要作用。主要由肠系淋巴组织中的浆细胞产生。血清免疫球蛋白 IgM：分子量最大，由5个IgM单体通过J链连接。是最早出现的Ig，是抗原刺激后最早出现的抗体，其杀菌、溶菌、溶血、促吞噬以及凝集作用比IgG高500-1000倍。测定方法：单向免疫扩散法（RID）或免疫比浊法。血清免疫球蛋白测定参考值参考值：IgG：7.6-16.6g/L （RID法）IgA：710-3350mg/L IgM ：0.48-2.12 g/L 临床意义免疫球蛋白增高多克隆增高:常见于各种慢性感染、慢性肝病、肝硬化、淋巴瘤和某些自身免疫性疾病，如SLE、类风湿关节炎等。单克隆增高:主要见于免疫增殖性疾病，如多发性骨隋瘤、原发性巨球蛋白血症等。免疫球蛋白降低：常见于各类先天性免疫缺陷病、获得性免疫缺陷病、联合免疫缺陷病及长期使用免疫抑制剂的病人。血清IgD测定免疫扩散法：0-62mg/L 已发现有些抗核抗体、抗基底膜抗体、抗甲状腺抗体和抗“O”抗体等均属IgD，但活性甚低。血清IgE：主要由鼻咽部、支气管、胃肠道等粘膜固有层的浆细胞分泌，为亲细胞抗体，能与肥大细胞、嗜碱性粒细胞膜上的FceR结合，产生I型变态反应。 ELASA：0.1-0.9mg/L 临床意义： 1. I型变态反应 2. IgE型骨髓瘤、寄生虫感染等 3. 慢性肝炎、SLE、类风湿性关节炎等。血清M蛋白测定（M protein，monoclonal immunoglobulins）是一种单克隆B淋巴细胞异常增殖时产生的IgG分子或片段，一般不具有抗体活性。参考值：蛋白电泳法，免疫电泳法：阴性意义：1.多发性骨髓瘤（MM），占35%-65%，其中IgG型占60%左右；IgA型占20%左右；轻链型占15%左右；IgD、IgE型罕见。2.巨球蛋白血症。3.重链病（HCDs）。4.半分子病。5.恶性淋巴瘤。6.良性M蛋白血症。血清补体测定补体是具有酶活性的一种不耐热球蛋白，分3组：9种补体成分（C1-C9）；B、D、P、H、I 因子；补体调节蛋白，如C1抑制物、C4结合蛋白、促衰变因子等。总补体溶血活性（CH50）测定参考值试管法：50000-100000U/L 意义：增高见于急性炎症、急性组织损伤、恶性肿瘤及妊娠。降低见于急性肾小球肾炎、自身免疫性疾病、亚急性感染性心内膜炎、慢性肝病、肝硬化、AIDS、严重烧伤等。

临床医学检验技术(中级)-临床免疫学和免疫学检验(B1型题)_1

临床医学检验技术（中级)-临床免疫学和免疫学检验 (B1型题) 1、既具有抗原吞噬能力又有抗原提呈能力的细胞是 A.纯化的T细胞 B.纯化的B细胞 C.纯化的红细胞 D.外周血单个核细胞 E.单核细胞 2、既不表达HLA-Ⅰ类抗原又不表达HLA-Ⅱ类抗原的细胞是 A.纯化的T细胞 B.纯化的B细胞 C.纯化的红细胞 D.外周血单个核细胞 E.单核细胞 3、应用CDC方法检测HLA-DR抗原所使用的待测细胞为 A.纯化的T细胞 B.纯化的B细胞 C.纯化的红细胞 D.外周血单个核细胞

E.单核细胞 4、PHA刺激法可用于 A.测定Tc细胞的效应功能 B.IgG测定 C.可溶性细胞因子测定 D.T细胞亚群测定 E.淋巴细胞转化试验 5、免疫比浊法可用于 A.测定Tc细胞的效应功能 B.IgG测定 C.可溶性细胞因子测定 D.T细胞亚群测定 E.淋巴细胞转化试验 6、流式细胞仪可用于 A.测定Tc细胞的效应功能 B.IgG测定 C.可溶性细胞因子测定 D.T细胞亚群测定 E.淋巴细胞转化试验

7、细胞毒试验可用于 A.测定Tc细胞的效应功能 B.IgG测定 C.可溶性细胞因子测定 D.T细胞亚群测定 E.淋巴细胞转化试验 8、测定抗体生成细胞数 A.免疫印迹法 B.细胞毒试验 C.反向溶血空斑试验 D.E花结试验 E.PHA淋巴细胞转化试验 9、测定T细胞数量 A.免疫印迹法 B.细胞毒试验 C.反向溶血空斑试验 D.E花结试验 E.PHA淋巴细胞转化试验

10、测定NK细胞的杀伤活性 A.免疫印迹法 B.细胞毒试验 C.反向溶血空斑试验 D.E花结试验 E.PHA淋巴细胞转化试验 11、测定非特异性细胞免疫功能 A.免疫印迹法 B.细胞毒试验 C.反向溶血空斑试验 D.E花结试验 E.PHA淋巴细胞转化试验 12、白血病儿童从骨髓库中得到别人捐献的骨髓，属 A.自体移植 B.同种移植 C.异种移植 D.同系移植 E.胚胎组织移植 13、试验性将猪心移植给猴，属

免疫学及免疫学检验学+题库答案

名词解释第1 章概论 1. 免疫学： 2. 免疫分子： 3.补体： 4.临床免疫学：第2 章抗原抗体反应 5.抗原抗体反应： 6.抗原抗体反应特异性 7.可逆性 8.比例性 9. 抗原抗体反应的等价带( zoneofequivalence ) 10.最适比( optimalratio ) 11.带现象( zonephenomenon) 第3 章免疫原和抗血清的制备 12.免疫原(immunogen) 13.半抗原 14.免疫佐剂 15.多克隆抗体(polyclonal antibody, pcAb) 第5 章凝集反应 16.凝集反应 17. 直接凝集反应 18. 间接凝集反应 19. 明胶凝集试验第6 章沉淀反应 20.沉淀反应 21. 絮状沉淀试验 22. 免疫浊度测定 23. 凝胶内沉淀试验

24. 单项扩散试验 25. 双向扩散试验 26. 免疫电泳技术 27. 对流免疫电泳 28. 火箭免疫电泳 29.免疫电泳 30. 免疫固定电泳第19 章补体检测及应用 31. 补体 32. 免疫溶血法 33. 补体结合试验第22 章感染性疾病与感染免疫检测 34. 感染第23 章超敏反应性疾病及其免疫检测 35.超敏反应 36.I型超敏反应 37.U型超敏反应 38.川型超敏反应 39.W型超敏反应第24 章自身免疫性疾病及其免疫检测 40.自身耐受 41.自身免疫 42. 自身免疫病 43.自身抗体 44.抗核抗体第25 章免疫增殖性疾病及其免疫检测 45. 免疫增殖性疾病 46. 免疫球蛋白增殖病 47. 本周蛋白

48. 血清区带电泳 49. 免疫电泳 50. 免疫固定电泳第26 章免疫缺陷性疾病及其免疫检验 51. 免疫缺陷病 52. 获得性免疫缺陷综合征第27 章肿瘤免疫与免疫学检验 53. 肿瘤免疫学 54. 肿瘤抗原 55. 肿瘤标志物第28 章移植免疫及其免疫检测 56. 移植 57. 主要组织相容性复合体 58. 移植排斥反应 59. 移植物抗宿主反应(GVHR) 60. 血清学分型法、填空题。第1 章概论 1.推动现代生命科学前进的三架战车：分子生物学、免疫学、细胞生物学 2.免疫学的发展历史可分为三个时期：经验时期、免疫学科形成时期、现代免疫学时期 3.为保持机体内环境稳定，免疫系统的三大生理功能分别是：免疫防御、免疫自稳、免疫监视。 4.免疫应答的过程主要分为：识别阶段、活化阶段、效应阶段 5.免疫系统的组成包括三部分，分别是：免疫器官、免疫细胞、免疫分子。 6.补体的三条激活途径分别是：经典途径、甘露糖结合凝集素途径、旁路途径。第2 章抗原抗体反应 7.在抗原抗体反应中，主要的结合力有：静电引力、范德华力、氢键、疏水作

临床免疫学检验

单选题 1．ELISA双抗体夹心法最常用于检测：E A．大分子抗体 B．小分子抗体 C．半抗原 D．HLA抗原 E．二价或二价以上抗原 2．ELISA间接法中使用的酶标记物是：D A．酶标半抗原 B．酶标抗原 C．酶标抗体 D．酶标抗抗体 E．酶标抗原抗体复合物 3．ELISA竞争法中，待测管的颜色与标本中抗原、抗体关系是：B A．与抗原或抗体浓度成正比 B．与抗原或抗体浓度成反比 C．与抗原或抗体浓度无平行关系 D．与抗原则成正比，与抗体成反比 E．与抗原成反比，与抗体成正比 4．ELISA最常用的固相载体：C A．聚氯乙烯 B．聚乙烯 C．聚苯乙烯 D．葡聚糖 E．聚丙烯酰胺 5．检查ELISA孔板性能常用：A A．含人IgG的缓冲液 B．含抗人IgG的缓冲液 C．含人IgA的缓冲液 D．含兔IgG的缓冲液 E．含抗人IgA的缓冲液 6．ELISA实验中，包被最常用的缓冲液为：E A．PH6.8的PAS缓冲液 B．PH7.0的柠檬酸盐缓冲液 C．PH7.2的Tris缓冲液 D．PH8.6的巴比妥缓冲液 E．PH9.6的碳酸盐缓冲液 7．ELISA实验中，包被条件最好为：A A．4℃包被24小时或以上 B．37℃包被24小时 C．室温包被6小时 D．0℃包被24小时 E．4℃包被6小时 8．ELISA板孔包被后再行封闭的原因是：B

A．包被液中的蛋白浓度过高 B．包被液中的蛋白浓度偏低 C．包被液中的蛋白质不够纯 D．调节包被后PH值 E．增加板孔吸附力 9．ELISA板孔包被后再行封闭的作用是：D A．调节吸附蛋白浓度 B．调节PH值 C．增加吸附力 D．消除非特异吸附的干扰 E．消除杂质的干扰 10．ELISA实验中，封闭液常用：B A．1～5%牛血清 B．1～5%牛血清白蛋白 C．1～5%马血清 D．1～5%兔血清 E．1～5%兔血清白蛋白 11．HRP辅基在何处有吸收峰：C A．275nm B．300nm C．403nm D．520nm E．660nm 12．ELISA法中HRP应用最多的底物：A A．OPD B．TMB C．ABTS D．4-硝基酚磷酸盐 E．硝基酚半乳糖苷 13．HRP催化OPD（在H2O2存在下)使之呈：B A．蓝色 B．橙红色 C．黄色 D．深褐色 E．棕色 14．ELISA实验中，用AP为标志酶，其底物为：C A．OPD B．TMB C．P-NPP D．H2O2 E．ABTS 15．ELISA实验HRP为标记酶时，其终止剂为：D A．H2O2 B．NaOH

免疫学检验复习重点与难点

一、重点与难点 1.绪论：现代免疫的概念及功能（生理、病理） 2.抗原：抗原免疫原性的本质及决定抗原免疫原性的首要条件，什么决定抗原的特异性，表位，TDAg。 3.抗体分子：Ig的分类、基本结构、多肽链的分区和功能、水解片段及功能、同种型抗原、抗体生物学活性、各类Ig的特点。 4.补体：激活途径有哪些？各自的激活物主要是什么？在机体感染后各自什么时间段参与溶菌杀菌作用？补体系统激活后的生物学作用 5.细胞因子：种类，生物学活性。 6.MHC：人类MHC是什么？位于哪里？经典MHCⅠ/Ⅱ类基因包括哪些？编码产物的分布和生物学功能。 7.免疫器官：免疫系统的组成。中枢免疫器官的功能，胸腺和骨髓的功能。外周免疫器官的功能 8.免疫细胞：T细胞膜分子(CD、TCR、HIV受本、E受体)，Th1/Th2、Tc的功能。B 细胞膜分子(CD、BCR、Fc受体、补体受体等)。NK细胞功能。专职APC的组成，APC 的免疫活性。 9.免疫应答：基本过程；T/B细胞对抗原的识别、活化信号；Th细胞对B细胞的辅助；初次应答和再次应答产生抗体的特点；介导体液免疫应答和细胞应答的细胞及参与细胞。细胞免疫应答的生物学意义。 10.抗原抗体结合力的包括哪些？在什么条件下最大？抗原抗体反应的特点，影响因素。可溶性抗原抗体结合出现可见反应的条件。 11.McAb的制备原理。 12.凝集反应的概念与分类，各类凝集反应的原理与临床应用。 13.免疫标记技术的分类及基本原理。酶免疫技术常用标记酶；ELISA的常用载体、HRP常用底物、基本原理、各技术类型的原理及应用；把抗原抗体反应与酶促反应结合起来的是什么？ELISA试验中阳性、阴性和空白对照的作用。 14.标记物中，可循环应用的是什么？ 15.荧光免疫技术：常用荧光素，荧光抗体技术直接法和间接法的原理及优缺点，荧光显微镜观察的注意事项；实验本身可避免自发荧光和激发光干扰的检测方法是什么？TrFIA的基本原理及常用标记物。 16.各类化学发光免疫分析与ELISA的异同点。 17.在固相标记免疫测定中，什么是非特异性吸附，其引起什么后果。洗涤的目的是什么。洗涤液中加0.05%吐温-20的作用是什么。 18.免疫浊度测定的基本原理、基本原则及影响因素。速率散射比浊法，免疫胶乳比浊法(胶粒子增强浊度测定法)，免疫透射比浊法。

《临床免疫学与免疫学检验》教案首页

安徽理工大学医学院

教研室审阅意见：（教研室主任签名）年月日（教案续页）基本内容辅助手段和时间分配备注

荧光免疫技术(fluoroimmunoassay)是免疫标记技术中发展最早的一种检测方法，其将免疫学反应酶异性与荧光技术的敏感性结合起来。基本原理是：利用荧光素标记抗体，使之在涂片上或组织切片上以一定的条件与标本中的待测抗原特异性地结合，通过高发光效率的点光源，经过滤色板发出一定波长的光，使标本结合的荧光素激发而产生荧光，借助荧光显微镜来进行观察，可以判断待测抗原或抗体的有无。荧光免疫技术被广泛地应用于临床检测和科学研究。第一节荧光的基本知识一、荧光现象荧光就是某些物质受到一定波长光的激发后，在极短的时间内发射出的波长大于激发光波长的光。二、荧光技术中有关的概念和参数 1．发射光谱指固定激发波长，在不同波长下所记录到的样品发射荧光的相对强度。 2．激发光谱指固定检测发射波长，用不同波长的激发光激发样品所记录到的相应的荧光发射强度。 3．荧光效率荧光物质不会将全部吸收的光能都转变成为荧光，荧光效率是指荧光物质将吸收的光能转变序为荧光的百分率。荧光效率=发射荧光的光量子数（荧光强度）/吸收光的光量子数（激发光强度）不同的荧光物质各有其特定的吸收光谱和发射光谱，即在某一特定波长处有最大吸收峰和最发射峰。选择激发光波长在最接近于荧光物质的最大吸收峰的波长，而且测定光波长也设定在最接近于最大发射光波峰时，可得到最高的荧光效率。 4．荧光寿命指荧光物质被一瞬时光脉冲激发后产生的荧光随时间而衰减到一定程度时所用的时间。 5．荧光的猝灭指荧光物质的荧光辐射能力在受到激发光较长时间的照射后会发生减弱的现象。一些化合物有天然的荧光猝灭作用而被用作猝灭剂，用以消除（教案续页）基本内容辅助手段和时间分配备注

临床免疫学检验知识点

12、抗体由浆细胞产生。抗体分子上 VH 和VL （高变区）是抗原结合部位。临床免疫学检验免疫防御（对外）；免疫自稳（防自身免疫病）；免疫监视（防肿瘤）。中枢免疫器官：骨髓、胸腺；外周免疫器官：淋巴结、脾脏（最大）、黏膜相关淋巴组 B 细胞：通过识别膜免疫球蛋白来结合抗原，介导体液免疫;B 细胞受体=BCR=mIg 表面标志：膜免疫球蛋白（Smig ）、Fc 受体、补体受体、EB 病毒受体和小鼠红细胞受体。成熟B 细胞：CD19 CD20 CD21 CD22 （成熟B 细胞的 mig 主要为mIgM 和mIgD ）同时检测CD5分子，可分为B1细胞和B2细胞。 B 细胞功能检测方法：溶血空斑形成试验（体液免疫功能）。 5、T 细胞：介导细胞免疫。共同表面标志是CD3（多链糖蛋白）；辅助T 细胞的标志是CD4; 杀伤T 细胞的标志是 CD8 T 细胞受体=TCR T 细胞和NK 细胞的共同表面标志是 CD2（绵羊红细胞受体）； CD 外CD4+ CD8-=辅助性T 细胞（Th ） CD 外CD4 CD8+ =细胞毒性T 细胞（Tc 或CTL ）（ T 细胞介导的细胞毒试验） CD 知CD25^ =调节性T 细胞（Tr 或Treg ） T 细胞功能检测：植物血凝素（PHA ）刀豆素（CONA 刺激T 细胞增殖。增殖试验有：形态法、核素法。 T 细胞亚群的分离：亲和板结合分离法，磁性微球分离法，荧光激活细胞分离仪分离法 *E 花环试验是通过检测SRBC 受体而对T 细胞进行计数的一种试验; 6、NK 细胞：具有细胞介导的细胞毒作用。直接杀伤靶细胞（肿瘤细胞和病毒感染的细胞）表面标志： CD16（ ADCC ）、 CD56。测定人NK 细胞活性的靶细胞多用 K562细胞株，而测定小鼠 NK 细胞活性则常采用 YAC-1细胞株。 7、吞噬细胞包括：单核-吞噬细胞系统（MPS 表面标志CD14包括骨髓内的前单核细胞、外周血中的单核细胞和组织内的巨噬细胞）和中性粒细胞。（表达MH ffi 类分子） 8、人成熟树突状细胞（DC （专职抗原呈递功能）：表面标志为CD1a CD11C 和CD83 9、免疫球蛋白可分为分泌型（sig ，主要存在于体液中，具有抗体功能）及膜型（mIg ，作为抗原受体表达于 B 细胞表面，称为膜表面免疫球蛋白） 10、免疫球蛋白按含量多少排序：lgG > IgA > IgM > IgD > IgE 五类（按重链恒定区抗原性（CH 排序）免疫球蛋白含量测定：单向环状免疫扩散法、免疫比浊法。 11、免疫球蛋白的同种型抗原决定簇位于恒定区（ CH 、 CL ） 1、免疫：是机体识别和排斥抗原性异物的一种生理功能 2、 3、 4、

临床免疫学检验重要知识学习材料编辑

简述抗原抗体反应的原理。答：抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原表位与抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性，这种特性是由抗原、抗体分子空间构型所决定的，它们之间的结合是抗原表位与抗体超变区沟槽分子表面的结合简述抗原抗体反应的类型。答：抗原抗体反应分为五种类型：①颗粒性抗原与相应抗体结合所产生的凝集反应；②可溶性抗原与相应抗体结合所产生的沉淀反应；③抗原抗体结合后激活补体所致的细胞溶解反应；④细菌外毒素或病毒与相应抗体结合所致的中和反应；⑤免疫标记的抗原抗体反应等。影响抗原抗体反应的环境条件有哪些?在实验中如何控制这些条件因素? 答：环境条件包括：电解质，酸碱度和温度。稳定条件：①电解质：常用O．85％氯化钠或各种缓冲液作抗原及抗体的稀释液及反应液；②酸碱度：pH过高或过低都将影响抗原与抗体的理化性质，抗原抗体反应一般在pH为6～8时进行；③温度：一般以15，40℃为宜，最佳反应温度为37℃。简述单克隆抗体制备技术的主要步骤。单克隆抗体是应用B细胞杂交瘤技术进行制备的，其主要操作步骤包括抗原免疫、亲本细胞的选择和制备、细胞融合、杂交瘤细胞的筛选和克隆化、杂交瘤细胞体内接种或体外增量培养、单克隆抗体的纯化与鉴定。试述免疫血清应如何进行纯化。免疫血清的纯化主要是指提纯免疫血清中的IgG并去除无关的杂抗体。提纯IgG类抗体的方法有：硫酸胺盐析法粗提、离子交换层析法和亲和层析法，采用亲和层析法提取IgG时，可使用纯化抗原或葡萄球菌蛋白A交联sephamse 4B制成层析柱。另外，还可通过吸附法获得单价特异性抗血清。方法是将不含特异性抗原的杂抗原与戊二醛等双功能试剂混合制成固相吸附剂，以吸附免疫血清中的杂抗体，或将杂抗原交联于sephamse 4B上，通过亲和层析去除杂抗体。叙述杂交瘤技术的基本原理。杂交瘤技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。这种杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特性，即既能够分泌抗体又能在体外长期繁殖，经过克隆化后成为单个细胞克隆，分泌的抗体即为单克隆抗体。简述间接血凝试验的基本原理。间接血凝试验是将可溶性抗原(或抗体)吸附于人的0型红细胞或绵羊、家兔的红细胞制成抗原致敏的红细胞，与相应抗体(或抗原)作用，在有电解质存在的条件下，经过一定时间可出现肉眼可见的红细胞凝集现象，又称被动血凝试验简述抗人球蛋白试验的原理(又称Coombs试验)、类型及其在临床上的应用。 Coombs试验又称抗人球蛋白试验，其原理是不完全抗体多半是7S的IgG类抗体，能与相应的抗原牢固结合，但在一般条件下不出现可见反应，利用抗球蛋白抗体作为第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗体，可使红细胞凝集。 Coombs试验有二种类型：(1)直接Coombs试验：用于检测红细胞结合的不完全抗体。(2)间接Coombs试验：用于检测血清中游离的不完全抗体。抗球蛋白试验主要应用于那些方面？ ①输血：对于“危险”受体（指曾经输血、肌肉注射过血液制品或母子间血型不合的妊娠而可能产生免疫性血型抗体的人）的配血试验必须包括各种不完全抗体的检查，以抗球蛋白法最为可靠。②血型抗原抗体的检查：主要检查Rh—者，其体内是否有抗-D抗体，应用抗球蛋白试验对外表为D 阴性的供体血液作常规检查。最可靠和灵敏的方法是将待检D 阴性的红细胞与高效价的不完全抗-D 血清混合，然后加抗球蛋白血清检查细胞上有无致敏抗体。③对新生儿溶血性贫血性疾病的诊断：母体产生的最常见的免疫性抗体为Rh 抗体和ABO 抗体，一般为7S 的IgG，可通过胎盘屏障，作用于胎儿红细胞，引起新生儿溶血性疾病，可借抗球蛋白试验检出而采取预防性措施。④对溶血性贫血的研究：获得性溶血性贫血患者大多数可借助该方法证实有自身红细胞的抗体存在。⑤对细菌或立克次体的不完全抗体的检查。Coombs 试验还可采用专一性特异性的抗球蛋白的血清，如抗IgG 血清、抗IgM、抗IgA以及抗补体血清等，分析结合于红细胞上的不完全抗体免疫球蛋白的亚类。什么是协同凝集试验？主要用于何种检测？协同凝集试验与间接凝集反应的原理相类似，但所用的载体为金黄色葡萄球菌。这种细菌的细胞壁中含

免疫学和免疫学检验：沉淀反应.

免疫学和免疫学检验：沉淀反应沉淀反应（precipetaiton）是可溶性抗原与相应抗体特异性结合所出现的反。早在1897年Kraus就发现，细菌培养液与相应抗血清混合时可发生沉淀反应（precipetaiton）是可溶性抗原与相应抗体特异性结合所出现的反。早在1897年Kraus就发现，细菌培养液与相应抗血清混合时可发生沉淀反应。1905年Bechhold把抗体放在明胶中，将抗原加于其中，发现沉淀反应可在凝胶中进行。Oudin（1946）报告了试管免疫扩散技术，Mancini（1965）提出单向免疫扩散技术，使定性免疫试验向定量化发展。另一方面，免疫浊度法的出现，使沉淀反应达到快速、微量、自动化的新阶段。沉淀反应分两个阶段，第一阶段发生抗原抗体特异性结合，第二阶段形成可见的免疫复合物（参见第九章）。经典的沉淀反应在第二阶段观察或测量沉淀线或沉淀环等来判定结果，称为终点法；而快速免疫浊度法则在第一阶段测定免疫复合物形成的速率，称为速率法。现代免疫技术（如各种标记免疫技术）多是在沉淀反应的基础上建立起来的，因此沉淀反应是免疫学方法的核心技术。第一节液体内沉淀试验一、絮状沉淀试验絮状沉淀试验为历史较久，又较有用的方法。该法要点是：将抗原与抗体溶液混合在一起，在电解质存在下，抗原与抗体结合，形成絮状沉淀物。这种沉淀试验受到抗原和抗体比例的直接影响，因而产生了两种最适比例的基本测定方法。（一）抗原稀释法抗原稀释法（Dean-Webb法）是将可溶性抗原作一系列稀释，与恒定浓度的抗血清等量混合，置室温或37℃反应后，产生的沉淀物随抗原的变化而不同。表12-1系以牛血清白蛋白为例的实验结果。表12-1Dean-Webb定量沉淀试验管号抗原抗体总沉淀量反应过剩物抗原沉淀量抗体沉淀量沉淀中Ab/Ag 1 0.003 0.68 0.093 Ab 0.003 0.090 30.0 2 0.005 0.68 0.145 Ab 0.005 0.140 28.0 3 0.011 0.68 0.249 Ab 0.011 0.238 21.7 4 0.021 0.68 0.422 Ab 0.021 0.401 19.1 5 0.032 0.68 0.571 Ab 0.032 0.539 16.8 6 0.043 0.68 0.734 － 0.043 0.691 16.1 7 0.064 0.68 0.720 Ab －－－ 8 0.085 0.68 0.601 Ag －－－ 9 0.171 0.68 0.464 Ag －－－ 10 0.341 0.68 0.368 Ag －－－单位：mmol/L 从表12-1可以看出，1～5管为抗体过剩管，7～10管为抗原过剩管，唯第6管沉淀物最多，两者之比为16:1，即最适比。（二）抗体稀释法（Ramon）法本法采用恒定的抗原量与不同程度稀释的抗体反应，计算结果同上法，得出的是抗体结合价和最适比。现今，为了取得抗原与抗体的最佳比例，已将以上两法相结合，即抗原和抗体同时稀释，称为棋盘格法（亦称方阵法），找出最佳配比。举例见表12-2。表12-2方阵最适比测定抗体稀释度抗原稀释度 1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640 1/12 对照 1/5 ＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋± －－

临床免疫学与检验重点

免疫学简介一、免疫学概念与免疫应答免疫应答过程：抗原的识别、处理、信息传递、免疫细胞的激活、增值、分化以及产生一系列的免疫效应分子免疫应答分为识别阶段、活化阶段、效应阶段 1、识别阶段：是巨噬细胞等抗原呈递细胞对外来抗原或自身变性抗原进行识别、摄取、降解和递呈抗原信息给T副主席报及相关淋巴细胞的阶段 2、活化阶段：是T、B淋巴细胞在接受抗原信号后，在一系列免疫分子的参与下，发生活化、增值、分化的阶段。B细胞接受抗原信息分化为浆细胞，T细胞接受抗原刺激和协同刺激双信号后分化为效应细胞 3、效应阶段：是浆细胞分泌特异性抗体，执行体液免疫功能。T细胞中的Th细胞分泌细胞因子等效应分子，T杀伤细胞执行细胞毒效应功能。另外有少量T、B细胞在增值分化后，不直接执行效应功能，而成为记忆细胞免疫应答效应多为生理性，是机体对外来抗原或自身变性抗原的清楚效应二、免疫组织与器官免疫系统由免疫器官、免疫细胞和免疫分子构成免疫器官按功能不同，分为中枢免疫器官和外周免疫器官。中枢免疫器官是免疫细胞产生、分化和成熟的场所，由骨髓和胸腺组成；外周免疫器官是免疫应答的场所，有淋巴结、脾及扁桃体等组成。单核细胞核淋巴细胞经血液循环及淋巴循环进出于外周淋巴组织及淋巴器官，形成机体免疫系统的免疫网络。（一）中枢免疫器官 1、骨髓 2、胸腺：是一级淋巴上皮组织，是T细胞发育的重要中枢器官，胸腺由胸腺基质细胞（TSC）和胸腺细胞组成。（二）外周免疫器官及组织 1、淋巴结：分为皮质区及髓质区。皮质区主要的细胞是B淋巴细胞又称为非胸腺依赖区。淋巴结的中心是髓质区，由淋巴索和淋巴窦组成，淋巴索为之谜聚集的淋巴细胞，包括B 细胞、浆细胞、T细胞及巨噬细胞淋巴结主要功能：是共淋巴细胞栖息和增值的场所；是适宜于淋巴细胞增值分化发挥免疫应答的基地；是淋巴液运行中监视清除病原体异物的过滤监控站 2、脾：是富含血管的最大外周淋巴器官。 3、黏膜伴随的淋巴组织：有B细胞、T细胞、浆细胞及巨噬细胞，受局部侵入的病原体激活执行固有和适应性的免疫应答，使B淋巴细胞活化分化为浆细胞，产多种Ig类别的看那个题，其中最主要的是IgA及分泌型IgA，执行体液免疫及局部特异免疫作用（三）淋巴细胞再循环与归巢三、免疫细胞（一）淋巴细胞：是免疫系统的主要细胞，包括T细胞、B细胞核NK细胞 1、T细胞外周血中T细胞约占淋巴细胞的70%-75%。（1）、T细胞受体（TCR）：是T细胞特有的表面标志，可表达于所有的成熟T细胞表面。T细胞识别抗原和转导信号是由TCR特异识别MHC分子递呈的抗原肽，CD3分子转导T 细胞活化的第一信号，TCR与CD3分子通过盐桥结合形成稳定的复合物，TCR识别抗原的这一特点构成MHC限制性的基础（2）簇分化抗原（CD）：是区分T淋巴细胞的重要标志，T细胞发育不同阶段的亚群存在