SDS-PAGE凝胶配方及制胶
SDS-PAGE 凝胶配方及制胶
12%分离胶
试剂
5ml 8ml 10ml 15ml 25ml
30ml 60ml 90ml 120ml 30%Acr-Bis （ml ） 2 3.2 4
6
10
12
24
36 48 1.5M Tris-HCl PH8.8（ml ） 1.25 2 2.5 3.75 6.25 7.5 15 22.5 30 ddH2O （ml ） 1.65 2.64 3.3 4.95 8.25 9.9 19.8 29.7 39.6 10%SDS （ul ） 50 80 100 150 250 300 600 900 1200 10%APS （ul ） 50 80
100 150 250
300 600 900 1200 TEMED （ul ） 3 4.8 6 9 15 18 36 54 72
5%浓缩胶
试剂
4ml 6ml 8ml 12ml 16ml 20ml 24ml 36ml 48ml 30%Acr-Bis （ml ） 0.66 0.99 1.32 1.98 2.64 3.3 3.96 5.94 7.92 1M Tris-HCl PH6.8（ml ） 0.5 0.75 1 1.5 2
2.5 3
4.5
6
ddH2O （ml ） 2.74 4.14 5.48 8.28 11.02 13.7 16.56 24.84 33.12 10%SDS （ul ） 40 60 80 120 160 200 240 360 480 10%APS （ul ） 40 60 80 120 160 200 240 360 480 TEMED （ul ）
4
6
8
12
16
20
24
36
48
1、按顺序加溶液，每加完一个溶液摇匀一下。
2、TEMED 要在通风橱中加，加入后混匀30秒左右后再注胶；吸打时枪头不出液面，以减少气泡
3、分离胶配好后要用水封顶，聚合至少40min （也可聚合一夜）
4、加入浓缩胶后插梳子（要洗干净），梳子倾斜插入，避免产生气泡。聚合0.5-1h （若不用可先泡在电极液中，第二天再用），拔梳子时要尽量避免拔歪
5、电泳条件：大胶 500V ，15mA/板 9h 左右
小胶 500V ，15mA/板 1.5-2h 左右
（电流根据时间来定，用新电极液时，时间会缩短，此外溴酚蓝条带过了浓缩胶后，可适当加大电流）
体积
体积
10% 2块大板
分离胶30%Arc-Bis 24.448
mL
1.5M
Tris-Hcl(pH8.8)
16.8 mL
ddH2O 27.367
mL
10%SDS 672μl 10%APS 504μl TEMED 25.2μl
5% 2块大
板（15mL）
浓缩胶30%Arc-Bis 2.4255mL 1.0M
Tris-Hcl(pH6.8)
1.837 mL ddH2O 10.143mL 10%SDS 147μl 10%APS 13
2.3μl TEMED 1
3.23μl