基因工程试题

答案：基因操作。将在细胞外产生的核酸（物质）分子插入到病毒，质粒或其它载体系统中，再整合到特定的宿主中，从而形成一种新的可连续繁殖的有机体。名词解释问题： Interrupted genes

参考答案：间断基因。序列中间插入有与氨基酸编码无关的 DNA 间隔区，使一个基因分隔成不连续的若干区段。我们称这种编码序列不连续的基因为间断基因。名词解释问题： Promotor

参考答案：启动子。 DNA 分子可以与 RNA 聚合酶特异结合的部位，也就是使转录开始的部位。

名词解释问题： Subcloning

参考答案：亚克隆。当初始克隆中的外源 DNA 片段较长，含有许多目的基因以外的 DNA 片段时，在诸如表达、序列分析和突变等操作中不便进行，将目的基因所对应的一小段 DNA 找出来，这个过程叫“亚克隆”。

填空题问题：基因操作（Gene manipulation）的核心部分是基因克隆（gene cloning）， gene cloning 的基本要点有（），（）和（）。

参考答案：克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择

填空题问题：（）是遗传物质的基本单位,也是作为遗传物质的核酸分子上的一段片段。它可以是连续的，也可以是（）；可以是（），也可以是RNA；可以存在于染色体上，也可以（）

参考答案：基因；连续；DNA；存在于染色体之外（如质粒，噬菌体等）

填空题问题：基因操作并不是一个法律概念，除了包括基因克隆外，还包括基因的（）、（）、（）和（）等与基因研究相关的内容。

参考答案：表达；调控；检测；改造

填空题问题：启动子（Promotor）是指（）。通常一个 Gene 是否表达，（）是关键的一步，是起决定作用的。在转录过程中，Promoter还是（）的结合位点。参考答案：基因转录过程中控制起始的部位；转录起始；RNA 聚合酶

填空题问题：原核生物的 RNA polymerase 主要由两部分组成：（）和（），其中σ-因子并不参与 RNA 的合成，它的作用主要是（）。

参考答案：核心酶；σ因子；识别要转录的起始位点

填空题问题：从（）到（）的这一段距离称为一个转录单位，或者一个转录产物，其中可包括一个或者多个 Gene 。

参考答案：启动区；终止区

填空题问题：转录终止子主要有两种，一种是（），另一种是（）。

参考答案：依赖ρ因子；不依赖ρ因子

填空题问题： Gene 的书写方式，通常是写出的 DNA 序列总是与（）相同的那条链，方向是从（）到（）。对于碱基的位置，一般自转录起始点向两个方向编号，其中转录起始点定为（），（）定为 -1 。

参考答案： mRNA；5'；3'；+1；在起始点上游第一个碱基

填空题问题：重叠基因（Overlapping gene）是指（），间隔基因（Interrupted gene）是指（）

参考答案：一个基因的序列中，单个 DNA 序列可编码一个以上的蛋白质；在编码序列中间插入的一段无编码作用的碱基序列

简答题问题：简述基因克隆的两个基本特征？

参考答案：基因克隆的两个基本特征是一是强调外源核酸分子（一般情况下都是 DNA）在不同宿主中的繁殖，打破自然种的界限将来自于不相关物种的基因放入一个宿主中是基因操作的一个重要特征，基因操作的另一个重要特征是繁殖。

简答题问题：谈谈你对 gene 的认识，并简要说说 gene 概念的发展情况？

参考答案：能够表达和产生基因产物（Proteinor RNA）的 DNA 序列（可自由发挥，发展情况请查找相关资料）基因概念的发展：基因作为遗传学中的专用术语，其概念每发展一步都意味着遗传学乃至整个生物学的一次革命和突破，其内容的每次丰富和充实都凝聚着生物学家们的滴滴心血。“基因”概念的提出：遗传学的奠基人孟德尔在 1866 年发表的论文《植物杂交试验》指出生物每一个性状都是通过遗传因子来传递的，遗传因子是一些独立的遗传单位。这样把可观察的遗传性状和控制它的内在的遗传因子区分开来了，遗传因子作为基因的雏形名词诞生了。 1909 年丹麦遗传学家约翰逊在《精密遗传学原理》一书中提出“基因”概念，以此来替代孟德尔假定的“遗传因子”。从此，能够表达和产生基因产物（protein or RNA）的 DNA 序列（可自由发挥）“基因”一词一直伴随着遗传学发展至今。基因结构和功能的探索：摩尔根和他的学生们利用果蝇作了大量的潜心研究， 1926 年他的巨著《基因论》出版，从而建立了著名的基因学说，首次完成了当时最新的基因概念的描述，即基因以直线形式排列，它决定着一个特定的性状，而且能发生突变并随着染色体同源节段的互换而交换，它不仅是决定性状的功能单位，而且是一个突变单位和交换单位。 1941 年比德尔和塔特姆提出一个基因一个酶说； 1949 年鲍林与合作者在研究镰刀型细胞贫血症时推论基因决定着多肽链的氨基酸顺序； 1944 年艾弗里、麦卡蒂首次用实验明确证实： DNA 是遗传信息的载体； 1952 年赫尔希和蔡斯进一步证明遗传物质是 DNA 而不是蛋白质； 1953 年美国分子生物学家沃森和英国分子生物学家克里克通力协作，根据 X 射线衍射分析，提出了著名的 DNA 双螺旋结构模型，进一步说明基因成分就是 DNA ，它控制着蛋白质的合成； 1957 年法国遗传学家本滋尔以 T4 噬菌体作为研究材料分析了基因内部的精细结构，提出了顺反子学说。这个学说打破了过去关于基因是突变、重组、决定遗传性状的“三位一体”概念及基因是最小的不可分割的遗传单位的观点，从而认为基因为 DNA 分子上一段核苷酸序列，负责着遗传信息的传递，一个基因内部仍可划分为若干个起作用的小单位，即可区分成顺反子、突变子和重组子。一个作用子通常决定一种多肽链合成，一个基

因包含一个或几个作用子。突变子指基因内突变的最小单位，而重组子为最小的重组合单位，只包含一对核苷酸。所有这些均是基因概念的伟大突破。关于基因的本质确定后，人们又把研究视线转移到基因传递遗传信息的过程上。 1961 年开始，尼伦伯格和科拉纳等人逐步搞清了基因以核苷酸三联为一组编码氨基酸，并在 1967 年破译了全部 64 个遗传密码，这样把核酸密码和蛋白质合成联系起来。然后，沃森和克里克等人提出的“中心法则”更加明确地揭示了生命活动的基本过程。 1970 年特明以在劳斯肉瘤病毒内发现逆转录酶这一成就进步发展和完善了“中心法则”，至此，遗传信息传递的过程已较清晰地展示在人们的眼前。过去人们对基因的功能理解是单一的即作为蛋白质合成的模板。 1961 年法国雅各布和莫诺的研究成果，又大大扩大了人们关于基因功能的视野。他们在研究大肠杆菌乳糖代谢的调节机制中发现了有些基因不起合成蛋白质模板作用，只起调节或操纵作用，提出了操纵子学说。从此根据基因功能把基因分为结构基因、调节基因和操纵基因。基因概念的进一步发展： 70 年代后，基因的概念随着多学科渗透和实验手段日新月异又有突飞猛进的发展，主要有以下几个方面。基因具重叠性、内含子和外显子、管家基因与奢侈基因和基因的游动性。所有这些成果无疑给基因概念中注入鲜活科学的内容，帮助人们揭开层层面纱去更加全面了解基因的真面目。时代在发展，科学在进步，基因概念的深入发展，必将对人类的文明进步产生强大的推动作用。

简答题问题：如何理解 gene 及其产物的共线性和非共线性？

参考答案：基因决定蛋白质的序列组成，是由密码子对应特定氨基酸所决定的。当一个基因的核苷酸序列与其产物的氨基酸序列是一一对应时，则表明它们是共线性的。在原核生物中，基因及其产物是共线性的。 70 年代以来，在真核生物中，发现了间断基因，后来发现这种间断基因在真核生物中普遍存在，也就是后来所说的基因间存在着内含子。内含子指真核生物基因中不能被翻译成蛋白质的 DNA 片断，但可被转录，当两侧序列的转录 RNA 被剪接在一起时，就将内含子转录的 RNA 从整个转录物中除去。外显子是指能够翻译成蛋白质的任一间断的基因片段，一个基因可有多个外显子。内含子并不是一成不变的，具有相对性，对一个 DNA 片断来说，在某个基因中是内含子，但在另一个基因中却可以作为外显子。

您的答案：

简答题问题：什么是 gene cloning ？什么是亚克隆（subcloning）？

参考答案：基因克隆：一定程度上等同于基因的分离，即从复杂的生物体基因组中，经过酶切，消化等步骤，分离带有目的基因的 DNA 片段。基因亚克隆：初步克隆中的外源片段往往较长，含有许多目的基因片段以外的 DNA 片段，在诸如表达、序列分析和突变等操作中不便进行，因此必须将目的基因所对应的一小段 DNA 找出来，这个过程叫“亚克隆”。

您的答案：

简答题问题：假如从一个原核生物中 cloning 某基因（1-2kb），请谈谈它的基本步骤？

参考答案：①对原核生物染色体 DNA 进行不完全酶切，纯化所得到的 DNA 片断，并与载体连接，转化大肠杆菌；②得到转化子后，根据目标基因两侧的已知序列设计探针，杂交，筛选转化子；③所得到的转化子中含有目标基因，进一步作亚克隆，一步步地向目标基因逼近，最后可得到目标基因

简答题问题：什么叫基因工程（Gene Engineering），试从理论和技术两个方面谈谈 Gene Engineering 诞生的基础？

参考答案：基因工程（Gene Engineering ）又称基因操作（Gene Manipulation）、重组 DNA 。基因工程是以分子遗传学理论为基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因（DNA 分子），按预先设计的蓝图，在体外构建杂种 DNA 分子，然后导入活细胞，以改变生物原先的遗传特性，获得新品种，生产新产品，或是研究基因的结构和功能。

思考题问题：简述基因操作、基因重组和基因工程的关系。

思考题问题：为什么说基因工程是生物学和遗传学发展的必然产物？

思考题问题：简述基因的结构组成对基因操作的影响。

第二章

名词解释问题： Restriction and modification

参考答案：限制和修饰。宿主特异性地降解外源遗传物质（DNA）的现象称为限制。外源遗传物质通过甲基化等作用避免宿主的限制作用称为修饰。

名词解释问题： Matched ends

参考答案：匹配末端。识别位点为回文对称结构的序列，经限制酶切割后，产生的相同的，互补的末端称为匹配粘端，亦即粘性末端（cohesive end）。

名词解释问题： Blunt ends

参考答案：平末端。在回文对称轴上同时切割 DNA 的两条链，产生的没有碱基突出的末端称为平末端。

名词解释问题： Isoschizomer

参考答案：同裂酶。识别相同序列的限制酶称同裂酶，但它们的切割位点可能不同。

名词解释问题： Isocaudiners

参考答案：同尾酶。来源不同、识别序列不同，?但产生相同粘性末端的酶。

名词解释问题： Site preferences

参考答案：位点偏爱。某些限制酶对同一介质中的不同位置的同一个识别序列表现出不同的切割效率的现象称为位点偏爱。

名词解释问题： Star activity

参考答案：星星活性。在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特殊性称星星活性。

参考答案：切口酶。有些限制酶只切割双链 DNA 中的一条链，产生单链缺口，这种酶称为切口酶。

名词解释问题： Klenow fragment

参考答案： Klenow 片段。Klenow DNA 聚合酶是 E.coli DNA polymerase 经蛋白酶（枯草杆菌蛋白酶）裂解而从全酶中除去 5'--3' 外切活性的多肽大片段，而聚合活性和 3'--5' 外切活性不受影响。

名词解释问题： Sequenase

参考答案：测序酶。是改造的 T7 噬菌体 DNA 聚合酶，切除了 99% 以上的 3'--5' 外切活性。Sequenase Version2 切除了所有的 3'--5' 外切活性，用于双脱氧链终止法对长片段进行测序。

名词解释问题： Reverse transcriptase

参考答案：反转录酶。即依赖于 RNA 的 DNA 聚合酶，它有 5'--3' 合成 DNA 活性，但是无 3'--5' 外切活性。它来自 AMV （禽成髓细胞瘤病毒）

或 Mo-MLV （Moloney 鼠白血病病毒，又称 M-MuLV）。

名词解释问题： Terminal transferase

参考答案：末端转移酶。来源于小牛胸腺，是存在于前淋巴细胞及分化早期的类淋巴样细胞内的一种不寻常的 DNA 聚合酶，在二价阳离子存在下，末端转移酶催化 dNTP 加于 DNA 分子的 3' 羟基端。若 dNTP 为 T 或 C ，此二价阳离子首选钴离子；若 dNTP 为 A 或 G，此二价阳离子首选镁离子。

名词解释问题： Ligase

参考答案：连接酶。催化 DNA 5' 磷酸基与 3' 羟基之间形成磷酸二酯键，将两段核酸连接起来的酶。

名词解释问题： T4 polynucleotide kinase

参考答案： T4 多核苷酸激酶。催化 ATP 的γ-磷酸基转移至 DNA 或 RNA 的 5' 末端。

名词解释问题： Alkaline phosphatase

参考答案：碱性磷酸酶。主要来源于牛小肠（Calf intestinal alkaline phosphatase），简称 CIP 或 CIAP，也有来自细菌（BAP）。催化除去 DNA 或 RNA 5' 磷酸。

名词解释问题： S1 nuclease

参考答案： Sl 核酸酶。来源于米曲霉（Aspergillus oryzae），可降解单链 DNA 或 RNA ，产生带 5' 磷酸的单核苷酸或寡核苷酸双链；对 dsDNA ，dsRNA ， DNA:RNA 杂交体不敏感。

名词解释问题： ExonuleaseЩ

参考答案：外切核酸酶Щ。来源于大肠杆菌，催化从 dsDNA 3'-OH 逐一去除单核苷酸的反应，底物为 dsDNA 或线状和带切口或缺口的环状 DNA ，反应结果是在 dsDNA 上产生长的单链区。

名词解释问题： Single strand binding protein

参考答案：单链结合蛋白。此蛋白能协同地与 ssDNA 结合而不与 dsDNA 结合，可以削弱链内二级结构的稳定性，从而加速互补多核苷酸的重新退火，并通过消除阻碍 DNA 聚合酶前进的链内二级结构，而提高这些聚合酶的持续作用能力。

名词解释问题： Proteinase K

参考答案：蛋白酶 K 是具有高活性的丝氨酸蛋白酶，属枯草杆菌蛋白酶，可以水解范围广泛的肽键，尤其适合水解羧基末端至芳香族氨基酸和中性氨基酸之间的肽键。 K 指该蛋白酶通过水解角蛋白（keratin）可以为该霉菌提供所有所需的碳源和氮源。

名词解释问题： Lysozymes

参考答案：溶菌酶。一类水解细菌细胞壁中肽聚糖的酶，常用的是卵清溶菌酶，用于破碎细胞。

填空题问题： Ecok 的一般分子组成为 R2M2S ，在这些亚基中， R 亚基具有（）的作用， M 亚基具有（）的作用， S 亚基具有（）的作用，当该该酶发生作用时，需用到的辅因子有：（）、（）、（）。

参考答案：限制酶；甲基化；识别 DNA 序列；ATP；SAM；Mg2+

填空题问题：限制性内切核酸酶（Restriction endonuclease）的命名是按属名和种名相结合的原则的，通常第一个大写字母取自（），第二、三个字母取自（），第四个字母则用（）表示。

参考答案：属名的第一个字母；种名的前两个字母；菌株名

填空题问题：Ⅱ型限制酶识别回文对称序列，在回文序列（）或（）切割 DNA ，产生带 3'－OH和 5'－P 基团的 DNA 的产物，需（）的存在才能发挥活性，相应的修饰酶只需 SAM 。

参考答案：内部；附近；Mg2＋

填空题问题：从因特网上可以找到限制酶的数据库（），该网站由 New England Biolabs 公司维护（https://www.wendangku.net/doc/aa1038761.html,）。

参考答案： REBASE

参考答案：同裂酶

填空题问题：Ⅰ-CeuI 酶是衣滴虫叶绿体大 rRNA 基因的内含子编码的产物，识别位点为（）bp，识别的核心部位为（）至（）位置的 19bp ，反应温度为37℃。参考答案： 26；-12；+7

填空题问题：位点偏爱是指：（）

参考答案：限制酶对不同位置的同一个识别序列表现出不同的切割效率

填空题问题： 1 单位NaeⅠ或NarⅠ的定义：（）

参考答案：切割 1μg 腺病毒 2 DNA 在 50ul 体系中 1 小时所需的酶量

填空题问题：有些限制酶只切割双链 DNA 中的一条链，产生单链缺口，即（）

参考答案：切口酶

填空题问题：个体间 DNA 限制性片段长度的差异叫（）

参考答案：限制性片段长度多态性（RFLP）

填空题问题： DNA 载体经HindⅢ切割后产生粘性末端，能发生载体自连，影响载体与外源 DNA 的连接效率，常用的防止载体自连的方法有（）、（）。

参考答案：去磷酸化；部分补平

填空题问题：完全的回文序列应具备两个特点即（）和（）。

参考答案：能够在中间划一个对称轴，两侧的序列两两对称互补配对；两条互补链的 5'--3' 的序列组成相同，即将一条链旋转180°，则两条链重叠

填空题问题： Dcm Methylase（Dcm 甲基化酶）的识别序列为（）和（），该酶的作用位点为（）。

参考答案： CCTGG；CCAGG；第二个胞嘧啶 C 的 C5 位置

填空题问题：大肠杆菌中至少有三种依赖于甲基化的限制系统（）、（）、（）。它们识别的序列各不相同，但只识别经过甲基化的序列，都限制 CpG 甲基化酶作用的 DNA 。

参考答案： mcrA；mcrBC；mrr

您的答案：

填空题问题：分别写出以下限制性内切核酸酶（Restriction endonuclease）的识别序列EcoRⅠ（）、Sau3AⅠ（）、HindⅢ（）。

参考答案： GAATTC；GATC；AAGCTT

填空题问题： Weiss 单位的定义为（）

参考答案：在37℃下 20 分钟内催化 1nmol32P 从焦磷酸根置换到[γ,β－32P]ATP 所需的酶量

填空题问题：限制性内切核酸酶（Restriction endonuclease）通常保存在（）浓度的甘油溶液中。

参考答案： 50%

填空题问题：载体和外源 DNA 经酶切，在进行下一步操作前，需消除限制性内切核酸酶（Restriction endonuclease）的影响。常用的方法有（）、（）、（）、（）。

参考答案： EDTA 法；加热法；苯酚抽提法；试剂盒除酶法

填空题问题：对 DNA 进行双酶切时，酶切缓冲液的选择原则有(1) （）、(2) （）、(3) （）

参考答案：可选用都合适的缓冲液或通用缓冲液；若缓冲液不可替代则先用低浓度的，再加适量 NaCl 和第二种酶；先用低盐缓冲液再用高盐缓冲液

填空题问题：DnaseⅠ为内切核酸酶，在不同的辅因子条件下，产生不同的酶切效果，当 Mg2+ 存在时（）；当 Mn2+ 存在时（）。

参考答案：独立作用于每条 DNA 链，且切割位点随机；可在两条链的大致同一位置切割 dsDNA ，产生平端或 1 到 2 个核甘酸突出的 DNA 片断

填空题问题： Klenow DNA 聚合酶是 E.coli DNA polymerase 经蛋白酶裂解而从全酶中除去（）活性的多肽大片断，而其他活性保持不变。

参考答案： 5'--3' 的外切活性

填空题问题： T4 phage DNA polymerase 分子量为（）kDa，该酶的 3'--5' 的外切活性比 Klenow 酶强（）倍，由于它不从单链 DNA 模板上替换引物，故可用于（）。

参考答案： 114；200；提高诱变反应

填空题问题：反转录酶来自 AMV 或 Mo－MLV ，即依赖于 RNA 的 DNA 聚合酶，它有（）活性，但无（）活性。

参考答案： 5'--3' 合成 DNA 的；3'--5' 的外切

填空题问题：末端转移酶来源于（），是存在于前淋巴细胞及分化早期的类淋巴样细胞内的一种不寻常的 DNA 聚合酶，在（）存在下，末端转移酶催化 dNTP 加于 DNA 分子的 3' 羟基端。

参考答案：小牛胸腺；Mg2＋

填空题问题： T4 DNA 连接酶的分子量为 68kDa ，它可以催化 DNA 5' 磷酸基与 3' 羟基之间形成磷酸二酯键。反应底物为粘端、切口、平端的 RNA 或 DNA 。

参考答案：聚乙二醇 PEG；单价阳离子

填空题问题： E.coli DNA 连接酶与 T4 DNA 连接酶相似，但需（）的参与，且其平端连接效率低常用于置换合成法。

参考答案：烟酰胺－腺嘌呤二核苷酸（NAD＋）

填空题问题： T4 多核苷酸激酶在高浓度的 ATP 时发挥最佳活性，（）是其强烈抑制剂。

参考答案： NH4＋

填空题问题： BAL31 核酸酶主要活性为 3' 外切核酸酶活性，可从线性 DNA 两条链的 3' 端去除掉单核苷酸；还可从内部切割核酸，作用于单链。 BAL31 发生作用依赖（），（）可抑制其活性。

参考答案： Ca2＋；EGTA

填空题问题：绿豆核酸酶来源于绿豆芽，与 S1 酶相似，但比 S1 酶更温和，在（）上才切割，可使 DNA 突出端变成平端。

参考答案：大切口

填空题问题：核糖核酸酶 A 来源于牛胰，为内切核酸酶，可特异攻击（）。可除去 DNA:RNA中未杂交的 RNA 区，可用来确定 DNA 或 RNA 中单碱基突变的位置。

参考答案： RNA 上嘧啶残基的 3' 端

填空题问题：用于构建嵌套缺失体常用到的核酸酶有（）、（）、（）。

参考答案：DnaseⅠ；外切核酸酶Ⅲ；BAL31

填空题问题：琼脂糖酶作用于低熔点琼脂糖，它的活性是可切割琼脂糖酶亚单位。由于此酶可分解琼脂糖，因此应用于（）。

参考答案：分离大片段 DNA

选择题问题：限制性内切酶一般保存在（）浓度的甘油溶液中。

参考答案： C 50%

点评：合适浓度的甘油和二甲基亚砜可以作为冰冻保护剂，保护生物大分子的活性。

选择题问题：限制性图谱与限制性片段长度多态性（RFLP）图谱的最显著区别在于（）

参考答案： A 前者是物理图谱后者是连锁图

点评：详细理解两者的概念

选择题问题：迄今为止所发现的限制性内切核酸酶可以作用于（）

参考答案： C 只能作用于双链 DNA

点评：限制性内切核酸酶的识别和切割序列有很强的特异性，特别是第Ⅱ型的限制性内切酶。

选择题问题：已知某一内切酶在一个环状 DNA 上有 4 个切点，当用此酶切割该环状 DNA ，可以得到（）个片段

参考答案： B 4

点评：注意 DNA 分子的形状，其它条件相同的时候，线状比环状产生的片段要多一个。

选择题问题：甘油会使许多限制性内切核酸酶的特异性发生改变，是导致一些酶星星活性的主要原因之一，防止的办法是在酶切反应体系中，将甘油的浓度控制在（）以下

参考答案： A 5%

点评：低温下保存生物大分子时，甘油可以作为冰冻保护剂，但反应体系中甘油浓度过高会导致星星活性。

选择题问题：在下列进行 DNA 部分酶切的条件中，控制哪一项最好（）

参考答案： D 酶量

点评：各种酶都有适合自己的反应温度；同时根据酶反应动力学，酶切反应一定时间后酶的活性就会减弱或丧失，所以控制酶量是最合适的

选择题问题：下列试剂中，哪一种可以螯合 Ca2＋离子（）

参考答案： D EGTA

点评：EDTA 螯合 Mg2+ 等金属离子， EGTA 螯合 Ca2＋离子。

选择题问题： DNA 被某种酶切割后，电泳得到的电泳带有些扩散，下列原因中，哪一项不太可能（）

参考答案： C 酶失活

点评：理解限制性内切酶酶切本质和 DNA 电泳实验原理。

选择题问题： nick 与 gap 的区别在于（）

参考答案： A 前者是断开了一个磷酸二酯键，后者是指 DNA 的单链中有较小的缺失

点评：注意理解专业词汇。

参考答案： B S1 核酸酶

点评：BAL31 核酸酶主要活性为 3' 外切核酸酶活性，可以从线性 DNA 两条链的 3' 端去掉单核苷酸； S1 核酸酶可降解单链 DNA 或 RNA ，产生带 5' 磷酸的单核苷酸或寡核苷酸，中等浓度可在切口或小缺口处切割双链；核糖核酸酶 A 可以特异攻击 RNA 上的嘧啶残基的 3' 端，可除去 DNA:RNA 中未杂交

的 RNA 区；λ外切核酸酶可以作用于 dsDNA ，持续逐一释放5’单核苷酸。

选择题问题： Klenow 酶与 DNA 聚合酶相比，前者丧失了（）活性

参考答案： A 5'--3' 外切酶

点评：Klenow DNA 聚合酶是 E.coli DNA polymerase 经蛋白酶（枯草杆菌蛋白酶）裂解而从全酶中除去 5'--3' 外切活性的多肽大片段，而聚合活性和 3'--5' 外切活性不受影响。

选择题问题：限制酶的命名遵循一定的原则，涉及来源（宿主），菌株或生物型。命名时（）

参考答案： A 属名第一字母，种名头两个字母，菌株号，然后再加上序号（罗马字）

点评：限制酶的命名遵循一定的原则，涉及来源（宿主），菌株或生物型。命名时，依次取属名第一字母，种名头两个字母，菌株号，然后再加上序号（罗马字）选择题问题：以下对同裂酶的描述中，哪一项是正确的（）

参考答案： A 识别相同序列的限制酶称同裂酶

点评：识别相同序列的限制酶称同裂酶，但它们的切割位点可能不同。具体可分为：同裂同切酶、同序异切酶、“同功多位”等

选择题问题：下列 DNA 聚合酶中，哪一种酶只切割双链 DNA 中的一条链，产生单链切口，即切口酶（）

参考答案： A DnaseⅠ

点评：在 Mg2+ 存在下，独立作用于每条 DNA 链，且切割位点随机。在 Mn2+ 存在下，它可在两条链的大致同一位置切割 dsDNA ，产生平端或 1～2 个核苷酸突出的 DNA 片段； Klenow DNA 聚合酶是 E.coli DNA polymerase 经蛋白酶（枯草杆菌蛋白酶）裂解而从全酶中除去 5'--3' 外切活性的多肽大片段，而聚合活性和 3'--5' 外切活性不受影响； T4 噬菌体 DNA 聚合酶与 Klenow DNA 聚合酶相似，但 3'--5' 外切活性强 200 倍，且不从单链 DNA 模板上替换引

物； T7 噬菌体 DNA 聚合酶的活性功能与 T4 噬菌体 DNA 聚合酶和 Klenow DNA 聚合酶类似，但 3'--5' 外切活性为 Klenow 的 1000 倍。

选择题问题： BAP 与 CIAP 的区别在于（）

参考答案： B CIAP 68℃时失活，而 BAP 68℃稳定

点评：CIAP 来源于牛小肠碱性磷酸酶，而 BAP 来自细菌的碱性磷酸酶。 BAP 抗性强、抗高温和去除污剂。 CIAP 可用蛋白酶 K 消化灭活，或

在 5mM EDTA 下。65℃或75℃处理 10 分钟，然后用酚、氯仿抽提，纯化去磷酸化的 DNA ，从而除去 CIAP 的活性。

选择题问题：下列哪一种酶作用时需要引物（）

参考答案： B 反转录酶

点评：其它三种酶均只需要 DNA 链即可

选择题问题： CIAP 催化脱磷酸时有两种最适温度， 37℃和56℃，二种温度分别适用于（）端脱磷酸

参考答案： A 5' 突出端；平末端和突出的 3' 端

点评：3' 端突出时，磷酸基团是内陷的，需要激烈一点的反应条件。

选择题问题：关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下述描述中只有（）不恰当

参考答案： D 这一系统的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶

点评：根据酶的亚单位组成、识别序列的种类和是否需要辅助因子，限制与修饰系统至少可分为四类：Ⅱ型、Ⅱs型、Ⅰ型、Ⅲ型

选择题问题：限制性内切核酸酶可以特异性地识别（）

参考答案： C 双链 DNA 的特定碱基序列

点评：了解限制性内切酶的识别序列。

选择题问题：以下为同尾酶的是（）

参考答案： B BamHⅠ,Sau3AⅠ,StyⅠ

点评：所谓同尾酶即他们可以产生相同的粘性突出末端。其中 B 选项中BamHⅠ识别位点为G↓GATCC，Sau3AⅠ识别位点为↓GATC，StyⅠ识别位点

为CC↓WWGG。（W=AorT）

选择题问题：在长模板链的指导下引物延伸合成长的 DNA 互补链时应选用（）

参考答案： B T7 DNA 聚合酶

您的答案：

点评：T7 DNA 聚合酶是所有 DNA 聚合酶中持续合成能力最强的一个

选择题问题：在大肠杆菌中，大多数都有三个位点特异性的 DNA 甲基化酶，以下选项中哪一种酶不包括在内（）

参考答案： D SssⅠ

点评：SssⅠ甲基化酶来自原核生物 Spiroplasma

选择题问题：在大肠杆菌中，至少有 3 种依赖于甲基化的限制系统，以下选项中不属于这 3 种的为（）

参考答案： C mcrD

点评：无 mcrD

选择题问题：以下几种核酸酶中，不能用于嵌套缺失的为（）

参考答案： B S1 核酸酶

点评：S1 核酸酶可降解单链 DNA 或 RNA ，酶浓度大时可完全消化双链，中等浓度可在切口或小缺口处切割双链。

选择题问题：下面有关限制酶的叙述哪个是错误的（）

参考答案： A 限制酶是外切酶而不是内切酶

点评：了解限制性内切酶的特性。

选择题问题：在下列酶中，催化反应不需要 ATP 的是（）

参考答案： D BamHⅠ

点评：Ⅰ型和Ⅲ型限制性内切酶在发生限制作用时需要 ATP ，Ⅱ型则不需要，而 B amHⅠ为Ⅱ型限制性内切酶，在催化反应时不需要 ATP

选择题问题： DNA 连接酶在体内的主要作用是在 DNA 复制、修复中封闭缺口，下列对 DNA 连接酶的描述中，那项是正确的（）

参考答案： A 将双链 DNA 分子中的 5' 磷酸基团同 3'－OH 末端重新形成磷酸二酯键

点评：了解 DNA 连接酶的特性。

选择题问题：下列酶中，除（）外都具有磷酸酶的活性

参考答案： A BamHⅠ

点评：磷酸酶活性包括磷酸化活性和去磷酸化活性。

您做对了0个

简答题问题：简述限制性内切核酸酶（Restriction endonuclease）的概念及其生物学功能？

参考答案：定义：指识别 DNA 的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链 DNA 的一类内切酶。生物学功能：保护宿主不受外来 DNA 分子的感染，可降解外来的 DNA 分子，从而阻止其复制和整合到细胞中。

简答题问题： PCR 引物设计引入酶切位点时，为什么需在酶切位点后加上一些碱基？

参考答案：限制酶切割 DNA 时对识别序列两端的非识别序列有长度要求，也就是说在识别序列两端必须要有一定数量的核苷酸，否则限制酶将难以发挥切割活性。因此，一般需在设计引物时在限制酶切位点外另加 3～4 个碱基。

简答题问题：试回答影响限制性内切核酸酶（Restriction endonuclease）切割效率的因素？

参考答案：外因：反应条件、底物纯度、反应温度和限制性内切酶本身的活性；内因：位点偏爱性；甲基化；底物的构象。

简答题问题：在酶切缓冲液中，一般需加入 BSA，请问加入 BSA 的作用是什么？并简述其原理？

参考答案：作用是提供一定的蛋白质浓度，起保护限制性内切酶的作用。限制性内切酶在稀释液中会迅速变性， BSA 是一种很好的可加入酶反应液中的中性蛋白质。

简答题问题：何谓 Star activity？简述 Star activity 的影响因素及克服方法？

参考答案：在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特征称为星星活性。引起星星活性的的因素：①高甘油浓度（>5%）；②酶过量（>100U/ml）；③低离子强度（<25mM）；④高 pH (>8.0)；⑤有机溶剂如 PMSD （二甲基亚砜）、乙醇、乙二醇、二甲基乙酰胺（dimethylacetamide）、二甲基甲酰胺（dimethylformamide）和 sulphalane 等；⑥用其它二价阳离子 Mn2+、Cu2+、Co2+ 或 Zn2+ 代替 Mg2+ 。星星活性的抑制措施：①减少酶的用量，避免过量酶切，减少甘油浓度；②保证反应体系中无有机溶剂或乙醇；③提高离子强度到 100～150mM （在不抑制酶活性的前提下）；④降低反应 pH 至 7.0 ；

⑤使用 Mg2+ 作为二价阳离子。

简答题问题：某 DNA 序列中存在 DpnI 酶切位点，以此 DNA 为模板，在体外合成 DNA 序列，当用该酶进行酶切时，发现切割不动，试分析可能原因？

参考答案：生物体内的 DNA 序列可能是经过甲基化修饰的，而在体外合成时，缺乏这种修饰作用。当用依赖于甲基化的限制酶 DpnI 来切割非甲基化的序列时，就会出现不能切割的情况。

简答题问题：天然的质粒载体（plasmid vectors）通常需经改造后才能应用，包括去除不必要的片段，引入多克隆位点等。试问在此过程中如何增减酶切位点？参考答案：在酶切水平上，通过酶切和连接产生新的酶切位点。①将产生的 5' 突出端补平后，再连接以产生新的酶切位点；②同尾末端的连接，不同的同尾酶切割 DNA 产生的末端，再相互连接时，可产生新的酶切位点，同时原来的酶切位点却消失；③平末端的连接

简答题问题：双脱氧终止法测定 DNA 序列的片段一般不能太长，如何运用本章所学知识测定较长片段的 DNA 序列？

参考答案：①将所需要测序的 DNA 片断采用 2 种不同的限制性内切酶切割，产生不同的酶切片段，将此酶切片段连接到载体上，测序后，拼接，即可得到全

长的 DNA 序列；②用一种限制性内切酶进行部分酶切，酶切产物与载体连接后，测序，拼接，即可得到全长 DNA 片断。采用以上任一方法均可，需要注意的是，在进行部分酶切时，应该控制好条件，要确保所得到的酶切片断能覆盖所需测序的 DNA 片断。

您的答案：

简答题问题：大肠杆菌 DNA 聚合酶Ⅰ，具有 3'--5’外切活性和 5'--3' 的聚合酶活性以及 5'--3' 的外切活性，试根据此推测该聚合酶可能具有哪些用途? 参考答案：①利用 E.coli DNA 聚合酶的 5'--3' 外切核酸酶活性，可用切口平移法标记 DNA ，所有 DNA 聚合酶中只有此酶有此反应；②用于 cDNA 克隆中的第二链，即单纯的 DNA 聚合活性；③对 3' 突出端的 DNA 作末端标记（交换或置换反应）。

简答题问题：用 T4 phage DNA polymerase 可进行末端标记，试简述其原理？

参考答案： T4 phage DNA 聚合酶具有 3'--5' 外切活性和 5'--3' 的聚合酶活性， 3'--5' 的外切活性可以被 5'--3' 的聚合活性所封闭，首先在反应体系中加入一种 dNTP ，产生 3' 凹端，然后加入经过标记的 dNTP ，利用 T4 phage DNA 聚合酶的聚合活性补平 3' 凹端，即可得到标记了末端的 DNA 片断。

简答题问题： BAP 和 CIAP 有何作用？为何一般采用 CIAP 而不采用 BAP ？

参考答案：作用：催化除去 DNA 或 RNA 5' 磷酸。BAP 抗性强，抗高温和去污剂。 CIAP 可用蛋白酶 K 消化灭活，或在 5mM EDTA 下，65℃处理或75℃处理 10 分钟，然后用酚氯仿抽提，纯化去磷酸化的 DNA ，从而去除 CIAP 的活性。相比之下， CIAP 比 BAP 更易去除，因此，一般采用 CIAP 。

简答题问题：依赖于 DNA 的 RNA 聚合酶包括 SP6 噬菌体 RNA 聚合酶和 T4 或 T7 噬菌体 RNA 聚合酶，这类聚合酶可用于表达外源基因，阐述常用的构建策略？

参考答案：①将 T7 RNA 聚合酶基因置于 E.coli lacUV5 启动子之下，插入到λ噬菌体中，感染 E.coli ，建立稳定的溶源菌。 E.coli BL21（DE3）菌株即为将 lacUV5 启动子和 T7 聚合酶基因置于λ噬菌体 DE3 区，该λ噬菌体 DNA 整合于染色体的 BL21 处。若将 T7 噬菌体启动子控制的目的基因经质粒载体导入该宿主菌中，在 IPTG 诱导下，可启动外源基因的表达；②先导入带 T7 噬菌体启动子控制的目的基因的质粒，再用λ噬菌体（带 T7 RNA 聚合酶基因）感染 E.coli ，激活目的基因的表达。

简答题问题：简述 T4 多核苷酸激酶的活性和用途？

参考答案： T4 多核苷酸激酶的活性催化 ATP 的γ－磷酸基转移到 DNA 或 RNA 的 5' 末端。可表现为两种反应，正反应指 ATP 的γ－磷酸基被转移到去磷酸化的 DNA 5' 端，用于对缺乏 5'－磷酸的 DNA 进行磷酸化。在交换反应中，过量的 ATP 可使该激酶将磷酸化的 5' 端磷酸转移给 ADP ，然后 DNA 从【γ－32P】ATP 中获得放射性标记的γ－磷酸而重新磷酸化，因此可用于 DNA 的末端标记。用途：该酶主要用于对缺乏 5'－磷酸的 DNA 或合成接头进行磷酸化，同时可对末端进行标记。通过交换反应，用于标记 5' 末端，以供 Maxam－Gilbert 法测序、 S1 核酸酶分析以及其它须使用末端标记 DNA 的步骤。

您的答案：

思考题问题：限制性内切酶可划分为哪几个类型，各自有何特点？

思考题问题：哪些酶可用于DNA片段的末端标记？

思考题问题： DNA 聚合酶有哪些类型，各有什么活性？

思考题问题：在分子克隆中所用的酶主要作用于哪些底物？

第三章

名词解释问题： Vehicle

参考答案：载体。将外源 DNA 或基因携带入宿主细胞（host cell）的工具称为载体。具备以下三个必须元件：复制原点、多克隆位点和筛选标记。

名词解释问题： Gene clone

参考答案：基因克隆。克隆作动词时，指从单一祖先产生同一的 DNA 分子群体或细胞群体的过程；作名词时指从一个共同祖先无性繁殖下来的一群遗传上同一的 DNA 分子、细胞或个体所组成的特殊的生命群体。利用重组 DNA 技术分离目的基因，称之为基因克隆。

名词解释问题： Gene library

参考答案：基因文库。由大量的含有基因组 DNA（即某一生物的全部 DNA 顺序）的不同 DNA 片段的克隆所构成的群体，称之为基因文库。

名词解释问题： Plasmid incompatibility

参考答案：质粒不相容性。利用同一复制系统的两个质粒在同一宿主中不能共存的现象称质粒的不相容性，它是指在第二个质粒导入后，在不涉及 DNA 限制系统时出现的现象。

名词解释问题：α-complementation

参考答案：α-互补。指 lacZ 基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的α-半乳糖苷酶阴性的突变体之间实现的互补。这两个无酶学活性的产物混合在一起时，可恢复α-半乳糖苷酶的活性。

名词解释问题： X-gal/IPTG

参考答案：两者都是乳糖的衍生物，X-gal：乳糖操纵子底物，可以作为生色剂，被α-半乳糖苷酶分解后可产生兰色产物，可使菌落呈现兰色；IPTG：乳糖操纵子诱导物。

名词解释问题： lytic growth

参考答案：裂解生长状态。噬菌体侵染宿主细胞后，大量复制并组装成子代噬菌体颗粒，导致宿主细胞裂解的现象称裂解生长状态。

名词解释问题： lysogenic state

参考答案：溶源状态。噬菌体侵染宿主细胞后，将λ噬菌体基因组 DNA 通过位点专一性重组整合到宿主的染色体 DNA 中，并随宿主的繁殖传给子代细胞的现象称溶源状态。

名词解释问题： Multiplicity of infection

参考答案：感染复数。指单个宿主细胞感染的噬菌体颗粒数，等于实验所用的噬菌体与细胞的数量之比。

名词解释问题： Insertion vectors

参考答案：插入型载体。通过特定的酶切位点允许外源 DNA 片段插入的载体称为插入型载体。

名词解释问题： Replacement vectors

参考答案：置换型载体。而允许外源 DNA 片段替换载体的非必须 DNA 片段的载体，称为置换型载体。

名词解释问题： Cosmid

参考答案：粘粒。带有将 DNA 包装到噬菌体颗粒中所需的 cos 序列的质粒。包括质粒复制起点，可以象质粒一样转化并增殖；包括 cos 位点，可以象噬菌体颗粒一样包装、侵染。

名词解释问题： Replicative form DNA

参考答案：复制型 DNA 。在宿主细胞内，感染性的单链噬菌体 DNA （正链）在宿主酶的作用下转变成环状双链 DNA ，用于 DNA 的复制，这种双链 DNA 称为复制型 DNA 。

名词解释问题： Phagemid

参考答案：噬菌粒。具有 ColE1 复制起点及单拷贝的丝状体噬菌体主要基因间隔区的质粒载体。此基因间隔区含病毒 DNA 合成的起始与终止及噬菌体颗粒形态发生所必须的全部顺式作用序列。含 phagemid 的细菌被噬菌体感染后，基因Ⅱ蛋白作用于间隔区，启动滚环复制产生 ssDNA 并进行包装。

您的答案：

名词解释问题： M13K07 help phage

参考答案： M13KO7 辅助噬菌体。 M13 单链丝状噬菌体的衍生株，基因Ⅱ带有一个 G--T 的突变。 M13KO7 基因组双链 DNA 可表达产生子代单链 DNA 所必需的所有蛋白。 M13K07 中突变的基因Ⅱ产物与自身携带的噬菌体复制起点的作用尚不如它与克隆于噬菌粒 pUCll8 和 pUCll9 中的病毒复制起点的作用有效，可以确保在细胞所产生的病毒颗粒中来自噬菌粒的单链 DNA 能够占据优势。

名词解释问题： Yeast artificial chromosomes

参考答案：酵母人工染色体载体。利用酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）染色体的复制元件来驱动外源 DNA 片段复制的载体称为酵母人工染色体载体。由自主复制序列、着丝粒、复制子及选择标记等元件组成。

名词解释问题： Bacterial artificial chromosomes

参考答案：细菌人工染色体。是基于大肠杆菌的 F 质粒构建的高通量低拷贝质粒载体。包括严谨型控制的复制区 oriS 、启动 DNA 复制的由 ATP 驱动的解旋酶（(RepE)，以及三个确保低拷贝并使质粒精确分配至子代细胞的基因座(parA,parB 和 parC)等元件）。

名词解释问题： P1 artificial chromosomes

参考答案： P1 人工染色体载体。结合了 P1 载体和 BAC 载体的特性，是 P1 噬菌体载体的改进载体。重组分子不能通过体外包装来感染宿主细胞，而只能通过电转化来将重组分子导入宿主细胞。

名词解释问题： Shuttle vector

参考答案：穿梭载体。能够在两类不同的宿主中复制、增殖和选择的载体称为穿梭载体。

填空题问题：载体（Vehicle）的类型有（），（），（），（）等。

参考答案：质粒载体；噬菌体载体；粘粒载体；噬菌粒载体

填空题问题： Gene cloning 是指（），基因文库（Gene library）是指（）。

参考答案：利用重组DNA技术分离目的基因；由大量的含有基因DNA（即某一生物的全部DNA顺序）的不同DNA片段的克隆所构成的群体

填空题问题： Plasmid 的定义是（）， Plasmid 能进行自我复制，大多数为（）链（）状 DNA 分子，大小一般为（）kb。

参考答案：染色体外的遗传因子；双；闭环；1～200

您的答案：

填空题问题：（）即为质粒的拷贝数，按照质粒拷贝数的多少，质粒可以分为（）和（），（）质粒多数是一些具有转移能力的大质粒；（）质粒多数是一些不具有转移能力的小质粒。

参考答案：单个细胞中所含有的质粒 DNA 分子数目；严谨型；松弛型；严谨型；松弛型

填空题问题：松弛型质粒和严谨型质粒融合以后，杂合质粒一般优先使用（）的复制子。

参考答案：松弛型

参考答案：两个质粒在同一宿主中不能共存的现象；相同

填空题问题：质粒具有转移性，它是指（），它需要（），（）和（）

参考答案：在自然条件下，很多质粒可以通过称为细菌接合的作用转移到新宿主内；移动基因 mob ；转移基因 tra ；转移起始位点

填空题问题：根据质粒的转移性可以将质粒分为（）和（），一般大质粒都是（），（）一般都是小质粒，其上没有（）

参考答案：接合型质粒；非接合型质粒；接合型质粒；非接合型质粒；编码其 DNA 转移的基因

填空题问题：按其用途可将标记基因分为选择标记和筛选标记，选择标记一般用于（），筛选标记一般用于（）

参考答案：鉴别目的 DNA（载体）的存在；将特殊表型的重组子挑选出来

填空题问题：常用的用来鉴定重组质粒的细菌菌落的方法有（），（），（）等。

参考答案：α－互补；插入失活；原位杂交

填空题问题： pBR322质粒是基因工程最重要的人工质粒之一，它的大小约为（）kb，用于其组建的三个亲本质粒是（）, （）,和（）。此质粒具有一个colE1松弛型质粒复制子，两个筛选标记氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，其中colE1松弛型质粒复制子来源于（），氨苄青霉素抗性基因来源于（），四环素抗性基因来源于（）

参考答案： 4.3；pM131；pSC101；pSF2124；pM131；pSF2124；pSC101

填空题问题： pUC 系列的质粒载体是由（）和（）两种质粒构建而来的，其中氨苄青霉素抗性基因来自于（），多克隆位点 MCS 来自于（）。 pUC 系列的质粒载体一般是成对存在的如 pUC18 和 pUC19 ，其主要区别是（）。

参考答案： pBR322；M13mp18/19；pBR322；M13mp18/19；MCS 方向不同

填空题问题：质粒载体的附加功能要素主要有（），（），（）等。

参考答案：α－互补；ssDNA phage origin，promotor

填空题问题：λ噬菌体 Genome 的长度约为（）kb，其 DNA 分子为（）（填单或双）链。它的 DNA 分子既可以以（）状存在也可以以环状存在，而且可以自然成环，其原因是在λ噬菌体的线性分子的两端各有一个长度为（）个碱基的天然粘性末端，这种粘性末端可以自然成环，成环后的粘性末端就叫做（）。参考答案： 50；双；线；12；cos位点

填空题问题：λ噬菌体在感染大肠杆菌以后，可以进入 Lytic growth 也可以进入 Lysogenic state 。如果其基因组 DNA 通过专一性重组整合到宿主染色体中，则其进入（）；它也可以选择进入（），大量复制并组装子代噬菌体颗粒。

参考答案： Lysogenic state；Lytic growth

填空题问题：在λ噬菌体载体中，常用的选择标记有（），cⅠ基因失活，和（）等。

参考答案： LacZ；spi 筛选

填空题问题：改造后的λ噬菌体才可用作载体，按照改造方式的不同可将其分为两种类型，即插入型载体（insertion vectors）和替代型载体（replacement vectors）。其中 Insertion vectors 是指（）；Replacement vectors 是指（）

参考答案：通过特定的酶切位点允许外源 DNA 片断插入的载体；允许外源 DNA 片断替换载体的非必须 DNA 片断的载体

填空题问题：λgt10 是一个由λ噬菌体衍生而来的 insertion vectors ，主要用于（）。它缺失了含有溶源整合的（）；λgt11 载体也是一

种 insertion vectors ，该载体的最大特点是在最左侧可替代区置换了一段（）基因，可编码β-半乳糖苷酶，在 IPTG/X-gal 平板上可形成（）色噬菌斑。参考答案：克隆小的 cDNA；b257；lacZ；蓝

填空题问题：λ噬菌体由于受到包装的限制，插入外源 DNA 片段后，其总的 DNA 长度应该在噬菌体 genome 的（）范围内。

参考答案： 78%～105%

填空题问题： Cosmid 实际上是由（）和（）构成的杂合载体，也可以说是带有（）序列的质粒。

参考答案： cos 位点；质粒；cos

填空题问题：染色体步查指（）。

参考答案：采用一段分离自某一重组体一端的非重复 DNA 片段作为探针以鉴定含有相邻序列的重组克隆。

填空题问题： Cosmid 的组成包括三个部分：（），（）和（），其中复制子来源于（），cos 序列来源于（）。

参考答案：质粒复制起点；cos 位点；抗性标记；质粒；噬菌体

您的答案：

填空题问题：λ噬菌体的最大克隆片段是（）kb， Cosmid 的最大克隆片段可达到（）kb。

参考答案： 23；45

填空题问题：利用λ噬菌体载体构建的 gene library 中，文库是以（）的形式存在的；用质粒载体构建的 gene library 是以（）的形式存在的；粘粒载体构建的 gene library 是以（）的形式存在的。

参考答案：噬菌斑；菌落；菌落

填空题问题： M13 噬菌体颗粒是（）状的，其基因组为（）（填单或双）链 DNA 。它只感染（）性大肠杆菌，感染宿主以后，其噬菌体颗粒的释放不像λ噬菌体那样要裂解宿主菌，而是（）。

参考答案：丝；单；雄；从感染的细胞中分泌出噬菌体颗粒

填空题问题： M13 噬菌体仅有两个大的基因间隔区，分别位于（）与（）之间以及（）和（）之间，这些基因间隔区内含有（）的元件。其中，（）称为 IG 区，它有三个最重要的功能即（），（）和（）。

参考答案：Ⅷ；Ⅲ；Ⅱ；Ⅳ；调节基因表达和 DNA 合成；GeneⅡ和GeneⅣ之间的间隔区；含有可对包装及 DNA 在病毒颗粒中的定向进行调控的顺式作用因子；正链与负链 DNA 合成起始和终止位点；不依赖与ρ因子的转录终止信号

填空题问题： RFDNA 是指（）。

参考答案：复制型 DNA ，感染性的单链噬菌体 DNA （正链）在宿主酶的作用下转变成环状双链 DNA ，用于 DNA 的复制。

填空题问题： M13K07 辅助噬菌体是（）的衍生株，它带有一个来自（）的复制起点，还带有一个来自（）的卡那霉素抗性基因，用作选择标记；基因Ⅱ带有一个（）的突变，导致基因蛋白质第 40 位氨基酸由甲硫氨酸变为异亮氨酸。

参考答案： M13 phage；p15A；Tn903；G-T

填空题问题： YAC 载体基本组成元件有（），（），（），（）和（）。

参考答案：复制起点；着丝粒；端粒；MCS；筛选标记

填空题问题：表达载体（Express vector）是在常规载体的基础上衍生而来的，其构建的原理主要是增加一个（），以及有利于表达产物的分泌、分离或纯化的元件；穿梭载体（Shuttle vector）是指（）

参考答案：表达元件；能够在两类不同宿主中复制、增殖和选择的载体

选择题问题：氨苄青霉素的工作原理为（）

参考答案： A 可以抑制细胞壁肽聚糖的合成

点评：B、D 为四环素的工作原理； C 为氯霉素的工作原理

选择题问题： pUC18 与 pUC19 的区别在于（）

参考答案： B 二者的多克隆位点方向相反

点评：系列载体的区别一般不大，主要是克隆方向或读码框等方面的差别。

选择题问题：载体所具备的特点中，以下描述不恰当的是（）

参考答案： D 必须具有较高的拷贝数，便于制备

点评：对于那些有剂量限制的基因克隆需要使用低拷贝的质粒载体

选择题问题：复制子由三部分组成，以下不属于的为（）

参考答案： D 启动子

点评：了解质粒的生物学性质。

选择题问题： pBluescript M13 载体在多克隆位点的两侧引入了 T7 和 T3 两个噬菌体的启动子，这样增加了该载体的功能，以下 4 种功能哪一种是不正确的（）

参考答案： D 利用这两个启动子进行定点突变

点评：了解 pBluescript M13 载体的工作原理及特性。

选择题问题：以粘粒为载体转染受体菌后，平板上生长的菌落会出现大小不一、生长速度不一的现象，其原因是（）

参考答案： D 重组体中插入片段的大小不同

点评：插入片段本身的复制以及插入片段在宿主菌中的表达产物都会影响宿主的生长。

选择题问题：噬菌粒是由质粒和噬菌体 DNA 共同构成的，其中来自质粒的主要结构是（），而来自噬菌体的主要结构是（）

参考答案： A，A 重组体中插入片段的大小不同

点评：了解噬菌粒的生物学特性。

选择题问题：野生型的 M13 有 10 个基因，分为三个功能基团，其中与复制有关的两个基因是（）

参考答案： A 基因Ⅱ；基因Ⅳ

点评：熟悉 M13 噬菌体的遗传学性质。

选择题问题： M13 单链噬菌体的复制分为三个阶段，以下哪一项不属于此（）

参考答案： D SS→SS

点评：RFDNA 特指 M13 单链噬菌体复制型双链 DNA

参考答案： A 滚环复制模型

点评：λ噬菌体 DNA 和 M13 单链噬菌体侵染宿主后，都是先θ复制模型，后转为滚环复制模型。

选择题问题：以下对 pUC18 的描述中，错误的为（）

参考答案： C 可以在辅助质粒的帮助下合成单链 DNA

点评：pUC18 没有 IG 区，不可能形成单链。

选择题问题：以下对粘粒为载体的重组体的描述正确的是（）

参考答案： B 各重组体在平板上生长的速度不同，转化子中插入片段的扩增量也是不同的

点评：理解粘粒载体的工作原理。

选择题问题：下列哪种克隆载体对外源 DNA 的装载量最大（）

参考答案： B 酵母人工染色体（YAC

点评：人工染色体包括 YAC、BAC、PAC 等，其特点是可以装载大的（100kb 以上）外源 DNA 片段。

选择题问题：同一种质粒 DNA ，以三种不同的形式存在，电泳时，它们的迁移速率是（）

参考答案： B SC DNA>L DNA>OC DNA

点评：DNA 分子结构越紧凑，泳动时受到的阻力越小，迁移速率越大。

选择题问题：关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确（）

参考答案： A 在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点

点评：能够在两类不同的宿主中复制、增殖和选择的载体称为穿梭载体。

选择题问题：反向重复序列：（）

参考答案： C 可以回折形成发夹结构

点评：理解什么是反向重复序列。

选择题问题：λ噬菌体线性 DNA 分子的两端各有一个（）个碱基组成的天然黏性末端

参考答案： B 12

点评：λ噬菌体线性 DNA 分子的两端各有一个 12 个碱基组成的天然粘性末端，称为 cos 位点。

选择题问题：下列关于细菌人工染色体（BAC）的特点描述，除（）以外都是正确的

参考答案： B BAC 载体在大肠杆菌中为高拷贝

点评：细菌人工染色体。是基于大肠杆菌的 F 质粒构建的高通量低拷贝质粒载体。包括严谨型控制的复制区 oriS 、启动 DNA 复制的由 ATP 驱动的解旋酶（RepE），以及三个确保低拷贝并使质粒精确分配至子代细胞的基因座（parA ， parB 和 parC）等元件。

选择题问题：粘粒（cosmid）是一种人工建造的载体，下列对它的描述中哪一项是不正确的（）

参考答案： D 进入受体细胞后，可引起溶源化反应

点评：粘粒指带有将 DNA 包装到噬菌体颗粒中所需的 cos 序列的质粒。包括质粒复制起点，可以像质粒一样转化并增殖；包括 cos 位点，可以像噬菌体颗粒一样包装、侵染。

选择题问题：松弛型质粒：（）

参考答案： A 在寄主细胞中拷贝数较多

点评：理解松弛型质粒的概念。

选择题问题：关于质粒的不相容性，下列哪一种说法正确（）

参考答案： C 如果两个质粒不相容，说明它们的复制机制相同

点评：利用同一复制系统的两个质粒在同一宿主中不能共存的现象称质粒的不相容性，它是指在第二个质粒导入后，在不涉及 DNA 限制系统时出现的现象。

选择题问题：一般情况下，质粒的存在情况以下描述正确的是（）

参考答案： A 独立存在

点评：质粒指细菌或某些低等生物里面存在的独立于染色体外的双链闭合环状 DNA 分子（现在也发现有线状的），它经常携带一些不必需的遗传信息。

选择题问题：转座子不包括下列哪个部分（）

参考答案： D 重复序列

点评：理解转座子的概念。

选择题问题：下列哪一项不是质粒载体必备的基本特征（）

参考答案： D 含 lacZ

点评：lacZ 是一种筛选标记，能够使载体使用的更加方便，但不是载体的必需元件。

选择题问题：质粒的消失和染色体的突变是不同的，表现在（）

参考答案： A 前者不能恢复，后者可以通过回复突变恢复该基因的性状

点评：理解回复突变。

选择题问题：以下的描述中，哪一项是正确的（）

参考答案： C 如果细菌的某种表型特征在 UV 处理下丧失后不再恢复，这种表型有可能是质粒赋予的

点评：了解质粒的生物学性质及质粒载体的工作原理。

选择题问题：线性质粒复制的引物来自于（）

参考答案： D 自身末端的端粒序列

点评：参照染色体的复制。

选择题问题：下面关于松弛型质粒的性质描述中，（）是不正确的

参考答案： A 通常带有抗性标记

点评：氯霉素可以增加质粒的复制，而不影响染色体的复制。

选择题问题： ColE1 是唯一用作遗传工程载体的自然质粒，以下对这种质粒描述不正确的是（）

参考答案： B 具有四环素抗性

点评：ColE1 是自然质粒，没有四环素抗性基因，不能通过抗性筛选

选择题问题：以下不是表达载体所必须的条件是（）

参考答案： C 启动子不需要受控制

点评：表达载体与克隆载体相比就是多了表达所必须的各种遗传元件。

您做对了0个

简答题问题：何为载体？一个理想的载体应具备那些特点？

参考答案：将外源 DNA 或目的基因携带入宿主细胞的工具称为载体。载体应具备：①在宿主细胞内必须能够自主复制（具备复制原点）；②必须具备合适的酶切位点，供外源 DNA 片段插入，同时不影响其复制；③有一定的选择标记，用于筛选；④其它：有一定的拷贝数，便于制备。

简答题问题：含 pMB1 或（ColE1）复制子的 plasmid 是如何复制的，其调节机制如何？

参考答案：复制方式：在复制时，首先合成前RNAⅡ，即前引物，并与 DNA 形成杂交体；而后 RnaseH 切割前RNAⅡ，使之成为成熟的RNAⅡ，并形成三叶草二级结构。该引物引导质粒的复制。调节机制：形成的RNAⅠ可控制RNAⅡ形成二级结构，同时 Rop 增强RNAⅠ的作用，从而控制质粒的拷贝数。削

弱RNAⅠ和RNAⅡ之间相互作用的突变，将增加带有 pMB1 或（ColE1）复制子的拷贝数。

简答题问题：当向细菌培养基中加入氯霉素时，可以使细菌质粒的拷贝数得到扩增，试分析其原理？

参考答案： pMB1 质粒的复制并不需要质粒编码的功能蛋白，而是完全依靠宿主提供的半衰期较长的酶（DNA 聚合酶Ⅰ， DNA 聚合酶Ⅲ），依赖于 DNA 的 RNA 聚合酶，以及宿主基因 dnaB 、dnaC 、dnaD 和 danZ 的产物。因此，即使存在抑制蛋白质合成并阻断细菌染色体复制的氯霉素或壮观霉素等抗生素时，带有 pMB1（或 ColE1）复制子的质粒将继续复制，最后每个细胞中可积聚 2～3 千个质粒。

简答题问题：抗性基因（Resistant gene）是目前使用的最广泛的选择标记，常用的抗生素抗性有哪几种？并举两例说明其原理？

参考答案：氨苄青霉素抗性基因（ampr）、四环素抗性基因（tetr）、氯霉素抗性基因（Cmr）、卡那霉素和新霉素抗性基因（kanr , neor）以及琥珀突变抑制基因 supF 。青霉素抑制细胞壁肽聚糖的合成，与有关的酶结合，抑制转肽反应并抑制其活性。 Ampr 编码一个酶，可分泌进入细胞的周质区，并催化β-内酰胺环水解，从而解除氨苄青霉素的毒性。四环素与核糖体 30S 亚基的一种蛋白质结合，从而抑制核糖体的转位。 Tetr 编码一个由 399 个氨基酸组成的膜结合蛋白，可阻止四环素进入细胞。

简答题问题：何为α-complement ？如何利用α-complement 来筛选插入了外源 DNA 的重组质粒？

参考答案：α-complementation 指 lacZ 基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的β-半乳糖苷酶阴性的突变体之间实现互

补。α-complementation 是基于在两个不同的缺陷β－半乳糖苷酶之间可实现功能互补而建立的。实现α-complement 主要有两部分组成：LacZ△M15，放在 F 质粒或染色体上，随宿主传代； LacZ' ，放在载体上，作为筛选标记，当在 LacZ' 中插入一个片断后，将不可避免地导致产生无α-complement 能力的β－半乳糖苷酶片断。在诱导物 IPTG 和底物 X-gal（同时可作为生色剂）的作用下，含重组质粒的菌落不能产生有活性的β－半乳糖苷酶，不能分解 X-gal ，呈现白色，而含非重组质粒的菌落则呈现兰色。以此达到筛选的目的。

简答题问题：为什么野生型的λ噬菌体 DNA 不宜作为基因工程载体？

参考答案：①野生型噬菌体 DNA 没有容载能力，因为噬菌体的头部对 DNA 包装的量是有限制的，不能大于基因组的105％，所以要将λ噬菌体改造成载体，必须削减分子量；②野生型的λ噬菌体对于一些常用的酶都有多个识别和切割位点，不便于克隆；③没有可供选择的标记；④野生型的λ噬菌体具有感染性，因此不够安全。

参考答案： Lytic growth 是λ噬菌体在宿主中大量复制并组装成子代λ噬菌体颗粒，导致宿主细胞裂解。 Lysogenic state 为λ噬菌体基因组 DNA 通过位点专一性重组整合到宿主染色体 DNA 中随宿主的繁殖传到子代细胞。调节过程：由感染复数和细胞的营养状态决定的，感染复数越高，营养状态越差，则溶源化的频率就越高。溶源现象的生化媒介可能是 3'--5' cAMP，它在细胞内的浓度会随营养条件的变化而改变，当细胞在富营养培养基中生长时，cAMP 的浓度较低，有利于裂解生长；在缺乏 cAMP 的突变细胞中，更有利于裂解生长另外一个重要的调节因素是噬菌体的CⅡ蛋白，它是噬菌体基因转录的激活子，抑制裂解功能基因的表达，催化噬菌体 DNA 整合到细菌的染色体中去。高浓度的CⅡ蛋白促进溶源化，而低浓度的CⅡ蛋白促进裂解生长。当CⅡ蛋白浓度足够时，激活CⅠ蛋白和基因 int 的表达，导致噬菌体 DNA 与染色体整合，朝着溶源态生长。

您的答案：

简答题问题：用λ噬菌体载体进行 gene cloning 时，主要利用λ噬菌体的生物学特性作选择标记，其中有 cI 失活和 Spi 筛选，请问什么叫cI筛选？什么叫 Spi 筛选？

参考答案：CⅠ蛋白控制溶源态的形成，裂解生长受到抑制，当外源基因片段插入cⅠ中，cⅠ蛋白失活，溶源态打破而进入裂解生长而筛选出重组克隆，叫做cⅠ筛选。野生型噬菌体在带有 P2 原噬菌体的溶源性 E.coli 中的生长会受到限制的表型，称作 Spi+ ，即对 P2 噬菌体的干扰敏感

（ sensitive to P2 interference ）。如果λ噬菌体缺少两个参与重组的基因 red 和 gam ，同时带有 chi 位点，并且宿主菌为 rec+ ，则可以在 P2 溶源性 E.coli 中生长良好，噬菌体的这种表型称作 Spi- 。因此，通过λ噬菌体载体 DNA 上的 red 和/或 gam 基因的缺失或替换，可在 P2 噬菌体溶源性细菌中鉴别重组和非重组λ噬菌体。

简答题问题：简述λ噬菌体载体的克隆原理及一般步骤？

参考答案：λ噬菌体载体属于克隆载体，主要用于克隆 DNA 片断。工作原理：λ噬菌体载体克隆外源 DNA 片断的原理与质粒载体的工作原理是类似的，只是在形式上有许多差别。载体和外源 DNA 片断经过酶切后，外源 DNA 片断插入到载体的适当位置，或置换载体的填充片段。这种连接后的重组 DNA 保留增殖性能，但由于分子量太大，不能象重组质粒 DNA 那样可通过转化方法进入大肠杆菌。通过提取λ噬菌体的蛋白质外壳，可在体外将重组噬菌体 DNA 进行包装，形成噬菌体颗粒。这样的噬菌体颗粒保留对大肠杆菌的感染能力，可将被包装的重组噬菌体 DNA 注射到宿主菌中。通过裂解生长，可增殖重组噬菌体。克隆步骤：①通过裂解过程增殖载体；②载体与外源 DNA 的酶切；③外源 DNA 与载体的连接；④重组噬菌体的体外包装；⑤包装噬菌体颗粒的感染；⑥筛选。

简答题问题： Cosmid 的工作原理是什么？

参考答案：粘粒载体的主要原理类似λ噬菌体载体。在外源片断与载体连接时，粘粒载体相当于λ噬菌体载体的左右臂， cos 位点通过粘端退火后，再与外源片断相间连接成多联体。当多联体与λ噬菌体包装蛋白混合时，λ噬菌体 A 基因蛋白的 terminase 功能将切割两个 cos 位点，并将两个同方向 cos 位点之间的片断包装到λ噬菌体颗粒中去。这些噬菌体颗粒感染大肠杆菌时，线状的重组 DNA 就象λ噬菌体 DNA 一样，被注入细胞并通过 cos 位点环化。这样形成的环化分子含有完整的粘粒载体，可象质粒一样复制并使其宿主获得抗药性。因而，带有重组粘粒的细菌可用含适当抗生素的培养基挑选。通过这种方式，就将外源 DNA 片断通过粘粒载体克隆到大肠杆菌中去了。

简答题问题：构建粘粒文库时会遇到哪些问题？你如何解决？

参考答案：利用粘粒构建基因文库时会遇到许多困难：①载体分子会自身连接，从而导致效率大大降低甚至失败。通过对载体作去磷酸化处理或使用双 cos 位点载体或对载体的酶切产物进行部分补平可解决这一问题；②多个外源片断插入载体中，会误将两个本来不相连的 DNA 片断认为是基因组中的连续 DNA 片断。通过收集 35～45kb 的部分酶切外源 DNA 片断与载体连接、使用双 cos 位点载体或对载体和外源片断的酶切产物进行部分补平，可解决这一问题。③提取的基因组 DNA 长度小于 200kb ，将使部分酶切后形成的 35～45kb 片断只有少部分在其两端带有酶切位点，致使目标 DNA 的可用性大大降低。在对外源 DNA 片断作部分酶切之前，应检查其大小，如果小于 200kb 则不能用于构建文库；④提取的总 DNA 纯度不高，可能由于出现酶解抑制物而得不到理想的酶切产物。因此，在制备总 DNA 时，应小心避免混入的有机相和水相交界处的物质。如果问题依旧出现，可用氯化铯梯度离心方法纯化 DNA 或重新制备总 DNA ；⑤在构建的文库中常常出现不含外源片断的克隆。这种“空”克隆的比例依载体的不同和操作的小心程度而不同一般而言，使用单 cos 位点的载体，约有 5％的克隆是空的。使用双 cos 位点的载体，产生空克隆的比例要低得多；⑥不同重组质粒拷贝数可以有很大差异，导致收获量相差悬殊。每当对文库作一次噬菌体的扩增，这些差异将会被进一步放大；⑦尽管文库似乎全面，但也许不能获得目的克隆。限制酶位点的非随机分布、包装蛋白污染限制酶、重组引起的序列缺失和扩增时目的克隆可能被淘汰等都是产生这种现象的原因。

简答题问题：丝状噬菌体克隆中经常会遇到哪两类问题？可用何种方法来解决？

参考答案：①外源 DNA 区段的部分缺失，克隆于丝状噬菌体基因间隔区的外源基因趋于不稳定。外源基因越大，缺失突变率越高，尽量避免带有让感染细菌在液体培养中连续生长，可以使这种现象减少到最低限度（尽管不能完全消除）。正确的做法是，用保存于－70℃的重组噬菌体原种转染适当的宿主菌，铺成平板，并从分隔良好的单个噬斑的中央挑取细菌进行小规模培养；②外源 DNA 总是以单方向插入，实验中经常会遇到，尽管某一载体可能在两个方向上接受 DNA ，但特定外源 DNA 区段却更容易仅以其中一个方向插入该载体，这种情况屡见不鲜。之所以出现这种现象，是因为外源 DNA 另一条链上的序列不同程度地干扰了载体基因间隔区的功能。在多克隆位点区内遴选不同的位点插入外源 DNA ，或者选用可进行定向克隆的限制酶组合，有时可避免上述问题。

简答题问题：噬菌粒（Phagemid）具有那些特征？许多 phagemid 都有一个主要的缺点，即在辅助噬菌体感染后，有时候单链 DNA 的产量较低且重复性一般较差，试分析其原因？

参考答案：①双链 DNA 既稳定，又高产，具有常规质粒的特征；②免却了将外源 DNA 片断从质粒亚克隆于噬菌体载体；③由于载体足够小，故可得到长达 10kb 的外源 DNA 区段的单链。原因：①噬菌体携带的基因间隔区的确切序列，携带完整基因间隔区的质粒可由于干扰辅助病毒 DNA 复制而抑制子代噬菌体颗粒的产生；

②基因间隔区插入质粒的具体位置，基因间隔区插入 pBR322 HindⅢ位点所构成的噬菌粒，会严重干扰野生型噬菌体的生长，而将基因间隔区插入AhaⅢ位点则不然；③辅助噬菌体的性质，野生型丝状噬菌体及其抗干扰突变株都被用作辅助噬菌体。辅助噬菌体基因间隔区插入了 lacZ 序列，因而基因Ⅱ产物对它的识别不那么有效；④克隆于噬菌粒的外源 DNA 的大小与性质，因外源 DNA 片断的大小而异，单链 DNA 的产量可以在 5～10 倍之间有所差异（一般来说，外

源 DNA 越大，产量越低）。另外，由于一些尚不清楚的原因，大小相同的外源 DNA ，其单链 DNA 的产量也参差不齐。

简答题问题： YAC 载体具有什么样的功能性元件？为什么它在克隆大片段时具有很大的优越性？

参考答案： YAC 带有天然染色体所有的功能元件，包括一个着丝粒，一个复制起点，两个端粒。 YAC 能够容纳长达几百 kb 的外源 DNA ，这是质粒和粘粒办不到的。大片断的插入更有可能包含完整的基因，在染色体步移中每次允许更大的步移距离，同时减少完整基因组文库所需的克隆数目。

思考题问题：作为一个最基本的载体，它必须具备哪些功能元件？

思考题问题：何为α-互补？在载体构建中有何作用？

思考题问题：请简要描述?噬菌体溶原状态和裂解循环的基因调控模式，及其在构建载体中的作用。

思考题问题：简述M13K07辅助噬菌体的遗传学特性和生物学功能，及其在制备单链DNA中的作用。

第四章

名词解释问题： TAE buffer

参考答案：醋酸缓冲液。由 Tris 碱、醋酸和 EDTA 等成分组成的缓冲体系，用于琼脂糖凝胶电泳。

名词解释问题： SDS-PAGE

参考答案：十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳。用于检测蛋白质分子量的电泳方法，待分离蛋白质是变性的，泳动速率只与分子量相关，与本身所带电荷无关。

名词解释问题： Southern blot

参考答案： Southern 杂交。一种检测 DNA 分子的方法。将 DNA 片段从琼脂糖凝胶转移到滤膜，结合了 DNA 分子的滤膜先与特定的预杂交液进行预杂交，然后与标记的核酸探针和滤膜混合。如果滤膜上的 DNA 分子存在与探针同源的序列，那么探针将与该分子形成杂合双链，从而吸附在滤膜上。在经过一定的洗涤程序将游离的探针分子除去后，通过放射自显影或生化检测，就可判断滤膜上是否存在与探针同源的 DNA 分子及其分子量。

名词解释问题： Northern blot

参考答案： Northern 杂交。用于检测细胞或组织样品中是否存在与探针同源的 mRNA 分子的检测方法。过程与 Southern 杂交相似，只不过在 Blotting 过程中转移的是 RNA 而不是 DNA 。

您的答案：

名词解释问题： Western blot

参考答案： Western 杂交。用来检测细胞或组织样品中是否存在能被某抗体识别的蛋白质的方法。将蛋白质样品从 SDS-PAGE 凝胶通过电转移方式转移到滤膜，通过抗体以免疫反应形式检测滤膜上是否存在被抗体识别的蛋白质，并判断其分子量。所用的探针不是 DNA 或 RNA ，而是针对某一蛋白质制备的特异性抗体。名词解释问题： Colony hybridization

参考答案：菌落杂交。将细菌菌落影印到滤膜上，或将菌种点种在滤膜上然后再生长出可见的菌落，对滤膜上的菌体进行原位裂解使 DNA 释放出来，并使之固定在滤膜上。然后通过分子杂交，判断哪个或哪些菌落含有与探针同源的 DNA 。

名词解释问题： Dot hybridization

参考答案：斑点杂交。直接将 DNA 或 RNA 分子以斑点的形式固定在滤膜上，然后进行分子杂交。核酸分子的斑点面积小，在单位面积滤膜上处理的样品数量就多，当检测的灵敏度进一步提高后，就发展成 DNA 芯片。

名词解释问题： S1 酶作图

参考答案： S1 核酸酶作图是专门用来分析真核生物中原 mRNA 加工剪切成成熟 mRNA 的剪切位置的方法。首先克隆得到待分析 mRNA 的基因组 DNA 片段，标记后用作探针，通过与 mRNA 杂交形成杂合链，然后从 S1 核酸酶消化后条带的大小来判断内含子的位置。

名词解释问题： Primer extension

参考答案：引物延伸。主要用于 mRNA 的 5' 末端作图。首先在 mRNA 的预测的 5' 末端下游约 150bp 位置处，设计一段互补寡核苷酸引物。以 mRNA 作模板，用反转录酶延伸该引物，产生的 cDNA 与 mRNA 模板互补且其长度与引物 5' 末端至 mRNA 的 5' 末端之间的距离相等。测定该 cDNA 的长度就可推算

出 mRNA 的 5' 末端位置。

填空题问题：碱裂解法提取质粒 DNA 的原理是（）。

参考答案：在碱性条件下， DNA 变性，在高盐条件下，只有超螺旋构象的质粒 DNA 复性。

填空题问题：抽提含 pBR322 系列质粒的细菌前，需在培养基中加入一定浓度的氯霉素，此氯霉素的作用是（）。

参考答案：提高质粒拷贝数

填空题问题：从琼脂糖凝胶中回收 DNA 片段的方法有（）、（）、（）、（）、（）等

参考答案：低熔点 agarose 电泳；透析袋；电洗脱法；Glass Milk (bead)；Kit

填空题问题：在 RNA 的分离、纯化和检测过程中，需控制 RNA 酶的活性，常用的 RNA 酶抑制剂有（）、（）、（）。

参考答案：人胎盘 Rnase 抑制剂；氧铜核糖核苷复合物；硅藻土

填空题问题：在用SDS分离DNA时，要注意SDS的浓度，0.1%和1%SDS的效果是不同的，前者（），后者（）

参考答案：只将 RNA 分离出来；可将 DNA 和 RNA一起分离出来

填空题问题：预杂交的目的是（），通常需在预杂交液中加入（），其原因是（）。

参考答案：封闭背景；预杂交液；防止探针与膜结合

填空题问题：在 Southern hybridization 中， DNA 经琼脂糖凝胶电泳后，通常须经 NaOH 处理，其原因是（）。

参考答案：使 DNA 变性，形成单链

填空题问题： Northern hybridization 检测 RNA 时，需将 RNA 片段转移到尼龙膜上，常用的转移方法有（），（），（）。

参考答案：毛细管；电转移；真空

填空题问题：原位杂交的定义是（），根据杂交的对象可分为（）和（）。

参考答案：原位杂交就是将细菌菌落影印到滤膜上，或将菌种点种在滤膜上然后再生长出可见的菌落，对滤膜上的菌体进行原位裂解使 DNA 释放出来，并使之固定在滤膜上。然后通过分子杂交，判断哪个或哪些菌落含有与探针同源的 DNA；菌落杂交；空斑杂交

填空题问题： DNA 探针制备通常可分为均一标记和末端标记，均一标记可分为（）和切口平移标记，切口平移标记的原理是（）。

参考答案：随即引物标记；利用大肠杆菌 DNA 聚合酶Ⅰ 5'--3' 外切活性和 5'--3' 聚合活性。通过在待标记的 DNA 分子上产生切口，该酶引发 5'--3' 外切反应，在随后的 5'--3' DNA 聚合反应中若存在标记的脱氧三磷酸核苷酸（dNTP），新合成的核酸链就带有标记物。

填空题问题： SSC 是由 NaCl 和柠檬酸钠组成的试剂，其中 NaCl 的作用是（），而柠檬酸钠的作用是（）。

参考答案： DNA 溶解；作为螯合剂，抑制核酸酶的活性

填空题问题：在整个 Southern hybridization 过程中，一般需要防护有（）、（）以及（）。

参考答案：紫外照射；EB；放射性同位素

填空题问题：复性是指（），杂交是指（）。

参考答案：互补单链重新配对恢复成双链；同源单链重新配对恢复成双链。

填空题问题： DNA 或 RNA 在杂交前，需将其转移到膜上，常用的膜有（）和（）。

参考答案：硝酸纤维素滤膜；尼龙膜

填空题问题： RNA 的浓度和纯度可通过测试其 OD260 来判断， OD260 为 1 时相当于浓度为（）。

参考答案： 40μg/ml

选择题问题：关于碱裂解法分离质粒 DNA ，下面哪一种说法不正确（）

参考答案： D 质粒 DNA 分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性

点评：质粒 DNA 变性了，但由于分子小，复性很快，而染色体 DNA 分子大，复性慢，来不及复性，而与质粒分开

选择题问题：用碱法分离质粒 DNA 时，染色体 DNA 之所以可以被除去，是因为（）

参考答案： B 染色体变性后来不及复性

点评：碱法分离质粒 DNA 运用的核心原理就是质粒的超螺旋构象。

选择题问题： SDS 是分离 DNA 时常用的一种阴离子去污剂，下列对其作用描述不正确的是（）

参考答案： D 消除反应中的泡沫

点评：消除反应中的泡沫的是异戊醇。

选择题问题：用 SDS－酚抽提 DNA 时， SDS 浓度十分重要， 0.1% 和 1% 的 SDS 的作用分别为（）

参考答案： B 前者只能将 RNA 分离出来；后者能将 DNA 和 RNA 一起分离出来

点评：SDS 是一种表面活性剂。

选择题问题：从细胞或组织中分离 DNA 时常用蔗糖的作用（）

参考答案： C 保护 DNA ，防止断裂

点评：蔗糖增加溶液的粘滞性，减小机械剪切，保护 DNA ，防止断裂。

选择题问题：苯酚/氯仿/异戊醇中，异戊醇的作用是（）

参考答案： A 减少气泡，促进分相

点评：苯酚：蛋白变性剂；氯仿：溶解痕量苯酚；异戊醇：减少气泡，促进分相。

选择题问题：以下保存 DNA 的温度中，哪一种是最好的（）

参考答案： D －70℃

点评：了解 DNA 及其它一些生物大分子的特性。

选择题问题：在分离 DNA 过程造成 DNA 分子断裂的因素很多，下列说法中哪一项是不正确的（）

参考答案： C 保存液中未加一滴氯仿

点评：保存液中加一滴氯仿的作用是防止真菌污染。

选择题问题：在分离 mRNA 的溶液中， Mg2＋离子的浓度不能低于 0.5mmol/L ，否则（）

参考答案： B 核糖体解体

点评：理解 mRNA 的分离原理。

选择题问题：关于 cDNA 的最正确的说法是（）

参考答案： A 以 mRNA 为模板合成的双链 DNA

点评：正确理解 cDNA 的概念。

选择题问题：一个典型的哺乳动物细胞中，大部分的 RNA 为（）

参考答案： C rRNA

点评：一个典型的哺乳动物细胞约含 10－5μg RNA ，其中 80～85％为 rRNA ， 15～25％主要由各种类型的低分子量 RNA 组成（如 tRNA ，核内小分子 RNA 等）， 1～5％为 mRNA 。

选择题问题： Agarose-EB 电泳法分离纯化 cccDNA 的原理是（）

参考答案： B EB 不容易插入到 cccDNA 中，因而迁移速度快

点评：了解 cccDNA 的性质和 EB 的工作原理。

选择题问题：下列哪一项不是 Southern blotting 的步骤（）

参考答案： B DNA 与载体的连接

点评：Southern blotting 的步骤有：酶切、电泳、转膜、杂交、检测。

选择题问题： Southern blotting 的 DNA 探针（）杂交

参考答案： D 可与任何含有互补序列的 DNA 片段

点评：理解 Southern blotting 的工作原理。

选择题问题：以下关于 T4 多核苷酸激酶标记 5' 端制备探针的描述中（）是不正确的

参考答案： A 能标记单链 DNA

点评：T4 多核苷酸激酶的活性催化 ATP 的γ－磷酸基转移至 DNA 或 RNA 的 5' 末端。

选择题问题：以下（）方法才能说明外源基因进行了表达

参考答案： D Western blotting

点评：检测到 mRNA 只能说基因转录，检测到蛋白才能证明基因表达。 Western blotting 是通过抗原抗体反应检测目标蛋白的方法。

选择题问题：在切口平移方法标记 DNA 探针时只能使用（）

参考答案： B DNA 聚合酶Ⅰ

点评：熟悉这些酶的活性。切口平移方法标记 DNA 探针需要所使用的酶既有 5'--3' 的聚合活性，又有 5'--3' 的外切活性。

选择题问题： SSC 是由 NaCl 和柠檬酸钠组成的试剂，其作用分别是（）

参考答案： A 前者是使 DNA 溶解，后者作为螯合剂，抑制核酸酶的活性

点评：理解 Southern blotting 的工作原理。

选择题问题：斑点杂交的缺点在于（）

参考答案： D 假阳性较高

点评：斑点杂交指直接将 DNA 或 RNA 分子以斑点的形式固定在滤膜上，然后进行的分子杂交。杂交信号特别强，容易产生假阳性。

选择题问题：菌落杂交筛选重组体时，（）

参考答案： B 不需要外源基因的表达

点评：因为菌落杂交是一种 DNA 杂交，所以不需要外源基因的表达。

选择题问题：以下对杂交率的影响因素描述中，不正确的是（）

参考答案： C 重复性探针不可以增加杂交率

点评：理解 Southern blotting 的工作原理。

选择题问题： Southern blotting 与 Northern blotting 的区别在于（）

参考答案： A 印记的对象不同，前者是对 DNA ，后者是对 RNA

点评：Southern blotting 是针对 DNA 的检测手段。 Northern blotting 是针对 RNA 的检测手段， Western blotting 是针对蛋白质的检测手段。

选择题问题：切口平移是指在（）的作用下，使（）带上放射性标记

参考答案： B DNA 聚合酶Ⅰ， DNA

点评：掌握探针标记的方法。

选择题问题：用免疫化学法筛选重组体的原理是（）

参考答案： A 根据外源基因的表达

点评：免疫化学法筛选使用的是蛋白质的抗原抗体反应。

选择题问题：以下不属于核酸探针的是（）

参考答案： D 抗体

点评：抗体为蛋白质探针，用于 Western blotting 。

简答题问题：分析比较琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳的异同点？

参考答案：琼脂糖和聚丙烯酰胺可以制成各种形状、大小和孔隙度。琼脂糖凝胶电泳分离 DNA 片断大小范围较广，不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从 200bp 至近 50kb 的 DNA 片段。琼脂糖通常用水平装置在强度和方向恒定的电场下电泳。聚丙烯酰胺分离小片段 DNA （5-500bp）效果较好，其分辨力极高，甚至相

差 1bp 的 DNA 片段就能分开。聚丙烯酰胺凝胶电泳很快，可容纳相对大量的 DNA ，但制备和操作比琼脂糖凝胶困难。聚丙烯酰胺凝胶采用垂直装置进行电泳。目前，一般实验室多用琼脂糖水平平板凝胶电泳装置进行 DNA 电泳。

简答题问题：琼脂糖凝胶电泳中，简述影响 DNA 在凝胶中迁移速率的因素？

参考答案：① DNA 的分子大小，分子越大，则摩擦阻力越大，也越难于在凝胶孔隙中蠕行，因而迁移得越慢；②琼脂糖浓度，一个给定大小的线状 DNA 片断，其迁移速率在不同浓度的琼脂糖中各不相同；③ DNA 分子的构象；④电源电压，在低电压下，线状 DNA 片断的迁移速率与所加电压成正比。但是，随着分子量的增加，高分子量 DNA 片断的迁移率将以不同的幅度增长。因此，随着电压的增加，琼脂糖凝胶的有效分离范围缩小；⑤电场方向；⑥碱基组成和温度；⑦嵌入染料的存在；⑧电泳缓冲液的组成。

简答题问题： CsCl-EB 梯度平衡离心法分离质粒和染色体 DNA 的原理？

参考答案：① CsCl 是一种高分子量的重金属，在一定的高速离心下，可以自动形成 CsCl 的浓度梯度；②当进行离心时， CsCl 溶液中的大分子物质将根据它本身的密度停留在不同的 CsCl 密度区，形成一个致密带，而不会像 CsCl 一样形成浓度梯度。 CsCl 溶液中大分子到底在何处形成带，将取决于大分子本身的浮力密度。 DNA 的浮力密度大约为 1.7g/cm3 ，离心时将迁移到 CsCl 的密度为 1.7g/cm3 处。与此相反，蛋白质的浮力密度相当低，将漂浮在离心管的顶部。而 RNA 则沉淀于离心管的底部；③溴化乙碇存在的密度梯度离心中，能够将超螺旋的 DNA 与非超螺旋的 DNA 分离开来。嗅化乙碇可嵌入到 DNA 的双螺旋分子中，使 DNA 部分解旋，其结果可使线性 DNA 的浮力密度减少 0.125g/cm3 。由于超螺旋的 DNA 没有游离的末端，解螺旋的幅度有限，也就只能结合有限的 EB ，因此，超螺旋 DNA 的浮力密度只有少许下降，大约为 0.085g/cm3 。结果，超螺旋的 DNA 将与线性、开环的 DNA 在 EB－CsCl 密度梯度离心中由于密度不同而分开。

您的答案：

简答题问题：小量制备质粒 DNA ，用质粒中特定的酶切发现切割不动，试分析可能原因及克服方法？

参考答案：①加solutionⅠ前，没有用 STE 洗涤，导致细菌菌株的细胞壁成分抑制限制酶的活性；②没有用酚：氯仿抽提蛋白，导致 DNA 能耐受限制酶酶切；③限制酶对甲基化敏感，而所采用的宿主为非甲基化缺陷型，可采用对甲基化不敏感的同裂酶，或换用甲基化缺陷型的宿主菌株。

简答题问题：何谓 RNA 的斑点杂交和狭缝杂交？

参考答案：将 DNA 或 RNA 样品直接点在固体支持物上，然后与核酸探针进行分子杂交，这种方法称为斑点杂交。如果借用一种模具，将核酸样品加到模具的狭缝中，通过真空抽滤，印迹到滤膜上，然后进行杂交称为狭缝杂交。

简答题问题：以 pUC18 系列为载体，外源基因经酶切和载体连接后，将其导入处于感受态的宿主细胞中，筛选菌落，设计一个实验证明外源基因能在宿主细胞中转录表达。

参考答案：实验步骤：①将该基因克隆到一个表达载体上，利用表达载体本身的启动子，大量表达目标蛋白；②目标蛋白纯化，制备抗体；③将该抗体与宿主细胞进行杂交，若出现信号，则说明该基因在该宿主细胞中能转录表达，否则，不能转录表达。

简答题问题：简述随机引物标记的原理和步骤？

参考答案：随机引物是人工合成的长度为 6 个核苷酸的寡聚核苷酸片段群体，含有各种可能的排列顺序（46＝4096）；或是用 DNA 酶处理小牛胸腺 DNA 后获得的 6～12 个碱基的片段。将待标记的 DNA 片段同随机引物一起进行杂交，并以杂交体上的寡聚核苷酸为引物，在 Klenow 酶的作用下合成互补 DNA 链，当反应底物中有放射性底物 dNTP 时，新合成的 DNA 就带上了标记。

参考答案： S1 核酸酶作图指：预先判断 mRNA 的端点位置，设计一段覆盖该端点的寡核苷酸，并作末端放射性标记。然后将该标记的寡核苷酸与 mRNA 混合，退火，形成杂交体。在 S1 核酸酶作用下，呈单链状态的 DNA 和 RNA 被降解，保留 DNA-RNA 杂交体双链，最后通过凝胶电泳检测 DNA-RNA 杂交体中标记的 DNA 单链的分子量大小，从而推断 mRNA 的末端序列。

简答题问题：什么是 Western blot ？它和 Southern blot 有何区别？

参考答案： Western blot 是将蛋白质经电泳分离后从凝胶中转移到固相支持物上，然后利用特异性抗体进行检测。它与 Southern blot 的不同在于探针的性质不同，在 Western blot 中所使用的探针是抗体（蛋白质），而 Southern blot 的探针则是核酸。

思考题问题：在基因操作实践中有哪些检测核酸和蛋白质分子量的常规方法？

思考题问题：印迹分子杂交有哪些种类，并说明在什么情况下需要使用这些方法。

思考题问题：核酸分子的标记有哪些方法，各有何特点？

思考题问题： DNA转化有哪些方法，各有何优点？

第五章

名词解释问题： Polymerase chain reaction

参考答案：聚合酶链式反应。是通过模拟体内 DNA 复制的方式，在体外选择性地将 DNA 某个特殊区域扩增出来的技术。包括变性、复性和延伸三个步骤。

名词解释问题： Primer

参考答案：引物。是 DNA 复制的先锋，就象结晶过程中的晶核，引导 DNA 的合成。

名词解释问题： Template

参考答案：模板。DNA 复制是通过拷贝的方式将 DNA 重新制造一份的过程，待拷贝的 DNA 称为模板，可以是双链 DNA 也可是单链 DNA 。

名词解释问题： Plateau effect

参考答案：平台效应。 PCR 扩增过程后期会出现产物的积累按减弱的指数速率增长的现象。

名词解释问题： Inverse PCR

参考答案：反向 PCR 。主要用于解决扩增与已知序列相邻的未知 DNA 片段。首先用已知片段内部没有的限制性内切酶切割模板 DNA ，再将酶切后的 DNA 片段连接成环状分子，其中至少有一个环状分子含有完整的已知片段。根据已知片段两端的序列设计引物，可将邻近的 DNA 片段扩增出来。

名词解释问题： Splicing by overlap extension

参考答案：重叠延伸剪接术。PCR 介导的，用于将两个 DNA 片段在所期望的位点进行连接的方法。

名词解释问题： Random amplified polymorphic DNA

参考答案：随机扩增多态性。用长度为 10 个或 11 个碱基的单一固定序列引物扩增出随机大小的 DNA 片段，产生 DNA 片段的多态性，称为随机扩增多态性。名词解释问题： Amplified fragment length polymorphism

参考答案：扩增片段长度多态性。是针对基因组 DNA 的限制性酶切片段进行选择性 PCR 扩增的分析方法。将基因组 DNA 以两种限制性内切酶完全切割，之后再将合成的并与这两个限制酶产生的末端相对应的接头与酶切 DNA 片段的两端连接。然后以含有接头序列和酶切位点序列的引物，对连接产物作 PCR 扩增。最后用聚丙烯胺凝胶电泳进行 PCR 产物分离，从而产生 DNA 多态性。

名词解释问题： Reverse transcriptase PCR

参考答案：反转录 PCR 。即以反转录的 cDNA 作模板所进行的 PCR 反应，可用于测定基因表达的强度，还可用于鉴定已转录序列是否发生突变及呈现多态性，克隆 mRNA 的 5' 和 3' 末端序列，从非常少量的 mRNA 样品构建大容量的 cDNA 文库。

名词解释问题： Real time PCR

参考答案：实时 PCR 。通过特定设计的 PCR 仪器来实时检测 PCR 扩增过程每一轮循环产物的累积数量，推算模板的起始浓度，这种工作方式就称为实时 PCR 。填空题问题： PCR 是（）的简称。 PCR 反应体系的基本要素有（），（），（），（）等。

参考答案： polymerase chain reaction；模板；引物；dNTP；DNA 聚合酶

填空题问题： PCR 反应过程分为三个步骤，即（），（）和（）。

参考答案：变性；复性；延伸

填空题问题：在 PCR 反应体系中， Taq polymerase 的合成速率取决于（），（），dNTP 的浓度，（），（）等。

参考答案：温度；Mg2+ 浓度；去污剂；模板的二级结构

填空题问题： PCR 反应体系中往往要加入适量的矿物油，其作用是（）。

参考答案：防止反应液挥发

填空题问题： PCR反应过程的最适温度仅与（）有关，其定义是指（）。

参考答案：模板Tm值；使DNA双链离解一半时温度称为解链温度（Tm）

参考答案： Vent；Pwo；Pfu；Tth

填空题问题：一般常规的 PCR 仅能扩增（）kb 以下的 DNA 片段。

参考答案： 1kb

填空题问题： PCR 的标准缓冲液含（）mmol/L KCl，（）mmol/L Tirs.HCl，（）mmol/L MgCl2。

参考答案： 1.5；10～50；1.5

填空题问题： A/T cloning 是利用（）。

参考答案： Taq 酶扩增的产物一般要在 3' 末端加一个核苷酸且通常为 A 的性质

您的答案：

填空题问题：随机引物（Random primer）是指（）

参考答案：即随机 DNA 六聚体，该六聚体能够结合在单链 DNA 上，并在合适的酶作用下，作为互补链合成的引物。填空题问题： PCR 定点诱变可分为三类，包括（）、（）和（）。

参考答案：同源重组法；DpnⅠ法；重叠延伸法

填空题问题：通用引物（universal primer）是指（）。

参考答案：根据载体多克隆两端序列设计的一段引物序列

填空题问题： Inverse PCR 是指（）。

参考答案：应用于扩增和克隆与已知 DNA 序列某一个末端相邻的侧翼的未知 DNA 序列的一项 PCR 技术。

填空题问题： PCR 介导的诱变包括（）和 PCR 定点诱变。

参考答案： PCR 随机突变

填空题问题：在简并引物的设计中，常常要用到 dI（次黄嘌呤），其原因是（）。

参考答案：次黄嘌呤可以和任何碱基配对

填空题问题：热起始是一种在 PCR 反应中优化目标扩增产物的方法，它可抑制（）扩增。

参考答案：非特异性

选择题问题：聚合酶链反应可表示为（）

参考答案： D PCR

点评：聚合酶链反应，英文全称为 Polymerase Chain Reaction 缩写为 PCR 。

选择题问题：催化聚合酶链反应的酶是（）

参考答案： D Taq DNA 聚合酶

点评：Taq DNA 聚合酶耐高温。

选择题问题：以下各项中不是 PCR 反应所必须的是（）

参考答案： D 甘油

点评：甘油可以增加引物与 DNA 链的结合，但不是必需的。

选择题问题：关于 PCR 技术的叙述，下列哪项是错误的？（）。

参考答案： B 利用 PCR 技术可完全无误地扩增基因

点评：PCR 反应可能导致错配。

选择题问题：有关 PCR 的描述下列哪项不正确：（）

参考答案： C 扩增的对象是氨基酸序列

点评：理解 PCR 反应的工作原理。

选择题问题：以下关于简并引物的描述中，正确的是（）

参考答案： B 简并引物是根据已知蛋白质的氨基酸序列设计的引物群

点评：简并指三联体密码的第三位碱基具有一定的摆动性。

选择题问题：以下对 PCR 出现平台效应原因的描述中不正确的是（）

参考答案： D 退火温度过高

点评：平台效应是 PCR 反应后期，产物的积累按减弱的指数速率增长。

选择题问题： PCR 扩增有时会出现弥散的条带，以下原因阐述不正确的是（）

参考答案： B 退火温度过高

基因工程考试试题.doc

基因工程 一名词解释 DNA，1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外 来 从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护 自身的 DNA不被讲解。限制酶和甲基转移酶组成限制与修饰系统。 2、各种限制与修饰系统的比较 Ⅱ型Ⅰ型Ⅲ型 识别位点4~6bp，大多为回文序列二分非对称5~7bp 非对称 切割位点在识别位点中或靠近识别位点无特异性，至少在识别位点外100bp 识别位点下游 24~26bp 简答 1. 何谓 Star activity？简述Star activity的影响因素及克服方法？ 答：在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特征称为星星活性。 pH 引起星星活性的的因素：①高甘油浓度（>5%）；②酶过量（ >100U/μl ）；③低离子强度（ <25mmol/L）；④高(> ；⑤有机溶剂如DMSO （二甲基亚砜）、乙醇、乙二醇、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺等；⑥用其它二价阳离子 星星活性的抑制措施：①减少酶的用量，避免过量酶切，减少甘油浓度；②保证反应体系中无有机溶剂或乙醇；③提高离子强度到100 ～ 150mM（在不抑制酶活性的前提下）；④降低反应pH至；⑤使用Mg2+作为二价阳离子。 2. 试回答影响限制性内切核酸酶切割效率的因素？（影响酶活性的因素？） 答：外因：反应条件、底物纯度（是否有杂质、是否有盐离子和苯酚的污染）、何时加酶、操作是否恰当，反应体系的选择、反应时间的长短 内因：星星活性、底物甲基化、底物的构象 3、 DNA末端长度对酶切割的影响 答：限制酶切割 DNA 时，对识别序列两端的非识别序列有长度要求，也就是说在识别序列两端必须要有一定数量的 核苷酸，否则限制酶将难以发挥切割活性。在设计PCR引物时，如果要在末端引入一个酶切位点，为保证能够顺利切 割扩增的 PCR产物，应在设计的引物末端加上能够满足要求的碱基数目。一般需加 3 ～4 个碱基对。 4、何为载体？一个理想的载体应具备那些特点？ 答：将外源 DNA 或目的基因携带入宿主细胞的工具称为载体。载体应具备：①在宿主细胞内必须能够自主复制（具 备复制原点）；②必须具备合适的酶切位点，供外源DNA 片段插入，同时不影响其复制；③有一定的选择标记，用于 筛选；④其它：有一定的拷贝数，便于制备。 5 抗性基因（ Resistant gene）是目前使用的最广泛的选择标记，常用的抗生素抗性有哪几种？并举两例说明其原理？ 答：氨苄青霉素抗性基因（ ampr）、四环素抗性基因（tetr ）、氯霉素抗性基因（ Cmr）、卡那霉素和新霉素抗性基因（ kanr , neor ）以及琥珀突变抑制基因supF 。 ⑴青霉素抑制细胞壁肽聚糖的合成，与有关的酶结合，抑制转肽反应并抑制其活性。氨苄青霉素抗性Ampr 编码一个酶，可分泌进入细胞的周质区，并催化β - 内酰胺环水解，从而解除氨苄青霉素的毒性。 ⑵四环素与核糖体 30S 亚基的一种蛋白质结合，从而抑制核糖体的转位。 Tetr 编码一个由 399 个氨基酸组成的膜 结合蛋白，可阻止四环素进入细胞。 6. 何为α - 互补？如何利用α - 互补来筛选插入了外源DNA 的重组质粒？ 答：α - 互补指 lacZ 基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的β - 半乳糖苷酶阴性的突变体之间实现互补。α - 互补是基于在两个不同的缺陷β－半乳糖苷酶之间可实现功能互补而建立的。实现α- 互补主要有两部分组成：LacZ △ M15 ，放在 F 质粒或染色体上，随宿主传代；LacZ' ，放在载体上，作为筛选标记，当在 LacZ' 中插入一个片断后，将不可避免地导致产生无α- 互补能力的β－半乳糖苷酶片断。在诱导物IPTG 和底物 X-gal （同时可作为生色剂）的作用下，含重组质粒的菌落不能产生有活性的β－半乳糖苷酶，不能分解 X-gal ，呈现白色，而含非重组质粒的菌落则呈现兰色。以此达到筛选的目的。 7、试简述λ噬菌体的裂解生长状态Lytic growth 和溶原状态 Lysogenic state 两种循环的分化及其调节过程？ 答：裂解生长状态是λ噬菌体在宿主中大量复制并组装成子代λ噬菌体颗粒，导致宿主细胞裂 解。溶原状态为λ噬菌体基因组 DNA 通过位点专一性重组整合到宿主染色体DNA 中随宿主的繁殖传到子代细胞。调节过程：由感染复数

基因工程习题及答案

第二章习题 一、单选题 1.在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指（ B ） A．I类限制酶 B. II类限制酶 C. III类限制酶 D.核酸内切酶 E. RNAase 2.下列关于同裂酶的叙述错误的是( B ) A. 是从不同菌种分离到的不同的酶,也称异源同工酶。 B. 它们的识别序列完全相同。 C. 它们的切割方式可以相同，也可以不同。 D. 有些同裂酶识别的完整序列不完全一样，但切割位点间的序列一样。 E. 两种同裂酶的切割产物连接后，可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。 3. 多数限制酶消化DNA的最佳温度是（ A ） A. 37℃ B.30℃ C.25℃ D.16℃ E.33℃ 4. 下列关于限制酶的叙述错误的是( B ) A. I类限制酶反应需要 Mg2+、ATP和S-腺苷蛋氨酸。 B. II类限制酶反应需要Mg2+、ATP。 C. III类限制酶反应需要Mg2+、ATP，S-腺苷蛋氨酸能促进反应，但不是绝对需要。 D. I、III类限制酶对DNA有切割和甲基化活性，II类限制酶对DNA只有切割活性而无甲基化活性。 E. II类限制酶要求严格的识别序列和切割点，具有高度精确性。 5. 如果一个限制酶识别长度为6bp ,则其在DNA上识别6bp的切割概率为( D ) A. 1/44 B. 1/66 C. 1/64 D.1/46 E. 1/106 6. 多数II类限制酶反应最适PH是 ( C ) A. PH:2-4 B. PH:4-6 C. PH:6-8 D. PH:8-10 E. PH:4-10 7. 下列关于限制酶反应的说法错误的是 ( D ) A. 限制酶识别序列内或其邻近的胞嘧啶、腺嘌呤或尿嘧啶被甲基化后，可能会阻碍限制酶的酶解活性。 B. 许多限制酶对线性DNA和超螺旋DNA底物的切割活性是有明显差异的。 C. 有些限制酶对同一DNA底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。 D. 限制酶反应缓冲系统一般不用磷酸缓冲液，是由于磷酸根会抑制限制酶反应。 E. BSA对许多限制酶的切割活性都有促进作用，所以酶切反应中常加入一定量的BSA。 8. II类限制酶反应中必须的阳离子是（ C ）

基因工程选择题试题库,很全

2. 第一个作为重组DNA载体的质粒是() (a) pBR322 (b)ColEI (c)pSCI01 (d)pUCI8 3. 关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有()不太恰当 (a) 由作用于同一DNA序列的两种酶构成 (b) 这一系统中的核酸酶都是U类限制性内切核酸酶 (c) 这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰 (d) 不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统 4. H型限制性内切核酸酶：() (a) 有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列 (b) 仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 (c) 限制性识别非甲基化的核苷酸序列(d)有外切核酸酶和甲基化酶活性(e) 仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 5?下面有关限制酶的叙述哪些是正确的?() (a) 限制酶是外切酶而不是内切酶 (b) 限制酶在特异序列(识别位点)对DNA进行切割 (c) 同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同的 (d) 一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA，产生黏末端 (e) 一些限制酶在识别位点内相同的位臵切割双链DNA，产生平末端

6 .第一个被分离的U类酶是：() (a) EcoK (b)Hind 川(c)Hind U(d)EcoB 7?在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制那一项最好?() (a) 反应时间(b)酶量(c)反应体积(d)酶反应的温度 8. 在下列试剂中，那一种可以螯合Ca2+离子?() (a) EDTA (b)柠檬酸钠(c)SDS (d)EGTA 9. 在下列工具酶中，那一种可以被EGTA抑制活性?() (a) S1单链核酸酶(b)末端转移酶(c)碱性磷酸酶(d)Bal 31核酸酶 10 .限制性内切核酸酶可以特异性地识别：() (a)双链DNA的特定碱基对(b)双链DNA的特定碱基序列 (c)特定的三联密码(d)以上都正确 11.下列关于限制性内切核酸酶的表示方法中，正确一项的是()。 (a) Sau3A I (b)E . coRI (c)hind III (d)Sau 3A1 12 .限制性内切核酸酶的星号活性是指：() (a)在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性。(b)活性大大提高 (c)切割速度大大加快(d)识别序列与原来的完全不同 13 .下面哪一种不是产生星号活性的主要原因?() (a)甘油含量过高(b)反应体系中含有有机溶剂 (c)含有非Mg2+的二价阳离子(d)酶切反应时酶浓度过低 14. 关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有()不太恰当

基因工程测试题

基因工程测试题 一、选择题： 1.人的糖蛋白必须经内质网和高尔基体进一步加工合成。通过转基因技术可以使人的糖蛋白基因得以表达的受体细胞是( ) A.大肠杆菌 B.酵母菌 C.肺炎双球菌 D.乳酸菌 2.下列有关基因工程的叙述，正确的是( ) A．DNA连接酶将碱基对之间的氢键连接起来 B．目的基因导入受体细胞后，受体细胞即发生基因突变 C．限制性核酸内切酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的几率就越大 D．常用的载体有大肠杆菌、噬菌体和动植物病毒等 3.我国科学家运用基因工程技术，将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因导入棉花细胞并成功表达，培育出了抗虫棉。下列叙述不正确的是( ) A.抗虫基因的提取和运输需要专用的工具酶和载体 B.重组DNA分子中替换一个碱基对，不一定导致毒蛋白的毒性丧失 C.抗虫棉的抗虫基因可通过花粉传递到近缘作物，从而造成基因污染 D.转基因抗虫棉是否具有抗虫特性是通过检测棉花对抗生素抗性来确定的 4.如图是获得抗虫棉的技术流程示意图。卡那霉素抗性基因(kan r)常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养

基上生长。下列叙述正确的是( ) A.构建重组质粒过程中需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶 B.愈伤组织的分化产生了不同基因型的植株 C.卡那霉素抗性基因(kan r)中有该过程所利用的限制性核酸内切酶 的识别位点 D.抗虫棉有性生殖后代能保持抗虫性状的稳定遗传 5.上海医学研究所成功培育出第一头携带人白蛋白基因的转基因牛。他们还研究出一种可大大提高基因表达水平的新方法，使转基因动物乳汁中的药物蛋白含量提高30多倍，以下与此有关的叙述中正确的是( ) A.“转基因动物”是指体细胞中出现了新基因的动物 B.“提高基因表达水平”是指设法使牛的乳腺细胞中含有更多的人白蛋白基因 C.只有从转基因牛乳汁中才能获取人白蛋白，是因为人白蛋白基因只在牛乳腺细胞中含有 D.转基因牛的肌肉细胞中也有人白蛋白基因，但不发生转录、翻译，不能合成人白蛋白 6.下列关于蛋白质工程和基因工程的比较，不合理的是( )

【精品】2021年高中高三生物二轮复习专题练习含答案解析4：基因工程

2021年高三生物二轮复习专题练习4含答案解 析：基因工程 一、选择题 1.下列关于基因工程应用的叙述，正确的是( ) A．基因治疗就是把缺陷基因诱变成正常基因 B．基因诊断的基本原理是DNA分子杂交 C．一种基因探针能检测水体中的各种病毒 D．利用基因工程生产乙肝疫苗时，目的基因存在于人体B淋巴细胞的DNA中 2.1970年，特明和巴尔德摩证实了RNA病毒能依赖RNA 合成DNA的过程，并发现了催化此过程的酶。下面为形成cDNA 的过程和PCR扩增过程示意图。请根据图解分析，下列说法不．正确的是( ) A．催化①过程的酶是逆转录酶 B．从图示可以看出要将碱基对之间的氢键断开可以用核酸酶H和高温处理 C．从图中信息分析可知，②⑤过程为DNA复制，催化⑤过程的酶能耐高温 D．如果RNA单链中有碱基100个，其中A占25%，U占15%，则通过该过程合成的一个双链DNA片段中有胞嘧啶30

个 3.在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是( ) A．用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸 B．用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体 C．将重组DNA分子导入烟草原生质体 D．用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞 4.如图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”的示意图。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因。判断下列说法正确的是( ) A．将重组质粒导入细菌B常用的方法是显微注射法 B．将完成导入过程后的细菌涂布在含有氨苄青霉素的培养基上，能生长的只是导入了重组质粒的细菌 C．将完成导入过程后的细菌涂布在含有四环素的培养基上，能生长的就是导入了质粒A的细菌 D．目的基因成功表达的标志是受体细胞能在含有氨苄青霉素的培养基上生长 5.在基因工程操作中限制性核酸内切酶是不可缺少的工具酶。下列有关限制性核酸内切酶的叙述错误的是( )

基因工程测试题经典

xxxXXXXX 学校XXXX 年学年度第二学期第二次月考 XXX 年级xx 班级 姓名：_______________班级：_______________考号：_______________ 一、选择题 （每空？ 分，共？ 分） 1、下列有关基因工程和蛋白质工程的叙述，正确的是 A ．蛋白质工程的流程和天然蛋白质合成的过程是相同的 B ．基因工程合成的是天然存在的蛋白质，蛋白质工程合成的可以不是天然存在的蛋白质 C ．基因工程是分子水平操作，蛋白质工程是细胞水平（或性状水平）操作 D ．基因工程完全不同于蛋白质工程 2、PCR 是一种体外迅速扩增DNA 片段的技术，下列有关PCR 过程的叙述，不正确的是 A ．变性过程中破坏的是DNA 分子内碱基对之间的氢键 B ．复性过程中引物与DNA 模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成 C ．延伸过程中需要DNA 聚合酶、ATP 、四种核糖核苷酸 D ．PCR 与细胞内 DNA 复制相比所需要酶的最适温度较高 3、35．采用基因工程技术将人凝血因子基因导入山羊受精卵，培育出了转基因羊。但是人凝血因子只存在于该转基因羊的乳汁中。下列有关叙述，正确的是（ ） A ．人体细胞中凝血因子基因的碱基对数目，小于凝血因子氨基酸数目的3倍 B ．可用显微注射技术将含有人凝血因子基因的重组DNA 分子导入羊的受精卵 C ．在该转基因羊中，人凝血因子基因只存在于乳腺细胞，而不存在于其他体细胞中 D ．人凝血因子基因开始转录后，DNA 连接酶以DNA 分子的一条链为模板合成mRNA

4、ch1L基因是蓝细菌拟核DNA上控制叶绿素合成的基因．为研究该基因对叶绿素合成的控制，需要构建该种生物缺失ch1L基因的变异株细胞．技术路线如图所示，对此描述错误的是（） 5、下图表示基因工程中目的基因的获取示意图，不正确的是： A、同种生物的基因组文库大于cDNA文库 B、③表示PCR技术，用来扩增目的基因 C、从基因文库中要得到所需目的基因，可根据目的基因的有关信息来获取 D、只要基因的核苷酸序列已知，就只能通过人工合成的方法获取 6、图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序 列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为：C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。下列分析中正确的是：

基因工程练习题(附答案)

基因工程练习题 1、在基因工程中使用的限制性核酸内切酶，其作用是( ) A、将目的基因从染色体上切割出来 B、识别并切割特定的DNA核苷酸序列 C、将目的基因与运载体结合 D、将目的基因导入受体细胞 2、基因工程中常用细菌等原核生物作受体细胞的原因不包括( ) A、繁殖速度快 B、遗传物质相对较少 C、多为单细胞，操作简便 D、DNA为单链，变异少 3、基因工程是DNA分子水平的操作，下列有关基因工程的叙述中，错误的是( ) A、限制酶只用于切割获取目的基因 B、载体与目的基因可以用同一种限制酶处理 C、基因工程所用的工具酶是限制酶，DNA连接酶 D、带有目的基因的载体是否进入受体细胞需检测 4、运用现代生物技术，将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因整合到棉花细胞中，为检测实验是否成功，最方便的方法是检测棉花植株是否有( ) A、抗虫基因 B、抗虫基因产物 C、新的细胞核 D、相应性状 5、转基因动物转基因时的受体细胞是( ) A、受精卵 B、精细胞 C、卵细胞 D、体细胞 6、基因工程中常见的载体是( ) A、质体 B、染色体 C、质粒 D、线粒体 7、水母发光蛋白由236个氨基酸构成，其中Asp、Gly、Ser构成发光环，现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记，在转基因技术中，这种蛋白质的作用是( ) A、促使目的基因导入宿主细胞中B、促使目的基因在宿主细胞中复制 C、使目的基因容易被检测出来 D、使目的基因容易成功表达 8、运用现代生物技术的育种方法，将抗菜青虫的Bt基因转移到优质油菜中，培育出转基因抗虫的油菜品种，这一品种在生长过程中能产生特异的杀虫蛋白质，对菜青虫有显著抗性，能大大减轻菜青虫对油菜的危害，提高油菜产量，减少农药使用，据以上信息，下列叙述正确的是( ) A、Bt基因的化学成分是蛋白质 B、Bt基因中有菜青虫的遗传物质 C、转基因抗虫油菜能产生杀虫蛋白是由于具有Bt基因 D、转基因抗虫油菜产生的杀虫蛋白是无机物 9、人的糖蛋白必须经内质网和高尔基体进一步加工合成，通过转基因技术，可以使人的糖蛋白基因得以表达的受体细胞是( ) A、大肠杆菌 B、酵母菌 C、T 噬菌体 D、质粒DNA 4 10、不属于质粒被选为基因运载体的理由是（） A．能复制 B.有多个限制酶切点C．具有标记基因D．它是环状DNA

基因工程和细胞工程测试题(附答案,可用于考试)

5 高二生物《基因工程和细胞工程》测试题姓名班级 （时间：90分钟分数：100分） 一．选择题（本大题包括25题，每题2分，共50分。每题只有一个选项符合题意。） 1．以下说法正确的是（） A.所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B．质粒是基因工程中惟一的运载体 C．运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接D．质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器 2．植物体细胞杂交与动物细胞工程中所用技术与原理不．相符的是（） A．纤维素酶、果胶酶处理和胰蛋白酶处理——酶的专一性 B．植物组织培养和动物细胞培养——细胞的全能性 C．植物体细胞杂交和动物细胞融合——生物膜的流动性 D．紫草细胞培养和杂交瘤细胞的培养——细胞分裂 3．有关基因工程的叙述正确的是（） A.限制性内切酶只在获得目的基因时才用 B.重组质粒的形成在细胞内完成 C.质粒都可作运载体 D.蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料 4．能克服远缘杂交障碍培育农作物新品种的技术是（） A.基因工程 B.组织培养 C.诱变育种 D.杂交育种 5．下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是( ) A．培养人的效应T细胞能产生单克隆抗体 B．培养人的B细胞能够无限地增殖 C．人的成熟红细胞经过培养能形成细胞株 D．用胰蛋白酶处理肝组织可获得单个肝细胞 6．PCR技术扩增DNA,需要的条件是( ) ①目的基因②引物③四种脱氧核苷酸 ④DNA聚合酶等⑤mRNA⑥核糖体 A、①②③④ B、②③④⑤ C、①③④⑤ D、①②③⑥ 7．以下对DNA的描述，错误的是（） A.人的正常T淋巴细胞中含有人体全部遗传信息 B.同种生物个体间DNA完全相同 C.DNA的基本功能是遗传信息的复制与表达 D.一个DNA分子可以控制多个性状 8. 蛋白质工程中直接需要进行操作的对象是（） A.氨基酸结构 B.蛋白质空间结构 C.肽链结构 D.基因结构 9．细胞工程的发展所依赖的理论基础是（） A.DNA双螺旋结构模型的建立 B.遗传密码的确立及其通用性的发现 C.生物体细胞全能性的证明 D.遗传信息传递的“中心法则”的发现 10．下列不是基因工程中的目的基因的检测手段的是：（） A.分子杂交技术 B.抗原—抗体杂交 C.抗虫或抗病的接种 D.基因枪法 11．在以下4种细胞工程技术中，培育出的新个体中，体内遗传物质均来自一个亲本的是（） A.植物组织培养 B. 单克隆抗体 C. 植物体细胞杂交 D.细胞核移植 12．动物细胞融合与植物细胞融合相比特有的是（） A.基本原理相同 B.诱导融合的方法类 C.原生质体融合 D.可用灭活的病毒作诱导剂 13．下列哪一项属于克隆（） A．将鸡的某个DNA片段整合到小鼠的DNA分子中 B．将抗药菌的某基因引入草履虫的细胞内 C．将鼠骨髓细胞与经过免疫的脾细胞融合成杂交瘤细胞

基因工程试题及答案

基因工程试题及答案 【篇一：基因工程题库以及答案】 因工程是_________年代发展起来的遗传学的一个分支学科。 2．基因工程的两个基本特点是： (1)____________， (2)___________。 3．基因克隆中三个基本要点是：___________；_________和 __________。 4．通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的___________。 5．限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自_______，第二、三两个字母取自_________，第四个字母则用___________表示。 6．部分酶切可采取的措施有：(1)____________(2)___________ (3)___________等。 7．第一个分离的限制性内切核酸酶是___________；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_____________。 8．限制性内切核酸酶bsuri和haeⅢ的来源不同，但识别的序列都是_________，它们属于_____________。 9．dna聚合酶i的klenow大片段是用_____________切割dna聚合酶i得到的分子量为76kda的大片段，具有两种酶活性： (1)____________； (2)________________的活性。 10．为了防止dna的自身环化，可用_____________去双链 dna__________________。 11．egta是____________离子螯合剂。 12．测序酶是修饰了的t7 dna聚合酶，它只有_____________酶的活性，而没有_______酶的活性。 13．切口移位(nick translation)法标记dna的基本原理在于利用 _________的_______和______的作用。 14．欲将某一具有突出单链末端的双链dna分子转变成平末端的双链形式，通常可采用_________或_______________。 15．反转录酶除了催化dna的合成外，还具有____________的作用，可以将dna- rna杂种双链中的___________水解掉。

基因工程实验考试试题(答案)

1.简述本学期从基因组DNA提取到重组质粒鉴定的实验流程？ 答：①基因组DNA的提取；②PCR扩增目的基因；③凝胶电泳分离纯化PCR扩增的DNA片段以及DNA的体外连接；④重组质粒的转化及转化子的筛选；⑤重组质粒的抽提；⑥重组质粒的酶切鉴定。 2.如何正确使用微量移液器？ 答：①选取合适量程的移液器；②根据取液量设定量程；③安装（吸液）枪头；④按至第一档，将枪头垂直伸入液面下适当位置吸液；⑤按至第二档将液体打入容器；⑥弃掉枪头；⑦将量程调至最大，放回原处。 3.在琼脂糖凝胶电泳点样时，DNA通常和什么试剂混匀，其主要成分和作用是什么？ 答：loading Buffer。主要成分为溴酚蓝，二甲苯青和甘油。 溴酚蓝和二甲苯青起指示作用；甘油加大样品密度，从而沉降于点样孔中，以免浮出。 4.简述制作1%的琼脂糖凝胶电泳的操作步骤。 答：①取0.5g琼脂糖置于锥形瓶，量取50ml 1×TBE溶液于瓶中，微波炉加热至琼脂糖溶解；②将移胶板放入胶室中，选取合适梳子垂直安插在移胶板上方，待琼脂降温至55℃下后，缓慢导入该胶室里；③量取合适量1×TBE溶液导入洗净的电泳槽，并正确插好电泳线； ④等凝胶凝固后，将梳子垂直拔出；⑤点样；⑥轻放移胶板至电泳槽的合适位置；⑦打开电泳仪的开关，调好参数，开始电泳；⑧一定时间后，停止电泳，取出凝胶板，然后经BE染色放入成像系统显色、观察。 5.琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响？（实验书P75） 答：①样品DNA的大小和构象；②琼脂糖浓度；③电泳电场；④温度；⑤缓冲液；⑥嵌入染料的存在与否； 6.在使用苯酚进行DNA抽提时应注意什么？（实验书P31） 答：注意不要吸取中间的变性蛋白质层。 7.在基因组DNA提取过程中常用酚、氯仿、异戊醇试剂，它们各有什么作用？ 答：酚——是蛋白质变性，抑制DNA酶的降解作用；氯仿——除去脂类，同时加速有机相与水相的分层；异戊醇——降低表面张力，从而减少气泡的产生。 8.提取DNA实验中，通常可选用哪些试剂沉淀DNA？ 答：冷的无水乙醇、冷的异丙醇、终浓度为0.1～0.25mol/L 的NaCl 9.简述在DNA提取实验中个试剂的作用（SDS，EDTA，酚/氯仿/异戊醇、无水乙醇，70%乙醇）。 答：SDS——破坏细胞膜，解聚核蛋白；EDTA——整合金属离子，抑制DNase活性；酚/氯仿/异戊醇——见第7题；无水乙醇——沉淀DNA；70%乙醇——洗涤DNA沉淀。 10.简述PCR扩增技术的原理及各种试剂的作用（Mg2+，dNTP，引物，DNA，缓冲液，Taq DNA聚合酶）。 答:(1)利用半保留复制的原理，以待扩增的DNA为模板，通过一系列酶在体外引物介导下，

2015-2017基因工程高考题附答案

选修3——基因工程高考题 1．（2017?新课标Ⅰ卷.38）（15分） 真核生物基因中通常有内含子，而原核生物基因中没有，原核生物没有真核生物所具有的切除内含子对应的RNA序列的机制。已知在人体中基因A（有内含子）可以表达出某种特定蛋白（简称蛋白A）。回答下列问题： （1）某同学从人的基因组文库中获得了基因A，以大肠杆菌作为受体细胞却未得到蛋白A，其原因是_____________________________________________。 （2）若用家蚕作为表达基因A的受体，在噬菌体和昆虫病毒两种载体中，不选用______________作为载体，其原因是_______________________________________________________________。（3）若要高效地获得蛋白A，可选用大肠杆菌作为受体。因为与家蚕相比，大肠杆菌具有_____________________________________________________（答出两点即可）等优点。 （4）若要检测基因A是否翻译出蛋白A，可用的检测物质是___________________（填“蛋白A 的基因”或“蛋白A的抗体”）。 （5）艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验为证明DNA是遗传物质做出了重要贡献，也可以说是基因工程的先导，如果说他们的工作为基因工程理论的建立提供了启示，那么，这一启示是_______________________________________________________________________________。2．（2017?新课标Ⅱ卷.38）（15分） 几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题： （1）在进行基因工程操作时，若要从植物体中提取几丁质酶的mRNA，常选用嫩叶而不选用老叶作为实验材料，原因是________________________________。提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是______________________________________。 （2）以mRNA为材料可以获得cDNA，其原理是________________________________。 （3）若要使目的基因在受体细胞中表达，需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体细胞，原因是________________________________________________________（答出两点即可）。（4）当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是__________________________。 （5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是____________________________________________。 3.（2017?新课标Ⅲ卷.38）（15分）编码蛋白甲的DNA序列（序列甲）由A、B、C、D、E五个片段组成，编码蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段组成，如图1所示。 回答下列问题： （1）现要通过基因工程的方法获得蛋白乙，若在启动子的下游直接接上编码蛋白乙的DNA序列（TTCGCTTCT……CAGGAAGGA），则所构建的表达载体转入宿主细胞后不能翻译出蛋白乙，原因是_____________________________________________________________。（2）某同学在用PCR技术获取DNA片段B或D的过程中，在PCR反应体系中加入了DNA聚合酶、引物等，还加入了序列甲作为________________，加入了________________作为合成DNA的原料。 （3）现通过基因工程方法获得了甲、乙、丙三种蛋白，要鉴定这三种蛋白是否具有刺激T淋巴细胞增殖的作用，某同学做了如下实验：将一定量的含T淋巴细胞的培养液平均分成四组，其中三组分别加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一组作为对照，培养并定期检测T淋巴细胞浓度，结果如图2。 ①由图2 可知，当细胞浓度达到a时，添加蛋白乙的培养液中T淋巴细胞浓度不再增加，此时若要使T淋巴细胞继续增殖，可采用的方法是________________________。细胞培养过程中，培养箱中通常要维持一定的CO2浓度，CO2的作用是________________________。 ②仅根据图、图2可知，上述甲、乙、丙三种蛋白中，若缺少______________（填“A”“B”“C”“D”或“E”）片段所编码的肽段，则会降低其刺激T淋巴细胞增殖的效果。 4．（2017·天津理综卷9）（20分）玉米自交系（遗传稳定的育种材料）B具有高产、抗病等优良性质，但难以直接培育成转基因植株，为使其获得抗除草剂性状，需依次进行步骤I、II试验。 Ⅰ．获得抗除草剂转基因玉米自交系A，技术路线如下图。 （1）为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用2种限制酶，选择的原则是______（单选）。 ①Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点 ②G基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点

基因工程作业题及答案

第二章 1. 名词解释：核酸内切酶、核酸内切限制酶、同裂酶、同尾酶、核酸外切酶、末端脱氧核苷酸转移酶 答： 核酸内切酶：是一类从多核苷酸链的内部催化磷酸二酯键断裂的酶。 核酸内切限制酶：是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列（4—8bp），并由此处切割DNA双链的核酸内切酶。 同裂酶：识别位点的序列相同的限制性内切酶。 同尾酶：识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端。 核酸外切酶：是一类从多核苷酸链的一头开始催化降解核苷酸的酶。 末端脱氧核苷酸转移酶：可以不需要模板，在单链DNA或突出的双链DNA 3’-OH端随机 添加dNTPs的酶 2. 限制性内切核酸酶的命名原则是什么？ 答：限制性内切核酸酶按属名和种名相结合的原则命名的，即：属名+种名+株名+序号； 首字母：取属名的第一个字母，且斜体大写； 第二字母：取种名的第一个字母，斜体小写； 第三字母：(1)取种名的第二个字母，斜体小写； (2)若种名有词头，且已命名过限制酶，则取词头后的第一字母代替。 第四字母：若有株名，株名则作为第四字母，是否大小写，根据原来的情况而定，但用正体。 顺序号：若在同一菌株中分离了几种限制酶，则按先后顺序冠以I、Ⅱ、Ⅲ、…等，用正体。 3．部分酶切可采取的措施有哪些？ 答：1）缩短保温时间 2）降低反应温度 3）减少酶的用量 4. 在序列5'-CGAACATATGGAGT-3'中含有一个6bp 的Ⅱ类限制性内切核酸酶的识别序列，该位点的序列可能是什么? 答：回文序列是：5'-CATA TG-3， 5．什么是限制性内切核酸酶的星号活性? 受哪些因素影响? 答：Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。条件的改变，限制酶的特异性就会松 动，识别的序列和切割都有一些改变，改变后的活性通常称第二活性，而将这种因 条件的改变会出现第二活性的酶的右上角加一个星号表示，因此第二活性又称为星 活性。 概括起来，诱发星活性的因素有如下几种：(1)高甘油含量(>5％, v／v)；(2)限制性 内切核酸酶用量过高(>100U／ugDNA)；(3)低离子强度(<25 mmol／L)；(4)高pH(8．0 以上)；(5)含有有机溶剂，如DMSO，乙醇等；(6)有非Mg2+的二价阳离子存在(如 Mn2+，Cu2+，C02+，Zn2+等)。 第三章 1．如何将野生型的λ噬菌体改造成为一个理想的载体? 答：①删除λ噬菌体的非必需区，留出插入空间；并在余下的非必须区内制造限制酶切点 ②引进某些突变表型，作为选择标记 ③突变某些基因，使它成为安全载体 ④删除λDNA必须区段上常用的限制酶切点

高中生物高考题分类题基因工程(可编辑修改word版)

知识点一基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA 重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA 分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA 重组技术。 注意：对本概念应从以下几个方面理解： 知识点二基因工程的基本工具 1.限制性核酸内切酶——“分子手术刀” (1)限制性内切酶的来源：主要是从原核生物中分离纯化来的。 (2)限制性内切酶的作用：能够识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并能将每一条链上特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键切开。 (3)限制性内切酶的切割方式及结果：①在中心轴线两侧将DNA 切开，切口是黏性末端。 ②沿着中心轴线切开DNA，切口是平末端。 2.DNA 连接酶——“分子缝合针” (1)来源：大肠杆菌、T4噬菌体 (2)DNA 连接酶的种类：E.coliDNA 连接酶和T4DNA 连接酶。 (3)作用及作用部位：E.coliDNA 连接酶作用于黏性末端被切开的磷酸二酯键，T4DNA 连接酶作用于黏性末端和平末端被切开的磷酸二酯键。 注意：比较有关的DNA 酶 (1)DNA 水解酶：能够将DNA 水解成四种脱氧核苷酸，彻底水解成磷酸、脱氧核糖和含氮碱基 (2)DNA 解旋酶：能够将DNA 或DNA 的某一段解成两条长链，作用的部位是碱基和碱基之间的氢键。注意：使DNA 解成两条长链的方法除用解旋酶以外，在适当的高温(如94℃)、重金属盐的作用下，也可使DNA 解旋。(3)DNA 聚合酶：能将单个的核苷酸通过磷酸二酯键连接成DNA 长链。 (4)DNA 连接酶：是通过磷酸二酯键连接双链DNA 的缺口。注意比较DNA 聚合酶和DNA 连接酶的异同点。 3.基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”

基因工程试题及答案全集

作业一： 一、名词解释： 1、基因：是遗传的物质基础，是DNA（脱氧核糖核酸）分子上具有遗传信息的特定核苷酸序列的总称，是具有遗传效应的DNA分子片段。 2、基因组该指单倍体细胞中包括编码序列和非编码序列在内的全部DNA分子 3、操纵子:原核生物的几个功能相关的结构基因往往排列在一起，转录生成一个mRNA，然后分别翻译成几种不同的蛋白质。这些蛋白可能是催化某一代谢过程的酶，或共同完成某种功能。这些结构基因与其上游的启动子，操纵基因共同构成转录单位，称操纵子。 4、启动子:是RNA聚合酶结合位点周围的一组转录控制组件，包括至少一个转录起始点。在真核基因中增强子和启动子常交错覆盖或连续。有时，将结构密切联系而无法区分的启动子、增强子样结构统称启动子。 5、增强子:是一种能够提高转录效率的顺式调控元件，最早是在SV40病毒中发现的长约200bp 的一段DNA，可使旁侧的基因转录提高100倍，其后在多种真核生物，甚至在原核生物中都发现了增强子。增强子通常占100～200bp长度，也和启动子一样由若干组件构成，基本核心组件常为8～12bp，可以单拷贝或多拷贝串连形式存在。 6、基因表达：是指细胞在生命过程中，把储存在DNA顺序中遗传信息经过转录和翻译，转变成具有生物活性的蛋白质分子。 二、简答题 1、说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。 答：限制性内切核酸酶采用三字母的命名原则,即属名+种名+株名的各一个首字母,再加上序号. 基本原则: 3-4个字母组成,方式是:属名+种名+株名+序号; 首字母: 取属名的第一个字母,且斜体大写;第二字母: 取种名的第一个字母,斜体小写;第三字母: (1)取种名的第二个字母,斜体小写;(2)若种名有词头,且已命名过限制酶,则取词头后的第一字母代替.第四字母: 若有株名,株名则作为第四字母,是否大小写,根据原来的情况而定,但用正体. 顺序号: 若在同一菌株中分离了几种限制酶,则按先后顺序冠以I,Ⅱ,Ⅲ,…等,用正体. 2、什么是限制性内切核酸酶的星号活性受哪些因素影向 答：Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。条件的改变，限制酶的特异性就会松动，识别的序列和切割都有一些改变，改变后的活性通常称第二活性，而将这种因条件的改变会出现第二活性的酶的右上角加一个星号表示，因此第二活性又称为星号活性。 概括起来，诱发星活性的因素有如下几种： (1)高甘油含量(>5％, v／v)； (2)限制性内切核酸酶用量过高(>100U／ugDNA)； ；L)／mmol(<25 低离子强度(3)． (4)高pH以上)；(5)含有有机溶剂，如DMSO，乙醇等； (6)有非Mg2+的二价阳离子存在(如Mn2+，Cu2+，C02+，Zn2+等)。 3、影响DNA连接酶催化连接反应的因素有哪些 答：（1）DNA的纯度（2）DNA甲基化的程度（3）酶切消化反应的温度（4）DNA的分子结构（5）核酸内切限制酶的缓冲液 4、什么是Klenow酶有哪些活性在基因工程中有什么作用 答：Klenow酶是1974年Klenow用枯草杆菌蛋白酶水解DNA聚合酶I，得到两个片段，其中大片段的分子量为75kDa，它具有5'-3'聚合酶和3'-5'外切核酸酶的活性，小片段具有5'-3'外切核酸酶活性。由于大片段失去了DNA聚合酶I中会降解5'引物的5'-3'外切核酸酶的活性，所以在

基因工程试题与答案

基因工程试题与答案 1 、转基因动物的安全性问题 正面观点： （1）转基因工程是不可阻挡的. 基因工程将影响当代重大的环境问题:人口过剩/污染/ 生物多样性急剧减退等等. 保护土壤/ 水/ 能源成为发展可持续农业的目标。 （2）转基因食品的功效: 改良植物的食用品质；增加果蔬贮藏、保鲜性能；生产特殊食品——食品疫苗。 （3）迄今为止并没有发现转基因食品危害人体健康和环境的确切证据。如果转基因生物技术得不到社会支持，这一研究将被扼杀。 反面观点： 转基因的潜在危害：转基因动植物安全性评价主要集中在环境安全性，食品安全性以及对人动物健康的影响三方面。 环境安全性分析包括： （1）生存竞争性：转基因植物在生存竞争方面具有的优势可能导致生物多样性的减少，影响了生物多样性； （2）生殖隔离距离: 基因不可控制的水平转移的可能性；与近缘野生种的可交配性：外源基因是否会漂流扩散至亲缘野生种中，从而破坏自然生态平衡； （3）对非靶生物的影响：转基因植物花粉通过风，雨，鸟，昆虫，真菌，细菌以至 个生物链传播使外源基因逃逸，从而造成基因污染

（4）病毒发生异缘重组或异缘包装的可能性：自然界中存在着植物病毒之间的异缘重 组。 （5）对农业和生态环境的影响，生态平衡. 如产生超级杂草的可能性；种植抗虫转基 因作物后可能使害虫产生免疫并遗传、从而产生更加难以消灭的“超级害虫”； 食品安全性： （1）转基因毒性. 如英国发现转基因马铃薯会减弱老鼠免疫系统功能，美国发现转基因 玉米会危害蝴蝶幼虫及其相关生态环境； （2）人的毒理反应或过敏反应. 大肠杆菌细胞膜间隙中含有大量的内毒素，痕量的内 毒素即可导致人体热原反应。 （3）实质等同性的原则，即某一种生物技术产品或其成分能够与市场上现有的对应产 品进行比较。如果一种转基因产品能够与现存的一种产品进行比较，并且发现具有实质同等性，便能用现产品安全性同种方法对待它。转基因植物所引入的蛋白对人体可能是异性蛋白质，在部分人中可能发生食物过敏，特别是幼儿和某些过敏体质的人。 对人动物健康的影响：转入传统食品或作物中的基因可能来自各种物种，有些是人们不 能或者极少食用的，是否会对人体造成危害；转基因植物食品中的新基因会不会传递给人畜的肠道微生物，插入表达，然后危害健康。 动物：1. 外源基因在动物基因组中的随机整合，可能会引起宿主细胞基因的插入突变、 缺失突变及宿主基因的扩增重排和移位，也可能激活正常状态下处于关闭状态的基因，从而导致动物表型的改变甚至造成动物不育或死亡； 2. 插入的外源基因是否会影响宿主动物自身的基因表达及表达水平； 3. 转基因动物是否可能会把外源基因传递给生活在其周围的其它种群及环境，造成基因 污染； 4. 在病毒等致病基因的转基因研究中，不可避免地会产生一些有害的转基因动物，是否 可能因为使用转基因动物制品而将一些动物性疾病传递给人类。 5. 未知的. 总的来说：就目前而言，还没有发现转基因食品对人类有害，但同时也缺乏证据证明它的无

华中农业大学生物化学本科试题库 第18章 基因工程基础

第18章基因工程基础单元自测题 (一) 名词解释 1.遗传工程 2.生物技术 3.基因工程 4.细胞工程 5.蛋白质工程 6.分子克隆 7.载体 8.转化 和转染9.基因文库10. cDNA文库 (二) 填空 1．自然界的常见基因转移方式有、、、。 2．不同DNA分子间发生的共价连接称为，有、两种方式。 3．基因工程的载体必须具备的条件有、、。 4．基因工程常用的载体DNA分子有、、和。 5．一个完整的DNA克隆过程应包括、、、、 。 6．目的基因获取的途径或来源有、、、。 7．基因工程过程中重组体直接筛选法的方式有、、。 8．基因克隆真核生物表达体系常见的有、、表达体系。 9．根据重组体DNA的性质不同，将重组体DNA导入受体细胞的方式有、、等。10．如果M13的外源基因被插入到lac Z基因内，则在含有X-gal的培养基上生长时会出现色菌落，如果在lac Z 基因内无外源基因插入，在同样的条件下呈现色菌落。 11．当细胞与细胞或细菌通过菌毛相互接触时，就可以从一个细胞(细菌)转移到另一细胞(细菌)，这种类型的DNA 转移称为作用。 12．重组DNA技术中常用的工具酶有、、、。 (三) 选择题 1．下列那种方式保证了免疫球蛋白的多样性? A. 转化 B. 转染 C. 转位 D. 转导 2．微切割技术使目的基因可来源于下列那种物质? A. 真核细胞染色体DNA B. 人工合成DNA C. cDNA D. G-文库 3．重组DNA技术中常用的工具酶下列那项不是： A. 限制性核酸内切酶 B. DNA连接酶 C. DNA聚合酶I D. RNA聚合酶 4．DNA致癌病毒感染宿主细胞后，使之发生癌变是因为发生了： A. 转化 B. 转导 C. 接合 D. 转座 5．关于基因工程的叙述，下列哪项是错误的? A. 基因工程也称基因克隆 B . 只有质粒DNA可作为载体 C . 重组体DNA转化或转染宿主细胞 D. 需获得目的基因 6．有关质粒的叙述，下列哪项是错误的? A. pB R322含有β-半乳糖苷酶的α片段基因 B. 质粒较易转化 C. 质粒的遗传表型可作为转化子的筛选依据 D. pB R322的分子中仅有一个 E.co R I 内切酶位点 7．下列哪项不是重组DNA的连接方式? A. 粘性末端与粘性末端的连接 B ．平端与平端的连接 C . 粘性末端与平端的连接 D . 人工接头连接 8．有关噬菌体的叙述哪项不符合? A. 感染大肠杆菌时仅把D NA注入大肠杆菌内 B. 只有裂解一种生活方式 C . 溶源和裂解两种生活方式可以相互转变 D. 噬菌体是由外壳蛋白和D NA组装而成 9．D NA克隆不包括下列哪项步骤? A. 选择一个适合的载体 B . 重组体用融合法导入细胞 C . 用连接酶连接载体 D NA和目的D NA，形成重组体 D . 用载体的相应抗生素抗性筛选含重组体的细菌 10．下列哪项不能作为表达载体导人真核细胞的方法? A. 磷酸钙转染 B . 电穿孔 C . 脂质体转染 D . 氯化钙转染 11. 下列哪项不能作为基因工程重组体的筛选方法? A. PC R技术 B. 宿主菌的营养缺陷标志补救